Manual de Practicas de Bioquimica Basica

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA
FACULTAD DE MEDICINA Y PSICOLOGIA

MANUAL DE BIOQUMICA BASICA

Cdigo: L1M-N3-002 No.de Revisin: 1 Efectividad: 2008-2

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Facultad de Medicina y
Psicologa

Manual de Laboratorio de Bioqumica Bsica

Laboratorio 1

Autor(es): MC Raquel Cortes Talavera Firma: Fecha: Julio 2007
Revis: QFB Ma, de la Luz Ibarra Arias Firma: Fecha: Julio 2007
Autoriz: Dra. Sara Corts Bargall Firma: Fecha: Julio 2007



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INDICE

TEMA PAGINA
Portada 1
ndice 2
Introduccin 3
Reglamento de laboratorio de Bioqumica Bsica 5
Medidas de Bioseguridad 7
Protocolizacin de las prcticas 8
Prctica No. 1 Mtodos y tcnicas de anlisis 9
Prctica No. 2 Espectrofotometra 16
Prctica No. 3 Enzimologa 24
Prctica No. 4 Digestin y absorcin 30
Prctica No. 5 Calorimetra 35
Prctica No. 6 Proyecto de Investigacin en Bioqumica Bsica 42
Prctica No. 7 Determinacin de Triglicridos 45
Prctica No. 8 Gluconeognesis 49
Prctica No. 9 Cetogenesis 54
Prctica No. 10 Colesterol 58
Prctica No. 11 Determinacin de Urea 63
Prctica No. 12 Determinacin de bilirrubinas 67



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INTRODUCCIN

La Bioqumica es la ciencia que estudia los procesos qumicos de los seres vivos desde dos
puntos de vista: estructural y funcional. Mediante el primero conocemos la distribucin
espacial de la materia viva; con el segundo, su devenir en el tiempo.

La aproximacin morfolgica conduce al estudio de las formas propias del ser vivo; la
aproximacin funcional estudia funciones, es decir, variaciones temporales que se dan en el
mismo con el fin de mantener su organismo en un estado estacionario y de reproducir en otro
ser vivo su material gentico. De todas las funciones, ninguna hay ms generalizada que la
que llamamos Metabolismo, es decir, el conjunto de reacciones qumicas que un organismo
es capaz de llevar a cabo.

Para comprender la influencia de la Bioqumica sobre la Biologa, es preciso conocer los
elementos qumicos de la materia viva y las estructuras completas de muchos compuestos
biolgicos (protenas, azcares, lpidos, nucletidos, vitaminas y hormonas) y su
comportamiento durante las reacciones metablicas.

Ser preciso conocer la estequiometra y los mecanismos de un gran nmero de reacciones.
Adems el conocimiento de los principios bsicos de la termodinmica es esencial para
entender de qu manera obtienen los seres vivos la energa de los alimentos.

El propsito de este manual es proporcionar al alumno los recursos necesarios para un buen
desarrollo de las prcticas, as como brindarle informacin bsica que utilizar durante el
proceso de las mismas.



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Este manual consta, de doce prcticas de laboratorio, diez de las cuales se enfocan a temas
que estn ntimamente relacionados con procesos metablicos que realiza la clula dentro del
organismo, lo cual le permitir al alumno conocer y comprender de una mejor manera el
funcionamiento del cuerpo humano. Las otras estn enfocadas a la elaboracin de proyectos
de investigacin en el rea.

OBJETIVO GENERAL

Proporcionar al alumno los conocimientos bsicos de los diferentes mtodos analticos que
se utilizan en un laboratorio de anlisis clnicos, as como brindarle las herramientas
prcticas, con las cuales ser capaz de evaluar el funcionamiento de los diferentes procesos
metablicos que lleva a cabo el organismo.



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REGLAMENTOS

Los alumnos debern cumplir con el Reglamento interno de Laboratorio de la Facultad de Medicina
Tijuana, el reglamento interno del Laboratorio de Bioqumica Bsica y las medidas de Bioseguridad.

REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE BIOQUMICA BSICA

1. El alumno no puede entrar y salir a voluntad del laboratorio. Debe esperar fuera del
laboratorio hasta que el maestro llegue. Deben presentarse con un mximo de 10 minutos de
retardo, despus de esa hora no podr entrar y la puerta permanecer cerrada.
2. Al inicio del semestre el Maestro integrar equipos de trabajo a los que les asignar una
mesa. En caso que aplique se les indicar los microscopios que utilizarn durante el
semestre, as como la bitcora de registro correspondiente.
3. Se les asignarn gavetas y se les proporcionar una llave al responsable del equipo para que
hagan una copia de la misma, la cual tendrn que entregar al final del semestre.
4. En la primera sesin se les proporcionar material bsico de Laboratorio suficiente para la
realizacin de sus prcticas firmando el recibo correspondiente. El material perecedero (No
desechable) deber ser entregado al finalizar la ltima prctica del semestre. En caso
contraro deber reponer el material faltante antes de finalizar el semestre.
5. Est estrictamente prohibido el uso de zapatos destapados (huaraches, chanclas, etc),
telfonos celulares e ingerir cualquier tipo de alimento durante las prcticas de Laboratorio.
6. Los alumnos designarn un representante del grupo y un suplente, quienes tendrn la
responsabilidad de registrar la prctica en la Bitcora Semanal de prcticas de Laboratorio del
Sistema de Gestin de Calidad (SGC) con cdigo: LC-N4-001.
7. Las prcticas de Laboratorio de Bioqumica Bsica requieren que el alumno aporte el
siguiente material para su proteccin personal, el cual deber ser presentado durante la
primer semana de clase y guardado en la gaveta que se le asigne: jabn para las manos,
toallas de papel, guantes de ltex, un plumn indeleble para marcar sus tubos y lo que indique
previamente el instructor.
8. Los alumnos y maestros segn sea el caso tendrn la obligacin de registrar los materiales
que aporten o salgan del Laboratorio en el Diario del Laboratorio.



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9. Debern acudir al Laboratorio horas antes, al da que les corresponda la prctica, para la toma
de su muestra de sangre (podrn conseguir muestras idneas o tomar la muestra con
anticipacin a la fecha de la prctica). Es indispensable hacerlo por la maana y en ayuno
cuando sea necesario.
10. A la hora de su prctica debe contar con el material (muestra) necesario, en caso contrario no
podrn realizar la prctica. El horario establecido para este fin es de 7:00 a 8:30 horas.
11. Es responsabilidad del alumno el horario extra clase que utilice para la obtencin de
muestras, realizacin de su proyecto o cualquier actividad relacionada con el laboratorio.
12. Los alumnos supervisados por el maestro registrarn en la Bitcora de Control de pacientes y
servicios LC-N4-015 del SGC, las muestras (pacientes) y los resultados obtenidos en cada
una de las determinaciones.
13. Los alumnos supervisados por el maestro son responsables de la separacin, envase y
deposito en el rea temporal del Laboratorio de los Residuos Peligrosos Biolgico
Infecciosos.
14. Los alumnos son responsables de que las llaves de agua y gas queden debidamente cerradas
al finalizar la prctica.
15. Los alumnos deben dejar limpia su mesa de trabajo y el material utilizado antes de retirarse
del laboratorio.
16. Los alumnos deben contestar las encuestan de satisfaccin de usuario LC-N4-006 cuando se
le asigne.
17. Cuando sea necesario debern presentar quejas o sugerencias llenando el formato LC-N4-006
y depositndolo en el Buzn de quejas.
18. En caso de suspensin oficial, la prctica podr realizarse en la fecha programada para
reposicin de prctica.
19. En caso de que alguna prctica sea suspendida porque el alumno no cuente con su muestra en
las condiciones requeridas, la prctica se dar por vista.
20. El alumno que no cumpla total o parcialmente el reglamento o ponga en riesgo la seguridad
de sus compaeros, la primera vez ser expulsado de la clase. En caso de reincidir no tendr
derecho a prcticas de laboratorio durante el semestre.



