1

Misin y Visin Institucional 3

TUXTLA GUTIRREZ, CHIAPAS
ENERO DEL 2011



DOCENTE: M. EN C. MARA EMPERATRIZ DOMNGUEZ ESPINOSA

IESCH
Universidad Salazar
LICENCIATURA EN:

QUMICO
FARMACUTICO
BILOGO.
MANUAL DE PRCTICAS
BIOQUMICA CLNICA I

2


CONTENIDO


Misin y Visin Institucional ............................................ 3
Misin y Visin de la Carrera ........................................... 4
Perfil del Egresado ............................................................ 5
Introduccin a la Bioqumica ........................................... 6
Reglamento del Laboratorio ............................................. 7
Reglas de Seguridad ....................................................... 11
Criterios de Calificacin ................................................. 14
Formato de reporte de prcticas ................................... 15
Anexos ............................................................................. 17





3


MISION Y VISION DEL IESCH


El Instituto de Estudios Superiores de Chiapas, tiene por Misin:


Formar al ser humano, fomentando el desarrollo de actitudes, valores,
habilidades y conocimientos en pertinencia y vinculados con el entorno
econmico, social, poltico y cultural que demanda nuestra regin y el pas


Y por Visin:

Ser una Institucin integrada a los sectores productivos y sociales que
conjunten actividades docentes y de investigacin con el servicio y mejora de
nuestro estado y pas, acorde al proceso de globalizacin actual, fomentando
excelencia y calidad








4



MISION Y VISION DE LA LICENCIATURA

La licenciatura en Qumico Farmacutico Bilogo, tiene por Misin:

Formar profesionales en Qumico Farmacutico Bilogo con capacidad para la
produccin de bienes y servicios para la salud y para realizar actividades de
intervencin, investigacin y docencia que respondan a las necesidades
individuales y colectivas que demanda nuestra regin y pas, con una visin
integral del ser humano y con alto sentido de responsabilidad y humanismo


Y por Visin:

Ser una licenciatura con alto nivel acadmico y amplio reconocimiento social,
lder en la formacin de profesionales qumico farmacutico bilogo; integrada a
los sectores productivos y sociales que vincule actividades de docencia,
investigacin y servicio, acorde al proceso de globalizacin actual, fomentando la
excelencia y la calidad en su quehacer diario






5


PERFIL DEL EGRESADO

El egresado de la carrera de qumica farmacutico biolgica deber poseer los
conocimientos habilidades y aptitudes para poder colaborar en el equipo de salud
realizando funciones especficas en la investigacin, desarrollo, preparacin y control de
frmacos y medicamentos, teniendo la responsabilidad social para fabricar y/o distribuir
al pblico los medicamentos y la informacin necesaria de los mismos. Desarrollar,
supervisar, Investigar y realizar los procedimientos y tcnicas analticas en el rea de la
salud colaborando en la resolucin de problemas de salud relacionados con la
prevencin, diagnstico y control de enfermedades de acuerdo con la normatividad del
pas y las recomendaciones internacionales. Participar en el establecimiento de la
normatividad que rige las actividades del rea de Salud, colaborar en la verificacin,
peritaje y supervisin del cumplimiento de las normas. Adems de contar con los
conocimientos necesarios para incorporarse en estudios de postgrado, todo esto para
servir a la sociedad responsablemente contribuyendo as al desarrollo de su entorno
regional.









6


INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE
BIOQUMICA CLINICA I

La Bioqumica Clnica es un campo multidisciplinario cuya finalidad es la aplicacin de la ciencia
Qumica para la resolucin de problemas de salud.
La funcin del laboratorio de Bioqumica clnica es realizar anlisis tanto cualitativos como
cuantitativos en fluidos corporales como sangre, orina, lquido seminal, lquido cefalorraqudeo,
as como en otros materiales por ejemplo clculos. Para que los resultados de dicho anlisis sean
tiles a los mdicos en el diagnstico, tratamiento y seguimiento de una enfermedad estos
debern realizarse bajo estricto control de calidad logrando niveles ptimos de precisin,
exactitud, coordinacin y plausibilidad, caractersticas deseables en cualquier resultado
diagnstico.
Es indispensable que el estudiante de la Licenciatura en Qumico Farmacutico bilogo, adquiera
una formacin y preparacin bioqumica que le permita afrontar los retos que encontrar en su
vida profesional, ante el creciente nmero de tcnicas manuales y automatizadas que
continuamente se estn desarrollando para la deteccin y cuantificacin de metabolitos de
inters para la medicina moderna.
Al trmino del curso el alumno deber ser capaz de realizar anlisis de productos biolgicos
incluyendo una adecuada manipulacin de los especmenes desde la toma y/o recepcin de la
muestra hasta la entrega de resultados.
Este proceso incluye: diseo, seleccin, elaboracin y ejecucin analtica, evaluacin y
resolucin de problemas con la metodologa empleada, planeacin, aplicacin e interpretacin
de grficas y monogramas relativos y correlacin de los datos obtenidos con las posibles
alteraciones que se presentan en el organismo en las diferentes patologas.








7


REGLAMENTO DEL LABORATORIO

GENERALES:
El presente reglamento tiene como objetivo establecer las normas y conductas que
deben presentar catedrticos, alumnos y laboratoristas en el transcurso de las prcticas de
la materia de Bioqumica Inmunolgica, para establecer los parmetros de calificaciones
asignadas a los alumnos.


CAPITULO I

DEL LABORATORISTA

Artculo 1


El laboratorista permanecer en el laboratorio en el horario que le corresponde.

Tendr listo el material (cristalera, instrumental, reactivos y equipos) para las
prcticas dentro del laboratorio, de acuerdo a lo solicitado por el profesor, con tres
das de anticipacin por lo menos.

Entregar con debida cortesa, el material a los alumnos y a los profesores durante
el tiempo estipulado para cada sesin de laboratorio.

El material ser entregado durante los primeros 15 minutos.

Recibir y revisar que el material y el equipo estn en buen estado y en perfectas
condiciones de limpieza,

Auxiliar a los profesores en la preparacin de soluciones u otros reactivos que se
requieran para el desarrollo de la prctica.

Orientar a los estudiantes en el manejo y cuidado del equipo.

Tendr al da los inventarios fsicos, de cristalera, instrumental, reactivos y
equipo de laboratorio a su cargo y los entregar a fin de semestre a la
Coordinacin de la materia.
8

Mantendr el equipo en su sitio procurando su correcta utilizacin y bajo
controles de seguridad.

Ser el responsable absoluto de que el equipo de laboratorio este en perfecto
estado de uso (limpio, funcionando, etc)

Controlar el regreso de material, equipo, etc, en el tiempo estipulado.

En casos estrictamente necesarios, se quedar unos minutos ms para facilitar la
prctica.

Al final del semestre le entregar a los alumnos un comprobante de No Adeudo
de material de Laboratorio.

Esta prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio.


CAPITULO II

DE LOS ALUMNOS

Artculo 2


El alumno deber llegar puntual a la hora correspondiente de la prctica. Se le dar una
tolerancia mxima de 10 minutos, transcurrido ese tiempo, no podr ingresar al
laboratorio.

Es indispensable el uso de la bata dentro del laboratorio, no se permite el uso de
filipina.

Esta prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio, cualquier incurrimiento en lo
antes mencionado anular el derecho a realizar la prctica.

Entrando al laboratorio, el alumno deber entregar los requisitos de la prctica a realizar
de lo contrario se anular dicha prctica.

Se deber entregar un Reporte de Prctica 8 das despus de haberla realizado. El
contenido del mismo ser indicado por el catedrtico.

El alumno deber cumplir con al menos el 80% de asistencias en el laboratorio durante
todo el ciclo escolar, para evitar la baja del curso prctico.

9

El Material biolgico necesario para la realizacin de las prcticas ser proporcionado
por los alumnos, el incumplimiento de esta disposicin anular el derecho a realizar la
prctica.

El alumno deber solicitar el material de laboratorio con un mximo de 3 das de
anticipacin, mediante un vale a los laboratorista, de lo contrario perder el derecho de
realizar la prctica.

Cualquier material que resulte daado durante la realizacin de la prctica deber ser
repuesto por el alumno a ms tardar en 8 das, de lo contrario perder el derecho de
realizar la siguiente prctica y su calificacin de ese mes ser anulada.

La calificacin de laboratorio constituir el 20% de la calificacin global de la materia.

El alumno presentar un examen terico de la practica, durante el transcurso de la
realizacin de la misma.

La calificacin de cada practica estar integrada por el reporte, la evaluacin terica de
la practica y el desempeo durante la misma.

La calificacin mnima aprobatoria es de 6.0

Es requisito indispensable aprobar la teora para validar la calificacin del Laboratorio.

Los alumnos que reprueben ms del 20% del total de las prcticas, se vern obligados a
presentar un Examen terico-prctico Final del Laboratorio, como requisito
indispensable para poder tomar en cuenta el porcentaje correspondiente al Laboratorio
para la calificacin final de la materia.


CAPITULO III

DE LOS PROFESORES
Artculo 3


El profesor deber llegar 10 minutos antes del inicio de la prctica para verificar el
orden y funcionamiento del material de laboratorio que se emplear en el desarrollo de la
misma.

La calificacin de laboratorio constituir el 20% de la calificacin global de la materia.

El alumno presentar un examen terico de la prctica, durante el transcurso de la
realizacin de la misma.

10

La calificacin de cada prctica estar integrada por el reporte, la evaluacin terica de
la prctica y el desempeo durante la misma.

La calificacin mnima aprobatoria es de 6.0

Los alumnos que reprueben ms del 20% del total de las prcticas, se vern obligados a
presentar un Examen terico-prctico Final del Laboratorio, como requisito
indispensable para poder tomar en cuenta el porcentaje correspondiente al Laboratorio
para la calificacin final de la materia.

Est prohibido comer, beber o fumar dentro del laboratorio.

Las calificaciones mensuales debern entregarse al profesor titular a ms tardar 5 das
antes de la aplicacin del examen mensual.

Se debern entregar al profesor 10 reactivos referentes a lo revisado durante el mes para
su inclusin en el examen mensual terico, a mas tardar 5 das antes de la aplicacin de
este,

Se deber proporcionar junto con las calificaciones, la relacin de alumnos que adeudan
material, as como las inasistencias para su contabilizacin.
















11

MEDIDAS DE SEGURIDAD QUE DEBE TOMAR DURANTE EL DESARROLLO
DE LA PRCTICA.

1. Leer antes su prctica. En ocasiones se le pedir traer materiales y si no los trae no
podr efectuar su prctica.
2. Traiga consigo siempre material de limpieza, como franela, detergente y jabn neutro.
3. No coloque mochilas sobre su mesa de trabajo.
4. Tenga consigo siempre su manual de prcticas o diagrama de flujo de la misma.
5. Efectu solo lo que se le seala. Lo dems podra ocasionar riesgos.
6. Tome en cuenta las fuentes flamables: equipo elctrico, mecheros, tuberas de gas,
fuentes de calor, etc.
7. No utilice equipos de comunicacin mientras trabaja en el laboratorio.
8. No pruebe ni huela las sustancias qumicas a menos que se lo indique su profesor.
9. No se frote los ojos con las manos mientras se este trabajando, si necesita hacerlo use
un pauelo apropiado.
10. Antes de succionar pipetas, lvelas y squelas para no contaminar los reactivos.
11. Nunca mezcle sustancias qumicas a menos que el procedimiento se lo indique.
12. Si la meza de trabajo se ensucia, inmediatamente debe limpiarla con una toalla hmeda
para eliminar los residuos de los reactivos.
13. Deseche las sustancias segn las instrucciones de su profesor.
14. Cuando ponga a calentar tubos de ensayo, debe hacerlo inclinado este 45 C. en
direccin opuesta a sus compaeros y usted.
15. Use pinzas para manejar recipientes calientes.
16. No utilice la boca para pipetear sustancias qumicas, use una perilla.
17. En caso de quemaduras, avise al encargado de laboratorio o a su profesor.
18. Siempre deje limpia su mesa de trabajo y lave el material que utilizo con agua y jabn,
con un enjuague final con agua destilada.
19. Cuando utilice aparatos especiales, entrguelos limpios.
20. Entregue el material, reactivos y equipos.
21. Al concluir la practica qutese la bata y lvese las manos.


12

MANEJO DE EQUIPO Y CRISTALERIA.
a. Cercirese que la cristalera este limpia y sin dao al recibirla.
b. Si va a aplicar calor a la cristalera, revise que sea tipo Pyrex.
c. Si usted dao cristalera, debe inmediatamente informarlo al encargado de laboratorio.
d. Toda la cristalera se lava con jabn y los tubos de ensayo se colocan en la gradilla boca
abajo.
e. No utilice termmetros como agitadores.
f. Utilice esptulas limpias para recoger los reactivos slidos.
g. Limpie los goteros y las pipetas antes de usarlas para evitar contaminaciones.
h. Cuando tenga que utilizar equipos de los cuales desconozca su funcionamiento pregunte
al profesor.

MANEJO DE REACTIVOS.
i. Antes de usar un reactivo qumico lea cuidadosamente la etiqueta, este le indica nombre,
formula, concentracin. Tome lo que necesita y cierre el recipiente.
ii. No use ningn reactivo que no posea etiqueta.
iii. Mantenga los reactivos en el lugar indicado por su profesor. Los cidos y base fuertes
mantngalos alejados de su mesa de trabajo.
iv. Para medir volmenes de cidos y bases concentrados, use probetas o buretas. Nunca
pipetas.
v. Al usar reactivos evite tocarse los ojos o la boca.
vi. Mucho de los solventes que se utilizan en laboratorio son flamables, entre ellos estn el
metanol, la acetona, el ter y el hexano. Por ello deben mantenerse lejos de mecheros
encendidos y deben de manejarse en campanas de extraccin de vapores.
vii. Los cidos y base fuertes deben de manejarse en campanas de extraccin de vapores.
viii. Al verter al drenaje cidos y bases fuertes deje correr mucha agua para diluirlos.
ix. No vaci al drenaje material insoluble como grasas, ceras, vidrios, etc.
x. Si se derramara cualquier reactivo sobre su piel u ojos, avise de inmediato a su profesor.
xi. No introduzca pipetas, goteros o cualquier otro objeto en los reactivos, salvo los que este
utilizando para evitar contaminacin.
xii. No mezcle el contenido de varios tubos a menos que lo indique el procedimiento, puede
causar explosiones, calentamiento o vapores txicos.
xiii. Vierta la solucin concentrada en la menos concentrada para evitar reacciones violentas.
13

xiv. Si se produjera derrame de sustancias voltiles, apague mecheros y equipo y limpie el
rea.
xv. Lee las etiquetas de los reactivos para ver si es toxico, inflamable, irritante o corrosivo.

