Tcnicas de

recuperacin de la
inmunorreactividad.
Prof. Laura Ochoa Martnez.
Objetivo de la
recuperacin
de la
reactividad.
Qu podemos
utilizar para
recuperar los
antgenos
enmascarados
por la
fijacin..?
Calor en un medio acuoso.
Enzimas.
Pero la mejor recuperacin parte con un
buen lavado luego de la fijacin del
tejido.
Digestin
enzimtica.
Variables a considerar:
la eleccin de la enzima, depende del
determinante a desenmascarar.
La utilizacin de recuperacin enzimtica se
realiza solo cuando la informacin del
anticuerpo lo permite.
Las enzimas poseen requerimientos distintos
de tiempo de digestin, temperatura,
concentraciones optimas
Digestin
enzimtica.
Desventajas.
Slo permiten recuperacin antignica en fijacin con
Formalina.
Necesitan mantener un control permanente de la
Temperatura y tiempo.
Digestin Subptimas:no logran recuperacin
Digestin Sobreptimas: deterioro de la morfologa y
de los epitopos.
Mayor costo.
Algunas
enzimas de
uso comn
Recomendaciones...
Mecanismo de
ACCIN..
No se conoce con exactitud.
Teora de rompimiento de enlaces cruzados
mediante HIDRLISIS.
RENATURACIN de la protena fijada o al
menos la restauracin parcial de la estructura
proteica.
El reconocimiento antignico por parte de la
protena requiere de la conservacin de la
estructura de la protena especialmente para
determinantes antignicos conformacionales.
Factores que
influyen..
CALOR: es el mas importante.
Variados estudios han demostrado que
incubando cortes de tejido en diferentes
soluciones de recuperacin a temperatura
ambiente o a 37C provee de malos resultados.
AGUA: Necesaria para la hidrlisis.
Abundantes lavados en agua corrientes post-
fijacin pueden revertir la prdida de
reactividad.
Fuentes de
calor.
HORNO DE MICROONDAS
VAPORERA
BAO DE AGUA
AUTOCLAVE
OLLA A PRESIN
Soluciones de
recuperacin.
EDTA pH 8,0
BUFFER CITRATO pH 6,0
TBS pH 10
TBS pH 7,4
Sulfato de Zinc
Isotiocianato de plomo
H2O destilada
TAREA
Tcnicas afines y complementarias a la Inmunohistoqumica:
CISH,
FISH,
PCR in situ.
Bases moleculares de la IF e IFI
Ppt
Apunte para el estudio, con cuestionario al final.