EXAMEN ANDROLOGICO. J. F.

Cox Laboratorio de Reproduccin Animal

Introduccin. La fertilidad es uno de los parmetros productivos que ms afecta la rentabilidad de explotacin pecuaria. Desde un punto de vista econmico la eficiencia reproductiva en produccin de carne es 10 veces ms importante que la calidad de canal y 5 veces mas importante que las tasas de crecimiento. La fertilidad del rebao ha sido medida usando un nmero de indicadores, los cuales varan de acuerdo al tipo de especie que est en produccin. Los indicadores ms universales son el porcentaje de preez despus de una inseminacin natural o artificial (Indice Coital; usado en rumiantes y cerdos ) o perodo de inseminaciones (yeguas y ovejas), el porcentaje de animales que no presentan estro en un perodo especfico de das post inseminacin, corrientemente 30-60 das (Tasa de no Retorno, NR; Centros de Inseminacin bovinos y porcinos), el nmero promedio de das entre un parto y el siguiente (Lapso Interparto, LIP; rumiantes) y camada al nacimiento y destete (cerdas, caprinos y ovinos). La fertilidad de rebao esperable en los animales domsticos se muestra en la tabla 1. Tabla 1. Fertilidad media de los animales domsticos. Parmetros
Tasa de preez % de preez post 1 inseminacin Tasa de NR, % de NR al servicio post 1 IA Tasa de preez post servicio natural Tasa de preez post 1 IA semen congelado % de animales no preados restante

Vacas leche
50-65 70-85 60-65 50-65 8-9

Vacas carne
60-65

Ovejas
65-75 65

Cerdas
80-90 90-95 85-90 62-64 6-7

Yeguas
50-65

70

70-80 33.5

50-70 50-60 2 IA 25-30 post

todos los servicios

10-20

6-7

N.O. Rasbech. 1981.

Los componentes que definen la fertilidad del rebao pueden desagregarse en dos grandes grupos, los derivados de las hembras y los del macho o del semen, en caso de inseminacin artificial. La performance reproductiva de los machos, sea en monta natural o artificial, depende a su vez del nmero y calidad de los espermatozoides, de la libido y habilidad de monta expresada, as como de las interacciones sociales entre los animales en el potrero de monta. Estos a su vez dependen de factores fisiolgicos (madurez sexual, gentica, fotoperodo), ambientales y de manejo (alimentacin, crianza, nivel de actividad, etc en caso de monta natural, y sumado a lo anterior, de factores asociados a la calidad del semen procesado y de su manejo, en el caso de inseminacin artificial) y de factores patolgicos, que por lo dems son los menos frecuentes. En ese contexto, la influencia de la infertilidad del macho en la fertilidad del rebao puede ser muy clara como cuando se est frente a un problema extremo, en el que las tasas de preez luego del servicio caen a niveles muy bajos. Pero ms frecuentemente, debido a la falta de registros, a la utilizacin de grupos de machos en los programas de encaste, a las temporadas extendidas de encaste en los rumiantes y al aporte del componente hembra, los problemas de subfertilidad slo se expresan una vez que los indicadores reproductivos de la temporada son inadecuados. Desgraciadamente, las prdidas econmicas resultantes, slo evidenciables con un buen control de costos, son inevitables. Hay un dicho antiguo que dice que el examen visual te dice como podra ser el toro, el examen de su pedigree dice cual podra ser el potencial del toro, mientras que el reproductivo y la performance de su progenie dice lo que el toro realmente es. Los exmenes de fertilidad potencial (google.cl, Breeding Soundness Evaluation, BSE) son indicados: a) para certificar que el reproductor que se vende es apto; examen pre-venta). Corrientemente son solicitados por criadores de tradicin, que desean mantener una reputacin. Se evitan as la solucin alternativa que es garantizar la reposicin del reproductor si el vendido es encontrado no satisfactorio dentro de los prximos 6 meses; b) para prevenir problemas en la temporada de encaste que se inicia; examen pre-temporada. En este caso, se desea evitar prdidas econmicas asociadas a una performance inapropiada de los reproductores; y c) para evaluar la fertilidad de los reproductores una vez que se ha presentado un problema de fertilidad de rebao; examen post-temporada problema. En este caso, es muy importante el registro de datos concretos asociados a la performance de los machos en las temporadas previas. 1. Estructura del examen androlgico. El examen androlgico o de fertilidad potencial ha sido desarrollado para predecir con un grado razonable de seguridad la capacidad que un reproductor determinado tiene para prear un grupo de hembras. Debido a que se hace esencialmente un pronstico de la fertilidad potencial, el examen debe ser cuidadoso, riguroso y debe utilizar procedimientos estandarizados.

