Análise Dos Parâmetros Eletrofisiológicos Do Nervo Ciático e Ganglio Da Raiz Dorsal Decorrentes de Um Período de Imobilização Da Pata Traseira Direita de Ratos Diabéticos

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEAR
JAMILLE SOARES MOREIRA ALVES

ANLISE DOS PARMETROS
ELETROFISIOLGICOS DO NERVO CITICO E
GNGLIO DA RAIZ DORSAL DECORRENTES DE UM
PERODO DE IMOBILIZAO DA PATA TRASEIRA
DIREITA DE RATOS DIABTICOS

FORTALEZA-CEAR
2010


ANLISE DOS PARMETROS
ELETROFISIOLGICOS DO NERVO CITICO E
GNGLIO DA RAIZ DORSAL DECORRENTES DE UM
PERODO DE IMOBILIZAO DA PATA TRASEIRA
DIREITA DE RATOS DIABTICOS

Dissertao apresentada ao Curso de
Mestrado Acadmico em Cincias
Fisiolgicas do Centro de Cincias da
Sade da Universidade Estadual do
Cear, como requisito parcial para
obteno do grau de Mestre em Cincias
Fisiolgicas.
rea de Concentrao: Fisiologia.
Orientadora: Prof. Dr. Roseli Barbosa

FORTALEZA-CEAR
2010

A474a Alves, Jamille Soares Moreira.
Anlise dos parmetros eletrofisiolgicos do nervo
citico e gnglio da raiz dorsal decorrentes de um perodo
de imobilizao da pata traseira direita de ratos diabticos /
Jamille Soares Moreira Alves. Fortaleza, 2010.
105p.;il.
Orientador: Prof.
a
Dr.
a
Roseli Barbosa.
Dissertao (Mestrado Acadmico em Cincias
Fisiolgicas) Universidade Estadual do Cear, Centro de
Cincias da Sade.
1. Imobilizao. 2. Diabetes. 3. Nervo Citico. 4.
Gnglio Raiz Dorsal. 5. Potencial de Ao Composto. I.
Universidade Estadual do Cear, Centro de Cincias da
Sade.
CDD: 574.1

ANLISE DOS PARMETROS ELETROFISIOLGICOS DO NERVO CITICO E
GNGLIO DA RAIZ DORSAL DECORRENTES DE UM PERODO DE
IMOBILIZAO DA PATA TRASEIRA DIREITA DE RATOS DIABTICOS

Dissertao apresentada ao Curso de
Mestrado Acadmico em Cincias
Fisiolgicas do Centro de Cincias da
Sade da Universidade Estadual do
Cear, como requisito parcial para
obteno do grau de Mestre em Cincias
Fisiolgicas.
.

Aprovada em 15/05/2010

BANCA EXAMINADORA

____________________________________________

Prof. Dra. Roseli Barbosa (Orientadora)
Universidade Estadual do Cear -UECE

____________________________________________

Prof. Dr. Jos Henrique Leal Cardoso
Universidade Estadual do Cear - UECE

___________________________________________

Prof. Dr. Jos Cipolla Neto
Universidade de So Paulo - USP

AGRADECIMENTOS

A Deus, pela fora e amparo nos momentos mais difceis desta caminhada.
A minha me Maria, pelo exemplo de determinao, coragem e luta por seus
objetivos, pelo apoio e compreenso nos momentos em que estive ausente para
dedicar-me a este trabalho.
A minha irm Jssica, pelo carinho e companheirismo.
Ao Jos Carlos, pelo apoio nos momentos de dificuldade, incentivo em todas as
minhas vitrias e por me fazer acreditar que tudo daria certo.
A minha orientadora Roseli Barbosa, por me aceitar como orientanda e pelos
ensinamentos compartilhados durante o desenvolvimento deste trabalho.
A todos os membros da minha banca, que aceitaram esse convite, para
acrescentarem neste trabalho.
A professora Vnia Ceccatto, por ter aberto o seu laboratrio para nicio da
pesquisa.
Aos meus colegas Fleury, Patrick, Liza, Andr, Alex, Elenir, Haward, Flvio, Kerly,
Humberto, Emmanuely, Tiago, Matheus pela amizade e contribuio cientfica.
A todos os membros dos Laboratrios de Eletrofisiologia e de Bioqumica e Cultura
de Clulas que contriburam, direta ou indiretamente, para este trabalho.
Aos professores do curso de mestrado, por seus ensinamentos e contribuies
cientficas.
Ao Pedro Milito e Franck pelos ensinamentos de laboratrio e biotrio.
A Ecila Maria e Maria Lindalva por todo apoio.
A todos que de certa forma, fizeram-se presente e contriburam para a concretizao
de mais um passo neste longo trajeto.