Riesgo biolgico

PREPARACIN DEL REA DE TRABAJO:

La mesa de trabajo debe ser con cubierta de acero inoxidable, o cualquier material plstico
resistente al calor, humedad y corrosin, la cual debe mantenerse limpia y en buen estado de
conservacin. Contar con suficiente iluminacin, natural o artificial, sin reflejos molestos sobre el
analista. Sin objetos sobre de ella que vayan de ninguna manera intervengan en el trabajo.
Distribuir los materiales dentro del rea de trabajo en tal forma que el movimiento del material se
realice de izquierda a derecha y siempre dentro del espacio suficiente para realizar las
maniobras con fluidez. Al concluir la ltima actividad en la mesa de trabajo, proceder a su
limpieza.
El analista estar provisto de bata manga larga, limpia y en buen estado. Bajo ninguna
circunstancia fumar, masticar o hablar en tanto se realiza el trabajo.






14

CRITERIOS DE CALIFICACIN

A) DISCIPLINA:
1.- Se presenta puntual y correctamente vestido al laboratorio
2.- Utiliza el material requerido
3. Se comporta adecuadamente y con inters
B) DESARROLLO DE LA PRCTICA:
1.- Presenta su manual de prcticas
2.- Presenta el material qumico o biolgico que se le solicita para desarrollar la prctica
3.- Solicita material completo para realizar la prctica
4.- Define con claridad los trminos y conceptos relacionados a la prctica
5.- Conoce la finalidad de cada paso que se realiza en la prctica
6.- Sabe distinguir los diferentes reactivos y materiales utilizados
7.- Maneja con habilidad las tcnicas establecidas
8.- Observa los resultados que se obtienen y toma nota
9.- Entrega material limpio y completo al finalizar la prctica
10.- Reporta sus anotaciones individuales al catedrtico responsable de la prctica
11.- Reporte de prctica


15

EL REPORTE DE LABORATORIO DEBE CONTENER LOS SIGUIENTES PUNTOS:

1. TITULO DE LA PRACTICA
2. RESUMEN EJECUTIVO
3. PALABRAS CLAVE
4. INTRODUCCIN
5. OBJETIVO
6. MATERIALES Y METODOS
7. RESULTADOS
8. DISCUSION DE RESULTADOS
9. CONCLUSION
10. CUESTIONARIO
11. BIBLIOGRAFIA

INSTRUCCIONES GENERALES PARA REALIZAR EL REPORTE DE
PRCTICA.

1- Indicaciones para el reporte escrito
Generales. Usar hojas blancas, tamao carta. Escribir con letra
nmero doce y margen izquierdo de 3 cm. Entregar las hojas
grapadas, no clip, sin carpeta. La entrega se realizar siete das
despus de haberla concluido.
Portada. Deber realizarse en la primera hoja del reporte, el
nombre del instituto, de la licenciatura, nombre de la asignatura, el
nmero de prctica y nombre de la misma, nmero de equipo e
integrantes, fecha, y de ah iniciar el la misma con el resumen
ejecutivo.


Resumen ejecutivo. En forma concisa se informar sobre el
objetivo de la prctica, el equipo y las consideraciones principales
del modelo, se enfatizarn los resultados obtenidos, as cmo las
limitaciones a su validez.
Palabras clave
Introduccin. Deber ser breve, no mayor de dos cuartillas y
deber anotar las citas bibliogrficas respectivas.
Objetivo(s)
Materiales y Mtodos. Describa de forma detallada la forma en que
realiz la prctica.
16

Resultados. Describa y analice sus resultados, aqu anote los
cuadros que realiz junto con su(s) compaero(s). Es conveniente
anexar tablas, grficas, dibujos, fotografas o esquemas de lo que
observ durante la prctica. Si existen dibujos, stos debern estar
entintados y coloreados.
Discusin. Esta es la parte ms difcil de escribir, pero es la ms
importante. Aqu se deben sealar las diferencias y similitudes que
hallaste con los datos bibliogrficos y analizar el porqu de los
resultados que obtuviste. Puedes utilizar cuadros comparativos u
otra herramienta que te sea til para presentar la informacin.
Conclusiones. Redactar con relacin al o los objetivo(s) y a los
resultados obtenidos
Cuestionario Deber contestar las preguntas que se encuentran al
final de cada prctica, citar la bibliografa empleada.
Bibliografa. Debe citar SIEMPRE la fuente de donde obtuvo la
informacin, ya sea escrita o visual. Utilice revistas especializadas,
libros y pginas de Internet recomendadas por el docente.
Al final de la prctica debers anexar las hojas que se firman
durante el desarrollo de la prctica, para confirmar tu participacin


Al finalizar cada prctica contenida en este manual debers anexar 2 hojas blancas para que
estas sean en las que realices tus anotaciones y las que entregues en el reporte. Debers
presentar el manual de prcticas engargolado en cada prctica de laboratorio.












17

ANEXO
PRCTICAS DE LABORATORIO


Practica Nombre Pagina
1
Control de calidad en qumica clnica
18
2
Examen coprologico
23
3
Metabolismo de carbohidratos
30
4
Pruebas confirmatorias de Diabetes mellitus:
Curva de tolerancia a la glucosa
35
5
Metabolismo de los lpidos
36
6
Determinacin de triglicridos
40
7
HDL (Lipoprotenas de alta densidad)
42
8
Metabolismo de protenas y funcin renal
45
9
Examen general de orina

54














18


PRACTICA NO. 1
CONTROL DE CALIDAD EN QUIMICA CLNICA

INTRODUCCION AL CONTROL DE CALIDAD EN EL LABORATORIO CLNICO.
ESTANDARES, CONTROLES y CALIBRADORES.
BASES PARA LA MEDICION DE LOS PRINCIPALES METABOLITOS EN
EL LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLNICA I, ESTANDARES, CONTROLES y
CALIBRADORES:
A menudo nos encontramos con que se tienen ciertos conceptos errneos sobre lo que
es un estndar y un control, cul es su respectivo uso y sus caractersticas.
La Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada (IUPAC) ha hecho la siguiente
clasificacin de estndares:
GRADO A: Estndar de peso atmico.
GRADO B: Estndar ltimo. Una sustancia que puede ser purificada hasta prcticamente
grado A.
GRADO C: Estndar primario. Una sustancia que se puede obtener comercialmente con
un grado de pureza de 100 + 0.02%.
GRADO D: Estndar de trabajo. Una sustancia que se puede obtener comercialmente
con un grado de pureza de 100 + 0.05%.
GRADO E: Estndar secundario. Una sustancia de menor pureza que puede
estandarizarse contra material estndar primario (grado C).
Especficamente en Qumica Clnica un ESTANDAR es un material o
solucin que va a ser comparado con la muestra para determinar la concentracin
o el contenido de un componente presente en la muestra (estndar de
calibracin).
Una solucin ESTANDAR PRIMARIA es usada como estndar de
calibracin en el que la concentracin es determinada solamente por disolucin de
un peso determinado de material estndar primario en un solvente apropiado y
completando a un volumen o peso determinado.
En otras palabras, las soluciones estndar son soluciones de una sustancia
pura en un solvente adecuado, que se emplean en la calibracin de instrumentos.
Las soluciones calibradoras son generalmente mltiples conteniendo ms
de un componente que ha sido agregado por pesada a una matriz, que puede ser
un buffer o una solucin de protenas, estabilizadores, etc. de tal forma que existe alguna
semejanza con el material que se analizar en la referente a viscosidad,
pH, etc. Ejemplo, Calibrador para sistemas automatizados.
Por ltimo los SUEROS DE CONTROL son sueros de origen humano,
animal o artificial a los que se puede enriquecer agregando sustancias puras para
alcanzar aproximadamente la concentracin deseada (valores "normales", medios
o elevados).
19

La concentracin final es determinada mediante anlisis hechos en el
producto final por laboratorios de referencia, es decir, por laboratorios de
reconocida experiencia y calidad. Los resultados analticos obtenidos son
analizados estadsticamente indicndose en el instructivo el valor promedio y la
desviacin estndar obtenidos para cada componente y mtodo de anlisis.
Los SUEROS DE CONTROL tambin puede ser sin valores, destinados a
controlar slo la precisin de los anlisis, a diferencia de los con valores que
permiten evaluar tanto la precisin como aproximadamente la exactitud.
Los sueros de control, por no saberse exactamente su contenido (el valor
real est cercano al promedio pero no sabemos cuan cercano), no pueden ser
usados como calibradores y los calibradores no pueden ser usados como
controles porque con ellos se calibr el instrumento de medicin y porque adems
no son muy semejantes a las muestras (efectos de matriz).
ALGUNOS FACTORES QUE AFECTAN LA CALIDAD DE LOS ANLISIS Y SU CONTROL.
En todos los anlisis que se llevan a cabo en el laboratorio clnico, existen
factores diversos que pueden conducir a errores y pueden ser clasificados en
gruesos, sistemticos e indeterminados o fortuitos. Entre los errores gruesos se
pueden sealar para su frecuencia al cambio de una muestra por otra o la
transcripcin de un resultado por otro; estos errores son sin duda, los ms graves
que pueden cometerse en el laboratorio clnico y lamentablemente no son
sencillos de controlar. Sin embargo pueden ser evitados si se toman rigurosas
medidas en el manejo de muestras e informe de resultados. En cambio los
errores sistemticos y los errores indeterminados, se pueden poner de manifiesto
y controlar mediante sistemas de control de calidad. Cabe sealar, que los errores
sistemticos afectan la exactitud de los anlisis, mientras que los indeterminados
afectan la precisin de los mismos y se pueden poner de manifiesto mediante un
sistema de control de calidad tanto interno como externo, respectivamente.
Objetivos: Poner de manifiesto algunos de los factores que afectan la
calidad de cualquier anlisis qumico. Evaluar el grado en el que lo hacen y buscar
soluciones alternativas que los minimicen.
IMPORTANCIA CLINICA
El valor que los anlisis clnicos tienen en el diagnstico, pronsticos y seguimiento de
muchos padecimientos, es fundamental, ya que con frecuencia dan informacin de los
estados de salud de un paciente. Sin embargo, se necesita tener confiabilidad en los
resultados de laboratorio, esto solo se puede asegurar mediante la utilizacin de los
modernos sistemas de CONTROL DE CALIDAD.
Material:

1 gradilla espectofotometro
16 tubos de ensayo de 18X 150 mm NaOH
2 pipetas de 0.1 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml H
2
SO
4

Solucin amortiguadora de citratos pH 4.7 Rojo de cresol
Dicromato de potasio

20


PROCEDIMIENTO
Con la solucin de dicromato de potasio al 5% realizar diluciones 1:5 y repetir dicha
dilucin en 10 tubos de 16x150 mm, posteriormente leer la absorbancia de cada tubo a 507
nm.
REPORTE SUS RESULTADOS:
1.-Calcule:
Promedio:
-----------------------------
Desviacin estndar:
--------------------
Coeficiente de Variacin.
------------------
2.- De los parmetros determinados anteriormente indique cul de los parmetros le determina la
precisin de sus resultados y cul de ellos la exactitud.
3.- Determine las fuentes de error de sus resultados:
4.-Concluya en base a sus resultados.

BIBLlOGRAFA
1. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE LABORATORIO.
EDITORIAL INTERAMERICANA.
2. MARCUS A. KRUPP, I.M. TIERNEY. JR., ERNEST JAWESTZ, ROBERTO I. ROE, CARLOS
A. CAMARGO. 1996. DIAGNOSTICO CLNICO Y DE
LABORATORIO. ED. MANUAL MODERNO














21



CALIBRACIN DEL ESPECTOFOTOMETRO:

INTRODUCCION:
Para garantizar la calidad del trabajo realizado en el laboratorio se requiere que el
personal est capacitado para llevar un cuidado preventivo de los instrumentos
empleados. Para ello el primer punto es familiarizarse con el instrumento, su
calibracin y su control peridico (Longitud de onda, eficiencia de la lmpara, luz
extraa).
Cada fabricante debe proveer al usuario sistemas de control a emplea, a fin de
que ste pueda ser el primer indicador de un requerimiento de mantenimiento,
fuera del fijado previamente.

USO DE CURVAS DE CALIBRACIN

Generalmente se usan para verificar tanto el aparato como el buen
funcionamiento del reactivo y sobre todo como material de referencia para la
obtencin de la concentracin de la muestra a analizar. Para ello vamos a
emplear una de las pruebas de laboratorios: GLUCOSA (Mtodo: O-Toluidina).

PROCEDIMIENTO:
1) En matraces volumtricos de 100 ml:

Tubo Patrn de glucosa
(10 mg/dl)
Agua destilada
(ml)
mg Glucosa/dl Transmitancia
1 5 95 50
2 7.5 92.5 75
3 10 90 100
4 15 85 150
5 20 80 200
6 25 75 250
7 30 70 300
8 35 65 350

2) De cada una de estas diluciones tomar 0.1 m\. y transferir a tubos de ensayo
debidamente marcados. Disponer de un tubo blanco con 0.1 m\. de agua
destilada.
3) Aadir a todos los tubos 5 ml de O-Toluidina y mezclar.
4) Colocar en bao de agua hirviente durante 10 minutos.
5) Enfriar en agua fra durante 3 minutos. Volver a mezclar
6) Leer en el espectrofotmetro a 630 nm contra el blanco, antes de que
transcurran 30 minutos. Usar cubeta de 12 x 75 mm.
REPORTE:
Grfica en papel milimtrico y/o semilogaritmica segn sea la conveniencia para la curva de
calibracin correspondiente.
CUESTIONARIO:
1. Cul es la Iinearidad del mtodo empleado para la curva de calibracin:
2. Porque es importante realizar las curvas de calibracin.
3. Cuando no es necesario realizar las curvas de calibracin.
4. Cules pueden ser los factores que pueden influir en la realizacin de la curva de
calibracin.
22







CONTROL DE CALIDAD INTERNO.