Es importante considerar la seguridad personal y de los asistentes en aquellos casos en que existan riesgos. La contencin del animal es un aspecto bsico al llevar a cabo exmenes de toros y potros. Bretes o mangas seguras en el caso de los toros y trabas seguras en el de los potros son mandatarios. La contusiones y eventualmente fracturas deben ser obviadas con el uso de barreras o un distancia apropiada entre los miembros de los reproductores y los propios, asimismo, la aproximacin al macho debe ser segura y predecible para el reproductor para evitar reacciones bruscas del ltimo. En general, los machos son tolerantes al examen androlgico, pero toleran menos la prolongacin de los mismos, por lo que deben ser llevados a cabo relativamente rpidos. El examen androlgico o de fertilidad potencial determina si el potencial del reproductor es satisfactorio, debe mantenerse como pendiente a la espera de nuevos exmenes, o simplemente si debe ser descartado como reproductor. La decisin tcnica debe ser tomada despus de una evaluacin sistemtica y rigurosa de al menos 4 componentes: a) un examen fsico general y de integridad genital, b) una evaluacin del permetro escrotal; c) una evaluacin del potencial de movimiento espermtico; y d) una evaluacin de la morfologa espermtica. Cada etapa presenta exigencias mnimas que deben ser superadas para que el reproductor sea considerado satisfactorio. Adicionalmente se puede considerar la evaluacin del potencial de servicios (o test de lbido), que en carneros est estandarizada y ha demostrado estar relacionada con el potencial de produccin de corderos por temporada. Idealmente el examen debiera considerar la evaluacin fsica y reproductiva de los machos (incluida la circunferencia o permetro escrotal), la coleccin y examen de semen, la evaluacin de la libido o capacidad de servicios y exmenes por enfermedades infecciosas que afecten la fertilidad. Sin embargo realizar estas evaluaciones no es prctico en la mayora de las situaciones, llevando a los siguientes enfoques: 1. Evaluacin fsica y reproductiva (incluyendo genitales internos y circunferencia escrotal) con examen de semen slo a machos problemas. 2. Lo mismo que antes pero a todos los reproductores. 3. Lo mismo que 2, pero adems con evaluacin de la capacidad de servicios. Como toma el doble de tiempo cada etapa adicional de evaluacin (y de costos) y considerando que un 75-80% de los problemas puede ser identificado en la etapa 1, y un 10% adicional en la etapa 2, por lo general no se efectan pruebas de capacidad de servicios. Exmenes de enfermedades slo se efectan cuando se sospecha de problemas de ese tipo. 1.1 Historia clnico-reproductiva. La obtencin de una historia completa del reproductor es de mucha importancia. Es importante identificar el animal (un examen puede tener ramificaciones legales, por lo que la identificacin segura debe preceder la certificacin del resultado), conocer porqu se solicita la evaluacin, si es por problema de fertilidad tratar de conocer informacin de la naturaleza del problema y de eventuales factores que pudieron interferir con la performance del macho. Verificar registros de

enfermedades, manejos, planos de alimentacin, poca y condiciones del encaste, performance en temporadas pasadas, etc. Es importante tener presente que la produccin de espermatozoides maduros es un proceso largo, de manera que cuadros espermticos anormales presentes pueden ser consecuencia de factores que pudieron afecta al reproductor algunos meses atrs. La historia clnica y reproductiva del toro facilita la evaluacin y el establecimiento de recomendaciones. 1.2. Examen fsico general. En su mayora, los exmenes son llevados a cabo en reproductores que sern usados en monta natural. Por lo mismo, se debe tener presente que la temporada de encaste demanda de una actividad fsica intensa. Esto implica no solamente que el macho debe tener un aparato visual, locomotor (particularmente del tren posterior) y digestivo adecuado, sino adems el desarrollo corporal debe ser adecuado para la raza y edad (Fig.1).

Figura 1. Conformacin del tren posterior. La actividad de monta afectar con ms probabilidad las articulaciones de toros con conformacin incorrecta (B,C,E y F). 1.3. Examen morfolgico del tracto genital. Tiene por objetivo determinar la presencia, integridad y desarrollo de los rganos genitales con relacin a la edad y a la raza. De acuerdo al orden del procedimiento, se revisa: 1) Testculos. Los testculos se fijan con ambas manos y la evaluacin se lleva a cabo por inspeccin y palpacin (Fig.2). Al efectuar su examen clnico interesan los siguientes aspectos :

a. Escroto. Se debe apreciar la forma, el grosor y la integridad de la piel. La presencia de heridas, laceraciones, ectoparsitos, hemangiomas y su severidad, deben ser registrados. En general, se prefiere un saco escrotal con un cuello bien formado (B en la Fig.3) para facilitar el control de la termorregulacin y cualquier hallazgo que comprometa esta funcin debe ser registrado, incluidas las espermatoceles, varicoceles y hernias. La envolturas testiculares permiten el libre desplazamiento de los testculos en el saco escrotal, por lo mismo cualquier alteracin es indicio de patologa. Las forma de escroto con paredes rectas (A) por lo general estn asociadas a depsitos de grasa en el cuello y afecta la capacidad de termorregulacin del mismo. Con la edad los depsitos se pierden y los machos adquieren un escroto con un cuello mas normal. La forma C por lo general estn asociadas a testculos pequeos y mala calidad seminal, por lo que deben evitarse. b. Forma de los testculos. Los testculos son ovodeos y simtricos. Formas redondeadas y alargadas se pueden presentar en menos del 15% de los casos y a menos que presenten alteraciones en el espermiograma, no debieran considerarse como problemas serios. Asimetras importantes, del orden del 60:40, deben ser registradas porque corrientemente estn asociadas a hipoplasias o degeneraciones testiculares unilaterales.

Figura 2. La evaluacin testicular debe hacerse fijando el saco escrotal con ambas manos. Es importante la seguridad para el operador y el animal. El toro debe estar contenido en un brete adecuado, que impida su movimiento hacia atrs y la fijacin testicular debe ser con las manos libre del riesgo de compresin.

