INSTRUCCIN DE TRABAJO Eluido. Procedimiento de Lui.

FECHA
I

CODIGO PLI.22 REVISIN 01

PROPIETARIO REVISADO APROBADO

INMUNOHEMATOLOGIA Sra. Carmen FranquetDr. Arturo Pereira Pgina 1 de 2

24- marzo - 2007

CONTROL CAMBIOS: Creacin documento.

PLI 22.

ELUIDO DE LOS HEMATIES (Procedimiento de Lui)

PRINCIPIO y METODO DE MEDIDA : Consiste en eluir (despegar) el anticuerpo de los hemates por congelacin-descongelacin. Es el procedimiento de eleccin para los hemates de los recin nacidos afectos de eritroblastosis.

MUESTRA : Tipo: sangre total anticoagulada con EDTA Volmen mnimo necesario: 2 mL Conservacin: 48 h a 4 C. Criterios de rechazo: muestra diluida o coagulada.

4. MATERIAL E INSTRUMENTACIN AUXILIAR: Centrfuga de tubos. Tubos de hemlisis. REACTIVOS Y CONTROLES): Panel de hemates reactivos de grupo A, B y O (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote). Solucin LISS (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote). Antiglobulina (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote). Hemates Control Coombs (4 2 C hasta la caducidad indicada en cada lote). CONTROL INTERNO: Frecuencia y criterios de aceptacin: Sobrenadante del ltimo lavado de los hemates: controla que los hemates hayan sido suficientemente lavados y que no queden anticuerpos del plasma que pudieran luego atribuirse al eluido. Se procesar en paralelo con el tipaje del eluido y ha de ser negativo. Acciones correctoras (en caso de no aceptacin del control interno): El resultado no es vlido, Se deber repetir con lavado manual y revisar la centrfuga lavadora. Si persistiese el fallo del control interno, deber descartarse el frasco de antiglobulina en uso y abrir uno nuevo. Bao termostatizado a 37 C. Congelador de -80 C.

CONTROL EXTERNO: No existe.

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INSTRUCCIN DE TRABAJO Eluido. Procedimiento de Lui. FECHA

I

CODIGO PLI.22 REVISIN 01

PROPIETARIO REVISADO APROBADO

INMUNOHEMATOLOGIA Sra. Carmen FranquetDr. Arturo Pereira Pgina 2 de 2

24- marzo - 2007

CONTROL CAMBIOS: Creacin documento.

METODE OPERATIVO Y RESULTADOS: I. Realizacin del eluido. 1. Calentar la muestra de sangre a 37 C durante 30 minutos. 2. Lavar los hemates cuatro veces con abundante PBS precalentado a 37 C. Reservar el sobrenadante del ltimo lavado. 3. A un tubo de hemlisis, aadir 16 gotas de hemates concentrados y 4 gotas de solucin salina isotnica (o proporcin similar: 8 gotas de hemates y 2 de solucin salina). 4. Agitar y esparcir la suspensin de hemates por las paredes del tubo. Cerrar con Parafilm. 5. Colocar el tubo en el congelador a T < -30 C, en posicin horizontal durante un mnimo de 30 minutos. 6. Descongelar colocando el tubo bajo un chorro de agua del grifo (con precaucin de que el agua no entre dentro). 7. Centrifugar el tubo (3000 rpm x 10 minutos) y recoger el hemolizado sobrenadante. Prestar especial cuidado a no aspirar los estromas de hemates. Conviene dejar 1-2 mm de sobrenadante sobre el fondo del tubo.

II. Tipaje del eluido. El eluido de los hemates podr emplearse para investigar la presencia de anticuerpos IgG del sistema ABO y/o anticuerpos irregulares por procedimientos en tubo. No es apropiado para ser estudiado en tarjetas de gel. Siempre se procesar en paralelo el sobrenadante del ltimo lavado, que deber ser negativo. Si este control resultara positivo, invalida el resultado del eluido.

DOCUMENTACI DE REFERENCIA:
CS Fen, KC Kirkle,CA Eiche, DS de Jongh. The Lui elution technique. A simple and efficient method for eluting ABO antibodies. Transfusion 1985; 25: 433-4.

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