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MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1. No hacer uso de lpiz labial u otros cosmticos en el Laboratorio.
2. Los cogulos de sangre, el suero y el plasma deben ser depositados en el recipiente de
RPBI correspondiente que se encuentra en el rea temporal de Residuos Peligrosos
Biolgico infecciosos.
3. Las agujas deben ser colocadas en el recipiente rgido rojo de RPBI que se encuentra
en el rea temporal de Residuos Peligrosos Biolgico infecciosos.
4. Los algodones, jeringas sin aguja, guantes de ltex, papel absorbente contaminado y
los aplicadores de madera deben ser depositados en la bolsa roja de RPBI ubicada en
rea temporal de Residuos Peligrosos Biolgico infecciosos.
5. Siempre deben hacer uso de pipetadores para dispensar los reactivos.
6. Los alumnos que tengan pelo largo deben mantenerlo recogido para evitar accidentes
de trabajo.
7. Las mesas deben limpiarse al final de la prctica con solucin clorada o fenol al 5%.
8. Siempre deben usar guantes de ltex para trabajar en el Laboratorio.
9. Deben tener en su mesa de trabajo exclusivamente el material requerido para la
realizacin de la prctica.
10. Al entrar al Laboratorio debern colocar sus mochilas o tiles en su gabinete
correspondiente que se encuentra ubicado en dicha rea.
11. En caso de cualquier accidente personal o de material de trabajo debe notificarse
inmediatamente al maestro o instructor verbalmente y registrar en el diario del
Laboratorio.



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PROTOCOLIZACIN DE LAS PRACTICAS

1. El alumno deber contar con su manual de prcticas. En caso contrario
no podr ingresar al laboratorio.
2. Deber leer previamente la prctica correspondiente y realizar una
investigacin preliminar por equipo antes de cada prctica, para reforzar
los conocimientos o conceptos que requiera; debiendo entregar dicha
investigacin el equipo al ingresar al laboratorio.
3. Antes de la prctica y a consideracin del instructor se cuestionar a los
alumnos de forma verbal, sobre el tema que corresponda.
4. Al inicio de la prctica se proporcionar el mtodo que se utilizar, el
cual puede variar dependiendo de la clase de reactivos que se disponga
al momento del desarrollo de la misma. (depende del laboratorio de
fabricacin)
5. Despus de leer la prctica deber realizar un diagrama de flujo de
forma sencilla y entendible por sus compaeros de equipo.
6. Siguiendo el diagrama de flujo, realizar la prctica de laboratorio
correspondiente.
7. Deber anotar sus resultados y conclusiones en su manual, en el espacio
designado para ello.
8. Al finalizar la prctica se analizarn y discutirn los resultados
obtenidos.
9. Deber anotar sus resultados en la bitcora correspondiente.
10. Cada alumno entregar al finalizar el semestre su manual con sus
resultados y conclusiones tanto personales como de equipo.



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MTODOS Y TCNICAS DE ANLISIS

PRACTICA No. 1.
Tema terico al que apoya: Metodologa del Laboratorio de Bioqumica.

OBJETIVOS
Al finalizar la sesin el alumno ser capaz de:
Diferenciar entre un anlisis cualitativo y un anlisis cuantitativo.
Argumentar qu mtodo de Laboratorio es ms conveniente utilizar en la
determinacin de un analito.
Explicar la utilidad de los diferentes mtodos de anlisis en el Laboratorio.

FUNDAMENTO

La determinacin de un analito en el Laboratorio puede llevarse a cabo a travs de dos tipos
principales de anlisis: Anlisis cualitativo; basado en la identificacin por medios qumicos,
de la presencia de una sustancia o sustancias que se encuentran en una muestra de orina,
suero, heces fecales o plasma.

Anlisis cuantitativo; que es la medicin de la cantidad de sustancia especfica que se
encuentra en la muestra a analizar. Este mtodo es el que tiene inters para nosotros.

Es por ello que al inicio de este curso se discute el trabajo en un Laboratorio y se analizan los
diferentes mtodos y tcnicas de anlisis, para poder comprender con mayor facilidad cada
uno de stos; ya que sern parte de la herramienta a utilizar durante la realizacin las
prcticas.



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METODOS CUANTITATIVOS

1. GRAVIMTRICOS.
Donde la sustancia que se analizar se precipita bajo la forma de sal insoluble o bien se
extrae con algn solvente. El peso seco del precipitado o del extracto es una medida de la
cantidad de sustancia que contena la muestra analizada. Estos mtodos se utilizan rara
vez en el Laboratorio porque requieren grandes cantidades de muestra.

2. VOLUMTRICOS.
Estos se basan en la medicin de la cantidad de una sustancia presente en una muestra, a
travs de titulacin.

3. COLORIMTRICOS.
En estos mtodos la muestra se somete a una reaccin qumica cuyo producto final es
coloreado. La intensidad de color de la sustancia final depende de la concentracin del
analito analizado. En este grupo se encuentran los siguientes:

MTODOS COLORIMTRICOS

Fotometra.

Dentro de los mtodos colorimtricos, un gran nmero de determinaciones que se
realizan habitualmente en el laboratorio, utiliza medidas de energa radiante, ya sea
emitida, absorbida o reflejada. Estas medidas se determinan a travs de tcnicas
fotomtricas. Las tcnicas fotomtricas tienen su fundamento en las interacciones de las
radiaciones electromagnticas sobre la materia.



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Radiaciones Electromagnticas
Pueden considerarse como un conjunto de corpsculos, llamados fotones, los cuales
llevan asociada una onda. La energa de radiacin esta relacionada con la longitud de
onda. Las longitudes de onda ms cortas poseen mayor energa que las longitudes de
onda ms largas. De tal manera que podemos hablar de un espectro electromagntico
constituido por las radiaciones electromagnticas, mismo que se ha dividido en varias
regiones, de acuerdo con la longitud de onda () y la energa.
Rayos X (1-100 nm)
Ultravioleta (100-390 nm)
Visible (390-700 nm)
Infrarrojo (700-100 000 nm)
Microondas (100 000- 1 000 000 nm)

Fotometra de Absorcin
Est basada en la Ley de Lambert-Beer, que relaciona la intensidad de luz
incidente y la de la luz transmitida, cuando es atravesada una longitud de onda de
un medio que absorbe.



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Fluorimetra

Los fluoromtros, son los instrumentos que se utilizan para cuantificar la
fluorescencia emitida por algunas sustancias.
Un gran nmero de compuestos presentan el fenmeno de la fluorescencia, la
mayora de los cuales son sustancias que tienen enlaces mltiples, conjugados con
electrones excitados que previamente han absorbido radiacin y que, de esta forma
vuelven a su estado fundamental.