Sem sonhos, as perdas se tornam insuportveis,
as pedras do caminho se tornam montanhas,
os fracassos se transformam em golpes fatais.
Mas, se voc tiver grandes sonhos...
seus erros produziro crescimento,
seus desafios produziro oportunidades,
seus medos produziro coragem.
(Augusto Cury)

RESUMO

Diariamente, milhares de pessoas passam por limitaes fsicas provisrias
decorrentes da imobilizao de alguma parte de seu corpo, podendo resultar numa
alterao de sua funo orgnica normal. Entretanto, esta situao poder agravar-
se quando o paciente for diabtico, devido a alteraes metablicas e do sistema
nervoso motor e sensitivo. Neste contexto, o presente estudo tem com objetivo de
caracterizar a interao imobilizao/diabetes experimental, avaliando os
parmetros eletrofisiolgicos do nervo citico (NC) e do gnglio da raiz dorsal
(GRD), os quais podem contribuir para um melhor entendimento da interao
imobilizao/diabetes. Utilizou-se 56 Rattus novergicus (Wistar), machos, com oito
semanas de idade, com massa corprea 200-320 g. Os animais foram distribudos
em quatro grupos experimentais: Controle (n=15), Imobilizado (n=16), Diabtico
(n=11) e Diabtico Imobilizado (n=14), sendo a Diabetes Mellitus induzida com
estreptozotocina 65 mg/kg. Para os grupos imobilizados o membro posterior direito
foi imobilizado por duas semanas com esparadrapo impermevel. O NC e GRD,
ambos direito, foram dissecados e mantidos a temperatura entre 18 a 22C numa
soluo nutridora Locke com pH ajustado para 7,40,1. Para os registros
eletrofisiolgicos do NC, utilizou-se a tcnica extracelular. Obteve-se uma reduo
da 1 componente e um aumento da 2 componente do potencial de ao composto
da fibra do nervo citico para os grupos imobilizados, diabticos e diabticos
imobilizados comparados com o grupo controle. Sugerindo um comprometimento
das fibras motoras decorrentes das alteraes da imobilizao e da diabetes, e um
aumento das fibras sensitivas por alterao da excitabilidade. A reduo da
velocidade de conduo nervosa do NC, possivelmente, deve-se pela degenerao
axonal das fibras mielinizadas de menor dimetro e pelo perodo adaptativo
funcional em reorganizar esta velocidade durante a imobilizao. Para os registros
eletrofisiolgicos do GRD, utilizou-se a tcnica do microeletrodo intracelular (Current
Clamp). Mostrando que a imobilizao juntamente com a diabetes de uma maneira
geral resultou em uma tendncia a aumento da excitabilidade que possivelmente
deva-se a uma diminuio da condutncia ao potssio. Verificou-se tambm um
aumento da resistncia de membrana e diminuio da dV/dT ascendente e dV/dT
descendente. Devido a no alterao do potencial de repouso, sugere-se que a
alterao da excitabilidade se deva principalmente ao bloqueio da corrente M de
potssio.

Palavraschave: Imobilizao, Diabetes, Nervo Citico, Gnglio Raiz Dorsal,
Potencial de Ao Composto.

