Materia: Farmacologa General Carrera: Mdico Veterinario Zootecnista Semestre: Tercero
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE AGUASCALIENTES DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y FARMACOLOGA CENTRO DE CIENCIAS BSICAS
REGLAMENTO Y MEDIDAS DE SEGURIDAD A SEGUIR EN LOS LABORATORIOS DE PRCTICAS DOCENTES
Sobre el uso del laboratorio:
Con anterioridad a la realizacin de la prctica, los alumnos debern leer el texto completo de la misma, y llevar por escrito los pasos experimentales a desarrollar.
El uso de bata es obligatorio durante todo el desarrollo de la prctica.
Est prohibido comer, fumar, beber o masticar chicle dentro del laboratorio.
Usar guantes de ltex desechables y cubre-bocas cuando se trabaje con muestras biolgicas y /o material patolgico.
Se deber informar inmediatamente al profesor o al tcnico de laboratorio de cualquier accidente que ocurra durante la prctica.
Slo se llevarn a cabo los procedimientos descritos en los instructivos de la prctica.
Al terminar cualquier experimento el profesor o el tcnico indicarn a los estudiantes donde deben colocarse los residuos segn su naturaleza (peligrosos, punzocortantes, biolgico-infecciosos,etc.).
Los alumnos siempre consultarn al profesor responsable, instructor o tcnico encargado, para aclarar cualquier duda.
Antes de retirarse del laboratorio los alumnos debern dejar limpio su lugar de trabajo.
Recomendaciones en caso de contaminacin con materiales biolgico infecciosos.
1. Retirar la ropa contaminada y colocarla en un contenedor de material biolgico- infeccioso, lavar la zona contaminada con abundante agua y jabn, y luego desinfectar con alguna solucin antisptica. 2. Si se ocasion alguna herida, oprimir suavemente la zona circundante a la misma hasta que salgan algunas gotas de sangre, y luego proceder como en el paso anterior. Acudir a revisin mdica de manera inmediata, y despus en caso de que se presente cualquier sntoma de infeccin. 3. En caso de derramamiento de alguna muestra biolgica, desinfectar el rea con hipoclorito de sodio al 5%. Depositar los material biolgico-infecciosos utilizados en los contenedores correspondientes.
Recomendaciones en caso de shock y traumatismo.
No dar de beber a la persona. No sobrecalentarlo. Solicitar ayuda mdica de inmediato. Sntomas: piel plida, fra y hmeda, de color moteado. La respiracin es dbil o profunda, pero irregular; apata y nusea. 1. Acostar a la persona. Colocar una cobija debajo si la superficie est fra o hmeda, pero NO moverla si tiene (o se sospecha ) de alguna lesin en cuello o espalda. 2. Si la persona accidentada presenta alguna lesin en la cabeza, elevarle el cuello y hombros. 3. Elevarle las piernas 30 centmetros a menos que le cause dolor o tenga una lesin. 4. Cubrirla suavemente con una cobija.
Recomendaciones en caso de envenenamiento por ingestin.
Inmediatamente llamar al centro de salud ms cercano y solicitar ayuda mdica, informando detalladamente sobre la naturaleza de la sustancia txica ingerida. Guardar el recipiente en el que se encontraba la sustancia txica y guardar el vmito en caso de presentarse. Observar la respiracin cuidadosamente.
Recomendaciones en caso de shock elctrico.
No tocar a la persona directamente mientras se encuentre en contacto con la corriente elctrica. Solicitar ayuda mdica de inmediato.
1. Tratar de desconectar la corriente quitando el fusible o desenchufando el cable elctrico. Si eso no es posible , subirse sobre algo seco (una cobija, tapete de hule, peridicos, etc.) y jalar o empujar a la persona accidentada con una tabla o palo seco. 2. Si es necesario comenzar a darle respiracin artificial inmediatamente, y segn el caso, dar tratamiento para quemaduras, shock y traumatismo.
PROGRAMACIN DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOLOGA GENERAL MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA
CARRERA: M.V.Z. SEMESTRE: 2 HORARIO: PROFESOR:
PRCTICAS FECHA MATERIAL BIOLGICO POSOLOGA - - - VAS DE ADMINSTRACIN 24 RATAS BIODISPONIBILIDAD DE LA ASPIRINA - - - INDUCCIN ENZIMTICA 20 RATONES FARMACOCINTICA (ELIMINACIN) 4 CONEJOS SEMINARIO DE INTEGRACIN - - - RELACIN DOSIS EFECTO GRADUAL 3 RANAS INHIBIDORES DE ACH 3 RANAS BLOQUEADORES NEUROMUSCULARES 3 RANAS ANESTSICOS LOCALES - - - ANTICOAGULANTES - - - EXMEN
POSOLOGIA
INTRODUCCIN.-Debido a las diferentes propiedades fsicas y qumicas de los frmacos, as como tambin a las muchas aplicaciones que algunos de ellos tienen, cuando se elaboran los medicamentos es necesario prepararlos bajo diferentes formas de dosificacin, para poder administrarlos a los pacientes durante el tratamiento o diagnstico de la enfermedad. La preparacin de formas farmacuticas adecuadas, apegadas a las normas oficiales, es responsabilidad de los fabricantes de productos farmacuticos. Estas preparaciones podemos encontrar como slidos, semislidos, lquidos y gases; pero en todos los casos, siempre se indica la concentracin o la cantidad del principio activo. Ahora bien, existen varios factores que pueden modificar la intensidad del efecto de los medicamentos y que deben ser tomados en cuenta durante el empleo teraputico de los mismos. Entre otros factores podemos mencionar; la edad del paciente, las caractersticas individuales de cada persona, la dosis y la frecuencia de administracin del medicamento. El concepto de dosis designa la cantidad de medicamentos que debe ser administrado a un ser vivo para producir un efecto determinado. De esta manera, se denomina dosificacin a la estimacin de la dosis para este fin, y posologa, al estudio de la dosificacin.
OBJETIVO.- Familiarizar al alumno con el manejo de las unidades de masa, volumen y concentracin para que basado en ello sepa administrar a los pacientes, de acuerdo con las dosis apropiadas, las cantidades exactas de los principios activos presentes en las formas farmacuticas.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO. a) Operaciones aritmticas fundamentales. b) Tipos de soluciones y modos de expresar sus concentraciones. c) Clasificacin y empleo de las formas farmacuticas.
MATERIAL (por equipo) - 3 matraces Erlenmeyer de 50ml - 1 vaso de precipitado de 250ml (con agua destilada). - 2 pipetas de 1ml (graduadas en centsimas). - 1 probeta graduada de 50ml. - 100ml de azul de metileno al 0.025% (por grupo). - Fotocolormetro y celdillas (por equipo).
DESARROLLO.- a. Unidades de Masa: b. La unidad MKS de masa es el kilogramo o (kg). El gramo (g) es, desde luego, la milsima parte del kilogramo. Una unidad ms pequea es el miligramo (mg) o milsima parte del gramo (0.001 g). Todava menor es el microgramo (g), que es la millonsima parte del gramo(10 6). Con base en lo anteriormente descrito, realiza los ejercicios siguientes. Expresa el valor equivalente a 16mg. en kilogramos. Cul es el peso en toneladas de 120mg. de NaCl? Transforma 2.10g a microgramos, miligramos y kilogramos. Cul es la masa de un galn de agua en kilogramos?
UNIDADES DE VOLUMEN:
En el sistema CGS (centmetro-gramo-segundo), la unidad de volumen es el centmetro cbico (cm o cc). Un litro equivale a un decmetro cbico 1000 centmetros cbicos. Un mililitro, como su nombre lo indica, es la milsima parte de un litro. Por lo tanto, tenemos que: 1 litro (1)= 1000 mililitros (ml)= 1000 cc. 1mililitro = 1 cc.
Realiza los siguientes ejercicios:
Cuntos centmetros cbicos tiene un metro cbico?. Cuntos litros tiene un metro cbico?. Determinar la capacidad en litros de un recipiente que tiene 0.5m de largo, por 10cm de ancho y 50 nm de profundidad.
UNIDADES DE CONCENTRACIN:
Cuando se emplean unidades fsicas, las concentraciones de las soluciones generalmente se expresan de las maneras siguientes: mediante el peso del soluto por unidad de volumen de la solucin, ejemplo,1omg de NaCl por litro de solucin en forma porcentual, o sea, el nmero de gramos de soluto por 100ml de solucin, ejemplo, una solucin acuosa de KCl al 5% contiene 5 g de KCl en 100ml de agua; finalmente, cuando la solucin est formada por sustancias lquidas (lquido/lquido), la relacin porcentual nos indica el nmero de mililitros de soluto que deben ser mezclados con los mililitros necesarios del disolvente para que juntos formen 100ml de solucin, ejemplo, una solucin de etanol en agua al 10% est formada por 10ml de etanol y 90ml de agua. Basado en lo anteriormente descrito, realiza los siguientes ejercicios: Calcula los miligramos de dextrosa necesarios para preparar 200ml de una solucin acuosa de este azcar cuya concentracin sea de 0.3mg/ml. Sabiendo que la solucin isotnica de NaCl se prepara al 0.9%, determina la cantidad de soluto que se necesita para preparar 500ml de esta solucin. Se requiere administrar a un paciente 50mg de un medicamento cuya presentacin farmacutica es la de una solucin a una concentracin de 1:5000. Determina el volumen de la solucin que el paciente necesita ingerir. Nota: En algunas ocasiones, la concentracin de soluciones muy diluidas se expresa mediante el uso de una proporcin. En el problema anterior, la relacin 1:5000 indica que 1 g del medicamento se encuentra disuelto en 5000ml del vehculo o disolvente. Un frasco mpula contiene 0.1g de un medicamento A disuelto en 10ml de agua bidestilada. Qu volumen de esta solucin es necesario administrar a un paciente, para que ste reciba 30mg del medicamento?
