BIOACUMULACIN EN PORCELLIO SCABER (CRUSTACEA, ISPODOS) COMO UNA MEDIDA DE LA EFICIENCIA DE

REMEDIACIN DE EDTA DE SUELO DE METAL-CONTAMINADO

Introduccin
Tcnicas de remediacin de suelos contaminados se pueden dividir en dos grupos principales. Tecnologas de
inmovilizacin dejan metales en el suelo , pero cambian su especiacin y fraccionamiento en fases slidas del suelo ,
minimizando as su disponibilidad y la movilidad ( Guo et al . , 2006 ) . Tecnologas de eliminacin tales como
fitoextraccin , extraccin electrocintica y mtodos de lavado / lixiviacin , eliminar los metales de la tierra , por lo
tanto siendo preferidos ( Peters , 1999 ) . El lavado del suelo / lixiviacin implica la separacin de metales a partir de
fases slidas del suelo mediante la solubilizacin en una solucin de lavado / lixiviacin . Adems de los cidos , agentes
quelantes ( quelatos) son los agentes de eliminacin de ms prevalentes y efectivos utilizados en el suelo de lavado /
lixiviacin ( Lestan et al , 2008 ; . Peters , 1999 ) . Los quelantes desorben metales de las superficies del suelo mediante la
formacin de compuestos de coordinacin fuertes y solubles en agua de metal - quelante (complejos ) que se pueden
quitar (lavado / lixiviado ) desde el suelo . Entre los quelantes probados , cido tetraactico etilendiamina ( EDTA ) ha
demostrado ser muy eficaz en la disminucin de la concentracin de metales ( Fingar y Lestan , 2007 ) .
Metales en el suelo se speciated de diferentes maneras , lo que resulta en diferentes solubilidades ( Ure , 1996 ) . Ellos
no son totalmente accesibles a los agentes quelantes y son en consecuencia eliminan slo parcialmente.
Metales residuales que quedan en el suelo despus de la remediacin siguen presentes en las especies qumicamente
estables con destino a las fracciones de suelo no lbiles ( zgar Fin y Lestan , 2007 ; . Nowack et al, 2006) . La eficacia y el
xito de la recuperacin de suelos es a menudo juzgada en la menor disponibilidad (disponibilidad stripping) de
contaminantes para los organismos , evaluada por ensayos de extraccin qumica.
Diferentes tcnicas de extraccin se utilizan para evaluar los metales . Extracciones secuenciales se utilizan para evaluar
diferentes de metal de la fraccin -ciones en los suelos , discriminar metales de acuerdo con sus asociaciones fsico-
qumicas con otros componentes del suelo , la movilidad y la biodisponibilidad ( McGrath , 1996 ; . Mulligan et al , 2001 ;
Sabiene y Brazauskiene , 2004 ) . La movilidad y el potencial de lixiviacin de los metales en el sistema de aguas
subterrneas son evaluados de acuerdo a la estandarizada caracterstica de toxicidad Procedimiento de Lixiviacin (TCLP
) ( EE.UU. EPA ,
1995 ) . Se han desarrollado y utilizado para estimar la biodisponibilidad oral de los contaminantes del suelo para los
seres humanos ( Oomen et al. , 2002 , 2003 ) Varios modelos de digestin in vitro en funcin de determinados
parmetros fisiolgicos en el ser humano . La Prueba de extraccin de Fisiolgicamente basado en ( PBET ) fue diseado
para evaluar la oral biodisponibilidad de los metales en el estmago humano , donde el pH es bajo ( pH 2,5 ) , y en el
intestino delgado , donde el pH es neutro (pH 7,0 ) . Este ltimo mtodo calcula la cantidad de metales listos para ser
absorbidos por el intestino a la sangre (Ruby et al, 1996 ; . Turner e Ip , 2007 ) .
Por otra parte , una variedad de bioensayos se utilizan para examinar la eficiencia del proceso de recuperacin de suelos
en trminos de toxicidad reducida .
Sin embargo, cuando la biodisponibilidad de los productos qumicos y transferencia trfica potencial es de inters, tales
bioensayos deben ser empleados donde se determinan los contaminantes acumulados. Algunas plantas y animales,
especialmente invertebrados ya se han utilizado para evaluar la disponibilidad de metal en los suelos (Meier et al.,
1997). Estos organismos se acumulan metales en proporcin a las concentraciones ambientales y por lo tanto se utilizan
como bioindicadores / biomonitores de contaminacin por metales del medio ambiente.
Entre los invertebrados, los organismos ms populares para los metales investigacin acumulacin son los moluscos,
gusanos, crustceos, insectos, miripodos y arcnidos (Hopkin, 1989), entre las cuales ispodos parecen ser las ms
eficientes de ellos como asimiladores de metales. Se acumulan las mayores concentraciones de metales como zinc,
cadmio, plomo y cobre hasta ahora registraron en cualquier tejido blando de los animales terrestres (Hopkin, 1989;
Hopkin et al, 1993;. Vijver et al, 2006.; Witzel, 1998). Asimilacin de metal eficiente, la riqueza de conocimiento sobre su
fisiologa metal, y la facilidad de manipulacin en el laboratorio, fueron las principales razones para la eleccin de los
ispodos terrestres como el animal de experimentacin en nuestro estudio. Debido ispodos terrestres acumular
metales de su entorno en proporcin a su concentracin en el suelo (Heikens et al, 2001;.. Hopkin et al, 1993),
aparecieron muy adecuadas como indicadores de la biodisponible de metal fraccin de la contaminacin del suelo y la
hojarasca (Ga 'l et al., 2008).