ABSTRACT

Temporary immobilization of body limbs may result in changes of the normal function
of the immobilized body organ. This situation could be hypothetically dangerous in
diabetic disease which, by itself, tends to derange the muscular and nervous system
function. In this context, this study was developed in order to characterize the effects
of immobilization by itself and of interaction between immobilization and diabetes on
the neural function of peripheral nerves, evaluating the electrophysiological
parameters of the sciatic nerve (SN) and dorsal root ganglion (DRG) cells. Male
wistar rats, eight weeks old, weighing 200-320 g, were used. They were divided into
four groups: Control (n = 15), Immobilized (n = 16), Diabetic (n = 11) and Diabetic
Immobilized (n = 14). For immobilized groups the right hind limb was chosen to
immobilization for two weeks with waterproof tape. The experimental diabetes
mellitus was induced by means of a single intraperitonial administration of
streptozotocin (65 mg / kg) to two months old rats. The SN and GRD of same body
side of the immobilization were dissected and kept at temperature between 18-22 C
in Lockes solution with pH adjusted to 7,40,1. For electrophysiological recordings of
SN, was used the extracellular electrophysiological recording. The data showed a
reduction of the 1st component and an increase of the 2nd component of the
compound action potential of the SN, as compared to controls, in the immobilized
group, diabetic and diabetic immobilized group. Also there were a reduction of nerve
velocity conduction in immobilized groups, diabetics and diabetics immobilized
compared with the control group. In DRG it was used the technique of intracellular
microelectrode (Current Clamp) recording. Intracellular recording showed that
immobilization, diabetes and immobilization+diabetes generally resulted in a
tendency to increase in excitability since a tendency to decrease in threshold current
for action potential firing was observed. There was also an increase in membrane
resistance and a decrease in upward and downward absolute value of maximum dV /
dT. No significant alteration of resting potential was observed. These data suggest
that the this change in excitability was mainly due to alteration in K+ conductance,
possibly predominantly involving a blockade of potassium M current.

Keywords: Immobilization, Diabetes, Sciatic Nerve, Dorsal Root Ganglion,
Compound Action Potential.

SUMRIO

LISTA DE TABELAS.................................................................................. 11
LISTA DE FIGURAS................................................................................... 12
LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS................................................ 14
1 INTRODUO.......................................................................................... 17
1.1 Histrico da Diabetes Mellitus.................................................................
17
1.2 Diabetes Mellitus.......................................................................................
18
1.3 Neuropatia Diabtica................................................................................
22
1.4 Agente Diabetognico..............................................................................
25
1.5 Imobilizao..............................................................................................
26
1.6 Potencial de Ao.....................................................................................
27
1.7 Potencial de Ao Composto..................................................................
29
1.8 Nervo Citico e Gnglio da Raiz Dorsal..................................................
30
2 RELEVNCIA........................................................................................... 34
3 OBJETIVOS............................................................................................... 35
3.1 Objetivo geral............................................................................................
35
3.2 Objetivos especficos...............................................................................
35
4 MATERIAIS E MTODOS..................................................................... 36
4.1 Delineamento Experimental.....................................................................
36
4.1.1 Materiais Biolgicos.................................................................................
36
4.1.2 Grupos Experimentais.............................................................................
36
4.1.3 Induo de Diabetes Experimental..........................................................
37
4.1.4 Tcnica de Imobilizao..........................................................................
38
4.1.5 Sacrifcio dos animais..............................................................................
39
4.1.6 Soluo....................................................................................................
39
4.1.7 Dissecao do nervo citico e montagem do sistema extracelular.........
39
4.1.8 Dissecao do gnglio da raiz dorsal e montagem do sistema
intracelular........................................................................................................ 42
4.1.9 Laboratrios.............................................................................................
44
4.2 Anlise Eletrofisiolgica..........................................................................
45
4.3 Tratamento Estatstico.............................................................................
46
5 RESULTADOS.......................................................................................... 47
5.1 Glicemia.....................................................................................................
47
5.2 Massa corprea.........................................................................................
48
5.3 Ingesto alimentar....................................................................................
49
5.4 Registro Extracelular................................................................................
51
5.4.1 Caracterizao.........................................................................................
51
5.4.2 Traados eletrofisiolgicos das componentes do potencial de ao
composto do nervo citico direito..................................................................... 51
5.4.3 Anlise eletrofisiolgica da amplitude positiva da 1
a
componente do
potencial de ao composto do nervo citico direito........................................ 53
5.4.4 Anlise eletrofisiolgica da amplitude positiva da 2
a
componente do
potencial de ao composto do nervo citico direito........................................ 54
5.4.5 Anlise eletrofisiolgica da amplitude pico-a-pico do potencial de ao
composto do nervo citico direito..................................................................... 55
5.4.6 Anlise eletrofisiolgica da velocidade de conduo da 1
a
componente
do potencial de ao composto do nervo citico direito................................... 56
5.4.7 Anlise eletrofisiolgica da velocidade de conduo da 2
a
componente
do potencial de ao composto do nervo citico direito................................... 58
5.4.8 Anlise eletrofisiolgica da reobase e cronaxia do nervo citico
direito................................................................................................................ 59
5.5 Registro Intracelular.................................................................................
60
5.5.1 Caracterizao e distribuio dos neurnios...........................................
60
5.5.2 Anlise eletrofisiolgica da corrente limiar...............................................
62
5.5.3 Anlise eletrofisiolgica da resistncia de entrada..................................
64
5.5.4 Anlise eletrofisiolgica do potencial de repouso....................................
66
5.5.5 Anlise eletrofisiolgica da amplitude do potencial de ao....................
68
5.5.6 Anlise eletrofisiolgica da inclinao mxima ascendente (dV/dT
asc
)...
70
5.5.7 Anlise eletrofisiolgica da inclinao mxima descendente (dV/dT
desc
)
72
5.5.8 Anlise eletrofisiolgica da durao do potencial de ao......................
74
6 DISCUSSO.............................................................................................. 76
7 CONCLUSO........................................................................................... 84
REFERNCIAS............................................................................................ 85
APNDICES.................................................................................................. 96