PREPARA LAS SOLUCIONES SIGUIENTES:
En tres matraces Erlenmeyer, debidamente etiquetados ( A,B y C, por ejemplo), coloca los mililitros de una solucin acuosa de azul de metileno al 0.025% que a continuacin se indica: Matraz A : 0.3ml de azul de metileno al 0.025% Matraz B: 0.6ml de azul de metileno al 0.025%. Matraz C : 0.9ml de azul de metileno al 0.025% Agrega a cada uno de los matraces anteriores el agua destilada necesaria para obtener un volumen final de 40ml. A continuacin, calcula la concentracin del azul de metileno en cada una de las soluciones que has preparado, expresando dicha concentracin en microgramos/mililitro. Finalmente, en un fotocolormetro determina la absorbancia o densidad ptica de las soluciones anteriormente descritas (609 nm), ajustando el cero de tu aparato con agua destilada (blanco). Anota tus resultados en el cuadro siguiente.
CURVA DE CALIBRACIN PARA EL AZUL DE METILENO MATRAZ AZUL DE METILENO (g/ml) ABSORBANCIA ( 609 nm) A B C
REALIZA LOS SIGUIENTES EJERCICIOS Y ENTREGALOS A TU INSTRUCTOR EN LA SIGUIENTE SESIN DE LABORATORIO.
1- En un sistema de coordenadas lineales, grafica la absorbancia de las soluciones del azul de metileno como una funcin de su concentracin. Explica la relacin entre variables. 2- Resuelve los siguientes problemas: Un paciente diabtico cuyo peso es de 65 Kg. requiere la administracin diaria de insulina a dosis de 0.25 U.I. /kg de peso (va subcutnea). Sabiendo que los frascos mpulas contienen 100 U.I./ml (24U.I./mg) calcula: a) Las unidades de insulina que el paciente recibe diariamente. b) Los miligramos de insulina que el paciente recibe por da. c) El volumen de la solucin que el paciente recibe diariamente.
La carbamacepina, medicamento til en el tratamiento del gran mal epilptico, debe administrarse a un paciente de 50kg de peso. La dosis es de 20 mg/kg y la presentacin farmacutica son tabletas de 0.2 gramos; determina: a) El nmero de tabletas que deben ser administradas diariamente. b) Si el medicamento se administra dos veces al da. Cuntas tabletas hay que dar en cada ocasin?
Un frasco mpula contiene una solucin formada por 0.5g de un medicamento X y 5.0ml de disolvente. Qu volumen de esta solucin es necesario administrar a un paciente, para que ste reciba 100mg del medicamento?.
Un frasco mpula contiene 2,000,000 U de penicilina G sdica. Cuntos mililitros de diluyente esterilizado se requieren para preparar una solucin de 250,000 U/ml? Sabiendo que un paciente debe de recibir 500,000 U cada 8 horas ( intramuscular), qu volumen de la solucin anterior es necesario administrarle en un da?
Se dispone de una solucin de alcohol en agua al 80%. Qu volumen de esta solucin se necesita para preparar 1oooml de solucin de alcohol al 25%
BIBLIOGRAFA
- Manual de Prcticas de Farmacologa de la Facultad de Medicina, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, (1970), pg., 2. - Asperheim M.K.: Pharmacology por Practical Nurses; 4 th. Edition, W.E. Saunders, (1975), pgs. 1-69. - Ayres G.H.: Anlisis Qumico Cuantitativo. 2 Edicin. Edit. Harla,(1970), pgs. 459-512. - Frey R. Paul: Problemas de Qumica.2 Edicin. Edit.CECSA, (1980), pgs. 29-50. - Litter Manuel: Farmacologa Experimental y Clnica. 5 Edicin. Edit. El Atenel,(1975), pgs. 130-172. - Meyer Jones L.: Farmacologa y Teraputica Veterinaria. 2 Edicin. Edit.UTEHA,(1969),pgs. 15-18. - Schaum Daniel: Teora y Problemas de Qumica General, 5 Edicin. Serie De Compendios Schaum, Edit. McGraw Hill, (1969). Pgs. 1-8 y 103-113. - Stecher Paul G. (Editor): The Merck Index, an Encyclopedia of Chemical and Drugs. 8 th. Edition, (1968), pgs.684. - Stoklosa M.J.: Pharmaceutical Calculations. 6 th . Edition. Lea Febiger (1974), pgs. 58-67.
ABSORCIN Y DISTRIBUCIN DE FRMACOS
Para que se manifiesten los efectos de los medicamentos en el organismo que los recibe, se requiere, en la mayora de los casos, que estos compuestos sean previamente absorbidos y distribuidos, es decir, necesitan atravesar diversas capas celulares para alcanzar finalmente su sitio de accin. Es cierto que algunos frmacos son capaces de actuar localmente, a nivel de la regin que los recibe, pero para la gran mayora de los medicamentos esto no sucede as. Por lo tanto, un frmaco que se administra directamente en el torrente sanguneo alcanzar con mayor rapidez su sitio de accin que cuando ese mismo frmaco se administra en el aparato digestivo. Por otra parte, libre difusin de los medicamentos a travs de las membranas celulares se relaciona directamente con su coeficiente de particin lpido/agua y con su grado de disociacin (pK). Adems, la unin de los frmacos con las protenas plasmticas y titulares, as como los procesos de biotransformacin y eliminacin, son factores que, sumados a los anteriormente mencionados, modulan la intensidad y la duracin del efecto farmacolgico.
OBJETIVOS.- Que el alumno determine la latencia del efecto hipntico del pentobarbital sdico, al administrar este frmaco por diferentes vas, y que analice la distribucin de la fluorescena sdica en los diferentes rganos y tejidos de la rata.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO. Estructura y funciones de las membranas celulares. Factores relacionados con la absorcin y distribucin de los medicamentos. Ventajas y desventajas de las vas de administracin.
MATERIAL (por equipo). - 1 estuche de diseccin - 6 vasos de precipitado de 30ml. - 2 agujas del No. 25 - Jeringas de 1.0 y 3.0 ml - Frasco boca ancha (para anestesiar ratas) - Cnula para la administracin oral de frmacos. - Franela y algodn. - Lmpara de luz ultravioleta. - Solucin salina isotnica (NaCl al 0.9%) - Fluorescena sdica al 0.5% (en solucin salina). - ter etlico y agua destilada. - Perntobarbital sdico (anestesal). - Tres ratas adultas (machos o hembras).
DESARROLLO
1.- Administracin de los agentes anestsicos
Pesa dos ratas y adminstrales lentamente pentobarbital sdica a las dosis y por las vas de administracin que a continuacin se indican:
Subcutnea------------------ 30mg/kg. Intraperitoneal-------------- 30mg/kg Impregna un algodn con ter y colcalo en el frasco de boca ancha; introduce una rata dentro de este recipiente el tiempo necesario para llevarla al estado de hipnosis que se manifiesta por la prdida del reflejo de enderezamiento, lo cual se observa si se coloca a la rata sobre su dorso y permanece en esa posicin. En cada uno de los casos anteriores, registra el momento en que administras el frmaco, as como el tiempo que transcurre en aparecer la hipnosis (latencia).
ABSORCIN Y DISTRIBUCIN DE LA FLUORESCEINA SODICA.
Administra fluorescena sdica a dos ratas por las vas de administracin y dosis que a continuacin se indican: Oral .. 1.0 ml (dosis nica) Intravenosa 0.4 ml / kg de peso corporal
RESULTADOS
Anota tus resultados en el cuadro siguiente, y compara el tiempo de latencia necesario para llevar a las ratas al estado de hipnosis al utilizar dos agentes depresores del SNC (pentobarbital y ter) y tres vas de administracin diferentes (subcutnea, intraperitoneal y pulmonar).
Para observar la distribucin del colorante en los diferentes rganos y tejidos de las ratas, sacrificar a estos animales 20 minutos despus de haberles administrado la fluorescena, y con el auxilio de una lmpara de luz negra (ultravioleta) revisa cuidadosamente el aparato digestivo, as como el sistema porta de la rata que recibi el colorante por va oral. Investiga tambin si el colorante se encuentra acumulado en la vejiga.
