Ministrio da Educao

Universidade Tecnolgica Federal do Paran

Campus de Curitiba

Gerncia de Ensino e Pesquisa
Departamento Acadmico de Qumica e Biologia


Prtica n
o
02
_
Cromatografia em Papel (CP) e Cromatografia em Camada Fina (TLC)
Disciplina: Sntese Orgnica 1 Prof. Dr. Paulo Roberto de Oliveira
Materiais e Reagentes
- 1 Lpis (Aluno e MP)
- 1 Rgua (Aluno e MP)
- 1 caneta azul, preta, vermelha,
verde, roxa, marrom. (Aluno e MP)
- 1 Rolo de Fita Adesiva. (MP)
- 1 Esptula (MP)
- 1 Proveta de 25 mL
- 1 Proveta de 100 mL
- 1 Cuba Cromatogrfica de 500 mL
- 2 Bequer de 100 mL
- 1 Faca (MP)
- Folhas de Papel Sulfite (MP)

- 1 placa de petri de 5 cm
- 1 placa de petri de 10 cm
- 1 Rolo de Papel Alumnio (MP)
- Papel filtro (MP)
- 1 Funil Simples
- 1 Tesoura (Aluno e MP)
- 1 Balana Semi-Analtica (MP)
- 1 Almofariz com Pistilo Grande
- 3 Erlenmeyers de 125 mL
- 1 Funil de Separao de 125 mL
- 1 Suporte Universal
- 1 Argola para Funil de Separao
- 400 mL de hexano (MP)
- 500 mL de Etanol 92% (MP)
- 200 mL de Acetona
- 50g de Sulfato de Sdio Anidro(MP)
- 10g de Iodo (I
2
) (MP)
- 1 Dessecador (MP)
- 4 Chapas de Aquecimento (Capela)
- 4 Barras Magntica (Peixinho)
- Capilares (MP)
- Placas cromatogrficas (MP)
- 1 Basto de Vidro
- 1 Pina Metlica (MP)


1 Objetivos

Estudar o comportamento de substncias orgnicas em termos da partio cromatogrfica -
estrutura qumica versus fenmeno adsoro cromatogrfica.
Utilizar o R
f
na identificao de compostos orgnicos usualmente presentes em diversas
formulaes farmacuticas.
Verificar as cores que compem as tintas de caneta e os pigmentos que compem os
pimentes verdes, amarelos e vermelhos.
2 Introduo
Entre os mtodos modernos de anlise, a cromatografia ocupa um lugar de destaque
devido a sua facilidade em efetuar a separao, identificao e quantificao das espcies
qumicas, por si mesma ou em conjunto com outras tcnicas instrumentais de anlise, como, por
exemplo, a espectrofotometria ou a espectrometria de massas.
A cromatografia (grego "chrom"=cor e "graphe"=escrever) um mtodo fsico-qumico de
separao dos componentes de uma mistura, realizada atravs da distribuio destes
componentes entre duas fases, que esto em contacto ntimo. Uma das fases permanece
estacionria enquanto que a outra se move atravs dela. A cromatografia em camada delgada
(CCD) consiste na separao dos componentes de uma mistura atravs da migrao diferencial
sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobre uma superfcie plana. O processo de
separao est fundamentado, principalmente no fenmeno de adsoro.
O grande desenvolvimento desta tcnica consequncia natural das mltiplas vantagens
que ela oferece, tais como: fcil compreenso e execuo, separaes em breve espao de
tempo, versatilidade, grande reprodutibilidade e baixo custo.
Na CCD uma fina camada de adsorvente espalhada sobre uma placa (em geral de vidro,
mas outros materiais podem ser usados). Na extremidade desta placa recoberta pelo adsorvente e
seca, chamada cromatoplaca, a amostra aplicada repetidas vezes com o auxlio de um capilar,
obtendo-se pequenas manchas.
Os principais fenmenos que governam a separao cromatogrfica so adsoro e
absoro (partio). A adsoro ocorre com fase estacionria (FE) slida, geralmente slicagel
(SiO
2
.xH
2
O) ou alumina (Al
2
O
3
). O grau de adsoro depende da quantidade de gua presente na
fase slida (esta ser mais reativa quanto menos gua estiver presente), da estrutura do composto
(presena de grupos funcionais polares, capacidade de formar ligaes hidrognio, etc.), da
adsoro do solvente ao ocupar os stios ativos da fase slida e da fora atrativa entre o soluto e o
solvente (Figura 1).
N
Al
2
O
3
H H
R
O Al
O
O H O
R
C
R
R
O
O Al
C
O
O
R
HOAl



Figura 1. Algumas formas de visualizar as interaes entre a alumina e os componentes orgnicos
de uma amostra. Estruturas similares podem ser escritas para a slicagel.