Para realizar el control de calidad interno (CCI), nos valemos del uso de
sueros controles (normales, o patolgicos bajos o altos), se denomina
interno porque este se realiza internamente dentro del laboratorio. Para valorar
nuestro control diariamente se debe de realizar una determinacin por cada
analito graficndolo inmediatamente. En nuestro caso determinaremos nuestra
variacin en condiciones ptimas del laboratorio (VCO). Para ello realizar una
determinacin de glucosa por alumno usando un suero control y posteriormente.
Cada alumno anotara su resultado en el pizarrn.

REPORTE SUS RESULTADOS:

1.-Sus lmites de confianza al 95%, para ello antes tienen que calcular los
parmetros siguientes:

Promedio: ___________________________
Desviacin estndar: __________________
Coeficiente de Variacin: ______________
Lmite Superior: ______________________
Lmite Inferior: _______________________

2.- Realice su curva de LEVI-JENNINGS de acuerdo a sus resultados y explique el
comportamiento de sus resultados en dicha grfica
4.- Determine las fuentes cuantos tipos de error se pueden detectar en dicha
curva:
5.- De acuerdo a sus datos cuantos tipos de errores encontr.
6.-Concluya en base a sus resultados.

BIBLIOGRAFA
1. ALVA ESI, UHTHOFF BEC.; PECEL. CURSO TERICO PRCTICO DE CONTROL
DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA; IPN ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS
BIOLGICAS; MXICO, 2000.
2. HENRY, CAN NON ANO WINKELMAN. 1999. CLLNICAL CHEMISTRY. PRINCIPLES
AND TECHNICS. EDITORIAL HARPER AND ROW.
3. J.M. GONZALEZ DE BUITRAGO, E. ARILLA FERREIRO, M. RODRIGUEZ
SEGADE, SANCHEZ POZO. 1997. BIOQUIMICA CLNICA. ED. MACGRAW
HILL- INTERAMERICANA








23


PRACTICA NO. 2
EXAMEN COPROLOGICO

OBJETIVO:
Describir la composicin normal de las heces y cuando existen algunas anormalidades.

INTRODUCCIN


El examen de heces fecales es lo que usualmente se conoce con el nombre de examen
coproparasitoscpico. Sin embargo en el examen coprolgico general el examen de las heces se
limita en la mayora de los casos a la investigacin de parsitos intestinales, en sus quistes o
huevecillos, sin embargo sus estimaciones fsicas, qumicas y microscpicas aportan datos
etiolgicos muy importantes para el diagnstico clnico de ciertas enfermedades digestivas que
no se obtienen con ningn otro examen.

El anlisis de las muestras fecales con frecuencia entra en la categora de un mal necesario sin
embargo como producto final del metabolismo corporal las heces si proporcionan informacin
diagnstica valiosa.

La composicin de las heces normales es el resultado de la digestin y depende en gran medida
de la cantidad y la calidad del alimento ingrido y de una buena digestin de los alimentos. An
en un funcionamiento totalmente competente del sistema digestivo, no se puede procesar y
absorber completamente una excesiva ingestin de alimentos, por lo que para este examen, el
paciente debe llevar una dieta no excedida y particularmente no debe comer carnes rojas,
durante tres das que preceden al estudio.

RECOLECCIN DE MUESTRAS
Las muestras deben recogerse y manejarse de manera que, en caso de existir parsitos, lleguen
al laboratorio en un estado que permita su identificacin.
Las muestras inadecuadas, mal conservadas y antiguas suelen tener poco valor diagnstico,
incluso pueden llevar a conclusiones errneas.
Las muestras de materia fecal deben recogerse directamente en un frasco de boca ancha y
provistos de tapa para cerrar hermticamente y evitar malos olores y desecacin de la muestra o
bien en un papel completamente limpio y transferir a un recipiente.

FUNDAMENTO
El examen de las heces, que cubre los aspectos macroscpicos y microscpicos, as como el
estudio qumico, tiene especial importancia en algunas disfunciones digestivas y en el
reconocimiento de sangrado de tubo digestivo. Este examen refleja tan slo el estado de la
digestin en un determinado momento.


MATERIAL

Portaobjetos
Cubreobjetos
Pinzas
Tiras reactivas de pH
Tubos de ensaye de 16x150 mm
Microscopio
Sudan III


24




PROCEDIMIENTO

EXAMEN MACROSCOPICO

Cantidad 200-300 g/da
Color Caf en distinta intensidad Adultos
Verde oscuro Recin nacido
Amarillas Bebes alimentados con leche
Arcilla Oclusin de las vas biliares,
Hepatitis Aguda, esteatorrea
Caf muy oscuro Anemia hemoltica
Negras

Sangrado en porciones altas del tubo
digestivo
Olor Fecal Normal
Acido picante Excesiva fermentacin de
carbohidratos
Ptrido Insuficiencia gstrica, excesiva
putrefaccin intestinal
Forma Una evacuacin normal debe ser moldeada a la forma del conducto
anorrectal, de consistencia pastosa a dura, ms bien gruesa
Moldeada Normal
Afilada Estenosis rectal
Redondeadas y fragmentos Espasmos del colon

Gruesas Insuficiencia pancretica
Alquitranadas Sangrados gastrointestinales
Pequeas, purulentas,
sanguinolentas
Colitis ulcerativa
Blanquecinas, purulentas
sanguinolentas
Disentera bacilar
Normal, mucosas y
sanguinolentas
Disentera amebiana (fase inicial)
Diarreicas, mucosas y
sanguinolentas
Disentera amebiana (fases
posteriores)
Lquidas Paratifoidea, enteritis
Consistencia La consistencia de las heces se registra como acuosas o lquidas,
blanda, pastosa y dura.
Duras Espasmos del colon
Pastosas y viscosas Insuficiencia pancretica.
Viscosas Sangrados gastrointestinales
Pastosas a lquidas Dispepsia putrefactiva
Acuosas Presencia de trofozotos de
protozoarios
Duras Quistes




25

MOCO

El moco puede presentarse mezclado o recubriendo las heces, en forma de filamentos, masas
gelatinosas, bolas o cintas, que a veces tienen el aspecto de pseudomembranas. Cuando el
moco es abundante, caracteriza por lo general, la irritacin o inflamacin de la mucosa
intestinal o del siogmoides. Su valor diagnstico es de importancia ya que dependiendo del
nmero de leucocitos presentes en la muestra se proceder a realizar la citologa del moco
fecal. El valor de referencia normal de leucocitos en una muestra de heces analizada en fresco
es de 0-5/campo.

Fundamento

La mucosa del colon secreta moco como respuesta al estimulo parasimptico. La presencia de
moco en la muestra fecal es anormal y se debe reportar de inmediato. reportar de inmediato.

PROCEDIMIENTO

Para proceder a realizar la citologa del moco fecal es necesario tener de 10 o
ms leucocitos por campo. Tiendo con coloracin de Wright como para el frotis sanguneo.

INTERPRETACIN

Aunque en algunos casos como el estreimiento, colitis
mucosa, pacientes con alteraciones emocionales y el esfuerzo excesivo para
defecar provocan un moco transparente y gelatinoso, pero cundo est acompaado de
sangre nos indica una neoplasia o irritacin anal. Pero si adems va acompaado de pus y
sangre se puede tratar de colitis ulcerativa, disentera, cncer ulcerativo de colon, etc.


Valor de referencia: Negativo

pH

El pH de las heces depende de la relacin que existe entre los cidos producidos por el
proceso de fermentacin y el amoniaco producido por el proceso de putrefaccin.

Rango de pH Caracterstica
7.0 - 8.0 Normal
Menor de 6.5 Dispepsia fermentativa
Mayor de 8.0 Dispepsia putrefactiva

La reaccin de las heces se mide humedeciendo un papel indicador.


EXAMEN QUMICO

El Anlisis Qumico asume importancia principal en sospecha de sangrado
de tubo digestivo y en caso de esteatorrea.

SANGRE OCULTA

El examen es de gran utilidad sobre todo en el estudio de las neoplasias del tubo digestivo y de
las anemias por deficiencia hierro. Para detectar sangre oculta en heces el paciente no deber
26

comer carne durante los tres das que preceden al examen, ni tomar medicamentos que
contengan hemoglobina.
Existen varias tcnicas que emplean diferentes sustancias qumicas para
detectar sangre "oculta", todas emplean el mismo fundamento qumico, pero
varan en su sensibilidad. Enumerados por orden decreciente. de sensibilidad
tenemos a la bencidina, ortotoluidina y guayacol. Los cuales utilizan como base la
accin de la pseudoperoxidasa de la hemoglobina que reacciona con el perxido de
hidrgeno para oxidar.

PRUEBA DE BENCIDINA
1.- En un tubo de ensaye de 15 x 125 mm se deposita 5 gr. de heces, aproximadamente y 3 ml
de cido actico al 30%.
2.- se agita con una varilla de vidrio y se hierve sobre una llama pequea durante dos minutos.
3.- Dejar enfriar a temperatura ambiente y aadir 3.0 ml de ter di etlico y extraer los
compuestos de heme invirtiendo varias veces el tubo sin agitar.
4.- Al extracto etreo de heces se aaden unos 3.0 ml de reactivo de bencidina recientemente
preparado, de manera que forme una capa sobre el extracto.

Solucin de bencidina al 1% en cido actico diluido al 50%, solucin que se conserva durante
quince das.

VALORES DE REFERENCIA: La prueba debe ser negativa.
PRUEBA CON TABLETAS REACTIVAS

Estas pruebas usan comprimidos a base de orto toluidina y son ampliamente
usadas, "occultest". Estas tabletas reactivas para la deteccin rpida de sangre
oculta, producen, en contacto con una suspensin de heces fecales en agua
destilada una coloracin azul es presencia de hemoglobina. La intensidad y
magnitud de la coloracin desarrollada es proporcional a la cantidad de
hemoglobina presente en la muestra, y la prueba positiva se califica de 1 + a 4+.
Una prueba negativa no mostrar color alguno o cuando ms una
coloracin azul nicamente en la porcin perifrica de la tableta, sin extenderse
ms.

Valores Normales: NEGATIVO

DETERMINACION DE GRASAS

El aumento de grasa en heces (esteatorrea) sugiere menoscabo de la
absorcin intestinal, por lo que la medicin de grasa fecal ayudar al
diagnstico de mala absorcin teniendo en cuenta adems que, en casos graves las heces son
de ordinario plidas, voluminosas y de mal olor no usual.
La grasa ingerida normalmente es hidrolizada por la lipasa pancretica con
formacin de cidos grasos, glicerol y rnonosteres de glicerol, y los productos de
la hidrolisis son absorbidos por el tracto intestinal. Por ello, el contenido de grasa neutra, cidos
grasos libres y jabones en las heces es relativamente bajo.


Las heces contienen aproximadamente 25% de slidos secos (materia seca) y hasta 25% de
esta materia seca puede ser de grasa.

Se agrega reactivo a una pequea cantidad de heces, se calienta ligeramente la
27

preparacin, esta solucin colorante se emplea para la investigacin de grasas
neutras y cidos grasas.

PROCEDIMIENTO DE SUDAN III
En un tubo de ensayo de 12 x 75 mm mezclar bien una pequea porcin de heces
con unas gotas de sudan III, transferir una gota de esta mezcla a un portaobjetos,
cubrir con un cubreobjetos y examinar al microscopio.

Interpretacin:
Las grasas neutras (gotitas o placas) se observan de color rojo. Los cidos
grasos al calentarse se tornan incoloros o caf obscuro rojizo.

VALOR DE REFERENCIA: Negativo


ALMIDON

El almidn no existe en las heces normales, o solo en pequeas cantidades siguindose una
dieta mixta. La presencia de almidn en cantidades significativas, es patolgico e indica una
insuficiencia pancretica.

El almidn forma grnulos redondos u ovales de diferentes tamaos,
formados por capas concntricas. Pueden encontrarse dispersos en el interior de
las clulas vegetales en forma granular o como masa homognea amorfa, lo
que puede ocasionar una confusin con huevecillos de parsitos. El almidn.
puede presentarse en dos formas como cocido, que se tie de color rojo-caf con lugol, debido a
las eritrodextrinas formadas por la hidrlisis parcial del almidn.
El almidn crudo, que se colorea de azul obscuro con el lugol, por lo general conserva su
aspecto granular y usualmente proviene de las frutas.


VALOR DE REFERENCIA: Negativo

AZUCARES REDUCTORES:
Se realiza en casos de que se sospeche diarrea por intolerancia a la leche,
como es el caso de los lactantes, que generalmente pueden presentar diarrea
cuando les cambian el tipo de leche. En casos de los adultos, es normal que esta
intolerancia se presente con la edad, ya que se pierden las lactasas lo que
provoca generalmente dicha intolerancia cuando ingieren leche o sus derivados.

FUNDAMENTO:

Se basa en la reaccin clsica de Benedict, la reduccin del cobre,
combinando reactivos con calor generando un sistema. Se usa para determinar la
cantidad de sustancias reductoras (generalmente glucosa) en heces, la cual
proporciona informacin sobre el metabolismo de los carbohidratos en el tracto gastrointestinal.


METODOLOGA:
El mtodo empleado para tal fin es el de Benedict, el cual consiste en:

Colocar 1 ml de reactivo de benedict, en un tubo de 13 X 100 mm.
Aadir aproximadamente 1 gr. de muestra fecal, mezclar bien.
28

Poner a punto de ebullicin la mezcla, y observar la coloracin.

INTERPRETACIN:

Si la muestra toma una coloracin azul es negativa.
Si la muestra toma una coloracin verde es positiva.


EXAMEN MICROSCOPICO


El examen coprolgico general incluye el estudio microscpico de las heces
para investigar: Residuos alimenticios microscpicos clulas, como eritrocitos,
leucocitos y clulas epiteliales, microorganismos como bacterias y hongos,
objetos inertes, como cristales de CHARCOT-LEYDEN, huevecillos y larvas de
Helmintos, Quistes de protozoarios y trofozoitos, cuando se recibe y procesa.


PREPARACIONES PARA MICROSCOPIA DE RESIDUOS ALIMENTICIOS CELULAS Y
OTROS ELEMENTOS

Para el examen de rutina, se disponen dos preparaciones hmedas para
observacin directa de la muestra de heces, entre porta y cubre objetos, tomando
una pequea porcin de heces con una varilla de vidrio o mediante una asa de platino y
homogenizndola en una o dos gotas de las soluciones siguientes,
previamente depositadas en los correspondientes portaobjetos:

METODO DE LA PLATINA CALIENTE

Consiste en poner a la llama una moneda de cobre y colocarla en uno de
los extremos del portaobjetos donde tiene su muestra de frotis en fresco,
consiste en que el calor generado por la moneda har mover los trofozoitos lo que
har que estos se distingan ms fcilmente a travs del microscopio.

