PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA

TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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PROCESOSGENTICOSDELASNTESISDEPROTENAS:LA
TRANSCRIPCIN
Jacob Monod Cech Pribnow
FundamentoCentraldelaBiologaMolecular:"DogmacentraldelaBiologaMolecular".
Transcripcin.
Las ARN polimerasas y los diferentes tipos de ARN.
Caractersticasdelatranscripcin:complementaridad,direccinyasimetra.
Iniciacindelatranscripcin.
Elongacindelatranscripcin.
Terminacindelatranscripcin.
Procesamiento del ARN.
Procesamiento alternativo.
Autoprocesamiento.
EdicinocorreccindelARN.
FUNDAMENTO CENTRALDELABIOLOGAMOLECULAR
Laaceptacindelahiptesisdela secuencia propuesta por Crick (1958) significaba por un lado la existencia de un cdigooclaveque
permitiera pasar de un lenguaje escrito con cuatro letras (las cuatro bases nitrogenadas) en el ADN a un leguaje escrito con 20 letras (los
aminocidos)enlasprotenas.Porotrolado,significabalaexistenciade unaseriedeprocesosquerealizaranenlaclulaeltrabajodepasarde
una estructuraqumicacomoladeloscidosnucleicosaunaestructuraqumicacomo ladelasprotenas.Yahemosvistoenelcaptuloanterior
lascaractersticasdelcdigooclavegenticaysudesciframiento,ahoravamosaestudiarlosprocesosgenticosdelasntesisdeprotenas.
Teniendoencuentaqueenlasclulas eucariontesloscromosomas(materialgenticoorganizado)seencuentranenel ncleoyquela
informacinquecontienenloscromosomas(losgenes)seexpresa enelcitoplasma,sesupusoquetendraquehaberalgunamolcula
intermediaria enelflujodelainformacindesdeelADNalasprotenas.JacobyMonoden 1961propusieronlaHiptesisdelmensajero:"debe
existirunamolculaque transportelainformacinfielmentedesdeelADNhastalasprotenas".Enese mismoaoBrennerycolaboradores
(1961) demostraron la existencia del este intermediarioqueresultserunamolculadecidoribonucleicoquesedenomin ARN mensajero
(ARNm).Posteriormente,elARNmtenaquesertraducidoaprotena.
Jacob Monod Brenner
BasndoseenestostrabajosCrick(1970) alumbrlaideadeunsistemafundamentaldemantenimientoyflujodela informacingenticaenlos
organismosvivosquedenomin Dogma Central de la BiologaMolecular .Demaneraquelainformacingenticacontenidaenel ADN se
mantiene mediante su capacidad de replicacin.LainformacincontenidaenelADNseexpresadandolugaraprotenas,mediantelosprocesos
de transcripcin,pasoporelquelainformacinsetransfiereaunamolculadeARNmensajero(ARNm)y,medianteelprocesodelatraduccin
elmensajetransportadoporelARNmsetraduceaprotena.
F. Crick "Dogma Central de la BiologaMolecular"
Este esquema central de flujo de la informacinprontofuemodificado,yaqueenalgunosviruscuyomaterial hereditarioesARN,lainformacin
seconservaomantienemediantereplicacin delARN.Adems,tambinsecomprobquelainformacinnovasiempredelADN hacia el ARN
(ADNARN), en algunos casos la informacinpuedefluirdelARNhaciaelADN(ARN ADN), es decir sintetizar ADN tomando como molde
ARN,teniendolugarelfenmenodela transcripcininversa.H.TeminrecibielPremioNobelen1975 porsusdescubrimientosenrelacincon
la interaccinentrelosvirustumoralesyelmaterialgenticoenlaclula,en particularporeldescubrimientodelatranscripcininversaenvirus
ARN-ADN.
Temin Modificaciones del "Dogma CentraldelaBiologaMolecular"
Por tal causa, en una ciencia como la Genticanodeberaemplearselapalabra"dogma"yaquecomoacabamosdeveren muy poco tiempo el
fundamentocentraldelaBiologaMolecularpropuestoporCricktuvoquesermodificado.
TRANSCRIPCIN
Latranscripcinconsisteenlasntesis deARNtomandocomomoldeADNysignificaelpasodelainformacincontenida en el ADN hacia el
ARN.LatransferenciadelainformacindelADNhaciaelARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y
essemejantealprocesodetranscripcindetextos,motivoporelqueha recibidoestenombre.ElARNproductodelatranscripcinrecibeel
nombre de transcrito.
Enlasbacteriaslatranscripcinyla traduccintienenlugarenelcitoplasmabacterianoyalmismotiempo,son simultneas.Sinembargo,en
eucarionteslatranscripcintienelugarenelncleoylatraduccinenelcitoplasma.
