INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE

CURSO DE FARMCIA
ROTEIRO PARA AULAS PRTICAS
DISCIPLINA:
IMUNOLOGIA CLNICA
Instituto de Cincias da Sade
Curso: FARMCIA
Disci!ina: I"uno!o#ia C!$nica
Titu!o da Au!a: %isua!i&a'(o de C)!u!as
San#u$neas
AU*A
+
O,-ETI%O: Proporcionar a identificao os elementos figurados do sangue e diferenciao
das principais clulas de defesa do sistema imune presentes na circulao sangunea! "a#er
correlao da morfologia com a funo destas clulas!
.ROCEDIMENTO:
$ Os microsc%pios de&em estar em superfcies isentas de &i'ra(es!
$ No trocar os microsc%pios de lugar!
$ Colocar a o')eti&a de menor aumento na direo da lu# atra&s de mo&imento do re&%l&er!
$ Colocar a l*mina +com lamnula para cima, na platina- encai.ando$a no /c0arriot1!
$ 2ncostar o condensador na l*mina e ligar a lu#!
$ Atra&s do mo&imento do parafuso macromtrico at focali#ar o esfregao sanguneo em
imagem ntida!
$ Aperfeioar o foco com o parafuso micromtrico e o'ser&ar a imagem e elementos figurados
3ue podem ser detectados neste aumento!
$ 4epetir o processo utili#ando as outras o')eti&as at a o')eti&a de 567- porm nesta no
utili#ar mais o parafuso macromtrico para foco e sim o parafuso micromtrico!
$ A)ustar a iluminao!
$ Nesta o')eti&a )8 poss&el diferenciar gl%'ulos &ermel0os- pla3uetas e gl%'ulos 'rancos e
tam'm o'ser&ar os diferentes tipos de leuc%citos pela l*mina!
$ Na o')eti&a de 9667- adicionar pre&iamente uma gota do %leo de imerso na l*mina +a)ustar
iluminao e o foco com parafuso micromtrico,!
$ Neste aumento- identificar as diferenas morfol%gicas entre neutr%filos- linf%citos- mon%citos-
eosin%filos e- se encontrado- 'as%filos! No poss&el &erificar diferenas morfol%gicas entre o
linf%cito :- linf%cito ; e clulas N< apesar de possurem fun(es 'astante distintas na resposta
imune!
*i"e&a do Microsc/io:
Ao finali#ar a an8lise- limpar as lentes do microsc%pio- iniciando da lente de menor
aumento para finali#ar com a de maior aumento- e&itando assim 3ue as o')eti&as de
menor aumento fi3uem su)as com o %leo de imerso utili#ado na o')eti&a de 9667!
MATERIAIS 0UANTIDADE
L*minas para leitura
=leo de imerso
E0UI.AMENTOS 0UANTIDADE
Microsc/io

Descarte do "ateria! uti!i&ado con1or"e Nor"as Internacionais de Se#uran'a
Instituto de Cincias da Sade
Curso: FARMCIA
Disci!ina: I"uno!o#ia C!$nica
Titu!o da Au!a: A#!utina'(o
AU*A
2
O,-ETI%O: mostrar ao aluno- rea(es de formao do comple.o antgeno$anticorpo /in &itro1
A#!utina'(o .assi3a: Deter"ina'(o de .rote$na C4Reati3a
Fina!idade> :este de aglutinao passi&a para deteco da Protena C$4eati&a no soro
0umano! A Protena C$4eati&a +PC4, em altas concentra(es est8 associada ? infec(es
agudas- situa(es necr%ticas e a uma &ariedade de estados inflamat%rios! A monitori#ao dos
n&eis de PC4 nos permite a&aliar a efic8cia do tratamento e a recuperao do paciente!
.rinc$io> As partculas de l8te. so sensi'ili#adas com anticorpos 0umanos anti$PC4!
@uando se mistura a suspenso de l8te. contendo ele&ados n&eis de PC4- ir8 produ#ir$se
uma aglutinao ntida em um perodo m8.imo de A minutos!
.rocedi"ento: Teste 0ua!itati3o
9, 2m cada crculo da placa colocar>
Crculo
nBmero 9
Crculo
nBmero A
Crculo
nBmero C
Crculo
nBmero 5
Controle Negati&o D6l $ $ $
Controle Positi&o $ D6l $ $
Amostra nBmero 9 $ $ D6l $
55*6te7 FR 9 gota 9 gota 9 gota 9 gota
A, Misturar com au.lio de esp8tula utili#ando toda a e.tenso de cada crculo da l*mina!
C, Agitar a l*mina com mo&imentos circulares por dois minutos!
5, O'ser&ar os resultados!
REA89O .OSITI%A> Ntida aglutinao!