Los ispodos son animales omnvoros, pero tienen clara la alimentacin preferencias. Muchas especies prefieren
alimentarse en descomposicin de hojarasca en lugar de fresco, con alta densidad microbiana (Zimmer, 2002). Algunas
otras especies son viven en el suelo con diferentes preferencias alimentarias. Terrestre ispodo Porcellio scaber habita
una amplia gama de hbitats. Ellos mastican las plantas muertas o material vegetal mezclados con tierra en pequeos
fragmentos. Ispodos terrestres deben haber evolucionado formas eficientes de asimilacin de los elementos esenciales
de los alimentos, porque a diferencia de sus antepasados marinos, ya no podan obtener directamente desde el medio
externo a travs de la respiratoria superficies (Warburg, 1993).
El principal rgano de almacenamiento de metal en ispodos es el hepatopncreas. Los metales se unen aqu para
pptidos de bajo peso molecular especficas, o se almacenan en grnulos insolubles (Hopkin, 1989). La absorcin del
metal de los alimentos depende de muchos factores, de los cuales los ms importantes son la biodisponibilidad de
metales en el material se ingiere, la microflora intestinal, la tasa de consumo de alimentos y el pH en el interior del
intestino, concentracin de metal, la duracin de la exposicin y la combinacin de factores a los que los metales estn
expuestos (Hopkin, 1989;. Hopkin et al, 1993; Odendaal y Reinecke, 2004). Los datos anteriores sugirieron que ispodos
acumulan metales para un tiempo de vida, pero investigaciones ms recientes proporcionan evidencia tambin de la
prdida de metales, una vez transferidos a las fuentes de alimentos incon-contaminada (Bibic et al, 1997;. Odendaal y
Reinecke,
2004; Witzel, 1998). Sin embargo, una correlacin entre la carga de cuerpo de metal y las concentraciones de metales en
los alimentos / sustrato se puede demostrar (Hopkin, 1989).
El objetivo de nuestro estudio fue investigar si las pruebas de extraccin qumica proporcionan (incluir) informacin
sobre la disponibilidad de metales para la fauna del suelo. La hiptesis era que ispodos acumulan metales del suelo
en proporcin a la fraccin de metal biodisponible. Esperbamos que la fraccin biodisponible en suelo remediado
sea menor y, en consecuencia, menos metales que se acumulan por ispodos que de la tierra antes de la remediacin.
Se discuten los beneficios de la evaluacin in vivo de eficacia de la recuperacin de suelos por los organismos
terrestres, adems de pruebas de extraccin qumica establecidos sobre la base de la extraccin qumica.
RESULTADOS
ANALISIS DEL SUELO
En 1990, la minera de plomo y fundicin en Z erjav (Me zica Valley, Eslovenia; x 489.300 m e y 152.300 m, Gaub-Kru
ger sistema de coordenadas) cesaron despus de haber estado activo durante ms de tres siglos. El suelo se recogi de
la capa de 30 cm superior de un huerto manejado regularmente cerca de la fundidora de plomo abandonada en este
valle. El pH del suelo se midi en un (w / v) de proporcin de suelo y 0,01 M de CaCl2 suspensin 1/2.5. Se analizaron las
muestras de suelo de la materia orgnica mediante valoraciones de Walkley-Black modificados (ISO
14235, 1998), la capacidad de intercambio catinico (CEC) por el mtodo de acetato de amonio (Rhoades, 1982), la
textura del suelo por el mtodo de la pipeta (Fiedler et al., 1964), el contenido de N total despus de la combustin seca
(ISO 13878, 1995), y carbonatos manomtricamente despus de la reaccin del suelo con HCl (ISO 10693, 1995). Anlisis
Pedolgico del suelo no lixiviada se realiz por triplicado y los resultados se presentan como medias + - SD.