Figura 3. Formas comnmente encontradas de saco escrotal. La forma deseada es la B y la que mas puede comprometer el control de la termorregulacin testicular es la forma C. c. Consistencia testicular. Es uno de los aspectos importantes de considerar en el examen testicular. Se realiza por palpacin de toda la superficie de ambos testculos y verifica la normalidad de sta. La consistencia normal de un testculo ha sido definida como duro-elstica (palpacin de una pelota de caucho o de un bceps en semiflexin). Consistencias duras (fibrosis testicular) o blandas (degeneracin testicular) asociadas a alteraciones serias de la funcin testicular. Es importante considerar adems que las especies con reproduccin estacional, tales como rumiantes chicos y equinos, presentan una reduccin en la consistencia fuera de la estacin reproductiva. d. Permetro o circunferencia escrotal. Consiste en determinar el permetro de ambos testculos en la zona de mayor convexidad, mediante el uso de una cinta mtrica. Por su elevada correlacin con la produccin espermtica y la productividad de la progenie, el permetro escrotal tiene gran significancia en el examen androlgico y es un parmetro muy utilizado en la seleccin de machos en pie para programas de encaste (rumiantes). El testculo est compuesto por aproximadamente un 80% de tbulos seminferos, por lo que a mayor tamao testicular existe un potencial mayor de produccin de espermatozoides. Adicionalmente los testculos chicos tienen un mayor porcentaje de anormalidades espermticas y menor la motilidad. El permetro escrotal debe ser interpretado en funcin de la edad, porque tal como se expone en las tablas 2, 3 y 4 la madurez sexual influye significativamente en la medicin y en funcin de la estacin reproductiva (tabla 5). Es importante asimismo, fijar adecuadamente los testculos para obtener una medida real del permetro (Fig. 4 y 5).

Figura 4. Evaluacin del permetro escrotal.

A A

Figura 4. Fijacin del saco escrotal para una evaluacin incorrecta (A) y correcta (B) del permetro escrotal. La posicin del pulgar en la Fig. A tiende a abrir el permetro y a sobrestimar el valor del permetro. El permetro o circunferencia escrotal es altamente heredable y tiene una alta correlacin gentica positiva con la edad a la pubertad de las hijas, tasas de crecimiento y fertilidad. Se considera a este parmetro como uno de los ms tiles en produccin de carne bovina.

Tabla 2. Valores mnimos de permetro escrotal sugeridos por la Sociedad de Teriogenologa (1992). Valores Mnimos Recomendados Edad Permetro < 15 meses * 30 > 15< 18 meses 31 > 18< 21 meses 32 > 21< 24 meses 33 > 24 meses 34 * Debe ser considerado que los toros de ao, dada su inmadurez sexual, podran requerir de un segundo examen para evaluarse como reproductor satisfactorio. Tabla 3. Permetro escrotal (cms) promedio para diferentes razas a los 12 meses de edad Raza Simmental Pardo Suizo Gelbvieh Holstein Charolais Limousin Permetro 33,7 33,8 33,3 32,3 32,3 30,2 Raza Blonde dAquitaine Salers Angus Hereford Red Poll Shortorn Permetro 29,7 29,4 33,2 32,2 32,5 31,8

Tabla 4. Permetro escrotal (cms) mnimo sugerido para diferentes razas. Razas Simmental, Pardo Charolais, Hereford, Limousin, Blonde Meses Suizo, Gelbvieh, Shortorn, Red Poll, dAquitaine, Salers Angus Holstein Galloway 12 32 30 29 13 33 31 30 14 34 32 31 15-20 35 33 32 Tabla 5. Variacin en el permetro escrotal en carneros debido a la estacin reproductiva. Edad Permetro escrotal (cm) Razas (aos) Junio Diciembre Suffolk Suffolk Suffolk Leicester Leicester Texel 1 2 3 1 4 1 31 38 38 36 40 34 25 32 32 31 33 30

e. Posicin del testculo: se refiere a la ubicacin de los testculos con relacin a los distintos planos anatmicos y se expresa como grados de torsin. Por lo general se acepta que torsiones de hasta 40 no tienen efecto sobre la irrigacin testicular. Entre las alteraciones testiculares que se describen figuran la hipoplasia uni (testculos usualmente un 20% inferior al normal) o bilateral, asociada a permetros pequeos, baja concentracin espermtica y alto porcentaje de anormalidades; degeneracin testicular, la alteracin ms frecuente a nivel testicular que se caracteriza por una disminucin de la consistencia (testculos blandos) y que cursa con perfiles seminales anormales. Temperatura ambiental, humedad, alojamiento, alimentacin, sobre engrasamiento del animal, etc. pueden contribuir a generar una degeneracin testicular. La atrofia testicular se caracteriza por una reduccin en el tamao testicular, endurecimiento y prdida de elasticidad de la cpsula. Tambin cursa con perfiles espermticos anormales. Orquitis y espermatoceles tambin son descritas en los rumiantes. 2) Epiddimo. Macroscpicamente est formado por cabeza, cuerpo y cola. La presencia y constitucin de sus partes se efecta por palpacin. Se considera la forma, tamao, delimitacin y consistencia. La cabeza se palpa en el polo superior y en la cara craneo-lateral del testculo, como un capuchn. El cuerpo se ubica en la cara medial y se palpa como una cinta aplanada. La cola finalmente, se palpa como un huevo de paloma (1,5 x 2,0 cm de dimetro), de consistencia duroelstica ubicada en el polo inferior del testculo. Es muy importante la evaluacin de la cola por la funcin de reservorio espermtico que sta posee, y porque adems es asiento ms frecuente de patologas epiddimarias por procesos infecciosos por brucelas y por corinebacterium. Como alteraciones epididimarias se han descrito la aplasia o hipoplasia, que corrientemente estn acompaada de alteraciones de los conductos deferentes y glndulas vesiculares ipsilaterales; epididimitis infecciosas, tambin corrientemente asociadas a alteraciones en las glndulas vesiculares. Ocasionalmente se describen tumores, absesos, espermatoceles y granulomas espermticos. 3) Pene y prepucio. El examen del estuche prepucial se refiere especialmente a la mucosa prepucial visible a travs del orificio externo. La exposicin del pene facilita la evaluacin de la mucosa, pero frecuentemente alteraciones de la misma se evidencian por medio de la aglutinacin de los pelos prepuciales con presencia de pus y materias extraas. Por la estructura de las mangas de contencin, es poco factible palpar el pene en toda su extensin tal como se recomienda, sin exponer la integridad fsica del operador. Por lo mismo, es recomendable efectuar un anlisis al momento de la exteriorizacin del pene durante la coleccin de semen con vagina

