CODIGO: 4081 PUNTAJE: 5 Puntos PLAN DE ESTUDIO: 1987 CARCTER DE LA MATERIA: Optativa, de Grado, Doctorado y Posgrado. DURACIN: Cuatrimestral HORAS DE CLASES SEMANALES: Tericas (4 horas), Problemas (6 horas). Total: 10 horas. ASIGNATURAS CORRELATIVAS: Final de Anlisis Instrumental.
PROGRAMA
Espectroscopa de Resonancia Magntica Nuclear
1. INTERACCIN ENTRE EL SPIN NUCLEAR Y UN CAMPO MAGNTICO. Nociones de la descripcin mecano-cuntica de la resonancia magntica. Poblacin de los estados de spin. Efectos de relajacin. Sensibilidad. Ecuacin de Boltzmann. Influencia del campo magntico B 0 en la sensibilidad, resolucin y claridad del espectro de RMN.
2. DESCRIPCIN CLSICA DE LA RESONANCIA MAGNTICA.
Modelo de vectores. Sistema de Coordenadas Rotante. Evolucin de la Magnetizacin en el sistema de Coordenadas rotante. Diferencias de poblacin en el sistema rotante. Saturacin. Coherencia de fase. Descripcin y propiedades de un pulso de Radiofrecuencia. Cambio de fase de un pulso de radiofrecuencia
3. TCNICAS OPERATIVAS Y PROCESAMIENTO. Componentes Bsicos de un Equipo de RMN moderno Muestreo de Datos Dominios de tiempo y frecuencia. FID. Transformaciones de Fourier. Descripcin de funciones y propiedades. Deteccin en Cuadratura. Ciclado de fases. Tcnica CYCLOPS. Mtodo de Redfield (TPPI). Introduccin a los Gradientes de Campo. Procesamiento de Datos. Truncado de una FID. Apodizacin. Funcin de pesado. Exponenciales y Gaussianas. Zero- filling. Correccin de Fase. Fase y forma de lnea: modos magnitud y potencia.
4. PROCESOS DE RELAJACIN DEL SPIN NUCLEAR: Relajacin longitudinal y transversal. Tiempos de relajacin T 1 , T 2 y T 2 *. Mecanismos de relajacin. Interaccin dipolar. Tiempo de correlacin. Influencia del tiempo de correlacin en T 1 y T 2 , relacin con las caractersticas de la molcula. Relajacin cuadrupolar. Interaccin escalar. Medicin de T 1 : mtodo de inversin-recuperacin. Medicin de T 2 : ecos de spin. Propiedades de los Ecos de Spin: influencia del desplazamiento qumico y del acoplamiento escalar en un eco de spin. Ecos de spin modulados por J: secuencia APT.
5. EFECTO NUCLEAR OVERHAUSER Definicin. Origen. Rutas de relajacin. Relajacin cruzada: transiciones de orden dos y cero. NOEs positivos y negativos: relacin con las rutas de relajacin predominantes y las caractersticas moleculares. Relacin del NOE con el tiempo de correlacin. NOE mximo observable en distintos ncleos. Relacin entre NOE y distancia interatmica. Cuantificacin del NOE. Espectros NOE-difference.
6. TRANSFERENCIA DE POLARIZACIN. Inversin selectiva de protn. Niveles de energa y poblacin en sistemas heteronucleares. Transferencia selectiva de polarizacin. Transferencia no selectiva: INEPT. Secuencia, evolucin de los vectores y resultados. INEPT reenfocado. Comparacin de aumento de sensibilidad con NOE. Secuencia DEPT para caracterizacin de la multiplicidad en 13 C. Coherencia cuntica doble. Influencia del ngulo de pulso: variantes del DEPT.
7. INTRODUCCIN A LA RESONANCIA MAGNTICA BIDIMENSIONAL. Dimensiones F 1 y F 2 . Significado. Origen de la dimensin F 1 . Transformacin de Fourier en dos dimensiones. Distinto tipo de seales: seales diagonales, axiales y de correlacin. Etapas de un experimento de RMN 2D: preparacin, evolucin, mezcla y deteccin. Clasificacin de los diferentes tipos de experimentos RMN 2D. Dimensiones F 1 y F 2 : nmero de puntos, tiempo y resolucin. Deteccin de un espectro 2D. Deteccin en cuadratura en la dimensin F 1 . Funciones de pesado. Forma de seales. Espectros de valor absoluto. Espectros sensibles a la fase. Mtodo Hipercomplejo. Mtodo de Redfield (TPPI). Parmetros a determinar en un espectro 2D. Efecto de la relajacin durante t 1 . Ruido en RMN 2D: simetrizacin de espectros.
