Imunodifuso em Gel de Agarose

(IDGA)
Paula Finger

Fevereiro de 2013

Universidade Federal de Pelotas
Graduao em Biotecnologia
Disciplina: Imunologia
- Prtica -
Mtodos de diagnstico
ANTICORPOS
CHAVE PARA
DIAGNSTICO
IDENTIFICAR
ANTGENO
Combinao Ag-Ac
Aglutinao
Precipitao
Ativao do Complemento
Citlise
Neutralizao

Reao de precipitao
Complexos moleculares gerados por Ag e Ac
Formao de precipitados de acordo com os
reagentes
Efeito pr-zona
Zona de equivalncia

Curva de precipitao
Considerar concentrao Ag x Ac
Reaes de precipitao
Ag com mltiplos
epitopos
Ac bivalente
AG + EXCESSO DE AC
Reaes de precipitao
Ag com mltiplos
epitopos
Ac bivalente
AG + AC EM
PROPORES TIMAS
Reaes de precipitao
Ag com mltiplos
epitopos
Ac bivalente
AC + EXCESSO DE AG
IMUNODIFUSO - Tipos
2 Tipos:

DUPLA
RADIAL
Permite determinar
concentrao de um
antgeno ou anticorpo
Permite determinar
presena de anticorpos ou
antgeno
Tcnica IDGA
Placas de petry
Tampo Tris HCl
Agar noble
Furador (roseta)
Sugador

Material necessrio:
- Realizao da tcnica -
Antgeno
Soro controle
Soros para testar
48-72 horas depois
Imunodifuso Dupla
Ag
Ac
Linha de Precipitao
Difuso Radial
Imunodifuso Dupla
O que determina a posio da linha de
precipitao????
Ag
Ac
Ag
Ac
Imunodifuso Dupla
Utilizao


Diagnstico
Leucose Bovina
Anemia Infecciosa
Equina
Lngua Azul
Distribuio dos reagentes
1 e 4: Ac padro
7: Ag padro
2, 3, 5 e 6 - soros de campo
2, 4 e 6: Ac padro
7: Ag padro
1, 3 e 5 - soros de campo
Reaes observadas
Soros de campo 2 e 5 negativos;
Soros de campo 6 e 3 positivos,
Obs.: soro 3 positivo mais fraco
que soro 4.
Soros de campo 1 e 4 positivos;
Soro de campo 5 negativo.


Roseta A
Roseta B
SP
SP
SP
SP
SP

Possveis reaes
Anti -1
A: identidade
Ag
B: no identidade
C: identidade parcial
Anti 1, 2 e 4
Anti 1 e 3
esporo

1) Os arcos de precipitao formados
entre o Ac e os dois antgenos se
fundem, indicando que o Ac est
precipitando epitopos idnticos.

2) O Ac preparado distingue os trs Ag
diferentes que formam arcos
independentes de precipitao.

3) Os antgenos compartilham o
epitopo 1, mas um deles tambm
possui um epitopo 3. A linha de
precipitao indica, ento, uma
identidade parcial e no total, entre as
preparaes de Ag.
Tipos de linhas:
Poos:
1 e 4: soros padro
2,3,5 e 6: soros de
campo
7: antgeno

Linhas:
Vermelha: Identidade
Verde: No identidade
Azul: Esporo
1
2
3
4
7
5
6
ANTGENO
LEUCOSE
SORO
PADRO
SORO
PADRO
SORO
PADRO
SORO de
CAMPO
(Pos)
SORO de
CAMPO
(Neg)
SORO de
CAMPO
(Neg)
Reaes no
teste de
Leucose
Vantagens
Simplicidade e praticidade;
Custo;

Desvantagens
Reaes inespecficas;
Tempo
Sensibilidade razovel.




Imunodifuso em gel de agarose - IDGA
Legenda da Placa 1
Roseta 1:
1. Bovino
2. Coelho
3. Bovino
4. Coelho
5. Bovino
6. Bovino
7. Anti-bovino

Roseta 2:
1. Equino
2. Bovino
3. Equino
4. Bovino
5. Equino
6. Bovino
7. Anti-bovino

Roseta 3:
1. Bovino
2. Bovino
3. Bovino
4. Bovino
5. Bovino
6. Bovino
7. Anti-bovino.
Roseta 4:
1. Bovino
2. Bovino
3. Bovino
4. Anti-Bovino
5. Anti-Bovino
6. Anti-Bovino
7. Equino/Anti-
bovino/Anti-caprino
Legenda da Placa 2
Roseta 1:
1. Bovino
2. Caprinp
3. Bovino
4. Caprino
5. Bovino
6. Caprino
7. Anti-bov e cap.

Roseta 2:
1. Coelho
2. Coelho
3. Coelho
4. Caprino
5. Caprino
6. Bovino
7. Anti-equino/Anti-
bovino

Roseta 4:
1. Equino/Anti-bovino
2. Equino/Anti-bovino/Anti-
cap
3. Equino/Anti-bovino
4. Equino/Anti-bovino/Anti-
cap
5. Equino/Anti-bovino
6. Equino/Anti-bovino
7. Anti-bov
Roseta 5:
1. Ceolho
2. Coelho
3. Equino/Anti-Bovino
4. Equino/Anti-Bovino
5. Anti-Bovino/Cap
6. Anti-Bovino/Cap
7. Bovino

Roseta 3:
1. Bovino
2. Bovino
3. Bovino
4. Bovino
5. Bovino
6. Bovino
7. Anti-bovino.