(TRABAJO ENCARGADO: Cultivos microbianos

industriales)

Docente: Ing. Dr. EULER NAVARRO PINEDO

Alumno: Gabriel Irigon Crdova

Cdigo : 112105




2014






CULTIVOS MICROBIANOS INDUSTRIALES

I. INTRODUCCIN
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada.
En general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las
caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la
disponibilidad de nutrientes en el medio.
Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa y
elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de
la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en
auttrofos si es el CO2 atmosfrico (microorganismos que fotosintetizan) y
hetertrofos si utilizan carbono orgnico.
La elaboracin de medios de cultivo requiere proporcionar los elementos antes citados
en una forma asimilable. As, por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono
orgnico para los hetertrofos y como CO2 para los auttrofos, el N en forma de NH
4
,
de NO
3
o de NO
2
o en forma de aminocidos a los que se pueda tomar su grupo
amino. Adems, en ciertos casos, es necesario aadir a los medios de cultivo algunos
aminocidos o vitaminas que determinados tipos de microorganismos no pueden
sintetizar.
Desde tiempos ancestrales se han obtenido productos en cuya fabricacin han
intervenido los microorganismos, aunque no se haya tenido conciencia de ello, como
ocurra con la fabricacin de queso, vino, yogur, cerveza, etc.
La primera prueba de la existencia de microorganismos se debe a los "animlculos
que Leuweenhoek observ gracias a su sistema de lentes en el siglo XVIII. Sin
embargo, no fueron estudiados hasta el siglo siguiente por Pasteur.
Los primeros procesos industriales que aprovecharon la accin de microorganismos
fueron procesos de obtencin de alcohol y cidos lctico y ctrico, entre otros, a
principios del s. XX. La Primera Guerra Mundial potenci la fabricacin de otros
productos necesarios para la guerra por va microbiana, como glicerol o acetona. Sin
embargo, es en la Segunda Guerra Mundial donde la necesidad de antibiticos,
descubiertos poco antes, da el impulso definitivo al estudio de las capacidades
industriales de los microorganismos.
As, en los aos 70 se perfeccionan las tcnicas de inmovilizacin de clulas para
aumentar el rendimiento econmico de los cultivos (en medios slidos, la vida media
de los cultivos es mucho mayor, adems de que facilita la separacin del producto),
as como los cultivos en continuo y el conocimiento en procesos anaerobios.
Existe una amplsima diversidad de microorganismos, entre los que se puede llevar a
cabo casi cualquier reaccin metablica. Sin embargo, y a pesar de su abundancia,
slo unas pocas presentan actualmente inters industrial, por lo que la bsqueda de
una determinada especie con unas ciertas caractersticas es bastante compleja.
Adems, las necesidades industriales son demasiado elevadas, por lo general, para
los microorganismos. Es por ello que las cepas salvajes son sometidas a diversas
alteraciones con el fin de inculcar a stas las caractersticas buscadas. Por ello, las
cepas industriales pueden ser muy diferentes de las salvajes originales, y deben
patentarse en alguna de las colecciones de cultivo existentes por el mundo.
II. OBJETIVOS

Conocer el manejo y conservacin de las cepas microbianas de importancia
industrial.
Recordar la aplicacin industrial de cada tipo de microorganismo en la industria
alimenticia.

III. REVISIN BIBLIOGRFICA
CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas,
qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada.
En general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las
caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la
disponibilidad de nutrientes en el medio.

MEDIOS DE CULTIVO
Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa y
elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares. Dependiendo de
la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en
auttrofos si es el CO2 atmosfrico (microorganismos que fotosintetizan) y
hetertrofos si utilizan carbono orgnico.

La frmula elemental de un microorganismo es, aproximadamente,
C
4
H
7
O
2
N
lo que supone que los componentes de las clulas son: carbono que representa
alrededor del 50% del peso seco, oxgeno (32%), nitrgeno (14%), fsforo (3%), azufre
(entorno al 1%) y otros elementos traza entre los que se encuentran Fe, K, Mg, Mn,
Co,
Mb, Cu y Zn.
La elaboracin de medios de cultivo requiere proporcionar los elementos antes citados
en una forma asimilable. As, por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono
orgnico para los hetertrofos y como CO2 para los auttrofos, el N en forma de NH4,
de NO3 - o de NO2 - o en forma de aminocidos a los que se pueda tomar su grupo
amino; el P debe estar en forma de PO4
3
-, el S procede de aminocidos sulfurados o
de SO4 2-, etc. Adems, en ciertos casos, es necesario aadir a los medios de cultivo
algunos aminocidos o vitaminas que determinados tipos de microorganismos no
pueden sintetizar.