LISTA DE TABELAS

Tabela 01 Classificao das fibras nervosas de mamferos.........................
30
Tabela 02 Protocolo experimental de coleta de registros de freqncias do
potencial de ao composto do nervo citico.............................. 41
Tabela 03 Amplitude positiva da 1 componente do potencial de ao
composto, em diferentes frequncias de estimulao no nervo
citico direito de ratos (APNDICE I)........................................... 97
Tabela 04 Amplitude positiva da 2 componente do potencial de ao
composto, em diferentes frequncias de estimulao no nervo
citico direito de ratos (APNDICE II).......................................... 98
Tabela 05 Amplitude pico-a-pico do potencial de ao composto, em
diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito
de ratos (APNDICE III)............................................................... 99
Tabela 06 Velocidade de conduo da 1 componente do potencial de
ao composto, em diferentes frequncias de estimulao no
nervo citico direito de ratos (APNDICE IV).............................. 100
Tabela 07 Velocidade de conduo da 2 componente do potencial de
ao composto, em diferentes frequncias de estimulao no
nervo citico direito de ratos (APNDICE V)............................... 101
Tabela 08 Distribuio dos parmetros eletrofisiolgicos do registro
intracelular dos neurnios sem inflexo (APNDICE VI)............. 102
Tabela 09 Distribuio dos parmetros eletrofisiolgicos do registro
intracelular dos neurnios com inflexo (APNDICE VII)............ 103