1).- SOLUCION SALINA FISIOLOGICA (Frotis en fresco):
Corresponde al Examen ordinario para observacin directa de heces en
preparacin hmeda. Permite una apreciacin general de los elementos
microscpicos presentes, en cuanto a su naturaleza y su nmero. Si se observan
objetos parecidos a quistes, se confirma la identidad con examen de la preparacin con yodo y
otros procedimientos.

2).- LUGOL (Frotis directo):
Se emplea principalmente para teir quistes y establecer el nmero de sus
ncleos, que se tien de amarillo; para la investigacin de almidones, para el
reconocimiento de vacuolas que contienen glucgeno (Iodamoeba) y para el
reconocimiento general de los elementos en la preparacin.







29


RESULTADOS DEL ANLISIS COPROLOGICO

HOJA DE REPORTE

NOMBRE DEL PACIENTE:_____________________________________FECHA:________
EDAD:_____________ SEXO:_____________

EXAMEN MACROSCOPICO

CANTIDAD APROXIMADA: __________
COLOR: _________________________
OLOR: __________________________
FORMA: _________________________
CONSITENCIA: ___________________
pH: _____________________________


EXAMEN QUIMICO:

MOCO: __________________________
SANGRE: ________________________
PIGMENTOS BILIARES: ____________
GRASAS: ________________________
ALMIDONES: _____________________


EXAMEN MICROSCOPICO

PROTOZOARIOS:__________________
HELMINTOS:______________________
BACTERIAS:______________________

OTRAS OBSERVACIONES:

ERITROCITOS: ____________________
LEUCOCITOS:_____________________
LEVADURAS:______________________



BIBLIOGRAFIA
1. BEATRIZ BAYARDO. 1990. MANUAL DE APUNTES DE ANLISIS. UNIVERSIDAD DE
GUADALAJARA.
2. CLlNICAL CHEMISTRY. 1999. INTERNATIONAL JOURNAL OF MEDICINE AND
MOLECULAR DIAGNOSTIC.
3. HENRY, CANNON AND WINKELMAN. 1999. CLINICAL CHEMISTRY. PRINCIPLES AND
TECHNICS. EDITORIAL HARPER AND ROW.
4. J.M. GONZALEZ DE BUITRAGO, E. ARILLA FERREIRO, M. RODRIGUEZ
SEGADE, SANCHEZ POZO. 1997. BIOQUIMICA CLNICA. ED. MACGRAW
HILL- INTERAMERICANA


30


PRACTICA NO. 3
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIN:

Los principales monosacridos que resultan de los procesos digestivos son: Aldosas,
Glucosa, Galactosa y Cetosa, Fructosa. Los Carbohidratos son utilizados por las clulas
principalmente en forma de Glucosa, que sirve como combustible para suministrar energa
para otros procesos biolgicos.
El diagnstico de los trastornos metabolismo de los hidratos del carbono se
apoya en parte en la medicin de la glucosa plasmtica, ya sea en ayunas, tras
estimulacin o en pruebas de supresin.
La sangre venosa es la muestra de eleccin para el anlisis de glucosa,
pero en nios y otros pacientes en los que resulte difcil la puncin venosa, puede
utilizarse sangre capilar, ya que se estima que la concentracin de glucosa en
esta ltima es mayor tan solo de 2 a 3 mg/dl que la venosa; aunque tras una
sobrecarga de glucosa los valores capilares pueden ser pueden ser de 20-30
mg/dL ms elevados Las concentraciones de glucosa en sangre arterial y venosa
son similares.
Los mtodos que se utilizan para la identificacin y cuantificacin de
Glucosa de los fluidos del cuerpo, se dividen en dos tipos: qumicos y
enzimticos. La mayora de las determinaciones qumicas de la glucosa se basan
en sus propiedades reductoras, y debido a la ausencia de especificidad no son
utilizadas. Los mtodos enzimticos proporcionan a una mxima especificidad en
cuanto a las estimaciones de glucosa.

DOSIFICACION DE GLUCOSA
METODOS QUIMICOS
Por reduccin.
a).- Usando FERRICIANURO como oxidante.
La Glucosa se calienta frente a un exceso de Ferrocianuro, los iones
amarillos de ste son reducidos en solucin alcalina a iones incoloros de
Ferrocianuro. El cambio de color (de amarillo a incoloro) puede medirse por
titulacin lodomtrica o por medicin Fotomtrica (Mtodo de Hoffman).
b).- Usando COBRE como oxidante.
Los monosacridos se oxidan fcilmente ya que son sustancias reductoras. Las sales
cpricas en solucin alcalina caliente se reducen a xido cuproso rojo.
Se puede medir el xido formado utilizando Fosfomolibdato (Foln-Wu),
Fosfotungstato (Benedict), Arsemolibdato (Somogyi-Nelson) que dan un color
estable para su medicin Fotomtrica.

UTILIZANDO COBRE COMO OXIDANTE. METODO DE FOLlN-WU

DESPROTEINIZACION:

En los mtodos que utilizan cobre es necesario eliminar las protenas como
paso preliminar, la mayora de las protenas muestran una tendencia a
experimentar cierta forma de alteracin, llamada Desnaturalizacin, por
accin de calor, de lcali, de cidos, alcoholes e incluso agitacin. Generalmente en Bioqumica
Clnica se prefieren los mtodos a base de cidos (como el cido Tungstico, Ac. Tricloroactico,
etc).

31

Para el mtodo de Folin-Wu se sigue el siguiente procedimiento:


FUNDAMENTO DE LA DESPROTEINIZACION.
El cido Sulfrico reacciona con el Tungstato de Sodio para formar Acido Tngstico, el
cual precipita las protenas que son separadas por centrifugacin o
filtracin.

REACTIVOS
cido Sulfrico 1/12 N. En un matraz aforado de 1 L agregar 300 ml de
agua destilada + 2.5 ml de cido Sulfrico concentrado lentamente, escurrindolo por las
paredes del matraz. Enfriar y aforar a 1 It. con agua destilada.

Tungstato de Sodio al 10% en Agua Destilada.

PROCEDIMIENTO:
1.- En un matraz Erlenmeyer de 125 ml agregar 8 ml de cido Sulfrico 1/12N.
2.- Aadir 1 ml de sangre y mezclar suavemente.
3.- Agregar 1 ml de solucin de Tungstato de Sodio al 10%, mezclar evitando la formacin de
espuma. Filtrar.
El filtrado debe de ser transparente. Si es turbio o de color caf, deber repetirse
la operacin, ya que indica que la desproteinizacin ha sido incompleta.
Tener en cuenta que la dilucin de la sangre es 1:10.

Solucin B

FUNDAMENTO DEL FOLlN-WU

La Glucosa reduce en solucin alcalina y caliente al in cprico en in cuproso con
formacin de Oxido Cuproso insoluble el cual reacciona con el cido Fosfomolibdico dando
lugar a un complejo azul que es proporcional al contenido
de Glucosa y que puede ser medido espectrofotomtricamente.


REACTIVOS

1. Solucin patrn Stock de glucosa 1ml=10 mg

Dextrosa anhidra 1 g
Acido benzoico al 0.2% c.b.p. 100 ml

2. Solucin patrn de trabajo 1 ml= 0.1 mg
Diluir 1 ml de la solucin patrn stock hasta 100 ml con agua destilada
Solucin SI


3. Solucin cuproalcalina

Carbonato de sodio anhidro 40 g
Acido tartrico 7.5 g
Sulfato cprico 4.5 g

Disolver los 40 g de carbonato de sodio en aproximadamente 400 ml de agua, aadir el cido
32

tartrico y disolver. Aforar a 1 L con agua destilada, guardar en frasco oscuro, es muy estable.


4. Solucin Fosfomolbdica


cido fosomolmbdico 70 g
Tungstato de sodio 10 g
Ac. Fosfrico concentrado 85% 250 ml
Solucin de NaOH 10% 400 ml


A 70 g del cido molibdico y 10 g de tungstato de sodio agregar 400 ml de agua destilada en un
matraz, hervir vigorosamente durante 20-40 minutos, antes de agregar el agua adicional 400 ml
de NaOH al 10%, enfriar, diluir aproximadamente a 700 ml con agua y agregar los 250 ml de
cido fosfrico, aforar a 1 L con agua destilada.

PROCEDIMIENTO


Poner 2 ml del filtrado tnstico libre de protenas en un tubo especial de Folin-Wu (si esperan
datos muy elevados conviene poner 1ml de filtrado y 1ml de agua) y 2ml de solucin reactivo
alcalina de cobre, debiendo llegar la superficie libre de la mezcla a la parte angosta del tubo. Lo
anterior se repite con la solucin patrn de trabajo. Si no se tienen vidrios tipo, en otros tubos se
ponen cantidades debidas de solucin tipo de glucosa para hacer las comparaciones al
colormetro. Se calientan los tubos en bao de Mara por 8 minutos y se agregar 2ml de solucin
de cido fosfomolibdico y se diluyen, en casos normales, hasta la marca de 25 ml en cuyo caso
la lectura es directa, pues si el ensayo no est muy azul slo conviene diluir hasta la marca de
12,5 y multiplicar el resultado por dos.

Tubo folin-wu

Despus de 10 minutos, comprese en el colormetro con el patrn ms prximo.

Clculo del factor




33

Para determinar la cantidad de glucosa:

( )

METODO DE O-Tiluidina

REACTIVOS:
1.- Solucin de O-Toluidina (Merck o Hycel) para Glucosa.
2.- Solucin patrn de trabajo. De la solucin Stock del mtodo de Folin se hace
una dilucin de 1: 1 O con agua destilada para obtener 1 mI = 1 mg que equivale a un patrn
de Glucosa de 100 mgr.
PROCEDIMIENTO:
En dos tubos de ensayo, uno marcado "problema" colocar 0.1 mi de suero o
plasma, en otro tubo marcado "patrn" colocar 0.1 de solucin patrn de trabajo.
Agregar a ambos tubos 5 ml de solucin de O-Toluidina. Colocar los tubos en un bao de
agua hirviente por 10 min, asegurndose que el nivel de agua del bao
sea superior al de los lquidos contenidos en los tubos.
Al cabo de los 10 mino sacar los tubos del bao, enfriar y leer a 630 nm
contra blanco de agua o de reactivo.
El color es estable por una hora.

CALCULOS

A muestra x (Conc del Estndar)
A patrn

CIFRAS NORMALES:

Sangre 70-100 mg
Plasma 65-100 mg
LCR 40-74 mg


METODOS ENZIMATICOS

El uso de enzimas especficas para la Glucosa, como Glucooxidasa y hexoquinasa
purificadas da una alta especificidad a la cuantificacin de dicho
monosacrido. Utilizando estos mtodos directamente en suero o plasma, la
presencia de ciertos inhibidores como altas concentraciones de cido Ascrbico,
Hemlisis, Bilirrubina, Acido rico, Catecolaminas pueden restarle a esta tcnica
algunas de sus ventajas tericas.

Utilizando la Glucoxidasa tenemos la siguiente reaccin:

Glucoxidasa H
2
0
GLUCOSA -----------> GLUCONOLACTONA ---------> AC. GLUCONICO
FAD FADH
2
H
2
0
2


PROCEDIMIENTO

1.- Marcar3 tubos (blanco, estndar y muestra) posteriormente pipetear los reactivos como
se indican en la siguiente tabla:
1.- Marcar3 tubos (blanco, estndar y muestra) posteriormente pipetear los
34

reactivos como se indican en la siguiente tabla:

REACTIVOS BLANCO ESTNDAR MUESTRA
MUESTRA -------- --------- 20uL
PATRON -------- 20 L --------
BLANCO 2.50mL 2.50 mL 2.50mL



Mezcle incube a 37C durante 15 mino o deje a temperatura ambiente durante por lo
menos 30 min ..
Leer la absorbancia de la muestra y del patrn a 505 nm (500 -550) y el blanco a 500 nm.

CALCULOS:
A muestra x (Conc. Del Estndar)
A patrn


REPORTE DEL RESULTADO:

No. De Clave: ___________
No. De Identificacin de su muestra: ________________
NOMBRE DEL PACIENTE: _____________________________________________
Resultado de su muestra: ________________________________________

COMPARATIVAMENTE EXPONGA SUS RESULTADOS DE ACUERDOS A LAS
TECNICAS EMPLEADAS. (EXPLIQUE).

BIBLIOGRAFIA
1. AIQUEL. 1995. MANUAL DE ANLISIS CLNICOS. ED. PANAMERICANA.
2. BEATRIZ BAYARDO. 1990. MANUAL DE APUNTES DE ANLISIS. UNIVERSIDAD DE
GUADALAJARA.
3.L YNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE LABORATORIO.
EDITORIAL INTERAMERICANA.










35

PRACTICA No. 4

PRUEBAS CONFIRMATORIAS DE DIABETES MELLlTUS
CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA ORAL

FUNDAMENTO:
Consiste en la ingestin de una dosis fija de glucosa (250 g/dl) y valorar la glucosa a
los 30, 60 y 120 minutos para valorar el grado de tolerancia e intolerancia de la
glucosa del paciente.

PROCEDIMIENTO

1.- Obtener una muestra de sangre en ayunas (Basal). Trabajar la muestra segn la
tcnica a emplear.
2.- Administrar la solucin de glucosa, hacindola beber completamente, (ej. 100 gr
de glucosa disuelta en agua con unas gotas de
limn), marcar el tiempo.
3.- Obtener otra muestra de sangre cada 30 min durante dos horas (pueden omitirse
estas muestras y tomarse una despus de dos horas).

VALORES NORMALES:
En una respuesta normal, el nivel de glucosa en ayunas (basal) est dentro
de los lmites normales; la concentracin mxima se alcanza hasta los 30 a 60
mino Y no excede de 170 mg/dl y el nivel de glucosa a las dos horas desciende por
debajo de 120 mg/dl. Se recupera nuevamente el nivel de Glucosa en ayunas
despus de tres horas.