Latencia del efecto hipntico (min.) producido por el ter etlico y el pentobarbital sdico, al administrar estos medicamentos por diferentes vas. RATA FARMACO VIA DE ADMON. LATENCIA (min.) 1 ter Pulmonar
2 Pentobarbital Intraperitoneal
3 Pentobarbital Subcutnea
En la rata que recibi la fluorescena sdica por va intravenosa, trata de localizar el colorante en: hgado, msculo esqueltico, cerebro, corazn, pulmones, riones, ureteros y vejiga. Anota rganos en donde se haya distribuido la fluorescena. La localizacin del colorante se facilita trabajando en un cuarto oscuro (una vez realizada la diseccin del animal), colocando porciones de los rganos anteriormente descritos en vasos de precipitados con agua destilada y dirigiendo sobre ellos la lmpara de luz ultravioleta. Analiza los resultados obtenidos de esta prctica, en tu reporte de actividades da una explicacin de las diferencias que hayas encontrado.
ABSORCIN Y DISTRIBUCIN DE FRMACOS
Para que se manifiesten los efectos de los medicamentos en el organismo que los recibe, se requiere, en la mayora de los casos, que estos compuestos sean previamente absorbidos y distribuidos, es decir, necesitan atravesar diversas capas celulares para alcanzar finalmente su sitio de accin. Es cierto que algunos frmacos son capaces de actuar localmente, a nivel de la regin que los recibe, pero para la gran mayora de los medicamentos esto no sucede as. Por lo tanto, un frmaco que se administra directamente en el torrente sanguneo alcanzar con mayor rapidez su sitio de accin que cuando ese mismo frmaco se administra en el aparato digestivo. Por otra parte, libre difusin de los medicamentos a travs de las membranas celulares se relaciona directamente con su coeficiente de particin lpido/agua y con su grado de disociacin (pK). Adems, la unin de los frmacos con las protenas plasmticas y titulares, as como los procesos de biotransformacin y eliminacin, son factores que, sumados a los anteriormente mencionados, modulan la intensidad y la duracin del efecto farmacolgico.
OBJETIVOS.- Que el alumno determine la latencia del efecto hipntico del pentobarbital sdico, al administrar este frmaco por diferentes vas, y que analice la distribucin de la fluorescena sdica en los diferentes rganos y tejidos de la rata.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO. Estructura y funciones de las membranas celulares. Factores relacionados con la absorcin y distribucin de los medicamentos. Ventajas y desventajas de las vas de administracin.
MATERIAL (por equipo). - 1 estuche de diseccin - 6 vasos de precipitado de 30ml. - 2 agujas del No. 25 - Jeringas de 1.0 y 3.0 ml - Frasco boca ancha (para anestesiar ratas) - Cnula para la administracin oral de frmacos. - Franela y algodn. - Lmpara de luz ultravioleta. - Solucin salina isotnica (NaCl al 0.9%) - Fluorescena sdica al 0.5% (en solucin salina). - ter etlico y agua destilada. - Perntobarbital sdico (anestesal). - Tres ratas adultas (machos o hembras).
DESARROLLO
1.- Administracin de los agentes anestsicos
Pesa dos ratas y adminstrales lentamente pentobarbital sdica a las dosis y por las vas de administracin que a continuacin se indican:
Subcutnea------------------ 30mg/kg. Intraperitoneal-------------- 30mg/kg Impregna un algodn con ter y colcalo en el frasco de boca ancha; introduce una rata dentro de este recipiente el tiempo necesario para llevarla al estado de hipnosis que se manifiesta por la prdida del reflejo de enderezamiento, lo cual se observa si se coloca a la rata sobre su dorso y permanece en esa posicin. En cada uno de los casos anteriores, registra el momento en que administras el frmaco, as como el tiempo que transcurre en aparecer la hipnosis (latencia). BIODISPONIBILIDAD DE LA ASPIRINA EN EL HOMBRE
Es un hecho bien conocido que dos o ms productos farmacuticos, con diferentes nombres comerciales, que contienen el mismo frmaco, en la misma cantidad, e incluso en el tipo de forma farmacutica, pueden producir diferencias en los niveles sanguneos del principio activo y en la magnitud de las respuestas clnicas. Los productores de medicamentos requieren, en muchas ocasiones, incorporar otras sustancias al principio activo (saborizantes, aglutinantes, estabilizadores, etc.) necesarias para elaborar el medicamento, lo cual puede influir en el grado de liberacin y en la velocidad de absorcin del principio activo. En el estudio del temporal de la accin de los frmacos, la biodisponibilidad determina la cantidad de medicamento que entra a la circulacin sangunea a partir del preparado farmacutico que se administra a los pacientes, as como la velocidad con la que el frmaco aparece en la sangre.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO: Vas de administracin de los medicamentos. Formas farmacuticas. Farmacocintica. Farmacodinamia.
MATERIAL (por equipo) jeringas estriles y desechables de 3ml. (con agujas). Frasco de heparina sdica; 5,000 UI/ml. Tubos de ensayo de 10ml Gradilla Pipeta Pasteur Bulbo para pipeta 2 Pipeta volumtricas de 1ml 1 pipeta volumtrica de 5ml 1 probeta de 50ml 2 vasos desechables Algodn y alcohol etlico Agua potable
Los alumnos que ingieran cido acetilsaliclico (voluntarios) debern reunir los requisitos siguientes:
ser del mismo sexo. Ser aproximadamente del mismo peso. No haber ingerido alimento cuando menos 8 horas antes de realizar esta prctica. Haber ingerido en ocasiones anteriores cido acetilsaliclico, sin que este frmaco les haya ocasionado molestia alguna. No encontrarse bajo tratamiento mdico en el momento de realizar la prctica. No haber ingerido ningn medicamento cuando menos 48 horas antes del inicio de este trabajo.
Los productos comerciales seleccionados para realizar esta prctica son:
Nombre del producto Forma Farmacutica Cantidad de cido acetilsaliclico Alka-Seltzer Tabletas efervescentes 320 mg/tableta ASA-500 Cpsulas 500 mg/cpsula Aspirina Tabletas 350 mg/tableta Asawin Grajea 500 mg/grajea Adiro Comprimido 500 mg/ comprimido
Cada equipo de trabajo, integrado por cuatro alumnos, seleccionar (sin presin alguna) a dos voluntarios, quienes habrn de ingerir una dosis nica de 1000 mg de cido acetilsaliclico a partir del producto comercial que les sea sealado por su instructor. Los dos voluntarios del mismo equipo debern de ingerir el mismo producto comercial.
1) Ingiera 1000mg de cido acetilsaliclico junto con 500ml, de agua potable, anote el tiempo en que se realiza la ingesta del medicamento. 2) Con jeringas estriles y heparinizadas, tome una muestra de sangre (3ml/muestra) antes de administrar el medicamento y dos muestras a los tiempos que a continuacin se le indican: 45 min y 90 min despus de haber administrado la droga en estudio. 3) Cuantifique la concentracin de cido acetilsaliclico en el plasma, utilizando el siguiente procedimiento:
Cuantificacin del cido Saliclico presente en el plasma (mtodo de Trinder).
a) Coloca la muestra de sangre (3ml) en un tubo de ensayo y centrfuga a 2000 rpm durante 5minutos, para separar el plasma y colcalo en otro tubo de ensayo. b) Utilizando pipetas volumtricas, coloca en un tubo de centrifugacin:
- Plasma 1ml - Reactivo de coloracin... 5ml Agitar durante algunos instantes y centrifugar.
c) Extraer el lquido sobrenadante y leer de inmediato, en un fotocolormetro, la absorbancia de la muestra a 540nm. No olvides preparar una muestra blanco para ajustar a cero tu aparato (ver preparacin de curva tipo). d) En una curva de calibracin para salicilatos (curva tipo) determina la concentracin plasmtica del medicamento administrado.
RESULTADOS Colecta los valores de concentracin de cido acetilsaliclico (salicilatos) encontrados en el plasma de todos los voluntarios. Determina los valores promedio de concentracin de los sujetos que ingirieron el mismo producto comercial y coloca esos valores en el cuadro siguiente: Niveles Plasmticos de salicilato generados por la ingestin de diversas formas farmacuticas Concentracin cido saliclico en Plasma Producto ingerido por el voluntario 45 minutos 90 minutos Alka-Seltzer
ASA-500
Aspirina
Asawin
Adiro
En un sistema de coordinas lineales, grafica los valores de concentracin plasmtica de cido acetilsaliclico como una funcin del tiempo (min.). analiza si existen diferencias entre los distintos productos comerciales que fueron administrados. Compara los niveles sanguneos de cido saliclico producidos, a los 45 y 90 minutos, por los diferentes productos que fueron ingeridos por los voluntarios. Para ello, construye un diagrama de barras. En tu reporte de actividades, anexa las grficas anteriormente descritas, selecciona el producto comercial (o los productos) que consideres como el ms apropiado para obtener rpidas concentraciones de cido saliclico en plasma. Finalmente, da una explicacin a las diferencias encontradas.
TRABAJO DE INVESTIGACIN. Clasificacin y caractersticas de las formas o preparados farmacuticos.
BIBLIOGRAFA.