2.2. Lixiviacin del suelo
Del suelo se sec al aire tamizada Cinco mm ( 4,6 kg por columna ) se coloc en 15 cm de dimetrocolumnas 27 cm de
altura del suelo. Malla de plstico ( D de 0,2 mm ) en la parte inferior de la columna conservado el suelo . El suelo se
lixivia en primer lugar con solucin de EDTA que circula a travs las columnas de suelo en un bucle cerrado durante 24 h
utilizando una bomba peristltica ( caudal 15 ml min ? 1 ) para movilizar y eliminar Pb , Zn y Cd como metal -EDTA
soluble en agua complejos . Diferentes concentraciones de EDTA ; 2,5 , 10 , 40 , y cuatro lotes de 40 mmol kg ? 1 EDTA (
4 ? 40 mmol kg ? 1 EDTA, cada lote que dura 24 h ) en 3,1 L grifose utiliza agua . Despus, cada columna se lav con 80 L
de agua del grifo pura en un bucle abierto (velocidad de flujo de 15 mL min ? 1 ) para eliminar especies de metales
movilizados y EDTA. EDTA en las soluciones de enjuague de todos los tratamientos se determin
espectrofotomtricamente de acuerdo con el procedimiento de Hamano y col . ( 1993 ) y metales eran determinado
directamente con espectrofotometra de absorcin atmica (AAS ) ( Perkin - Elmer 1100 -B , Norwalk, EE.UU. ) para
asegurar que no hay metales movilizados y / o EDTA fueron que queda en el suelo despus de enjuagar con agua del
grifo .
2.3 . Extraccin secuencial de seis pasos
Procedimiento de extraccin secuencial de Tessier A modificado ( Lestan et al. , 2003) fue utilizado para determinar el
fraccionamiento de Pb , Zn y Cd en el suelo en seis fracciones . la agua fraccin extrable se obtuvo por extraccin de 1 g
de suelo seco al aire , de 2 mm tamizada , con 10 ml de agua desionizada durante 1 h. La fraccin intercambiable del
suelo coloides fue extrado de la muestra residual en el suelo con 10 ml de 1MMg ( NO3 ) 2 para 2 h . La fraccin unida a
los carbonatos se extrajo con 10 ml de 1 M de NH4OAc ( Ph 5 ) durante 5 h . La fraccin unida a Fe y Mn -xidos se
extrajo con 20 ml de 0,1 M NH2OH ? HCl (pH 2 ) durante 12 h . Se obtuvo la fraccin unida a la materia orgnica despus
de calentar la suspensin de suelo en 3 ml de 0,02 M de HNO3 y 5 ml de H2O2 al 30% para 3 h a 85 ? C, seguido por
extraccin con 15 ml de 1 M de NH4OAc durante 30 min . lam solucin de extraccin se centrifug despus de cada
etapa de extraccin y el sobrenadante se almacena a 4 C durante el anlisis . La muestra residual en el suelo se agit en
10 ml de agua desionizada de agua durante 10 min , se centrifug y se desech el sobrenadante . El ltimo , residual
fraccin se obtuvo despus de la digestin de las muestras con agua regia . tres repeticiones se realizaron para cada
secuencia de fraccionamiento . El fraccional final de la recuperacin de Pb , Zn y Cd se calcul despus de la suma de las
concentraciones de todos los seis pasos de extracciones secuenciales y su comparacin con la cantidad total de Pb , Zn y
Cd en el suelo respectiva.
2.4. Toxicidad Procedimiento de Lixiviacin Caracterstico (TCLP)
La movilidad (lixiviacin) de Pb, Zn y Cd en el suelo se determin a travs de anlisis TCLP (EE.UU. EPA, 1995). Los anlisis
se realizaron por triplicado. El procedimiento consisti en agitacin una muestra de suelo 1 g, tamizado a 2 mm, en 20
ml de 0,0992 M de cido actico y solucin de extraccin 0,0643 M de NaOH (1:20 ratio) con un pH de 4,93 0,05,
durante 18 h en un agitador rotatorio a aproximadamente 300 rpm. Despus del perodo de reaccin, los contenidos se
filtraron (N 4 de papel de filtro Whatman), el filtrado se acidific con 65% de HNO3 a pH <2 y se almacena a 5 C para
la determinacin de metal.
2.5. Evaluacin de la disponibilidad de metal a las plantas
La disponibilidad del metal para plantas (fitodisponibilidad) se evalu por el cido dietilentriaminopentaactico (DTPA)
de extraccin, inicialmente diseada para extraer simultneamente plantar disponible de Zn, Fe, Mn y Cu en el suelo casi
neutro y calcrea (Lindsay y Norvell, 1978) y se utiliza como un predictor de la biodisponibilidad de los metales y de la
ecotoxicidad (Conder et al, 2001;. Ma et al, 2002.). La solucin de extraccin DTPA se prepar para contener 0,005 M de
DTPA, CaCl2 0,01 M, y 0,1 M de trietanolamina (TEA) y se ajust a pH 7,30 0,05. El procedimiento consisti en agitacin
una muestra de suelo 5 g, tamizado a 2 mm, en 10 ml de solucin de DTPA extraccin durante 2 h en un agitador
horizontal a aproximadamente 120 rpm. Despus del perodo de extraccin, los contenidos se filtraron (Whatman N 42
de papel de filtro) y los filtrados se analizaron para Pb, Zn y Cd. la extracciones se llevaron a cabo por triplicado.