LISTA DE FIGURAS

Figura 01 Fotoneuromiografia do GRD........................................................
32
Figura 02 Esquema ilustrativo do setup para registro extracelular do
potencial de ao composto......................................................... 42
Figura 03 Esquema ilustrativo do setup para registro intracelular do
potencial de ao dos neurnios do gnglio da raiz dorsal......... 44
Figura 04 Evoluo da mdia da glicemia nos grupos controle (C),
imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI),
durante seis semanas aps induo da STZ............................... 48
Figura 05 Comparao da mdia da massa corprea dos grupos controle
(C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI),
durante a quarta e sexta semana aps induo da
STZ............................................................................................... 49
Figura 06 Evoluo da ingesto de rao nos grupos controle (C),
imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI),
durante seis semanas aps induo da STZ............................... 50
Figura 07 Traados eletrofisiolgicos representativos do potencial de
ao composto (PAC) do nervo citico direito dos grupos
controle (A), imobilizado.(B), diabtico (C), diabtico
imobilizado (D).............................................................................. 52
Figura 08 Amplitude positiva da 1 componente do PAC, em nervo citico
direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI)............................................................. 53
Figura 09 Amplitude positiva da 2 componente do PAC, em nervo citico
direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI)............................................................. 54
Figura 10 Amplitude pico-a-pico do PAC, em nervo citico direito dos
grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico
imobilizado (DI)............................................................................. 56
Figura 11 Velocidade de conduo da 1 componente do PAC, em nervo
citico direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico
(D) e diabtico imobilizado (DI).................................................... 57
Figura 12 Velocidade de conduo da 2 componente do PAC, em nervo
citico direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico
(D) e diabtico imobilizado (DI).................................................... 58
Figura 13 Reobase em nervo citico direito dos grupos controle (C),
imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI)............ 59
Figura 14 Cronaxia em nervo citico direito dos grupos controle (C),
Figura 15 Traados representativos do potencial de ao nos neurnios
sem inflexo (N
si
)(A) e com inflexo (N
ci
)(B)............................. 61
Figura 16 Corrente limiar avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com
inflexo (B) do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado
(I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI)............................... 63
Figura 17 Resistncia de entrada avaliada nos neurnios sem inflexo (A)
e com inflexo (B) do GRD direito dos grupos controle (C),
Figura 18 Potencial de repouso avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e
com inflexo (B) do GRD direito dos grupos controle (C),
Figura 19 Amplitude do potencial de ao avaliada nos neurnios sem
inflexo (A) e com inflexo (B) do GRD direito dos grupos
controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico
imobilizado (DI)............................................................................. 69
Figura 20 Inclinao mxima ascendente avaliada nos neurnios sem
imobilizado (DI)............................................................................. 71
Figura 21 Inclinao mxima descendente avaliada nos neurnios sem
imobilizado (DI)............................................................................. 73
Figura 22 Durao do potencial de ao avaliada nos neurnios sem
imobilizado (DI)............................................................................. 75

LISTA DE SIGLAS E ABREVIATURAS

A/D Anlogico Digital
ANOVA Anlise de varincia
C Controle
CaCl
2
Cloreto de clcio
C
ci
Neurnios de ratos controle com inflexo na fase de repolarizao do
potencial de ao
CEUA Comit de tica para o uso de Animais
CFMV Conselho Federal de Medicina Veterinria
cm Centmetro
COBEA Colgio Brasileiro de Experimentao Animal
C
si
Neurnios de ratos controle sem inflexo na fase de repolarizao do
potencial de ao
D Diabtico
D
ci
Neurnios de ratos diabticos com inflexo na fase de repolarizao
do potencial de ao
DI Diabtico imobilizado
DI
ci
Neurnios de ratos diabticos imobilizados com inflexo na fase de
repolarizao do potencial de ao
DI
si
Neurnios de ratos diabticos imobilizados sem inflexo na fase de
DM Diabetes mellitus
D
si
Neurnios de ratos diabticos sem inflexo na fase de repolarizao
do potencial de ao
dV/dT
asc
Inclinao mxima do ramo ascendente do potencial de ao
dV/dT
desc
Inclinao mxima do ramo descendente do potencial de ao
g Gramas
GRD Gnglio da Raiz Dorsal
HCl cido Clordrico
Hz Hertz
I Imobilizado
I
ci
Neurnios de ratos imobilizados com inflexo na fase de
I
M
Corrente de potssio M
ISCB Instituto Superior de Cincias Biomdicas
I
si
Neurnios de ratos imobilizados sem inflexo na fase de
K
+
on potssio
KCl Cloreto de potssio
M Molar
m/s Metro por segundo
mg/dl Miligrama por decilitro
mg/kg Miligrama por quilograma
MgCl
2
Cloreto de magnsio
min Minutos
ml Mililitro
ml/min Mililitro por minuto
mm Milimetro
ms Milissegundos
mV Milivolt
M Megaohm
N Nmero de experimentos
nA Nanoampere
Na
+
on sdio
NaCl Cloreto de sdio
NaOH Hidrxido de sdio
NC Nervo Citico
N
ci
Neurnios com inflexo na fase de repolarizao do potencial de
ao
NDs Neuropatias diabticas
N
si
Neurnios sem inflexo na fase de repolarizao do potencial de
ao
PA Potencial de ao
PAC Potencial de ao composto
PAs Potenciais de ao
pH Potencial hidrogeninico
SNC Sistema nervoso central
SNP Sistema nervoso perifrico
STZ Estreptozotocina
TRIS Tris-Hidroximetil-Aminometano
UECE Universidade Estadual do Cear
UFC Universidade Federal do Cear
V/s Volt por segundo
V
m
Potencial de membrana
Alfa
Beta
Gama
Delta
m Micrmetro
s Microsegundo