- Bayardo P.Beatriz: Apuntes de Anlisis Clnicos. Publicacin de la Universidad de Guadalajara (1975). - Best y Taylor: Bases Fisiolgicas de la Prctica Mdica. Captulo 8. 10 Edicin. Editorial Panamericana (1983) pg. 1481-1490. - Bowman W.C. y Rand M.J.: Farmacologa, Bases bioqumicas y patolgicas. Captulo 16. 2 Edicin. Editorial Interamericana (1984). Pg.16.5-16.25. - Craig C. y Stitzel R.: Farmacologa Mdica. 1 Edicin. Editorial Interamericana (1984), pg. 579-588. - Davison I. y Henry J.B.: Diagnstico clnico por el laboratorio, 5 Edicin. Edicin Salvat (1979). Pg. 406-407. - Frjaville J.P. y Bourdon R.: Toxicologa clnica y analtica. 2 Edicin. Editorial JIMS (1979). Pg. 202-207. - Gibaldi M.: Introduccin a la biofarmacia. Editorial Acribia (1974). Pg. 1-58. - Hanson D.F., Murphy P.A. y Windle B.E.: Failure of rabbit Neutrophils to Secrete Endogenous Pyrogen when Stimulated with Staphylococci.J.Exp. Med., 151: pg.1360-1371 (1980). - Heyman E.: Hydrolysis of carboxylic esters and amides. Cap. 12. en metabolic Basis of Detoxications, Academic Press, N.Y. (1982). pg. 229-245. - Holum R.J.: Prcticas de qumica general, qumica orgnica y bioqumica. 1. Edicin. Editorial Limusa-Wiley (1972). Pg. 111-113. - Kluger M.J.: La Fiebre. Mundo Cientfico, 1 (6): 638-645 (1982). - Litter M.: Farmacologa experimental y clnica. 5. Edicin. Editorial El Ateneo (1975). Pg- 1371-1425. - Spenney J.G.: An Ultraviolet Absorbance Method for Determining Acetylsalicylic Acid Hydrolase Activity. Anal. Biochem., 80: 578-584 (1977). - Trinder P.: Rapid Determination of Salicylate in Biological Fluids. Biochem J., 57: 301-303 (1954).
ESTIMULACIN DE LA ACTIVIDAD BIOTRANSFORMANTE (INDUCCIN ENZIMATICA)
Las modificaciones que sufren los medicamentos en su estructura qumica cuando ingresan al organismo de los animales (biotransformacin), es un fenmeno farmacolgico que cada da se conoce mejor. La mayor parte de los sistemas enzimticos encargados de esa biotransformacin se localizan en el sistema reticuloendoplsmico liso (fraccin microsmica) de los hepatocitos y otras clulas. Hoy en da se sabe que ciertas drogas puede modificar la capacidad del hgado para biotransformar a los medicamentos. El fenmeno de la induccin enzimtica, por ejemplo, consiste en aumentar la biotransformacin de un frmaco por parte de las enzimas microsmicas hepticas y es determinado por la administracin previa del mismo o de otro frmaco. De esta manera, el conocimiento de la induccin enzimtica contribuye a esclarecer algunos problemas teraputicos y nos seala los riesgos que pueden presentarse al administrar asociaciones de medicamentos.
OBJETIVO.- analizar la duracin del efecto hipntico producido por el pentobarbital sdico en ratones tratados previamente con fenobarbital (agente estimulante o inductor) y en ratones que no estuvieron en contacto con este frmaco (animales testigos).
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO. Concepto e importancia de la biotransformacin de los medicamentos (metabolismo o destoxificacin). Reacciones metablicas involucradas en el metabolismo de los medicamentos. Factores fisiolgicos y farmacolgicos relacionados con la biotransformacin de los frmacos.
MATERIAL (por equipo) 5 ratones cuyo peso flucte entre 25-30 g (5-6 semanas de edad). Bscula Jeringa de 1ml con aguja del No.25 Algodn Fenobarbital sdico Pentobarbital sdico (15mg/ml en solucin isotnica) Cronmetro.
DESARROLLO: Tomar un lote de 40 ratones machos y dividirlo en dos grupos (20 ratones/grupo): tratados y testigos. Marcar cada uno de los ratones para poder identificarlos de acuerdo con su grupo. PRETRATAMIENTO PARA LA ESTIMULACIN ENZIMTICA. Cinco das antes de realizar esta prctica, cada ratn del grupo de animales tratados debe recibir diariamente 100mg/Kg. de peso de fenobarbital sdico (solucin acuosa 20mg/ml), por va oral. En caso de no disponer del frmaco anteriormente sealado, administra pentobarbital sdico a dosis de 40mg/Kg./da, por va intraperitoneal. Los animales testigos recibirn volmenes equivalentes de agua bidestilada. Determinacin de la duracin del efecto hipntico producido por el pentobarbital en ratones tratados previamente con fenobarbital y en ratones testigos. Transcurrido el periodo de pretratamiento, cada equipo de estudiantes trabajar con un grupo de cinco ratones (testigos y pretratados con fenobarbital). Pesa con exactitud a los ratones y adminstrales pentobarbital sdico a dosis de 40mg/Kg., por va intraperitoneal. Mide a cada uno de ellos la duracin de la hipnosis (la duracin del efecto hipntico puede ser cuantificada mediante la prdida del reflejo de enderezamiento; la prdida de este reflejo aparece cuando al colocar al ratn sobre su dorso, ste permanece en esa posicin. RESULTADOS Determina en minutos la duracin del efecto hipntico para cada uno de los ratones. Como ya se menciono, la duracin de este efecto es el tiempo transcurrido desde el momento en que se manifiesta, en el ratn, la prdida del reflejo de enderezamiento hasta que ste comienza a apoyarse sobre su plano de sustentacin (aparicin del reflejo de enderezamiento).
Anota tus resultados en el siguiente cuadro:
Duracin del efecto hipntico producido por el pentobarbital sdico en ratones que recibieron esta droga a dosis de 40mg/Kg., por va intraperitoneal. Ratones utilizados (grupo) Nmero de ratones Peso (g) Duracin de la hipnosis (minutos)
PROMEDIOS
Recopila los resultados de todos los equipos de trabajo y, junto con los tuyos, antalos en el cuadro siguiente,
Duracin de la hipnosis producida por el pentobarbital sdico (40mg/kg, va IP) en ratones tratados previamente con fenobarbital (100mg/kg/da durante cinco das, va oral), as como en animales testigos. Ratones utilizados Nmero de equipo Peso medio (g) Valor medio de hipnosis (minutos)
Testigos
PROMEDIOS
TRATADOS
PROMEDIOS
Utilizando un diagrama de barras, compara la duracin de la hipnosis entre el grupo de animales testigos y el grupo de ratones tratados previamente con fenobarbital. Utiliza para ello los valores promedios. En tu reporte de actividades, adems de incluir la informacin anteriormente descrita (cuadros y diagramas de barras), da una explicacin del fenmeno analizado en el laboratorio y contesta las siguientes preguntas: Mediante un estudio in Vitro. Cmo demostraras la induccin enzimtica de ratones pretratados con fenobarbital? Cul es el significado de los trminos inductor enzimtico e inhibidor enzimtico, y cules son las consecuencias teraputicas derivadas de la administracin de estas substancias? Investiga los medicamentos que actualmente se conoce que actan como inductores enzimticos y los que funcionan como inhibidores enzimticos.
DETERMINACIN DE LOS PRAMETROS FARMACOCINTICOS DE UN MEDICAMENTO.
La velocidad con la que un frmaco es eliminado del organismo depende de la velocidad con la cual sea biotransformado y de la velocidad con la que sea excretado a travs de su ruta o rutas de eliminacin. Ambos procesos, biotransformacin y excrecin, contribuyen pues a la eliminacin de los frmacos. Para muchos frmacos, los cambios de su concentracin en sangre reflejan los cambios en la cantidad de frmaco presente en el organismo. De esta manera, la velocidad de todos los procesos involucrados en la excrecin de un frmaco puede ser determinada midiendo la velocidad con la que disminuyen las concentraciones sanguneas del medicamento.
OBJETIVO.- Que el alumno determine el orden del proceso de eliminacin, la vida media biolgica (t ) y la constante de eliminacin (Kel) de la sulfacetamida sdica, utilizando las concentraciones en sangre de este medicamento.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO.
Vas de eliminacin de los medicamentos. Cinticas de eliminacin de orden cero y de primer orden. Conceptos de vida media y constante de eliminacin. Funciones exponenciales y logartmicas.
MATERIAL (por equipo):
jeringas de 5.0 y 3.0ml aguja No 21 ( No 23) navaja de rasurar ocho vasos de precipitados de 50ml nueve matraces Erlenmeyer de 25ml ocho matraces Erlenmeyer de 50ml probeta de 50ml tres embudos diez discos de papel de papel filtro pipeta graduada de 10ml pipeta volumtrica de 10ml tres pipetas volumtricas de 1ml conejo de aproximadamente 2.5kg soluciones requeridas: - Heparina 5000UI/ml u oxalato de sodio al 15%(en agua). - cido tricloroactico (TCA) al 15% (en agua). - Nitrito de sodio al 0.1% al 15% (en agua). - Diclorhidrato de N-(1-naftil) etilendiamina al0.1%( en agua, prepararlo inmediatamente antes de usarlo y colocarlo en frasco mbar). - Sulfamato de amonio al 0.5% (en agua). - Sulfacetamida sdica al 10% (sulfacetamid). DESARROLLO.
