Cromatografa en columna.

Es el mtodo ms utilizado para la separacin de compuestos orgnico a escala

preparativa. La fase estacionaria se deposita en el interior de una columna de
vidrio que termina con una placa porosa que impide su paso y en un
estrechamiento con una llave. La mezcla se deposita sobre la parte superior de la
fase estacionaria mientras que la fase mvil atraviesa el sistema. Los compuestos
van saliendo por separado de la columna y se recogen en fracciones, los ms
polares quedan ms retenidos y para que salgan generalmente hace falta
aumentar la polaridad del disolvente. El tiempo necesario para eluir un compuesto
de la columna se llama tiempo de retencin.

El adsorbente ms utilizado para cromatografa de columna es gel de slice,
aunque tambin se puede emplear almina y florisil. La elucin de la
cromatografa puede realizarse por gravedad o mediante presin (Flash
chromatography), la diferencia en ambos casos est en el tamao de las
partculas de gel de slice (0,063-0,200 nm, slice de columna, 0,040-0,063 nm,
slice flash). Debido a que la disminucin del tamao de las partculas de
adsorbente conduce a una separacin ms eficaz, la cromatografa a media
presin (flash) proporciona mejores resultados, adems de ser ms rpida.
Las variables que ms influyen en la eficacia de la separacin en cromatografa de
columna y utilizando gel de slice como adsorbente son las siguientes:
a) Dimetro de la columna y cantidad de gel de slice. La altura del adsorbente
est relacionada con la diferencia de Rf de los componentes de la mezcla. El
dimetro de la columna con la cantidad de producto a separar.
b) Eleccin del disolvente. El disolvente tiene que conducir a una buena
separacin de los componentes de la mezcla en capa fina, utilizndose en muchos
casos mezclas de disolventes y se realiza una elucin en gradiente. Una de las
mezclas ms utilizadas es hexano/acetato de etilo.

EQUIPO UTILIZADO
SOPORTE UNIVERSAL
PINZAS DE DOBLE PRESION
COLUMNA PARA CROMATOGRAFIA
VASOS DE PRECIPITADOS
VARILLA DE VIDRIO
ALGODN
MUESTRA DE CHILE
GEL DE SILICE
DISOLVENTES

RELACION DEL DIAMETRO CON LA LONGITUD DE LA COLUMNA

Dimensiones de la columna: el adsorbente se debe empacar en sta una
proporcin de altura/ diametro de 10:1
ejemplo Cunto gel de silice se requiere, para llenar 4/5 partes de una
columna de 18mm de diametro y una longitud de 57cm?
En el diagrama se muestra que para un dimetro de 18mm,26g del gel
slice (empacado como suspensin) dar 18 cm (diam.:altura 10:1) de
empaquetamiento.
Por lo tanto, para 45.6 cm (4/5 de 57) se requieren 66g (45.6/18x26) de gel
de silice.


