Josu De Corta Hernez

Extraccin slido-lquido de Alquilfenoles y Bisfenol A en

lodos de depuracin con ultrasonidos focalizados.
Influencia de la sonda y su uso
Mara Teresa Tena Vzquez de la Torre
Facultad de Ciencias, Estudios Agroalimentarios e Informtica
Mster en Qumica Avanzada
2012-2013
Ttulo
Autor/es
Director/es
Facultad
Titulacin
Departamento
TRABAJO FIN DE ESTUDIOS
Curso Acadmico
El autor
Universidad de La Rioja, Servicio de Publicaciones, 2013
publicaciones.unirioja.es
E-mail: publicaciones@unirioja.es
Extraccin slido-lquido de Alquilfenoles y Bisfenol A en lodos de depuracin
con ultrasonidos focalizados. Influencia de la sonda y su uso, trabajo fin de
estudios
de Josu De Corta Hernez, dirigido por Mara Teresa Tena Vzquez de la Torre (publicado
por la Universidad de La Rioja), se difunde bajo una Licencia
Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 Unported.
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titulares del copyright.








EXTRACCIN SLIDO-LQUIDO DE
ALQUILFENOLES Y BISFENOL A EN
LODOS DE DEPURADORA CON
ULTRASONIDOS FOCALIZADOS.
INFLUENCIA DE LA SONDA Y SU USO
JOSU DE CORTA HERNAEZ
SEPTIEMBRE 2013
REA DE QUMICA ANALTICA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
UNIVERSIDAD DE LA RIOJA










DEPARTAMENTO DE QUMICA
UNIVERSIDAD DE LA RIOJA


EXTRACCIN SLIDO-LQUIDO
DE ALQUILFENOLES Y BISFENOL
A EN LODOS DE DEPURADORA
CON ULTRASONIDOS
FOCALIZADOS.
INFLUENCIA DE LA SONDA Y SU
USO.




JOSU DE CORTA HERNAEZ
SEPTIEMBRE DE 2013






















Deseo hacer constar mi agradecimiento al Ministerio de Educacin y
Ciencia por la financiacin de este trabajo a travs del proyecto
CTM2010-16935 del Plan Nacional de Investigacin Cientfica y
Desarrollo e Innovacin Tecnolgica co-financiado con fondos FEDER.


















ndice



NDICE

Presentacin 1
Objetivos 5
I.Introduccin 9
1. Disrupcin endocrina 11
2. Alquilfenoles y Bisfenol A 13
3. Exposicin y determinacin de APs y BPA en diferentes tipos de
muestra 14
4. Mtodo de anlisis 19
4.1. Extraccin slido-lquido con ultrasonidos focalizados 19
4.2. Extraccin en fase slida 21
4.3. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de
masas 22
5. Diseo de experimentos 23
II.Experimental 29
1. Materiales y reactivos 31
2. Muestras 31
3. Extraccin con lquidos presurizados 32
3.1. Extractor PLE 32
3.2. Preparacin de la celda de extraccin 33
3.3. Condiciones PLE 34
4. Extraccin slido lquido con ultrasonidos focalizados 35
4.1. Extractor FUSLE 35
4.2. Procedimiento FUSLE 36
5. Extraccin en fase slida 36
5.1. Sistema SPE 36
ndice



5.2. Procedimiento SPE 37
6. Derivatizacin 38
7. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas 39
7.1. Cromatgrafo de gases acoplado a espectrmetro de
masas 39
7.2. Condiciones de inyeccin 40
7.3. Condiciones cromatogrficas 40
7.4. Espectrometra de masas 40
7.5. Tratamiento de datos 41
8. Anlisis de las muestras 41
III.Resultados y discusin 43
1. Presentacin del problema 45
2. Limpieza del extracto 47
2.1. Eleccin del sorbente 47
2.1.1. SPE en fase reversa (cartuchos C18) 47
2.1.2. SPE en fase normal (cartuchos de slice y Florisil) 51
2.2. Estudio de las variables SPE 53
2.2.1. Volumen de elucin 54
2.2.2. Porcentaje de AcOEt en la disolucin del extracto 55
3. Extraccin FUSLE. 57
3.1. Estudio de variables. 57
3.1.1. Consideraciones previas 57
3.1.2. Diseo central compuesto 60
3.1.3. Estudio del nmero de ciclos 65
4. Caracterizacin del mtodo FUSLE-SPE-CG-MS 66
5. Estudio del tiempo de vida de la sonda 67
5.1. Influencia del uso de la sonda 67
5.2. Influencia del pulido de la sonda 79
IV.Conclusiones 83
V. Bibliografa 87
Presentacin

1














PRESENTACIN













Presentacin

3





Los alquilfenoles (APs) y el bisfenol A (BPA) son productos habituales en la
industria qumica. Los primeros (sobre todo el 4-n-octilfenol y el 4-n-
nonilfenol) se utilizan como agentes surfactantes en detergentes
industriales. El BPA se utiliza principalmente como aditivo en la fabricacin
de plsticos de muchos tipos, desde resinas epoxi de ingeniera hasta
envases alimentarios.
El efecto de estos compuestos en la sociedad es importante ya que actan
como disruptores endocrinos, provocando problemas medioambientales y de
salud pblica.
Por sus caractersticas, los APs y el BPA se acumulan en el lodo generado en
las plantas EDAR (Estaciones de Depuracin de Aguas Residuales), producto
que habitualmente se utiliza como relleno agrcola y como fuente de
energa. Este primer uso, adems de ser el mayoritario, es una fuente
importante de entrada de estos compuestos a la cadena trfica.
En esta memoria se presenta el desarrollo, caracterizacin y aplicacin de
un mtodo para la determinacin de APs y BPA en lodo de depuradora.
El mtodo desarrollado se basa en una extraccin slido lquido con
ultrasonidos focalizados (FUSLE), para la limpieza del extracto se efecta
una extraccin en fase slida (SPE) seguida por cromatografa de gases
acoplada a un detector MS (GC-MS) para la determinacin.
Finalmente, este mtodo ha sido empleado para estudiar la posible prdida
de la eficiencia de la sonda con su uso, as como la influencia del pulido de
la sonda en la eficiencia.



Objetivos

5














OBJETIVOS














Objetivos

7



OBJETIVOS

El objetivo principal de este trabajo es desarrollar un mtodo rpido, sencillo
y efectivo para la determinacin de APs y BPA en lodos de depuradora.
Posteriormente este mtodo se ha utilizado para estudiar la eficiencia
obtenida a medida que se usa la sonda FUSLE y la influencia del pulido de
sta.
Para ello, se pretende cumplir los siguientes objetivos:
Establecer las mejores condiciones para la separacin cromatogrfica
y deteccin mediante espectrometra de masas de APs y BPA.
Desarrollar un mtodo basado en extraccin slido lquido con
ultrasonidos focalizados seguido por una etapa de limpieza del
extracto (clean up) que consiste en una extraccin en fase slida y el
anlisis final por cromatografa de gases acoplada a espectrometra
de masas.
Estudiar la influencia de las principales variables FUSLE que afectan
a la extraccin de los APs y BPA en lodo de depuradora, como la
potencia, el tiempo y el nmero de ciclos.
Optimizar las principales variables que afectan a la SPE, como la
naturaleza del sorbente, el volumen de elucin y el porcentaje de
AcOEt en la disolucin del extracto.
Caracterizar el mtodo desarrollado en trminos de exactitud,
repetibilidad y precisin intermedia.
Aplicar el mtodo desarrollado para estudiar la influencia de la sonda
y su uso en la eficacia extraccin.
Estudiar el efecto del pulido de la sonda en la recuperacin.


Introduccin

9
















INTRODUCCIN
















Introduccin

11



INTRODUCCIN


1. Disrupcin endocrina


El control y coordinacin de las actividades fisiolgicas de los seres vivos se
basa en la transmisin de informacin entre las distintas clulas. Dicha
comunicacin ocurre a travs de varios sistemas: sealizacin paracrina,
sistema nervioso y sistema endocrino.
Los dos primeros ocurren de forma rpida y altamente dirigida, mientras
que en el sistema endocrino la transmisin de la informacin sucede de
manera no dirigida a travs de mensajeros qumicos especficos
(hormonas), que se distribuyen a los tejidos por el torrente sanguneo. Para
poder hacer llegar el mensaje, la hormona debe unirse a su correspondiente
receptor en la clula diana, cuando esto ocurre se da una serie de
reacciones qumicas que activan la clula para llevar a cabo una funcin
especfica. El tiempo de respuesta puede ir desde algunos segundos (como
la adrenalina) a periodos de tiempo ms largos (como el ciclo menstrual o el
crecimiento del esqueleto). La regulacin endocrina se desarrolla a travs de
estados sucesivos de equilibrio dinmico, de acuerdo con unos patrones
genticamente establecidos, aunque sometidos a la influencia de factores
ambientales. En determinadas circunstancias, estos patrones pueden
experimentar cambios que perjudican a los individuos que los sufren.
La disrupcin endocrina es un mecanismo que afecta al funcionamiento del
sistema endocrino. Los disruptores endocrinos son las sustancias
susceptibles de producir desajustes en dicho funcionamiento alterando, por
Introduccin

12


distintos mecanismos, los efectos que fisiolgicamente deberan producir las
hormonas en los organismos.
Los disruptores endocrinos son sustancias de naturaleza muy diversa como
dioxinas (dibenzo-p-dioxinas), plaguicidas, ftalatos, PCBs (bifenilos
policlorados), etc.
Muchos estudios sugieren que la disrupcin endocrina es la causa de
alteraciones como (Birnbaum y col. 2013):

La reduccin de la edad de llegar a la pubertad (Gayle y col. 2010).
El cncer de testculo, prstata y mama.
Evidencias de infertilidad masculina.
Recuento y calidad del esperma.
Obesidad y diabetes (Babrauskas y col. 2011).
Autismo (Volk y col. 2013).
Deficiencias en el sistema inmune.
Alteraciones en la vida de las especies salvajes, mayoritariamente
relacionadas con cambios en la reproduccin.