A partio ocorre com FE lquidas (que so imobilizadas sobre suportes slidos). Os
componentes da mistura adsorvem-se com as partculas de slido devido interao de diversas
foras intermoleculares. O composto ter uma maior ou menor adsoro, dependendo das foras
de interao, que variam na seguinte ordem: formao de sais > coordenao > ligaes de
hidrognio >dipolo-dipolo >Van der Waals. O processo de absoro (interfacial) governado pela
partio e ocorre devido a diferena de solubilidade dos componentes na FE lquida.
Dependendo da natureza das duas fases envolvidas (estacionria e mvel) tm-se diversos
tipos de cromatografia:

- slido-lquido (CC, TLC);
- lquido-lquido (HPLC, CP);
- gs-lquido (CG).

Na cromatografia em papel (CP), a fase estacionria o papel colocado em um frasco. A
fase mvel o eluente que sobe pelo papel carregando as substncias que compem as misturas
(no experimento, as substncias que compem as tintas das canetas). As diferentes substncias
sobem com velocidades diferentes, porque interagem de forma diferente com o eluente e com o
papel. As substncias que tm mais afinidade pelo eluente sobem mais rpidamente, enquanto as
que tm grande afinidade pelo papel so arrastadas mais lentamente pelo eluente. Dessa forma,
ocorre a separao, sendo possvel visualizar os diferentes componentes de cada tinta. A
cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquido-lquido, estando um deles fixado a
um suporte slido. Este mtodo, embora menos eficiente que a cromatografia em camada delgada
(CCD), muito til para a separao de compostos polares.
Na Cromatografia em Camada Fina (TLC) uma pequena quantidade de uma amostra
orgnica colocada em um ponto da placa, sendo adsorvida pela fase slida (Figura 2a). A placa
cromatogrfica colocada em uma cmara fechada contendo um eluente que percorre a fase fixa
em movimento ascendente por ao capilar, carregando consigo a amostra orgnica (Figura 2b). A
visualizao dos componentes da mistura pode ser feita a olho nu (se os componentes forem
coloridos) atravs de luz ultravioleta, por se tornarem fluorescentes quando excitados por essas
radiaes (cuidado!) e por vapores de iodo, em recipiente fechado (Figura 2c).

Figura 2. (a) Aplicao da amostra na cromatoplaca (b) Eluio de uma placa cromatogrfica; (c) Revelao
de uma placa cromatogrfica em cuba de iodo

Este procedimento especialmente til no caso de compostos que so sensveis ao calor
ou no so volteis, ou seja, no caso de compostos que no so apropriados determinao de
ponto de ebulio ou cromatografia em fase gasosa. A distncia percorrida por cada composto
em uma amostra, dividido pela distncia percorrida pelo solvente conhecido como o R
f
(fator de
reteno). Comparaes do valor de R
f
da amostra com o de um padro um mtodo qualitativo
usado na identificao de um composto.
Para o clculo de valor de R
f
mede-se a distncia que a substncia deslocou a partir do
ponto de aplicao (d
s
), considerando-se para efeito de medida o centro de gravidade da mancha,
e divide-se pela distncia percorrida pela frente do solvente a partir do ponto original da amostra
(d
m
). A Figura 3 ilustra o clculo do R
f
para os componente de uma amostra.

Distncia percorrida pela mancha desde a origem (d
s
)
R
f
= -----------------------------------------------------------------------------------
Distncia percorrida pelo solvente desde a origem (d
m
)




Figura 3. Determinao de R
f
no cromatograma em camada fina.
3


Quando as condies de medida so completamente especificadas, o valor do R
f
constante
para uma dada substncia, e corresponde a uma propriedade fsica daquele composto. O valor de R
f

pode, ento, ser usado para identificar um composto desconhecido, mas como muitas substncias
podem ter o mesmo valor de R
f
, assim com podem ter o mesmo ponto de fuso, mtodos adicionais
devem ser utilizados para identificao inequvoca do composto.
Existem vrias tcnicas cromatogrficas que vo das mais simples como cromatografia de
coluna e camada fina at as mais sofisticadas e computadorizadas, como a cromatografia lquida
de alta eficincia (CLAE). De modo geral, entre os mtodos modernos de anlises, as tcnicas
cromatogrficas, ocupam um lugar de destaque na qumica e bioqumica, na pesquisa e na
indstria, devido a sua facilidade em efetuar a separao, identificao e quantificao das
espcies qumicas presentes em uma amostra, mesmo em misturas muito complexas.