2.6. Pb, Zn y Cd evaluacin oral biodisponibilidad
El PBET utilizado est diseado en torno a los parmetros del tracto gastrointestinal peditricos para un nio de 2-3 aos
de edad (Turner y Ip, 2007), ya que los nios ingieren ms tierra y las partculas de polvo que los adultos, debido a su
comportamiento habladuras, y estn por lo tanto ms expuesta a los contaminantes del suelo (Davis y Mirick, 2006). El
PBET incluye dos fases. En primer lugar, 0,5 g de muestra tamizada suelo (250 mm) se digiere en un matraz de reaccin
durante 2 h a constante temperatura ( 37 C ) en fluido gstrico simulado ( 50 ml ) preparado mediante el ajuste de 1 L
de agua desionizada a pH 2.50 ? 0,05 con HCl diluido y la adicin de 1,25 g de pepsina (porcino , Sigma ) , 0,50 g de
citrato, 0,50 g de malato , 420 ml de cido lctico y 500 ml de cido actico . El pH de la mezcla de reaccin se midi
cada 10 min y se ajustcon HCl segn sea necesario para mantenerla en un valor de 2,50 ? 0.05 . Las muestras ( 3 ml
cada uno) fueronrecogida despus de 2 h y se centrifug a 1600 g durante 25 min . La fraccin lquida fue decantada
para su posterior anlisis . El volumen de la muestra 3 ml fue reemplazado con gstrica solucin para mantener una
constante volumein el matraz de reaccin . Despus de 2 h , los reactionwas valorado a pH 7 con solucin saturada de
NaHCO3 . Cuando lleg el recipiente de reaccin de equilibrio a pH 7 , 175 mg de sales biliares ( porcino , Sigma) y 50 mg
de pancreatina( porcino , Sigma ) se aadieron , simulando las condiciones del pequeo intestino . Despus de 2 h, la
soluciones de reaccin se centrifugaron a 1600 g durante 25 min . La fraccin lquida fue decantado y analizado como la
fraccin del intestino delgado. Durante ambas fases , una constante flujo de argn humedecido ( 1 L min ? 1 ) a 37 C se
llev a cabo a travs de la reaccin mezcla con el fin de simular el peristaltismo . El PBET se llev a cabo por triplicado .
2.7 . Anlisis de metal
Muestras secadas al aire de suelo ( 1 g ) se molieron en un molino de gata, digerido en agua regia (28 ml ), se diluy con
agua desionizada hasta 100 ml, y Pb , Zn y Cd analizados por llama ( acetileno / aire) AAS con una correccin de fondo de
deuterio ( Perkin -Elmer 1100 -B , Norwalk, EE.UU. y Varian AA240FS ) . Pb , Zn y Cd en los extractos (soluciones de
lixiviacin , agua de lavado , soluciones de extracciones secuenciales , PBET , TCLP y extractos de DTPA ) se determinaron
mediante AAS directamente . Un material de referencia estndar que se utiliza en comparaciones entre laboratorios (
WEPAL 01/01/2003 ) desde HBLFA Raumberg - Gumpenstein , Irdning , Austria, fue utilizado en la digestin y anlisis
como parte del protocolo de QA / QC . Los porcentajes de recuperacin fueron 106 5,9 , 108 12,7 y 105 30,1 % , y los
lmites de cuantificacin (LC) fueron 0,25 , 0,02 y 0,03 mg L 1 para Pb , Zn y Cd , respectivamente . Tambin se usaron
duplicados en blanco y reactivo analtico en su caso para asegurar la exactitud y la precisin en el anlisis.
.8 . La acumulacin del metal en Porcellio scaber
Los ejemplares adultos de un ispodo terrestre P. scaber se recogieron en julio de 2007 en dos jardines administrados
no contaminadas en Celje y Krsko , Eslovenia, mantenidos en el laboratorio a temperatura ambiente constante ( 24 C) y
se alimenta con hojas de color avellana comunes ( Corylus avellana) recogida de un sitio no contaminado en Tivoli
Parque Regional, Ro? znik y Sisenski hrib (Ljubljana , Eslovenia ) . Las concentraciones de metales en las hojas estaban en
el rango dentro del cual las hojas se clasifican como contaminado no metlico ( 64,5 ? 11,4 , 48.3 ? 9,5 , 4,50 ? 0,44 mg
de Pb , Zn y Cd por g de peso en seco de la hoja , respectivamente ) .Estas son las condiciones habituales en nuestro
laboratorio para el mantenimiento de los animales antes de la experimentos . Durante el experimento , los animales
fueron expuestos nicamente al suelo . Ninguna hoja basura esta en los contenedores experimentales. Para el
experimento , 15 ejemplares adultos de 30 a 60 mg de peso fresco fueron expuestos durante 14 das a
aproximadamente 600 ml de suelo experimental se sec al aire ( contaminado y remediados con 2,5 , 10 , 40 y 4 ? 40
mmol kg ? 1 EDTA , respectivamente) en plstico embarcaciones ( 17 ? 13 ? 7 cm) con tapas de plstico . Las cubiertas
estaban echados hacia atrs para permitir que la circulacin de aire . Con el fin de lograr un gradiente de humedad del
suelo , una esquina en el recipiente fue humedecido a diario con agua del grifo ( 5-10 ml). Los vasos experimentales se
mantuvieron a temperatura ambiente y se revisa diariamente para regular el contenido de humedad del suelo . despus
14 das de la exposicin , los animales fueron retirados de los vasos y se alimentaron con Hazel no contaminada deja
durante 24 h para eliminar los metales del sistema digestivo . Luego se transfirieron separadamente en tubos de plstico
, colocados para un 4 h a 5 ? C a obtener un efecto anestsico- como y despus se congelan . Antes de los anlisis , las
muestras se liofilizado , se pesaron y completamente digerido en una mezcla de cido ntrico / perclrico( 7:01 ) .