En un nuevo informe del Programa de las Naciones Unidas para el Medio
Ambiente (PNUMA) y la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) se pide que
se siga investigando y que estudios ms exhaustivos y mejores mtodos
analticos podran reducir el riesgo de enfermedad y generar ahorros
considerables para la salud pblica.
El trabajo presentado en esta memoria se centra en la determinacin de los
alquilfenoles y el bisfenol A en lodos, empleando la tcnica de extraccin
FUSLE. Adems, se realiza un estudio de la influencia de la vida de la sonda
FUSLE en las caractersticas analticas del mtodo desarrollado.



Introduccin

13


2. Alquilfenoles y Bisfenol A


Los alquilfenoles se utilizan como detergentes industriales por su carcter
surfactante no inico y como aditivos en pinturas y algunos plsticos,
aunque tambin se encuentran en textiles y cuero, como metabolitos de los
APEOs (etoxilatos alqilfenlicos) (Nota Tcnica de Prevencin 758, 2011).
En este trabajo se estudian ocho alquilfenoles, 4-t-butilfenol, 4-n-butilfenol,
4-n-pentilfenol, 4-n-hexilfenol, 4-n-heptilfenol, 4-t-octilfenol, 4-n-octilfenol
y 4-n-nonilfenol.

R= t-butil, n-butil, n-pentil, n-hexil, t-octil, n-heptil, n-octil y n-nonil
Fig.I.1.Estructura de los alquilfenoles

Los alquilfenoles ms mencionados son el 4-n-octilfenol y el 4-n-nonilfenol,
ya que son los ms perjudiciales, pero es importante estudiar el resto de
alquilfenoles ya que estos dos compuestos se degradan al resto por
transformaciones biolgicas de acortamiento progresivo de cadena bajo las
condiciones aerobias y anaerobias en los procesos de depuracin (Chang y
col. 2005).
El bisfenol A (BPA, 4,4-(propano-2,2-diil)difenol) es un producto industrial
que fue sintetizado por primera vez por condensacin de dos grupos fenol y
una molcula de acetona en 1891. Se utiliza predominantemente como un
Introduccin

14


monmero en la fabricacin de polmeros como policarbonato, resinas epoxi,
polisulfona o poliacrilato, como antioxidante e inhibidor al final de la
polimerizacin en plsticos de cloruro de polivinilo (PVC) y como precursor
para la sntesis del retardador de llama tetrabromobisfenol A. Estos
polmeros son materiales destinados a envases de alimentos, contenedores
para microondas, utensilios de cocina, equipamiento mdico y materiales
dentales entre otras (Geens y col. 2012).

Fig.I.2. Estructura del bisfenol A

3. Exposicin y determinacin de APs y BPA en diferentes
tipos de muestra


Hay que tener en cuenta que los efectos de estos compuestos sobre el
organismo dependen de factores como el mbito de exposicin, el sexo y la
edad del individuo.
Son muchos los estudios sobre los niveles de APs y BPA en fluidos
biolgicos, estos estudios se centran principalmente en la determinacin de
4-n-octilfenol, 4-n-nonilfenol y bisfenol A (Benjamin y col. 2003; Calafat y
col. 2005; Vanderberg y col. 2007). En la tabla I.1 se muestran los niveles
de APs y BPA descritos en la bibliografa en diferentes fluidos biolgicos.
Introduccin

15


Tabla I.1 Niveles de APs y BPA y limites de deteccin (LOD) en fluidos
biolgicos
Fluido biolgico Compuesto
Nivel
(ng/mL)
LOD (ng/mL) Referencia



Sangre de cordn
umbilical
4-t-butilfenol 0.54 0.05



Benjamn y
col. 2003
4-n-butilfenol 0.80 0.05
4-t-octilfenol 1.15 0.05
4-n-octilfenol 4.17 0.05
4-n-nonilfenol 15.17 0.05
Bisfenol A 4.05 0.05
Orina
4-n-nonilfenol 1.28 0.1
Calafat y col.
2005 Bisfenol A 1.33 0.1
Suero humano Bisfenol A 0.2-20 -

Vanderberg y
col 2007
Placenta Bisfenol A 11.2-104.9 -
Leche materna Bisfenol A 0.28-0.97 -
Es importante estudiar la presencia de estos compuestos en lodo por varios
motivos:
Tanto los APs como el BPA son compuestos hidrfobos y en las
sucesivas etapas de depuracin se acumulan en los subproductos
slidos (lodos), adsorbidos sobre la superficie o precipitados por
iones metlicos (principalmente Ca
2+
y Mg
2+
) (Fernndez-San Juan y
col. 2009).
El lodo de depuradora es reutilizado principalmente como fuente de
energa y como abono agrcola (RD 1310/1990). Esta segunda forma
de reutilizacin es una va de entrada de los APs y el BPA en la
cadena trfica.
Introduccin

16


Es una fuente de informacin sobre contaminacin qumica y riesgos
potenciales asociados a la reutilizacin del lodo como relleno
agrcola, fuente de energa o abono (Martnez-Moral y Tena 2011).
Muchos estudios se han centrado en el desarrollo y puesta a punto de
mtodos de anlisis de APs y BPA en lodo de depuradora. Estos mtodos
suelen constar de 3 etapas: extraccin, limpieza de los extractos o clean up
y determinacin de los analitos.
En la tabla I.2 se muestran algunos ejemplos indicando las tcnicas, los
compuestos determinados, los niveles hallados y los LODs encontrados.
Introduccin

17



Introduccin

18



Introduccin

19


4. Mtodo de anlisis

El mtodo empleado en este trabajo se basa en la tcnica de extraccin
FUSLE, seguida por una etapa de limpieza mediante SPE en fase normal. La
determinacin de los analitos en los extractos se realiza por cromatografa
de gases acoplada a espectrometra de masas.
Tambin se empleo la tcnica de extraccin PLE selectiva en algunos
anlisis.
4.1. Extraccin slido-lquido con ultrasonidos focalizados

La extraccin slido-lquido con ultrasonidos focalizados es una tcnica
relativamente nueva que permite superar la lenta extraccin (30-60 min) y
la baja reproducibilidad de la extraccin slido-lquido usando un bao de
ultrasonidos.
La extraccin mediante FUSLE es muy rpida, econmica y ha mostrado
resultados similares a los de otras tcnicas de extraccin como la extraccin
asistida por microondas (Errekatxo y col. 2008; Navarro y col. 2009; Sanz-
Landaluce y col. 2006).
La tcnica FUSLE se basa en los fenmenos de cavitacin. Las ondas de
ultrasonidos generadas atraviesan el lquido creando ondas de compresin y
depresin a velocidades muy elevadas. Durante la fase de depresin se
generan y crecen en el interior del lquido numerosas burbujas minsculas,
llamadas burbujas cavitacionales, (ver Figura I.3. fase A y B). Durante la
segunda fase, la compresin, se ejerce una presin enorme sobre estas
burbujas, de tal manera que se comprimen, cargndose de energa (ver
Figura I.3. fase C) hasta que se produce la implosin (ver Figura I.3. fase D)
con la consiguiente expulsin de esa enorme cantidad de energa
Introduccin

20


(http://www.soltec.it/d1/en/principles-ultrasonic-cleaning ; Capelo y col.
2005).

Figura I.3. Proceso de cavitacin: formacin de cavidades e implosin.

Como resultado de esta implosin, se alcanzan a nivel puntual y
microscpico temperaturas y presiones muy elevadas, de hasta 5000 K y
2000 atm, y velocidades de chorro de disolvente de hasta 280 m/s (Suslick
1998). Todas estas caractersticas, que no se alcanzan con estas
magnitudes en otras tcnicas, favorecen que la extraccin sea ms eficiente
y rpida.
Asimismo, el tamao de las burbujas es muy pequeo en comparacin con
el volumen total de lquido. De este modo, el calor que se produce se disipa
muy rpidamente y no se aprecian cambios significativos en las condiciones
del entorno. Por todo esto, a la cavitacin se le conoce tambin como
ebullicin fra (Navarro y col. 2009). Sin embargo en segundos o pocos
minutos la muestra comienza a calentarse y se ha demostrado que trabajar
en bao de hielo mejora la extraccin (Capelo y col. 2005). Es por esta
razn, que su uso puede ser de especial inters para la extraccin de
compuestos termolbiles que se descompondran usando otras tcnicas
como PLE, MAE o SFE.
Pero stas no son las nicas ventajas que ofrece la tcnica FUSLE. La
aplicacin de ultrasonidos es 100 veces ms potente que en los baos de
ultrasonidos tradicionales (Errekatxo y col. 2008), ya que la micropunta
Introduccin

21


emisora se sumerge directamente en la disolucin a extraer y la potencia de
ultrasonidos aplicada es mayor. Adems hay que tener en cuenta, que
cuando la burbuja cavitacional colapsa cerca de la superficie de una
partcula slida, los micro-chorros del disolvente se propagan por su
superficie a gran velocidad, causando una erosin mecnica del slido y
provocando la ruptura de la partcula. Esto produce la reduccin de tamao
de partcula y aumenta el rea total de muestra expuesta al disolvente.
Por todo ello, se concluye que el uso de ultrasonidos focalizados puede ser
muy til para el desarrollo de nuevos procedimientos de extraccin slido-
lquido.
Por este mismo fenmeno, las sondas estn sujetas a un desgaste natural,
provocado por la erosin de la superficie de emisin de ultrasonidos y la
reduccin de su accin. Este desgaste es mayor a medida que se aumenta la
potencia de ultrasonidos en los sucesivos usos. Por lo que se recomienda su
pulido cuando esto ocurre.

