LESPENICILLINES

1 StellaMORABITO ECP March2008

Sommaire
Lesantibiotiques:dfinition
Petitehistoiredesantibiotiques
Mcanismesdactiondesantibiotiques
Classesdantibiotiques
Lapnicilline:formulechimiqueetclassedappartenance
Typologiesdepnicilline
Pnicilline:insaturations,carbonesasymtriques,chiralit,stroisomres
deconfiguration,hydrolyse
Pnicilline:exempledefragilitenmilieubasique
Modeopratoiredespnicillines:inhibitiondestranspeptidases
Mcanismeractionnelsimplifidelapnicilline
SynthsedelapnicillineG,ducyclelactameethmisynthse
Mcanismesdersistanceauxlactamines etinactivationenzymatique:
pnicillinasesetlactamases
Rsistancesauxantibiotiques
Pnicilline:leprocessusdeproduction
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Lesantibiotiques Dfinition
Le terme antibiotique drive du grec anti et
biotikos , littralement contre la vie et
traduit le phnomne dantagonisme bactrien.
Les antibiotiques sont des substances dorigine
microbienne (sucres, protines, aminoglycosides,
etc.) qui inhibent (bactriostatiques) ou dtruisent
(bactricides) les bactries, les empchant de se
multiplier dans lorganisme.
Contrairement aux antiseptiques, les antibiotiques
exercent une action spcifique (toxicit slective).
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Petitehistoiredesantibiotiques
Dans lantiquit les moisissures taient dj utilises pour traiter les infections. En Grce, Inde, Serbie et
Russie du pain ou des plantes moisies ainsi que du terreau chauff taient appliqus sur les blessures.
1870 Sir John Scott Burdon Sanderson, du St. Marys Hospital, observe le premier que des bouillons de
culture attaqus par les moisissures ne dveloppent pas de bactries. Des travaux sont ensuite produits
autour de ce constat par des scientifiques anglais et franais (Pasteur, Joubert, Duchesne), en tudiant le
Penicillium Glaucum. Mais peu dattention est finalement accorde ces dcouvertes.
1928 L'anglais Fleming dcouvre le Penicillium Notatum et appelle pnicilline la substance inhibitrice de
lactivit bactrienne, dont il comprend immdiatement le potentiel. Cependant, il narrive purifier et isoler
que de trs faibles quantits, insuffisantes pour en tester lefficacit en tant que mdicament.
1940 Deux chercheurs de luniversit de Oxford, Howard Florey et Boris Chain, parviennent cristalliser la
pnicilline et la stabiliser grce une technique de refroidissement (pnicilline G).
Fleming, Chain et Florey obtiendront en 1945 un prix Nobel conjoint pour leurs dcouvertes.
1941 42 Des mthodes industrielles de production de la pnicilline par fermentation de sousproduits de
lamidon sont dveloppes aux US et contribuent la fabrication de pnicilline pour gurir les infections des
soldats au front de la seconde guerre mondiale. Il sagit de la premire application industrielle des
biotechnologies
1944 L'amricain Waksman dcouvre la streptomycine efficace sur le bacille tuberculeux et il obtient le prix
Nobel en 1952.
1952 Le chloramphnicol et la ttracycline sont isols, ainsi que lrytromycine.
1954 On commence " forcer" le btail avec des antibiotiques et conserver les aliments dans des solutions
antibiotiques.
1956 Apparaissent les premiers dsordres provoqus par l'emploi inconsidr des antibiotiques.
Aujourdhui Une dizaine de familles principales dantibiotiques sont connues et permettent de contrler la
quasitotalit des bactries. Le problme des rsistances devient de plus en plus proccupant.