REPORTE DE SUS RESULTADOS:
GLUCOSA EN AYUNAS: ________________________
GLUCOSA A LOS 30 MIN: _______________________
GLUCOSA A LOS 60 MIN: _______________________
GLUCOSA A LOS 120 MIN: ______________________

Cuestionario:

1.- Cual es la dieta previa que se le debe de dar al paciente:
2.- Que otras pruebas para el control del paciente diabtico existen:
3.- Indique en base a sus resultados si su paciente est o no diabtico:


Observaciones y Conclusiones:


BIBLBIOGRAFIA
1. BEATRIZ BAYARDO. 1990. MANUAL DE APUNTES DE ANALlSIS. UNIVERSIDAD DE
GUADALAJARA
2. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE
LABORATORIO. EDITORIAL INTERAMERICANA.







36


PRACTICA NO. 5
METABOLISMO DE LOS LPIDOS

INTRODUCCION:
Todos los lpidos son transportados en la sangre como lipoprotenas, sus
clases son:

Lipoprotenas de alta densidad ()
Lipoprotenas de baja densidad ()
Lipoprotenas de muy baja densidad
Quilomicrones (ricos en triglicridos) transitoriamente elevados despus de la
ingestin de grasas.

Con respecto al riesgo, las dos clases ms importantes son las lipoprotenas de baja
densidad y las de muy baja densidad. Las lipoprotenas de alta densidad son ricas en
Colesterol y llevan algunos triglicridos y slo tienen algo de col esterol,

La determinacin de triglicridos debe hacerse siempre en conjunto
con la determinacin de colesterol en suero. Ya que por medio de la
medicin de ambos, es posible hacer una estimacin de la naturaleza de
algunos desordenes lipdicos.
El colesterol se sintetiza sobre todo en el hgado, pero tambin en la
piel, intestino, glndulas suprarrenales, el ovario, el testculo, el rin y el
pulmn. Todas las sustancias que en el organismo producen cido actico
.pueden ser precursoras de colesterol (cidos grasos, glucosa, algunos
aminocidos, etc.) El colesterol es esencial para el funcionamiento normal
deI organismo, ya que es:

1. Componente estructural esencial de membranas de todas las clulas y partculas
subcelulares.
2. Precursor de cidos biliares
3. Precursor de hormonas esteroides.
Clnicamente es importante ya que existe una relacin entre la
concentracin del colesterol plasmtico y la presencia de problemas
coronarios.
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) han demostrado tener una
correlacin inversa con enfermedades isqumicas del corazn y su
determinacin ayuda al pronstico de riesgos cardacos. Hay dos mtodos bsicos
disponibles para medir HDL, el primero es la ultra centrifugacin y el segundo la precipitacin.
De tal manera que teniendo los datos o valores de cada una de las lipoprotenas se puede
calcular el factor de riesgo como se muestra a continuacin.


37


OBJETIVOS:
Explicar la metodologa ms usual para el anlisis del Lpidos.
Determinar correctamente los niveles de los distintos lpidos y lipoprotenas
plasmticas e interpretar sus rangos de referencia.
Ser capaz de interpretar el perfil de Lpidos y relacionarlo con alguna
anormalidad en dicho metabolismo
COLESTEROL TOTAL
Existe una gran variedad de mtodos para la determinacin de Colesterol sanguneo, como
enzimticos, gravimtricos, cromatogrficos, fluoromtricos, turbidimtricos, etc., siendo los
ms usados los colorimtricos.
El Colesterol como otros esteroides dan colores intensos cuando son
tratados con reactivos cidos. El color producido depende del cido empleado y
de su concentracin, adems de otras variantes. Se pueden clasificar los mtodos
colorimtricos segn la reaccin empleada; y tambin en mtodos directos e
indirectos.
DOSIFICACION DE COLESTEROL TOTAL:
Para su determinacin describiremos dos mtodos:
METODO DE LlEBERMAN -BOURCHARD
Mtodo en medio actico-sulfrico; es una modificacin al mtodo original de
LlEBERMAN-BOURCHARD.
FUNDAMENTO:

El colesterol libre y esterificado forma con el anhdrido actico y el cido sulfrico una
combinacin verde cuya intensidad de color es proporcional a la cantidad de colesterol.

MATERIAL

cido actico glacial
Anhdrido Actico
Colesterol Q.P.
Ac. Sulfrico Concentrado.
Patrn de Colesterol 200mg/dl

A.- REACTIVO DE COLOR.
En un matraz Erlenmeyer, agregar 47.5 mI de cido acti co y 48.7 ml de
anhdrido actico. Mezclar, enfriar en hielo o en refrigerador. Sobre la mezcla fra, agregar
8.6 ml de cido sulfrico concentrado (en dos pasos si es necesario) evitando que se
caliente la mezcla por arriba de 40C. Enfriar en el refrigerador. Guardar en frasco
obscuro en refrigerador.
B.- SOLUCION PATRON DE COLESTEROL.
Se pesan 200 gr de colesterol Q.P. seco y disolverlos con ayuda de calor
en 100 ml de cido actico 1 ml = 200mg.


38


PROCEDIMIENTO

1. Tomar 2 tubos de 16X150 mm; en uno agrerar 0.1 ml de suero problema y en el otro
0.1 ml de solucin patrn.
2. Aadir a los 2 tubos 5 ml de reactivo de color para colesterol. Mezclar
3. Ponerlos en la estufa en bao mara a 37C por 20 minutos exactamente.
4. Leer contra blanco de agua a 610 nm


CALCULO

D.O. problema x concentracin del patrn
D.O. Patrn


VALORES NORMALES
1 mes a 20 aos 100-140 mg
20 aos-29 aos 144-275 mg
30 aos-39 aos 165-295 mg
40 aos-49 aos 170-315 mg
50 en adelante 177-340 mg


MTODO ENZIMATICO

FUNDAMENTO:
El colesterol y sus esteres se liberan de las lipoprotenas por los
detergentes. La colesterol-esterasa hidrolisa los steres. En la oxidacin
enzimtica por el colesterol oxidasa, que tiene lugar a continuacin se produce
H
2
0
2
por reaccin de la 4 amino-antipirina y fenol, en un colorante quinonimina.

MUESTRA CLNICA:
Suero o plasma (heparina o EDTA).

TECNICA:
1.- Marcar 3 tubos (blanco, estndar y muestra) posteriormente pipetear los reactivos como
se indican en la siguiente tabla:

REACTIVOS BLANCO ESTNDAR MUESTRA
MUESTRA -------- -------- 10 L
PATRON ------

10 L -------
Sol. Reactiva 1 mL 1 mL 1 mL

Mezcle incube a 37 C durante 5 min o deje a temperatura ambiente durante por lo menos
20 min. Leer la absorbancia a 505 (500 -530) nm de la muestra y el patrn frente al
blanco.

LlNEARIDAD DEL METODO

Hasta 700 mg/dL


39


CALCULOS:
A muestra X (Conc. Del Estandar)
A patron

Conversion de unidades:
Colesterol (g/l)= Colesterol (mg/dl) x 0.01
Colesterol en (mmol/I)= (g/dl)x 2.59
Colesterol (g/l)= colesterol en (mmoI/L)X 0.39
REPORTE DE LA PRCTICA DE: ____________________
Informe y evaluacin del trabajo metodolgico de:
NOMBRE DEL ALUMNO:
Resultado de su muestra problema: ______________
No. De identificacin de su muestra: _____________
Mtodo utilizado: ___________________________

Interpretacin diagnstica por el laboratorio:
OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:

































40

PRACTICA NO. 6
DETERMINACION DE TRIGLICRIDOS.

FUNDAMENTO:
De los triglicridos de suero o plasma se libera glicerol y cidos grasos a partir de una
hidrlisis alcalina. La turbidez causada por los cidos grasos libres se remueve por precipitacin
con sales de magnesio.

El glicerol se transforma segn el siguiente esquema de reaccin

TRIGLlCERIDOS ----KOH-------->GLlCEROL + ACIDOS GRASOS LIBRES
GLICEROL + ATP ---GC----------7 GLICEROL - 1-P + ADP
ADP + FOSFOENOLPIRUVATO --PC------7 ATP + PIRUVATO
PIRUVATO + NADH2 ---LDH----------7 LACTATO + NAO

La disminucin de concentracin de NADH2 es proporcional a la
concentracin de glicerol total.
Abreviaturas; GC= glicerolcinasa, PC= piruvato cinasa; LDH= Lactato deshidrogenasa.

MUESTRA CLNICA: Suero o plasma.
Suero control comercial.

REACTIVOS:
Estuche comercial para determinacin de triglicridos (Mtodo enzimtico).

Sol. estndar de trinoleina 100 mg/dL
Sol. amortiguadora pH=7.6
Trienolamina 104.0 mmoLlL
MgS0
4
4.2 mmoLlL
Sol. de NADH
2
PEP/ATP
NADH
2
5.3 mmol/L
PEP 11.4 mmol/L
ATP 34.3 mmol/L
Suspencin de PC/LDH
Piruvatocinasa 375.0 KU/L
Lactato deshidrogenasa 450.0 KU/L
Suspencin de glicerocinasa
Glicerocinasa 85.0 KU/L
Sol. de Sulfato de Magnesia
MgS04 150.0 mmol/L
Sol. etanlica dehidrxido de potasio
KOH
Etanol cbp 500 mmoLlL
Sol. reactiva
Sol. Amortiguadora
Sol. de NADH2/PEP/ATP
Suspensin PC/LDH

MATERIAL DE LABORATORIO

Tubos vacutainer
Tubos de 13 x 100
Micropipeta de 1000 uL
41

Micropipeta de 100 uL
Puntas amarillas y azules
Por grupo:
Bao de agua
Espectrofotmetro
Celdas

DESARROLLO DE LA PRCTICA:

PROBLEMA ESTANDAR BLANCO
Sol. reactiva 1 mL 1 mL 1 mL
Problema 10 L ----- -----
Estndar ----- 10 L -----

Mezclar y dejar en reposo a temperatura ambiente 20 rrun o 5 min a 37 grados centgrados.
Ajustar a 0.00 de Absorbancia con el blanco de reactivos a 505 nm.
VALOR DE REFERENCIA
Menos de 150 mg/dL
Clculos:
Absorbancia Problema (concentracin del estndar)
Absorbancia estndar

REPORTE DE LA PRCTICA DE: ____________________ _
Informe y evaluacin del trabajo metodolgico de:
NOMBRE DEL ALUMNO:
Resultado de su muestra problema: ______________
No. De identificacin de su muestra: _____________
Mtodo utilizado: ___________________________

Interpretacin diagnstica por el laboratorio:

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:






42


PRACTICA 7
HDL (Lipoprotenas de alta densidad)

FUNDAMENTO:
Las lipoprotenas de alta densidad (HDL), se separan de los quilomicrones, y de las
lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL) as como de las de baja densidad (LDL) por la
adicin de un reactivo de precipitacin (con cido fosfotngstico e iones magnesio) al suero
o al plasma. Despus de centrifugar, se determina el contenido de colesterol en la fraccin
HDL que permanece en el sobrenadante, por el mtodo colorimtrico enzimtico de
colesterol.
OBJETIVO:
Separacin de la fraccin HDL de las fracciones LDL y VLDL por precipitacin con cido
fosfotnsgtico e iones de magnesio y consecuente determinacin.
Establecer la significancia clnica de la determinacin de HDL y su correlacin con
las dems determinaciones del perfil de lpidos.
MUESTRA CLNICA:
Suero obtenido de 12 horas de ayuno. El suero puede conservarse a temperatura ambiente
hasta 5 das. La refrigeracin puede alterar la estructura de las
lipoprotenas dando resultados bajos. Usar suero control comercial.
REACTIVOS:
Solucin precipitante (Reactivo comercial):
0.5 Molar de MgCI
2

Fosfotungstato al 4%
Reactivo para la determinacin de colesterol enzimtico (reactivo comercial)
Solucin estndar de colesterol de 200 mg/dL
Nota: las soluciones se deben atemperar ante de su uso
MATERIAL POR EQUIPO:
Tubo de ensaye de 13x1 00 mmm
Tubos de centrifuga
Micropipeta 1 000 L
Micropipeta 200 L
Gradilla
Centrifuga
POR GRUPO
Bao Mara a 25 C
Espectrofotmetro
Celdas
43

PROCEDIMIENTO
Pipetear en tubos de centrifuga

Suero 250 L
Solucin precipitante 25 L
A Mezclar y dejar en reposo a la temperatura ambiente durante 10 min. Centrifugar el
sobrenadante a 4000 rpm.
Separar el sobrenadante claro y emplearlo para la determinacin de colesterol con el mtodo
CHOD-PAD


Mezclar e incubar los tubos a 37 C durante 15 min o a 37 C por 12 min. Leer a 505 nm
Clculos: Los mismos que para el Colesterol Total.

LlNEARIDAD DEL METODO:
La reaccin es lineal u sigue la ley de Lambert-Beer hasta 1000 mg/dL
VALORES DE REFERENCIA:
Hombres(mg/dL) Mujeres(mq/dL)
Pronstico favorable > 55 > 65
Riesgo Normal 35 - 55 45 - 65
Alto riesgo < 35 < 45
REPORTE DE LA PRCTICA DE: ____________________ _

Informe y evaluacin del trabajo metodolgico de:
NOMBRE DEL ALUMNO:
Resultado de su muestra problema: ______________
No. De identificacin de su muestra: _____________
Mtodo utilizado: ___________________________

Interpretacin diagnstica por el laboratorio:

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES:
DETERMINACION DEL FACTOR DE RIESGO DE INFARTO AL MIOCARDIO

VLDL + LDL
F .R. = ---------------------------
HDL









Probl. St Blanco
Sobrenadante 100uL 20 ul
Sol. Reactiva 2.0 2.0 2.0
44


BIBLIOGRAFA:

1. AIQUEL. 1995. MANUAL DE ANLISIS CLNICOS. ED. PANAMERICANA.
2. BEATRIZ BAYARDO. 1990. MANUAL DE APUNTES DE ANLISIS. UNIVERSIDAD
DE GUADALAJARA.
3. J.M. GONZALEZ DE BUITRAGO, E. ARILLA FERREIRO, M. RODRIGUEZ
SEGADE, SANCHEZ POZO. 1997. BIOQUIMICA CLNICA. ED. MACGRAW HILL-
INTERAMERICANA
4. JOAN F. ZILVA, P.R. PANNALL. 1998. BIOQUIMICA CLNICA EN EL
DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO. ED. SALVAT
5. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE
LABORATORIO. EDITORIAL INTERAMERICANA.






























