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CONTAGEM MANUAL DE PLAQUETAS PELO MTODO DE MASPES & JAMRA

Trata-se de um procedimento de contagem de plaquetas manual e direto descrito em 1955 e modificado posteriormente por Oliveira & Barreto em 2003. No processo de separao dos eritrcitos do plasma, tanto por sedimentao espontnea, quanto por baixa fora centrifuga, as plaquetas se arranjam de uma maneira uniforme distribudas no plasma e mantm em valores constantes, embora boa parte de plasma livre de plaquetas fique retida entre os eritrcitos sedimentados, o que torna o plasma sobrenadante superconcentrado de plaquetas (3). Alternativamente, o valor de plaquetas no plasma pode ser corrigido empregando a tabela (anexo 1) com ndices calculados atravs da frmula: plaq/mm sangue = plaq/mm plasma x {[100 (Ht + Ht/2)]/100}
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AMOSTRA
Sangue total com EDTA

MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
Material para determinao de hematcrito (manual ou automatizado) Centrfuga Cmara de Neubauer Microscpio Placa de Petri 100 mm com algodo umedecido Tubos de ensaio 12x75 mm (tubos de hemlise) Pipetadores automticos

Soluo diluidora (formalina 1%) Formol 40% NaCl 0,85% q.s.p. 1,0 mL 100 mL

QUADRANTES DE CONTAGEM
Os quadrantes no retculo de Neubauer destinados contagem so os mesmos recomendados para eritrcitos e esto indicados na figura 1 como H1, H2, H3, H4 e H5:

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Figura 1: quadrantes de contagem para protocolos A, B e C.

PROCEDIMENTO
Um critrio que assegura a exatido e reprodutibilidade dos resultados que a soma nos cinco quadrantes de contagem (H1+H2+H3+H4+H5) seja entre 150 a 200 plaquetas. Em amostras plaquetopnicas, diluies alternativas devem ser empregadas, sendo ento sugeridos quatro protocolos de contagem conforme o grau de trombocitopenia. Obteno de plasma rico em plaquetas (PRP) 1. Determinar o hematcrito do paciente por centrifugao ou automao; 2. Centrifugar o sangue total do paciente (2,5 a 4,0 mL) a 1.000 rpm por um minuto. Alternativamente pode deixar a amostra em repouso por 30 min Protocolo A PARA AMOSTRAS NO-PLAQUETOPNICAS 1. Pipetar 980 L de soluo diluente em um tubo 12x75 mm; 2. Aspirar 20 L de PRP e diluir no tubo com soluo diluidora (1:50); 3. Encher o retculo de Neubauer; 4. Colocar em cmara mida e deixar em repouso por 20 min em posio horizontal; 5. Contar as plaquetas nos cinco quadrantes de contagem de hemcias (H1+H2+H3+H4+H5) em aumento de 400x (objetiva de 40x e ocular de 10x). Protocolo B PARA AMOSTRAS PLAQUETOPNICAS Proceder como protocolo A, empregando diluio de 1:20: 20 L PRP + 380 L soluo diluente.

Protocolo C PARA AMOSTRAS PLAQUETOPNICAS Empregar diluio de 1:10: 20 L PRP + 180 L soluo diluente.

Protocolo D PARA AMOSTRAS SEVERAMENTE PLAQUETOPNICAS Proceder como no protocolo C, mas quando a contagem nos cinco quadrantes de hemcias (H1+H2+H3+H4+H5) for inferior a 150 plaquetas; Contar todo o quadrante central, indicado pela regio circundada na figura 2.

Figura 2: quadrantes de contagem para protocolo D.

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CLCULOS
Os resultados da contagem em cmara representam o valor de plaquetas no plasma, devendo utilizar o 3 3 fator de correo (FC) para converso de plaq/mm plasma para plaq/mm sangue atravs da formula abaixo. Esta fator tem um valor fixo para cada valor de hematcrito. A tabela no anexo 1 apresenta os valores de acordo com o hematcrito. FC = {[100 (Ht + Ht/2)]/100} Deve-se considerar tambm o fator de diluio empregado. 3 Com os clculos abaixo se obtm a contagem de plaquetas por plaq/mm sangue, j considerando a diluio empregada (protocolo) e o fator de correo pelo hematcrito (FC). Protocolo A (H1+H2+H3+H4+H5) x 2500 x FC* Protocolo B (H1+H2+H3+H4+H5) x 1000 x FC* Protocolo C (H1+H2+H3+H4+H5) x 500 x FC* Protocolo D (Quadrante central) x 100 x FC*

LQUIDO DE DACIE Formol 40% Citrato trissdico 3%

1 mL 99 mL

LQUIDO DE TURK cido actico glacial Violeta de genciana 1% gua destilada q.s.p.
3

1 mL 1 mL 100 mL
3

FATOR DE CORREO (FC) PARA CONVERSO DE PLAQ/MM PLASMA PARA PLAQ/MM SANGUE PELA FRMULA MATEMTICA FC = {[100 (HT + HT/2)] /100} Hematcrito 10% 11% 12% 13% 14% 15% 16% 17% 18% 19% 20% 21% 22% 23% 24% 25% 26% 27% 28% 29% 30% 31% 32% 33% 34% 35% FC 0,767 0,753 0,738 0,724 0,710 0,695 0,681 0,667 0,652 0,638 0,624 0,609 0,595 0,581 0,566 0,552 0,537 0,523 0,509 0,494 0,480 0,466 0,451 0,437 0,423 0,408 Hematcrito 36% 37% 38% 39% 40% 41% 42% 43% 44% 45% 46% 47% 48% 49% 50% 51% 52% 53% 54% 55% 56% 57% 58% 59% 60% 61% FC 0,394 0,380 0,365 0,351 0,408 0,394 0,380 0,365 0,351 0,336 0,322 0,308 0,293 0,279 0,265 0,250 0,236 0,222 0,207 0,193 0,179 0,164 0,150 0,135 0,121 0,085

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