artificial o electroeyaculacin. En presencia de alteraciones, est indicado proceder a un examen minucioso del mismo, utilizando tranquilizantes (en caso de toros y verracos) y en ltimo trmino derribando al reproductor (lo corriente en casos de chivatos y cameros). Anormalidades de pene y prepucio son mencionadas en la Tabla 6. Tabla 6. Anormalidades de pene y prepucio clasificadas segn su prevalencia. Anormalidades de pene y prepucio Prevalencia Desviaciones de pene Alta Trauma de glande y laceraciones de prepucio Alta Infecciones de pene y prepucio (balanopostitis) Moderada Fibropapilomas Moderada Hematomas de pene y secuelas Moderada Frenillo persistente Baja Fstula uretral (hipospadia) Baja Prolapso de prepucio Alta Anillos Moderada Fimosis (estenosis ) y parafimosis Moderada 4) Genitales internos. Se efecta por palpacin y es lo ltimo que se examina en el examen morfolgico de los genitales, porque sirve adems del examen mismo, para evacuar el recto y facilitar el contacto de los electrodos con la mucosa rectal y como un preestimulante en casos de electroeyaculacin. Implica un examen minucioso de las glndulas vesiculares, cuerpo de la prstata y ampulas de Henle. Su ubicacin es relativamente sencilla de localizar, puesto que todas evacuan su secrecin a nivel del culculo seminal, en el extremo anterior de la uretra pelviana. Esta ltima es fcilmente localizable por la contraccin tpica del msculo uretral e isquiocavernoso en respuesta a la estimulacin mecnica. a) Glndulas vesiculares (vesculas seminales). Son pareadas, alargadas, aplanadas dorso-ventralmente de lobulacin marcada en el toro y relativamente simtricas. Su tamao flucta entre los 10 y 15 cm de largo por 2 a 4 cm de dimetro. Son indoloras a la palpacin, de consistencia firme y elstica con algo de variacin dependiendo de la abstinencia sexual. Las glndulas vesiculares son el asiento ms frecuente de patologas en las glndulas accesorias (5-8% de prevalencia de alteraciones). b) Ampulas de Henle. Son pareadas, simtricas y corresponden a la porcin dilatada de los conductos deferentes. Miden 10 a 12 cms de largo por 1 a 1,5 cm de dimetro, por lo que se palpan como dos pajuelas en su arribo al colculo seminal. Las aplasias segmentarias y ampulitis son las patologas que ms afectan a las mpulas. c) Cuerpo de la prstata. Se palpa como una cinta aplanada en el extremo anterior de la uretra pelviana. Es muy poco frecuente el asiento de patologas en

este nivel en rumiantes. La porcin diseminadas de la prstata no es palpable debido a que se encuentra disgregada cubierta por el msculo uretral. 1.4 Examen de una muestra representativa de semen. La parte final del examen androlgico es la coleccin y anlisis de una muestra representativa de semen. Aunque hay varios mtodos para colectar semen, la electroeyaculacin es el ms popular, cuando se trata de colectar muestras de toros no entrenados o de carneros y chivatos. El examen de semen permite diferenciar el semen normal (normospermia) de semen con diferentes grados de alteracin (dispermia). Interesa discriminar aquellas muestras que pueden alterar la fertilidad del reproductor (impotencia generandi). Para que el resultado de los exmenes de laboratorio refleje adecuadamente las caractersticas de ese semen, la muestra debe reunir las siguientes condiciones: a) El eyaculado debe ser colectado totalmente, sin prdidas, impurezas o contaminaciones. b) La vitalidad de los espermatozoides no debe comprometerse. c) La coleccin no debe producir efectos adversos sobre la salud o la lbido del animal. d) El procesamiento del semen debe ser efectuado preservando la funcionalidad de los espermatozoides y su integridad morfolgica. Cuando se obtienen eyaculados con resultados que se separan de la normalidad, es recomendable repetir la coleccin luego de unos 20 minutos y si la anormalidad persiste es necesario repetir el examen con un intervalo de 4 a 10 semanas para evaluar el grado de alteracin de la espermatognesis. Desde un punto de vista puramente operacional, el examen de semen puede ser dividido en inmediato y mediato. Los exmenes inmediatos son los que se realizan inmediatamente despus de colectado el semen, e incluyen el volumen, aspecto, pH y movimiento espermtico. Los exmenes mediatos son los que se efectan luego en el laboratorio e incluye la medicin de la concentracin espermtica, relacin vivos: muertos (vitalidad) y morfologa espermtica (espermiograma). 1. Exmenes inmediatos: a) Volumen. La cantidad de semen vara segn la especie, edad, raza, el mtodo y calidad de la coleccin (grado de estimulacin), alimentacin, etc. El volumen se calcula en ml cc, utilizando una copa de coleccin graduada o mediante pipetas graduadas (ver tablas 8,9 y 10). b) Aspecto. Comprende el color y la consistencia o viscosidad. Depende de la concentracin espermtica, el contenido de las secreciones de las glndulas anexas, como tambin de eventuales inclusiones (tales como sangre, pus e impurezas). Lo normal flucta entre cremoso y lechoso, dependiendo de las