4.2. Extraccin en fase slida

La extraccin en fase slida es una tcnica eficaz y simple para la limpieza
de extractos que es, al mismo tiempo, rpida y econmica. Una columna
SPE consiste en un lecho de adsorbente de partculas mantenido entre dos
discos porosos en un tubo desechable. La SPE permite la preconcentracin
de la muestra con un riesgo mnimo de prdida o contaminacin de la
misma. El componente de inters resulta retenido en una fase slida
mientras que los contaminantes de la matriz se eluyen.
Las etapas de la extraccin en fase slida son:

Activacin. En la que se utiliza un disolvente orgnico para
humidificar la fase.

Introduccin

22


Acondicionamiento. La fase estacionaria se acondiciona con el mismo
disolvente de la muestra.

Retencin. Las interacciones entre los componentes de la muestra y
la fase estacionaria controlan la retencin en el adsorbente de SPE.
Para maximizar las interacciones, la muestra debe cargarse en el
adsorbente de SPE a una velocidad controlada.

Lavado. Usando un disolvente o serie de disolventes de fuerza
creciente los contaminantes pueden eliminarse del adsorbente de
SPE hasta que slo queden retenidos los analitos de inters.

Elucin. Se efecta mediante un eluyente adecuado y un caudal de 1
ml/min. El adsorbente de SPE y las interacciones analito-adsorbente
determinan el disolvente o mezcla de elucin

4.3. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de
masas

La cromatografa de gases es una tcnica de separacin muy apropiada para
la resolucin de mezclas complejas. Pero los analitos, un vez separados,
detectados, e incluso cuantificados, han de ser identificados de manera
unvoca. El nico dato que proporciona la GC es el tiempo de retencin de
cada pico cromatogrfico, y no es suficiente para una identificacin
inequvoca, sobre todo en el anlisis de muestras con elevado nmero de
componentes.
Por otro lado, la espectrometra de masas puede identificar de manera casi
indiscutible cualquier sustancia pura, pero normalmente no es capaz de
identificar los componentes individuales de una mezcla sin una separacin
previa, debido a la extrema complejidad del espectro obtenido por
superposicin de los espectros individuales de cada componente.
Introduccin

23


Por tanto, la asociacin de las dos tcnicas, GC y MS, da lugar a la tcnica
combinada GC-MS que permite la separacin e identificacin de mezclas
complejas.
En resumen, en la GC-MS una mezcla de compuestos es inyectada en el
cromatgrafo de gases, donde se separa en la columna cromatogrfica,
obteniendo la elucin sucesiva de los componentes individuales aislados,
que pasan inmediatamente al espectrmetro de masas. Cada uno de estos
componentes se registra en forma de pico cromatogrfico y se identifica
mediante su respectivo espectro de masas.

5. Diseo de experimentos

Normalmente durante la elaboracin de un mtodo analtico aparece un
nmero elevado de factores que necesitamos optimizar para obtener la
mejor seal o respuesta posible. Un estudio univariante, donde se estudia
cada factor por separado, implica un gran nmero de experimentos, lo que
supone ms tiempo, material, personal y, debido a todo esto, ms dinero.
Asimismo, la informacin proporcionada con este mtodo no es relevante en
muchos casos porque no tiene en cuenta las interacciones entre los factores
estudiados.
Un diseo de experimentos es una aplicacin matemtica y estadstica clave
en el desarrollo de un mtodo analtico, para evaluar con el menor nmero
posible de experimentos la influencia y significacin de cada factor y sus
interacciones, y as optimizar la variable respuesta de manera eficiente.
En muchos casos, para reducir inicialmente el elevado nmero de factores a
tener en cuenta, se realiza un diseo factorial para descartar los que no
fueran importantes o significativos. En este trabajo, despus de realizar una
seleccin de los factores FUSLE que desebamos optimizar, decidimos
continuar con solo dos factores, por lo que no se consider necesario
Introduccin

24


realizar un diseo factorial y directamente se efectu un diseo central
compuesto.
Un diseo central compuesto (CCD) es un diseo de segundo orden que nos
permite cuantificar la influencia de los factores significativos mediante
superficies de respuesta y funciones de deseo. Fue presentado por primera
vez por Box y Wilson (1951) en el articulo On the Experimental Attainment
of Optimum Conditions y es el diseo ms utilizado en el ajuste de
superficies de respuesta de segundo orden (Park y col. 2008; Montgomery
1991; Box y col. 1951).
Para encontrar las condiciones ptimas de los factores que maximicen,
minimicen o cumplan unas condiciones especficas en la variable respuesta,
en general, que proporcionen la mejor respuesta, es necesario utilizar una
serie de tcnicas estadsticas y matemticas para obtener una aproximacin
adecuada de la relacin o dependencia entre la variable respuesta y los
factores o variables independientes. Para ello, suponemos que la variable
respuesta se ajusta a una funcin de segundo orden, de tal manera que
consideramos que las interacciones de tercer orden o superior entre los
factores son despreciables o no significativas frente a las de primer o
segundo orden. La funcin de este modelo no lineal donde existe curvatura
debido a las interacciones de segundo orden entre los factores, tiene la
siguiente forma:

donde y es la respuesta, x los factores, los coeficientes y e el error
asociado a la respuesta.

Introduccin

25


Para comenzar con el diseo, es necesario establecer el dominio
experimental que es el intervalo de valores que pueden tomar los factores a
estudiar. Para definir estos factores y su rango, nos basamos en la
experiencia previa, bibliografa, las necesidades de la experimentacin
(criterios de rentabilidad, limitaciones experimentales,) y el equipo a
utilizar.
El CCD es en realidad un diseo factorial 2
k
con varios puntos centrales, en
funcin del nmero de factores, que se complementa con 2k puntos axiales
o estrella. En un diseo factorial 2
k
cada factor tiene dos niveles que
representan los extremos del dominio experimental del diseo factorial: el
superior (+1) y el inferior (-1) y los puntos factoriales equivalen a todas las
combinaciones posibles de estos dos niveles. Asimismo, los puntos axiales
se corresponden a todas las posiciones del espacio donde todas las
coordenadas son cero, excepto una que es , es decir, (, 0,0,0), (0,
,0,0) (0, 0,0,).
Los puntos factoriales permiten la estimacin de los efectos de los factores
y sus interacciones, y los puntos axiales permiten evaluar el efecto de los
trminos cuadrticos del modelo junto con el punto central con el que se
detecta el efecto de la no linealidad de cada factor. Asimismo, con las
rplicas del punto central se determina la varianza en la respuesta o el error
experimental del diseo.
Para aumentar la eficiencia del diseo es necesario que sea rotable y
ortogonal. El criterio de rotabilidad establece que la varianza de la respuesta
que predice el modelo, depende nicamente de la distancia del punto al
origen y no de su direccin. De este modo, todas las estimaciones que nos
proporciona el modelo son igualmente precisas en toda la regin de estudio.
Para conseguir esto, definimos el valor de alfa para crear la regin esfrica
del diseo de tal manera que englobe los puntos factoriales, es decir, los
Introduccin

26


vrtices del cubo. Para obtener la rotabilidad, el valor de alfa depende del
nmero de factores en el estudio y viene dado por:

Asimismo, es importante establecer el criterio de la ortogonalidad para
conseguir que los parmetros del diseo puedan estimarse de forma
independiente, sin que exista una correlacin. Este criterio se establece
fijando el nmero de rplicas del punto central en funcin del nmero de
factores a estudiar. Con dos factores se realizan 5 rplicas y con tres son
necesarias 8 rplicas.
Finalmente es muy importante aleatorizar los experimentos para evitar
llegar a falsas conclusiones.
En el caso de un CCD de dos factores (ver Figura I.4), como en este trabajo,
los puntos factoriales corresponden a los vrtices de un cuadrado, y los
puntos axiales o estrella se encuentran en los puntos medios de las aristas
del cuadrado a una distancia de 1,41 veces mayor a la de los extremos del
dominio experimental, por lo que teniendo en cuenta las 8 rplicas del punto
central que se opt por hacer, es necesario realizar 16 experimentos.
No hay que olvidar que estos modelos dependen del dominio experimental
que decidamos, por lo que no explican la relacin real entre los factores y la
variable respuesta en todo el dominio existente. Sin embargo, son una
buena aproximacin, sobre todo cuanto menor es el intervalo de estudio de
los factores.
Introduccin

27



Figura I.4. Esquema de un diseo central compuesto 2
2
.






















Experimental

29














EXPERIMENTAL














Experimental

31


EXPERIMENTAL

1. Materiales y reactivos

Se usaron acetato de etilo y n-hexano de grado HPLC y cartuchos para SPE
de slice de 1 g y 6 mL, de C-18 de 500 mg y 6 mL, y de florisil de 1 g y 6
mL suministrados por Schalab (Barcelona, Espaa).
Los patrones de 4-t-butilfenol (t-Bu), 4-n-butilfenol (Bu), 4-n-pentilfenol
(Pen), 4-n-heptilfenol (Hep), 4-n-octilfenol (Oct), 4-n-nonilfenol (Non) y el
reactivo derivatizante (BSTFA, N,O-bis(trimetilsilil)trifluoroacetamida)
fueron suministrados por Alfa Aesar GmbH & Co (Karlsruhe, Alemania). El 4-
n-hexilfenol (Hex) fue adquirido en Acros Organics. El 4-t-octilfenol (t-Oct)
fue obtenido de Dr Ehrenstorfer GmbH (Augsburgo, Alemania), y el bisfenol
A (BPA) de Sigma Aldrich (Madrid). El BPA marcado isotpicamente (BPA-
d
16
) fue adquirido en Cambridge Isotope Laboratories, Inc (EEUU).
2. Muestras

Las muestras de lodo de depuradora fueron proporcionadas por plantas
EDAR de La Rioja. Tras su recepcin y etiquetado, las muestras se
almacenaron en congelador, -5C, y protegidas de la luz, hasta su anlisis.
Para su anlisis, se liofilizaron en un tubo Falcon durante al menos 48 horas.
El liofilizador utilizado fue el modelo Virtis Sentry Freezemobile 3S + L.
Una vez liofilizado el lodo, se tritur con un molino refrigerado con agua a
10-15C modelo IKA Labortechnik A10. La refrigeracin del molino es
necesaria para evitar la prdida de los analitos, que son voltiles, porque
durante la molienda la muestra se calienta. El lodo liofilizado y molido se
almacen en el tubo Falcon en refrigerador (+4C) y protegida de la luz,
hasta su anlisis.
Experimental

32


3. Extraccin con lquidos presurizados

3.1. Extractor PLE

Se utiliz un extractor ASE200 (Accelerated Solvent Extractor) de Dionex,
equipado con celdas de acero inoxidable de 11 mL. Los disolventes son
conducidos hasta la celda de extraccin mediante una bomba de alta
presin. El equipo lleva incorporado un carrusel en el que se pueden
disponer 24 celdas de extraccin de 1, 5, 11, 22 o 33 mL. La celda que
contiene la muestra se introduce de forma automtica en el horno donde se
llena con el disolvente hasta que alcanza la presin y la temperatura
programadas para la extraccin. Transcurrido un tiempo de extraccin
esttica, la celda se vaca mediante el paso de disolvente, a continuacin, el
sistema se purga con nitrgeno. En la Figura II.1. se muestra un esquema
del extractor PLE utilizado.