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Mcanismesdactiondesantibiotiques
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Pnicillines,Cphalosporines,
Bacitracine,Vancomycine
Chloramphnicol,Erythromycine,
Ttracyclines,Streptomycine
Polymixine B
Quinolones,Rifampine
ADN:blocagedelarplicationet
Delatranscription
ACTIVITEENZYMATIQUE
Inhibitiondelasynthsedes
mtabolitesessentiels
Source:http://www.123bio.net/cours/antibio/modedaction.html
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Classes Structuresmolculaires Action Indications
Aminoglycosides (66%)
(ex. streptomycine)
Perturbentlasynthsedesprotines
Infections parlegenreHaemophilus,
brucellose,tularmie,peste,cholra
Betalactamines
(entreautres:pnicillines,
cphalosporines)
Perturbentlasynthsede laparoi
Infections streptococciques,syphilis,
gonorrheetmaladiedeLyme
Chloramphnicols
Inhibentlasynthsedesprotines
Mningite, fivretyphode,typhus
Lincosamides
(Lyncomycine,Clindamycine)
Antagonistesdeschloramphnicolset
macrolides
Infectionsstreptococciques etrespiratoires
Macrolides
(entreautresrythromycine)
Empchentlasynthsedesprotines
Infectionsstreptococciques, syphilis,infections
respiratoiresetmycoplasmiques
Oxalidonones (Linzolid)
Bloquent laproductiondesprotines
Classedcouverteen1987
Polypeptides(entreautres
bacitracine etglycopptides)
Inhibentlasynthsedela paroi(Gram+)
Infectiondesoreilles,desyeuxoudelavessie
Quinolones
PerturbentlADNetlareproductionARN
Infectiondesvoies urinaires,prostatite
bactrienne,diarrhebactrienne,gonorrhe
Sulfamides
Interfrentaveclemtabolismeprincipal
Infections desvoiesurinaires
Ttracyclines
Inhibentlasynthseprotique
Syphilis,clamydioses,maladiedeLyme,
infectionsmycoplasmiques etrickettsioses
Pname Clavame Carbapnme Cphme Oxacphme
Lesclassesdantibiotiques
Source:divers
Lespnicillines:formulechimiqueet
classedappartenance
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Lespnicillinesontpourformulechimique:
RC
9
H
11
N
2
O
4
S,oleradicalRestunechanevariable
Lenoyauprincipalestuncyclelactame,cestdireun
lactamestructurecycliquehtroatomique consistantde
3atomesdecarboneetunatomedazote.
Lescycleslactamesprennentdiffrentesdnomination
enfonctiondelanatureducycleadjacent.Danslecasdela
pnicillinelecycleadjacentestuncyclepname c.a.d.un
cycle5atomessoufr
noyaulactame
noyauthiazolidine
Pnicilline
Typologiesdepnicilline
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SuivantlanaturedugroupeRnousdistinguonsplusieurs
typesdepnicilline,naturelsouhmisynthtiques
Source:ThierryPrazuck Pnicillines CHROrlans
Typologiesdepnicilline
PENICILLINESGetV(SENSIBLESAUXPENICILLINASES):
pnicillineGacidosensible.
pnicillineVacidorsistante
PENICILLINESRESISTANTESAUXPENICILLINASES:
mthicilline acidosensible.
isooxazolylpnicillines acidorsistantes
(oxacilline,cloxacilline,dicloxacilline,flucloxacilline).
AMINOPENICILLINESAACIDORESISTANTESETASPECTREELARGI:
ampicilline,amoxycilline.
ciclacilline
PENICILLINESACIDOSENSIBLESATRESLARGESPECTRE:
carboxypnicillines (ticarcilline,carbnicilline,tmocilline)
acyluridopnicillines (pipracilline,azlocilline,mzlocilline)
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Source:http://www.123bio.net/cours/antibio/lactames11.html
Insaturations delamolculedepnicillineG
LamolculedepnicillineGprsente9insaturations:
Lecyclebenzne(phnyle):4insaturations,1pourlecycleet3
doublesliaisons
LestroisdoublesliaisonsC=O
Lecyclelactame
Lecyclethiazolidine
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Pnicilline:insaturations
StructuredelapnicillineV
CyclePhnyle
C
6
H
5
StructuredelapnicillineG
CyclePhnyle
C
6
H
5
Pnicilline:carbonesasymtriques
CarboneasymtriqueduLACTAMEportantlazote:
NH>CS>C=O>H R
CarboneasymtriqueduLACTAMEportantlesoufre:
S>N>CN>H R
Carboneasymtriqueportantlacidecarboxylique:
N>CS>C=O>H S
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R
R
S
CyclePhnyle
C
6
H
5
* *
*
Pnicilline:carbones asymtriques
Pnicilline:chiralit
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Rappel:unemolculechiralenepossdeniplannicentredesymtrie.
Sinousprenonsdeuxenantiomres (stroisomres deconfiguration
imagelundelautredansunmiroir),lamolculeserachiralesiellenest
passuperposablesonimagedansunmiroir.
DanslexempledelapnicillineV,cidessous,lamolculeestCHIRALE car
ellenestpassuperposablesonimagedansunmiroir.
LamolculedepnicillineVnepossdeaucunlmentdesymtrie,ce
quipermettraitlexistenceduncomposmsoetrduiraitainsilenombre
destroisomres possibles.
DanslapnicillineVilyadonc2
3
=8stroisomres deconfiguration.
PnicillineV
Activitdesstroisomresde
configuration
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Lacide 6aminopnicillanique (6APA) reprsente la structure de base des
pnicillines. Il peut tre substitu par acylation sur sa fonction amine pour
donner naissance des drivs qui se distinguent par pharmacocintique,
stabilit, spectre antibiotique et rsistance aux lactamases. Il est
galement la brique de base de toutes les pnicillines dhmisynthse.
