Manual de Bioquimica

Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica
El Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, es una obra diseada y creada en la Universidad Pedaggica de El Salvador. En la modificacin y diseo de esta obra intervinieron: Lic. Carlos Garca Navarro (Docente de la Universidad Pedaggica de El Salvador) Juan Carlos Prez Majano (Laboratorista de la Universidad Pedaggica de El Salvador)
Presentacin
La bioqumica es la ciencia que estudia la composicin qumica de los seres vivos, especialmente las protenas, carbohidratos, lpidos y cidos nucleicos, adems de otras pequeas molculas presentes en las clulas y las reacciones qumicas que sufren estos compuestos que les permiten obtener energa y generar biomolculas propias. La bioqumica se basa en el concepto de que todo ser vivo contiene carbono y en general las molculas biolgicas estn compuestas principalmente de carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno, fsforo y azufre. Es la ciencia que estudia la base qumica de la vida: las molculas que componen las clulas y los tejidos, que catalizan las reacciones qumicas del metabolismo celular como la digestin, la fotosntesis y la inmunidad, entre otras. El Manual Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, es un material didctico que presenta una serie de experimentos, en los cuales podrs realizar muchas experiencias como Carbohidratos, Lpidos, Protenas, otras. Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, esta diseado de acuerdo al Programa de Estudio, cubriendo todas las unidades y objetivos planteados. Las prcticas podrn realizarse de forma segura acatando las normas y reglas de uso de laboratorio. Para que el trabajo de laboratorio sea eficaz por favor tomar en cuenta las recomendaciones de tu docente. Esperando que este manual sea de mucha utilidad a los estudiantes que realizan las prcticas de laboratorio y que de alguna manera logren comprender las Ciencias Naturales. "Los conceptos y principios fundamentales de la ciencia son invenciones libres del espritu humano "Albert Einstein
ndice
Contenido Introduccin Reglamento interno de Laboratorio de Qumica y Biologa Recomendaciones generales del trabajo en el laboratorio Prctica 1 Prctica 2 Prctica 3 Prctica 4 Prctica 5 Prctica 6 Carbohidratos: Prueba para azucares reductores y no reductores. Parte I Carbohidratos: Reacciones de Hidrlisis (Almidn y Sacarosa). Parte II Lpidos Protenas: Desnaturalizacin, prueba de Biuret y Xantoprotica. Extraccin de ADN (cido Desoxirribonucleico) Obtencin de pectinas Bibliografa Pg. 45 67
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Universidad Pedaggica de El Salvador Facultad de Educacin Escuela de Ciencias Naturales y Exactas
INTRODUCCIN La bioqumica estudia la base molecular de la vida. En los procesos vitales interaccionan un gran nmero de substancias de alto peso molecular o macromolculas con compuestos de menor tamao, dando por resultado un nmero muy grande de reacciones coordinadas que producen la energa que necesita la clula para vivir, la sntesis de todos los componentes de los organismos vivos y la reproduccin celular. Al conjunto de reacciones que suceden dentro de los seres vivos se le llama metabolismo. Actualmente se conoce a detalle la estructura tridimensional de las macromolculas de mayor importancia biolgica, los cidos nucleicos y las protenas, lo que ha permitido entender a nivel molecular sus funciones biolgicas. Gracias al conocimiento de la estructura de los cidos nucleicos, se esclarecieron los mecanismos de transmisin de la informacin gentica de generacin a generacin, y tambin los mecanismos de expresin de esa informacin, la cual determina las propiedades y funciones de las clulas, los tejidos, los rganos y los organismos completos. Conocer a detalle la estructura de varias protenas ha sido muy til en la especificacin de los mecanismos de las reacciones enzimticas. Prcticamente todas las reacciones que integran el metabolismo son reacciones enzimticas. El tipo de especie qumica y los mecanismos de accin que intervienen en el almacenamiento, replicacin y transferencia de la informacin gentica, as como las reacciones que forman el metabolismo son prcticamente
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Manual de Prcticas de Laboratorio Bioqumica
idnticos, desde las bacterias hasta los organismos superiores. No todas las clulas contienen y expresan la misma informacin, pero las reacciones que s llevan a cabo, utilizan enzimas prcticamente idnticas. De hecho las diferencias y similitudes entre ellas se han utilizado para establecer la secuencia de aparicin de las especies. Los virus tienen algunas variantes, por ejemplo; los cromosomas de los retrovirus estn constituidos por molculas de ARN y en algunos fagos (virus que atacan a las bacterias) tienen ADN de una sola cadena. Los virus no cuentan con un metabolismo que les permita vivir en forma autnoma, slo se pueden reproducir y expresarse dentro de las clulas que invaden. Las reacciones que constituyen el metabolismo estn localizadas en determinadas estructuras celulares que forman unidades discretas que se llaman organelos. Las reacciones se llevan a cabo en los lugares en donde se encuentran las enzimas que las catalizan. La clula no es un saco sin estructura, sino que es un sistema muy complejo y altamente organizado. En la subseccin 1.1.2, denominada Citologa, se encontrar la descripcin de las estructuras celulares. En seguida vamos a presentar la informacin ms relevante, para la toxicologa, sobre las macromolculas biolgicas en lo que se refiere a su estructura y funcin. Frecuentemente se mencionar la localizacin dentro de la clula de los sitios donde se sintetizan y actan.
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Reglamento Interno de Laboratorio de Qumica y Biologa 1. Cada grupo de laboratorio es atendido por el profesor de la ctedra, quien es el responsable del buen desarrollo de las prcticas y del cuidado del equipo de laboratorio. 2. El laboratorista entregar a cada grupo el equipo de laboratorio correspondiente a la prctica a ejecutarse y ser el encargado de revisarlo y recibirlo cuando finalice la prctica. 3. Cada grupo de laboratorio estar dividido en mesas de trabajo, de las cuales se elegir un representante, quien ser el responsable del equipo ante su profesor. 4. Cualquier prdida o dao del equipo de laboratorio, ser cargado a todos los miembros de la mesa; s no se detectara la mesa en la que hubo dao o prdida se cargar a toda la seccin. 5. Est prohibido fumar, beber, comer, contestar celulares o usar cualquier otro distractor que pueda perturbar su trabajo dentro de las instalaciones del laboratorio. 6. En la mesa de trabajo solamente se tendr el manual y tiles que ayuden a desarrollar su prctica, sus bolsos sern colocados en las gavetas o en un lugar donde no perjudiquen la perfecta realizacin de la prctica. 7. Cada representante entregar al profesor, en orden y en buen estado, el equipo que se ha utilizado durante la prctica.