Fig.II.1. Esquema del extractor PLE utilizado
Experimental

33


El extracto se recoge en un vial colector situado en el carrusel inferior con
capacidad para 26 viales colectores de 40 60 mL y otros 4 viales para
residuos. En la Figura II.2. se muestra una fotografa del extractor ASE200.
Este equipo permite trabajar con presiones desde 500 a 3000 psi y con
temperaturas comprendidas entre temperatura ambiente y 200 C.


Fig.II.2. Equipo ASE200, A. Distribuidor de disolventes, B. Carrusel de
celdas de extraccin, C. Carrusel de viales colectores

3.2. Preparacin de la celda de extraccin

Cada celda se prepar colocando en el fondo 2 filtros de celulosa, sobre los
filtros se dispone 1 g de desecante. Se aade la mezcla de muestra con
desecante y sorbente y, a continuacin, se rellena completamente con
desecante, colocando encima otro filtro de celulosa (ver Figura II.3).
Experimental

34



Fig.II.3. Esquema de la forma de llenado de la celda de extraccin

3.3. Condiciones PLE

Las condiciones experimentales utilizadas para realizar la PLE son las
mismas propuestas por Martnez-Moral y Tena 2011:

Disolvente: Diclorometano
Temperatura: 130 C
Presin: 1500 psi
Tiempo: 1 minuto
N de ciclos: 1 ciclo






Experimental

35


4. Extraccin slido lquido con ultrasonidos focalizados


4.1. Extractor FUSLE

Todos los procesos FUSLE fueron efectuados con un equipo de ultrasonidos
focalizados SONOPULS 2070 provisto de una sonda con una micropunta de
titanio de 3 mm y una cmara de insonorizacin como el que se muestra en
la Figura II.4.

Fig.II.4. Equipo SONOPULS 2070 usado en FUSLE. A) Convertidor de
ultrasonidos, B) Resonador, C) Sonda de titanio, D) Bao de hielo, E)
Cmara de insonorizacin, F) Generador.

Experimental

36


4.2. Procedimiento FUSLE

Los tratamientos FUSLE fueron efectuados a 0C en un bao de hielo. En
todos los casos se pesaron 0,5 g de lodo seco y las muestras se extrajeron
con 10 mL de acetato de etilo, durante un periodo de tiempo comprendido
entre 20 y 120 s, a una potencia de ultrasonidos entre 20 y 70 %, al 50%
del ciclo del pulso, y entre una y tres veces. Durante el estudio de vida de la
sonda y la influencia del pulido de la sonda las muestras se extrajeron ya en
las condiciones ptimas, las cuales son 30 s, 70% de potencia y dos ciclos.
La micropunta fue sumergida en la mezcla muestra-disolvente dentro de un
vial cilndrico de fondo plano, a unos 5 mm de distancia del fondo. Los
extractos obtenidos se centrifugaron durante 5 min a 2500 rpm en un
equipo Orto Alresa modelo Digicen. El sobrenadante se guarda y al slido se
le aaden 5 mL de acetato de etilo y se centrifuga. Este proceso se repite
dos veces. Se juntan todos los sobrenadantes y se evaporaron hasta unos
250 L bajo corriente de nitrgeno usando un evaporador Turbo Vap II
(Zymark, Hopkinton, MA, EEUU)

5. Extraccin en fase slida

Esta tcnica se ha utilizado para realizar una limpieza de los extractos
FUSLE y PLE antes del anlisis cromatogrfico.

5.1. Sistema SPE

Para llevar a cabo la extraccin en fase slida se utiliz un sistema de vaco
modelo Visiprep
TM
SPE Vacuum Manifold con 12 puertos, como el que se
muestra en la Figura II.5.

Experimental

37



Fig.II.5. Sistema de vacio empleado para realizar la SPE

5.2. Procedimiento SPE

El extracto concentrado despus de la evaporacin en el Turbo Vap II (unos
250 L) se mezcla con n-hexano o con agua a pH 2.5, segn sea el sorbente
contenido en el cartucho SPE. La mezcla se pasa por el cartucho a una
velocidad de 1 mL/min.
Si se requiere, el cartucho se lava y se seca bajo vacio antes de la elucin
con acetato de etilo. El eluyente obtenido se evapora en el Turbo Vap II y el
residuo se reconstituye en 2 mL con acetato de etilo que se almacenan en
viales de 2 mL a -5C en ausencia de luz hasta su anlisis por cromatografa
de gases acoplada a espectrometra de masas. En la Figura II.6 se muestran
los extractos finales listos para el anlisis.

Experimental

38



Fig.II.6. Extractos finales en acetato de etilo que se analizan mediante GC-
MS.

6. Derivatizacin

Para llevar a cabo el anlisis de estos compuestos mediante GC-MS es
necesario formar derivados ms voltiles y menos polares. Esta etapa de
derivatizacin se realiz bajo las condiciones descritas por Martnez-Moral y
Tena 2011, aadiendo 50 L de BSTFA a 500 L de extracto y calentando a
50C durante 15 min.
La reaccin que se lleva a cabo es una sililacin, reemplazo de un hidrgeno
cido con un grupo alquilsililo (ver figura II.7).

Figura II.7. Reaccin de sililacin del BSTFA

Experimental

39


7. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de
masas


7.1. Cromatgrafo de gases acoplado a espectrmetro de
masas

Se utiliz un cromatgrafo de gases modelo Varian 3900 acoplado a un
detector MS de trampa de iones Varian 2100T (Walnut Creed, CA, EEUU)
equipado con una columna capilar de slice fundida de 30 m x 0.25 mm con
una fase estacionaria de 0.25 m de espesor, de composicin 5% de
polidifenilsiloxano 95% de polidimetilsiloxano. Para automatizar las
inyecciones se utiliz un muestreador automtico CombiPAL (CTC Analytics,
Zwingen, Suiza) (ver Figura II.8).


Fig.II.8. Sistema cromatogrfico. 1) Cromatgrafo de gases, 2)
Espectrmetro de masas de trampa de iones, 3) Automuestreado CombiPAL.
Experimental

40


7.2. Condiciones de inyeccin

El volumen de inyeccin fue 1 L. El inyector se programo a 280C.
Inicialmente se utiliz una relacin de divisin del flujo 1:20 durante 0.01
minutos, seguida de una inyeccin sin divisin (splitless) durante 2 minutos
y finalmente la relacin de divisin se fijo en 1:50 hasta el final del
cromatograma.

7.3. Condiciones cromatogrficas

Para la separacin de la mezcla de los 10 analitos derivatizados la rampa de
temperatura del horno cromatogrfico comenz con una temperatura inicial
de 50C durante los dos primeros minutos, tras los que asciende hasta
100C a un ritmo de 30C/min, a continuacin aumenta a un ritmo de
10C/min hasta 200C, y finalmente aumenta hasta 300C a un ritmo de
10C/min, mantenidos durante 8 minutos.
Como gas portador se utiliz helio (99.996%) a un caudal de 2 mL/min.

7.4. Espectrometra de masas

La ionizacin se realiz mediante impacto electrnico y la deteccin fue en
modo SIS (Selected Ion Storage). Los iones de cuantificacin de los analitos
derivatizados y los tiempos de retencin se detallan en la tabla II.1.






Experimental

41


Tabla II.1. Tiempo de retencin e iones de cuantificacin de los derivados de
los analitos.
Compuesto Tiempo de retencin (min) Iones de cuantificacin
4-t-butilfenol 8.40 207
4-n-butilfenol 9.20 179 + 222
4-n-pentilfenol 10.42 179 + 236
4-n-hexilfenol 11.35 179 + 250
4-t-octilfenol 11.49 207 + 208
4-n-heptilfenol 12.83 179 + 264
4-n-octilfenol 13.84 179 + 292
4-n-nonilfenol 14.61 197 + 358
BPA 16.34 357 + 358
BPA-d16 16.19 368 + 369

7.5. Tratamiento de datos

Los cromatogramas se procesaron utilizando el programa MS Data Review
6.5, de Varian MS Workstation. Para el tratamiento de datos y la
representacin grfica se utiliz Microsoft Excel 2007. Statgraphics se utiliz
para el diseo de experimentos.