MTODOS DE AISLAMIENTO
El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de
los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos. El
crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran nmero de ellas a
partir de una nica clula inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las
condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista
y formada por individuos iguales (un clon bacteriano).
Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las muestras ambientales
son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades
intrnsecas en el cultivo (microorganismos parsitos de otros), al desconocimiento de
los requerimientos especficos de cultivo, y a la existencia de grupos de
microorganismos que deben mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir (casos de
sintrofa por ejemplo).
Se estima que en slo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 - 0,01 % de las
bacterias marinas son cultivables.
CRECIMIENTO MICROBIANO
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio lquido, se pueden diferenciar cuatro
fases en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano:

1.- Fase lag o de adaptacin durante la que los microorganismos adaptan su
metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y
condiciones de cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.

2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima y
el tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen a
velocidad mxima los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas
durante esta fase se explica con los modelos matemticos que describiremos a
continuacin.



3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la masa u
otros parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan un
metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una
acumulacin y liberacin de metabolitos secundarios que pueden tener importancia
industrial.
Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algn nutriente
esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la
fase exponencial hacen que el medio sea inhspito para el crecimiento microbiano.
La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente con
mayor fidelidad el estado metablico real de los microorganismos en los ambientes
naturales.
4.- Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de bacterias viables del
cultivo.


MICROORGANISMOS UTILIZADOS A NIVEL INDUSTRIAL

No todos los microorganismos tienen un uso industrial. Mientras que los
microorganismos aislados de la naturaleza muestran el crecimiento celular como su
principal propiedad fisiolgica, los microorganismos industriales son organismos que
se han seleccionado cuidadosamente para que produzcan uno o ms productos
especficos. Incluso cuando el microorganismo industrial es uno que se ha aislado por
las tcnicas tradicionales, se convierte en un organismo altamente "modificado" antes
de entrar en las industrias a gran escala. En gran parte, los microorganismos
industriales son especialistas metablicos capaces de producir especficamente
determinados metabolitos y con gran rendimiento.
Con el fin de lograr esta elevada especializacin, las cepas industriales estn
alteradas genticamente, por mutacin o por recombinacin. Habitualmente se
reprimen o se eliminan las vas metablicas menores y frecuentemente existe en ellas
un desequilibrio metablico. Los microorganismos industriales pueden presentar
muchas propiedades celulares y bioqumicas alteradas.
Aunque las cepas industriales pueden crecer satisfactoriamente bajo las condiciones
altamente especializadas de un fermentador, pueden mostrar un crecimiento pobre en
ambientes naturales competitivos.

Origen de las cepas industriales

La fuente ltima de todas las cepas de microorganismos industriales es el ambiente
natural. Pero a travs de los aos, a medida que los procesos microbianos a gran
escala se han ido perfeccionando, un cierto nmero de cepas industriales se han ido
depositando en las colecciones de cultivos. Cuando se patenta un nuevo proceso
industrial, al solicitante de la patente se le requiere para que deposite una cepa capaz
de llevar a cabo el proceso, en una coleccin de cultivos reconocida. Hay varias
colecciones de cultivos que actan de depositarias y suministradoras de cultivos
microbianos. Aunque estas colecciones pueden ser una fuente rpida y fcil de
cultivos, es comprensible que la mayora de las compaas industriales se sientan
poco dispuestas a depositar sus mejores cultivos en las colecciones de cultivos.
Adems de cultivos de microorganismos, muchas colecciones de cultivos tienen
tambin colecciones de varios plsmidos, de genes clonados y de vectores para su
uso en ingeniera gentica, de lneas celulares animales para el cultivo de virus
animales, y de hibridomas para producir anticuerpos monoclonales.