8. EXPERIMENTOS DE RMN BIDIMENSIONAL. Espectros RMN 2D J-resueltos: Casos homonuclear y heteronuclear. Secuencias y explicacin mediante el modelo de vectores. Ejemplos y utilidad. Espectros de Correlacin Heteronuclear con Deteccin Directa: transmisin de la informacin mediante pulsos. Secuencia HETCOR: desarrollo en pasos de la secuencia bsica y explicacin mediante vectores. Ejemplos. Correlacin heteronuclear a larga distancia. Secuencia COLOC: particularidades, optimizacin y ejemplos. Espectros de Correlacin Homonuclear: COSY. Secuencia.. Forma de las seales. Efecto de un tercer spin. Spins activos y pasivos. COSY 45. COSY a larga distancia. Influencia de la intensidad de las correlaciones con J y . Ejemplos. COSY Phase Sensitive. Ciclado de fases. Caractersticas. Forma y fase de las seales. Identificacin del acoplamiento activo. Espectros de Correlacin por NOE: Secuencia NOESY. Anlisis mediante vectores. Origen de las seales. Influencia del tiempo de mezcla. Ejemplos. NOESY Phase sensitive: propiedades, forma y fase de las diferentes seales. Interpretacin. Ejemplos. Coherencia: Definicin. Matriz densidad. Orden de coherencia: propiedades. Coherencias cunticas mltiples. Caminos de transferencia de coherencia. Filtros cunticos. DQ-COSY. Propiedades. Fases y formas de las seales. Identificacin y medicin de los acoplamientos activos. Ejemplos. E-COSY. Definicin, ventajas y desventajas respecto del DQ-COSY. Transferencia Remota de coherencias: relayed coherence transfer (RCT). Secuencia. Fundamentacin. Interpretacin de los espectros. Mltiples relays. Coherencia cuntica doble: Secuencia INADEQUATEAnlisis de la secuencia. Optimizacin. Interpretacin de resultados. Variantes de la secuencia. Problemas de sensibilidad y solubilidad Spin-Lock. Definicin. Implementacin. Propiedades de los sistemas en spin-lock. Espectros de correlacin total, Secuencia TOCSY- HOHAHA. Utilidad para el estudio de sistemas de spins cerrados: hidratos de carbono, pptidos y oligonucletidos. Influencia del tiempo de mezcla y de las constantes de acoplamiento en la propagacin. Complicaciones y artefactos. ROESY: NOE en el sistema rotante. Similaridades y diferencias con el NOE. Artefactos de la secuencia y falsas correlaciones.
9. DETECCIN INVERSA. Concepto. Problemas de Implementacin. Comparacin de sensibilidad relativa en experimentos de correlacin heteronuclear. Correlacin directa 1 H- 13 C mediante deteccin inversa. Secuencias HMQC HSQC. Descripcin de las secuencias. Informacin que brindan. Ventajas y desventajas comparativas. Ejemplos. BIRD- HMQC. COSY X-H para correlacin con ncleos X abundantes ( 31 P). Correlacin heteronuclear a larga distancia mediante deteccin inversa: secuencia HMBC. Low-pass filter: funcionamiento. Ejemplos.
10. GRADIENTES DE CAMPO EN RMN BIDIMENSIONAL: Implementacin. Descripcin y propiedades de los gradientes de campo. Giro de fase: dependencia con el orden de coherencia y constante magnetogrica. Reenfoque por gradientes opuestos. Utilizacin de los gradientes para seleccin del camino de Transferencia de Coherencia y como pulsos de purga. Condicin de reenfoque. Comparacin con el ciclado de fases. Experimentos RMN 2D con aplicacin de gradientes de Campo: COSY-magnitud, COSY-MQF, COSYPH, TOCSY. Gradientes en sistemas heteronucleares: propiedades y ventajas. HMQC, HSQC y HMBC con gradientes. Variantes sensibles a la fase.
11. PULSOS SELECTIVOS: Implementacin. Caractersticas de los pulsos semiselectivos y selectivos. Problemas de fase. Eco de spin selectivo con gradientes de campo. Excitacin selectiva. Excitacin semiselectiva. Eliminacin de la seal del solvente. Secuencia WATERGATE. Tcnicas heteronucleares.