Mediante experimentos de pulso y caza, se suministranprecursoresradiactivosquemarcanespecficamenteelARN(uridina tritiada) a las
clulasduranteunbreveperododetiempo(pulso).Unavezque lasclulashanincorporadolauridinatritiadasetransfierenaunmediocon
precursores sin marcar (caza). De este forma es posible seguir el destino del ARNmarcadoduranteelpulso,yaquelasntesisdelnuevoARNse
produce con precursoressinmarcar(uridinanormal).Lasmuestrasdeclulastomadasdespus delacaza,mostrabanmarcajeenelncleo,
indicandoqueARNsesintetizaall, sinembargo,lasmuestrasdeclulastomadasdespusdelacazamostrabanel marcaje radiactivo en el
citoplasma. Por tanto, parece que el ARN se sintetiza enelncleoysetransportaposteriormentealcitoplasma.
Experimento de pulso y cazaconprecursoresradictivos(uridina
tritiada)
Eucariontes:transcripcinenelncleoytraduccinenelcitoplasma
Volkin y Astrachan (1957) demostraron que despusdelainfeccinde E. coli por el fago T2 aumenta la sntesisdeARNyqueesteARN
inducidoporlainfeccindeT2tieneunavidamedia muy corta. Infectaron bacterias con el fago T2 en un medio que contenauridinatritiada,base
nitrogenadaespecficadelARN(pulso),y despuslaspasaronaunmedioconuridinanormalnomarcada(caza).ElARN recuperadodespus
delpulsoestabamarcado,peroelobtenidodespusdelacaza noloestaba,loqueindicabaqueelARNtenaunavidamediamuycorta.Por
ltimocuandosecomparelporcentajedelosdiferentestiposdenucletidos delARNsintetizadoinmediatamentedespusdelainfeccinpor
T2 y del ADNdelfago,seobservqueeramuyparecido,sugiriendoesteresultadoqueel ARNsintetizadodespusdelainfeccinpor T2
procedadelADNdelfago.
LAS ARN POLIMERASAS Y LOS DISTINTOS TIPOS DE ARN
ElARNsueletenerunasolahliceo cadenadenucletidospudiendoformarunaampliagamaestructuras tridimensionales diferentes. El ARN
contienecomoazcaralaribosaylasbases nitrogenadas mayoritarias que posee son adenina (A), guanina (G), citosina (C) y uracilo (U). Por
tanto,eluracilo(U)escaractersticodelARN.Tambinsehan encontrado bases poco frecuentes que forman parte del ARN, como son: la
pseudouridina(),metilguanosina(mG),dimetilguanosina (m
2
G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH
2
).
Enlasclulasexistendiferentestiposde ARN.Porunladoestnlos ARN funcionales,oARNquetienenunafuncin oactividadenlaclulay
quenosetraducenaprotena.DentrodeestacategoraestnelARNribosmico (ARN-r) que forma parte de los ribosomas que intervienen en la
traduccin,los ARN transferentes (ARN-t) cuyafuncinestransportaralosaminocidosduranteelprocesodetraduccin, los ARN nucleares
pequeos(ARNnp)queinteraccionanconprotenas formandoloscomplejosderibonucleoprotenasnecesariosparaelprocesamiento de los
transcritosenelncleoylos ARNcitoplsmicospequeos (ARNcp) queintervieneneneltrasportedelospolipptidosenlasclulas
eucariticas.
Porotrolado,estnlosARN informativosquesonlosquesevanatraduciraprotenas.EstosARN informativos son los ARN mensajeros (ARN-
m). En bacterias el transcrito primario, tal y como se sintetiza ya es el ARN-m maduro que se traduceaprotenas.Eneucariontes,elARNrecin
transcrito se denomina ARN heterogneonuclear (ARN-hn) y es un pre-ARN-m que es procesado antes de convertirse en el ARN-m maduro que
posteriormentesetraduciraprotena.
En bacterias, existe solamente una ARN polimerasaqueescapazdesintetizartodoslostiposdeARN,elribosmico,el transferente y los
mensajeros. La ARN polimerasa de E. coliestformadaporvariospolipptidos,elncleocentraldelenzimatienedoscadenas de tipo (peso
molecular de 40.000), una (peso molecular de 155.000) otra ' (pesomolecularde165.000).Adems,laenzimacompletauholoenzimatienela
subunidad o factor (peso molecular de 95.000)que es necesario para iniciar latranscripcin.Lasubunidad unavezinciadalatranscripcin
se libera y el ncleocentralprosigueconlaelongacindelARN.
ARN Polimerasa de E. coli: subunidades ARNmpolicistrnico:opernlactosa
En bacterias, con mucha frecuencia, los ARNmsonpolignicosopolicistrnicos,demaneraqueunsoloARNmcontiene informacinparala
sntesisdevariospolipptidosdistintos.Habitualmentesetratadegenesquecompartenunsistemacomnquecontrolasuexpresin(opern).
Sin embargo, en eucariontes hay diferentes polimerasas encargadas de sintetizar distintos tipos de ARN.
La ARN polimerasa I sintetiza los precursoresdelARNribosmico(ARNr).
La ARN polimerasa II produce ARN heterogneonuclear(ARNhn)quetraselprocesamientodalugaralosARNmensajeros (ARN-m) que
setraducenaprotenas.
La ARN polimerasa III transcribe los precursores de los ARN transferentes (ARN-t), los ARN nucleares y citoplsmicosdepequeo
tamaoylosgenesparaelARN5Squeformapartedelasubunidad grande de los ribosomas.