Mejora de cepas

La fuente inicial de un microorganismo industrial es el ambiente natural, pero el
aislamiento original se modifica en gran medida en el laboratorio. Como resultado de
esta modificacin, es posible anticipar una mejora progresiva en el rendimiento de un
producto. El ejemplo ms espectacular de tal mejora progresiva es el de la penicilina,
el antibitico producido por el hongo Penicillium chrysogenum. Cuando se produjo por
primera vez la penicilina a gran escala, se obtuvieron rendimientos de 1- 10 g/ml. A lo
largo de los aos, como resultado de la mejora de las cepas acoplada a cambios en el
medio y en las condiciones de cultivo, el rendimiento de penicilina aument hasta
50.000 g/ml. Es interesante decir que todo este incremento de 50.000 veces el
rendimiento, se obtuvo por mutacin y seleccin; no estuvo implicada ninguna
manipulacin gentica. La introduccin de nuevas tcnicas genticas ha conducido a
posteriores, aunque mucho ms modestos, incrementos del rendimiento.


ACTIVIDADES Y CARACTERSTICAS DE INTERS. PRINCIPALES TIPOS

Propiedades de un microorganismo industrial
Un microorganismo adecuado para su utilizacin industrial debe producir la sustancia
de inters, pero hay muchos otros aspectos a considerar. Es preciso disponer del
organismo en cultivo axnico (puro), debe ser genticamente estable, y debe crecer en
cultivo a gran escala. Adems, debe ser posible mantener cultivos del organismo
durante un perodo de tiempo largo en el laboratorio y en la planta industrial. El cultivo
debe producir preferentemente esporas o alguna otra forma celular reproductora, para
que los organismos se puedan inocular fcilmente en los grandes fermentadores. Una
caracterstica importante es que el organismo industrial crezca rpidamente y
produzca el compuesto deseado en un perodo de tiempo relativamente corto.

El organismo, adems, debe ser capaz de crecer en un medio de cultivo lquido y
relativamente barato, que se pueda obtener en grandes cantidades. Muchos procesos
microbiolgicos industriales utilizan fuentes carbonadas de desecho de otras
industrias, como principal ingrediente o como suplemento para los medios de cultivo a
escala industrial. Algunas de estas fuentes son, por ejemplo, el licor de maceracin de
maz (un producto rico en nitrgeno y factores de crecimiento), el suero (un producto
lquido de desecho de la industria lechera, que contiene lactosa y sales minerales) y
otros materiales de desecho industriales, que tienen elevado contenido de carbono
orgnico. (La utilizacin de estos materiales carbonados de desecho ayuda tambin a
resolver los problemas de eliminacin de residuos, creados por la elevada demanda
biolgica de oxgeno (BOD) de los residuos orgnicos de desecho). Adems, un
microorganismo industrial debera no ser daino para las personas ni para los
animales y plantas econmicamente importantes. Debido al gran tamao de la
poblacin dentro del fermentador y a la imposibilidad prctica de evitar la
contaminacin del ambiente fuera del fermentador, un patgeno podra plantear
problemas potenciales desastrosos.
Otro requisito importante de un microorganismo industrial es que sea posible eliminar
las clulas microbianas del medio de cultivo con relativa facilidad. En el laboratorio, las
clulas se retiran principalmente por centrifugacin, pero la centrifugacin a gran
escala puede ser difcil o cara. Los organismos industriales ms favorables son
aquellos que tienen un tamao de clula grande, porque las clulas ms grandes se
depositan rpidamente en un cultivo o pueden filtrarse fcilmente con materiales de
filtro relativamente baratos. Los preferidos son los hongos, las levaduras y las
bacterias filamentosas. Las bacterias unicelulares, debido a su pequeo tamao, son
difciles de separar del fluido de cultivo.
Finalmente, un microorganismo industrial debera ser susceptible de manipulacin
gentica. En microbiologa industrial, el incremento del rendimiento se ha obtenido
primordialmente por medio de la mutacin y seleccin. Tambin es deseable que el
organismo industrial sea capaz de sufrir recombinacin gentica, bien por un proceso
sexual o por algn tipo de proceso parasexual. La recombinacin gentica permite
incorporar en un solo genoma, caractersticas genticas de ms de un organismo.
Sin embargo, muchas cepas industriales se han mejorado enormemente por mutacin
y seleccin, sin el uso de la recombinacin gentica.