Despus de la evaporacin del cido , el residuo se recogi en 0,1 % de HNO3 . Total Pb ,Concentraciones de Zn y Cd en
animales enteros fueron determinadas por la llama atmica espectrometra de absorcin ( Perkin - Elmer AAnalyst 100 )
. Blancos de reactivos y el estndar Se utilizaron soluciones ( Merck ) para asegurar la exactitud y la precisin en el
anlisis . nosotros expresado la acumulacin de metal en los animales con los FBA mediante el clculo de la relacin de
concentracin de metal en los ispodos a la concentracin total de metal del suelo . La duracin de la exposicin se
determin sobre la base de los resultados preliminares , donde se evaluaron diferentes parmetros de estrs . Llegamos
a la conclusin de que los 14 das de la exposicin en condiciones subptimas no afectan gravemente animales. Por otro
lado, esto es lo suficientemente largo para que se acumulan cantidad sustancial de biodisponible metales ( Bibic et al . ,
1997 ) . Para las concentraciones de metales iniciales presentes en P. scaber antes de la exposicin a Se determinaron
las concentraciones de suelos contaminados y remediados , el cuerpo de Pb , Zn y Cd en 15 muestras , como se describi
anteriormente . El cuerpo inicial concentraciones de 30,2 ? 22.7 , 350.2 ? 95,5 y 4,9 ? 1,6 mg g ? 1 de Pb , Zn y Cd ,
respectivamente , fueron restados de las concentraciones acumuladas de medicin en los animales de laboratorio
expuestos a la contaminacin y remediacin de suelos.
2.9. El anlisis estadstico
Las diferencias entre las concentraciones de Cd Pb, Zn y en ispodos expuestos a suelos diferente remediadas y no
remediadas, as como las diferencias entre los Los BAF para suelo saneado y no remedi se determinaron mediante la
prueba de Duncan al Nivel de confianza del 95% (P <0,05) utilizando el software Statgraphics (Statgraphics Plus)
Tabla 1
La concentracin total de Pb, Zn y Cd en el suelo antes y despus de remediacin con lixiviacin con diferentes
concentraciones de EDTA. Los resultados se presentan como medias de tres repeticiones +- SD.






3. RESULTADOS Y DISCUSION
3.1. Remediacin de suelos
Las siguientes propiedades edafolgicas del suelo utilizados en el experimento se evaluaron : pH 6.57 ? 0.02 , la materia
orgnica 11.3 ? 0,4 % , CEC 27 ? 1 cmol ( c ) kg ? 1 de suelo , arena 42 ? 1 % , limo 47.5 ? 1,4 % , arcilla 10.5 ? 0,4 % , N 4,8
? 0,1 g kg ? 1 , carbonatos 202 ? 15 g kg ? 1 . Remediacin de suelos con EDTA lixiviacin significativa reducido la carga
de metal del suelo . Mediante el uso de soluciones de lixiviacin que contiene cuatro concentraciones diferentes de
EDTA ( 2,5 , y 10 , 40 4 ? 40 mmol kg ? 1 EDTA), que lograron un gradiente esperado eliminacin de Pb , Zn y Cd con un
ligero aumento en el pH del suelo en cada uno tratamiento ( 6,89 ? 0,04 , 6,9 ? 0,01 , 6,88 ? 0,1 y 6,98 ? 0,02 ,
respectivamente, significativas a P < 0.05 ) . tratamientos respectivos eliminado 6 , 41, 54 y 73 % de inicial Pb, 3,13 , 20 y
23 % de Zn inicial y 17 , 54, 66 y 74 % de Cd inicial ( Tabla 1 ) . La cantidad de Pb, Zn y Cd eliminado con la lixiviacin de
EDTA es congruente con el metal concentraciones en las principales fracciones metalferas , conforme lo resuelto por
extracciones secuenciales ( Tabla 2 ) . La mayora de Pb en el suelo antes remediacin estaba obligado a carbonatos y
materia orgnica. La lixiviacin con EDTA elimina hasta el 85 % de la Pb inicialmente unido
Tabla 2
El fraccionamiento de Pb , Zn y Cd en el suelo antes y despus de remediacin con EDTA expresada como porcentaje de
la suma de todas las fracciones . Los resultados se presentan como medios de tres repeticiones ? SD. LDC , por debajo
del lmite de cuantificacin .
Tabla 2
El fraccionamiento de Pb, Zn y Cd en el suelo antes y despus de remediacin con EDTA
Tres repeticiones SD. LDC, por debajo del lmite de cuantificacin.