especies. Aspectos acuosos, particularmente de eyaculados obtenidos por vagina artificial sugieren casos de oligozoospermia o azoospermia (espermios escasos o ausentes). La presencia de pus (piospermia) se manifiesta generalmente por cogulos o grumos. El color del eyaculado puede fluctuar de blanco marfil a amarillento dependiendo del contenido de riboflavina que tie el semen amarillento. Una coloracin rojiza indica sangre fresca en el eyaculado (hemospermia) mientras que tiende a ser parda cuando sta se encuentra hemolizada. c) pH. En general, el semen fresco presenta un pH alrededor del 7 y tiende rpidamente a acidificarse a medida que pasa el tiempo, producto del metabolismo espermtico y consecuente acumulacin de metabolitos cidos. En presencia de patologas inflamatorias de las glndulas accesorias, el pH tiende a la alcalinidad, lo mismo en presencia de casos de oligozoospermia o azoospermia. d) Motilidad. Es uno de los parmetros ms importantes en la evaluacin del semen. El procesamiento de la muestra es de fundamental importancia, puesto que puede introducir artefactos de tcnica que torne el examen no representativo. En la evaluacin de la motilidad se debe usar un microscopio adecuado (idealmente contraste de fase o contraste de interferencia diferencial, DIC), una platina temperada (idealmente entre 30 y 38 C), vidrios limpios (porta y cubre objetos) y se deben evitar corrientes de aire que condicionen una deshidratacin rpida de la muestra o modificaciones bruscas de temperatura. La motilidad debe evaluarse rpidamente o en su defecto, la muestra a analizarse debe ser resuspendida en un diluyente apropiado (cualquier solucin simple que tenga una fuente de energa, balance electroltico, macromolculas, pH y osmolaridad adecuadas). Se evala corrientemente la motilidad de masa y la motilidad individual. La motilidad de masa es el resultado del movimiento de todos los espermatozoides de la muestra. Se evala depositando un gota de semen en un portaobjetos limpio y temperado y observndolo en un aumento bajo (generalmente 10X). En eyaculados normales, el semen se aprecia con un movimiento ondular, que se asemeja a un cardumen de peces y se califica segn pautas preestablecidas, como la que se describe a continuacin. Pauta de evaluacin de la motilidad de masa en rumiantes. 0: No se aprecia movimiento alguno. 1: Escaso movimiento, no se aprecian ondas. 2: Escaso movimiento, ondas tenues, condensaciones aisladas. 3: Movimiento lento, ondas de poca amplitud, incipiente movimiento de cardumen. 4: Movimiento activo, ondas amplias, movimiento de cardumen con condensaciones numerosas de color oscuro. 5: Movimiento activo a muy activo, ondas pronunciadas,cardmenes con corrientes que se oponen, condensaciones numerosas.

6: Movimiento muy activo con ondas y cardmenes que se mueven siguiendo un patrn ondular. Puede considerarse como requerimiento mnimo de un eyaculado una clasificacin 4. La evaluacin de la motilidad individual (movimiento progresivo) implica la observacin del movimiento de espermios en un ambiente apropiado. Corrientemente demanda una dilucin previa del eyaculado o de la muestra a analizar, lo cual se hace con soluciones isotnicas recientemente preparadas y temperadas, tales como suero salino, PBS, etc. En el examen, se colocan 30 !l de la muestra sobre un portaobjetos temperado y limpio y se cubre suavemente con un cubreobjeto y se observa a un aumento de 200-400x. El movimiento espermtico adecuado es el rectilneo caudoceflico y se conoce como movimiento progresivo. Un eyaculado debiera tener al menos un 30% de sus espermios experimentando movimiento progresivo, de no ser as, ste debiera ser descartado. La motilidad individual es muy buena si al menos un 70% de los espermios muestran movimiento progresivo. 2) Exmenes mediatos. a) Concentracin espermtica. El nmero de espermios por ml de semen est relacionado con la fertilidad del eyaculado, especialmente en monta natural. Es decir, reproductores con concentraciones espermticas reducidas tienden a presentar ndices de fertilidad inferiores. Factores genticos y ambientales influyen en forma importante en la concentracin espermtica del eyaculado. As, los carneros Suffolk presentan concentraciones espermticas, caractersticamente elevadas, la alimentacin por intermedio de la funcin testicular tambin, y la estimulacin sexual pre-monta puede aumentar en ms de un 25 % la concentracin del eyaculado en rumiantes. La concentracin espermtica se mide con un hemocitmetro (cmara de Neubauer o Thomas), con un espectofotmetro y con una contador Coulter. Los dos ltimos se usan corrientemente en centros de Inseminacin Artificial puesto que se trabaja con reproductores normales, mientras que el primero es popular en los laboratorios androlgicos, en el que inclusiones en el semen pueden dar grados de turbidez que aumentan artificialmente la concentracin espermtica. El hemocitmetro contiene dos cmaras de 1 mm de largo x 1 mm de ancho y una vez montado el cubreobjetos, una altura de 0,1 mm. Cada cmara est a su vez, subdividida en 25 cuadros (ver Fig. 5). El procedimiento para cuantificar los espermios usando el hemocitmetro se describe a continuacin:

Figura 5. Esquema de un hemocitmetro. Cada cmara tiene entre 20 y 25 cuadros y los espermios se cuentan de acuerdo a las cabezas que estn dentro de los cuadros. Se incluyen las cabezas espermticas que estn sobre o al interior de las lneas marcadas. Cuantificacin espermtica por hemocitmetro 1. Prepare el hemocitmetro. 2. Prepare la dilucin de la muestra. Si la concentracin no es muy elevada diluya 1:100 con la siguiente solucin : 9.8 ml HCl 0,1 N 0.1 ml eosina 0.1 ml de semen 3. Cargue el hemocitmetro y deje decantar por 3-5 min. 4. Cuente las cabezas espermticas localizadas dentro de 5 cuadros (4 extremos y el cuadro central; ver Fig.5) en ambas cmaras. Si la concentracin obtenida difiere del 10 % debe repetirse cargando nuevamente el hemocitmetro. 5. Una vez cuantificados los espermios, debe multiplicarse por 5 (el equivalente de todos los cuadros, es decir del 1 mm de la cmara), por 10 (porque la altura de la cmara es de 0,1 mm y lo que necesitamos es 1 mm3 o !l. Si deseamos transformarlo en ml cc deberemos multiplicar por 1.000. Las concentraciones estimadas como normales se muestran en las tablas 8,9 y 10 Tabla 8. Caractersticas seminales normales de toros. Colecciones/semana: Volumen: Concentracin espermtica: (109/ml): Espermios totales/eyaculado (109): Espermios mtiles (%): Espermios normales (%): 2-3 2-10 1-2 3-25 50-75 80-95

Tabla 9. Caractersticas seminales normales de carneros. Colecciones/semana : Volumen: Concentrcin espermtica (109/ml): Espermios totales /eyaculado (109): Espermios mtiles (%): Espermios normales (%): Tabla 10. Caractersticas seminales normales de verracos. Colecciones / semana: Volumen: Concentracin espermtica (109/ml): Espermios totales /eyaculado (109): Espermios mtiles (%): Espermios normales(%):

7-25 0,8-3 2-3 2-7,5 60-80 80-95

2-5 100-300 0,1-0,3 15-60 80-90 80-90

b) Tinciones vitales. Son usadas para la diferenciacin de espermatozoides vivos de los muertos. La base su utilizacin es que la membrana plasmtica de los espermatozoides vivos excluyen ciertas tinciones, mientras que cuando estn alteradas las tinciones pasan fluidamente. As, se han utilizado con frecuencia la tincin eosina o eosina-nigrosina con este fin. La eosina tie slo a los espermios muertos o alterados y la nigrosina es una tincin de contraste (como un fondo oscuro para facilitar la interpretacin). Desgraciadamente la tcnica depende mucho del pH, temperatura y duracin de la tincin, por lo que hay que tener en consideracin estos factores para evitar tinciones parciales, que no necesariamente significa que los espermios que se tien estn alterados. Procedimiento de tincin con Eosina Tincin: Eosina hidrosoluble 0,5% (p/v) Citrato de Sodio 2H2O al 2,9% en agua Procedimiento: a) Poner una gota de Eosina y otra de semen en un portaobjetos temperado (37C) y mezclarlos. b) Extender inmediatamente una gotita de la mezcla sobre otro portaobjetos con ayuda de un cubreobjetos y proceder a secar. c) Contar 300 espermios para estimar el % de clulas que no se tien. WHO 1987.

Tincin con Eosina-Nigrosina Reactivos : Eosina hidrosoluble 1 % (p/v) en agua destilada. Nigrosina 10 % en agua destilada. Procedimiento : a) Mezclar una gota de semen con dos gotas de Eosina. b) Despus de 30 seg., agregar tres gotas de Nigrosina a la suspensin y mezclar. c) Poner una gota de la mezcla semen-Eosina-Nigrosina en un portaobjetos y preparar un frotis delgado. d) Contar 300 espermios. WHO 1987. Las tinciones supravitales estn bien correlacionadas con el movimiento pogresivo, por lo que son una buena estimacin de la vitalidad del eyaculado. Sin embargo estn siendo desplazadas por tinciones que junto con medir la vitalidad espermtica, evalan la morfologa e integridad del acrosoma, tales como la triple tincin (Azul Tripn, Rojo Fenol y Caf Bismarck) y la Tincin Giemsa-EosinaNigrosina. c) Morfologa espermtica. Es uno de los componentes ms estrechamente vinculados con el potencial reproductivo de los machos. Un eyaculado con un espermiograma anormal, corrientemente est asociado a infertilidad. La evaluacin de la morfologa espermtica (cabeza y cola) adems permite evaluar la presencia de clulas inmaduras (espermatogonias, espermatocitos y espermtidas) y otras clulas extraas al semen, tales como leucocitos, eritrocitos y clulas epiteliales. La morfologa espermtica puede ser evaluada en frotis teidos o sin teir. En ambos casos es importante una buena manipulacin del semen para evitar artefactos de tcnicas que tienden a confundir los resultados. La tincin eosinanigrosina es la ms corrientemente utilizada para evaluar morfologa espermtica. Sin embargo, otras tcnicas de tincin tales como Giemsa o Giemsa-May Greenwald o como se vio anteriormente Giemsa-Eosina-Nigrosina pueden ser tambin utilizadas. Estas ltimas tienen la ventaja de permitir evidenciar leucocitos (Giemsa-May Greenwald) o morfologa de acrosoma. Bajo microscopa de luz, se cuentan 200 espermios en unos 5-6 campos al azar y es esencial utilizar aumento mayor bajo aceite de inmersin (100x), debido a que la evaluacin se toma insegura a menor aumento. En frotis sin teir se utiliza microscopa de contraste de fase y generalmente frotis hmedos, preparados de suspensiones fijadas previamente con formol salino o mejor con glutaraldehdo al 1% en buffer cacodilato. Se pone una gota de semen (15-20!l) sobre un