Espectrometra de Masa
1. SISTEMA DE PRODUCCIN DE IONES. Mtodos con volatilizacin previa. Impacto electrnico. Ionizacin qumica. Ionizacin por el campo elctrico. Mtodos de desorcin. Fundamentos de la desorcin de partculas cargadas por impacto con proyectiles. Sistemas de matriz slida y matriz lquida. Bombardeo por tomos rpidos. Espectrometra de masa de iones secundarios. Desorcin por plasma. Desorcin por LASER. Desorcin por campoelctrico. Desorcin por ionizacin qumica. Mtodos de ionizacin a presin atmosfrica.
2. SISTEMA DE ENFOQUE. Enfoque magntico. Enfoque elctrico. Doble enfoque magntico -elctrico. Cuadrupolo. Tiempo de vuelo. Resonancia ion ciclotrn por transformadas de Fourier. Trampa inica.
3. SISTEMA DE INTRODUCCIN DE MUESTRAS. Directos. Cromatografa gaseosa. Cromatografa lquida de alta resolucin. Fluidos supercrticos. Matriz slida.
4. TIPOS DE IONES. Iones positivos. Iones negativos. Potenciales de ionizacin y de aparicin. Iones hijo. Iones padre. Iones estables. Ionesinestables. Iones metaestables. Descomposiciones unimoleculares. Descomposiciones bimoleculares. Disorciacin activada por colisin.
5. NOCIONES DE ESTUDIOS DE SECUENCIA GENTICA. Instrumentos de doble enfoque magntico - elctrico. Instrumentos de doble enfoque cuadrupolo - cuadrupulo. Instrumentos hbridos.Instrumentos tandem. Cmaras de colisin. Sistemas de procesamientode datos. Aplicaciones prcticas, alcances y limitaciones de cada uno de ellos.
BIBLIOGRAFA RECCOMENDADA 1. Modern NMR Spectroscopy - A Guide for Chemists, J. Sanders, K. Hunter (Oxford University Press). 2. Modern NMR Techniques for Chemistry Research, A.Derome (Pergamon) 3. One - dimensional and Two dimensional NMR Spectra by Modern Pulse Techniques, K. Nakanishi (University Science Books). 4. Two- Dimensional NMR Spectroscopy. Applications for Chemists and Biochemists W. Croasmun, R. Carlson (VCH) 5. Structure Determination by NMR , B. Jaun (e-book). 6. High Resolution NMR Techniques in Organic Chemistry T. Claridge (Pergamon) 7. What is Mass spectrometry?, Am. Soc. Mass Spectrom., (1998). 8. Time-of-Flight Mass Spectrometry, R.J. Cotter, ACS Symposium Books, 549, ACS (1994) 9. Time-of-Flight Mass Spectrometry. Instrumentation and Applications in Biological Research, R.J. Cotter, ACS Professional Reference Books, ACS (1997) 10. Electrospray Ionization Mass Spectrometry. R. B. Cole (ed.), J. Wiley & Sons, Inc. NY (1997). 11. Mass Spectrometry of Biological Materials. B. S. Larsen and C. N. McEwen (eds.), Marcel Dekker, Inc., NY (1998). 12. Mass Spectrometry in Biological Sciences: A Tutorial. M. L. Gross (ed.). NATO ASI Series, Series C, Vol. 353. Kluwer Acad. Pub., London (1990) 13. Interpretation of Mass Spectra, F. W. McLafferty and F. Turecek, Uiversity Science Books, Mill Valley, California (1993). 14. Practical Organic Mass Spectrometry, J. R. Chapman. Wiley, NY (1993). 15. Time-of-Flight Mass Spectrometry and its Applications. E. W. Schlag (ed.). Elsevier, NY (1994). 16. Applicatioins of Modern Mass Spectrometry in Plant Science Research, R. P. Newton and T. J. Walton, Clarendon Press, Oxford, London (1996) 17. Del volar de las protenas y de como lograrlo (Espectrometra de masa UV- MALDI, R. Erra-Balsells, Qumica Viva, 3 (2), abril 2004. www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar; ISSN 1666-7948 18. Del volar de las protenas y de como lograrlo (Espectrometra de masa ESI, R. Erra-Balsells, Qumica Viva, 3 (3), septiembre 2004. www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar; ISSN 1666-7948 19. "Mass Spectrometry", J.H. Gross, Springer, 2004 20. "Mass Spectrometry, Principle and Applications", E. de Hoffmann, V. Stroobant, 3 th edition, Wiley, UK, 2007.