REQUISITOS DE LAS CEPAS INDUSTRIALES
Posibilidad de obtener cultivos puros
Genticamente estables
Fcil de mantener por largos perodos de tiempo
Tasa rpida de produccin de formas de propagacin
Tasa rpida de crecimiento en pre-inculo y en fermentador
Ausencia de problemas tecnolgicos durante el escalado
Nutricionalmente poco exigentes
Autoproteccin (bajada de pH, temperatura ptima extrema,
produccin de agentes antagonistas, etc).
Produccin rpida de los metabolitos de inters
Fcil separacin entre el producto y el microorganismo
Produccin mayoritaria del metabolito de inters
Falta de produccin de sustancias txicas
Susceptible de mejora gentica

DIFERENTES TIPOS DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES
Los microorganismos que sintetizan productos tiles para el hombre representan,
como mximo, unos pocos centenares de especies de entre las ms de 100000
descritas en la Naturaleza. Los pocos que se han encontrado con utilidad industrial
son apreciados por elaborar alguna sustancia que no se puede obtener de manera
fcil o barata por otros mtodos.

LEVADURAS

Las levaduras se vienen utilizando desde hace miles de aos para la fabricacin de
pan y bebidas alcohlicas. La levadura que sin duda fue la primera y an hoy en da
sigue siendo la ms utilizada por el hombre es Saccharomyces cerevisiae de la que se
emplean diferentes cepas para la fabricacin de
cerveza, vino, sake, pan y alcoholes industriales.
Kluyveromyces fragilis es una especie
fermentadora de la lactosa que se explota en
pequea escala para la produccin de alcohol a
partir del suero de la leche. Yarrowia lipolytica es
una fuente industrial de cido ctrico.
Trichosporum cutaneum desempea un
importante papel en los sistemas de digestin
aerbica de aguas residuales debido a su enorme
capacidad de oxidacin de compuestos orgnicos,
includos algunos que son txicos para otras
levaduras y hongos, como los derivados fenlicos.

HONGOS FILAMENTOSOS

Los hongos tienen una gran importancia econmica, no tan slo por su utilidad, sino
tambin por el dao que pueden causar. Los hongos son responsables de la
degradacin de gran parte de la materia orgnica de la Tierra, una actividad
enormemente beneficiosa ya que permite el reciclaje de la materia viva. Por otro lado,
los hongos causan gran cantidad de enfermedades en plantas y animales y pueden
destruir alimentos y materiales de los que depende el hombre. Los efectos
perjudiciales de los hongos estn contrarrestados por su utilizacin industrial. Los
hongos son la base de muchas fermentaciones como la combinacin de soja,
habichuelas, arroz y cebada que dan lugar a los alimentos orientales miso, shoyu y
tempeh. Los hongos son tambin la fuente de muchos enzimas comerciales (amilasas,
proteasas, pectinasas), cidos orgnicos (ctrico, lctico), antibiticos (penicilina),
quesos especiales (Camembert, Roquefort) y, evidentemente, de las setas.



BACTERIAS

Entre las especies bacterianas de inters industrial estn las bacterias del cido
actico, Gluconobacter y Acetobacter que pueden convertir el etanol en cido actico.
El gnero Bacillus es productor de antibiticos (gramicidina, bacitracina, polimixina),
proteasas e insecticidas. Del gnero Clostridium cabe destacar Clostridium
acetobutylicum que puede fermentar los azcares originando acetona y butanol. Las
bacterias del cido lctico incluyen, entre otras, las especies de los gneros
Streptococcus y Lactobacillus que producen yogur. Corynebacterium glutamicum es
una importante fuente industrial de lisina. El olor caracterstico a tierra mojada se debe
a compuestos voltiles (geosmina) producidos por Streptomyces aunque su principal
importancia radica en la produccin de antibiticos como anfotericina B, kanamicina,
neomicina, estreptomicina, tetraciclina, etc.

MANTENIMIENTO Y CONSERVACIN DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES

Dado el alto coste de obtencin de las cepas industriales, se requiere la adopcin de
tcnicas de conservacin apropiadas que permitan preservar sus propiedades. No
existe un nico mtodo, ya que cada especie presenta sus preferencias de
conservacin:

SUBCULTIVO: Consiste en el paso de un inculo de un cultivo agotado en otro fresco
(preferentemente, slido). No es la ms apropiada para la industria, ya que presenta
tres grandes inconvenientes:
- El tiempo de persistencia de las clulas es, por lo general, bastante bajo. Este
tiempo puede aumentarse por refrigeracin a unos 4 C.
- Se puede producir contaminacin fcilmente, dada la alta frecuencia de
manipulacin.
- Debido a la manipulacin continua, aumenta el riesgo de variabilidad gentica
en la cepa.