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8. Al finalizar la prctica, los miembros de la mesa de trabajo, se encargarn de dejar limpio, tanto el equipo de laboratorio como el espacio fsico donde trabaj. 9. Se requiere de la puntualidad de docentes como de los estudiantes para el mayor aprovechamiento de la prctica. 10. La entrega del reporte de laboratorio quedar sujeta a las indicaciones del docente. 11. Ser obligatorio que los alumnos posean su gabacha; de no ser as, no se permitir el ingreso al laboratorio. 12. Adems de la gua de laboratorio, el alumno deber de obtener los siguientes artculos para uso en el laboratorio: rollo de papel higinico, detergente, Fsforos, Tirro o vieta y Toalla pequea.
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Recomendaciones generales del trabajo en el laboratorio. El aula de laboratorio es el lugar destinado para la realizacin de actividades experimentales. Para aprovechar al mximo cada actividad de aprendizaje, es conveniente ser cuidadoso y disciplinado; para esto se tiene que tomar en cuenta las siguientes recomendaciones: 1. Es necesario seguir en detalle todas las instrucciones dadas por el profesor o la persona encargada del laboratorio. 2. Antes de realizar una prctica se debe de leer cuidadosamente lo que se va a hacer durante el desarrollo de la misma y preparar los aparatos y materiales necesarios para evitar contratiempos, equivocaciones y desperdicios de materiales. 3. Se realizar un examen previo la cual demostrara que sabe lo que va a realizar en el laboratorio. 4. Revisar que el material y/o equipo est limpio y en buen estado antes de comenzar la prctica para que no afecte los resultados. 5. Una vez concluida la prctica debe limpiar y ordenar adecuadamente los instrumentos y equipo utilizado sobre la mesa de trabajo, donde luego revisara el laboratorista para verificar que el material est en buenas condiciones. 6. Al terminar el trabajo experimental, es importante que analice y comente con su profesor y compaeros los resultados alcanzados y
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que obtenga conclusiones sobre el trabajo realizado, procure adems, aclarar las dudas que tenga para la elaboracin del informe. 7. Limpiar todos los materiales qumicos, especialmente los de vidrio, con detergente y abundante agua, luego con agua destilada si la hay. Los tubos son lavados con cepillo, posteriormente djelos que se escurran. 8. No calentar lquido combustible directamente a la llama como son: Benceno, ter, gasolina y otras sustancias inflamables. 9. Cuando utilice cidos y bases fuertes y los vierta en el desage, utilice bastante agua, djela correr y vierta la sustancia. 10. Es recomendable identificar en todos los casos la ubicacin exacta del botiqun de emergencia. 11. No probar los reactivos en la boca, para pipetear cidos o sustancias txicas, debe usarse perillas en las pipetas y si no hay, debe utilizarse probetas de baja graduacin (10 25ml). 12. Antes de abrir un frasco, es necesario leer las indicaciones sealadas en su etiqueta, y deben seguirse siempre en forma detallada. 13. Por ningn motivo debe darse al equipo de laboratorio un uso diferente de aquel para el cual fue diseado. 14. Cuando se use gas, las llaves deben quedar bien cerradas; es necesario revisarlas al final de la sesin. 15. Cuando se use el cabello largo, ste debe sujetarse para evitar accidentes.
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Prctica 1
Carbohidratos: Pruebas para azucares reductores y no reductores. Parte I
Objetivo
Identificar las diferentes clases de carbohidratos e hidrolizar el enlace de disacridos. Identificar la propiedad reductora de los carbohidratos.
Fundamentacin terica Los carbohidratos son los compuestos orgnicos ms abundantes de la biosfera y a su vez los ms diversos. Normalmente se los encuentra en las partes estructurales de los vegetales y tambin en los tejidos animales, como glucosa o glucgeno. Estos sirven como fuente de energa para todas las actividades celulares vitales. Son complejos terciarios en los cuales el hidrgeno y el oxgeno estn en igual proporcin que el agua. Los ms comunes son los sacridos, los cuales se dividen tambin en monosacridos o azcares simples, disacridos y polisacridos. Como ejemplos tenemos a:
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Los carbohidratos se pueden clasificar en: 1. Monosacridos: Llamados tambin azcares simples. Son los azcares ms sencillos, no se hidrolizan y contienen de 3 a 6 tomos de carbono (desde triosas hasta hexosas). Los ms importantes son la glucosa, la sacarosa, xilosa y fructosa. 2. Oligosacridos: Son polmeros de monosacridos que se pueden hidrolizar produciendo un bajo nmero de monosacridos. Comprenden desde disacridos hasta hexasacridos. El ms notable es la lactosa (disacrido). 3. Polisacridos: Son compuestos formados por la unin de muchos monosacridos. Se hidrolizan produciendo muchas molculas de monosacridos. El ms importante es el almidn. Tambin stos presentan una diferente isomera. 4. Aldotriosas: Presentan un carbono asimtrico, dos ismeros (enantimero). 5. Aldotriosas: Presentan dos carbonos asimtricos distintos, ocho ismeros (cuatro pares). 6. Aldohexosas: Presenta cuatro carbonos asimtricos distintos, diecisis ismeros (cuatro pares). Con respecto a la configuracin de un carbohidrato, la estructura patrn es el aldehdo glicrido. El glcido que tiene el ltimo oxidrilo del carbono asimtrico hacia la derecha pertenece a la serie D. En caso contrario, es de la serie L. D y L son imgenes especulares y tambin antpodas pticos, pero las letras D y L no se refieren al sentido del poder rotatorio.