1. Administracin de la sulfacetamida sdica. Registra el peso del conejo y calcula el volumen de la solucin de sulfacetamida que vas a administrar para una dosis de 0.1g/kg. Rasura la vena marginal de la oreja y administra el frmaco por esta va. Antes de administrar la sulfa, toma una muestra de sangre (blanco).
OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE (PUNCIN CARDACA). - Hepariniza una jeringa limpia de 5.0ml. - Rasura la zona que vas a emplear para tomar las muestras de sangre. - Mediante una puncin cardiaca, extrae 2.5ml de sangre. - Coloca 2.0ml de sangre en un matraz Erlenmeyer de 50ml que contenga 30ml de agua destilada (rotula el matraz con el tiempo de la muestra), agita suavemente. Las muestras de sangre debern ser tomadas a los 5, 10, 20, 30, 60, 90 y 120 minutos despus de haber administrado la sulfacetamida. Cada muestra de sangre se mezclar con el agua de acuerdo a lo anteriormente descrito.
DETERMINACIN DE SULFACETAMIDA EN SANGRE.
Ala mezcla que contiene 2.0ml de sangre y 30ml de agua, agrega 8.0ml de cido tricloroactico (al 15 %) y filtrar. Marca, con el nmero o letra correspondiente a la muestra, el matraz que contiene el filtrado. Coloca 10ml. Del filtrado en un matraz Erlenmeyer de 25ml. Agrega 1.0ml de la solucin de nitrito de sodio (al 0.1%), tres minutos despus, agrega 1.0ml de la solucin de sulfamato de amonio (0.5%). Dos minutos ms tarde, agrega 1.0ml de la solucin de N-(1-naftil) etilendiamina (0.1%). Rotula el matraz con el nmero o letra correspondiente. En un fotocolormetro, determina la densidad ptica de la solucin anterior, a 545nm.
RESULTADOS. Anota en el cuadro siguiente tus resultados.
Concentraciones de sulfacetamida sdica en muestras de sangre obtenidas de un conejo que recibi una dosis de 0.1/Kg., por va intravenosa. Las muestras de sangre fueron tomadas durante los primeros 120minutos, despus de haber administrado el frmaco.
Nmero de la muestra Tiempo (min.) Sulfa en sangre (/ml) % de la concentracin sangunea inicial 1 0* 0 0 2 5
3 10
4 20
5 30
6 60
7 90
8 120
*Muestra obtenida inmediatamente antes de administrar la sulfacetamida, se usar como blanco.
En un sistema de coordenadas lineales, grafica la concentracin de la sulfa en sangre como una funcin del tiempo (minutos). Con estas mismas variables construye una grafica de tipo semilogaritmica, es decir, grafica el logaritmo de la concentracin de la sulfa en sangre en funcin del tiempo (minutos). A partir de las grficas y datos anteriores, determina el orden del proceso de eliminacin, el tiempo de vida media (t ) y la constante de eliminacin de la sulfacetamida sdica. Compara tus resultados con los resultados obtenidos por los otros equipos de trabajo. En tu reporte de actividades, adems de incluir toda la informacin anterior, describe el anlisis matemtico para un proceso de eliminacin de primer orden.
BIBLIOGRAFIA
- Bratton A.C. y Marshall E.K.: A New Coupling Component for sulphanilamide Determination. J.Bio. Chem., 128:537-550, (1939). - Du Souich Patricio: La farmacocintica, una ciencia al servicio de la teraputica. Mundo Cientfico, Vol.6, N 59, pgs.646-650, (1987). - Garret E.R.: The pharmacokinetic bases of biological response: Quantification in Toxicology, Pharmacology and Pharmacodynamics; Prog. Drug Res., 21:105-230,- (1977). - Golstein, A. Aronow L. y Kalman S.: Farmacologa, pgs.149-424, 2 Edicin, Edit.Limusa, (1978), pg.149-424. - Lehman F.Pedro: Anlisis farmacocintica de la eficacia de medicamentos: logros y limitaciones; Ciencia, 32:97-106, (1981). - Levine R.: Farmacologa, acciones y reacciones medicamentosas: 2 edicin, Edit. Salvat, (1982), pgs. 49-263. - Notari R.E.: Biopharmaceuticas and Pharmacokinetics; Marcel Dekker, Inc., N.Y., (1971), pgs. 1.186. - Ritschel W.A.: Laboratory Manual of Biopharmaceuticas and Pharmacokinetics, University of Cincinnati, USA, (1974), pgs.199-216. - Valdecasas F.G. y cols.: Bases farmacolgicas de la teraputica medicamentosa. 1 edicin. Edit. Salvat (1977), pgs 9-91. - Van Rossum J.M.: La farmacocintica, bases para una farmacoterapia adecuada. En avances en teraputica 4:160, Laporte y Salvat Eds., Edit. Salvat, (1973).
RELACION DOSIS-EFECTO GRADUAL
El propsito fundamental de la farmacometra consiste en establecer con exactitud la relacin entre la dosis de un frmaco y la actividad biolgica producida por ste. Esta relacin expresada grficamente constituye la llamada curva dosis-efecto. Es necesario sealar que la relacin entre la dosis de un frmaco y el efecto obtenido no es constante, in vivo, entre las distintas especies de animales y ni siquiera entre los individuos de una misma especie. Sin embargo, in Vitro, esa relacin es mucho ms constante, debido a que se eliminan algunos factores que modifican la cantidad del frmaco disponible para ejercer su accin a nivel de la biofase. Finalmente, vale la pena mencionar que la relacin entre la dosis y la respuesta puede ser de dos tipos: en el primero de ellos, la respuesta o el efecto obtenido es gradual y va desde un valor mnimo hasta un valor mximo, de tal forma que la magnitud de la respuesta depende de la dosis del frmaco en estudio; en el segundo caso, la respuesta es de tipo cuntico, es decir, est presente o ausente, y la proporcin de respuestas positivas en el nmero total de ensayos depende de la dosis administrada.
OBJETIVOS.- Que el estudiante verifique el efecto de dosis crecientes de la acetilcolina sobre el msculo recto anterior de la rana: relacione el fenmeno observado con los postulados de la teora de la ocupacin y determine el efecto mximo (contraccin mxima) producido por este neurotransmisor.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO. Diferencias entre respuestas graduales y respuestas del tipo todo o nada. Accin de la acetilcolina sobre la placa neuromuscular. Teora de la ocupacin.
MATERIAL (por equipo)
Fisigrafo Transductor B (migrafo) Cmara para rgano aislado Conexin de vidrio en Y Bomba burbujeadota de aire Madera recubierta de corcho(mesa de diseccin) Pipeta Pasteur con bulbo Pipeta volumtrica de 2.0ml Pipeta de 1.0ml (graduada en centsimas) Tapn de hule para cmara de rgano aislado Frasco de vidrio con salida en la parte inferior Una rana Caja petri Soporte Pinzas universales Tijeras de corte fino Manguera de hule (conexiones) Cuatro alfileres Hilo Tubo de ensaye chico Estilete
SOLUCIONES (por cada preparacin) Ringer-rana glucosado .. 2 lts. Solucin patrn de acetilcolina: 30g / ml 10ml (dilucin con Ringer-rana). La solucin de acetilcolina debe ser recientemente preparada.
DESARROLLO.
Mientras uno de los estudiantes calibra el fisigrafo, otro destruir el encfalo y la mdula espinal de la rana con el estilete, y disecar, cuidadosamente, el msculo recto anterior (abdominal). Coloca el msculo disecado en la cmara para rgano aislado: uno de los extremos del msculo se fija en el tapn de hule de la cmara y el otro se sujeta en la palanca del migrafo. Agrega la solucin ringer y acopla de inmediato el burbujeador de aire. Registra la respuesta del msculo de la rana hacia la acetilcolina, utilizando las soluciones siguientes (comienza colocando la de menor concentracin y termina con la mayor concentracin):
Solucin de acetilcolina 0.1g / ml. Solucin de acetilcolina 0.2 g / ml. Solucin de acetilcolina 0.4 g / ml. Solucin de acetilcolina 1.0 g / ml. Solucin de acetilcolina 2.0 g / ml. Solucin de acetilcolina 5.0 g / ml.
NOTA: Registra el efecto de cada una de las dosis anteriores durante un minuto. Antes de administrar una nueva solucin de acetilcolina, lava la preparacin cuando menos dos veces en un lapso de cuatro minutos. Se recomienda dejar en la cmara un volumen basal de Ringer-rana (aproximadamente 40 ml, para una cmara de 50ml) y agregar los volmenes de solucin patrn de acetilcolina necesarios para obtener las concentraciones de las soluciones anteriormente descritas. En todos los casos, el volumen final de las soluciones empleadas siempre debe de cubrir por completo al msculo de la rana (mantener en la cmara, un mismo nivel final de solucin).
RESULTADOS Anota tus resultados en el siguiente cuadro, (a la concentracin mxima obtenida se le asigna el valor del 100% de efecto).