45


PRACTICA NO. 8
METABOLISMO DE PROTENAS Y FUNCIN RENAL

PROTENAS Y COMPUESTOS NITROGENADOS NO PROTEICOS

INTRODUCCIN

Las protenas son compuestos organicos, macromoleculares, ampliamente
distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos,
factores de coagulacin, etc.
La protena ms abundante en el plasma es la albmina, una de las funciones ms importantes
es la de permitir el transporte de cidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas,
que en forma libre son insoluble en medio acuoso.

La concentracin de albmina en el plasma influye notablemente en el
mantenimiento de la presin coloidosmtica, lo que est relacionado con su
relativamente bajo peso molecular y su gran carga neta.

En condiciones patolgicas como prdidas renales, desnutricin, infecciones
prolongadas, etc. Suelen presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras
como el mieloma mltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de
diversos orgenes, se observan hiperprotenemias.

En general ambas situaciones, se ven acompaadas por hipoalbuminemias. Los
aumentos anormales de albmina son ocasionales y se relacionan casi siempre
con deshidratacin que produce el consecuente aumento en el contenido proteico
del plasma.

OBJETIVOS
Explicar los fundamentos de los principales mtodos para el anlisis de protenas.
Determinar correctamente las protenas totales y sus fracciones e interpretar
adecuadamente los resultados.
Describir el proceso metablico de los compuestos nitrogenados no proteicos: urea,
creatinina y cido rico.
Definir el concepto de depuracin de creatinina como prueba para valorar la filtracin
glomerular.
Correlacionar los valores de urea, creatinina y cido rico como pruebas para valorar la
funcin renal.
Explicar las distintas pruebas para la valoracin de la funcin renal y tubular.
Determinar correctamente los niveles de urea, creatinina y cido rico e interpretar los
rangos de referencia.

46

REACTIVOS:
REACTIVO EDTA/Cu: Complejo EDTA/Cu 13 mmol/L en NaOH 875 mmollL y alquil Aril politer
(AAP).
REACTIVO BCF: Solucin de Bromo Cresolsulfon Ftalena (en polioxietiln lauril
ter).
Suero Patrn: Solucin Albmina y globulina en estado nativo con ttulo conocido
de protenas (Biuret o Kjeldhal ) y albumina (unin BCF).
MUESTRA A ANALIZAR:
Suero
Se recomienda que el suero se procese el mismo da de su recoleccin, pero
puede ser almacenado 3 das en refrigeracin o 7 en congelacin.
MATERIAL DE LABORATORIO:
Espectrofotmetro o fotocolormetro.
Micro pipetas y puntas.
Cubetas
Bao de agua a 37 grados (Para Protenas totales).
Reloj o cronometro.
DETERMINACIN DE PROTEINAS TOTALES:
Fundamento del mtodo:
Los enlaces peptdicos de las protenas reaccionan con el in cprico, en medio
alcalino, para dar un complejo color violeta con mximo de absorcin a 540 nm,
cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas totales en la
muestra.
PROCEDIMIENTO:
En tres tubos marcar: Blanco (B), Estndar (S) y D (Desconocido).

B S D
Agua destilada 50 l
Suero patrn 50 l
Muestra 50 l
Reactivo EDTA/Cu 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml
Mezclar con varilla, incubar, 15 min a 37 C, y leer a 540 nm o con filtro verde (520-560
nm) llevando a cero con blanco de reactivo. . -
Nota: el color de la reaccin es estable durante 12 hrs por lo que la absorbancia debe de
ser leda dentro de este lapso.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
PROTENAS TOTALES (g/dL): D.O. Muestra x Concentracin del estndar
D.O. Estndar



47

DETERMINACIN DE ALBMINA

La albumina reacciona especficamente sin separacin previa con la forma
aninica de la Bromo Cresolsulfon Ftalena (BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a pH 3.8 El aumento de absorbancia a 625 nm
respecto al blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albmina presente
en la muestra.

PROCEDIMIENTO:
En tres tubos marcar: Blanco (B), Estndar (S) y O (Desconocido) y colocar:

B S O
Suero patrn(S) 10 l
Muestra 10 l
Reactivo BCF 3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml

Mezclar con varilla, mantener los tubos entre 15 y 28 grados C. Durante 10 min
y leer a 925 nm o con filtro verde (620-650 nm) llevando a cero con 'blanco-de
reactivo.

Nota: el color de la reaccin es estable durante 20 min por lo que la absorbancia debe de
ser lida dentro de este lapso.

CALCULOS DE LOS RESULTADOS:
ALBMINA (g/l): D. O Muestra x Conc. S
D.O. Estndar
NOTA: checar el valor del suero patrn para protenas totales y albumina en el marbete del
frasco, ya que son diferentes para cada caso.

VALORES DE REFERENCIA
PROTENAS TOTALES: 6.1 7.9 g/dl
ALBMINA: 3.5-4.8 g/dl
RELACIN A/G: 1.2 2.2

INFORME Y EVALUACIN DEL TRABAJO METODOLGICO:
NOMBRE DEL ALUMNO: _________________________________________
No. De identificacin de su muestra:
Resultado de:

PROTEINAS TOTALES
A.LBMINA
RELACION A/G
Mtodo utilizado:
Interpretacin diagnstica por el laboratorio:





48


DETERMINACIN DE UREA

INTRODUCCION:
La urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en
la mayora de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto del
metabolismo proteico se produce en el hgado y es excretado por la orina a travs
de los riones.
Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta
generalmente como una disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse el hecho
de que los 'valores sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la
dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin de estas variables
se traducir en un cambio en la concentracin de urea en suero.
FUNDAMENTO: La ureasa descompone especficamente a la urea produciendo
dixido de carbono y amonaco; ste reacciona con fenol y con hipoclorito en
medio alcalino produciendo azul de indofenol que se determina
colorimtricamente.
Reactivos provistos por la marca Weiner Lab:
REACTIVOS 1: Reactivo desecado, conteniendo fenol, nitroferrocianuro de sodio
y etiln- bis-ditiocarbamato manganoso. Disolver el contenido del frasco con agua
destilada y fechar.
REACTIVO 2: Reactivo concentrado de hipoclorito de sodio y p-tolun
sulfoncloramida en hidrxido de sodio. Diluir el contenido del frasco de acuerdo
con las indicaciones del rotulo y mezclar por inversin. Colocar fecha de
preparacin.
Estndar: Solucin de urea: 0.60 g/l Listo para usar.
Nota: Los reactivos son estables hasta la fecha de vencimiento.

MUESTRA: Suero, plasma u Orina.

MATERIAL DE LABORATORIO:
Espectrofotmetro o fotocolormetro.
Micro pipetas y puntas.
Cubetas
Bao de agua a 37 grados (Para Protenas totales).
Reloj o cronometro.

PROCEDIMIENTO:

En tres tubos marcar: Blanco (B), Estndar (S) y O (Desconocido) y colocar

49

B S D
Agua 20 L
Estndar 20 L
Muestra 20 L
Ureasa 1 gota 1 gota 1 gota

Mezclar suave por agitacin e incubar 5 min a 37C, luego agregar:

Reactivo 1 1 ml 1 ml 1 ml
Reactivo 2 1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar suave por agitacin e incubar 5 min a 37C, luego agregar:

Agua 10 ml 10 ml 10 ml

Mezclar por inmersin y retirar del bao. Despus de 10 min leer en el espectrofotmetro a
540 nm, llevando a cero con blanco de agua.

Urea (g/l): D.O. Muestra X Concentracin S
D.O. estndar



NITROGENO UREICO (BUN) (g/l): Valor de la urea X 2.14

Valores de referencia:
UREA: 20-45 g/dl





INFORME Y EVALUACIN DEL TRABAJO METODOLGICO


NOMBRE DEL ALUMNO: ___________________________
RESULTADOS: ___________________________________

METODO UTILIZADO:


Interpretacin diagnstica por el laboratorio


DETERMINACION DE CREATININA
CREATININA
Introduccin


La creatina y la creatinina son dos compuestos de nitrgeno que se asocian
con el metabolismo proteico del cuerpo. La creatina se encuentra distribuida
extensamente en todos los tejidos pero abunda principalmente en el tejido
muscular donde esta combinada con el H PO formando la fosfocreatina que
50

ejerce un papel importante en la contraccin muscular como reserva de energa;
uno de los productos finales del metabolismo muscular es la creatinina, anhdrido
de la creatina se excreta con la masa muscular.

Fundamento.

En medio alcalino la creatinina y otros cromgenos presentes en el plasma,
reaccionan, con el in picrato dando un complejo de color amarillo-rojizo
(Reaccin de Jaffe). En estas condiciones, la formacin del complejo colorido
creatinina picrato es mxima, cuantificndose foto colorimtricamente. Bajando el
pH con cido actico, se desintegra el complejo picrato creatinina. Mientras que la
coloracin formada por los cromgenos del plasma permanece intacta y se mide
tambin foto colorimtricamente. La diferencia entre ambas lecturas nos dar el
valor de la creatinina.
La reaccin no es especfica ya que abarca todos los cromgenos de la
sangre, pero como la mayora de estos se encuentran en los eritrocitos, se evita
su interferencia usando suero o plasma (no hemolizado).

Muestra:
Suero, plasma, orina

REACTIVOS

No. 1.- Patrn: (3 mg/dl), Estable por 2 aos a Temperatura ambiente. Se recomienda
mantenerlo en refrigeracin para evitar que se concentre por refrigeracin.
No. 2.- Acido Pcrico: Estable por 2 aos a Temperatura ambiente.
No. 3.- Reactivo Alcalino: Estable indefinidamente a temperatura ambiente.
Nota: en climas fros puede presentarse turbiedad, sin que se afecte su funcionamiento.
Cuando esto ocurra, incubar el reactivo a 37C hasta su disolucin completa.
No. 4.- cido Actico.- Estable indefinidamente a temperatura ambiente.
Mantener el re activo bien cerrado.



PROCEDIMIENTO


1.- En tres tubos marcar: Blanco (B), Estndar (S) y (D) Desconocido) y colocar
2.- Enseguida pipetear

Blanco Muestra Estndar
Reactivo A1calino (#3 ) 2.0ml 2.0 ml 2.0 ml
H
2
0 Destilada 250 l
Plasma o suero 250 l
Standard (#1) 250 l
Ac. Pcrico (#2 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml


3.- Agitar y dejar en reposo durante 20 minutos o incubar por 10 minutos a
37C.
4.- Leer los tubos a 495 nm ajustando a cero con el blanco
5.- A continuacin pipetear

51


Blanco Muestra Estndar
cido actico (no. 4) 100 L 100 L 100 L


6.- Despus de 3 minutos, leer nuevamente a 495 nm los tubos de la muestra
igualando a cero con el blanco. La absorbancia del tubo que contiene la muestra
ser M
2.


Creatinina (mg/100 mi): M1 - M2
Absorbancia del estandard



VALORES DE REFERENCIA:

Suero o plasma: 0.4 - 1.4 mg/dl
Orina hombres: 21.0 - 26.0 mg/kg de peso/da
Orina mujeres: 16.0 - 22.0 mg/kg de peso/ da
Depuracin de creatinina: de 95 a 131 ml/Da I mino Corregido el valor para la
superficie corporal.


INFORME Y EVALUACIN DEL TRABAJO METODOLOGICO

NOMBRE:
RESULTADO DE CREATININA
METODO UTILIZADO
INTERPRETACIN DIAGNOSTICA POR EL LABORATORIO


ACIDO URICO


INTRODUCCION:
El Acido Urico proviene del metabolismo de las bases purcas (guanina) y
se elimina por la orina. Parte del cido rico circulante es endgeno (por
destruccin normal de los tejidos del organismo) y parte exgeno (por el
metabolismo de los alimentos).
La mayor parte de los mtodos para dosificarlo se basa en su oxidacin y
otros por su degradacin con Uricasa.

METODO DE CARAWAY MODIFICADO.

Fundamento:


En medio alcalino, el cido rico reduce al reactivo fosfotngstico ( reactivo de
color) a azul de tungsteno, el cual es determinado fotomtricamente a 700 nm.
MUESTRA:
Suero, orina, lquido amnitico o lquido sinovial.
El cido rico es estable durante 3 das a la temperatura a 4 C y 6 meses
cuando el suero se congela. No usar plasma porque se pueden obtener resultados
falsamente disminuidos




52

REACTIVOS:

1. Reactivo Desproteinizante: Acido Tngstico estabilizado. Estable a temperatura
ambiente.
2. Carbonato de Sodio. Estable a temperatura ambiente
3. Reactivo de Color cido rico: Estable 3 aos y a la temperatura ambiente e
indefinidamente en refrigeracin.
4. Solucin patrn 100mg/100ml: Estable a temperatura Ambiente e indefinidamente
en refrigeracin

PROCEDIMIENTO:

1. Para desproteinizar la muestra en tubo de centrfuga colocar:

Agua Destilada 8.0ml
Reactivo desproteinizante 1.0 mi
muestra 1.0 mi

2.- Agitar fuertemente y centrifugar durante 5 minutos a 2500-3000 r.p.m.
3.- Identificar y marcar 3 tubos de ensayo y proceder como sigue:

BLANCO PATRON PROBLEMA
Sobrenadante 5.0 mi
Agua destilada 5ml 5 ML
Solucin patrn .05 mi
Carnato de sodio (No. 2) 1 mi 1 mi 1 mi
4.- Mezclar. Reposar por 10 minutos. Luego agregar:
5.- Agitar bien y reposar por 20 minutos. Leer contra blanco de reactivo a 700 n.m.
Ajustando a cero con el blanco. El color es estable durante 30 minutos.
Calculas:
cido rico (mg/dl) : Absorbancia de la M x 10
Absorbancia del Patrn

CIFRAS NORMALES
Suero: Hombres: 2.5 - 7.0 mg/dl
Mujeres : 1.5 - 6.0 mg/dl
Orina: 250 - 750 mg/24 hrs.