17
1 INTRODUO

1.1 Histrico da Diabetes Mellitus

Doena conhecida antes da era crist. No papiro de Ebers descoberto no
Egito, correspondente ao sculo XV antes de Cristo, j se descreviam sintomas que
pareciam corresponder diabetes, porm sem nome especfico (ARDUINO, 1980;
LAUN, 1993).
No SCULO II da ERA CRIST, Areteu da Capadcia deu a esta afeco
o nome de diabetes, que em grego significa sifo, referindo-se ao seu sintoma mais
chamativo que a eliminao exagerada de gua pelo rim, expressando que a gua
entrava e saa do organismo do portador sem fixar-se nele (polidipsia e poliria,
caractersticas da doena e por ele avaliadas por esta ordem). Ainda no sculo II,
Galeno, contemporneo de Areteu da Capadcia, tambm se referiu diabetes,
atribuindo-a incapacidade dos rins em reter gua (ARDUINO, 1980; LAUN, 1993).
Em 1670, Thomas Willis fez uma descrio da diabetes, magistral para a
poca, ficando desde ento reconhecida por sua sintomatologia como entidade
clnica. Foi ele quem, referindo-se ao sabor doce da urina, lhe deu o nome de
diabetes mellitus (sabor de mel) (RUBIN; PEYROT, 2002).
Na metade do sculo XIX, o grande clnico francs Bouchardat assinalou
a importncia da obesidade e da vida sedentria na origem da diabetes e traou as
normas para o tratamento diettico, baseando-a na restrio dos glicdios e no baixo
valor calrico da dieta. Os trabalhos clnicos e anatmico-patolgicos adquiriram
grande importncia em fins do sculo XIX, nas mos de Frerichs, Cantani, Naunyn,
Lanceraux (WORLD HEALTH ORGANIZATION, 1999).
Em 1921, dois jovens canadenses, Banting e Chals Best, conseguiram
isolar a insulina e demonstrar seu efeito hipoglicmico. Esta descoberta significou
uma das maiores conquistas mdicas do sculo XX, porque transformou as
expectativas e a vida dos diabticos e ampliou horizontes no campo experimental e
biolgico para o estudo da diabetes e do metabolismo dos glicdios. Posteriormente,
18
o transplante de pncreas passou a ser considerado uma alternativa vivel insulina
para o tratamento da diabetes mellitus do tipo 1 (SKYLER; RAPITS, 1981; KING,
2003).
A importncia de novas alternativas para o tratamento da diabetes
mellitus est se tornando maior pela difcil teraputica e alta mortalidade que
continuam ocorrendo em pacientes com a forma insulino-dependente, tipo 1. A
administrao de insulina, controlando os nveis sangneos de acar, embora
permita ao paciente diabtico sobreviver, no tem prevenido o desenvolvimento de
complicaes microvasculares, em quase metade desses pacientes, resultando em
doena renal, amaurose, cardiopatia, hipertenso, embolia e gangrena
(WAINSBERG; MAGALHES; GONALVES, 1987).
Em 1966, foi realizado o primeiro transplante de pncreas com essa
finalidade no Canad, na universidade de Manitoba (SKYLER; RAPITS, 1981).
Em 2004, realizado primeiro transplante de ilhotas de Langerhans para
curar diabetes do tipo 1, feito pela equipe do Dr. F. G. Eliaschewitz no Hospital
Albert Einstein de So Paulo. Uma linha mais recente de pesquisa na Medicina que
busca fazer o transplante apenas das ilhotas de Langerhans. O procedimento
simples, tem poucas complicaes e exige uma hospitalizao de curta durao. O
grande problema a obteno das clulas, que so originrias de cadveres. So
necessrios em mdia trs doadores para se conseguir um nmero razovel de
clulas (KING, 2003).