DESECACIN: Consiste en la eliminacin de agua del microorganismo, reduciendo
as el metabolismo. Para evitar que el proceso de desecacin dae las clulas, se
aaden compuestos protectores. El proceso se produce a temperatura ambiente una
vez aadidos los protectores. Finalizado el proceso, se sella el cultivo y se conserva
en refrigeracin. Un mtodo alternativo es el del L-secado. Consiste en pequeos
discos gelatinosos que se impregnan con el cultivo lquido y se secan por un proceso
activo (temperatura, etc.). Al igual que antes, al finalizar el proceso, se sella y se lleva
a refrigeracin.

CONGELACIN: Segn la tcnica empleada, la temperatura de congelacin vara. Se
usan congeladores normales (unos 30 C), industriales (-70 C) o nitrgeno lquido
(hasta 200 C). Cuanto ms baja sea la temperatura, mejor es la conservacin, pero
tambin es mayor el costo. Para evitar la formacin de cristales en el interior de las
clulas, que pueden producir daos en sus estructuras, se usan dos tcnicas:
- Adicin de compuestos protectores, como dimetilsulfxido.
- Congelacin lenta, de modo que se formen primero los cristales en el medio
exterior. Esto provocar la prdida de agua de la clula por smosis. El
inconveniente de este mtodo es el gran aumento de la concentracin de sales
en el proceso de descongelacin, a la que las clulas pueden ser muy
vulnerables.
- Para evitarlo, se usan medios de congelacin poco salinos.

LIOFILIZACIN: Se hace una congelacin previa antes de pasar al liofilizador. En l,
el agua se sublimar por bajada de presin y el cultivo microbiano queda en el seno de
una matriz porosa protectora (que por lo general es leche descremada o sacarosa).
Debido a las caractersticas del mtodo, se sella a vaco. Este mtodo, junto con la
congelacin, es el ms valorado, ya que permite unos tiempos de conservacin
bastante altos.



Los principales usos de las distintas clases de microorganismos son:





Levaduras
- Industria panadera
- Bebidas alcohlicas
- Fuente de vitaminas y de protena
unicelular (SCP, importante complemento
diettico de bajo costo, de gran importancia
en zonas con carencias de alimentos).
- Sntesis de protenas de origen no
microbiano, tales


Saccharomyces
cerevisiae
Kluyveromyces
fragilis




Hongos
filamentosos
- Setas, derivados de soja y ciertos quesos.
- Produccin de diversas enzimas, como
pectinasas (tiles para la elaboracin de
zumos).
- Sntesis de cidos orgnicos (sobre todo,
ctrico y lctico).
- Sntesis de antibiticos, como la penicilina.
- Sntesis de alcaloides, con diversos fines
teraputicos.



Aspergillus niger
(sobre todo en
sntesis de cidos
orgnicos)
Penicillium notatum











Bacterias



Bacterias lcticas (el
grupo ms
importante)
- Embutidos y
conservas
- Probiticos
(productos
de efectos
beneficiosos
para la salud)
- cido lctico

Actinomicetos
(similares a hongos
por morfologa y tipo
de crecimiento,
presentes en suelos)
- Antibiticos
- Enzimas
- Inhibidores
enzimticos
Corinebacterias,
Utilizadas en
industria
quesera y en
sntesis de
potenciadores de
sabor

Bacillus
- Antibiticos
peptdicos
- Enzimas proteasas
- Insecticidas
Bacillus
thuringiensis


Clostridium
(organismos
Estrictamente
anaerobios)
- Sntesis de
disolventes
- Degradacin de
sustratos complejos
en
combinacin con
otras
especies de
microorganismos








IV. BIBLIOGRAFIA

- file:///C:/Users/mi%20pc/Downloads/14715667-Bases-de-Microbiologia
Industrial.pdf
- Microbiologa Industrial, ALICIA HERNANDEZ

- Introduccin a la microbiologa, Volumen 2 Escrito por John L. Ingraham,Catherine A.
Ingraham

- http://recursospolitecnico2012.bligoo.cl/media/users/24/1214066/files/352529/
CAPITULO_3_MICROORGANISMOS_DE_INTERES_INDUSTRIAL.pdf