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Existen reactivos que pueden identificar a los Carbohidratos: Reaccin de Fehling: Se basa en el carcter reductor de los monosacridos y de la mayora de los disacridos (excepto la sacarosa). Si el glcido que se investiga es reductor, se oxidar dando lugar a la reduccin del sulfato de cobre (II), de color azul, a xido de cobre (I), de color rojo-anaranjado. Un excelente sustituto para ste reactivo sera el reactivo de Benedict, el cual identifica a cualquier clase de carbohidrato. Reaccin de Lugol: La coloracin producida se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta producto de haber identificado una cetosa. Reaccin de Molish: Todos los sacridos pueden ser degradados o hidrolizados hasta transformarlos en las unidades de monosacridos que los constituyen. La hidrlisis qumica, requiere de catalizadores (cidos minerales) y de calor. La hidrlisis puede seguirse controlando algunas propiedades qumicas como el poder reductor. La hidrlisis del almidn produce azcares de peso molecular cada vez menor hasta convertirse ntegramente en monosacridos: almidn, dextrina, eritro dextrina, alfa y beta acrodextrina, maltosa y D-glucosa. Reaccin de Salivanoff: El cido clorhdrico caliente del reactivo deshidrata a las cetohexosas para formar hidroximetilfurfural ms rpido que las aldohexosas correspondientes. Las cetohexosas reaccionan con el Resorcinol del reactivo para dar compuestos de color rojo oscuros, las aldohexosas forman compuestos de color ligeramente rosados.
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Materiales Tubos de ensayo Pipeta Probeta de 10ml y 25ml Gotero Beaker 400ml (2) Mechero Bunsen Base soporte, malla de asbesto Agitador Fsforos * Toalla pequea * Pinza para tubos de ensayo
Sustancias Solucin de glucosa * Solucin de fructosa * Solucin de sacarosa * Solucin de lactosa * Solucin de almidn * H2SO4 [ ] Reactivo de Benedict Reactivo de Molish Reactivo de Fehling A y B Lugol Reactivo de Benedict Reactivo de Barfoed Reactivo de Salivanoff
*Material que traer el alumno Desarrollo Experimental Reaccin con el Reactivo de Fehling 1. En un tubo de ensayo agregar 3ml de solucin de Carbohidratos. 2. Al tubo de ensayo con la solucin de carbohidrato agregar 1ml de Reactivo de Fehling A y 1ml de Fehling B. 3. Calentar el tubo en bao Mara y observar lo que sucede Preguntas del experimento 1. Qu color torna la solucin con el reactivo de Fehling? 2. Qu ocurri con la solucin de carbohidrato cuando se someti a bao de Mara?
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3. En que momento la reaccin ser positiva o ser negativa? Prueba con Reactivo de Molish 1. A 2 ml de carbohidratos; agregar 2 gotas de reactivos de Molish. Mezclar bien ambas sustancias. 2. Seguidamente vierta 2 ml H2SO4concentrado procurando no mezclar los lquidos. (Inclinar el tubo y dejar ir la sustancia por las paredes del tubo). Preguntas del experimento 1. Qu color observa en la interface de los lquidos? 2. Qu otras sustancias, adems del alfa naftol podran ser usados como reactivos? 3. Qu grupo de sustancias dan la prueba de Molish? 4. Por qu muchas protenas dan la prueba de Molish? 5. Explique los cambios ocurridos en los carbohidratos. Prueba con el Reactivo de Benedict 1. Poner en dos tubos separados 2 ml de reactivo de Benedict 2. Agregar 4 gotas de solucin de carbohidratos, mezclar bien y poner todos los tubos al mismo tiempo en agua hirviendo por 3 minutos 3. Enfriar espontneamente (no enfriar con agua fra de chorro). Compare el color desarrollado en cada uno y tabule los datos o resultados. Preguntas del Experimento 1. Cul es el color del precipitado? 2. Discutir la qumica de la prueba
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3. Cul es la diferencia entre el reactivo de Benedict y reactivo de Molish? Prueba con el Reactivo de Barfoed 1. Poner 3 ml de reactivo de Barfoed, en varios tubos de ensayo, agregar 1 ml de solucin de carbohidratos cuya reaccin se quiere conocer. Mezclar bien, y poner los tubos al mismo tiempo en agua hirviendo por un minuto y ms, hasta que note el cambio de algunos de ellos. Preguntas del Experimento 1. Qu carbohidratos se oxidan ms rpidamente? 2. Cul es la objecin de hervir por un tiempo ms largo? 3. Puede usarse la prueba de Barfoed en la orina para investigar glucosa en vez de Benedict? Prueba con el Reactivo de Salivanoff 1. Poner 3 ml de reactivo de Salivanoff en tres tubos de ensayo, agregar 3 gotas de solucin de carbohidratos a cada uno de ellos, colocar los tubos en agua hirviendo y calentar hasta que el color se desarrolle en uno o ms tubos. Preguntas del Experimento 1. 2. 3. 4. 5. Qu carbohidrato da la prueba positiva en el tiempo ms corto? Puede usarse esta prueba para distinguir la sacarosa de la fructosa. Cules fueron azucares reductores? Cules No fueron azucares reductores? Qu diferencia existe entre un cido aldnico y uno aldarico? cite ejemplos
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Prctica 2
Carbohidratos: Reacciones de Hidrlisis (Almidn y Sacarosa). Parte II
Objetivo
Obtener monosacridos a partir de un polisacrido por hidrlisis total con cido fuerte.
Fundamentacin Terica El polisacrido estructural ms abundante es la celulosa, componente principal de las plantas superiores. La hidrlisis total de la celulosa, empleando cidos, produce D Glucosa. La hidrlisis parcial produce celulosa. La celulosa (papel) puede transformar sea en azcar por tratamiento por acido relativamente concentrado; otro polisacrido, con funcin de reserva, es el almidn. Las propiedades del almidn son diferentes a las de la glucosa como se evidenciar mediante la hidrlisis del almidn para generar glucosa. Todos los polisacridos son hidrolizados en sus constituyentes monosacridos, por la accin de cidos diluidos. Esta es una reaccin gradual que puede observarse durante el tiempo de la sesin de laboratorio. Es por tanto recomendable que usted inicie el proceso de hidrlisis al comenzar la sesin de laboratorio y luego proceda con el resto de las pruebas. La hidrlisis del almidn se puede evidenciar con dos pruebas: 1. Desaparicin del color azul caracterstico de la prueba del yodo. 2. Aparicin de glucosa, un azcar reductor. La aparicin de glucosa se evidenciar mediante la prueba de Benedict.