portaobjetos limpio y se cubre posteriormente con un cubre objeto (20x20). El frotis tambin debe ser observado en aumento mayor, bajo aceite de inmersin. Las anormalidades espermticas son clasificadas actualmente como anormalidades mayores, cuando afectan o estn correlacionadas con cuadros de infertilidad y anormalidades menores, cuando por s mismas no estn asociadas con cuadros de infertilidad (Tabla 11; Fig. 6). Esto, para diferenciarla de una clasificacin ms antigua, incorrecta desde un punto de vista clnico, en que clasificaba a las anormalidades en primarias, es decir que se originaban durante la espermatognesis y secundarias, cuando se originaban en el epiddimo y conductos excurrentes. Tabla 11. Morfologa Espermtica. Se acepta un mnimos de 70% clula normales. Anormalidades Espermticas Primarias Anormalidades Espermticas Secundarias (mayores)* (menores)** Subdesarrollo Cabeza pequea normal, gigantes o Formas dobles desprendidas Defectos de acrosoma (e.g., Acrosomas desprendidos, sueltos o knobbed acrosome) plegados Cabezas estrechas Implantacin abaxial Defecto crter/diadema Gota citoplasmtica distal Cabezas piriformes Colas dobladas en forma simple Contorno anormal Colas dobladas en pieza terminal Cabezas anormales pequeas Otras Clulas Pieza media anormal Clulas epiteliales Gota citoplasmtica proximal Eritrocitos Flagelo fuertemente enrollado Formaciones medusas Flagelo accesorio Clulas de lnea espermatognica Clulas de la lnea blanca * * Por si mismas pueden afectar la fertilidad del eyaculado * ** Slo en una proporcin elevada pueden afectar la fertilidad del eyaculado. Un espermiograma con un alto porcentaje de anormalidades mayores y menores debe ser analizado con cautela. En general, la presencia de ms de un 15 % de anormalidades mayores y ms de un 30% de anormalidades totales, especialmente cuando estn asociadas a otras anormalidades en el examen androlgico, es suficiente razn para clasificar un macho como cuestionable, hasta que nuevos exmenes sean realizados, es importante interpretar el espermiograma con una historia clnico-reproductiva detallada. Las clulas inmaduras son poco frecuentes en los eyaculados, su tamao es 8-10 veces superior al tamao de las cabezas espermticas (8 x 4 x 1 !m) y se observan como clulas redondeados o polidricas, con uno o ms ncleos que frecuentemente se encuentran vacuolados. En general, estn asociadas a cuadros degenerativos e hipoplsticos. Las clulas epiteliales previenen principalmente de la mucosa peniana y prepucial, como tambin de la uretra, se

caracterizan por un tamao variable, unas 10 veces el tamao espermtico, son redondeadas o poligonales, con un ncleo grande y en ocasiones difciles de distinguir.

Figura 6. Anormalidades espermticas mayores (1) y menores (2). 1.5. Examen funcional o de la capacidad de monta. Permite generar informacin asociada a la expresin de la lbido y a la correcta ejecucin de la cpula. Es un examen que no es frecuente debido al tiempo destinado a la evaluacin y a la necesidad de preparar una hembra en estro para evaluar lo anterior. Por lo que frecuentemente se usa la historia clnicoreproductiva del macho con este fin. El tiempo de reaccin mide al lapso que se demora el reproductor en completar la cpula frente a una hembra en estro. Indudablemente, hay una serie de factores que influyen, tales como la calidad de la hembra en estro, la madurez y experiencia sexual, el reposo sexual, la estacin reproductiva cuando la hay, el estado nutricional etc. El tiempo de reaccin no ha tenido una alta correlacin con la capacidad de etc. El tiempo de reaccin no ha tenido una alta correlacin con la capacidad de monta, por lo que ha sido reemplazado por el Test de Capacidad de Servicios (Serving Capacity Test). En este caso, dos hembras sedadas, son metidas en bretes de montas separados por 5 mts. y luego, dos toros cada vez son evaluados en trminos de nmero de montas en un lapso de 5 a 10 min. Se ha establecido que la correlacin es alta entre el test y la capacidad de monta en

encaste (> 0,8). Finalmente, se ha usado la medicin de los niveles de testosterona en respuesta a inyecciones de GnRH o hCG, sin embargo a pesar que las primeras pruebas en Australia mostraron estar correlacionadas con las tasas de preez, subsiguientemente este test no ha mostrado ser eficaz. 1.6 Exmenes especiales. Se refiere a cualquier examen requerido cuando la situacin clnica lo amerita. Son exmenes no rutinarios, por lo que no forman parte de un examen androlgico ordinario. Entre los corrientemente solicitados estn Brucelosis, Leptospirosis, Tricomoniasis, hemogramas, aislamiento de bacterias, etc. Cada uno de estos exmenes son analizados en detalles en los cursos respectivos de manera que no sern considerados ac. 1.7 Resultados de un Examen Androlgico Reproductor potencial satisfactorio Toros que logran los valores mnimos para circunferencia escrotal, motilidad espermtica y morfologa espermtica. Estos toros tambin deben estar libres de problemas genticos, esquelticos, infecciosos u otros problemas o lesiones que puedan comprometer la fertilidad en condiciones de monta natural. Reproductor potencial insatisfactorio Se consideran reproductores insatisfactorios a los que no logran llegar a los valores mnimos en cualquier categora y que tienen un pronstico desfavorable para mejorar su potencialidad. Esto significa que cualquier toro que tenga un defecto fsico significativo, que tenga un problema significativo afectando el aparato reproductivo que sea improbable de mejorar, cualquier toro con valores de circunferencia escrotal inferiores a la mnima (por categora de edad) y/o cuyo eyaculado contenga menos del 30% de espermatozoides mtiles o menos del 70% de morfologa normal debe ser clasificado como insatisfactorio. Clasificacin pendiente Toros que no pueden clasificarse en el presente como insatisfactorios pero que puedan mejorar con el tiempo o tratamiento. De hecho los formularios de anlisis proveen un espacio para reprogramar otra prueba. Esta categora incluye toros jvenes con perfiles de semen inmaduro, as como cualquier toro que tiene pobre calidad seminal que se considere capaz de mejorar. Tambin en esta categora se encuentran los toros que fallan en dar une eyaculado aceptable por razones que no son obvias a pesar de una evaluacin fsica cuidadosa, as como tambin toros con problemas que se consideren tratables. Si existe alguna duda de que un toro pueda ser asignado con seguridad a las categoras de reproductor potencial satisfactorio o insatisfactorio, se debe realizar una nueva prueba y el toro debe ser asignado a la clasificacin pendiente. Tanto falsos positivos como falsos negativos son inaceptables ya que es tan malo condenar a un toro satisfactorio como es el de aprobar un toro que debera ser clasificado como insatisfactorio.