I: agua extrable;
II: intercambiable;
III: unido a carbonatos;
IV: obligado a Fe y Mn-xidos; V: ligado a
la materia orgnica; VI: fraccin residual.

Antes





carbonatos y hasta 75 % de la Pb inicialmente unidos a la materia orgnica . El CD presente en el suelo fue ligado
principalmente a los carbonatos y materia orgnica , pero su eliminacin se logr en todas las fracciones , excepto la
fraccin residual ( Tabla 2 ) . La mayor parte de la Zn fue obligado a materia orgnica y en la fraccin residual y era
aparentemente inaccesible para el EDTA . Slo se detect 2,1 % de Zn total en la fraccin ms accesible , agua extrable e
intercambiable ( Tabla 2 ) . Despus con EDTA ing lixiviacin , Zn se ha eliminado correctamente de la fraccin de
carbonato ( hasta el 91 % de los obligados al principio) y para Fe y Mn -xidos ( hasta el 87 % de los obligados
inicialmente ) . Sin embargo , en conjunto slo el 23 % del total de Zn podra ser retirado de la tierra con la ms alta
concentracin de EDTA -tratamiento tracin ( 4 40 mmol kg 1 EDTA). La eficacia de los EDTA para la eliminacin de Zn de
este suelo parece ser limitado . Esto podra explicarse por las diferencias en la cintica de desorcin de Zn / disolucin en
comparacin con otros metales y por el hecho de que la mayora de Zn en los suelos est presente en la fraccin residual
( Sun et al , 2001 ; . Aleta zgar y Lestan , 2006 ) . EDTA es capaz de extraccin de metales en su mayora del agua
fracciones extrables , intercambiables y de carbonato , en parte de la materia orgnica , pero no de la fraccin residual (
Peters , 1999 ; Tandy et al, 2004 . ; Ure , 1996 ) . Las diferentes eficiencias de extraccin de diferentes metales obtenidos
por el quelante son por lo tanto simplemente debido a las diferentes distribuciones de las fracciones de metal (Tabla 2 ) .
En consecuencia , EDTA tuvo mucho xito en Pb y Cd remocin del suelo , pero no era apropiado para la eliminacin de
Zn. La movilidad de Pb , Zn y Cd en el suelo antes y despus de remediacin se determin por TCLP . La lixiviacin con
EDTA reduce considerablemente Pb , Zn y Cd movilidad en el suelo por debajo de la los valores lmite establecidos por la
EPA de EE.UU. ( 1995 ) , es decir, 5 mg L 1 de Pb, 250 mg L 1 para Zn y 1 mg L- 1 para el Cd ( Tabla 3 ) . Las
concentraciones de Zn mvil en suelos tratados con 4 40 mmol kg 1 EDTA se redujo en 88 % en comparacin a la
concentracin de Zn mvil en el suelo no remediado , mientras que en ese mismo tratamiento del suelo las
concentraciones de Pb y Cd mvil disminuyeron por debajo del lmite de deteccin . Remediacin de EDTA reduce
tambin la fraccin phytoavailable como se determina por extraccin DTPA de metales hasta en un 94 , 91 y 95 % de la
inicialmente phytoavailable Pb , Zn y Cd , respectivamente ( Tabla 3 ) . En el tratamiento con 4 40 mmoles de EDTA 1 kg
la cantidad de oral biodisponible Pb y Zn en la fraccin de estmago , evaluada mediante el PBET disminuyeron en un 88
y 68 % , respectivamente (Tabla 3 ) . El mismo tratamiento redujo la biodisponibilidad oral de Pb en la fraccin del
intestino delgado por debajo del lmite de cuantificacin y de Zn en un 70 % ( Tabla 3 ) . La concentracin de Cd
biodisponible por va oral ya estaba por debajo del lmite de deteccin en el suelo no remediado ( Tabla 3 ) .
3.2 . Acumulacin de Pb , Zn y Cd en P. scaber
Nuestros resultados mostraron que el gradiente de eliminacin de metal por cada vez mayor concentracin de EDTA de
la solucin de lixiviacin se refleja generalmente en las cantidades de metal acumuladas por ispodos (Fig. 1A ) .
Despus de 14 das de exposicin a no remediado y remediado suelo , P. scaber acumula Pb , Zn y Cd en una manera
dependiente de la concentracin . Esto confirma la literatura informa que las concentraciones internas de ( acumulados
) metales en ispodos aumentan con la concentracin de metal en el suelo (GRA FF et al , 1997 ; . . Cortet et al , 1999 ;
Paoletti y Hassall , 1999 ; . Heikens et al , 2001 ; Ga ' l et al, 2008) . .En concreto , no se observaron diferencias
significativas ( P < 0,05) entre las acumulaciones de Pb en los animales expuestos a no remediado suelo, suelo tratado
con 10 y el suelo tratado con 4 40 mmol kg 1 EDTA ( fig. 1A ) . En el caso de la acumulacin de Cd , diferencias
significativas ( P < 0,05 ) aparecieron entre los animales expuestos al suelo y el suelo no remediado lixiviada con 10
mmoles de EDTA 1 kg o ms altos (Fig. 1A ) . Las diferencias en la acumulacin de Zn por P. scaber entre los grupos no
fueron significativas ( P < 0,05 ) ( fig. 1A ) . Las pequeas diferencias en la acumulacin de Zn por P. scaber eran
probablemente debido a una menor eficiencia de la eliminacin de Zn del suelo mediante la extraccin con EDTA (
Tabla 1 ) . En contraste con la acumulacin de Zn en P. scaber , Zn movilidad ( TCLP ) , fitodisponibilidad ( DTPA ) y la
disponibilidad oral ( PBET ) disminuy significativamente con el tratamiento del suelo de EDTA ms estrictas ( Tabla 3
) .