LasARNpolimerasaseucariticassonbastantemscomplejasquelasde E. coli, poseen subunidades semejantes o correspondientes a las de
E. coli y otras que no lo son.
Las ARN polimerasas o trasncriptasas, a diferenciadeloqueocurreconlasADNpolimerasas,carecendefuncin" correctora de pruebas". Esta
diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos soncortosylaprobabilidaddequeunodelosARNposeaunaalteracinesbaja, y en
segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con
unaalteracinnoesgrave yaquedurarpocoyserremplazadoprontoporotronuevosinlaalteracin.Sinembargo,unerrorenlareplicacin
del ADN puede transmitirse a todaslasclulasquederivenpordivisindelaclulaafectada.
EneucarionteslosARNmsonmonognicoso monocistrnicos,demaneraqueunARNmcontieneinformacinparasintetizarun solo
polipptido.
CARACTERSTICASDELATRANSCRIPCIN:COMPLEMENTARIDAD,DIRECCINYASIMETRA
Seguidamente vamos a ver las principales caractersticasdelatranscripcin.
Complementaridad: El parecido entre el ADN yelARNsugierequelatranscripcinprobablementeestabasadaenlasreglasde
complementaridaddelasbasesnitrogenadasaligualquelareplicacindelADN. De manera que la ARN polimerasa o enzima encargada
de llevar a cabo la transcripcintomacomomoldeelADNparasintetizarARNysiguelasreglasde complementaridad, la A del ADN
empareja con U del ARN, la G con C, la C con G y laTconA.Existenexperimentosquedemuestranquelaproporcin(A+U)/G+C)del ARN
essimilaralaproporcin(A+T)/(G+C)delADN.Enlasiguientetablase muestralaproporcindenucletidosdediferentesADNsydesus
correspondientes transcritos:
Origen del ADN (A+T)/(G+C) del ADN (A+U)/(G+C) del ARN
Fago T2 1.84 1.86
Vaca 1.35 1.40
Micrococcus (bacteria) 0.39 0.49
En la siguiente figura, se ilustra que la secuenciadebasesenelARNescomplementariaalasecuenciadelahlice codificadora e igual a la
secuenciadelahliceestabilizadora,cambiandoTporU.
La secuencia de bases del ARN es complementariaalasecuenciadelahlicecodificadora
Otra manera de comprobar que existe complementaridadentreelADNyelARNesrealizarexperimentosdehibridacin, de manera que el ADN
se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en supresencia,cuandosellevaacabolarenaturalizacin(medianteun enfriamiento
lento),seproducenhbridosADNARN.Lasmolculashbridas ADNARNsepuedendistinguirmediantecentrifugacinengradientedeCsClya
que presentanunadensidaddiferentealadelasdobleshlicesADNADN.La aparcicindemolculashbridasADNARNsoloesposiblesi
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos resultados indican que el transcrito es complementario del ADN parental.
Ladireccin en la que las ARN polimerasassintetizanARNessiempre5'P3'OH,esdecirelARNproductodela transcripcincrece
solamenteenestadireccin.RecuerdequeladireccinenlaquelasADNpolimerasassintetizanADNestambinlamisma5'P3'OH.
Asimetradelatranscripcin: la asimetradelatranscripcinsignificaquesolamentesetranscribeparacada genunadelasdoshlices
deADN,lahlicequesetomacomomoldepara producir el ADN se la denomina hlicecodificadoraohlicecon sentidoylaotrahlice
de ADN, la que no se transcribe, se la denomina hliceestabilizadora o hlicesinsentido.
Direccinyasimetradelatranscripcin
Por ejemplo, Marmur y Greenspan (1963) comprobaron que en el fago SP8 que infecta a Bacillus subtilis, las dos hlicesdesuADNsepueden
separarmediantedesnaturalizacin,enfriamiento rpidoparamantenerlasseparadasyposteriorcentrifugacinengradientede densidad de
CsCl.Porconsiguiente,estevirusposeeunahliceligera(L)y otrahlicepesada(H)condistintarelacindepurinas/pirimidinas.Sise
renaturaliza(enfriamientolento)elARNsintetizadodespusdelainfeccinde B. subtillis por el virus y se hibrida por separado con el ADN de la
hliceLyconelADNdelahliceH,sepuedecomprobarqueelARNsolamente hbridaconelADNdelahliceH.Portanto,enelvirusSP8
todos los genessetranscribenutilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahliceH.Latranscripcinesasimtrica.
Hayashi y col. (1963) demostraron que el fago X174cuyomaterialhereditarioesADNcirculardeunahlice, denominadahlice(+),cuando
infecta a E. coli, pasa por una forma replicativadedoblehlice,lanuevahlicedeADNsintetizadadespusdela infeccinselallamahlice().
Lahlice()sirvedemoldedurantelas ltimasetapasdelainfeccinparaproducirmedianteuna replicacinasimtricanuevashlices(+)del
ADNdelvirusqueseintroducirnenel interiordelascpsidesyaformadas.Asuvez,comprobaronqueelARNquese sintetiza inmediatamente
despusdeinfectara E. coli , solamente hibrida conelADNdelahlice().Porconsiguiente,todoslosgenesdeestevirusse transcriben
utilizandocomomolde(hlicecodificadora)lahlice().Latranscripcinesasimtrica.