Test de Capacidad de Servicios Esta destinado a medir el nmero de servicios que es capaz de realizar un reproductor (toro o carnero) bajo condiciones estipuladas. Mide la lbido y la habilidad de monta que tiene el reproductor. Es preferible evaluar los machos individualmente, en corrales con espacio adecuado y sobre hembras en calor fijadas en bretes de monta ubicados equidistantemente, si se pretende poner mas de una hembra. Los machos deben estar estimulados sexualmente, usualmente viendo la actividad de monta de los machos que lo preceden (el primero debera ser un macho experimentado) y el periodo de interaccin con las hembras no debiera superar los 20 min, debido a que la correlacin con la actividad de monta en potrero es del orden de 0.91 (contra 0.95 interactuando por 40 o 60 min) lo cual es suficiente. Las evaluaciones son mas confiables cuando los machos han tenido experiencia sexual previa y es importante adems que los machos estn familiarizados con el entorno. Finalmente, la evaluacin debe repetirse en al menos 3 oportunidades para los reproductores que presentan una actividad de servicios baja, debido a que un porcentaje de ellos mejora con la secuencia, mientras que otros se mantiene con una baja actividad. Los que tienen alta actividad por lo general se mantienen activos. La interpretacin de los resultados es la siguiente para un lapso de 20 min: 0-1 es considerado baja capacidad de servicios 2-3 capacidad media > 4 capacidad alta Los resultados en trminos de tasas de preez son significativos entre machos con alta y baja capacidad de servicios, por lo que estos ltimos deberan evitar ser usados en programas de monta natural. As, toros con alta y baja capacidad de servicios tuvieron un 60 y 21% de preez en un periodo de 3 semanas de monta y carneros con alta capacidad de servicios producen significativamente mas corderos nacidos que los con baja capacidad. Sustentacin tcnico-econmica del examen androlgico Existe consenso en que las capacidades reproductivas de los toros reproductores son esenciales para cualquier consideracin econmica de sistemas de produccin vaca/ternero (crianza). Los problemas fsicos y la subfertilidad han sido identificados como los criterios ms importantes de eliminacin de toros de carne. Aunque hay muy pocos toros completamente estriles, an toros subfrtiles pueden afectar adversamente la tasa de preez. Uno de los estudios ms antiguos utiliz 48 toros clasificados como reproductores potenciales satisfactorios, cuestionables, o insatisfactorios en servicio natural logrando preeces de 75, 52 y 12% respectivamente [6]. Mientras que la prediccin de fertilidad para toros individuales era imperfecta, el uso de toros que fallaron en llenar el criterio de reproductores potenciales result en un nmero considerablemente menor de hembra preadas que cuando se usaron toros satisfactorios.

Otros estudios utilizaron rebaos grandes con esquemas de grupos de toros participando en las montas y con relacin vaca:toro aproximada de 25:1. En estos estudios, todos los toros se sometieron a una BSE y los toros que no pasaban el examen fsico o tenan circunferencia escrotal inadecuada se eliminaron. En el primer experimento, las vacas fueron servidas por toros con al menos 80% de morfologa espermtica normal, o con un grupo de toros control. En el segundo experimento, se sirvieron vaquillas vrgenes con grupos de toros con al menos 70% u 80% de morfologa espermtica normal, o con un grupo de toros control (no evaluados). En ambos ensayos los toros control tenan una distribucin de porcentaje de semen normal encontrados en la poblacin original (mayor), de toros disponibles. En el primer experimento, cuando se usaron toros con por lo menos 80% de semen normal, se obtuvo una tasa de preez del 97% comparada con una tasa de preez del 87% para toros control. En el segundo experimento, las tasas de preez fueron del 90% para novillas servidas por toros con al menos 80% de semen normal, 91% para novillas servidas por toros con al menos un 70% de semen normal y 85% para las novillas servidas por toros control. En promedio, los toros con caractersticas fsicas aceptables y que cumplan con el requisito mnimo de circunferencia escrotal y preseleccionados para tener al menos 70% de semen normal lograron un 5 a 6% ms de vacas preadas que los toros que no se seleccionaron por morfologa normal. Estas diferencias pueden ser mucho ms grandes en hatos que utilizan esquemas con montas usando un solo toro. En otro estudio, los factores ms importantes que afectaron las tasas de preez fueron la circunferencia escrotal y la ausencia relativa de defectos espermticos primarios. Estos estudios as como otros apoyan los lineamientos de la SFT de 1993 que ha puesto un mayor nfasis en la circunferencia escrotal mnima basada en la edad del toro, as como un mnimo aceptable de 70% de morfologa espermtica normal