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Materiales Sustancias Beaker 250ml, 400ml, 50ml Almidn * Mechero bunsen Lugol Malla de asbesto, aro metlico y HCl [ ] base soporte NaOH 5N Tubos de ensayos Sacarosa (solido) Probeta de 10ml Agua destilada Vidrio de reloj Bicarbonato de sodio * Pipeta y gotero Reactivo de Barfoed Papel litmus
* Material que traer el alumno
Desarrollo Experimental Prueba del yodo 1. En un Beaker de 250ml proceda a calendar 50ml de agua destilada hasta ebullicin. 2. Mientras tanto, en un Beaker de 50ml haga una mezcla de 2gr de almidn con 10ml de agua destilada. 3. Al agua hirviendo (1) agregue la mezcla de almidn (2) agitando y dejar que contine hirviendo hasta que la mezcla se vuelva traslcida. 4. Enfre 5ml de la solucin hervida, en un tubo de ensayo y guarde el resto.
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5. Aada 5ml de agua destilada al resto del almidn que quedo en el Beaker (2) y transfiera la suspensin en un tubo. 6. A cada uno de los dos tubos de ensayo (con almidn hervido y enfriando y con el almidn no hervido), agregue 3 gotas de Lugol. 7. Compare los colores obtenidos en ambos tubos. Hidrlisis acida del almidn 1. Emplee el resto del almidn hervido y solubilizado que quedo en el Beaker del experimento anterior. 2. Una vez fro, agregue 1.5ml de HCl concentrado (medirlo en probeta de 10ml), mezclar bien y cubra el Beaker con un vidrio reloj. Caliente la solucin permitiendo una ebullicin suave. 3. Desde el momento que comience a calentar, tome una gota de solucin (con gotero o pipeta) a intervalos de 1 minuto, y colquela en una depresin del bloque comparador o pgina de papel bond para hacer la prueba del yodo. 4. Note los cambios de color en la prueba, segn la hidrlisis progresa en el tiempo. (cuando al aplicar la prueba del yodo se nota que persiste el color del reactivo, se enfra la solucin y se le aade 3ml de NaOH 5N) la solucin debe ser acida al papel litmus. 5. Tome unos 2ml de solucin e investigue el azcar reductor con la prueba de Benedict.
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Hidrlisis acida de la Sacarosa 1. Disuelva 1 gr de sacarosa en 25 ml de agua destilada. 2. Coloque en dos tubos de ensayo 5 ml a cada uno. 3. Enumralos y el tubo 1 dejarlo en reposo (Muestra patrn). 4. Al tubo 2 agrega 5 gotas de acido clorhdrico concentrado. 5. Colocar en bao de mara por unos 5 minutos. 6. Dejarlo enfriar y agrega Bicarbonato de sodio hasta que no se produzca efervescencia. 7. Agrega 3 ml de Barfoed a los tubos 1 y 2 y colocar en bao de mara. 8. Observa lo sucedido.
Preguntas del experimento realizado 1. Qu organismos son capaces de dirigir la celulosa? Por qu? 2. Qu uso industrial tienen las pectinas? 3. Qu son los pectatos? 4. Con que propiedad fsica cree que esta relacionado la pectina en los frutos y vegetales? 5. Qu son las hemicelulosas?
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6. Cul es la diferencia entre mucoprotenas o mucinas y glicoprotenas? 7. Es la reaccin de Tollens positiva para todos los carbohidratos? Explique 8. Explique la reaccin del yodo con el almidn 9. Cul es la diferencia estructural entre la celulosa, la amilasa y Amilopectna? 10. Cul es la accin del NaOH y del NaHCO3? 11. Escribe las reacciones respectivas del NaOH y del NaHCO3? 12. Por qu razn la prueba de Barfoed solamente dio positiva con el tubo 2 y con el 1 NO? 13.Escriba la reaccin de hidrlisis total o parcial del almidn y sacarosa.
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Prctica 3
Lpidos
Objetivos
Identificar la solubilidad de los lpidos. Comprobar la reaccin caractersticas que identifica a los lpidos. Realizar hidrlisis de las grasas y su importancia industrial.
Fundamentacin Terica Los lpidos son un grupo heterogneo de compuestos orgnicos. Su estructura qumica vara y, con ella, tambin lo hacen sus propiedades y su funcin. Dentro de ellos se encuentran las grasas, que se dividen en saturadas e insaturadas. Estas ltimas, las vegetales y las del pescado (Omega 3) son las ms saludables. Los lpidos son un grupo muy heterogneo de compuestos orgnicos, constituidos por carbono, hidrgeno y oxgeno principalmente, y en ocasiones por azufre, nitrgeno y fsforo. En los alimentos existen fundamentalmente tres tipos de lpidos: 1. Grasas o aceites (tambin llamados triglicridos o triacilglicridos) 2. Fosfolpidos 3. steres de colesterol, que muestran un componente comn: los cidos grasos.
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Los cidos grasos son molculas orgnicas formadas mayoritariamente por carbono, hidrgeno y oxgeno. Dependiendo de su estructura qumica se clasifican en: 1. cidos grasos saturados (AGS): Son aquellos en los que sus tomos de carbono tienen todos sus lugares de unin saturados por tomos de hidrgeno. 2. cidos grasos insaturados (AGI): Son aquellos en los que dos de sus tomos de carbono tienen cada uno un enlace sin saturar con hidrgeno, es decir, faltan dos tomos de hidrgeno. Se forma as lo que se denomina un doble enlace.