Relacin Dosis-Efecto gradual para la acetilcolina, en el msculo recto anterior de la rana. Concentracin de acetilcolina (g / ml ) Logaritmo de la concentracin Amplitud de la respuesta (mm) % Efecto
1) En un papel milimtrico, grafica la amplitud de la respuesta como una funcin de la dosis. Grafica tambin el % del efecto en funcin del logaritmo de la dosis. 2) Entrega por escrito los resultados, as como su anlisis e interpretacin.
BIBLIOGRAFIA
Arins, Lehman y Simonis: Introducin a la Toxicologa General, 1. Edicin, Edit. Diana (1978). Pgs. 169-186. Day Michael: Farmacologa del Sistema Nervioso Autnomo. 1 Edicin, Edit. El manual Moderno, (1981), pgs. 58-78. Fisher N. y Westfall T.: Agentes Bloqueadores Neuromusculares y Drogas Contra la Espasticidad (en Farmacologa Mdica de Craig y Stitzel), 1 Edicin, Edit. Interamericana, (1984). Pgs 215-225. Levine Ruth: Pharmacology, Drug Actions and Reactions. 2 nd . Edition, Little Brown and Conpany, (1978). Pgs. 169-203. Palmer Taylor: Agentes anticolinestersicos (en las Bases Farmacolgicas de la Teraputica de Goodman y Gilman): 6 Edicin, Edit. Panamericana, (1981). Pgs. 114-132. Personal del Department of Pharmacology. Pharmacological Experiments on Isolated Preparations. 2 nd . Edition, University of Edinburg, (1971). Pgs. 42,43 y 48. Surez Kurtz Guilherme: Clcio e Contracao Muscular; Ciencia Hoje,Vol.2, (1984). Pgs. 66-71.
AGENTES ANTICOLINESTERASICOS
Las colinesterasas son un grupo de enzimas que comparten la propiedad de hidrolizar sustancias que contienen grupos ster, aunque difieren entre ellas en cuanto a la especificidad de sus sustratos. Los efectos fisiolgicos de la acetilcolina terminan en el organismo con la hidrlisis del enlace ster de la molcula del neurotransmisor, hidrlisis realizada por una enzima denominada acetilcolinesterasa. Existe otro grupo de enzimas semejantes a la anterior denominadas en conjunto seudocolinesterasas, que se encuentran en el plasma, intestino y algunos otros tejidos. La funcin de las pseudocolinesterasas no es bien conocida. Sin embargo, de la misma manera que la acetilcolinesterasa, las pseudocolinesterasas hidrolizan con relativa facilidad a la acetilcolina. Se han producido compuestos que compiten con la acetilcolina por el sitio activo de la acetilcolinesterasa o de las pseudocolinesterasas y que inhiben estas enzimas porque forman complejos ms estables con ellas. Estos frmacos se conocen como agentes anticolinestersicos y se dividen en dos grupos, reversibles e irreversibles, de acuerdo a la estabilidad del complejo formado con las enzimas mencionadas. Los agentes anticolinestersicos ejercen efectos semejantes a los producidos por la estimulacin de las fibras nerviosas colinrgicas (que liberan acetilcolina en sus terminaciones), ya que al evitar la hidrlisis de la acetilcolina, permiten que sta se acumule en el espacio sinptico, aumentando de esta manera la intensidad y la duracin de su interaccin con su sitio receptor (sinapsis colinrgicas autnomas, unin neuromuscular y sistema nervioso central).
OBJETIVOS. Demostrar la capacidad de la fisostigmina o de la neostigmina para inhibir a la seudocolinesterasa plasmtica.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO. Fisiologa del sistema nervioso autnomo. Funcin y localizaciones de las colinesterasas. Clasificacin y mecanismo de accin de los medicamentos parasimpaticomimticos.
MATERIAL (por equipo)
- fisigrafo - cmara para rgano aislado - gradilla - caja de petri - bomba para burbujear aire - material de diseccin - centrfuga clnica - jeringa 5.0ml (estril) - estilete - pipeta de 1.0 ml (graduada en centsimas) - pipeta volumtrica de 2.0 ml - frasco de vidrio con salida en la parte inferior - tapn de hule para cmara de rgano aislado - madera recubierta de corcho - transductor B (migrafo) - conexin de vidrio en Y - cuatro tubos de ensayo de 5.0ml - soporte, pipeta Pasteur y bulbo - pinzas universales - manguera de hule (conexiones) - hilo y cuatro alfileres - una rana mediana
SOLUCIONES Y FARMACOS REQUERIDOS
- Ringer-rana glucosado (por cada preparacin) ------------------------ 2 litros - Acetilcolina 10g / ml ------------------------------------------------------ 100 ml - Fisostigmina 100 g / ml -------------------------------------------------- 10 ml - Suero, aproximadamente 1.5 ml (por cada preparacin). - Heparina 1,000 U / ml) o solucin de citrato de sodio al 4%.
NOTA La neostigmina puede reemplazar a la fisostigmina utilizndola a las mismas concentraciones. Tanto la fisostigmina como la acetilcolina se preparan en Ringer-rana. Por otra parte, el plasma puede ser utilizado en vez del suero, su origen no representa un factor de importancia, pudiendo ser de humano o de cualquier otro mamfero.
DESARROLLO Mientras uno de los estudiantes calibra el fisigrafo, otro disecar con cuidado el msculo recto anterior (abdominal) de la rana y lo colocar en la cmara para rgano aislado. Simultneamente, seleccionar de cada equipo de trabajo un voluntario sano y obtener de l (con jeringa y aguja estriles y heparinizadas) 5.0ml de sangre. Colocar la sangre en un tubo de ensayo y centrfugar a 2 000 rpm, durante 5 minutos. Separar el plasma para utilizarlo en el momento oportuno.
a) Registra las respuestas del msculo de la rana hacia la acetilcolina, utilizando soluciones de diferentes concentraciones: 0.2, 0.4 y 0.8 g / ml. Para ello, utiliza la solucin patrn de acetilcolina (10 g / ml). Selecciona la solucin con cuya concentracin obtengas respuestas de buen tamao (cuantificables) y que sean reproducibles. Lava el msculo de la rana con la solucin Ringer, y registra el efecto de la solucin seleccionada de acetilcolina sobre el msculo, durante un minuto. Vuelve a lavar con la solucin Ringer al msculo colocado en la cmara. b) Mezcla el volumen de la solucin patrn de acetilcolina (necesario para obtener en la cmara la concentracin de acetilcolina seleccionada en el inciso anterior) con 1.0 ml de plasma o suero; deja la mezcla en reposo durante 5 minutos, y a continuacin agrgala en la cmara para rgano aislado. Registra la accin de la mezcla sobre el msculo durante 3 minutos. Se obtendr una respuesta muy pequea, o ninguna, mostrndose as que el plasma (o suero) cataliza la destruccin de la acetilcolina. c) Finalmente, mezcla 1.0ml de plasma con 1.0ml de la solucin de fisostigmina, seguido por la adicin del volumen de la solucin patrn de acetilcolina que se ha estado utilizando. La mezcla permanece en reposo durante 5 minutos y despus se agrega a la cmara. se obtendr una gran respuesta, mayor an que la respuesta original (inciso a). registra este efecto durante 3 minutos. La fisostigmina no solamente previene la destruccin de la acetilcolina realizada por las colinesterasas plasmticas, sino que bloquea tambin a la enzima presente en el msculo recto de la rana.
La magnitud con que es potenciada la accin de la acetilcolina puede ser cuantificada al encontrar la concentracin de acetilcolina que produzca respuestas aproximadamente iguales a las del caso anterior. Cuando la preparacin la preparacin es tratada con fisostigmina, la recuperacin es muy lenta y muchas veces es necesario prolongar los intervalos de tiempo hasta 10 minutos entre las dosis.
RESULTADOS
Utilizando un diagrama de barras, compara la amplitud de las contracturas de recto abdominal de la rana para cada una de las mezclas anotadas en el cuadro siguiente
Respuestas del msculo recto anterior de la rana para diferentes mezclas de acetilcolina SOLUCIN O MEZCLA AMPLITUD DE LAS CONTRACTURAS MUSCULARES (mm) Acetilcolina
Acetilcolina + Plasma
Acetilcolina + Fisostigmina + Plasma
En tu reporte de trabajo entrega la informacin que a continuacin se indica: El diagrama de barras, anteriormente sealado. Anlisis e interpretacin de los resultados obtenidos. Clasificacin y funcin de las colinesterasas. Mecanismo de accin de la fisostigmina.