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TCNICAS DE LABORATORIO

Tcnicas Inmunolgicas

La reaccin entre un antgeno y un anticuerpo dirigido especficamente contra l, da
lugar a un complejo antgeno-anticuerpo. Esta reaccin especfica se ha utilizado
ampliamente en los laboratorios para la deteccin y cuantificacin de una gran
cantidad de sustancias en diversos medios biolgicos. En la actualidad hay un gran
incremento de estas tcnicas, entre ellas se pueden citar:

Tcnicas de aglutinacin directa
Tcnicas de aglutinacin indirecta
Inhibicin de la aglutinacin
Pruebas de fijacin de complemento

Tcnicas con anticuerpos fluorescentes
En este tipo de pruebas, los anticuerpos frente a la sustancia que se va a medir se une
a colorantes, que producen con luz de una determinada longitud de onda. Una vez que
se ha tenido lugar la reaccin antgeno-anticuerpo se elimina el exceso de anticuerpo
marcado.

Los complejos antgeno-anticuerpo, que producen fluorescencia se detectan con un
microscopio de fluorescencia o con un citmetro de flujo, si se trata de clulas.



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Tcnicas de Inmunoensayo

Son tcnicas inmunolgicas de cuantificacin, que emplean tambin reacciones antgeno-
anticuerpo pero adems utilizan marcadores de antgenos o de los anticuerpos.

Los marcadores ms empleados son:

Istopos radioactivos (radio inmunoensayo)
Enzimas (enzimoinmunoensayo)
Compuestos fluorescentes (fluoroinmunoensayo)

En la actualidad este tipo de tcnica es muy utilizada en las siguientes determinaciones:

Hormonas (FSH, LH, ACTH, HGC, T3, T4, TSH, Insulina, Glucagn)
Frmacos ( Digoxina, Digitoxina, Fenobarbital, Carbamacepina)
Marcadores Tumorales (CEA, PSA, Alfafetoprotena, CA 15-3, CA125)
Protenas ( Mioglobina, Ferritina, IgE, Haptoglobina)
Enzimas ( CK-MB, Fosfatasa cida Prosttica )

Tcnicas de PCR ( Reaccin en Cadena de la Polimerasa)

Tiene como propsito hacer un nmero enorme de copias de un gen. Requiere de tres pasos
fundamentales:
1. Desnaturalizacin a 94 C
2. Reconocimiento a 54 C
3. Extensin a 72



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RECURSOS MATERIALES:
Manual de prctica de Laboratorio de Bioqumica Bsica.

DESARROLLO DE LA PRACTICA:
El alumno analizar y discutir en equipo cada uno de los mtodos sealados, especialmente
los mtodos espectrofotomtricos.

RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

EVALUACION: Participacin verbal y conocimientos.



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ESPECTROFOTOMETRIA

Prctica No. 2
Tema terico al que apoya: Tcnicas y mtodos de laboratorio. Mtodo
calorimtrico.

OBJETIVOS

Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:

Utilizar adecuadamente el espectrofotmetro.
Utilizar curvas de calibracin para obtener valores a partir de las absorbancias.
Describir las fuentes de error analtico que interfirieron en la obtencin de sus
resultados en la prctica.
Manejar la media (X) y la desviacin estndar (DS).

FUNDAMENTO

Dentro de la fotometra de absorcin, uno de los aparatos ms utilizados en la determinacin
de las concentraciones de los analitos es el espectrofotmetro; que es un instrumento que
utiliza medidas de absorcin de las radiaciones electromagnticas. Adems ste ser nuestra
principal herramienta de trabajo, ya que en l se harn las lecturas de absorbancia para la
determinacin de las concentraciones de los diferentes analitos a determinar durante el
semestre.

Las determinaciones por espectrofotometra requieren que se lleve a cabo previamente una
reaccin qumica especfica que varia segn el analito a determinar. Los productos finales de



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esta reaccin se cuantifican utilizando la lectura de la absorbancia de la muestra, as como la
de estndares conocidos (calibradores).
Es importante obtener los valores de desviacin estndar ya que las determinaciones en el
laboratorio requieren de un control de calidad.

El principio del Espectrofotmetro esta basado en la Ley de Lambert-Beer, que relaciona la
intensidad de luz incidente y la de la luz transmitida, cuando es atravesada una longitud de
onda de un medio que absorbe.

Y

Absorbancia. CURVA DE CALIBRACION (A)

0 X
Concentracin en mg/dL



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RECURSOS NECESARIOS:
Muestra biolgica:
Muestra de suero sanguneo obtenida en ayunas*.
Material:
Pipetas serolgicas.
Micropipetas de 5, 10. 20 y 30 uL.
Puntillas de micropipeta.
Bulbos.
Tubos de ensaye.
Bao Mara a 37 C.
Espectrofotmetro y aditamentos
Calculadora*
Regla, lpiz, marcador indeleble y papel milimtrico*
Gradilla, tubos y papel absorbente
El que indique su instructor*

Y

Transmitancia.

CURVA DE CALIBRACION (B)

0 X
Concentracin en mg/dL



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Reactivos:
Reactivo de glucosa.
Calibrador o estndar.
Control normal y anormal.
Agua destilada.
Insertos
*Insumos y muestra que deber ser proporcionado por el alumno.

DESARROLLO DE LA PRCTICA

1. Elaboracin de una curva de calibracin

1.1 Realice la determinacin en cuatro muestras de un estndar de glucosa en las siguientes
concentraciones; 50, 100, 200 y 300 mg/dl, siguiendo la tcnica que se le proporcione en el
laboratorio.

1.2 Leer utilizando la cubeta apropiada en el Espectrofotmetro de la siguiente manera:

Ajuste a cero con agua destilada.
Lea cada uno de los estndares de menor a mayor concentracin (color)
Registre los valores obtenidos en su manual en la tabla no.1

1.3 En papel milimtrico grafique la concentracin correspondiente contra la absorbencia que
obtenga al leer; (eje de las Y) las absorbancias de cada una de las cuatro determinaciones
realizadas del estndar de glucosa, (eje de las X) las concentraciones obtenidas.



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1.4 Trace una lnea tratando de unir los cuatro puntos o bien que sta pase lo ms cercano a la
de ellos.

2. Medicin de glucosa en un suero problema

2.1 Simultneamente a las determinaciones del estndar de glucosa, realice las
determinaciones de cada una de las muestra de los sueros de los pacientes (P) y un control
normal.

Todas estas determinaciones debe realizarlos con la misma tcnica que proporcione el
laboratorio.

2.2 Lea de igual forma que el anterior en el espectrofotmetro y registre la absorbancia de
cada una de sus muestras.

Utilizando la absorbancia del estndar de 100 mg/dl. Calcule la concentracin de las
determinaciones de glucosa realizadas a travs de la siguiente ecuacin y regstrelos en la
tabla No.2:

[P] = X = Abs p / Abs st x [St] dnde:

[P] = Concentracin del problema
Abs p = Absorbancia del problema
[St] = Concentracin del estndar
Abs st = Absorbancia del estndar



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2.3 Utilizando la curva de calibracin interpole en la grfica que obtuvo de los estndares los
valores de las absorbancias obtenidas de sus problemas y regstrelos en la tabla no.3. y
calcule la concentracin de glucosa de las muestras de los problemas .