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3. cidos grasos poliinsaturados (AGP). Son aquellos en los que ms de dos tomos de carbono tienen lugares no saturados con tomos de hidrgeno (formando dos o ms dobles enlaces). Grasas y aceites: Los aceites y las grasas (visibles o de depsito) constituyen un 98% de los lpidos totales de la dieta y estn formados casi exclusivamente por triglicridos, que contienen cidos grasos de los tres tipos mencionados junto con una molcula de glicerol. Las grasas a temperatura ambiente son slidas ya que estn compuestas principalmente por cidos grasos saturados, que poseen una temperatura de fusin ms alta que la ambiental. Por el contrario, los aceites a temperatura ambiente son lquidos debido a la gran proporcin de cidos grasos monoinsaturados (insaturados) y poliinsaturados que contienen. Grasa saturada: La grasa saturada est presente en los productos de origen animal y en dos aceites de procedencia vegetal, el de coco y el de palma, as como en productos derivados de stos o que los contengan. Los cidos grasos saturados ms comunes son el lurico, palmtico, mirstico y esterico. Los cidos grasos saturados hacen ms sabrosos los platos, adems de provocar sensacin de saciedad. Sin embargo, un consumo elevado de los mismos, junto con la ingesta de colesterol exgeno (procedente de los alimentos) puede ocasionar graves problemas cardiovasculares al obstruir las arterias. Grasa insaturada o aceites Mono-insaturada: El cido oleico es el componente principal del aceite de oliva gracias al cual se le atribuyen beneficiosas propiedades sobre diversas patologas.
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Poliinsaturada: Presenta en su composicin cidos grasos con uno o ms dobles enlaces en su estructura qumica, lo que hace que se oxide con mayor facilidad y se formen radicales libres que pueden dar lugar a compuestos potencialmente cancergenos. Fosfolpidos: Los fosfolpidos de la dieta constituyen un aporte de cidos grasos, aunque de menor importancia que los triglicridos. No obstante, intervienen en funciones de transporte de lpidos en el plasma y desempea un importante papel en la constitucin de la membrana celular y en la vaina de mielina de las neuronas. Colesterol: Su estructura es completamente diferente a la de los cidos grasos. No es considerado un nutriente esencial. Sin embargo, es fundamental desde el punto de vista celular para la formacin de la membrana celular. Materiales Tubos de ensayo Probeta 10ml Pipeta Beaker 100ml, 250ml y 400ml Balanza de tres brazos Agitador Soporte, aro metlico Embudo de vidrio Papel filtro Huevos (2) * Fsforos * Toalla de tela * Capsula de porcelana Mechero Bunsen Sustancias Aceite de algodn * Manteca vegetal * cido esterico Cloroformo Acetona Alcohol etlico Alcohol 95% Sulfato de sodio anhdrido Benceno Anhdrido actico cido sulfrico concentrado Agua destilada
*Material que traer el alumno

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Desarrollo Experimental Prueba de solubilidad 1. En tres tubos de ensayo colocar aproximadamente 5 ml de agua. 2. Agregar a cada uno una muestra de los siguientes lpidos: aceite de algodn, manteca vegetal y cido esterico. Agitarlos 3. Agregar al tubo de ensayo que contiene el aceite una pizca de detergente. Agitar 4. Depositar la mezcla en vaso precipitado de 250 ml que contenga 100 ml de agua y dejar en reposo. 5. Realizar las observaciones y concluir. 6. Agregar a cada uno de los lpidos, para comprobar su solubilidad. 7. Repetir el procedimiento agregando 2ml de cloroformo en tres tubos de ensayo. 8. Colocar una pequea muestra de lpidos a cada uno. Agitar. Preguntas del Experimento 1. Por qu los lpidos No son solubles en agua? 2. Qu accin realiza el detergente en la solubilidad? 3. Qu son las miscelas?
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4. Por qu los lpidos son solubles en cloroformo? 5. Qu otros solventes pueden solubilizar las grasas? Extraccin de Lpidos 1. Rotar el huevo suavemente sobre la mesa durante 2 minutos. 2. Separe la yema de la clara de un huevo y pnganlos respectivamente en 2 Beakers de 100 ml, previamente pesados y anote el peso de cada fraccin. 3. Agregue a la yema 15 ml del alcohol de 95% y agite bien, con un agitador de vidrio por varios minutos, para precipitar las protenas. 4. Agregue 25ml de cloroformo, agite tres minutos aproximadamente y filtre a travs de un papel filtro previamente pesado. 5. Lave el precipitado proteico que quedo en el embudo 3 veces, usando 10 ml de Cloroformo cada vez agitando con un agitador. No agregue la siguiente porcin sino hasta que la primera haya drenado completamente. Seque en bao de Mara. 6. Pese la protena y calcule el porcentaje de protena en la yema de huevo. 7. A los lpidos de la yema de huevo disueltos en cloroformo, agregar 2 cucharaditas de Na2SO4 anhdrido y agite por 5 minutos para remover el agua del solvente. Filtre dentro de una cpsula de porcelana previamente pesada y evapore a bao de Mara hasta que desaparezca el olor a solvente. Enfre y pese, calcule el porcentaje de lpidos en la yema.
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Preguntas del Experimento 1. Qu parte del huevo es rica en grasa? 2. Explique el efecto sobre la yema de huevo del: a) Alcohol b) Cloroformo c) Sulfato de sodio Anhdrido Investigar: 1. Qu es el colesterol? y como se clasifica. 2. Por qu las grasas saturadas son ms dainas que las insaturadas? 3. Qu tipos de grasas estn presentes en la yema del huevo?
Hidrlisis Alcalina de una grasa Saponificacin 1. Colocar 10 gamos de manteca en un Beaker de 250 ml. 2. Agregar10 ml de alcohol. Agitar. 3. Calentar con cuidado la mezcla y mantener agitacin constante desde este momento. 4. Agregar por porciones 15 ml de una solucin de Hidrxido de sodio; mantener la agitacin constante. Hasta evaporar el solvente y parte de la solucin.
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5. Colocar la solucin jabonosa en notro Beaker que contenga 2ml de solucin de cloruro de sodio y dejar en reposo. 6. Realizar la prueba de jabn; colocando una pequea muestra obtenida en un Beaker con agua y agitar hasta formar espuma. 7. Anotar las observaciones. Preguntas del Experimento 1. Cul es la composicin qumica de la manteca vegetal? 2. Qu accin tiene el alcohol y calor utilizado? 3. En que consiste la saponificacin? 4. Escriba la reaccin qumica. 5. Qu otros lcalis se pueden utilizar para preparar jabones? 6. Cmo se clasifican los jabones? 7. Qu diferencia existe entre un jabn y un shampoo? 8. Investigar la preparacin de los jabones lquidos.
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Prctica 4
Protenas: Desnaturalizacin, prueba de Biuret y Xantoprotica.