BIBLIOGRAFIA Arins, Lehman y Simonis: Introducin a la Toxicologa General, 1. Edicin, Edit. Diana (1978). Pgs. 169-186. Day Michael: Farmacologa del Sistema Nervioso Autnomo. 1 Edicin, Edit. El manual Moderno, (1981), pgs. 58-78. Fisher N. y Westfall T.: Agentes Bloqueadores Neuromusculares y Drogas Contra la Espasticidad (en Farmacologa Mdica de Craig y Stitzel), 1 Edicin, Edit. Interamericana, (1984). Pgs 215-225. Levine Ruth: Pharmacology, Drug Actions and Reactions. 2 nd . Edition, Little Brown and Conpany, (1978). Pgs. 169-203. Palmer Taylor: Agentes anticolinestersicos (en las Bases Farmacolgicas de la Teraputica de Goodman y Gilman): 6 Edicin, Edit. Panamericana, (1981). Pgs. 114-132. Personal del Department of Pharmacology. Pharmacological Experiments on Isolated Preparations. 2 nd . Edition, University of Edinburg, (1971). Pgs. 42,43 y 48. Surez Kurtz Guilherme: Clcio e Contracao Muscular; Ciencia Hoje,Vol.2, (1984). Pgs. 66-71. BLOQUEADORES NEUROMUSCULARES
Como ya fue mencionado, la actividad del msculo esqueltico est regulada por impulsos nacidos en el sistema nervioso central y por sistemas locales de control que operan a nivel de la terminal nerviosa. Por lo tanto, el sistema complejo que regula la funcin muscular es susceptible de modificacin o alteracin en diferentes niveles. La transmisin neuromuscular en la placa motora puede ser bloqueada experimentalmente por frmacos del tipo curare y por diversas sustancias con grupos qumicos semejantes a los de la molcula de acetilcolina. Ello les permite combinarse con los receptores nicotnicos de la acetilcolina en la placa motora. La ocupacin de estos receptores impide acceso y, consecuentemente, el efecto de la acetilcolina en el proceso de la contraccin muscular. El bloqueo de la transmisin neuromuscular tambin puede ser producido por medicamentos que despolarizan persistentemente la membrana de la placa motora. Por lo tanto, los bloqueadores neuromusculares son frmacos que interrumpen la transmisin del impulso del nervio motor al msculo esqueltico, provocando parlisis y relajacin muscular. Muchos bloqueadores neuromusculares son compuestos de amonio cuaternario, altamente ionizados, y constituyen generalmente bases fuertes. Desde el punto de vista farmacolgico, estas sustancias se clasifican como agentes de bloqueo competitivo y compuestos despolarizantes. El principal empleo de los bloqueadores neuromusculares es en la anestesia quirrgica como relajantes musculares.
OBJETIVOS
Analizar el efecto de un frmaco de bloqueo competitivo (tubocurarina) y de un frmaco despolarizante (succinilcolina) sobre el msculo recto abdominal de la rana.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO
Fisiologa y bioqumica de la placa neuromuscular. Clasificacin y mecanismos de accin de los bloqueadores neuromusculares.
MATERIAL (por equipo) fisigrafo transductor B (migrafo) cmara de rgano aislado conexin de vidrio en Y una caja petri pipeta Pasteur con bulbo tres pipetas de 1.0 ml (graduadas en centsimas). Una pipeta volumtrica de 5.0ml Soporte y pinzas universales (o pinzas para bureta) Bomba para burbujear aire Tijeras de corte fino Manguera de hule para conexiones Cuatro alfileres Hilo y estilete Frasco de vidrio con salida en la parte inferior Tapn de hule para cmara de rgano aislado Madera recubierta de corcho
SOLUCIONES Y FRMACOS REQUERIDOS
Ringer-rana glucosado (por cada preparacin) ------------- 2 lts. Acetilcolina 10 g / ml ----------------------------------------- 100 ml Succinilcolina 25 g / ml -------------------------------------- 50ml (+) Tubocurare 78.6 g / ml --------------------------------- 10 ml
NOTA Disolver estos frmacos en Ringer-rana. La acetilcolina debe ser de preparacin reciente.
DESARROLLO
Mientras uno de los estudiantes calibra el fisigrafo, otro disecar con cuidado el msculo recto anterior de la rana y lo colocar en la cmara para rgano aislado.
a) Registra respuestas del msculo de la rana hacia la acetilcolina, utilizando las soluciones de diferentes concentraciones: 0.2, 0.4 y 0.8 g / ml. Para ello. Utiliza la solucin patrn de acetilcolina (10 g / ml). Selecciona la solucin con cuya concentracin obtengas respuestas de buen tamao (cuantificables) y que sean reproducibles. Lava el msculo de la rana con la solucin seleccionada de acetilcolina sobre el msculo, durante 1 minuto. Lava nuevamente el msculo con la solucin Ringer. b) Compara las respuestas anteriores con las que produce la succinilcolina. Para ello, utilizando la solucin patrn de succinilcolina (25g /ml), registra las respuestas del msculo de la rana con diferentes concentraciones: 1.0, 2.0 y 3.0 g/ml. Selecciona la solucin con cuya concentracin obtengas respuestas cuantificables y reproducibles. Lava el msculo de la rana con la solucin Ringer, registra el efecto de la solucin seleccionada de succinilcolina sobre el msculo durante 1 minuto. Lava nuevamente el msculo con la solucin Ringer. Observa que la forma de las respuestas es diferente de las producidas por la acetilcolina y que la preparacin tarda ms tiempo en recuperarse. Si es necesario, cuando utilices succinilcolina extiende a 10 minutos el intervalo entre dosis. c) Una vez seleccionadas las concentraciones de las soluciones de acetilcolina y de la succinilcolina que producen respuestas de buen tamao (cuantificables), investiga las respuestas producidas por estas sustancias cuando el msculo se encuentra baado por una solucin de tubocurarina de 7.86 g/ml. Para ello, toma 5ml de la solucin patrn de tubocurarina (78.6 g/ml) y llvalos a un volumen final de 50ml con Ringer-rana. Utiliza esta solucin para lavar la preparacin y para probar el efecto de los agonistas previamente utilizados. Lo anterior significa que debes de repetir los registros parra las concentraciones seleccionadas de acetilcolina y de succinilcolina (incisos a y b), cuando el msculo se encuentra inmerso en una solucin de tubocurarina de 7.86 g/ml. En presencia del antagonista competitivo, se modifica la magnitud de las respuestas producidas por los agonistas?
RESULTADOS Utilizando un diagrama de barras, compara la amplitud de la contraccin (expresada en milmetros) del recto abdominal de la rana para la acetilcolina y la succinilcolina antes y despus de agregar la tubocurarina (antagonista competitivo). En un reporte de actividades entrega la informacin que a continuacin se indica: El diagrama de barras anteriormente sealado. Anlisis e interpretacin de los resultados obtenidos. Mecanismo de accin de la tubocurarina y de la succinilcolina.
BIBLIOGRAFA
- Arins, Lehman y Simonis: Introduccin a la Toxicologa General, 1 Edicin, Edit. Diana (1978). Pgs. 169-186. - Day Michael: Farmacologa del Sistema Nervioso Autnomo. 1 Edicin, Edit. El Manual Moderno, (1981), pgs. 58-78. - Fisher N. y Westfall T.: Agentes Bloqueadores Neuromusculares y Drogas Contra la Espasticidad (en Farmacologa Mdica de Craig y Stitzel), 1 Edicin, Edit. Interamericana, (1984). Pgs. 215-225. - Levine Ruth: Pharmacology, Drug Actions and Reactions. 2 nd . Edition, Little Brown and Company, (1978). Pgs. 169-203. - Palmer Taylor: Agentes Anticolinestersicos (en las Bases Farmacolgicas de la Teraputica de Goodman y Gilman): 6. Edicin, Edit. Panamericana, (1981). Pgs. 114-132. - Personal del Department of Pharmacology. Pharmacological Experiments on Isolated Preparations. 2 nd . Edition, University of Edinburg, (1971). Pgs. 42,43 y 48. Surez Kurtz Guilherme: Clcio e Contracao Muscular; Ciencia Hoje, Vol. 2, (1984). Pgs. 66-71.
ANESTESICOS LOCALES
Introduccin.- Los anestsicos locales constituyen un grupo de frmacos que se caracterizan por bloquear reversiblemente la conduccin del impulso nervioso en los axones y su generacin en los receptores sensitivos. La accin de estas sustancias se ejerce no solo sobre los elementos nerviosos antes mencionados, sino tambin sobre otras estructuras excitables, como son, por ejemplo, la unin neuromuscular , las sinapsis centrales, y perifricas y el tejido especializado de conduccin del msculo cardiaco. Estas drogas se aplican a las races o troncos nerviosos o son infiltradas en una zona del cuerpo para producir anestesia local, esto es, la anestesia de una regin del organismo sin la perdida de la conciencia que acompaa a la anestesia general. Todos estos frmacos son compuestos potencialmente txicos una vez que han sido absorbidos. Objetivos. Determinar la secuencia y la duracin de la perdida de la sensibilidad por la administracin de anestsicos locales, empleando el mtodo de infiltracin.
Conocimientos previos: a- Clasificacin y funcin de las fibras nerviosas. b- Mecanismo de accin de los anestsicos locales. c- Mtodos para producir la anestesia local.
Material y soluciones (por equipo): - 3 jeringas de 1ml con aguja No. 25 estriles. - 1 isopo. - 2 varillas de vidrio(en punta) - 1 aplicador de madera en punta - 1 marcador - 1 parrilla elctrica un bao Mara - 2 vasos de precipitado de 250ml - Hielo - Jabn y toallas desechables - Xylocana al 2% (frasco cerrado y estril). - Xylocana al 2% c/epinefrina (frasco cerrado y estril). - Solucin salina 0.9% (frasco cerrado y estril).