Fago SP8 FagoX174
En otros fagos, como el bacteriofago T4, sehacomprobadoquepartedelosgenessetranscribenapartirdeunahlicey otro grupo de genes
utiliza como codificadora a la otra cadena. Estos resultados se pueden explicar suponiendo que inicialmente todos los genes del fago se
transcribanutilizandosolamenteunadelashlicesyqueposteriormentese produjounainversin(seinvierteelordendeungrupodegenes
mediante dos girosperpendicularesde180,ungiroqueinviertelasecuenciayotrogiro perpendicular al anterior para mantener la polaridad de
la hebras del ADN). Como consecuencia,despusdelainversinelgrupodegenesdelsegmentoinvertido utiliza como codificadora la otra
hlice.
Inversin SituacinenelfagoT4
En los organismos eucariontes, para cada gen solamente se transcribe un hebra de ADN (la codificadora), de forma que genes distintos del
mismocromosomapuedenutilizarcomocodificadoraunahlicediferente a la de otros genes.
INICIACINDELATRANSCRIPCIN
Eliniciodelatranscripcinnecesitaque el factor estunidoalncleocentraldelaARNpolimerasa.Existenunas secuencias de ADN
especficasynecesariasparaquelaholoenzima reconozcaellugardecomienzodelatranscripcin,dichassecuencias especficasse
denominansecuenciaspromotoras.Pribnow(1975)aislysecuenci las regiones de ADN que quedaban protegidas por la ARN polimerasa
despusdesometerlasadigestinconADNasapancretica.Siguiendoestemtodose secuenciaron los primeros promotores de fagos como
el T7 y ,ydelpromotordelopern lactosa.Pribnowobservunasecuenciadeunos7paresdebasesquese encontraba 10 bases antes de la
primeraquesetranscribeyqueaparecaenla mayoradelosfragmentosprotegidosporlaARNpolimerasa.Estasecuenciasela denomin
Caja de Pribnow y es: 5' TATPuATPu 3'.
Secuencias promotoras consenso de E. coli y eucariontes Pribnow
Cuando se analizan las secuencias de las regiones anteriores a la primera base que se transcribe aparecen dos regiones cortas que muestran
unparecidoosimilitudbastantegrande,laprimeraregin se encuentra 10 bases antes de la primera que se transcribe ( Caja de Pribnow) y la
segunda se localiza 35 bases antes. El estudio de muchas regiones promotoras de diferentes genes permite determinar las secuencias que
aparecen con mayor frecuencia y establecer lo que se denomina las secuencias promotoras consenso o ideales.
Los resultados obtenidos en E. coli despusdeanalizar100regionespromotorassonlossiguientes:
Secuencias consenso promotoras en E.coli
5' ....... T
82
T
84
G
78
A
65
C
54
a45 ................ T
80
A
95
t
45
A
60
a
50
T
96
...................CAT .............. 3'
5' ....... -35 ................ -10 ................... 1basestranscrita
Elsubndiceindicaelporcentajedeaparicindelabasemsfrecuentedeesaposicin.Sila letraesmaysculaindicaqueelporcentajedeaparicinesmayor del 54% y
siesminsculaqueesinferioral54%.
El factor sigma es el responsable de que la ARN polimerasa reconozca estas secuencias y se una a ellas. La holoenzima recorre el ADN hasta
encontrar las regiones -10 y -35 (secuencias promotoras) y seuneaellas,posteriormentecomienzaasepararlasdoshlicesporlaregin -10
(rica en pares AT). Cuando la holoenzima ha reconocido y separado las dos hlicesseformaloquesedenomina" complejo abierto con el
promotor".
IniciacindelaTranscripcin Secuencias de regiones promotoras de E. coli
La actividad de los promotores puede modificarse por la presencia de otras secuencias estimuladoras o "enhancers" que aumentan la tasa de
transcripcinopor secuencias atenuadoras que disminuyenlatasadetrasncripcin.Estassecuenciasestimuladorasy/o atenuadoras suelen
estar cerca de las promotoras pero no a una distancia fija de estasypuedenejercersufuncinsobrevariospromotoresdiferentes.
Eneucarionteslainiciacindela transcripcinesmscomplejaquelade E. coli y depende de la presencia de Factores proteicos de
transcripcin(TF).Lamayoradelassecuencias promotoraseucariticasseencuentranantes(o"aguasarriba")delaprimera base transcrita,
aunque algunos promotores de la ARN Pol III se localizan despusdelaprimerabasetranscrita("aguasabajo").LosTFinteraccionancon las
ARNpolimerasasparainiciarlatranscripcin,lospromotoresdelaARNpol IIsonlosquemuestranmayorvariacinensusecuencia,motivopor
el que hay muchos TF diferentes que interaccionan con la ARN pol II para iniciar la transcripcin.ExistentrestiposdeFactoresproteicosde
transcripcin(TF):
Factores basales: necesarios para elcomienzodelasntesisdeARN.