REA89O NE:ATI%A> AusEncia de aglutinao +suspenso 0omogEnea,!
2; A#!utina'(o .assi3a: Deter"ina'(o de Fator Reu"at/ide
Fina!idade> :este de aglutinao passi&a para o diagn%stico de fator reumat%ide +"4,!
.rinc$io> Partculas de l8te. sensi'ili#adas com IgG! A aglutinao &is&el em amostra com
concentrao de "4 igual ou superior a F UIGml- de acordo com as referEncias esta'elecidas!
2.erccios propostos +no o'rigat%rio,
9, Nos testes de 0amaglutinao para :o.oplasmose e doena de C0agas- pede$se>
a, @ual suporte foi empregadoH
', 4eali#ou$se a pes3uisa de anticorpos! @ue tipo de antgeno foi empregadoH

c, @uais cuidados de&em ser o'ser&ados na reali#ao do testeH
d, @ual tipo de resposta imunol%gica foi ati&adaH 2.pli3ue!
e, Iupon0amos 3ue ten0a se detectado na pes3uisa da paciente a presena de IgM +IgMJ $ ou
reagente,- o 3ue significaH @ual a rele&*ncia da positi&idade de uma IgM em uma gestanteH
f, @ual o &alor da pes3uisa de IgG para a Koena de C0agasH 2.pli3ue!
MATERIAIS 0UANTIDADE
Kescarte com 0ipoclorito
Placa de fundo escuro +acompan0a o Lit,
Palito para 0omogenei#ar os reagentes +acompan0a o Lit,
Pipeta autom8tica de Dl $A6l
Ponteiras amarelas +menor &olume,
E0UI.AMENTOS 0UANTIDADE
Descarte do "ateria! uti!i&ado con1or"e Nor"as Internacionais de Se#uran'a
Instituto de Cincias da Sade
Curso: FARMCIA
Disci!ina: I"uno!o#ia C!$nica
Titu!o da Au!a: A#!utina'(o 4 <e"a#!utina'(o
AU*A
=
<e"a#!utina'(o .assi3a ara Doen'a de C>a#as
Fina!idade> :este de 0emaglutinao passi&a para o diagn%stico sorol%gico da doena de
C0agas!
.rinc$io> Mem8cias de a&es esta'ili#adas e sensi'ili#adas com antgenos totais de
Trypanosoma cruzi +antgenos solB&eis,- so aglutinadas 3uando colocadas em contato com
dilui(es de soros de pacientes c0ag8sicos!
.rocedi"ento: Teste 0uantitati3o
a, 2m tu'o de ensaio- diluir a amostra a 9G56 a ensaiar e os soros controle positi&o +4C, e
negati&o +45,- adicionando> 96l de amostra J 6-5ml de diluente +4AA,!
', Adicionar na microplaca a partir da A ca&idade D6l de diluente +4AA,!
c, :ransferir D6l da amostra diluda para a 9 ca&idade!
d, :ransferir D6l da amostra diluda a A ca&idade e 0omogenei#ar e transferir D6l para
a C ca&idade- 0omogenei#ar e transferir D6l para a 5 ca&idade e assim
sucessi&amente at a F ca&idade- em 3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l sero
despre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!
e, Controle positi&o> seguir o mesmo es3uema de diluio +ite" d,- at a N ca&idade- em
3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l sero despre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!
f, Controle negati&o> adicionar D6l do controle diludo nas O e F ca&idades!
g, Momogenei#ar 'em a suspenso de 0em8cias +49,- por agitao delicada do frasco e
adicionar AD l a cada ca&idade!
0, ;ater le&emente nas laterais da placa para 0omogenei#ao dos reagentes!
i, Kei.ar a placa em repouso por 9 0ora- a temperatura am'iente- em local isento de
&i'ra(es!
), 2fetuar leitura ao final da incu'ao!
Resu!tado:
O ttulo ser8 a maior diluio 3ue ainda fornecer um resultado positi&o! Para &alidar o teste
de&e$se encontrar nas mesmas condi(es de leitura- o ttulo do soro positi&o +4C, indicado na
eti3ueta 9 diluio!
REA89O .OSITI%A> Pu uniforme de 0em8cias reco'rindo toda a ca&idade- podendo estar ?s
&e#es parcialmente retrado nas 'ordas!
REA89O FRACAMENTE .OSITI%A> Pu pouco ntido- apresentando pe3ueno dep%sito de
0em8cias no fundo da ca&idade!
REA89O NE:ATI%A> ;oto compacto de 0em8cias no fundo da ca&idade!

Es@ue"a
:era!