8. Anlisis de las muestras

El mtodo se calibr mediante una recta de calibrado usando patrones
externos y reas de pico relativas a un patrn interno (BPA-d
16
). En cada
anlisis se obtuvo una recta de calibrado con 7 puntos, que incluan 0, 10,
100, 250, 500, 750, 1000 ng/mL. Las disoluciones de calibrado y las
muestras se procesaron en orden aleatorio.
En todos los casos se obtuvieron coeficientes de correlacin R
2
superiores a
0.99. En la Fig.II.9. se muestra el cromatograma correspondiente a una
disolucin patrn de 1000 ng/mL.
Experimental

42



Fig.II.9. Cromatograma GC-MS de una disolucin patrn de 1000 ng/mL de
cada compuesto. Identificacin de picos: derivados sililados de 1) t-Bu,
2) Bu, 3) Pen, 4) Hex, 5) t-Oct, 6) Hep, 7) Oct, 8) Non y 9) BPA

Resultados

43
















RESULTADOS Y DISCUSIN
















Resultados

45


RESULTADOS

1. Presentacin del problema
La determinacin de APs y BPA en lodo de depuradora se ha llevado a cabo
anteriormente en nuestro laboratorio utilizando el mtodo descrito por
Martnez-Moral y Tena 2011 basado en PLE-CG-MS. Tambin se trato de
aplicar la tcnica FUSLE para el tratamiento de los lodos antes del anlisis
por GC-MS.
Sin embargo, durante el estudio del efecto del tiempo de uso de la sonda
que se presenta en esta memoria, se observ que para ciertas muestras los
mtodos anteriormente establecidos no eran adecuados. Como se puede ver
en el cromatograma de la Fig.III.1, la seal correspondiente al patrn
interno para algunas muestras era muy superior a la de las disoluciones de
calibrado, cuando la seal de patrn interno debera ser del mismo orden
para extractos de muestra y disoluciones de calibrado.

Fig.III.1. Cromatograma GC-MS del extracto FUSLE de una muestra y una
disolucin de calibrado correspondiente a la seal del BPA-d
16
(modo SIS
m/z=368).
Resultados

46


En la Fig.III.1. se puede apreciar la diferencia entre las seales
correspondientes al BPA-d
16
, a pesar de que el extracto y la disolucin de
calibrado contienen la misma cantidad de BPA-d
16
. En azul se muestra la
seal del patrn interno de uno de los puntos de la recta de calibrado (1000
ppb) y en rojo se representa la seal obtenida para un extracto de muestra.
Con el BPA ocurre algo similar. En la Fig.III.2. se muestran las seales de
un extracto de muestra para el BPA y del patrn de 1000 ppb. Unas seales
tan grandes para el BPA en los extractos no son normales, lo que plantea
dudas sobre los resultados obtenidos.
El mismo problema se detect en los extractos PLE. Lo que nos indic la
existencia de algn compuesto en la matriz que produce interferencia en la
determinacin GC-MS de BPA y BPA-d
16
.

Fig.III.2. Cromatograma GC-MS de un extracto FUSLE de muestra y una
disolucin de calibrado correspondiente a la seal del BPA (modo SIS
m/z=357+358).
Por ello, se ha propuesto la inclusin de una etapa de limpieza mediante
SPE para los extractos PLE y FUSLE. A continuacin se presentan los
resultados obtenidos en el desarrollo del mtodo de limpieza.
Resultados

47


2. Limpieza del extracto


2.1. Eleccin del sorbente

Una vez detectada la presencia de una interferencia, se procedi al
desarrollo de un mtodo de limpieza del extracto. En este caso se opt por
una extraccin en fase slida. En primer lugar, se realiz la seleccin del
sorbente ms adecuado para retener los compuestos de inters y eliminar la
interferencia del extracto.
Para seleccionar el tipo de sorbente ms adecuado para los compuestos de
inters se probaron distintos sorbentes disponibles: C-18, Florisil y slice.
En los anlisis se utilizo un lodo que contena la interferencia y que fue
fortificado con 2 g de APs y BPA por gramo de lodo.

2.1.1. SPE en fase reversa (cartuchos C18)

Se han descrito distintos mtodos de limpieza mediante SPE en fase reversa
en el anlisis de los analitos de estudio o semejantes (Gatidou y col. 2007;
Andru y col. 2007; Vega-Morales y col. 2011; Mohapatra y col. 2012;
Samaras y col. 2013).
En la tabla III.1. se recogen las condiciones de trabajo descritas en los
trabajos citados.



Resultados

48


Tabla III.1.Condiciones SPE descritas para C-18.
Artculo
Gatidou y col.
2007
Andru y col.
2007
Vega-Morales
y col. 2011
Mohapatra y
col. 2012
Samaras y
col. 2013

Acondicionamiento
7 mL MeOH
6 mL agua

10 mL metanol
3x5 mL MeOH
3x5 mL agua
7 mL MeOH
3 mL agua
6 mL AcOEt
6 mL EtOH
6 mL agua
Muestra 100 mL agua 100 mL agua Agua 100 mL agua 100 mL
agua pH 2.5

Lavado

4x2.5 mL agua

2x5 mL
agua:metanol
9:1

2 mL agua
Secado 60 min 5 min Se secan

Elucin
8 mL
DCM:Acetona
4:1

10 mL MeOH

2 mL MeOH
8 mL
MeOH:DCM
3:1

6 mL AcOEt

En todos los casos, el primer paso es redisolver el extracto evaporado en
agua, generalmente acidificada para evitar la desprotonacin de los fenoles
y favorecer su retencin en el C18.
Una vez estudiada la bibliografa se decidi usar una adaptacin del mtodo
descrito por Samaras y col. tal y como se recogen en la Fig.III.3. En este
estudio se emplearon cartuchos de 500 mg de C-18 y de 6 mL de capacidad.
Tambin se probaron para la redisolucin de los analitos en el residuo seco
del extracto distintos disolventes miscibles con agua, como acetato de etilo,
acetona y metanol.
El residuo se redisolvi en 250 L de estos disolventes para a continuacin
aadirle 100 mL de agua antes de pasarlo a travs del cartucho.


Resultados

49





Acondicionamiento
- 6 mL acetato de etilo.
- 6 mL etanol.
- 6 mL agua pH 2.5.
Adicin de muestra
- La mezcla de 250 L de extracto en disolvente de
redisolucin y 100 mL de agua a pH 2.5 se pasa por el
cartucho a 3 mL/min.
Lavado
- 2 mL de agua acidificada.
Secado
- 15 minutos con aire con ayuda de vaco.
Elucin
- 6 mL de AcOEt.
Fig.III.3. Esquema del mtodo SPE con cartuchos C18

El extracto SPE se evapor a unos 500 L y se llev a 2 mL con AcOEt en
matraz volumtrico. De estos, se tomaron 500 L y se aadieron 50 L de
BSTFA y 10 L de piridina para formar los correspondientes derivados
sililados antes del su anlisis mediante CG-MS. Las recuperaciones
obtenidas se muestran en la Tabla III.2.



Extraccin en fase slida para APs y BPA con C-18 como
sorbente
Resultados

50


Tabla III.2. Recuperaciones SPE para distintos disolventes iniciales.
Compuesto AcOEt Acetona Metanol
t-Butylphenol 119 4 77 14 97 7
Butylphenol
110 2 82 8 99 3
Pentylphenol
108 4 75 8 130 9
Hexylphenol
110 4 148 30 131 12
t-Octylphenol
86 5 61 16 95 15
Heptylphenol
79 6 80 20 101 26
Octylphenol
59 8 74 10 110 0
Nonylphenol
76 4 41 21 137 2
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=3)
A pesar de que en la mayora de los casos las recuperaciones fueron
buenas, no se consigue eliminar la interferencia (ver Fig.III.4.), por lo que
el mtodo de limpieza propuesto no es vlido para las muestras.

Fig.III.4.Cromatograma CG-MS (modo SIS m/z=368) de extractos FUSLE de
una muestra sometida a SPE con cartuchos de C18 segn en procedimiento
descrito en Fig.III.3., usando distintos disolventes de redisolucin, y de un
blanco sin interferencia.
Resultados

51


2.1.2. SPE en fase normal (cartuchos de slice y Florisil)

En la bibliografa se han descrito distintos mtodos para el anlisis de BPA y
APs (Grumetto y col. 2008; Bizkarguenaga y col. 2012; Fernndez-Sanjun
y col. 2009) con limpieza de los extractos mediante SPE en fase normal.
En el caso de fase normal el extracto de muestra debe ser disuelto en
disolventes no polares para conseguir la retencin de los analitos en el
sorbente polar.
En este estudio, para realizar la limpieza en fase normal se emplearon
cartuchos de Florisil y cartuchos de slice, ambos de 1 g y 6 mL.
Tabla III.3.Condiciones SPE descritas en la bibliografa para Florisil y slice.
Articulo Grumetto y col. 2008 Bizkarguenaga y col.
2012
Fernndez-Sanjun y
col. 2009

Acondicionamiento
5 mL Hexano:AcOEt
96:4

5 mL n-hexano
20 mL Hexano:DCM 1:1
20 mL DCM:Acetona 1:1

Muestra
6 mL Hexano:AcOEt
96:4
8 mL AcOEt
8 mL n-hexano
Se lleva a 1 mL
100 mL Hexano:DCM/g
100 mL DCM:Acetona/g
Lavado 20 mL Hexano:AcOEt
93:7


Elucin

20 mL AcOEt
15 mL n-hexano:tolueno
65:35
15 mL AcOEt:DCM:MeOH
40:40:20

20 mL Hexano:DCM 1:1
20 mL DCM:Acetona 1:1

Una vez estudiada la bibliografa, se decidi utilizar una adaptacin del
mtodo descrito por Grumetto y col. 2008. Un esquema del proceso SPE se
muestra en la Fig.III.5.