Les pnicillines naturelles, comme la benzylpnicilline (pnicilline G) et la
phnoxymthylpnicilline (pnicilline V) ont une activit chez les drivs
dont la configuration est (5R) et (6R). Les pnicillines hmisynthtiques
prpares partir de l'acide 6aminopnicillanique ont des centres de
chiralit ayant la mme configuration que les drivs naturels.
Acide6aminopnicillanique
(5R,6R)
R R
2diastroisomres
Actifs:
2R,5R,6R
2S,5R,6R
* *
*
Pnicilline:hydrolyse
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Le chimiste Woodward a dmontr (1940) que la pnicilline V
est assez facilement hydrolysable la fois en milieu acide et
basique, ce qui illustre la fragilit de cette molcule.
En gnral: il y a deux fonctions amides une fonction amide
tertiaire et une secondaire. La plus instable tant la
secondaire, cest elle qui subira lhydrolyse en premier:
Amidetertiaire
Amidesecondaire
Hydrolysedelamidesecondaire
Donnedelacide6aminopnicillanique
Amine
Pnicilline:exempledefragiliten
milieubasique
En milieu basique, le carbone lectrophile de lamide est attaqu par lion
hydroxyde OH
Sen suit un dpart de lamine rsultante
Un mcanisme de typ addition limination a lieu
Les produits obtenus sont un carboxylate (base conjugue de lacide
carboxylique) et une amine (en loccurrence lacide 6amino
pnicillanique)
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R
L
=cyclepnicillanique
carboxylate
Amine=acide6aminopnicillanique
Source:http://centralesupelec.sceiconcours.org/CentraleSupelec/2006/PC/sujets/chimie.pdf
Modeopratoiredespnicillines
Les pnicillines, et plus gnralement les lactamines,
agissent en inhibant la synthse de la paroi bactrienne
(peptidoglycane) et sont donc actives sur les bactries qui ont
un taux lev de reproduction (action bactricide: les
bactries meurent car elles narrivent pas se ddoubler donc
se reproduire).
Elles sont particulirement efficaces contre les bactries
Gram+
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Gram+ Gram
LenveloppedesbactriesG etG+
La paroi des bactries est constitue par le
peptidoglycane (ou murne) qui donne forme et
rigidit la bactrie (en particulier G+) et lempche
dexploser suite des phnomnes osmotiques
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G-
membrane
externe
peptidoglycane
Membrane
cytoplasmique
G+
Au contact direct
de la membrane
cytoplasmique
Source:ThierryPrazuck Pnicillines CHROrlans
N-acetylmuramic acid (NAM)
Pont peptidique
N-acetylglucosamine (NAG)
Liaison osidique (14)
Lachanepeptidoglycane
Le peptidoglycane (ou murine) est un polymre constitu de sucres et
aminoacides. Les sucres sont lis entre eux par des liaisons osidiques et les
aminoacides contribuent relier chaque chane via des ponts peptidiques
Source:ThierryPrazuck Pnicillines CHROrlans
Lespontspeptidiques
L-alanine
D-alanine
D-glutamic acid
L- lysine or DAP
L-alanine
D-glutamic acid
L- lysine or DAP
D-alanine
M
G
G
G G M
DAP = diaminopimelate
D-alanine
La TRANSPEPTIDASE intervient pour lier DAP D-Ala.
La penicilline inhibe la formation des ponts peptidiques
en se liant la transpeptidase (PBP).
Chane
peptidique
Source:ThierryPrazuck Pnicillines CHROrlans
Modedactiondunepnicilline
Latranspeptidase estunenzymequicatalyselaractiondecrationdesponts
peptidiques,indispensablelorsdelabiosynthsedelaparoicellulairedela
bactrie.
Lapnicillinepeutragiraveccetenzyme(EnOH)etainsilinactiver.Enbloquant
lasynthsedelaparoi,lacellulenestpluscapabledesediviseretdeformerde
nouvellesbactries.
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Fixationdela
pnicillinedanslesite
actifdelaPBPpar
acylation
Inactivationde
lenzymeEnOH
Source:http://centralesupelec.sceiconcours.org/CentraleSupelec/2006/PC/sujets/chimie.pdf Source:ThierryPrazuck Pnicillines CHROrlans
Mcanismeractionnelsimplifidela
pnicilline
Hydrolyseducyclelactameparlafonctionhydroxyle
libredelenzyme(En)
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Fonctionhydroxyle
Amidetertiairedu
cyclelactame
Source:http://centralesupelec.sceiconcours.org/CentraleSupelec/2006/PC/sujets/chimie.pdf
SynthsedelapnicillineG
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Source: http://fr.wikipedia.org/wiki/Penicilline#Biosynth.C3.A8se
Synthseducyclelactame
Des mthodes permettant la synthse totale des lactames ont t mises au
point. Une des difficults lie la prparation du cycle lactame, est sa grande
fragilit et son extrme sensibilit l'hydrolyse.