LIMPIEZA DEL MATERIAL EMPAQUE POR VIA HUMEDA Y SECA
Se purga la columna con el solvente menos polar y se empaca con ese mismo
disolvente
1-por medio de CCF se optimiza el sistema (adsorbente,eluyente) para la
separacin.
2-cantidad de adsorbente que se requiere: de 30 a 100 veces el peso de la
muestra (50 veces es un buen promedio).
3-diensiones de la columna el adsorbente se debe empacar en esta en una
proporcin de altura/dimetro de 10:1; para estimar la cantidad de adosbente en
relacin con el dimetro de la columna.
4-sujete firmemente la columna en forma vertical.
5-llene la columna con el eluyente (o, si se utiliza una mezcla de disolventes,use
el componente menos polar).
6-coloque un pedazo de algodn en el fondo de la columna con una varilla de
vidrio.
7-vacie el adsobente previamente pesado:
Alumina: en forma de un fluido, mientras la columna se golpea suavemente con
un pedazo de manguerqa de hule
Gel de slice: como una papilla en el disolvente.
8-permita que el disolvente corra (golpeando suavemente la columna) hasta que
quede aproximadamente 1mm por arriba de la parte superior del adsorbente.
9-disuelva la sustancia en la en la minima cantidad de gel de slice y aplquelo
concuidado y uniformente en la parte superior de la columna. Despues, abra la
llave y corra el disolvente hasta que quede nuevamente una capa de 1mm por
arriba del adsorbente. Repita la misma operacin varias veces utilizando
cantidades pequeas de eluyente.
10-llene cuidadosamente con el eluyente el volumen de la columna que queda
por arriba del adsorbente, para proteger la suerficie de este, se puede depositar
una capa de gel de slice seco de .5cm de espesor en la parte superior de la
columna.
11-colecte el eluyente en fracciones(fracciones de x ml por x g de adsorbente).
12-velocidad del flujo: las velocidades altas proporcionan malas separaciones.
Una regla emprica indica de 3 a 4 ml por minuto en una columna de 40cm de
altura.
13- evapore cada fraccin, pese el residuo e incluya la informacin del registro.


Cmo se lleva a cabo la cromatografa en columna de sustancias incoloras?
Si las sustancias sometidas a cromatografa no son coloreadas, se necesitan mtodos especiales
para su localizacin.
Generalmente se emplea una lmpara ultravioleta, para los que presentan fluorescencia.

Adsorcin
La adsorcin es la propiedad que tienen ciertos slidos de aumentar la concentracin en su
superficie de otras sustancias.
La separacin se debe a las diferencias de adsorcin de los componentes de una mezcla sobre la
fase estacionaria.

Absorcin
Es la retencin de una especie qumica por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta
tiene a formar mezcla con la primera, absorcin pura, o a reaccionar qumicamente con la
misma, absorcin con reaccin qumica.

Eluyente
(Fase mvil). Es el disolvente que pasa a travs de la fase estacionaria en la columna.

Eluato
Disolucin que sale despus de pasar por la fase estacionaria y que es recolectada.
Fase estacionaria generalmente slida, su funcin es retener la muestra, posee cierta porosidad.
Fase mvil: generalmente lquido (o gas) que debe interaccionar con la muestra arrastrndola a travs
de la fase estacionaria.


Grado de resolucin

El grado de separacin o resolucin de dos bandas adyacentes se define como la distancia entre los
picos de las bandas (o centros) dividida entre el ancho promedio de las bandas. Si la retencin y el ancho
de la banda se miden en unidades de tiempo, como en la Fig, la resolucin est dada por:
Rs = (tR,2 - tR,1)/(0.5(W2+W1))




Velocidad de flujo:

Fc=velocidad de flujo de la fase mvil (ml/minuto) a la temperatura de la columna;
t'R = tR - tM Vm = tM Fc

t'R=tiempo de retencin corregido;
t'M=tiempo muerto (lo que demora en salir una especie no retenida,t0);
Vm=volumen muerto o volumen intersticial de la columna;
V'R = t'R.FcV'R=volumen de retencin corregido.

KD en cromatografa

Kd es el coeficiente de distribucin del soluto en gel y puede calcularse como:
Kd = (VR V0) / Vi = (VR V0) / Vt V0
Kd oscila entre 0 y 1
Si Kd = 0, comprende a las molculas cuyo tamao es mayor al de los poros del gel.
Si Kd = 1, comprende a las molculas cuyo tamao les permite penetrar completamente
en los poros del gel.
Si 0 < Kd < 1, las sustancias se separan selectivamente en el rango de fraccionamiento del
gel.
Si Kd > que 1, significa que existen mecanismo de retencin adicionales, diferentes de la
exclusin molecular.
Cromatografa de Particin / Adsorcin
La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las
fases estacionaria y mvil, que son ambas lquidas.
CICLOHEXANO SPARTAN