Objetivos
Determinar las propiedades fsicas y qumicas de las protenas. Realizar pruebas cualitativas de identificacin de aminocidos. Comprender la importancia de la desnaturalizacin de protenas dentro de los organismos vivos.
Fundamentacin terica Las protenas son compuestas de carbono, oxigeno hidrogeno y nitrgeno. La mayora de ellas contienen adems azufre, y algunos fsforos. Sus molculas son de proporciones coloidales, todas son muy complejas molecularmente y tienen alto peso molecular. La molcula proteica esta compuesta de una combinacin de aminocidos por condensacin. Las proteasas, peptonas, pptidos y aminocidos son derivados de las protenas formados en sntesis e hidrlisis. Hay ciertas reacciones coloreadas que dan las protenas y dependen de los aminocidos presentes en la molcula proteica. Todas dan la reaccin de Biuret. Se basa en una reaccin tpica de los enlaces peptdicos, en la cual los tomos de cobre del reactivo se unen a los grupos amino, lo que provoca una coloracin rosa - violcea. Las que contienen tirosina dan las reacciones Xantoprotica.
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Observaremos tambin en esta prctica como se destruye los enlaces que mantienen estable la conformacin globular de las protenas, de manera que stas queden con una estructura filamentosa; con lo cual pierden su solubilidad y precipitan en forma de cogulos. La desnaturalizacin se efectuar sometiendo una disolucin de protenas a cambios de pH, a alteraciones de concentracin del medio y a variaciones de la temperatura. Las protenas son clasificables segn su estructura qumica en: Protenas simples: Producen solo aminocidos al ser hidrolizados. Albminas y globulinas: Son solubles en agua y soluciones salinas diluidas (ejemplo: lactoalbmina de la leche). Glutelnas y prolannas: Son solubles en cidos y lcalis, se encuentran en cereales fundamentalmente el trigo. El gluten se forma a partir de una mezcla de glutennas y gliadnas con agua. Albuminoides: Son insolubles en agua, son fibrosas, incluyen la queratina del cabello, el colgeno del tejido conectivo y la fibrina del coagulo sanguneo.
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Protenas conjugadas: Son las que contienen partes no proteicas. Ej.: nucleoprotenas. Protenas derivadas: Son producto de la hidrlisis. En el metabolismo, el principal producto final de las protenas es el amonaco (NH3) que luego se convierte en urea (NH2)2CO2 en el hgado y se excreta a travs de la orina. Definicin y propiedades generales Las protenas son sustancias complejas, en estrecha relacin con la materia viviente, constituyen una de las tres clases fundamentales de alimentos; las otras son: carbohidratos y grasas. Estn compuestas, parcialmente o totalmente, por cadenas de aminocidos unidos por enlaces peptdico, de donde observamos que una protena es, un polipptido del tipo: - CO NH CH CO NH CH CO NH R R
Cabe decir que las protenas son compuestos de peso molecular elevado, desde varios miles a muchos millones. Peso molecular de las protenas Nombre Peso Molecular Insulina 6,000 (monmero) Ribonucleasa 13,000 Citocromo C 13,000 Loctalbmina 174,000 Mioglobina 175,000
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Protena de Bense Jones Lactoglubulina Pepsina Albmina de huevo Hemoglobina Ureasa Tiroglobulina Miosina Actomiosina Virus del mosaico del tabaco Tromboplastilina del pulmn Virus de la influenza
35,000 y 37,000 38,000 39,000 44,000 68,000 480,000 630,000 840,000 4 millones 40 millones 167 millones 200 a 322 millones
Algunas, son solubles en agua, otras necesitan para disolverse, la presencia de sales o de pequeas cantidades de cidos o bases y otras, se disuelven solo por la accin de reactivos que modifican mucho su estructura. La protena media es una entidad muy sensible, ya que al exponerse al calor I a pH extremos, a agentes tenso activos y a diversos reactivos, experimentan una serie de modificaciones llamadas en conjunto desnaturalizacin, lo que hace variar cierto numero de sus propiedades. Las protenas poseen grupos inicos libres cargados elctricamente y es por esta razn que se combinan con reactivos inicos, producindose en algunos casos, compuestos insolubles. Ahora bien, la reaccin de tales grupos con los iones hidrgeno e hidroxilo, indican que las protenas, al igual que los aminocidos, son anfteras. En general son slidas e incoloras y no hidrolizadas, producen algunas reacciones de coloracin, como las de Biuret.
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En las protenas cuya funcin es netamente estructural su gran tamao, constituye una ventaja, ya que esto limita su difusibilidad y limita a la protena a su radio de trabajo. Estructura Segn se ha sealado anteriormente, las cadenas largas de aminocidos enlazadas por uniones peptdicas se llaman: polipptido; pues bien, se designa como estructura primaria de la protena, al numero y orden de los aminocidos en dichas cadenas, las cuales se mantienen dentro de la molcula proteica, por medio de diversos mecanismos. Uno de ellos, es la unin di-sulfuro, que conectadas cadenas paralelas de pptidos, haciendo un enlace relativamente estable y por lo tanto resistente a la ruptura, en las condiciones habituales de desnaturalizacin. Dos cadenas de pptidos unidas por un enlace di-sulfrico.
Adems de este tipo de mecanismos, hay otra fuerza importante relacionada con la conservacin de la estructura de una molcula proteica, que es la del enlace de hidrgeno que se produce cuando el nitrgeno y el oxigeno de una mima cadena o de diferentes, comparten un protn.
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Enlaces de Hidrgeno Y son los enlaces de hidrgeno entre los grupos de una sola cadena peptdico los que plieguen dichas, cadenas formando una estructura helicoidal. Los enlaces de hidrgenos aislados, son muy dbiles, pero la accin conjunta de un gran nmero de ellos en la molcula de protenas, produce una estructura estable.
La plegadura de las cadenas de polipptido en una estructura enrollada, mantenida por uniones di-sulfuro y por enlaces de hidrogeno, constituye la estructura secundaria de la protena; y a la disposicin e interrelacin de las cadenas torcidas de protenas en capas especificas, en cristales o en fibras, se le denomina estructura terciaria de la protena. Es probable que estas estructuras sean determinadas entre s, por la estructura de los aminocidos de la cadena primaria del polipptido, o sea que, una vez que se ha formado la cadena, los grupos qumicos que se extienden desde los aminocidos dirigen el enrollamiento especifico (estructura secundaria) y la agregacin de cadenas enrolladas (estructura terciaria).