Como se muestra en la figura . 1B, no hubo aparentes decrecientes o crecientes tendencias y diferencias significativas
( P < 0,05 ) entre los factores de bioacumulacin ( BAF derivados ) para Pb , Zn y Cd en los suelos tratados con
concentraciones crecientes de EDTA . Esto indica una relacin constante entre no biodisponible y biodisponible ( a
ispodos ) concentraciones de Pb , Zn y Cd en suelos contaminados (no remediado ) y reme - mediadas , incluso en los
suelos ms EDTA procesados. Contrariamente a indicaciones dadas por pruebas de extraccin qumica (Tabla 3 ) ,
tratamiento con EDTA no elimin preferentemente fracciones de Pb , Zn y Cd.
Tabla 3
Pb, Zn y Cd movilidad (evaluada con el Procedimiento de Lixiviacin Caracterstico de Toxicidad, TCLP), la accesibilidad
para las plantas (cido dietilentriaminopentaactico (DTPA) de extraccin) y oral biodisponibilidad (Prueba de extraccin
Fisiolgicamente Based, PBET) en el suelo antes y despus de la rehabilitacin con lixiviacin con diferentes
concentraciones de EDTA. Los resultados se presentan como medias de tres repeticiones SD. LDC, por debajo del lmite
de cuantificacin.







La figura. 1. Pb, Zn y las concentraciones de Cd en Porcellio scaber (A) y los respectivos factores de bioacumulacin,
los FBA (B). P. scaber fueron alimentados durante 14 das con suelos no remediadas y remediadas. Caja y bigote
parcelas representan mnimo, primero cuartil, valor medio (-), la mediana (n = 3), 3 cuartil y valores mximos de
acumulado Pb, Zn y las concentraciones de Cd en todo el cuerpo de los animales. Los asteriscos (*) indican los valores
atpicos. Datos seguidos por la misma letra no son significativamente diferentes, segn la prueba de Duncan (P <0,05).
Considerado biodisponible para ispodos . Si fracciones biodisponibles haban sido preferente o eliminado por completo
, los FBA seran mayores en no remediada que en los suelos tratados con EDTA .Los resultados presentados en la figura .
1A implica una correlacin lineal entre Pb y la acumulacin de Cd en P. scaber y la concentracin total de metal en el
suelo no remediado y tratada con EDTA ( esta correlacin se presenta explcitamente en . Fig. 3 ) . Concentraciones de
plomo , Zn y Cd en P. scaber y en la fraccin extrable de agua no se correlacion linealmente ( R2 fueron < 0.1 , los datos
no se muestran ) . Sin embargo , la proporcin de metales en esta fraccin fue mucho menor que en otras fracciones del
suelo (Tabla 2) . Correlaciones lineales aparentes con R2> 0.5 existan entre las concentraciones de Pb en P. scaber y Pb
unido a carbonato , xido , orgnica y fracciones residuales de suelo (Fig. 2 ) . La acumulacin de cadmio en P. scaber y
Cd obligado a canjeables , carbonato , xido y las fracciones de materia orgnica del suelo tambin se correlacionaron
con R2 > 0.5 ( fig. 2 ) . correlaciones lineales entre Zn bioacumulado en P. scaber y Zn obligado a fracciones especficas
del suelo (Fig. 2 ) , as como la concentracin total de Zn ( fig. 3 ) , fue menos evidente, que para Pb y Cd ( Zn para R2
eran < 0,4 ) .En general , nuestros datos indican que la absorcin de metales ( especialmente de Pb y Cd ) por ispodos
se correlaciona linealmente con la concentracin total de metal y tambin con concentraciones de metales en fracciones
especficas del suelo en suelos no remediadas y remediadas ( Figs. 2 y 3 ) .P. scaber es probablemente capaz de adquirir
metales de varias fracciones de suelo, no slo el soluble en agua como se esperaba .Varias pruebas basadas en
extracciones qumicas se utilizan hoy en da para evaluar la movilidad y la biodisponibilidad de los metales pesados en el
suelo , como parte de un procedimiento de evaluacin de riesgo o como herramientas para medir la eficiencia de la
recuperacin del suelo . En la figura . 3 , se correlacion las concentraciones de metales acumulados en P. scaber con las
concentraciones de metales mviles (evaluado usando TCLP) , metales phytoavailable (evaluado por extraccin DTPA) , y
metales biodisponible por va oral de estmago y fases intestinales (evaluada con el PBET ) . Correlaciones lineales
significativas, particularmente para Pb y Cd , indican que el grupo de metales disponibles disminuy con la remediacin
(concentracin de EDTA) intensidad, segn la evaluacin , tanto por la acumulacin en P. scaber y por extracciones
qumicas ( en el intestino delgado fase , la concentraciones de Cd fueron inferiores a LOQ , Tabla 3 ) . Sin embargo, los
valores de interseccin positiva (extrapolacin de concentracin de metales en P. scaber a la concentracin nula de
metales extrados qumicamente , dada por y ( 0 ) los valores de . Figura 3 ) indican que los metales que de otro modo no
est disponible para las extracciones qumicas estaban disponibles y se acumularon por P. scaber . Para obtener una
imagen ms relevante de la disponibilidad de metales en el suelo antes y despus de la rehabilitacin , por lo tanto , las
extracciones qumicas deben ser complementados por la acumulacin in vivo.