Parmi les diffrentes voies d'accs aux blactames, la raction de Staudinger utilise
la cycloaddition [2+2] entre une imine et un ctne.
Il existe une version diastroslective de cette raction qui utilise comme
auxiliaire chiral une oxazolidonone dEvans.
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http://www.faidherbe.org/site/cours/dupuis/anhychld.htm#staudinger
HmisynthsedelapnicillineG
Beaucoup d'antibiotiques sont fabriqus industriellement par
hmisynthse partir d'un substrat commun, l'acide 6
aminopnicillanique, obtenu partir du champignon
penicillium chrysogenum.
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http://www.faidherbe.org/site/cours/dupuis/amidesd.htm#21
Lesprincipauxmcanismesde
rsistanceauxlactamines
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Impermabilitdelaparoibactrienne
Laparoidelabactrienelaissepluspasserles
lactamines
Inactivationenzymatique
Desenzymessontproduitsparlesbactries,les
pnicillinasesouleslactamases,etinhibentlaction
delapnicilline
Modificationdelacible
LesPBP(Penicillin Binding Proteins)sontaltresafin
derduireleuraffinitsauxpnicillines
Inactivationenzymatique:
lactamase etpnicillinase
Les lactamases, dont la pnicillinase fait partie, sont en
grande partie responsables de la rsistance des bactries aux
lactamines car elles hydrolysent le cycle lactame de
l'antibiotique, le rendant ainsi inactif, avant que celuici ne se
fixe sur les protines liant les pnicillines (PBPs)
StellaMORABITO ECP March2008 26
Source:ThierryPrazuck Pnicillines CHROrlans
Rsistancesauxantibiotiques
Larsistancenaturelleestuncaractrespcifiquepartagpartoutesles
souchesdelammeespce.Lesspectresdactiondesdiffrents
antibiotiquessurlesdiffrentesespcesdebactriessontconnus.
Enrevanchelarsistanceacquisediffrencielessouchesdunemme
espce.
Larsistanceauncaractrehrditaire lie:
unemutationdansungnedelabactrieou
LacquisitiondunnouveaugneparlintermdiairedunPLASMIDE,c.a.d.un
petitfragmentdADNtransmisparuneautrebactrie.Desespcesdiffrentes
peuventmmechangerdesgnesdersistance.
Ilexistegalementdestransposons,ou gnessauteurs quiseddoublent
etsautentsurlegneduneautrebactriepourdonnernaissancedes
mutants.
Lutilisationmassivedantibiotiques,chezlesanimauxcommechez
lhomme,exerceunepressiondeslectionquifavoriselapparitionde
souchesrsistantes.
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Dveloppementdesrsistances
StellaMORABITO ECP March2008 28
France
Europe
Source:
http://www.cpamdordogne.fr/2professionnels/thema/TDR/tableau.htm
Dosesdantibiotiquesparjourpour1000habitants
Source:
http://www.cpamdordogne.fr/2professionnels/thema/TDR/tableau.htm
TheLancet,vol.357,9Juin2001
Dosesdantibiotiquesparjourpour1000habitants
Pnicilline,leprocessusdeproduction:
lesbioracteurs
Procd de culture en profondeur
Cuves cylindriques de 2040.000 L. en acier
inoxydable
Avant lutilisation les cuves sont strilises avec de
la vapeur haute temprature
Souche utilise = Penicillium crysogenum
Nutriments = sources de carbone (glucose); source
dazote (NH
4
+
/ NO
3

; acides amins et sels

minraux)
Le penicillium est exigeant en oxygne. Lair
introduit est strilis afin quaucun bactrie ou
microorganisme ne contamine la culture
Le liquide de culture est agit pour mlanger le
contenu et distribuer quitablement nutriments et
oxygne
La temprature doit tre monitore pour viter la
surchauffe qui tue le Penicillium. La diminution de
la temprature seffectue en pompant de leau
froide dans la gaine externe du racteur
Lacidit doit tre constamment monitore pour
viter des excs ltaux pour le penicillium. Le pH est
corrig par rajout dacides ou de bases.
Aprs un certain temps de croissance, suivi par la
production dantibiotique, le contenu est sorti de la
cuve, filtr et labor pour en extraire le principe
actif. La cuve est ensuite nettoye et strilise, et le
processus recommence (tous les 68 jours).
StellaMORABITO ECP March2008 29
Source:http://www.biotopics.co.uk/microbes/penici.html