Resultados

52







Acondicionamiento
- 6 mL n-hexano/AcOEt 96:4.
Adicin de muestra
- La mezcla de 250 L de extracto en AcOEt y 6 mL de n-
hexano se pasa por el cartucho a 1 mL/min.
Elucin
- 8 mL de AcOEt.
Fig.III.5. Esquema del mtodo SPE con cartuchos de slice y Florisil.
El extracto SPE obtenido se evapora hasta 500 L y se lleva a 2 mL con
AcOEt en matraz volumtrico. A 500 L de este extracto se le aaden 50 L
de BSTFA para formar los derivados de los analitos y finalmente se inyecta
en el cromatografo.
En la tabla II.4. se muestran las recuperaciones obtenidas con slice y
Florisil.
Tabla III.4.Recuperaciones SPE para cartuchos de slice y Florisil.
Compuesto Slice Florisil
t-Butylphenol 96 3 55 1
Butylphenol 100 4 57 1
Pentylphenol 98 2 77 2
Hexylphenol 105 2 73 1
t-Octylphenol 100 3 46 3
Heptylphenol 101 3 54 2
Octylphenol 23 6 45 3
Nonylphenol 109 12 57 2
Bisphenol A - 115 7
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=3)
Extraccin en fase slida para APs y BPA con cartuchos de
slice y Florisil
Resultados

53


Se obtuvieron recuperaciones cuantitativas (100%) para los APs con slice y
para BPA con Florisil. Sin embargo, slo con Florisil se consigue eliminar la
interferencia procedente de la muestra. Esto se muestra en la Fig.III.6.


Fig.III.6. Cromatogramas CG-MS correspondientes a la seal del BPA-d
16

(modo SIS m/z=368) obtenidos para extractos sometidos a SPE con
cartuchos de Florisil y slice.

Para mejorar las recuperaciones obtenidas con los cartuchos de Florisil se
estudi la optimizacin de las variables de la SPE.

2.2. Estudio de las variables SPE

Antes de proceder al estudio de variables se llev a cabo un estudio de
distribucin del analito durante las diferentes etapas del proceso de SPE. De
esta forma se puede conocer que etapa puede mejorarse para alcanzar el
100% de recuperacin de los analitos.
Resultados

54


Para ello, se estudi el porcentaje de analito que queda en:
a) El material de vidrio utilizado antes de aadir la muestra al cartucho.
b) La muestra eluida del cartucho.
c) Sucesivas eluciones con disolvente de elucin.
El recipiente donde se mezcla el extracto con el hexano y la pipeta Pasteur
usada para aadirlo se lavaron con acetato de etilo para disolver los analitos
que se hayan podido quedar retenidos en las paredes.
Los resultados obtenidos muestran que en este proceso se pierde
aproximadamente un 5% de los analitos. Las prdidas se reducen si al
terminar de pasar la muestra tambin pasamos dos veces 2 mL de n-
hexano por las paredes del mismo recipiente que contena la muestra.

2.2.1. Volumen de elucin
Para determinar el volumen ptimo de elucin, esta etapa se realiz usando
3 alicuotas de 2 mL. Cada alcuota se analiz como se ha descrito
anteriormente. Los resultados de recuperacin se muestran en la tabla III.5.
Tabla III.5.Recuperaciones de las eluciones.
Compuesto 1 Elucin 2 Elucin 3 Elucin
t-Butylphenol 59 7 2 1 -
Butylphenol 60 8 - -
Pentylphenol 69 6 - -
Hexylphenol 80 9 - -
t-Octylphenol 69 7 - -
Heptylphenol 82 9 - -
Octylphenol 66 8 - -
Nonylphenol 71 8 - -
Bisphenol A 97 11 3 1 -
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
Resultados

55


La mayor proporcin de los analitos se eluyen en los primeros 2 mL y una
pequea parte en la segunda alcuota. En la tercera ya no se detecta
analito. Por lo tanto, se selecciona un volumen de 4 mL para eluir los
compuestos del cartucho.

2.2.2. Porcentaje de AcOEt en la disolucin del extracto

El extracto obtenido tras la extraccin FUSLE o PLE en acetato de etilo no es
adecuado para realizar una SPE en fase normal. Para mejorar la retencin
de los analitos es necesario disminuir la polaridad del disolvente. Para ello,
el extracto se lleva a sequedad o casi a sequedad (250 L de AcOEt) y se
reconstituye con n-hexano. Los volmenes de n-hexano que se estudian
fueron 3, 6, 12, 18 y 25 mL de n-hexano para 250 L de AcOEt y 10 mL
para extractos llevados a sequedad que corresponden a un 7.7, 4, 2, 1.4, 1
y 0% de AcOEt.
Los resultados se muestran en la Fig.III.7. Como puede verse, al disminuir
el porcentaje de acetato de etilo aumenta la recuperacin. La retencin en el
Florisil aumenta al aumentar el volumen de n-hexano, por consiguiente, el
porcentaje de AcOEt seleccionado fue 0% y el volumen de n-hexano
aadido al extracto llevado a sequedad fue 10 mL.


Resultados

56




Resultados

57


Por lo tanto, las condiciones SPE con las que finalmente se realizaron los
anlisis son:

Acondicionamiento:
- 5 mL de n-hexano
Adicin de muestra
- Se aaden 10 mL de hexano al residuo seco del extracto y se
pasa por el cartucho a 1 mL/min.
Elucin
- 4 mL de AcOEt.
El extracto SPE obtenido se evapora hasta 500 L y se lleva a 2 mL con
AcOEt en matraz volumtrico. A 500 L de este extracto se le aaden 50 L
de BSTFA para formar los derivados de los analitos y finalmente se inyecta
en el cromatografo.

3. Extraccin FUSLE.


3.1. Estudio de variables.

El objetivo principal de esta parte del estudio fue seleccionar las mejores
condiciones FUSLE para extraer los analitos del lodo seco de depuradora.

3.1.1. Consideraciones previas

Las variables que pueden influir durante el proceso de extraccin con
ultrasonidos focalizados son:
La potencia de los ultrasonidos.
Resultados

58


El tiempo de extraccin.
La composicin del disolvente de extraccin.
El nmero de ciclos de extraccin.
La masa de muestra puesta en juego.
El tamao de partcula del slido a extraer.
La temperatura de extraccin.
El tiempo de pulso.
La forma del vial.
De estas variables se estudiaron la potencia de ultrasonidos, el tiempo de
extraccin y el nmero de ciclos de extraccin. El resto de variables se fij
de acuerdo con los resultados descritos en la bibliografa y nuestra
experiencia previa con esta tcnica, tal como se describe a continuacin.

a) Temperatura de extraccin
Debe tenerse en cuenta que a mayor temperatura mayor es la solubilidad
del analito en el disolvente y se favorece la ruptura de la interaccin analito-
matriz. En cambio, un aumento de la temperatura afecta negativamente a
los fenmenos de cavitacin producidos durante la extraccin con
ultrasonidos focalizados. Al aumentar la temperatura, las burbujas
cavitacionales se llenan rpidamente de vapor de disolvente, por lo que se
amortigua la implosin y la capacidad de extraccin disminuye (Suslick y
col. 1998). La condicin de compromiso se alcanza a 0C (Sanz-Landaluze y
col. 2006), por lo que se sumergen los viales en un bao de hielo.



Resultados

59


b) Tiempo de pulso
El tiempo de pulso indica que tanto por ciento de cada segundo emite el
equipo radiacin ultrasonidos. Tienen que producirse dos etapas: 1) tiempo
de activacin, tiempo requerido para producir burbujas cavitacionales
qumicamente activas y con un tamao que les permita producir una
implosin eficaz, y 2) tiempo de desactivacin, intervalo entre cada pulso.
Se ha descrito que la radiacin de ultrasonidos durante el 50% del ciclo
ofreca los mejores resultados (Sun y Weavers 2006). Por lo que se decidi
establecer el tiempo de pulso al 50% del ciclo.

c) Forma del vial
Es importante para evitar zonas muertas donde no se produce la
cavitacin. Para evitarlas, el vial debe ser lo ms estrecho posible (Capelo,
J.L. y col. 2005) y la punta de titanio debe situarse a una distancia de unos
5 mm del fondo del vial.

d) La composicin del disolvente de extraccin
Esta variable ha sido estudiada por Martnez-Moral y Tena 2011. En este
trabajo se estudi el efecto de la acetona, acetato de etilo, metanol y
diclorometano siendo el metanol el disolvente que mejores resultados
proporcionaba pero su evaporacin era muy lenta y por eso se decidi
utilizar el acetato de etilo que permite buenas recuperaciones y una rpida
evaporacin.
Por ultimo, el volumen del disolvente de extraccin y la masa de muestra se
fij en 10 mL y 0.5 g de muestra, respectivamente, de acuerdo con el
tamao del vial y su geometra.

Resultados

60



3.1.2. Diseo central compuesto

Una vez fijados los valores de las variables antes comentadas se realiz un
diseo de experimentos central compuesto para encontrar la potencia de
ultrasonidos y el tiempo de extraccin ptimos para la extraccin de APs y
BPA de lodo de depuradora.
El diseo central compuesto se compone de un diseo factorial 2
2
con 4
puntos estrella dispuestos a del centro del dominio experimental y ocho
rplicas del punto central. Para conseguir la rotabilidad del diseo la
distancia fue de 1.41. De este modo, el diseo se compone de 16
experimentos llevados a cabo aleatoriamente que se detallan en la tabla
III.6.
Los niveles de las variables del dominio experimental del CCD se
corresponden con y . Los valores de la potencia de ultrasonidos
variaron desde el 20% al 70% y los niveles fueron 20, 27, 45 (valor
central), 63 y 70%. El tiempo de extraccin se estudi entre 20 y 120 s y
los niveles fueron 20, 35, 70 (valor central), 105 y 120 s.
Las seales obtenidas para los APs y BPA en los experimentos se ajustaron
al correspondiente modelo polinmico de segundo grado.
Los resultados del CCD se recogen en las tablas III.7 y III.8, y en los
diagramas de Pareto de la figura III.8.