Aplicaes da CCD em Qumica Orgnica

- Estabelecer a identidade dos compostos;
- Determinar o nmero de componentes de uma mistura;
- Determinar o solvente apropriado para a separao por cromatografia em coluna;
- Monitorar uma separao realizada por cromatografia em coluna;
- Verificar a eficincia de uma separao;
- Monitorar o andamento de uma reao.




3 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 3.1. Cromatografia em Papel.

3.1.1. Preparar uma cuba cromatogrfica colocando uma tira de papel de filtro (sulfite) de
10x15 cm e tampar com uma placa de petri.
3.1.2. A partir de um papel sulfite, cortar, uma tira de 5 cm de largura e 21 cm de
comprimento.
3.1.3. Com um lpis, traar em uma das extremidade do papel, uma linha de 1,5 cm acima da
extremidade inferior.
3.1.4. Fazer, nessa linha, quatro marcas a lpis, com distncia de 1 cm de cada uma, e nas
extremidades deixar 0,5 cm de distncia de cada margem.
3.1.5. Escrever o nmero 1 sob a primeira marca, o 2 sob a segunda,e assim por diante, at o
nmero 4.
3.1.6. Nas marcas com os nmeros 1, 2, 3 e 4 aplicar a tinta das canetas preta, roxa, rosa,
verde, verde ou azul, de tal forma que o circula tenha um dimetros de 0,5 cm.
3.1.7. Uma mancha no deve invadir a outra, e entre cada uma deve ficar um espao de pelo
menos 0,5 cm.
3.1.8. Cortar a extremidade superior do papel em um comprimento tal que sua extremidade
inferior fique a aproximadamente 0,5 cm do fundo da cuba cromatogrfica (vidro de
Nescaf).
3.1.9. Dobre a parte que sobra do papel e recorte de tal forma a deixar 1 cm de papel
sobrando.
3.1.10. Colocar um pedao de fita adesiva na parte superior dobrada do papel sulfite e prender
o papel na boca da cuba cromatogrfica.
3.1.11. Para obter o eluente, misturar 7 mL de etanol 92 e 7 mL de gua.
3.1.12. Colocar o eluente na cuba cromatogrfica at atingir 1 cm de altura.
3.1.13. Colocar a tira de papel preparada na cuba cromatogrfica tomando o cuidado para que
a camada de eluente fique prxima, mas no molhe inicialmente as manchas de tinta.
Se isso ocorrer, retire um pouco do eluente do frasco, at que o nvel no frasco no
alcance as manchas.
3.1.14. Prender o papel no topo da cuba cromatogrfica com a ajuda da fita adesiva.
3.1.15. Tampar o frasco de vidro com a placa de petri.
3.1.16. Esperar at que o eluente suba at o topo do papel.
3.1.17. Retirar a tira de papel do frasco de vidro, esperar secar e verificar o que ocorreu com as
cores. Anotar as observaes e calcular o R
f
de cada macha. Anexar o cromatograma
no relatrio.
3.1.18. O professor ir fazer uma anlise cromatogrfica utilizando um papel filtro aberto e uma
tampa contendo o eluente.


PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 3.2. Cromatografia em Camada Fina (TLC)

3.2a) Preparao do extrato

3.2a1) Cortar em pedaos pequenos os pimentes verdes, amarelos e vermelhos (Figura 4a).
3.2a2) Pesar cerca de 30 g dos pedaos de cada pimento em bqueres diferentes.
3.2a3) Adicionar 10 mL de acetona e 50 mL de hexano (Figura 4b).
3.2a4) Transferir cada mistura, separadamente, para um almofariz com pistilo e macerar at
obter uma pasta homognea.
3.2a5) Deixar em repouso por 1 hora (Figura 4c).
3.2a6) Filtrar para um funil de separao utilizando um funil comum, com papel de filtro
pregueado, adicionar a soluo lentamente para que o hexano seja filtrado primeiro.
3.2a7) Separar a fase aquosa.
3.2a8) Adicionar, 15 mL de gua. Girar lentamente o funil, pois a agitao brusca pode causar
a formao de emulso.
3.2a9) Separar e descartar a fase aquosa. Repetir esta operao de lavagem, por mais uma
vez.
3.2a10) Descartar a fase aquosa e transferir a fase orgnica (extrato) para um erlenmeyer de
125 mL (Figura 4d).
3.2a11) Adicionar 2g de sulfato de sdio anidro a fase orgnica e deixar em repouso por 15
minutos.
3.2a12) Filtrar em um bquer de 50 mL e concentrar os extratos at o volume de 1 mL, com
aquecimento em banho-maria a 70 C e sob agitao.