Factoresqueactanaguasarriba: reconocensecuenciasconsensocortassituadasantesdelpuntodeiniciacincuya actividadnoest
regulada, de manera que se unen a cualquier promotor que contenga estas secuencias.
Factores inducibles: reconocen secuencias consenso cortas o elementos de respuesta situadas antes del puntodeiniciacincuya
actividadsiestregulada.Estosfactoresinducibles son sintetizados o activados en diferentes tejidos y momentos del desarrollo
controlandolospatronesdetranscripcinendiferenteslugares(tejidos)ymomentos del desarrollo en los organismos.
Los promotores que tienen secuencias que solamentesonreconocidasporfactoresbasalesyfactoresqueactanaguas arriba, corresponden a
genes que se expresan de manera constitutiva (se expresan siempre) en todos los tejidos. Se trata de los genes encargados del metabolismo
bsicodelaclulainvolucradosenelbuenfuncionamientocelular.Aestos genes se les ha denominado genes (" Housekeeping genes"), es
decir, los genes que guardan o mantienen la casa.
Los promotores de la ARN pol I (transcribe losprecursoresdelARNribosmico)tienendossecuenciasricasenparesGCy que muestran una
homologadel85%,unasecuenciade65pbdenominadancleoque incluye la primera base que se transcribe (de -45 a +20) y una segunda
secuencia unos70pbantes(aguasarriba)queactacomoelemento de control y que vadesdelaposicin107ala180.
Los promotores de la ARN pol III (transcribenARNt,ARN5SyARNdetamaopequeo)contienensecuenciasde reconocimiento situadas
despusdelaprimerabasequesetranscribe(aguas abajo), a este tipo de promotores se les denomina promotores internos (estndentrodel
gen). Se han encontrado en los promotores de ARN-t y ARN-5S peronosehandescritoenARNdetamaopequeo.
LospromotoresdelaARNpolIIsonms variablesquelosdelasARNpolIypolIIIperoapesardeestavariacin tienen una estructura general
bastante conservada, de manera que se han reconocidoalmenostressecuenciascannicasoconsensosituadasenlas regiones -25 ( caja
TATA, con la secuencia TATAAAA), -75 ( caja CAAT con la secuencia GGC CAATCT) y -90 ( caja GC con la secuencia GGGCGG). La caja
TATA es equivalente a la caja de Pribnow de los promotores de bacterias y se la denomina caja de Hogness.
Elpuntodeiniciacindelatranscripcin eneucariontessueleserunaadeninaflanqueadaporpirimidinas,aceptndosela existencia de una
regininiciadora(Inr)conelsiguientetipodesecuencia:Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir.
Resumen de las secuencias consenso promotoras en eucariontes
5' .... GGGCGG ......... GGCCAATCT ...... TATAAAA ..... Pir-Pir-C-A-Pir-Pir-Pir-Pir-Pir ........ 3'
5' ..... -90 ......... -75 ...... -25 ..... 1basestranscrita
ELONGACINDELATRANSCRIPCIN
Laelongacindelatranscripcinno necesita del factor ,unaveziniciadalatrasncripcinelfactorsigmase sueltayelncleocentraldelaARN
polimerasa comienza a sinterizar el ARN enladireccin5'P 3'OH a partir de ribonuclesidostrifosfatolibresquesirvendesustratoalenzima.
Parece ser quesevanproduciendodesenrollamientosparcialesdelADNdelareginquese esttranscribiendoyquelavelocidadde
transcripcinenE. colia37Cesde2500ribonucletidosporminuto(aproximadamente42ribonucletidosporsegundo).
TERMINACINDELATRANSCRIPCIN
LaterminacindelatranscripcinenE. coli puede tener lugar por dos mecanismos distintos:
Existencia de unas secuencias terminadorasdeunos40paresdebasesquecontienenunareginricaenpares GC seguida por una serie
de6omsadeninas(A).CuandoestaregindelADN se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en pares GC seguida de 6 o
msuracilos(U),lareginricaenparesGCformaunaestructuraenforma de horquilla (por autoapareamiento). Este lazo en horquilla
seguido de uracilosactacomosealparalaseparacindelaARNpolimerasadelADNyterminacindelatranscripcin.
Secuencias terminadoras ricas en pares G-C que forman un lazo en horquilla, seguidas de 6 a 8
uracilos.
Terminacindependientederho
Terminacindependientedelaactuacin del factor proteico rho ( )queesunhexmeroformadopor6subunidades.Los ARN que
presentansealesdeterminacindependientesderho()nosuelenpresentar el lazo en horquilla seguido de uracilos. Par que se produzca
la terminacindelatranscripcin,elfactorrho()reconoceraunasecuenciaespecficadelARNdenominadasitiorut yseuniraaellapara
posteriormente tirar del ARN y soltarlo de la ARN polimerasa. Las secuencias rut suelen estar un poco antes (aguas arriba) del lugar en el
que la ARNpolimerasaterminalatranscripcin.
Eneucarionteslaterminacindelatranscripcinesmscompleja.