Desarrrollo. Para la realizacin de la prctica se requiere de uno o ms voluntarios por equipo: 1- Limpie la piel de la cara anterior del antebrazo de o los voluntarios con agua y jabn. 2- Marque tres crculos de aproximadamente 2cm de dimetro. 3- Dentro de cada uno de los crculos anteriores infiltre por va intradrmica, una de las siguientes soluciones; a) 0.1ml de xylocana al 2% b) 0.1ml de xylocana al 2% c/ epinefrina c) 0.1ml de solucin salina 0.9% 4- Anote la hora en que aplica cada una de las soluciones anteriores. 5- Realice la sensibilidad al tacto con el hisopo, la sensibilidad a la temperatura se determina con una varilla previamente calentada en agua, con una varilla de vidrio, fra (aproximadamente 40C y 0C respectivamente), finalmente, la prueba de la sensibilidad al dolor se determina pinchando levemente con el aplicador de madera en punta. 6- Las pruebas de la sensibilidad al tacto, a la temperatura y al dolor se llevan a cabo dentro de cada uno de los crculos con los intervalos de tiempo sealados en el cuadro siguiente
RESULTADOS. En el cuadro siguiente haga las anotaciones pertinentes utilizando la clave que a continuacin le es dada: (+) = presencia de sensibilidad (-) = ausencia de sensibilidad T = tacto D = dolor C = calor F = fro
Efecto de la infiltracin intradrmica de xylocana sobre la percepcin de estmulos cutneos. TIEMPO (minuto) XYLOCAINA 2% XYLOCAINA 2% CON EPINEFRINA SOLUCIN SALINA 0.9%
T D C F T D C F T D C F 5
10
15
20
30
40
50
60
65
70
75
80
85
90
a- Determine la hora en que se pierden las sensibilidades trmicas (fro y calor) tacto y dolorosa, as como el tiempo en que se recuperan estas mismas sensibilidades. Con estos datos, obtenga la duracin de la anestesia, en cada uno de los crculos, sobre las sensibilidades analizadas.
b- Analice la duracin de la anestesia en el cuadro siguiente: Duracin de la anestesia local sobre la sensibilidad cutnea al emplear como agente anestsico la xylocana y la xylocana c/ epinefrina. Se emplea como testigo la infiltracin de solucin salina al 0.9%. SENSIBILIDAD XYLOCAINA 2% XYLOCAINA C/EPINEFRINA SOLUCION SALINA 0.9% TACTO
DOLOR
CALOR
FRO
c- En tu reporte de trabajo explica: - Las diferencias que hayas encontrado en la duracin de la anestesia al infiltrar xylocana y xylocana c/epinefrina. - Reporta tambin el orden en que se perdieron las sensibilidades (trmica, tctil y dolorosa) y da una explicacin de este fenmeno. - La accin de los anestsicos locales sobre la membrana de las fibras nerviosas.
FRMACOS ANTICOAGULANTES
INTRODUCCIN.- El proceso de coagulacin de la sangre, fenmeno caracterizado por una serie de reacciones en las que participan un gran nmero de protenas o factores, as como tambin iones de Ca++ y que conducen a la formacin del cogulo de fibrina, puede ser interferido a diferentes niveles por las drogas conocidas como agentes anticoagulantes. Estos medicamentos constituyen una herramienta farmacolgica que puede ser utilizada por el mdico para prevenir en sus pacientes la trombosis venosa o la embolia pulmonar. Su empleo, sin embargo, debe ser acompaado de pruebas de laboratorio, como la determinacin del tiempo de protrombina, para medir los niveles plasmticos teraputicos y evitar las sobredosificaciones que pueden originar en los pacientes desde sangrados ligeros hasta algo tan grave como una hemorragia cerebral intensa.
OBJETIVO
Estudiar, in Vitro, la accin anticoagulante de diferentes drogas, utilizando sangre de humano y midiendo el tiempo de protrombina.
CONOCIMIENTOS PREVIOS DEL ALUMNO.
Mecanismo de coagulacin de la sangre. Clasificacin, sitios y mecanismos de accin de las drogas anticoagulantes.
MATERIAL (por equipo).
Tubos de ensayo chicos (10). Gradilla Pipetas de 1ml. Graduadas (1/100): 7 Jeringa de 5ml. (estril y con aguja) Papel parafilm Pipetas Pasteur (2) Bulbo para pipeta Pasteur Centrfuga clnica Cronmetro Bao de agua de temperatura graduable Termmetro Aplicadores de madera (2)
Soluciones Salina isotnica (NaCl 0.9%). Citrato trisdico al 3.8% Heparina sdica al 0.1% Warfarina sdica al 1.0% Equipo para la determinacin del tiempo de protrombina (Lafon, Sigma, Merck, etc.) DESARROLLO
De los procedimientos utilizados para el estudio de la coagulacin de la sangre, el tiempo de protrombina es una de las pruebas que se utilizan con ms frecuencia. Aunque es un procedimiento muy sencillo, est sujeto a numerosas variables y causas de error. Para evitar variaciones en los resultados deben tomarse las siguientes precauciones:
La cristalera debe de estar limpia y libre de raspaduras o marcas de uso. Todos los tubos, pipetas y jeringas debern estar secos. La temperatura del bao de agua debe mantenerse constante (37 C) mientras se hace la prueba. Mezclar la sangre con el anticoagulante en cantidades exactamente medidas. Es necesario evitar la hemlisis, y cuando se requiere plasma, centrifugar de inmediato la sangre y separar cuidadosamente el plasma. Una vez obtenida la muestra es preciso realizar la prueba lo ms pronto posible, evitando que el plasma e los reactivos permanezcan ms de 15 minutos a 37 C en el bao de agua antes del desarrollo de la prueba. Determinacin del Tiempo de Protrombina (Mtodo de Quick): Rotula cuatro tubos de ensayo y coloca en cada uno de ellos 0.1 ml. de una de las soluciones siguientes: solucin salina isotnica (tubo 1), citrato trisdico al 3.8% (tubo 2), heparina al 0.1% (tubo 3) y warfarina (tubo 4). De un voluntario sano, obtenga sangre por puncin venosa (5ml) y coloca de inmediato 0.9ml. de la mustra obtenida, en cada uno de los tubos anteriormente descritos. Mezcla cuidadosamente el contenido de los tubos utiliza papel parafilm para taparlos) y djalos en reposo durante 15 minutos. Transcurrido el tiempo anteriormente descrito, observa lo ocurrido y descarta y anota los tubos en los tubos en los que ha habido coagulacin. En seguida, centrfuga los tubos en los que no ha habido coagulacin. En seguida, centrfuga los tubos en los que no ha habido coagulacin a 2,000 rpm durante 5 minutos. Transfiere el plasma, utilizando pipeta Pasteur, a tubos de ensayo secos, limpios y rotulados. Realiza la siguiente prueba con cada una de las muestras de plasma: Colocar en un tubo de ensayo 0.1ml de tromboplastina activada e incubar en bao de agua a 37 C durante 3 minutos. Luego se agrega: 0.1ml de plasma y se mantiene la mezcla en incubacin durante un minuto ms para igualar las temperaturas. Manteniendo el tubo en el bao, agregar rpidamente 0.1ml de solucin de CaCl2 0.02M. Simultneamente, poner en marcha el cronmetro. Meclar suavemente el tubo y manteniendo su fondo dentro del agua, detn la marcha del cronmetro en el momento en que se observa la formacin de un cogulo gelatinoso (si es necesario, utiliza un aplicador de madera para determinar el momento en que el cogulo ha sido formado). Anota el tiempo transcurrido para que el plasma coagule y observa y anota tambin el tubo en donde no apareci el fenmeno de la coagulacin.
RESULTADOS
Anota las observaciones y los datos que hayas obtenido durante el desarrollo de este estudio, utilizando para ello el siguiente cuadro.
Tubos (nmero y solucin empleada) Coagulacin a los 15 (sin adicin de CaCl2)* Coagulacin al adicionar CaCl2* Tiempo de protrombina (seg.) 1) Solucin salina
2) Citrato de sodio
3) Heparina sdica
4) Warfarina sdica
* Presente (+) o ausente (-)
TRABAJO A DESARROLLAR
En tu reporte de actividades, adems de incluir el cuadro anteriormente descrito, realiza el trabajo que a continuacin se te indica: Investiga y describe la serie de reacciones que intervienen en la coagulacin extrnseca e intrnseca. Dentro de este esquema incluye el sitio de accin de los frmacos anticoagulantes. Explica el mecanismo de accin de los agentes anticoagulantes. Seala la razn por la que la warfarina sdica no present efecto anticoagulante, in nitro. Seala la razn por la cual, los citratos y oxalatos no pueden ser administrados a un paciente.
BIBLIOGRAFA Quick A. J.: Hemorrhagic diseases and thrombosis 2nd. Edition. Lea and Fabiger, Philadelphia, (1966). Bayardo P.B.: Apuntes de Anlisis Clnicos, Publicaciones de la Universidad de Guadalajara (1975). Barstegui Almagro C.: Esquemas y Prcticas de Farmacologa, 1 Edicin, Editorial Expazs, (1976).