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Adems de las estructuras primaria, secundaria y terciaria, algunas protenas pueden desplazar un cuarto nivel de organizacin en el cual se pueden combinar varias unidades manomricas, cada una con estructuras primaria, secundaria y terciaria apropiadas. Esta asociacin de unidades semejantes confiere a la protena de una estructura cuaternaria. Materiales Sustancias Tubos de ensayo Disolucin de albumina * Probeta de 10ml Acido Clorhdrico Pipeta Solucin saturada de NaCl Tirro * Hidrxido de sodio Mechero Bunsen Leche * Soporte, aro metlico y Sulfato de cobre al 1% malla de asbesto Acido Ntrico Beaker de 400ml y 250ml Reactivo de Millon Pinza para tubos de ensayo Reactivo de Hopkins Cole Toalla pequea * Acido Sulfrico Huevos (2) *
* Material que traer el alumno Desarrollo Experimental Desnaturalizacin 1. En 4 tubos de ensayo agregar 2ml de albmina a cada uno, y numerarlos. 2. Aadir al numero 1, 2ml de HCl, al numero 2, 2ml de solucin saturada de NaCl, al numero 3, 2ml de NaOH y a al numero 4, calentar suavemente. (Los nmeros cuatro con albumina, leche y clara de huevo hacerlo de una sola vez)
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3. Repetir el paso 1 y 2 sustituyendo la albmina por leche y luego por solucin de clara de huevo. 4. Anotar los resultados para cada proceso. Prueba de Biuret 1. Preparar tres tubos de ensayo y colocar en cada uno 2ml de las disoluciones proteicas. 2. Aadir en cada tubo 2ml de disolucin de hidrxido de sodio. Agitar y dejar caer cuatro o cinco gotas de solucin al 1% de sulfato de cobre. 3. Anotar los resultados. Prueba Xantoprotica 1. Preparar dos tubos de ensayo y verter en cada uno 2ml de las disoluciones proteicas. 2. Aadir 2ml de cido ntrico en cada tubo. Anotar la coloracin. 3. Calentar en bao Mara y volver a anotar los resultados. Reaccin de Millon 1. Aada 5 gotas de reactivo de Millon a 3ml de solucin de protena. 2. Calentar en bao de Mara (no exceda el reactivo, por que no se obtendrn los resultados esperados). Observe los resultados
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Reaccin de Hopkins Cole 1. Aada 2ml de reactivo de Hopkins Cole a 2ml de solucin de protenas, mezclar bien, inclinar el tubo y verter con mucha precaucin 3ml de H2SO4 concentrado. Hasta formar capas de solucin; si no aparece color deje reposar por unos minutos, o rote el tubo para que se unan los dos lquidos. Preguntas del Experimento 1. Qu le ocurre al calentar las protenas con un cido? 2. En qu consiste una desnaturalizacin de protenas? 3. Qu tipos de agentes desnaturalizantes existen? 4. Cul es la importancia biolgica de una desnaturalizacin? 5. Una protena desnaturalizada podr dar la reaccin de Biuret? Razona la respuesta. 6. Qu son las protenas? 7. Elabora un listado de 10 protenas indicando su importancia biolgica.
8. Qu diferencia existe entre una desnaturalizacin y una hidrlisis de una protena? 9. Qu le sucede a la protena cuando se le agrega este reactivo? 10. Elabora un cuadro descriptivo con las pruebas realizadas.
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Prctica 5
Extraccin de ADN (cido Desoxirribonucleico)
Objetivo
Realizar la extraccin de ADN a travs de una muestra vegetal.
Fundamentacin Terica El ADN es una molcula presente en todas las clulas de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo que nosotros somos, desde el color del pelo hasta las protenas que tenemos en nuestra sangre.
El ADN es una molcula presente en todas las clulas de los seres vivos y es la encargada de codificar todo lo que nosotros somos, desde el color del pelo hasta las protenas que tenemos en nuestra sangre.
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El ADN es una molcula cargada que esta asociada a protenas y en el caso de los organismos eucariontes est encerrado dentro de un ncleo. Para extraer el ADN primero es necesario romper las clulas y luego se necesita separar el ADN del resto de los componentes celulares como protenas y membranas lipdicas. Un detergente es una solucin capaz de disolver las membranas y as permitir que stas se separen del resto de los componentes. Adems este detergente es capaz de unir las protenas que estn junto al ADN. La sal de mesa tiene un catin que se une a la molcula de ADN y hace que cambie sus propiedades qumicas, permitiendo que el ADN precipite en presencia de alcohol. El alcohol adems disuelve los azcares y protenas. El ablandador de carne hace que las protenas remanentes se disgreguen permitiendo que el ADN adquiera ms flexibilidad. La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante un detergente, vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas por accin del detergente. Slo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamlico.
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Materiales Tubo de ensayo grande (2) Beaker de 250ml y 400ml Sal de mesa * Balanza de tres brazos Probeta de 10ml y 25ml Vegetales para extraer ADN * Cuchillo * Licuadora * Colador pequeo * Hielo * Pipeta Agitador
Sustancias Agua destilada Bicarbonato de sodio Detergente liquido o champ * Alcohol isoamlico
* Material que traer el alumno
Desarrollo Experimental 1. Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado lo siguiente:
2. En un Beaker agregar 120ml de agua, si es posible destilada y si no mineral (No usar agua del grifo), 1.5gr de sal de mesa, preferiblemente pura, 5gr de bicarbonato de sodio, 5ml de detergente lquido o champ. 3. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que se pueda conseguir (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
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4. Triturar la muestra con un poco de agua en una licuadora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente. 5. Mezclar en un recipiente limpio 5ml del triturado celular con 10ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. 6. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible. 7. Retirar 5ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con una pipeta 10ml de alcohol isoamlico enfriado. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. 8. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. Preguntas del Experimento Por qu se utiliza detergente para la extraccin de ADN? Qu funcin desempea la licuadora? Investigue otra forma para extraer el ADN?
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Prctica 6
Obtencin de pectinas
Objetivo
Obtencin de pectinas a partir de la corteza de toronja para determinar el porcentaje de esta.