INFORME Y EVALUACIN DEL TRABAJO METODOLOGICO

NOMBRE:
RESULTADO DE ACIDO URICO
METODO UTILIZADO
INTERPRETACIN DIAGNOSTICA POR EL LABORATORIO



53


BIBLIOGRAFIA
1. J.M. GONZALEZ DE BUITRAGO, E. ARILLA FERREIRO, M. RODRIGUEZ
SEGADE, SANCHEZ POZO. 1997. BIOQUIMICA CLlNICA ED. MACGRAW HILL-
INTERAMERICANA
2. JOAN F. ZILVA, P.R PANNALL. 1998. BIOQUIMICA ClNICA EN EL
DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO. ED. SALVAT
3. L YNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE
LABORATORIO. EDITORIAL INTERAMERICANA













54


PRACTICA NO. 9
PRUEBAS DE FUNCIONAMIENTO RENAL


INTRODUCCION:
La orina es un lquido excretado por el rin y su examen es de gran
utilidad en el diagnstico de varios padecimientos, en los que se modifican sus
caracteres fsicos y/o qumicos o aumentan los elementos celulares que
normalmente se encuentran en pequea cantidad. Su estudio es de utilidad no
slo en trastornos urinarios sino tambin en muchos trastornos generales o
localizados en porciones distales del organismo.
El estudio de los componentes qumicos normales se debe efectuar en orina de
24 hrs. debido a las variaciones de concentracin de sus componentes y la
aparicin de ciertos compuestos durante el da, entre los principales tenemos:

1.- UREA: Se elimina de 15 a 35 gr/24 hrs. Aumenta en casos de degradacin
protenica, cncer, fiebre, diabetes, etc. Disminuye en casos de inanicin,
trastornos hepticos, etc.
2.- AMONIACO: Se elimina unido a cidos principalmente fosfatos y sulfatos.
Su determinacin solo tiene valor en orinas frescas cuando no se ha iniciado la accin
bacteriana. Aumentan en la ACIDOSIS.
3.- ACIDO URICO: Se elimina de 0.4 a 1.2 gr/24 hrs. Aumenta en incremento
de destruccin nucleoproteca como neoplasias, tuberculosis, leucemias, ictericias
hemolticas, etc.
4.- CREATININA: Se elimina de 1 a 1.5 gr/24 hrs. Aumenta en actividad muscular
anormal como epilepsia.
5.- CLORUROS, FOSFATOS, CALCIO, ETC.

EXAMEN GENERAL DE ORINA
INTRODUCCION.
El urianlisis implica el examen de los caracteres fsicos y componentes
qumicos de la muestra, as como el estudio microscpico del sedimento urinario.
El anlisis de orina se ha convertido en un procedimiento sensible y rpido.
Actualmente es posible analizar nueve a 10 pruebas diferentes en menos de 60
segundos con la introduccin de tiras reactivas simples y mltiples, cintas de
prueba y tabletas. La tira re activa es esencialmente una banda angosta de
plstico con pequeos tacos adheridos, contienen reactivos para una reaccin
diferente, que permite la determinacin simultnea de varias pruebas.
Un requerimiento esencial es que las reacciones de las tiras reactivas sean
ledas en el momento prescrito despus de haber sido sumergidas en la muestra y
compararlas cuidadosamente con la carta de colores respectiva que trae el
inserto. Con el objeto de obtener resultados confiables con las tiras deben de tomarse
en cuenta lo siguiente para mantener su reactividad; no deben de estar
expuestas a medios hmedos, ni a la luz directa del sol, ni al calor, ni a las
sustancias voltiles y deben ser almacenadas en su envase original a temperatura
menor de 30 "C. Sacar slo la cantidad de tiras necesarias para su uso, y luego
55

cerrar hermticamente el envase. En caso de que los bloques de color negativo
de las tiras no concuerden estas debern ser deshechadas. Si la muestra de orina
fue refrigerada, debe dejarse que alcance la temperatura ambiente antes de
efectuar el examen.



INDICACIONES DE TOMA DE LA MUESTRA:

De ser posible, utilice guantes de latex; de no ser as, lave
perfectamente sus manos con jabn y abundante agua. Cualquier residuo de
jabn puede causar errores en el anlisis.
1.- Enbel caso de ser mujer realizar un aseo del rea pbica con jabn y
abundante agua.
En el caso de ser Varn y no tener la circuncici6n, se retrae la cabeza
que cubre la cabeza del glande (pene) con un movimiento hacia atras para
exponer el meato uretral.
Debe de realizarse para ambos casos una limpieza posterior con una
gasa de preferencia estril.
Este procedimiento debe de repetirse con una segunda gasa.
2.- Iniciar la miccin sin recolectar la primera fraccin, la cual se desecha
en el excusado en el recipiente que se le proporcion en el laboratorio, recolecte
la fraccin del chorro medio. Termine de orinar desechando la fraccin final.
3.- Etiquetar la(s) muestra(s), anotando # de identificaci6n, nombre y hora de
recoleccin de la muestra
4.- Iniciar el anlisis en un tiempo no mayor de una hora de iniciada la
recoleccin



OBJETIVOS

Conocer las tcnicas bsicas para el examen general de orina.
Analizar las propiedades fsicas y qumicas de la orina.
Realizar la observacin microscpica de elementos celulares en el
sedimento urinario.

MATERIAL.
Recipientes recolectores de orina.
Tubos de ensaye VACUTAINER.
Etiquetas adheribles.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Pipeta automtica de 20 micro litros.
Puntillas plsticas para pipeta.
Cmaras KOV A.
Papel adherente.
Gradilla.
EQUIPO.
Microscopio
Centrifuga.
56

Equipo automatizado Clinitex 50.
REACTIVOS.
Control positivo (tiras) Chek-Stix. BA YER.
Control negativo.(tiras) Chek-Stik. BAYER.
Tiras reactivas para uroanalisis (Multistix 1 OSG, Ames de Mexico)
Agua destilada.
Colorante de Eternheimer-Malbin ( Solucin diluida).
Material:
1 probeta
Tubos de ensaye de 13 x 100
Tiras reactivas


METODOLOGIA DEL EXAMEN FISICO DE LA ORINA:


VOLUMEN
En el adulto normal se forma diariamente de 600 a 1 800 ml de orina. El
volumen normal depende de la ingestin de agua, de la temperatura ambiente, de
la dieta y del estado fsico y mental de la persona.

600 - 800 ------- Normal
Poliuria ------- Aumento anormal del volumen de orina de 24 hrs.
Oliguria ------- Disminucin anormal
Anuria ------- Cesacin total de la excrecin urinaria


Procedimiento tcnico:
En una probeta medir el volumen reportndolo en mililitros.



2.- ASPECTO.
Normalmente la orina recin emitida es transparente, pero puede volverse
turbia por reposo o por la presencia de cristales, moco. A medida que la orina se
enfra y que ocurren cambios de pH como resultado de la accin bacteriana,
ocurre precipitacin de solutos. La orina normal es lmpia y transparente, o con
escasos fosfatos, uratos u oxalatos. El examen del sedimento urinario es la forma
ms segura para determinar la naturaleza de la turbidez urinaria.
Procedimiento tcnico:
Poner en un tubo de vidrio una cantidad de orina y observar con un fondo
de papel blanco la presencia de cierta turbiedad que pueda tener la muestra de
orina.

COLOR.
La orina de personas normales puede presentar
amarillos, generalmente tiene color amarillo claro o mbar, el color vara con la cantidad
y concentracin de la orina eliminada.

Amarillo claro al mbar.---------- Normal
57

Amarillo obscura.----------------- Fiebre.
Amarrillo marrn a verde.--------- Enfermedades hepticas.
Rojizo.--------------------------- Sangre o hemoglobina.
Marrn obscuro.------------------- Presencia de Bilirrubina.

El color y la transparencia del frasco interfieren se aconsejan usar tubos de 16 x 150 mm
se homogeniza por rotacin y se observa con buena luz.

OLOR

La orina reciente tiene un olor caracterstico aromtico, debido a la presencia de cidos
voltiles, ms intenso en las orinas concentradas.

Acetona ------------- Cetosis diabtica.
Suigneris ---------- Normal
Acetona ------------- Cetosis diabtica.
Amoniacal ptrido ----------- Orina infectada con proteus

pH : Mide la cantidad de ion es hidr6geno libres, no la excrecin total de
cidos. Para que esta prueba tenga valor diagn6stico se debe medir el pH en
orina reciente y respetar las indicaciones de uso al igual que los tiempos de
\
lectura de la tira del fabricante. (Lakeside , Bayer o Ames)

pH dbilmente cido (5.5 --6.0) ------------ Normal.

DENSIDAD

La densidad normal flucta entre 1.003 y 1.030, variando segn la ingestin
de alimentos a agua, y en relacin directa con la cantidad de slidos disueltos.
Se deben de respetar las condiciones de uso Ideal igual que los tiempos de lectura
de la tira del fabricante.

EXAMEN QUIMICO

Se consideran todos aquellos metabolitos que frecuentemente aparecen en
las orinas normales en cantidades mnimas, tan pequeas que con los reactivos
normales comunes no alcanzan a ser descubiertas por lo cual se consideran
practica mente ausentes, y que s610 aumentan en trastornos orgnicos.
Generalmente se reportan por cruces de acuerdo con la intensidad de la reaccin,
con el siguiente significado.

(-) Negativo
(H) Huellas
( +) Positivo debil
(++) Positivo
( +++) Positivo fuerte.

A) GLUCOSA:

FUNDAMENTO: Doble reaccin secuencial enzimtica de glucosa oxidasa y peroxidasa.
Procedimiento: Se lee a los 30 segundos
Interpretacin:
La temperatura, las cetonas, el cido ascrbico y la gravedad especfica alteran la
reactividad del rea.
NORMAL. Normalmente no existe glucosa detectable en la orina, esta es
absorbida en el rin por los tbulos despus de atravesar el glomrulo. El umbral
58

renal es aproximadamente 10 -14 mmol/I, si la concentracin
sangunea excede ste nivel aparece en orina. (glucosuria).
ANORMAL. La diabetes mellitus es la principal causa de glucosuria, otras
causas ms comunes son el dolor, hipertiroidismo, infarto del miocardio,
traumatismos, sndrome de Cushing, acromegalias. Dao heptico. Shock y
pancreatitis aguda. Puede verse tambin una elevacin posterior a la
administracin de corticoides y anestesia.

Puede ser determinada con los siguientes mtodos de manera cuantitativa y
semicuantitativa para los siguientes mtodos:

- Benedict cualitativa
- Orto-Toluidina (cuantitativo)
- Somogyi-Nelson
- Folin-wu
- Tira reactica (Combur-test O Multistix 10SG)

Para el caso de las tiras reactivas esta se debe ser leida a los 30 seg o
como lo marca el inserto segn el fabricante y se basa en la doble reaccin
secuencial y enzimtica de glucosaoxidasa y peroxidasa.
Normalmente no existe glucosa detectable en la orina, esta es reabsorbida
en el rin por los tbulos despus de atravesar el glomrulo. El umbral renal es
de aproximadamente de 10-14 mmollL o de 140-160 mg/dL si la concentracin
sangunea excede de este nivel pasar a la orina. (glucosuria).

B) PROTEINAS:

Fundamento: Principio de error proteico de los indicadores.

Procedimiento: Se lee a los 60 s

Posibles interferencias
Pueden ocurrir falsos positivos en orinas alcalinas, en presencia de
compuestos de amonio cuaternario (antisptico, detergentes), o con limpiadores
de la piel que contengan clorohexidina

VALOR DE REFERENCIA:
NORMAL. Los niveles de albumina por debajo de 15 g/ml pueden ser
considerados como normales ya que en orina puede aparecer por ejercicio
extenuante y exposicin al fro, en algunas con personas con proteinuria
ortosttica pueden aparecer protenas despus de levantarse.
ANORMAL. Proteinuria: puede ocurrir en varias enfermedades renales debido
a un incremento en la permeabilidad del glomrulo. La glomerulonefritis,
pielonefritis o hipertensin maligna pueden ocasionar proteinuria al igual que la
toxemia del embarazo, hipertensin benigna, la falla cardiaca congestiva y la
diabetes mellitus.
Cuando se requieren resultados cuantitativos se usa la siguiente prueba:
Pruebas con cido sulfosalicilico
59

Puede ser determinada con los siguientes mtodos de manera cuantitativa y
semicuantitativa por los siguientes mtodos:
- Pruebas con cido sulfosalicilico
- Prueba con calor y cido actico
- Electroforesis
- Tira reactiva (Cambur-test o Multistix 10 SG)
Para el caso de las tiras reactivas esta debe ser leida a los 60 seg y su estudio
se basa en el principio del error proteico de los indicadores. Los niveles de
albumina por debajo de los 15 ug/ml pueden ser considerados como normal ya
que en la orina puede aparecer por ejercicio extenuante y exposicin al fria.
Algunas personas con proteinuria ortosttica pueden aparecer protenas despus
de levantarse.

C) CUERPOS CETONICOS:
Fundamento: Reaccin de cido acetoactico con nitroprusiato de sodio.
Procedimiento: Se lee a los 40 s

Interpretacin:
La gravedad especfica elevada, el pH bajo, los metabolitos de levo-dopa, puede
dar resultados elevados.
NORMAL. Los cuerpos cetnicos, (cido acetoactico, acetona y cido b-
hidroxibutrico), pueden aparecer en muestras de pacientes normales con
dietas deficientes en carbohidratos, cuando el cuerpo no puede hallar
glucosa
que catalizar, obtiene la energa de los depsitos de grasas las cuales a su
vez son convertidas en cuerpos cetnicos.
ANORMAL. Los cuerpos cetnicos aparecen en la orina antes que en la
sangre. En la diabetes fuera de control, la cetonuria es un signo importante y
puede estar presente en los casos en los que estn incrementados los
requerimientos energticos como hipertiroidismo, diarrea, vmito, fiebre,
embarazo, lactancia, inanicin o trauma.
Las pruebas que pueden servir para confirmacin del resultado de cetonas son
las siguientes:
- Prueba de Rothera
- Reaccin de Legal
- Tira re activa (Combur-test).
C) BILlRRUBINAS, UROBILlNOGENO y UROBILlNA:
FUNDAMENTO: Acoplamiento de la bilirrubina con la dicloranilina
diazotizada en un medio fuertemente cido.
Procedimiento: Se lee a los 30 s
60

Interpretacin:
La reactividad puede ser alterada por la presencia de sulfato de indoxilo,
etodolaco y cido ascrbico.
NORMAL. La bilirrubina se forma del metabolismo de la hemoglobina en el
reticuloendotelio. Despus es transportada al hgado, donde se conjuga con
el
cido glucornico, y despus es excretada va tracto biliar al intestino, donde
es reducida a urobilinogeno con la ayuda de la flora intestinal, Normalmente
hay pequea cantidad de bilirrubina en orina que se encuentra por debajo de
la sensibilidad de cualquier tira reactiva.