Ca&idade da placa 9 A C 5 D N O F
Kiluente +4AA, l $ D6 D6 D6 D6 D6 D6 D6
Amostra diluda a
9G56 +l,
D6 D6
:ransferir D6l Q Q Q Q Q Q Q
despre#ar
Mem8cias +49, l AD AD AD AD AD AD AD AD
:tulo do Ioro 56 F6 9N6 CA6 N56 9AF6 ADN6 D9A6
Interreta'(o dos Resu!tados:
T$tu!o do soro "enor @ue +ABC> soro no reagente R indi&duo no parasitado!
T$tu!o do soro "aior ou i#ua! a +ABC> soro reagente R indi&duo com suspeita da parasitose!
<e"a#!utina'(o .assi3a ara To7o!as"ose
Fina!idade> :este de 0emaglutinao passi&a para o diagn%stico sorol%gico da to.oplasmose!
.rinc$io> Mem8cias de a&es esta'ili#adas e sensi'ili#adas com antgenos totais de
Toxoplasma gondii +antgenos solB&eis,- so aglutinadas 3uando colocadas em contato com
dilui(es de soros com anticorpos especficos!
.rocedi"ento: Teste 0uantitati3o
a, 2m tu'o de ensaio- diluir a amostra a 9G9N a ensaiar e os soros controle positi&o e
negati&o- adicionando> ADl de amostra J 6-5ml de diluente!
', Adicionar na microplaca a partir da A ca&idade D6l de diluente!
c, :ransferir D6l da amostra diluda para a 9 ca&idade!
d, :ransferir D6l da amostra diluda a A ca&idade e 0omogenei#ar e transferir D6l para
a C ca&idade- 0omogenei#ar e transferir D6l para a 5 ca&idade e assim
sucessi&amente at a F ca&idade- em 3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l sero
despre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!
e, Controle positi&o> seguir o mesmo es3uema de diluio +ite" d,- at a N ca&idade- em
3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l sero despre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!
f, Controle negati&o> adicionar D6l do controle diludo nas O e F ca&idades!
g, Momogenei#ar 'em a suspenso de 0em8cias- por agitao delicada do frasco e
adicionar AD l a cada ca&idade!
0, ;ater le&emente nas laterais da placa para 0omogenei#ao dos reagentes!
i, Kei.ar a placa em repouso por 9 0ora- a temperatura am'iente- em local isento de
&i'ra(es!
), 2fetuar leitura ao final da incu'ao!
Resu!tado:
O ttulo ser8 a maior diluio 3ue ainda fornecer um resultado positi&o! Para &alidar o teste
de&e$se encontrar nas mesmas condi(es de leitura- o ttulo do soro positi&o indicado na
eti3ueta 9 diluio!
REA89O .OSITI%A> Pu uniforme de 0em8cias reco'rindo toda a ca&idade- podendo estar ?s
&e#es parcialmente retrado nas 'ordas!
REA89O FRACAMENTE .OSITI%A> Pu pouco ntido- apresentando pe3ueno dep%sito de
0em8cias no fundo da ca&idade!
REA89O NE:ATI%A> ;oto compacto de 0em8cias no fundo da ca&idade!
Es@ue"a
:era!
Ca&idade da placa 9 A C 5 D N O F
Kiluente +4A, l $ D6 D6 D6 D6 D6 D6 D6
Amostra diluda a
9G9N +l,
D6 D6
:ransferir D6l Q Q Q Q Q Q Q
despre#ar
Mem8cias +49, l AD AD AD AD AD AD AD AD
:tulo do Ioro 9N CA N5 9AF ADN D9A 96A5 A65F
Interreta'(o dos Resu!tados:
%eri1icar a "67i"a a#!utina'(o
2.erccios propostos +no o'rigat%rio,
I, Nos testes de 0amaglutinao para :o.oplasmose e doena de C0agas e de aglutinao-
pede$se>
a, @ual suporte foi empregado nos testesH 2.pli3ue o princpio do mtodo!
', 4eali#ou$se a pes3uisa de anticorpos! @ue tipo de antgeno foi empregadoH
c, @uais cuidados de&em ser o'ser&ados na reali#ao dos testesH
d, @ual tipo de resposta imunol%gica foi ati&adaH 2.pli3ue!
e, 2.pli3ue o significado clnico para uma gestante com resultado reagente para IgM na
:o.oplasmose!
f, @ual o &alor da pes3uisa de IgG para a Koena de C0agasH 2.pli3ue!
II, Indi3ue o ttulo das amostras +em A e ;,!
Ap%s an8lise do controle positi&o e controle negati&o- )ustifi3ue a &alidao e a li'erao dos
resultados das amostras em cada teste!
Legenda>
CJ S controle positi&o
C$ S controle negati&o
4eao positi&a> &u uniforme de 0am8cias reco'rindo toda a ca&idade!