La figura. 2. Concentraciones de Cd en Porcellio scaber despus de dos semanas de exposicin, en funcin de los
metales presentes en las diferentes fracciones del suelo Pb, Zn y determinaron utilizando seis pasos secuenciales
extraccin (a excepcin de los metales en la primera - la fraccin de la solucin del suelo). Regresiones lineales se
trazan y respectiva R2 dados. Las barras de error representan la desviacin estndar del valor medio (n = 3).



La figura. 3. Concentraciones de Cd en Porcellio scaber despus de dos semanas de exposicin, en funcin de la
concentracin total de metales en suelos (extraccin de agua regia), metales phytoavailable (Diethylenetriamine
extraccin de cido pentaactico), metales lixiviables (caracterstica de toxicidad extraccin Procedimiento de
lixiviacin) Pb, Zn y, metales oral biodisponible en el estmago simulado y solucin intestino (ensayo de extraccin
Fisiolgicamente Based). Regresiones lineales se trazan y respectiva R2 y valores de interseccin y (0) se dan. Las
barras de error representan la desviacin estndar del valor medio (n = 3).
4 . Conclusiones
La eficiencia de la remediacin de suelos contaminados se evala habitualmente mediante la determinacin de la
fraccin de metal biodisponible por extracciones qumica selectiva. Sin embargo , la extraccin qumica del suelo no
puede comprender plenamente la fraccin biodisponible , debido a la naturaleza dinmica y compleja de las
interacciones metal del suelo y metal - organismo.
Pruebas de extraccin qumica han demostrado que la lixiviacin del suelo contaminado con EDTA redujo con xito la
movilidad metal, fitodisponibilidad y oral biodisponibilidad.
Cuando se expone a suelo no remediado y remediado , P. scaber acumula Pb y Cd en una manera dependiente de la
concentracin de diferentes fracciones del suelo . Contrariamente a lo esperado , se observ los FBA casi constantes en
el suelo remediado si se compara con el suelo antes del tratamiento. Cuando la fraccin biodisponible se evala
nicamente sobre la base de los resultados de las pruebas de extraccin qumica , sera de esperar cantidades mucho
ms bajas de metales biodisponibles que las indicadas por los FBA .
En base a nuestros resultados , concluimos que los resultados combinados de las extracciones qumicas y el ensayo de
acumulacin con P. scaber proporcionan una imagen ms completa y relevante del despojo disponibilidad de los
metales despus de la recuperacin del suelo . Nosotros sugerimos que los ensayos de bioacumulacin con ispodos P.
scaber podran ser utilizados como un suplemento a extracciones qumicas en la evaluacin de la eficiencia de la
recuperacin y la fraccin de metal biodisponible a la fauna del suelo .
Resumen
La lixiviacin usando EDTA aplicado a un suelo de Pb , Zn y Cd contaminado concentraciones de metales del suelo reduce
significativamente y la piscina de metales en fracciones de suelo lbiles . La movilidad de metales ( Toxicidad
Procedimiento de Lixiviacin Caracterstico ) , fitodisponibilidad ( extraccin con cido dietilentriaminopentaactico ) y
capacidad oral biodisponibilidad humana ( Fisiolgicamente prueba basada en la extraccin ) se redujeron en un 85-92 %
, 68-91 % y 88-95 % , respectivamente . La capacidad de acumulacin de metal de la scaber Porcellio ispodo terrestre (
crustceos ) se utiliz como ensayo in vivo de la biodisponibilidad de metal , antes y despus de la recuperacin del
suelo . Despus de la alimentacin en el metal contaminado el suelo durante dos semanas , P. scaber acumula Pb , Zn y
Cd en una manera dependiente de la concentracin . Las cantidades de metales acumulados fueron , sin embargo ,
mayor de lo esperado sobre la base de la extraccin de pruebas (in vitro) . Los resultados combinados de extracciones
qumicas y la prueba in vivo con P. scaber proporcionan una imagen ms relevante del despojo disponibilidad de los
metales despus de la recuperacin del suelo .
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