Resultados

61


Tabla III.6.Tabla de experimentos del diseo central compuesto.
Experimento Potencia, % Tiempo, s
1 (C) 45 70
2 (C) 45 70
3 21 70
4 (C) 45 70
5 (C) 45 70
6 28 35
7 45 120
8 28 105
9 (C) 45 70
10 (C) 45 70
11 63 35
12 (C) 45 70
13 45 20
14 (C) 45 70
15 63 105
16 70 70
(C): Punto central



Resultados

62


En la tabla III.7 se muestran los coeficientes ajustados de las variables y
sus interacciones. El anlisis ANOVA realizado mostr que solamente cinco
de estos coeficientes eran significativos, con un nivel de confianza del 95%
(p-valor < 0.05): la potencia para los compuestos t-butilfenol, butilfenol,
pentilfenol y BPA, y el efecto cuadrtico del tiempo de extraccin para el
hexilfenol. Al eliminar los factores no significativos la potencia para el
pentilfenol y el efecto cuadrtico del tiempo de extraccin para el hexilfenol
dejaron de ser significativos, tal como se puede ver en los diagramas de
Pareto de la Fig III.8, donde se muestra la significacin de los efectos para
cada compuesto.
Tabla III.7. Coeficientes del modelo que explica la seal en funcin de la
potencia y el tiempo obtenidos a partir de los resultados del diseo central
compuesto.
Compuesto Cte A B AA AB BB
t-Butilfenol 38310
2
-10.0* -418 0.715 2.00 1.93
Butilfenol 28210
2
110* -341 -0.573 1.58 1.53
Pentilfenol 28210
2
42.9* -335 -0.493 1.784 1.462
Hexilfenol 45810
2
-66.4 -563 -0.446 3.37 2.47*
t-Octilfenol 78410
2
-66.5 -931 -2.21 6.07 3.86
Heptilfenol 44610
2
-125 -553 -0.469 3.99 2.21
Octilfenol 14110
2
-355 121 2.76 1.66 -1.16
Nonilfenol 91210
2
-286 -11410 0.781 8.16 4.49
Bisfenol A 54310
2
-148* -470 2.11 8.26 0.751
A: Potencia
B: Tiempo de extraccin
*: Factores estadsticamente significativos (p-valor < 0.05)
Resultados

63


Tabla III.8.Valores p del anlisis ANOVA de los resultados del diseo central
compuesto.
Compuesto A B AA AB BB
t-Butilfenol 0.0124 0.1065 0.8490 0.4585 0.0614
Butilfenol 0.0111 0.0688 0.8567 0.4869 0.0768
Pentilfenol 0.0336 0.0779 0.8663 0.3974 0.0676
Hexilfenol 0.1145 0.1148 0.9189 0.2899 0.0434
t-Octilfenol 0.3481 0.1790 0.8131 0.3685 0.1213
Heptilfenol 0.1516 0.1159 0.9112 0.1987 0.0562
Octilfenol 0.8822 0.4356 0.5778 0.6350 0.3552
Nonilfenol 0.1678 0.0817 0.9264 0.1915 0.0542
Bisfenol A 0.0138 0.9149 0.8630 0.3503 0.8062
A: Potencia
B: Tiempo de extraccin
En rojo: Factores estadsticamente significativos (p-valor < 0.05)
a) t-butilfenol

b) Butilfenol

Resultados

64


c) Bisfenol A

d) Pentilfenol

e) Hexilfenol

f) T-Octilfenol h) Heptilfenol

g) Octilfenol i) Nonilfenol

Fig.III.8.Diagramas de Pareto estandarizados de todos los efectos
(izquierda) y de los significativos (derecha) para el t-butilfenol, butilfenol,
bisfenol A, pentilfenol y hexilfenol. Diagramas de pareto de todos los efectos
para el t-octilfenol, octilfenol, heptilfenol y nonilfenol.
Resultados

65


De acuerdo con los resultados obtenidos del diseo de experimentos, la
potencia y el tiempo son los nicos efectos significativos, y su efecto es
positivo. Por lo tanto, se seleccion una potencia del 70% y un tiempo de
extraccin de 30 s.

3.1.3. Estudio del nmero de ciclos

Una vez establecidas las condiciones ptimas de tiempo y potencia, se
procedi a determinar el nmero de ciclos de extraccin requeridos para
conseguir una extraccin completa. Para ello, se realizaron de uno a tres
ciclos de extraccin sobre una misma muestra de lodo fortificado. El estudio
se realiz por triplicado.
Los resultados se muestran en la Fig. III.9. Como puede verse la mayor
cantidad de analito se obtiene en el primer ciclo y en el segundo se obtienen
recuperaciones en torno al 10-15%. En el tercer ciclo las recuperaciones
obtenidas son en torno al 1-4%, por lo que finalmente se realizaran dos
ciclos en cada anlisis.


Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=3)
Fig.III.9. Recuperaciones obtenidas en cada ciclo.
Resultados

66


4. Caracterizacin del mtodo FUSLE-SPE-CG-MS

El mtodo completo se caracteriz para los nueve compuestos en trminos
de recuperacin, repetibilidad (DER intra-dia, %) y precisin intermedia
(DER inter-da, %).
Los valores de recuperacin oscilaron entre el 21 y 47% para el BPA y el
heptilfenol respectivamente (ver tabla III.9).
La repetibilidad y la precisin intermedia del mtodo se determinaron
mediante ANOVA. Se procesaron doce alcuotas de lodo seco fortificado
realizando cuatro repeticiones por da durante tres das. En la tabla IV.1 se
muestran los resultados obtenidos expresados como desviacin estndar
relativa (DER). Como se puede observar, los valores de repetibilidad no
superaron el 22% en ningn caso exceptuando el BPA que obtuvo unos
valores elevados. Los valores de precisin intermedia fueron en todos los
casos menores de 11%.
En la Fig. III.10. se muestran los valores de recuperacin obtenidos cada da
para cada compuesto.

Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
Fig. III.10. Recuperaciones medias obtenidas en tres das.
Resultados

67


Tabla III.9. Caractersticas del mtodo FUSLE-SPE-CG-MS.

Compuesto
Recuperacin (%) Repetibilidad
(DER, %)
Precisin
intermedia (DER,
%)
t-Butilfenol 32 19 9
Butilfenol 33 18 3
Pentilfenol 35 18 7
Hexilfenol 40 22 8
t-Octilfenol 47 19 9
Heptilfenol 40 15 7
Octilfenol 46 15 10
Nonilfenol 43 11 8
Bisfenol A 21 38 11
Repetibilidad calculada como la desviacin estndar relativa intra-dia (n=4
rplicas x 3 das). Precisin intermedia calculada como la desviacin
estndar relativa intra-dia (n=4 rplicas x 3 das).


5. Estudio del tiempo de vida de la sonda


5.1. Influencia del uso de la sonda


Como ya se menciona en la introduccin de esta memoria las sondas estn
sujetas a un desgaste natural, lo que provoca la erosin en la superficie de
emisin de ultrasonidos y la reduccin de su accin. Este desgaste es mayor
a medida que se aumenta la potencia de ultrasonidos en los sucesivos usos.
Para comprobar la influencia del uso de la sonda se realizaron ciento diez
extracciones de lodo seco fortificado siguiendo el mtodo descrito FUSLE-
SPE-CG-MS utilizando la misma sonda en todas las extracciones.

Resultados

68


A continuacin, en las Figuras III.11-19 se muestran las cartas de control
para cada compuesto. Las lneas rojas corresponden a la media 3s (tres
veces la desviacin estndar) y las amarillas a 2s (dos veces la desviacin
estndar) de los 5 primeros anlisis.

Fig.III.11. Evolucin de la recuperacin del t-butilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.

Fig.III.12. Evolucin de la recuperacin del n-butilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.
Resultados

69



Fig.III.13. Evolucin de la recuperacin del n-pentilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.


Fig.III.14. Evolucin de la recuperacin del n-hexilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.

Resultados

70



Fig.III.15. Evolucin de la recuperacin del t-octilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.


Fig.III.16. Evolucin de la recuperacin del n-heptilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.
Resultados

71



Fig.III.17. Evolucin de la recuperacin del n-octilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.

Fig.III.18. Evolucin de la recuperacin del n-nonilfenol con el n de
extracciones realizadas con la sonda.
Resultados

72



Fig.III.19. Evolucin de la recuperacin del BPA con el n de extracciones
realizadas con la sonda.

Se puede observar en esta secuencia de anlisis que hay una tendencia a
disminuir la recuperacin obtenida a medida que la sonda ha tenido ms
usos. En casi todos los casos se sobrepasa la lnea de 3s inferior y no la
superior. Para el Hex, Oct y BPA no se sobrepasa la lnea de 3s inferior por
lo que todava se podra seguir usando la sonda sin observar diferencias
significativas en la eficacia. Se puede decir que para la extraccin de APs y
BPA de lodo de depuradora, el nmero de usos de la sonda sera de unos
80.
En este trabajo tambin se hicieron fotografas de la sonda a medida que se
fueron realizando las extracciones para observar posibles cambios en la
punta de la sonda. En la Fig.III.20. se muestran las imgenes ms
representativas de los cambios en la sonda.
Las instantneas fueron tomadas con un microscopio Discovery
tm
VMS-004
capaz de hacer fotografas a x40 y a x400 aumentos.
Resultados