4eao negati&a> 'oto compacto de 0em8cias no fundo da ca&idade!
:este A> Koena de C0agas :este ;> :o.oplasmose
Kiluio> Amostra Kiluio> Amostra
9>56 CJ 9>9N CJ
9>F6 CJ 9>CA CJ
9>9N6 CJ 9>N5 CJ
9>CA6 CJ 9>9AF CJ
9>N56 CJ 9>ADN CJ
9>9AF6 CJ 9>D9A CJ
9>ADN6 C$ 9>96A5 C$
9>D9A6 C$ 9>A65F C$
MATERIAIS 0UANTIDADE
Kescarte com 0ipoclorito
Pipeta autom8tica de ADl- D6l
E0UI.AMENTOS 0UANTIDADE
Descarte do "ateria! uti!i&ado con1or"e Nor"as Internacionais de Se#uran'a

Instituto de Cincias da Sade
Curso: FARMCIA
Disci!ina: I"uno!o#ia C!$nica
Titu!o da Au!a: En&i"6tico 4 E*ISA
AU*A
B
O,-ETI%O: Mostrar ao aluno- rea(es de formao do comple.o antgeno$anticorpo /in &itro1
com o emprego de um teste en#im8tico aplicado na pr8tica de diagn%stico e de triagem!
.rinc$io
A amostra diluda no suporte no 3ual se encontra o antgeno imo'ili#ado! Ie a mesma
conti&er os anticorpos especficos- estes formaro um comple.o com os antgenos e
permanecero unidos! A frao no unida eliminada por la&agem! Adicionar os anticorpos
anti$imunoglo'ulina 0umana marcados pela en#ima +con)ugado,! Ie ocorrer a reao na
primeira etapa do processo- o con)ugado se unir8 ao anticorpo da amostra! Ap%s uma no&a
la&agem- se adiciona o su'strato cromogEnico! Nos casos onde o con)ugado ti&er se unido-
0a&er8 surgimento de colorao celeste! A reao se detm com 8cido sulfBrico- com o 3ue a
colorao a#ul celeste torna$se amarela!
.rocedi"ento
9! 2sta'elecer o plano de distri'uio e identificao das amostras e dos controles!
A! Pipetar A66Tl do diluente J 96Tl dos controles positi&o- negati&o e amostra! "a#er um
controle 'ranco no 3ual ser8 adicionado somente A66Tl do diluente!
C! ;ater le&emente nas laterais da placa!
4. Incu'ar por C6 minutos a COC !
D! Kespre#ar o l3uido de cada poo e la&ar D &e#es com tampo de la&agem!
N! Kistri'uir D6Tl do con)ugado anti$Ig 0umano pero.idase!
7. Incu'ar por C6 minutos a COC!
F! La&ar como no item D!
U! Kistri'uir D6Tl do 4e&elador A J D6Tl do 4e&elador ;! +uma gota de cada e cada um dos
poos,!
10. Incu'ar por C6 minutos a COC!
99! Kistri'uir D6Tl do /stoper1 em cada poo!
L2I:U4A> Proceder ? leitura da reao em espectrofotVmetro para microplacas utili#ando filtro
5D6m!
2.erccio proposto +no o'rigat%rio,
Para as tcnicas imunoen#im8ticas- responda>
a, 2.pli3ue o princpio do teste imunoen#im8tico!
', 2s3uemati#e um teste 2LIIA para a pes3uisa de anticorpos!
c, 2.pli3ue como em um teste 2LIIA pode$se determinar a fase da doena-
contra 3ual doena o anticorpo encontrado na amostra!
d, O 3ue o con)ugado empregado no teste 2LIIA para a pes3uisa de
anticorposH 2.pli3ue!
e, @ual o princpio do teste de Western blotting WBH 2.pli3ue!
f, Por3ue de&emos reali#ar as etapas de la&agemH @ual o o')eti&oH
g, Kiferencie o su'strato cromogEnico do teste 2LIIA e W;!

MATERIAIS 0UANTIDADE
Kescarte com 0ipoclorito
Pipeta autom8tica de Dl - ADl- D6l- 966l- D66l
Pro&eta D6mL +para diluir tampo de la&agem,
;alo &olumtrico A66mL +para diluir tampo de la&agem,
Ponteiras amarelas +&olume at A66l,
Ponteiras a#uis +&olume at 9666l,
;3uer de A66mL +para soluo de la&agem,
Pipeta Pasteur de pl8stico ou &idro +para la&agem,
E0UI.AMENTOS 0UANTIDADE
Leitora de placas +2LIIA,
Descarte do "ateria! uti!i&ado con1or"e Nor"as Internacionais de Se#uran'a:
Antes de descartar as placas usadas autocla&ar!