RESULTADOS
Tabla No. 1
Concentracin de los
Estndares
Absorbancia de los
Estndares
1 = 50 mg/dL 1 =
2 = 100 mg/dL 2 =
3 = 150 mg/dL 3 =
4 = 200 mg/dL 4 =

Tabla No.2
Absorbancia de los
Problemas
Concentracin de los
problemas

1= 1=
2= 2=
3= 3=
4= 4=



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2.5 Con los datos de la tabla no.2, obtenga la media y la desviacin estndar de los
valores de glucosa del problema, mediante las siguientes ecuaciones:

X= x n DS = ( X-X )
n-1

X = Media de los valores obtenidos
x = Suma de todos los problemas
n = Nmero de muestras
DS = Desviacin estndar

2.6 Al igual que en el paso anterior calcular la media y desviacin estndar con los datos de
la tabla no.3. Utilizando las mismas ecuaciones.

Tabla No.3
Concentracin de los
Problemas
[ X ] X - X ( X - X )
1 =
2 =
3 =
4 =
5 =



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CONCLUSINES:

MECANISMO DE EVALUACIN

Sesin de discusin de los resultados obtenidos por medio de los dos mtodos
utilizados.

Elaboracin de un argumento que justifique los valores que se obtuvieron a travs
de los diferentes clculos realizados.

BIBLIOGRAFA:

Mathews/Van Holde. BIOQUMICA. Segunda edicin. Editorial McGraw-Hill * Interamericana 2000
Lehninger. BIOQUMICA. Segunda edicin. Ediciones Omega .S.A. Barcelona 1985
Harper BIOQUMICA. 15 Edicin. Editorial Manual Moderno
http://www.mediben.com/Nutsem2.htm
M.J.Lynch/S.S. Raphael/L. D. Mellor/P.D. Spare/M.J.H.Inwood. Mtodos de Laboratorio
Segunda edicin/ Tomo I. Editorial Interamericana
IBQ. Arcelia Terriquez. Cuadernillo de apuntes de Anlisis Instrumental I. Tijuana, BC 2001
IBQ. Arcelia Terriquez. Cuadernillo de apuntes de Anlisis Instrumental II. Tijuana, BC 2001



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ENZIMOLOGIA

Practica No. 3
Tema Terico al que apoya: Enzimologa.

OBJETIVOS


Describir las variaciones que sufre una enzima en su actividad al modificar la
temperatura de su medio ambiente.
Describir el papel de una enzima al catalizar una reaccin, sealando la
reaccin que cataliza la Fosfatasa alcalina (FA) y Alaninaminotransferasa
(ALT)

FUNDAMENTO

Una enzima (catalizador), es una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una
reaccin qumica, sin verse alterada ella misma en el proceso global.

La sustancia sobre la que acta una enzima se denomina sustrato de esa enzima, por lo que
los polipptidos son sustratos apropiados de la tripsina. En esta sesin se realizarn las
determinaciones de FA y ALT .



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Aminotransferasa

Las aminotransferasas, antes llamadas transaminasas, son las indicadoras que se usan ms
frecuentemente como, marcadores de enfermedad heptica. Estas enzimas catalizan la
transferencia reversible de sus respectivos aminocidos (cido asprtico y alanina) hacia el
grupo alfa-ceto del cido cetoglutrico obtenindose as cido oxalactico y cido pirvico de
esos aminocidos respectivos y cido glutmico.

La reaccin que se lleva a cabo en laboratorio es la siguiente:

L alanina + oxo-glutarato ALT Piruvato + L-glutamato

Fosfatasa alcalina

Es un grupo de enzimas que hidrolizan los enlaces ster de los fosfatos orgnicos e
inorgnicos en las clulas, se encuentra en la mayora de los rganos de nuestro cuerpo
incluyendo hgado, hueso, intestino delgado, rin, placenta y leucocitos. La que se
encuentra en suero la mayora proviene del hgado y en menor proporcin de intestino. Los
niveles en suero varan con la edad y sexo.

El substrato empleado en este procedimiento es p-nitrofenil fosfato(4-NPP) que es
hidrolizado por la fosfatasa alcalina a fsforo inorgnico ligado a p-nitrofenol.

La formacin de color es proporcional a la actividad de la fosfatasa alcalina.



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Muestra biolgica:
Muestra de suero sanguneo en ayunas.

Material y equipo:

Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Calculadora, lpiz y marcador indeleble
Papel absorbente
Insertos del reactivo.

Reactivos:

Reactivo de ALT.
Reactivo de Fosfatasa alcalina.
Calibrador estndar
Controles normal y anormal
Agua destilada.



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1. Determinacin de la actividad enzimtica de Alanina Aminotransferasa (ALT)

1.1 Realice el corrimiento de un blanco, estndar, controles y problema de ALT, a las
temperaturas de 25, 37 y 60 grados centgrados; siguiendo la tcnica que se disponga
en el laboratorio.

1.2 Lea en el espectrofotmetro la absorbancia de cada una de sus muestras y registre
los valores obtenidos en su manual.

1.3 Calcule la actividad enzimtica de ALT de su muestra problema y controles a
travs de la siguiente ecuacin y anote los resultados en su manual.

[ P ] = X = Abs p/Abs st x [ st ]

[ P ] = Concentracin del problema
Abs p = Absorbancia del problema
[St] = Estandar
Abs st= Absorbancia del estandar

CALCULOS:



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2. Determinacin de la actividad enzimtica de Fosfatasa Alcalina ( FA )

2.1 Realice las determinaciones de FA con un blanco (H2O), estndar o calibrador,
sueros control y problema a las siguientes temperaturas: 25c, 37c y 60c, siguiendo
la tcnica de que se disponga en el laboratorio.

2.2 Lea en un espectrofotmetro la absorbancia de cada determinacin, obtenga las
lecturas a las distintas temperaturas y registre los valores obtenidos en su manual.

2.3 Calcule la actividad enzimtica de FA en cada determinacin problema (3) y
control (3) utilizando la ecuacin anterior. Anote los resultados en su manual.

RESULTADOS :

Absorbancias
Temperatura Absorbancias del Estndar Absorbancias del Control Absorbancias del Problema
ALT FA ALT FA ALT FA
T. Ambiente
37 C
60C

Temperatura Concentracin del Problema Concentracin del Control
ALT FA ALT FA
Temperatura ambiente
37 C
60C



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VALORES DE REFERENCIA DE ALT:
7 33 mU/ml.

VALORES DE REFERENCIA DE FOSFATASA ALCALINA

En adultos 40 a 140 U/L
En nios menores de 2 aos 85-235 U/L
En nios entre 2 y 8 aos 65-120 U/L
En nios entre 9 y 15 aos 60- 300 U/L
En adolescentes entre 16 y 21 aos 30- 200 U/L

CONCLUSIN

Sesin de discusin de resultados obtenidos, basada en los conceptos
termodinmicos de la funcin de una enzima y su relacin con los procesos
metablicos.
Elaboracin de un argumento que justifique los valores que se obtuvieron a
travs de los clculos realizados. Comparndolos con los de referencia.

BIBLIOGRAFA: Mathews/Van Holde. BIOQUMICA. Segunda edicin. Editorial McGraw-Hill

* Interamericana 2000



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DIGESTIN Y ABSORCION.
Prueba de Tolerancia a la Lactosa.