73


A) Sonda nueva



B) Sonda con 4 anlisis


C) Sonda con 9 anlisis





Resultados

74


D) Sonda con 30 anlisis



E) Sonda con 70 anlisis


F) Sonda con 110 anlisis



Fig.III.20. Imgenes de la sonda durante el transcurso del estudio.
Resultados

75


En ellas se observa como en los primeros usos la punta de la sonda se va
desgastando de manera uniforme. A los 70 usos se observa la aparicin de
irregularidades en la superficie de la punta. Sin embargo, esta erosin no
aparece a los 110 anlisis.
Tambin se han comparado los resultados obtenidos con dos sondas nuevas
para examinar la influencia del cambio de la sonda.
En la Tabla III.10. se muestra la comparacin de la recuperacin obtenida
con dos sondas nuevas. Se puede observar que hay diferencias significativas
para todos los compuestos excepto para el pentilfenol, el octilfenol y para el
BPA. Por ello, aunque las medias obtenidas no son muy distintas, no se
puede concluir que con dos sondas nuevas se vayan a obtener los mismos
resultados.
Tabla III.10. Comparacin de dos sondas nuevas.
Compuestos Sonda N1 Sonda N2 p-valor
t-Butilfenol 33 4 38 4 0.0207
Butilfenol 32 2 38 3 0.0053
Pentilfenol 35 4 39 5 0.1242
Hexilfenol 39 6 45 3 0.0413
t-Octilfenol 47 4 54 4 0.0074
Heptilfenol 39 3 44 3 0.0159
Octilfenol 45 5 49 4 0.1420
Nonilfenol 42 3 47 4 0.0294
Bisfenol A 21 6 24 2 0.1442
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
En rojo: valores con diferencias significativas (p-valor<0.05)


Resultados

76


A continuacin, en la tabla III.11. se muestra la comparacin de una sonda
nueva con otra que ha sido muy usada. Se puede concluir que hay
diferencias significativas entre las dos sondas para todos los compuestos
menos para el BPA.
Cabe destacar los valores de recuperacin elevados conseguidos con la
sonda muy usada para algunos compuestos (>50%). Este hecho podra
explicarse por la formacin de micropuntas en la superficie como
consecuencia de la erosin con el uso.
Tabla III.11. Comparacin entre una sonda nueva y otra usada.
Compuestos Nueva (N1) Usada (MU1) p-valor
t-Butilfenol 33 4 47 4 0.0003
Butilfenol 32 2 49 2 0.0000
Pentilfenol 35 4 53 3 0.0000
Hexilfenol 39 6 60 2 0.0007
t-Octilfenol 47 4 60 4 0.0004
Heptilfenol 39 3 57 2 0.0000
Octilfenol 45 5 60 2 0.0002
Nonilfenol 42 3 55 2 0.0000
Bisfenol A 21 6 22 3 0.5587
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
En rojo: valores con diferencias significativas (p-valor<0.05).
En la Fig.III.21 se muestran las fotografas de las cinco sondas utilizadas en
este trabajo:
- N1: sonda completamente nueva.
- N2: sonda completamente nueva.
- U: sonda usada en aproximadamente 250 usos de 30 segundos al 50% de
potencia.
- MU1: sonda muy usada, retirada por desgaste.
- MU2: sonda muy usada, retirada por desgaste.
Resultados

77


En ellas se observa como la superficie de la punta de las sondas nuevas
brilla y tiene surcos en forma de espiral mientras que la usada ya no tiene el
brillo inicial y se ha pulido de forma que ha desaparecido la espiral casi
completamente. La sonda MU1 presenta una superficie muy irregular, al
igual que la MU2 que presenta irregularidades siendo una de ellas una
micropunta que sobresale en el centro.
A continuacin se muestra una grafica, Fig III.22. con las recuperaciones
obtenidas para cada compuesto con cada una de las sondas con las que se
hizo el estudio.
Como conclusin, se puede afirmar que la sonda y el uso de la misma
son una importante fuente de variacin en los resultados obtenidos.
A) N1


B) N2




Resultados

78


C) U


D) MU1


E) MU2

Fig. III.21. Fotografas de las sondas utilizadas.

Resultados

79



Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
Fig. III.22. Recuperaciones de APs y BPA obtenidas con las distintas sondas.


5.2. Influencia del pulido de la sonda


En el manual del equipo de ultrasonidos focalizados, SONOPULS 2070,
encontramos un apartado en el que se comenta que todas las sondas estn
sujetas a un desgaste natural, lo que provoca la erosin en la superficie de
emisin de ultrasonidos y la reduccin de su accin. Por lo que pueden ser
pulidas y afiladas a fondo repetidamente, pero si el material se ha reducido
en aproximadamente 1 mm debido a la erosin o al afilado, la sonda no
deber seguir usndose.
Por esta razn, se quiso estudiar la influencia del pulido en las distintas
sondas utilizadas. Para ello comparamos los valores de la recuperacin de
APs y BPA obtenidas con tres sondas distintas antes y despus de ser
pulidas. El pulido se realiz con una Dremel incorporada con un disco para
tronzar.
Las recuperaciones obtenidas y las comparaciones para examinar si hay
diferencias significativas entre ellas se muestran a continuacin en las tablas
Resultados

80


III.12-14. Las fotografas de las sondas antes y despus de ser pulidas se
muestran en las Fig.III.23-25. En la tabla III.12 se muestra el resultado
obtenido para la sonda U. En este caso no se compararon los resultados
porque es evidente que hay diferencias significativas en los resultados. En
todos los compuestos el pulido ha derivado en una disminucin de la
recuperacin de aproximadamente el 10%.

Fig.III.23. Sonda U antes y despus de ser pulida respectivamente.
Tabla III.12. Recuperaciones con la sonda U antes y despus de ser pulida.
Compuestos Antes Despus
t-Butilfenol 46 3 34 3
Butilfenol 47 1 33 3
Pentilfenol 50 4 35 3
Hexilfenol 54 3 40 3
t-Octilfenol 61 3 49 4
Heptilfenol 54 3 42 2
Octilfenol 61 3 48 6
Nonilfenol 54 4 44 5
Bisfenol A 27 5 16 3
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
En la tabla III.13. se muestran los resultados para MU1. En este caso se
observa que no hay diferencias significativas entre las recuperaciones
obtenidas para los APs (excepto para el Pen) antes y despus del pulido de
la sonda.
Resultados

81


Por el contrario, la recuperacin de BPA aumenta ligeramente tras el pulido
de la sonda MU1.
Tabla III.13. Recuperaciones de APs y BPA obtenidas con la sonda MU1
antes y despus de ser pulida.
Compuestos Antes Despus p-valor
t-Butilfenol 47 4 47 3 0.8442
Butilfenol 49 2 46 4 0.1367
Pentilfenol 53 3 48 4 0.0180
Hexilfenol 60 2 54 6 0.0609
t-Octilfenol 60 4 59 4 0.5671
Heptilfenol 57 2 52 5 0.0910
Octilfenol 60 2 57 3 0.0755
Nonilfenol 55 2 53 3 0.1210
Bisfenol A 22 3 29 4 0.0053
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
En rojo: valores con diferencias significativas (p-valor<0.05).

Fig.III.24. Sonda MU1 antes y despus de ser pulida respectivamente.
En la tabla III.14. se muestran los resultados para MU2. Estadsticamente,
no hay diferencias significativas entre los valores de recuperacin obtenidos
antes y despus del pulido exceptuando el caso del t-Bu y el Hep. Por lo que
podemos considerar que no hay diferencias al pulir la sonda en este caso.

Tabla III.14. Recuperaciones de APs y BPA obtenidos con la sonda MU2
antes y despus de ser pulida.
Resultados

82



Compuestos Antes Despus p-valor
t-Butilfenol 39 2 36 1 0.0166
Butilfenol 38 5 34 1 0.2174
Pentilfenol 41 3 38 2 0.0711
Hexilfenol 45 2 42 2 0.0543
t-Octilfenol 49 6 49 1 0.8358
Heptilfenol 44 1 42 1 0.0269
Octilfenol 49 4 46 3 0.2024
Nonilfenol 48 9 45 2 0.4821
Bisfenol A 23 4 22 3 0.4846
Recuperacin media intervalo de confianza (95%, N=4)
En rojo: valores con diferencias significativas (p-valor<0.05).




Fig.III.25. Sonda MU2 antes y despus de ser pulida respectivamente.
En conclusin, la influencia del pulido de sondas no ha sido apreciable para
las sondas que haban tenido un gran uso, puede ser debido a que ya
haban sobrepasado 1 mm de erosin en la punta. Para la sonda que tena
un uso moderado el pulido a derivado en una disminucin del rendimiento
de la sonda. Por lo que el pulido no es recomendable a ningn efecto en
estos casos.
Conclusin

83














CONCLUSIONES














Conclusin

85



CONCLUSIONES

1. Se ha desarrollado un mtodo FUSLE-SPE-GC/MS para la determinacin de
APs y BPA en lodo de depuradora.
2. La tcnica FUSLE es ms rpida y fcil de llevar a cabo que otras, como la
MAE o PLE. Asimismo, es una tcnica de bajo coste frente a otras tcnicas
de extraccin.
3. Mediante un diseo central compuesto se han establecido las mejores
condiciones para la extraccin FUSLE de los compuestos estudiados: 70%
de la potencia de ultrasonidos y un tiempo de extraccin de 30 s.
4. Son necesarios dos ciclos de extraccin para obtener mejores
recuperaciones de los analitos.
5. Se consigue eliminar las interferencias usando Florisil como sorbente en la
extraccin en fase slida.
6. Se han obtenido las mejores condiciones SPE para la extraccin de los
compuestos a estudiar: 4 mL como volumen de elucin y ausencia de AcOEt
en la redisolucin del extracto.
7. El mtodo desarrollado proporciona valores de recuperacin entre el 32 y
47% (a excepcin del BPA que la recuperacin es de 21%).
8. El mtodo presenta una desviacin estndar relativa intra-da entre el 11 y
22% (a excepcin del BPA 38%) y valores de desviacin estndar relativa
inter-da entre el 7 y el 11%.
9. La sonda utilizada es una importante fuente de variabilidad en la
recuperacin de APs de lodo.
Conclusin

86


10. Se ha demostrado que a medida que aumenta el uso de la sonda se tiende a
obtener una recuperacin menor de los compuestos.
11. Se ha comprobado que el pulido de la sonda no tiene efectos positivos si se
quiere obtener mejores recuperaciones.

Bibliografa

87














BIBLIOGRAFA














Bibliografa

89



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