PROCESAMIENTO DEL ARN
LosARNrecinsintetizadossuelensufrir un procesamiento posterior. Por ejemplo, en bacterias, el ARN precursor del ARN ribosmico(ARNr)
esdemayortamao,sucediendoalgoparecidoconlosARN precursores de los ARN transferentes (ARN-t). Sin embargo, el ARN que se va a
traduciraprotenasnosufreprocesamientoalgunoenbacterias,talycomose sintetiza comienza a traducirse. De hecho, en bacterias la
transcripcinyla traduccinsonsimultneas(almismotiempo),esms,annohaterminadode transcribirse un ARN mensajero y ya se le han
unidoribosomasqueestntraducindolo.
Visualizacindelatranscripcinylatraduccinenla
bacteria E. coli
Esquema de la transcripcinylatraduccinenlabacteriaE. coli
El ARN precursor del ARN transferente de bacteriastieneunaregin"lder"porelextremo5'yuna"trailer"porel extremo 3' que desaparecen
duranteelprocesamientograciasalaaccindelaARNasaPydelaARNasaQ.AvecesseencuentralainformacinparadosARNtdistintos en
elmismoARNprecursor,existiendoentreambosunaregin espaciadora que se transcribe, de forma que la estructura del ARN precurso es la
siguiente:5'LderARNt
1
- Espaciador transcrito - ARN-t
2
- Trailer 3'. Posteriormente, la ARNasa P y la ARNasa Q cortan el precursor liberando
los dos ARN transferentes.
ElnmerodecopiasdegenesdeADNr(ADN ribosmico)enbacteriasesbajoentre5y10copias.CadagendeADNrposeeun promotor y
unareginterminadoraquedalugartraslatranscripcinaunARN precursordelARNribosmico(ARNr)demayortamaoqueelARNr
maduro. EL ARN precursortieneuncoeficientedesedimentacin30Seincluyeinformacinpara elARN16S,unamolculadeARNt,elARN
23S y el ARN 5S. Este ARN precursor es cortado por la ARNasa III y una endonucleasa que generan tres piezas, una que contiene el precursor
delARN16S(subunidadpequearibosoma)juntoconunARNt,elARN23S (subunidad grande del ribosoma) y el ARN 5S (subunidad grande
del ribosoma). DespusactalaARNasaMqueseparaelARN16SdelARNt.
Porcesamiento ARN-t de bacterias Procesamiento ARN-r de bacterias
LosgenesparaelARNribosmicoen eucariontes se encuentran repetidos en tandem del orden de cien veces en la regindelorganizador
nucleolar (NOR). En el caso de la especie humana existen varios cromosomas con regiones organizadoras nucleolares, en particular, cinco pares
decromosomas,lospares13,14,15,21y22.EncadareginNORcadagen ADNrtieneunpromotoryunterminadoryestseparadodel
siguiente por una reginespaciadoraquenosetranscribe.ElARNprecursor(recintranscrito) delARNribosmicotieneuncoeficientede
sedimentacin45Sysuestructuraeslasiguiente:5'LderprecursordelARN18SEspaciadortrasncrito - precursor del ARN 5,8S - Espaciador
transcrito - precursor del ARN 28S 3'. Posteriormente, diferentes ARNasas y endonuclesas producen cortes en el ARN 45S que dan lugar al ARN
18Sdelasubunidadpequeadelosribosomasya los ARN 28S y 5,8S que forman parte de la subunidad grande de los ribosomas. Los genes
paraelARN5Sdeeucariontesselocalizanenotraregindiferentedeloscromosomaseucariticos.
Procesamiento ARN-r de eucariontes Genes para ADN-r de la reginNOR
Sinembargo,eneucariontesademsdesufrirprocesamientosposterioresalatranscripcinlosARN funcionales que van a dar lugar a los ARN-
ryARNt,tambinsufrenunprocesamiento posteriorasutranscripcinlos ARN informacionales que van a ser traducidosapolipptidos.Este
procesamiento consta de varios pasos y tiene comoprincipalconsecuencialadisminucindeltamaodelARNhn(heterogneo nuclear)recin
transcritoporprdidadevariossegmentosdelinterior.Losprincipales pasos del procesamiento del ARN-hn son los siguientes:
Adicindeunacaperuzaoproteccinpor elextremo5'PdelARNhnqueentreotrascosasloprotegedesudegradacin por dicho
extremo.Estacaperuza("capping"oabreviadamentetapno"cap") consisteenlaadicindeunresiduode7metilguanosinamedianteel
establecimiento de un enlace trifosfato. Existen tres tipos de caperuzas, cap0 solamenteestmetiladalaprimerabase(laguanina),cap1
estmetiladatambinlasegundabase(eseltipomsfrecuentedecaperuza)ycap2enel quetambinestmetiladalatercerabase.Otra
posiblefuncindelacaperuza del extremo 5'P es la suministrar una estructura que sea reconocible por el ribosoma para iniciar la
traduccin.