Prctica No. 4
Tema Terico al que apoya: Digestin y Absorcin de Carbohidratos.

OBJETIVOS

Al trmino de la prctica el alumno ser capaz de:

Definir la digestin como un proceso qumico y mecnico.
Comparar el destino de los nutrimentos absorbidos en el intestino delgado.
Distinguir los trastornos de deficiencia de disacaridasa.
Describir las manifestaciones en el dficit congnito o adquirido en la
intolerancia a la lactosa.

FUNDAMENTO

La digestin y la absorcin tienen lugar fundamentalmente en un largo tubo al que se
denomina intestino delgado, el cual inicia a nivel del ploro, serpentea por las partes
central e inferior de la cavidad abdominal, y finalmente se contina con el intestino
grueso.

La pared del intestino delgado consiste en las mismas cuatro capas que componen a la
mayor parte del tubo digestivo; sin embargo, la mucosa y submucosa presentan



31

modificaciones que permiten al intestino delgado completar prcticamente los
procesos de digestin y absorcin. Existen varias formas de valorar la funcin
intestinal en cuanto a absorcin y digestin de los nutrientes, aqu nos enfocaremos
solo a una de ellas que es la prueba de tolerancia a la lactosa, donde se valora la
actividad enzimtica de la Lactasa.


Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Papel absorbente

Muestra biolgica:
Muestra de suero sanguneo despus de ingerir los 50 y 25 g de lactosa a
los 30, 60, 90 y 120 minutos.
50g de lactosa diluida en agua.
25g de lactosa diluida en agua



32

Reactivos:

Reactivo de glucosa.
Calibrador estndar de glucosa
Controles.
Agua destilada.


1. Procedimiento en suero

1.1 Se toma una muestra de sangre por la maana en ayunas. Enseguida se procede a
beber 50 y 25 gr. de Lactosa diluidos en agua, segn corresponda. A los 30, 60, 90 y
120 min. se obtiene muestra de sangre.

1.2 Se determina la concentracin de glucosa en la muestra en ayunas, se mide la
glucosa en sangre a los 30, 60, 90 y 120 minutos despus de haber ingerido la
Lactosa.

1.3 Realice la determinacin de un blanco, estndar, control y los cinco problemas
de glucosa de acuerdo a el procedimiento de que se disponga en el laboratorio.

1.4 Leer las absorbencias en el espectrofotmetro de todas las muestras a determinar.



33

1.5 A partir de las absorbencias obtenidas para cada muestra determine la
concentracin correspondiente de la manera siguiente:

Glucosa mg/dL = Absorbancia problema [estndar]
Absorbancia estndar

1.6 Con las concentraciones obtenidas hacer una curva contra absorbancia en papel
milimtrico.

RESULTADOS
Tabla No.4

Absorbancia de los
Problemas

Concentracin de los
Problemas
Ayunas =
30 min =
60 min =
90 min =
120 min =



34

CONCLUSIONES:


Sesin de discusin de resultados obtenidos.

Elaboracin de un argumento que justifique los valores que se obtuvieron a
travs de los clculos realizados. Verificar si se llev a cabo la hidrlisis de
Lactosa y por lo tanto la absorcin de la misma, as como corroborar si la
curva dio dentro de los lineamientos estimados en pacientes sanos.

www.tuotromedico.com
www.medlineplus.com



35

CALORIMETRA
Prctica No. 5
Tema terico al que apoya: Metabolismo de Hidratos de carbono, requerimientos:
valor calrico

OBJETIVOS


Determinar su metabolismo basal por medio de ecuaciones de regresin
mltiple.
Explicar la biotransformacin de la glucosa conforme ocurre su
catabolismo a travs de la gluclisis, descarboxilacin del piruvato y el
ciclo de Krebs.
Calcular el gasto calrico tanto en hombre como en la mujer de acuerdo a
su actividad.

FUNDAMENTO

La energa liberada en la oxidacin de los alimentos, o en la de los propios
componentes del organismo durante el ayuno, se transforma cuantitativamente en
calor. Si la temperatura corporal no vara, la determinacin del calor emitido por un
sujeto constituye una forma tericamente correcta de medir el recambio calrico de
dicho sujeto.



36

La produccin de calor es expresada tradicionalmente en Kilocaloras ( Kcal ) ,
recordando que 1 Kcal es la cantidad de calor necesaria para elevar en 1 C la
temperatura de 1 Kg de agua.

Se distinguen dos tipos de Calorimetra:

Calorimetra Directa

La medida de la cantidad de calor emitida por un hombre requiere la construccin de
una cmara de tamao suficiente para que el sujeto pueda alojarse cmodamente en
ella durante algn tiempo, y debidamente aislada, a esta cmara se le denomina
Calormetro.

En los calormetros modernos, tales como los de gradiente, el sujeto est rodeado por
una pared conductora del calor. La transferencia de calor a travs de dicha pared
causa una diferencia de temperatura entre ambos lados de la misma, que puede ser
medida con pares termoelctricas. La respuesta es ms rpida que la de las cmaras
respiratorias tradicionales y es independiente de la forma en que el calor llega a la
pared.

Calorimetra Indirecta

Puesto que la cantidad de calor liberada en la combustin de una sustancia en la
bomba calorimtrica es igual a la liberada al ser oxidada en el organismo, siempre que
los productos de la oxidacin sean los mismos, es posible calcular la cantidad de calor



37

producida si conocemos la cantidad de sustancia oxidada y su calor de combustin.
del mismo modo, si conocemos la cantidad de oxgeno que se necesita para oxidar una
sustancia y el calor de combustin de sta, podemos establecer una relacin entre la cantidad
de oxgeno consumida y la de calor liberado en la oxidacin. Estos hechos son la base de la
calorimetra indirecta.

Metabolismo Basal ( MB )

Se define como la produccin calrica de un sujeto en estado de reposo fsico y mental, que
se encuentra en un ambiente de temperatura confortable, y medida entre 12 y 16 horas
despus de la ingestin de alimento. El MB se expresa habitualmente en trminos de
consumo de Oxgeno por minuto o en trminos de Kilocaloras por hora o por 24 horas. El
MB est determinado por el tamao corporal (peso), sexo y la edad el sujeto.

Los factores que ejercen efectos en el MB incluyen los siguientes:
1. Actividad fsica. El MB se incrementa hasta 40 veces por arriba de lo normal cuando
se llevan a cabo actividades fsicas intensas.
Clasificacin del trabajo fsico
Ventilacin Consumo Metabolismo Frecuencia
Pulmonar oxgeno del pulso
(l min ) (l min ) (l min ) ( latidos min )
Muy ligero <10 <0.5 <2.5 <80
Ligero 10-20 0.5-1.0 2.5-5.0 80 -100
Moderado 20-35 1.0-1.5 5.0-7.5 100-120
Pesado 35-50 1.5-2.0 7.5-10 120-140
Muy pesado 50-65 2.0-2.5 10-12.5 140-160
Agotador >85 >3.2 >15 >180



38

2. Sistema Nervioso.
En casos de sobretensin o estrs, la porcin simptica del sistema nervioso autnomo
experimenta estimulacin, y los nervios liberan noradrenalina, sustancia que
incrementa e l metabolismo celular hasta en 160 veces, pero s lo hace durante
algunos minutos.