1.2 Diabetes Mellitus

De acordo com a Sociedade Brasileira de Diabetes (2002), em seu
Consenso, a Diabetes Mellitus (DM) pode ser definida como uma sndrome de
etiologia mltipla, decorrente da falta de insulina e/ou da incapacidade da insulina de
exercer adequadamente seus efeitos. Caracterizando-se por uma hiperglicemia
19
crnica, frequentemente acompanhada de dislipidemia, hipertenso arterial e
disfuno endotelial.
Segundo World Health Organization (1999), a Diabetes Mellitus inclui um
grupo de doenas metablicas caracterizadas por hiperglicemia, resultante de
defeitos na secreo de insulina e/ou em sua ao. A hiperglicemia se manifesta por
sintomas como poliria, polidipsia, perda de peso, polifagia e viso turva ou por
complicaes agudas que podem levar ao risco de vida: a cetoacidose diabtica e a
sndrome hiperosmolar hiperglicmica no cettica. A hiperglicemia crnica est
associada a dano, disfuno e falncia de vrios rgos, especialmente olhos, rins,
nervos, corao e vasos sangneos.
Em longo prazo, as conseqncias da DM decorrem de alteraes micro
e macrovasculares que levam a disfuno, dano ou falncia de vrios rgos.
Dentre as complicaes crnicas pode-se incluir a nefropatia, com possvel evoluo
para insuficincia renal, a retinopatia, com a possibilidade de cegueira e/ou
neuropatia, com risco de lceras nos ps, amputaes, artropatia de Charcot e
manifestaes de disfunes autonmicas, incluindo disfuno sexual. Portadores
de diabetes apresentam maior propenso doena vascular aterosclertica, como
doena coronariana, doena arterial perifrica e doena vascular cerebral
(SOCIEDADE BRASILEIRA DE DIABETES, 2002).
De acordo com estudos sobre prevalncia em diabetes (WILD et al.,
2004), em 1985 estimava-se a existncia de 30 milhes de adultos com DM no
mundo; crescendo para 135 milhes em 1995, passando a atingir 173 milhes em
2002, projetando-se a 300 milhes no ano de 2030, sendo que cerca de dois teros
desses indivduos com DM vivem nos pases em desenvolvimento, onde a epidemia
tem maior intensidade, com crescente proporo de pessoas afetadas em grupos
etrios mais jovens.
Sartorelli e Franco (2003) demonstraram que um estudo multicntrico de
base populacional, conduzido em 1988 em nove capitais de estados brasileiros,
demonstrou a prevalncia da diabetes e a tolerncia glicose diminuda em
populao urbana, entre 30 e 69 anos de idade, de 7,6 e 7,8% respectivamente.
Os casos de diabetes previamente diagnosticados corresponderam a 54% dos
casos identificados, ou seja, 46% dos casos existentes desconheciam o diagnstico,
que provavelmente seria feito por ocasio de manifestao de alguma complicao
20
crnica da diabetes. No Brasil, as cidades das regies Sul e Sudeste, consideradas
de maior desenvolvimento econmico do pas, apresentam maiores prevalncias de
DM e de tolerncia glicose diminuda. Os principais fatores associados maior
prevalncia da diabetes no Brasil foram a obesidade, o envelhecimento populacional
e a histria familiar da diabetes.
No contexto de sade pblica, os dados abaixo caracterizam a
importncia mdico-econmico-social da diabetes (SOCIEDADE BRASILEIRA DE
DIABETES, 2002):
Diabetes mellitus como o diagnostico primrio de internao hospitalar
aparece como a sexta causa mais freqente e contribui de forma significativa
(30 a 50%), para outras causas como cardiopatia isqumica, insuficincia
cardaca, colecistopatias, doena vascular cerebral e hipertenso arterial;
Pacientes diabticos representam cerca de 30% dos pacientes que se
internam em unidades coronarianas intensivas com dor precordial;
Diabetes a principal causa de amputaes de membros inferiores;
, tambm, a principal causa de cegueira adquirida;
Cerca de 26% dos pacientes que ingressam em programas de dilise so
diabticos.
As principais desordens so a diabete tipo I ou insulino-dependente (uma