Adicinporelextremo3'OHdeunacola dePoliA,estacoladepoliAconsisteenlaadicinde150a200residuosde adenina por el
extremo 3'OH. En primer lugar una endonucleasa corta el ARN y despusunaPoliApolimerasaaadelacoladePoliA.Lalongituddela
cola dePoliAvariaeneucariontes,esde150a200nucletidosenclulasde mamferos,yde50a60residuosenlevaduras.LosARNde
histonas no tienen poliadenilacinporelextremo3'OH,sufrenunprocesamientodiferentespor eseextremo.LafuncindelacoladePoliA
se cree que puede servir para evitarladegradacinpordelARNposeseextremoeintervenireneltransporte del ARN hacia el citoplasma.
Eliminacindesegmentosinterioresdel ARNhn.Losgeneseneucariontesestnfragmentados,demanera,queposeen regiones que se
traducenaaminocidosenlasecuenciadelpolipptidoyque se denominan Exonesy,regionesquenosetraducenaaminocidosenel
polipptidoyquesedenominan Intrones.CuandolaregindeADN correspondienteaungensetranscribe,elARNhnrecintranscrito
contiene los Exones y los Intrones, y durante el procesamiento posterior se van a eliminar los Intrones o regiones que no se traducen a
aminocidosenelpolipptido.Estaeliminacindelos Intrones que tiene lugar durante el procesamiento no suele afectar al orden relativo
de los quetenanlosExones en el ADN.
EnadenovirussedemostrporP.A.Sharp y R. J. Roberts (1977) que el ARN-m y el ADN del gen correspondiente no coincidanconexactitudal
hibridar,demaneraqueaparecanlazosdeADN monocatenarios.Portanto,habasegmentosdelADNdelgenquenoestaban representados
en el ARN-m maduro. Por consiguiente, los genes estaban fragmentados o en piezas. Por sus trabajos Sharp y Roberts recibieron el Premio
Nobelen1993.Posteriormente,secomproblaestructuraenIntronesy Exones(genesfragmentados)delosgeneseucariticos.Laprimera
evidencia se obtuvo con los genes de la globinadeconejoydelaovoalbminadegallina. Los genes de la globinadeconejoyratntienen
tres exones y dos intrones, mientras que el de la ovoalbumina de gallina tiene 7 intrones y 7 exones.
Esquema de procesamiento de un ARN-hn P. A. Sharp R. J. Roberts
A partir de eritrocitos de conejoseconseguiaislarelARNmensajeromaduro(ARNm)quellevainformacin para la -globina yelARNrecin
transcritooARNheterogneonuclear(ARNhn).Tambin,fue posibleaislarelsegmentodeADNquellevalainformacinparala -globina.
MediantelatcnicadeloslazosRdesarrolladaporWhiteyHogness(1977)esposible hibridarARNconADNdedoblehliceaaltas
temperaturas y en presencia de formamida.Enestascondiciones,loshbridosADNARNsonmsestablesquelas molculasdeADNdoble
hlice.Comoconsecuencia,elARNhibridaconla secuenciacomplementariadeADNydesplazaalaotrahlicedeADNquequedasin aparear
formandounlazoR.Sisehibrida,porunlado,elARNmdela -globina con el segmento de ADN que lo ha originado, y por otro, el ARN-hn
(recintranscrito) de la -globina conelsegmentodeADNquelooriginyseanalizanlosresultadosal microscopioelectrnico,seobtienenla
siguientesimgenes:
Los resultados obtenidos indicaban que hay una zona del ARN-m maduro que no hibrida con el ADN del gen de la -globina ya que en el centro
se observa laaparicindeunlazodeADNdoblehliceyaambosladoslaexistenciadedos lazosR.Sinembargo,elARNhn(recintranscrito)
hibrida en toda su longitud con el ADN del gen de la -globina sin que aparezcan enelcentrozonasolazosdeADNdoblehlice.Portanto,
parece que la diferenciaexistenteeneltamaodelARNhnydelARNmsedebeaqueexistira unprocesamientoqueeliminaraunapartedel
centro del ARN-hn. Estas regiones del ADN del gen de la -globina que no se traducen enaminocidosenlaprotenarecibieronelnombrede
Intronesyaquellasquesse traducenenaminocidossonlosExones.Enelsiguienteesquemasedauna interpretacinalosresultados
obtenidos cuando se hibrida el ARN-m con el ADN del gen de la -globina.
Lazos R: gen de la globina de conejo Procesamiento del ARNhn de la ovoalbumina
El gen de la seroalbminaderatatiene14exonesy13intronesyelfactorVIIIde coagulacinhumanoposee26exones.Elgendela
ovoalbumina de gallina tiene 7700 pares de bases entrelareginlder,lossieteintrones(1al7)ylossieteexones(AalG)queposee. El ARN-m
tiene1872nucletidos,elrestohastalos7.700paresdebasesse retiraduranteelprocesamiento.Eltamaodelosintronesdeestegenvaria
desdelos251pbdelintrnBhastalos1600pbdelintrnG.
HibridacindelADNdelgendelaovoalbuminaconelARN mensajero
maduro (ARN-m)
Hibridacindelgendela ovoalbumina Gen ovoalbumina: 7 intrones y 7 exones
En el gen del factorVIIIdecoagulacinhumanoeltamaodelosexonesvaraentre69y3106pbyposeeintronesdehasta32.400pb.Elnmero
de intrones y exones y su tamaoesmuyvariabledeunosgenesaotrosdentrodelamismaespecie.El nmerodegenesqueposeenunsolo
intrnvaramuchodeunasespeciesaotras,en Levadura (Saccharomyces cerevisiae) es el 95%, en D. melanogaster el17%yenmamferosel
6%.