3. Hormonas.
Adems de la noradrenalina, otras dos hormonas ejercen influencia en el MB, la
adrenalina, sintetizada por las suprarrenales y las hormonas tiroideas, que produce la
glndula homnima.

4. Temperatura Corporal.
Por cada grado centgrado de elevacin de la temperatura, se aceleran las reacciones
qumicas en un 10%.

VALORES CALRICOS DE LAS PRINCIPALES SUSTANCIAS QUE
COMPONEN LOS ALIMENTOS:

Azcares: 4 Caloras por gramo
Protenas: 4 Caloras por gramo
Grasas: 9 Caloras por gramo

Material y equipo:
lpiz.
Calculadora.
bscula
cinta mtrica



39


1. Determinacin del Metabolismo Basal

1.1 Siguiendo el protocolo de uso de la bscula proceda a:

1.2 Con el tallmetro medir su talla (estatura) en centmetros con la ayuda de un
compaero y antela en su manual.

1.3 A continuacin procede a pesarse en la bscula y anota el valor en tu manual.

1.4 En la siguiente frmula sustituye los datos obtenidos de peso y talla, agregando
tu edad en ella para que de esta manera obtengas tu Metabolismo Basal. Utiliza la
frmula segn corresponda:

MB = 66.4730 + 13.751P + 5.0033 T - 6.7550 E (para hombres)
MB = 655.0955 + 9.463 P + 1.8496 T - 4.6756 E (para mujeres)

MB = Metabolismo basal en Kcal/ min-1
P = Peso en Kg
T = Talla en cm
E = Edad en aos

2. Determinacin del gasto calrico

Con los valores asignados en la siguiente tabla segn la actividad, calcula tu gasto
calrico de acuerdo a tu gnero.



40

CALCULOS:

RESULTADOS:

TABLA NO.6
REFERENCIA PARA OBTENER Kcal.

ACTIVIDAD Tiempo Hombre Mujer
Hora Kcal /min-1 Total Kcal/min-1 Total
Durmiendo 1.1 1.0
Sentado 1.5 1.1
En Pie 2.5 1.5
Andando 3.0 2.5
Otras actividades 4.5 3.0
Total Kcal/da



41

CONCLUSIN:


Elabore un argumento que justifique los valores obtenidos a travs de las
diferentes actividades.

Discutir la diferencia o similitud de los valores obtenidos para ambos casos de
acuerdo a su gnero.

BIBLIOGRAFA: Mathews/Van Holde. BIOQUMICA. Segunda edicin.

Editorial McGraw-Hill * Interamericana 2000



42

PROYECTO DE INVESTIGACION EN BIOQUIMICA BASICA

Practica No. 6
Tema terico al que apoya: Los que incidan segn las propuestas de los alumnos.

OBJETIVOS

Elaborar un protocolo de investigacin relacionado con un tema de
Bioqumica.

FUNDAMENTO.

La investigacin en el rea de Bioqumica bsica forma parte integral en el
desarrollo de habilidades y conocimientos en el alumno. Esta habilidad es
esencial tanto en el desarrollo de sus actividades como estudiante, as como en su
futura prctica profesional.

Las habilidades adems de las necesarias para el desarrollo de habilidades
practicas, involucra otras esferas de conocimiento, actitudes y valores.

Esta sesin se deber planear con anterioridad de tal manera que durante la
sesin prctica se realice el anlisis del material bibliogrfico y la planeacin del
desarrollo del mismo.



43

El protocolo de investigacin deber contener :

Tema
Hiptesis
Muestra y Tipo de poblacin
Criterios de inclusin
Criterios de exclusin
Metodologa y Apoyo tecnolgico
Lugar de realizacin
Definiciones de terminologa
Referencias bibliogrficas
Discusin de artculos originales
Discusin de resultados obtenidos.
Conclusiones.

El protocolo deber ser entregado por escrito y acompaado por el material
bibliogrfico de apoyo.


En caso de que la investigacin sea teorico-prctica

Insumos necesarios
Equipo requerido



44


En coordinacin con el equipo de trabajo analice y discuta las referencias bibliogrficas y la
aplicacin a su proyecto de investigacin.

Valore y reafirme el tema o plantee otras alternativas de investigacin.

Defina el tipo de proyecto que puede ser terico o terico experimental.

Al final de la prctica presente las conclusiones de su proyecto.

RESULTADOS

CONCLUSIN:

MECANISMOS DE EVALUACIN:

Sesin de discusin de resultados
Exposicin y Elaboracin del proyecto.

Bibliografa utilizada y artculos originales anexos.



45

DETERMINACIN DE TRIGLICRIDOS

Prctica No. 7
Tema terico al que apoya: Triacilglicridos

OBJETIVOS
Explicar como afecta el realizar una determinacin de triglicridos sin
tener una ayuno adecuado.
Analizar y comparar las concentraciones de los valores de referencia de
poblacin adulta de triglicridos en sangre contra los obtenidos en la
prctica.
Argumentar la participacin de la lipasa pancretica en la digestin de los
triglicridos.

FUNDAMENTO
El procedimiento de colesterol involucra reacciones enzimaticas secuenciales. La
enzima colesterol enteraza hidroliza los esteres de colesterol a colesterol y acidos
grasos. El colesterol producido por esta reaccin junto con el colesterol libre presente
en la muestra es oxidado por colesterol oxidasa formando colesterol 4 en -3 ona y
peroxido de hidrgeno, la oxidacin del peroxido de hidrgeno en 4 aminoantipirina
se cataliza la peroxidasa. Obtenindose una quinoenimina.

Los triglicridos son las grasas ms abundantes de la dieta, existen normalmente en los
tejidos animales y vegetales como una mezcla de grasas puras y cidos grasos libres.



46

Adems de servir como fuente de energa y ser las principales formas de almacenaje de las
clulas; el anlisis de colesterol total es importante en el diagnostico de lipoproteinemia,
artebioesclerosis y enfermedades hepticas y de la tiroide.
Los triglicridos son hidrolizados por la lipasa para liberar cidos grasos y glicerol, ester
ltimo es fosforilado por ATP en presencia de glicerol cinasa. El glicerol resultante es
oxidado por GPO a hidroxiacetona fosfato y perxido de hidrgeno. El color es proporcional
a la concentracin de triglicridos.

En esta prctica nos enfocaremos a la determinacin de triglicridos en ayuno, as como
despus de haber ingerido una dieta rica en grasas.


Muestra biolgica:
Muestra de suero sanguneo de paciente en ayuno de 12 a 14 hrs.

Material:
Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Papel absorbente



47


Reactivos:
Set de Reactivo de Triglicridos.
Calibrador estndar de Triglicridos.
Sueros control
Agua destilada

1. Determinacin de triglicridos en suero

1.1 Se toma una muestra de sangre por la maana en ayunas.(muestra 1)
Enseguida ingerir un alimento rico en grasas, dejar pasar de 30-45 min. y tomar otra
muestra de sangre.(muestra 2)

1.2 En ambas muestras (1 y 2 ) se cuantifican los triglicridos

1.3 Realice la determinacin de las pruebas incluyendo blanco, estndar, control

1.4 Leer las absorbancias en el espectrofotmetro de las muestras a determinar.

1.5 A partir de las absorbancias obtenidas para cada muestra determine la concentracin
correspondiente de la manera siguiente:

Triglicridos mg/dl = Abs problema (estndar)
Abs estndar



48

RESULTADOS

VALORES DE REFERENCIA

Esperado: menos de 150 mg/dl
Lmite alto: 150 a 199 mg/dl
Alto: 200 a 499 mg/dl
Muy alto: 500 mg/dl o superior

DISCUSIN Y CONCLUSIN:

MECANISMOS DE EVALUACIN:
Sesin de discusin de resultados obtenidos en los dos casos
desarrollados.
Elaboracin de un argumento que justifique los resultados obtenidos.