Figura 4. Etapas da preparao dos extratos de pimento.
5

3.2b) Aplicao da amostra na placa

3.2b1. Utilizando um capilar, aplicar duas pores da soluo de
pigmentos sobre uma placa de slica (2,5 x 7,5 cm) a 1,0 cm de uma
das extremidades.

Evitar a difuso da mancha de forma que seu dimetro no deva
ultrapassar a 2 mm durante a aplicao da amostra.
3.2b2.
Deixar o solvente evaporar. 3.2b3.

3.2c) Desenvolvimento do cromatograma

3.2c1. Preparar uma cuba colocando uma tira de papel de filtro de 4x5
cm, hexano com 5% de acetona. Tampe com uma placa de petri.

Esperar o tempo suficiente para que ocorra a completa saturao. 3.2c2.
Colocar cuidadosamente a placa na cuba, evitando que o ponto
de aplicao da amostra mergulhe no solvente.
3.2c3.
Quando o solvente atingir cerca de 0,5 cm do topo da placa,
remover a placa e marcar a frente do solvente (linha de chegada
da fase mvel).
3.2c4.
Deixar secar ao ar por 5 minutos e observar o nmero de
manchas coloridas. Caso seja necessrio insira a placa na cuba
contendo um pouco de iodo slido e coberto com uma placa de
petri. Espera-se o surgimento de manchas na placa.
3.2c5.
Copiar a placa com as substncias separadas (cromatograma),
obedecendo fielmente a distncia entre o ponto de aplicao e a
frente do solvente, bem como a distncia percorrida por cada
substncia, iniciando pelo ponto de aplicao at o centro de
maior concentrao da mancha.
3.2c6.
Anotar as observaes e calcular o Rf de cada macha. Identificar
as manchas atravs de dados da literatura.
3.2c7.
Fazer uma anlise cromatogrfica utilizando papel filtro ou sulfite. 3.2c8.


4 Questes

4.1. Qual o estado fsico da fase mvel e da fase estacionria na cromatografia em camada
delgada (CCD)?
4.2. Com que finalidade a soluo de pigmentos lavada com gua?
4.3. Por que o sulfato de sdio anidro adicionado soluo de pigmentos?
4.4. Que se entende por fator de reteno (R
f
)?
4.5. Dois componentes A e B, foram separados por CCD. Quando a frente do solvente atingiu,
6,5 cm, acima do ponto de aplicao da amostra, a mancha de A, estava a 5 cm, a de B a
3,6 cm. Calcular o R
f
de A e de B. Desenhar esta placa, obedecendo o mais fielmente
possvel as distncias fornecidas. O que se pode concluir sobre a resoluo das manchas,
nesta separao?
4.6. Descreva detalhadamente o que voc observou medida que o eluente subia pelo papel
e ao final do experimento.
4.7. Com base nas informaes fornecidas na teoria e nas observaes do experimento, quais
so os componentes das tintas mais atrados pelo eluente? E quais os mais atrados pelo
papel? Explique
4.8. Por que a cromatografia utilizando hexano com 5% de acetona mais rpida que a
cromatografia utilizando etanol - gua 1:1?


5 Bibliografia

1. ROBERTS, R. M.; GILBERT, J . C.; RODEWALD, L. B. WINGROVE, A. S., Modern
experimental organic chemistry, 4
th
ed, Phyladelphia Saunders College Publishing,1985.
2. DEGANI, A. L. G., CASS, Q. B.; VIEIRA, P. C. Qumica Nova na Escola, 1998. 7, 21.
3. PALOSCHI, R.; ZENI, M.; RIVEROS, R. Experimentos Cromatogrficos. Qumica Nova na
Escola, n. 7, p. 35-41, 1998.
4. COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; PIERINA, S. B. Introduo a mtodos cromatogrficos. 4
ed., Campinas: Editora da Unicamp, 1995.
5. RIBEIRO, N. M.; NUNES, C. R. Anlise de Pigmentos de Pimentes por Cromatografia em
Papel. Qumica Nova na Escola, n.29, 34-37, 2008.
6. NBIA, D. S.; Instrumentao para o Ensino de Qumica, Srie: Experincias
Demonstrativas Cromatografia. UNIOESTE, Curso de Qumica.