ANORMAL. La bilirrubina aparece por obstruccin biliar y en hepatopatas. La
ictericia causada por la obstruccin eleva la bilirrubina, la hemoltica no.
Enfermedades como hepatitis, cirrosis, carcinoma del pncreas, obstruccin
biliar, envenenamiento por inhalaciones nocivas y la falla cardiaca congestiva
asociada con ictericia cursan con bilirrubinuria.
- Prueba de Fouchet
- Prueba de Ehrlich
- Prueba de Schlesinger
- Tira reactiva (Combur-test)
E).- UROBILlNOGENO
FUNDAMENTO: Reaccin de Erhlich modificada.
PROCEDIMIENTO: Se lee a los 60 s.
Causa interferencias: El cido paraaminisaliclico, las sulfonamidas y la formalina
presentes en la orina por medicacin o contaminacin.
VALOR DE REFERENCIA: Negativo
INTERPRETACiN:
NORMAL. El urobilinogeno se forma a partir de la bilirrubina por la accin de
la
flora intestinal, de donde una parte es excretada por las heces. Otra parte (+/-
10-15%) es regresada al hgado y excretada porla orina; la presencia de una
pequea parte de urobilinogeno en la orina es normal.

ANORMAL. No existe en el caso de obstruccin biliar. Hay disminucin en el
caso de terapia antibitica. El incremento se presenta en caso de dao celular
heptico, cirrosis incipiente, hepatitis viral aguda, hepatitis asociada con
mononucleosis (periodo ixtrico), anemia hemoltica, hemlisis extravascular,
anemia perniciosa, talsemia o falla cardiaca congestiva

E) HEMATURIA y HEMOGLOBINURIA:
61

FUNDAMENTO: Catlisis del di-hidroperxido de di-isopropibenceno y
3,3',5,5- tetrametibencidina por la similitud de la actividad de peroxidasa y
hemoglobina.
Metodologa: Se lee a los 60 s
VALOR DE REFERENCIA: Negativo
Interpretacin:
La sensibilidad del rea disminuye en orina con gravedad especifica
elevada o por ingesta de Capotena (captotril), El hipoclorito y peroxidasas
microbianas en infecciones del tracto urinario pueden causar falsos positivos.
1
NORMAL. Ms de 10 eritrocitos/L es considerado como patolgico, el rea de
sangre en la tira multistix 10SG es capaz de revelar la presencia de sangre
oculta en tres condiciones ms comunes: hematuria (eritrocitos intactos),
hemoglosuria (eritrocitos lisados), mioglosuria(de tejido muscular).
ANORMAL. La hematuria est presente en: nefritis aguda, litiasis, infeccin
crnica o carcinomas renales, papiloma maligno. Las sulfonamidas y
anticoagulantes pueden tambin causar hematuria. La hemoglobinuria puede
ser resultado de reacciones hemolticas post-transfuncionales, descargas
elctricas, quemadas severas, etc. La mioglobinuria ocurre en trastornos
musculares, traumatismos y dermatomiocitis.
Para confirmar el resultado se utiliza una de las siguientes pruebas como son:

- Prueba de la Bencidina.
- Prueba de la 0- Toluidina
- Tira re activa ( Combur-test)
G) LEUCOCITOS.


FUNDAMENTO: Hidrlisis de un derivados del ster cido aminipirrol,
liberando 3- hidroxi-5-fenil pirrol. Catalizado con esterasa.
PROCEDIMIENTO: Se lee a los 120 s

VALOR DE REFERENCIA: Negativo
Interpretacin:
La descarga vaginal puede ocasionar contaminacin de la muestra. Los
resultados disminuidos pueden ser causados por elevadas concentraciones de
glucosa, gravedad especifica elevada, medicacin con cefalosporinas tetraciclina.
NORMAL. La prueba detecta la esterasa liberada de los leucocitos
granulocitos en la orina. En condiciones normales la orina debe ser negativa a
leucocitos. Los falsos positivos pueden aparecer por contaminacin del
espcimen.
ANORMAL. La presencia de leucocitos en la orina sugiere una infeccin del
tracto urinario, la combinacin de leucocitos y nitritos positivos es una buena
indicacin para que que se haga el anlisis del sedimento urinario y se
confirme la presencia de leucocitos.
H) NITRITOS:
FUNDAMENTO: Conversin de nitratos en nitritos por la accin de las bacterias
PROCEDIMIENTO: Se lee a los 60 s. Gram negativas en orina.
VALOR DE REFERENCIA: Negativo
INTERPRETACIN:
La prueba slo detecta infecciones producidas por Gram negativas. El cido
ascrbico interfiere y puede haber resultados falsos negativos si falta incubacin
en vejiga si no se ingieren nitratos en la dieta.
NORMAL. La prueba de Griess modificada -cuando es positiva- es
virtualmente diagnostica de bacteriuria significativa, (105 microorganismos por
mi de orina),como la prueba depende de la conversin (in vivo) de nitratos de
la dieta, en nitritos por la presencia de bacterias Gram negativas se recomienda
el uso de orina con no ms de dos horas de haber sido emitida y por lo menos
4 horas de incubacin en vejiga, para obtener resultados confiables.
ANORMAL. Una reaccin positiva de nitritos indica de manera muy precisa la
presencia de infeccin. Aproximadamente de 1 - 2% de las nias y entre un 5
-10 % de las mujeres presentan bacterinuria, esta puede estar asociada a
pielonefritis, cictitis y uretritis.

EXAMEN MICROSCOPICO

METODOLOGA PARA EL ANLISIS DEL SEDIMENTO URINARIO.

Existen 2 mtodos que son la forma tradicional y la estandarizada,
recomendada por la Norma internacional de la NCSL que hasta ahorita no se ha
implantado en Mxico, pero que debemos de tratar de saber y realizar para estar
conforme a dichas Normas de calidad que rigen los laboratorios clnicos y que
nos compete por ser nuestra fuente de trabajo, por lo cual les enlisto las dos
metodologas ya que para la Internacional se requiere de equipo cosa que en la
Universidad no contamos ms que con lo indispensable.




Bioqumica Clnica I

63








METODO TRADICIONAL.

PROCEDIMIENTO:
1. Se mezcla la orina y se colocan unos 10 ml en un tubo de ensayo de 16x150.
2. Centrifugar a 2 000 r.p.m. durante 5 minutos.
3. Decantar el sobrenadante dejando solo el sedimento Se homogeneizar por golpes
suaves laterales con los dedos y se tomar una gota
de la suspensin que se depositar en el centro de un portaobjetos limpio y
nuevo, se colocar un cubreobjetos de 20 x 20 mm sobre la gota dejando que
asiente, enfocar al microscopio atenuando la luz y as mismo, se deber describir
la presencia de los distintos elementos formes que componen la orina y la
cantidad en forma subjetiva (abundantes, regular y escasos) y observar al microscopio
el sedimento urinario.

METODOLOGIA ESTANDARIZADA:

Con la metodologa estandarizada Kova una vez depositado los 12 ml de orina en
el tubo de ensaye, se centrifugar durante 5 minutos a una fuerza centrfuga
relativa (FCR) de 400g.Se calcular las revoluciones por minuto (R.P.M.) a las que
debe centrifugar para tener una FCR de 400g empleando la siguiente formula:
RFC= 11.18 x Radio en cm x [R.P.M./1000]2
En donde:
RFC= fuerza centrfuga relativa.
Radio = distancia en centmetros entre el eje de rotacin y el centro del tubo de la
centrfuga.
Una vez centrifugada la muestra, eliminar 11 ml de sobrenadante con pipeta o
jeringa, conservar en el tubo 1 ml para re suspender el sedimento. En los casos
peditricos se utilizarn bolsas peditricas dependiendo del sexo (nio o nia) en
que no puedan recolectar 12 ml, se pueden centrifugar 6 ml, eliminando 5.5 y
re suspender en 0.5ml.

Adicionar al sedimento una gota de colorante Sternheimer-Malbin, mezclar
suavemente hasta obtener una mezcla homognea. Con una pipeta Pasteur o con
un capilar, tomar una gota de la suspensin del sedimento teido y colocarla en la
esquina de una cmara de KOVA glasstic slide 10. La cmara se llenar por
capilaridad con un volumen estndar de 6.6 microlitros. Localizar la cmara y las
estructuras de mayor tamao (cilindros) con objetivo 100x.Estudiar los otros
elementos formes con objetivo 400x.Para reportar los elementos formes/microlitro
hay dos mtodos descritos por el fabricante:
Realizar el conteo de cada elemento forme en 10 cuadros pequeos de diferentes
cuadrantes empleando aumento de 100x para cilindros, o 400x para otros
elementos formes. Realizar el clculo empleando la formula siguiente: Elemento
forme/microlitro = [N entre C] x 7.5
En donde:
Bioqumica Clnica I

64






N= nmero de elementos formes observados.
C= nmero de cuadros pequeos en los que se efecta el conteo
7.5= factor constante. (Bayer, 1997).

De esa manera se realizar una tabla en donde se igualara la
cantidad en cruces de los elementos formes con la cantidad en microlitros de
dichos elementos formes. Para la estadstica de los datos se usar la prueba de
chi cuadrada para los anlisis, sobre diferencias de concordancia entre las
lecturas.


4. Anotar los elementos encontrados ya sea por la forma tradicional o
estandarizada los cuales pueden ser cualquiera de las clulas
enlistadas a continuacin.

CELULAS EPITELIALES
Generalmente tienen poco significado.

LEUCOCITOS
La eliminacin normal de leucocitos en la orina es del orden de 3000/ml lo
que corresponde aproximadamente a un leucocitos por cada 3 - 5 campos en
orina no concentrada.

ERITROCITOS
La presencia de eritrocito s en la orina indica sangrado en algn lugar de
las vas urinarias.

CILINDROS
Los cilindros urinarios son precipitados de protenas que se forman en los
tbulos de la nefrona. Las orinas normales pueden presentar algunos cilindros hialinos.
Pueden observarse ademas de estos los cilindros leucocitarios,
hemticos, epiteliales, granulosos, creos, grasoso
CILlNDROIDES:
Son en todos los aspectos iguales a los cilindros, excepto que tienen
extremos Puntiagudos.
FILAMENTOS MUCOSOS:
Se pueden encontrar en la orina normalmente pequeas cantidades de
filamentos mucosos.

ESPERMATOZOIDES:
Normalmente se encuentra en la orina de los hombres despus de la Eyaculacin
en la mujer contaminada por la secrecin vaginal despus del coito.

BACTERIAS:
La orina normal no debe contener bacterias, cuando menos en nmero
apreciable.
Bioqumica Clnica I

65






HONGOS Y LEVADURAS:
En las orinas normales no deben observarse estos elementos.

PARASITOS:

Exceptuando el flagelado Trichomana vaginalis, es raro encontrar :
zooparsitos en el.

CRISTALES:
Normalmente no hay cristales en la orina recin emitida. En general los cristales
urinarios no tienen significacin salvo si son de sulfonamidas, cistina leucina,
tirosina u oxalatos. La naturaleza de los cristales esta en relacin directa
con el pH de la orina.
1. CRISTALES DE ORINA ACIDA:
Oxalato de Calcio, Ac. rico, Cistina, Leucina, Tirosina Urato de Sodio,
Uratos
Amorfos.
2. CRISTALES DE ORINA ALCALlNA:
Fosfatos Amorfos, Fosfatos Triples, Carbonato de Calcio, Fosfato de
Calcio, Urato de Amonio, Urato de Calcio.
3. CUERPOS EXTRAOS:
No es raro que la orina se contamine con substancias extraas exgenas. Suele
suceder as cuando se emplean recipientes sucios para recogerlas o
cuando las muestras no se conservan adecuadamente.























Bioqumica Clnica I

66








REPORTE DE EXAMEN GENERAL DE ORINA

ESTUDIO FISICO DE LA ORINA

VOLUMEN
OLOR
pH
COLOR
ASPECTO
DENSIDAD

ESTUDIO QUIMICO DE LA ORINA

GLUCOSA
ACETONA
ALBUMINA
NITRITOS
SANGRE
HEMOGLOBINA
BILIRRUBINA
UROBILINA

ESTUDIO MICROSCOPICO

LEUCOCITOS
LEVADURAS
BACTERIAS
ERITROCITOS
CEL. EPITELIALES
FILAMENTOS DE MUCINA
CRISTALES DE:______________
OTROS:_______





BIBLlOGRAFIA
1. AIQUEL. 1995. MANUAL DE ANALlSIS CLlNICOS. ED. PANAMERICANA.
2. Beatriz bayardo. 1990. MAanual de apuntes de analisis. universidad de
guadalajara.
3. J.M. GONZALEZ DE BUITRAGO, E. ARILLA FERREIRO, M. RODRIGUEZ
SEGADE, SANCHEZ POZO. 1997. BIOQUIMICA CLlNICA. ED. MACGRAW HILL-
INTERAMERICANA
Bioqumica Clnica I

67






4. JOAN F. ZILVA, P.R. PANNALL. 1998. BIOQUIMICA CLNICA EN" EL
DIAGNSTICO Y TRATAMIENTO. ED. SALVAT
5. LYNCH, RAPHAEL, MELLOR SPARE E INWOOD. 1994. METODOS DE
LABORATORIO. EDITORIAL INTERAMERICANA.
6. SI8TER LAURINE GRAFF. 1996. ANALlSIS DE ORINA. ATLAS COLOR.
EDITORIAL PANAMERICANA.
7. SUSAN KING STRASINGER. 1997. L1QUIDOS CORPORALES y ANALlSIS DE
ORINA. EDITORIAL EL MANUAL MODERNO

























Bioqumica Clnica I

68






ANEXOS
INSERTOS SPINREACT MICROLAB 200



Bioqumica Clnica I

69











Bioqumica Clnica I

70









Bioqumica Clnica I

71













Bioqumica Clnica I

72







Bioqumica Clnica I

73







Bioqumica Clnica I

74













Bioqumica Clnica I

75








Bioqumica Clnica I

76












Bioqumica Clnica I

77

















Bioqumica Clnica I

78












Bioqumica Clnica I

79







Bioqumica Clnica I

80