Tambinsehandetectadointronesenlosgenesquecodifican para el ARN-r, por ejemplo en el ARN 28S en D. melanogaster . Igualmente, en
ARNtdeTyrenlevadurasehadetectadounintrnde14basesjustoantes delextremo3'deltripletedelanticodn.Posteriormentesehan
detectado intrones en posiciones semejantes en otros ARN-t (ser, phe, leu, etc).
Laeliminacindelosintronessellevaacabomedianteun mecanismodecorteenlasregionesdepasodeexnaintrnydeintrnaexn para
eliminarlosintronesydeuninposteriordelosexonessucesivos.Estemecanismodecorteyuninharecibidoelnombrede"splicing"eningls.
Cuandoseanalizanlassecuenciasdelasregionesdepasodeintrnaexnyde exnaintrnseencuentraunassecuenciasbastante
conservadas, en casi todos loscasosaparecelasecuenciaGUenelpuntodecorte5'delintrnyAGenel punto de corte 3'. Estas secuencias
sonreconocidaspormolculasdeARN nuclearespequeas(ARNnp)queinteraccionanconprotenasformandopartculas ribonucleoproteicas
pequeasqueconstituyenloquesehadenominadoel"espliceosoma".
Secuenciasconsensoexnintrnexn Espliceosoma
Las reacciones de corte y empalme en las que se elimina elintrnyseunenlosexonesconsecutivossondosreacciones transesterificacin,
estas reacciones consisten en el intercambio de un enlace fosfidisterporotro,dandocomoresultadolaunindedosexonesconsecutivos.
PROCESAMIENTO ALTERNATIVO
Tambinsehaobservadoqueendiferentestejidosdeunmismo individuo o en el mismo tejido en diferentes momentos del desarrollo se pueden
producir procesamientos distintos del mismo ARNhn, como consecuencia en cada tejido o momento del desarrollo se produce un ARN-m maduro
diferente que da lugaraunapolipptidodistinto.Unejemplodeprocesamientoalternativoeslo quesucedeeneltiroidesyenelhipotlamoen
los que el mismo ARNhn da lugar conprocesamientosdiferentesalpptidodecalcitoninaeneltiroidesyal pptidoCGRPenelhipotlamo.Otro
ejemplo de procesamiento alternativo es el caso del transcrito primario del gen de la tropomiosinaenmsculoestriado,msculoliso,cerebroy
fibroblasto. En los dos ejemplos citados de procesamiento alternativo se mantiene el orden relativo de los exones.
Procesamiento alternativo calcitonina y CGRP Procesamiento alternativotropomiosina
AUTOPROCESAMIENTO
ExistenmuchosejemplosdemolculasdeARNquepuedenrealizar el autoprocesmiento de sus intrones sin necesidad de la ayuda de protenas.
EstasmolculasdeARNquepuedenactuarcomounaenzimacon propiedadescatalticassehandenominado ribozimas. Esta capacidad de
autoprocesamientodealgunosmolculasdeARNfuedescubiertaporCechycolaboradores en 1981 estudiando el ARN 35S precursor del ARN-
r 26S de Tetrahymena thermophila(ciliado).LamolculadelARNr26Scontieneunintrnde400basesqueseautoprocesa.T.Cechrecibien
1989 el Premio NobelporeldescubrimientosdelosARNconpropiedadescatalticas.
Autoprocesamientodeunintrn T. Cech
Existen dos tipos de intrones que se autoprocesan, los del grupo I en los que el producto de eliminacindelintrnesunamolculalinealylosdel
grupo II en los que el productodeeliminacindelintrnesunamolculaenformadelazo.Enelgrupo I se encuentran los transcritos primarios de
algunos virus que infectan a E. coli, los transcritos primarios de Tetrahymena, en mitocondrias y cloroplastos, y en algunos ARN-t primarios de
bacterias. En el grupo II se encuentran algunos ARN-t primarios y algunos transcritos primarios de mitocondrias y cloroplastos.
EDICINOCORRECCINDELARN
CuandoseestudilasecuenciadebasesdelARNmde cox II que codifica para la subunidad II de la citocromo c oxidasa mitocondrial del
Tripanosoma bruceiencontraronqueenlaposicin520habacuatro uracilos que no se encontraban presenten en la secuencia de bases del
gen. Por tanto,estoscuatrouraciloshabansidoaadidosdespusdelatrasncripcin(Benney col. 1986).
LaedicinocorreccindelosARNsehadescritoendiferentesespecies(protozoos,hongos,plantasymamferos),enorgnulos(mitocondrias y
cloroplatos)yenelncleo.Ademsseproducetantoenregiones codificantes(exones)comonocodificantes(intrones).Lacorreccinoedicin
delARNpuedeproducirseporadicindebasesnitrogenadas,prdidadebases nitrogenadasoporsustitucindebasesdespusdela
transcripcin.
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