49

GLUCONEOGNESIS
Prctica No. 8
Tema terico al que apoya: Gluconeognesis
OBJETIVOS
Explicar la biotransformacin de la glucosa conforme ocurre su catabolismo a
travs de la gluconeognesis.

Describir la funcin de los principales sustratos fisiolgicos en el ciclo de cori.

Conocer la importancia que tiene la gluconeognesis en la regulacin enzimtica
por la va del sustrato fisiolgico lactato.
FUNDAMENTO

La gluconeognesis se define como la biosntesis de hidratos de carbono a partir de
precursores de tres y cuatro carbonos, que generalmente no tienen naturaleza de hidratos de
carbono.
Normalmente la va gluconeognica tiene su inicio en piruvato, en el compartimiento
mitocondrial, y su final en glucosa, en el citosol. La gluconeognesis debe considerarse como
una va energtica ascendente, a la que se debe aportar energa para sintetizar glucosa.
En hgado, los principales sustratos fisiolgicos de gluconeognesis son lactato, piruvato,
glicerol y alanina, en tanto que en corteza renal son lactato, piruvato, glicerol y glutamina.

El de inters en esta ocasin para nosotros es el sustrato lactato.

El lactato est considerado como el sustrato cuantitativamente ms importante en la sntesis
de glucosa. El lactato circulante deriva principalmente del msculo esqueltico, y en menor
proporcin de los eritrocitos y de la mdula renal.



50

Cuando el lactato llega al hgado, entra por medio de un transportador saturable (difusin
facilitada) y dentro de la clula es oxidado a piruvato en el citosol.

Lactato- deshidrogenasa (LDH)

Se conocen cinco isoenzimas y se encuentra en corazn, rin, hgado y msculo
La reaccin puede determinarse utilizando la reaccin directa de lactato a piruvato o la
reaccin reversible de piruvato a lactato.

La prctica se basa en la siguiente reaccin:

Lactato-deshidrogenasa
Piruvato + NADH + H Lactato + NAD


Muestra biolgica:

Material:
Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla



51

Bao Mara a 37 C
Papel absorbente

Reactivos:
Set de reactivo de LDH.
Calibrador estndar de LDH
Control.
Agua destilada.


1. Determinacin de la actividad enzimtica de Lactato Deshidrogenasa (LDH)

1.1 Realice el corrimiento de 4 muestras de un problema de suero, siguiendo la
tcnica de que se disponga en el laboratorio.
1.2 Lea en el espectrofotmetro la absorbancia de cada uno de las muestras
problema, registre los valores obtenidos en su manual.
1.3 Utilizando la metodologa correspondiente al procedimiento sacar las
concentraciones de los problemas.
1.4. Enseguida determinar la media de los valores de los problemas.



52

RESULTADOS

VALORES DE REFERENCIA DE LDH EN SUERO

Niveles normales de LDH en adultos 100 a 200 UI/L
Niveles normales en nios menores de 2 aos 100 a 250 UI/L
Niveles normales en nios entre 2 y 8 aos 60 a 70 UI/L
Niveles normales en recin nacidos 160 a 450 UI/L



53


MECANISMOS DE EVALUACIN

Elaboracin de un argumento que justifique los resultados obtenidos
BIBLIOGRAFA:
www.medlineplus.com



54

CETOGNESIS

Practica No. 9
Tema terico al que apoya: Oxidacin: cetognesis: acetoacetato, b-
hidroxibutirato y acetona

OBJETIVOS
Explicar la formacin de cuerpos cetnicos (Cetognesis)
Conocer la procedencia de dichos cuerpos cetnicos.
Describir la funcin de los cuerpos cetnicos.

FUNDAMENTO
La Cetognesis es la formacin de cuerpos cetnicos provenientes de la degradacin de los
cidos grasos, en una va derivada de la beta oxidacin, estos compuestos no se oxidan
completamente en el tejido (la clula) donde se sintetizan, sino que salen a la circulacin para
ser utilizados en otros lugares del cuerpo.

Los cuerpos cetnicos (acetoacetato, acetona y beta hidroxibutirato) se forman en hgado en
condiciones en que la beta oxidacin de los cidos grasos es alta y difunden a la sangre para
su utilizacin como sustratos energticos por tejidos extrahepticos. Esto se produce
especialmente cuando las concentraciones de oxalacetato son bajas, de forma que el flujo a
travs de la citrato cintaza est deteriorado.

No es comn encontrar estos cuerpos cetnicos en orina en concentraciones detectables salvo
en casos especficos como la diabetes mellitus, ayuno prolongado e inanicin por mencionar
algunos.



55

En esta prctica nos enfocaremos a la determinacin de cuerpos cetnicos en condiciones
tales como diabetes mellitus y ayuno prolongado donde hay una movilizacin ms activa de
triglicridos que son los cidos grasos ms abundantes en el organismo.


Muestra biolgica:
Muestra de orina de un diabtico,
Muestra de orina de un alumno con de 18 hrs. de ayuno

Material y equipo:
Clinitec 50 y aditamentos
Vaso hermtico de plstico
Papel absorbente
Tubos cnicos.

Reactivos:
tira reactiva para EGO.


1. Determinacin manual de cuerpos cetnicos en orina

1.1 Introducir una tira reactiva en la muestra de orina, elininar el exceso en un papel
absorbente.



56

1.2 Leer la tira comparando el color en la etiqueta del frasco donde vienen dichas
tiras.
1.3 Anotar su resultado en su manual.

2. Determinacin de cuerpos cetnicos en orina con mtodos automatizados.

2.1 Introducir una tira reactiva en la muestra de orina, eliminar el exceso en un papel
absorbente
2.2 Colocar la tira en el tren de lectura del lector de tiras de orina (Clinitec 50).
2.3 Esperar la impresin del resultado.
2.4 Anotar su resultado en su manual.

RESULTADOS



57



o Sesin de discusin de resultados obtenidos.
o Elaboracin de un argumento que justifique los resultados obtenidos




58

DETERMINACIN DE COLESTEROL

Prctica No. 10
Tema terico al que apoya: Colesterol

OBJETIVOS
Explicar el valor diagnstico de la determinacin del Colesterol Total.

Argumentar la relacin que existe entre los niveles en suero de Colesterol Total.
Discutir los valores obtenidos en su prctica.

FUNDAMENTO

COLESTEROL.
Es un componente lipdico esencial del cuerpo humano, se encuentra en membranas celulares
en forma libre, en algunas clulas capaces de almacenar Colesterol, eterificndolo
reversiblemente en cidos grasos y convirtindolo en partculas de deposito identificables; y
una tercera parte de Colesterol se encuentra en las Lipoprotenas circulantes en plasma
sanguneo, las cuales transportan Colesterol eterificado en el centro de la clula y Colesterol
libre en su capa externa.
El Colesterol es necesario para que las clulas eucariticas formen nuevas membranas y
adems juega un papel imprescindible en el organismo como precursor de sales biliares,
hormonas esteroides y Vitamina D.