Fundamentacin Terica Obtencin de pectinas Las sustancias ppticas se hallan casi universalmente distribuidas en los tejidos vegetales, donde actan como materiales de adhesin entre las clulas, particularmente en los tejidos de las frutas. La pectina es importante en la industria de alimentos, debido a las propiedades gelificntes. Esta se obtiene en escala comercial como un subproducto en la industria de las frutas ctricas. Los subproductos de la industria de zumos de frutas, bagazos de manzanas y albedos de ctricos (limn, naranja, toronja) constituyen bsicamente las fuentes industriales de pectinas. La pectina, de la palabra griega Pekos (denso, espeso, coagulado), es una sustancia mucilaginosa de las plantas superiores. Esta sustancia se asocia con la celulosa y le otorga a la pared celular la habilidad de absorber grandes cantidades de agua. La celulosa tiene un importante rol en la estructura ya que le da rigidez a las clulas, mientras que la pectina contribuye a su textura.
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Durante mucho tiempo, el ama de casa ha utilizado la pectina contenida en las frutas in situ para espesar jaleas. Su extraccin industrial se inici a principios del siglo XX. El parmetro qumico ms importante es el grado de esterificacin (M), es decir, el nmero de funciones carboxilo esterificadas por 100 grupos galacturonicos; esto permite distinguir dos grupos de pectinas: Pectinas fuertes metiladas (H.M. mayor 55%) Pectina dbilmente metiladas (L.M. menor 45%) Los procedimientos de fabricacin se basan en una hidrlisis, separacin y recuperacin. Las posibilidades de obtencin de pectina y substancias extensamente usadas en las industrias alimenticias y farmacuticas y que no se fabrican en cantidades necesarias en nuestro pas, a partir de un desperdicio insuficientemente industrializado: La cscara de naranja. En la actualidad en Mxico se tienen grandes cantidades de cscara de naranja de las cuales se emplean, una pequea parte para forraje y para extraerle el aceite esencial, airndose o quemndose la mayor parte debido a las dificultades que presenta su almacenamiento, pues es necesario secarla para evitar que se fermente. La pectina se puede extraer industrialmente de otras frutas como la manzana, pern, membrillo y algunos ctricos, como el limn, toronja y lima; se escoger la naranja debido a que es una de las frutas que ms se producen en nuestro pas.
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La pectina es un coloide natural, lioflico, reversible, es decir; puede disolverse en agua, precipitarse, secarse y volver a disolver sin afectar sus propiedades. La pectina es soluble en agua y en ella se dispersa para dar soluciones muy viscosas, esta solubilidad disminuye cuando aumenta su tamao molecular. En solucin las pectinas presentan grandes reas superficiales que estn relacionadas con su carga elctrica negativa. Esta carga vara segn la proporcin de grupos carboxilos libres y aparentemente responsables de la rpida precipitacin de las pectinas con electrolitos de diferentes potenciales elctricos. La pectina es soluble en alcohol, acetona, ter y casi todos los disolventes orgnicos. Algunos electrolitos como: cloruro de Aluminio, Sulfato de Amonio, Sulfato de Cobre, Cloruro Frrico, Sulfato de Magnesio y Sulfato de Aluminio, precipitan a la pectina en solucin, en condiciones apropiadas de P.H. y concentracin, en este caso se presenta ms bien una coagulacin semejante a la que ocurre cuando a ciertos coloides se les aade un electrolito apropiado que neutraliza las cargas trayendo por consecuencia una precipitacin por el aumento de volumen de las partculas que se unen entre s. Materiales Toronjas * Navaja * Mechero bunsen Malla de asbesto, aro metlico y base soporte Beaker de 400ml, 250ml y 100ml Probeta de 100ml Balanza de tres brazos Sustancias Agua destilada Acido Clorhdrico 12N Alcohol 95% Lugol Solucin alcohlica de NH4OH 4%. Solucin alcohlica de oxalato de amonio
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Erlenmeyer Papel pH Baln de destilacin Refrigerante Gasa * Tubos de ensayo * Material que traer el alumno Desarrollo Experimental
1. Haga cisuras en la corteza del ctrico como las lneas de una bola de baloncesto. 2. Desprenda las secciones de la corteza con la mayor cantidad de albedo posible (capa blanca). Ponga a hervir 100ml de agua en un Beaker. 3. Pese la totalidad de la corteza.
4. Pese dos secciones de corteza; luego obtenga de ellas el albedo y pselo. 5. Pese 10gr y colquelos en un Erlenmeyer. 6. Agrguele 25ml de agua caliente, agite de 1 a 2 minutos, decante el agua, gurdela. 7. Agrguele a la pulpa 50ml de agua destilada y 1ml de HCL 12N. Mida el pH que debe ser 2 muy prximo a dos. 8. Coloque el matraz un refrigerante y reflujo por 15 minutos.
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9. Filtre el reflujado con una gasa. 10. Al filtrado agrguele un volumen igual de alcohol 95%. 11. Al bagazo hacer la prueba de celulosa. 12. Filtre el proceso nmero 10 con gasa. Lave el precipitado con solucin alcohlica de NH4OH al 4%. 13. Seque el producto y pselo.
14. Mientras realiza el paso 11, el decantado del paso 6, tome 4ml y ponga dos en cada tubo de ensayo y agregue a uno 4ml de solucin alcohlica de oxalato de amonio. Si no observa precipitado, agregue 3ml de alcohol de 95%. Realiza tus observaciones y conclusiones.
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BIBLIOGRAFA 1. Conn, Eric E. Stumpf, Paul K. Bruening, George. Doi, Roy H. (2004), Bioqumica fundamental, Segunda Edicin. Limusa Wiley, Mxico.
2. Betancourt, Herbert A. Espinosa U. Eduardo. (1984), Bioqumica y fundamentos de qumica orgnica, MINED, El Salvador.
3. Mathews, Chritopher K. Holde, K. E. Ahern, Kevin G. (2002), Bioqumica, Addison Wesley, Madrid.
4. http://es.wikipedia.org/wiki/Bioqu%C3%ADmica
5. http://www.arrakis.es/~rfluengo/bioquimica.html
6. http://www.um.es/molecula/indice.htm
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