59

Se encuentra en Piel, Hgado y Suprarrenales, as como en algunos fludos corporales como
plasma sanguneo, bilis y orina. En la mayora de los tejidos el Colesterol se encuentra no
esterificado .

La capacidad de absorcin del Colesterol en la dieta es limitada, con un promedio de 0.3
g/da, no excede de 1 g/da, excretndose en las heces fecales el resto del Colesterol ingerido
en la dieta.


Muestra biolgica:
Muestra de suero sanguneo en ayunas
Muestra de suero sanguneo despus de desayunar

Material:

Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Papel absorbente



60


Reactivos:

Set de reactivo de colesterol Total
Calibradores estndares respectivos.
Controles Normales y anormales
Agua destilada


1. Determinacin de Colesterol Total

1.1 Realice la determinacin de una muestra problema, suero y control siguiendo la tcnica
de que se disponga en el laboratorio.

1.2 Lea en el espectrofotmetro las absorbancias de las muestras problema y controles

1.3 Registre los valores obtenidos en su manual.

1.3 Calcule la concentracin del control y problema mediante la ecuacin siguiente:

Colesterol mg/mL = Abs. del problema [ estndar]
Abs. del estndar



61

RESULTADOS

VALOR DE REFERENCIA DE COLESTEROL TOTAL:

35 a 200 mg/ml.

RESULTADOS



62

DISCUSIN Y CONCLUSIN







63

DETERMINACIN DE UREA

Practica No. 11
Tema terico que apoya: Ciclo de la urea.

OBJETIVOS
Explicar el papel fisiolgico de la urea.
Interpretar los niveles sricos de urea en el organismo.
Describir la funcin de la urea y saber de donde proviene.

FUNDAMENTO

La urea es el principal producto del catabolismo de las protenas y aminocidos,
constituye el principal compuesto nitrogenado no proteico del plasma.
Debe ser eliminada del organismo para garantizar el mantenimiento del metabolismo
proteico normal de las clulas. Se sintetiza casi exclusivamente en el hgado y se transporta
luego a los riones para su excrecin. Tiene la ventaja de ser una molcula muy hidrosoluble
e inocua, con una elevada proporcin de nitrgeno en su composicin, que permite su
eliminacin con escasa inversin de energa del organismo al ser concentrada en la orina y
eliminada al exterior.
Su determinacin nos refleja el buen funcionamiento del rin, por lo que aqu nos
enfocaremos solo a su determinacin en situaciones normales sin tocar las patologas que nos
pudieran reflejar.



64


Muestra biolgica:

Material:
Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Papel absorbente

Reactivos:
Reactivo de Urea.
Calibrador estndar de urea
Controles normal y anormal.
Agua destilada.



65


1. Determinacin de Urea en suero

1.1 Realice la determinacin de una muestra problema, un estndar y un control siguiendo la
tcnica de que se disponga en el laboratorio.

1.2 Lea en el espectrofotmetro las absorbancias de las muestras problema y control y
registre los valores obtenidos en su manual Calcule la concentracin del problema y
control mediante la siguiente frmula:

1.3 Calcule la concentracin del problema y control mediante la siguiente frmula:

Urea en mg/dL = Abs del problema [estandar]
Abs. del estandar

RESULTADOS



66

VALORES DE REFERENCIA DE UREA EN SANGRE
Adultos son entre 7 y 20 mg/dL.
Nios pequeos de 5 a 18 mg/dL.








67

DETERMINACIN DE BILIRRUBINAS
Prctica No. 12
Tema terico al que apoya: Sales biliares

OBJETIVOS
Explicar la formacin de las bilirrubinas.
Conocer la importancia que tienen como herramienta para el diagnstico
de las enfermedades hemolticas y diferentes tipos de hepatopatas.
Distinguir entre bilirrubina total, directa e indirecta, as como su
procedencia.

FUNDAMENTO
La bilirrubina es el producto de la degradacin de la hemoglobina, cuando los
hemates han cumplido su ciclo vital, de unos 120 das de vida media, y se han hecho frgiles
para persistir en el sistema circulatorio, sus membranas celulares se rompen y los macrfagos
tisulares de todo el cuerpo (llamado sistema retculoendotelial) fagocitan la hemoglobina
liberada.
Aqu, la hemoglobina se rompe y d como producto globina y hem; el hem es un
anillo que se abre para dar: 1) hierro libre que la transferrina transporta en la sangre y 2) una
cadena recta de cuatro ncleos pirrol, que es el sustrato a partir del cual se forma finalmente
la bilirrubina.
Esta bilirrubina es transportada por la albmina en la sangre hasta el hgado, donde la
mayor parte es conjugada con cido glucornico antes de ser excretada en la bilis. sta es
llamada bilirrubina directa, mientras que la bilirrubina no conjugada se denomina bilirrubina
indirecta, y juntas las dos forman lo que conocemos como bilirrubina total.



68


Muestra biolgica:

Material:
Pipetas serolgicas.
Micropipetas.
Bulbos.
Tubos de ensaye
Gradilla
Bao Mara a 37 C
Papel absorbente

Reactivos:
Reactivo de bilirrubina total.
Reactivo de bilirrubina directa.
Calibradores estndares respectivos.
Controles normal y anormal.
Agua destilada.



69


1. Determinacin de Bilirrubina Total

1.1 Realice la determinacin de un suero problema, un estndar y controles
siguiendo la tcnica de que se disponga en el laboratorio.
Lea en el espectrofotmetro las absorbancias de las muestras problema y control

Registre los valores obtenidos en su manual.

1.4 Calcule la concentracin del problema y control mediante la siguiente ecuacin:

Bilirrubina total en mg/dL = Abs. del problema [estndar]
Abs. del estndar

RESULTADOS



70

2. Determinacin de Bilirrubina Directa

2.1 Realice la determinacin de un suero problema, un estndar y un control
siguiendo la tcnica que se disponga en el laboratorio.

2.2 Lea en el espectrofotmetro las absorbancias de las muestras problema y control
y registre los valores obtenidos en su manual.

2.3 Calcule la concentracin del problema y control mediante la ecuacin anterior.

RESULTADOS

3. Determinacin de Bilirrubina Indirecta

3.1 Una vez obtenidos los valores de Bilirrubina Total y Directa calcular la
Bilirrubina indirecta mediante la ecuacin siguiente:



71

BT BD = BI
BT = Bilirrubina Total

BD = Bilirrubina Directa

BI = Bilirrubina Indirecta

RESULTADOS

VALORES DE REFERENCIA DE BILIRRUBINAS

Bilirrubina directa 0,1 a 0,3 mg/100 ml
Bilirrubina indirecta menor de 1,0 mg/ml
Bilirrubina total 0,3 a 1,0 mg/100 ml

DISCUSIN Y CONCLUSIN




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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA

FACULTAD DE MEDICINA Y PSICOLOGIA

BIBLIOGRAFA: Mathews/Van Holde. BIOQUMICA. Segunda edicin. Editorial McGraw-Hill

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