condio na qual as clulas beta do pncreas no produzem ou produzem muito
pouco insulina) e a diabete tipo II ou no insulino-dependente (uma condio na qual
existe uma deficincia das clulas beta ou uma resistncia insulina) (DYCK;
GIANNINI, 1996).
O diagnstico correto e precoce da diabetes mellitus e das alteraes da
tolerncia glicose extremamente importante porque permite que sejam adotadas
medidas teraputicas que podem evitar o aparecimento de diabetes nos indivduos
com tolerncia diminuda e retardar o aparecimento das complicaes crnicas nos
pacientes diagnosticados, como a neuropatia diabtica.
Em vrios tecidos no insulino-sensveis, a glicose metabolizada pela
via poliis em sorbitol e frutose, respectivamente pela ao das enzimas aldose
redutase e desidrogenase do sorbitol. Na diabetes mellitus, como resultado da
21
hiperglicemia, a via dos poliis ativada tanto em neurnios como em clulas
endoteliais, o que leva ao acumulo de sorbitol intracelular com diminuio
compensatria de mioinositol. A queda dos nveis de mioinositol associa-se
reduo na sntese e turnover de fosfoinositol. A depleo de mioinositol em
neurnios de ratos diabticos associa-se menor atividade da Na-K-ATPase e
diminuio da velocidade de conduo nervosa, e suplementao de mioinositol na
dieta ou o uso de inibidores da aldose redutase revertem estas alteraes.
Reduo no fluxo sanguneo nervoso, aumento de resistncia vascular e menor
tenso de oxignio em nervos citicos de ratos diabticos tambm tm sido
descritos. (GREENE et al., 1999). Biopsias de nervos surais de humanos
demonstraram alteraes vasculares como espessamento de membrana basal,
edema e proliferao de clulas endoteliais, agregao plaquetria e ocluses de
vasos (DYCK et al., 1986). Esses dados sugerem que, pelo menos em parte, a
perda de fibras mielinizadas caractersticas da diabetes mellitus deve-se a dano
secundrio isquemia e hipxia (DYCK et al., 1986; STEVENS; FELDMAN;
GREENE, 1995; BROWNLEE, 2001).
Uma unificao das hipteses metablica e vascular sugerida. Vrios
autores acreditam que precocemente, no incio da diabetes mellitus, defeitos
metablicos levam ativao da via aldose redutase e sorbitol desidrogenase. O
xido ntrico um radical altamente reativo, mediador de vasodilataao e
neurotransmissor inibitrio, sintetizado pela sintetase do xido ntrico, que
dependente do fosfato de nicotinamida adenina dinucleotdeo (NADPH). O fluxo de
glicose pela via dos poliis diminui a disponibilidade de NADPH, o que limita reaes
dependentes da glutationa e tambm a atividade da sntese do xido ntrico levando
a sua depleo. A depleo do xido ntrico leva a alteraes de fluxo sanguneo do
nervo, o que, por sua vez, diminui a capacidade do nervo em tamponar radicais
livres, alm de esgotar as reservas energticas disponveis. Essa falha energtica
promoveria o incio da neuropatia diabtica. O uso de inibidores da aldose-redutase,
bloqueando a formao de sorbitol e portanto, impedindo a depleo de NADPH,
preveniu o aparecimento de neuropatia diabtica em ratos com diabetes por
estreptozotocina. A associao destes com o inibidor da sintetase do xido ntrico
(L-NAME) permitiu novamente que os animais desenvolvessem neuropatia
diabtica, dados que reforam as teorias de que o fluxo contnuo de glicose atravs
22
da via dos poliis e aumento do estresse oxidativo (FELDMAN, 2003) limitam a
sntese de oxido ntrico por causar depleo de NADPH, e a diminuio de xido
ntrico resulta em vasoconstrio, isquemia e diminuio da velocidade de conduo
nervosa (STEVENS; FELDMAN; GREENE, 1995).

1.3 Neuropatia Diabtica

A freqncia pela qual o sistema nervoso acometido pelo DM foi, sem
dvida, o responsvel pela idia inicial de que o DM era causado por uma doena do
sistema nervoso. Apenas em 1864, foi reconhecido inicialmente que o contrrio
verdadeiro (THOMAS; ELIASSON, 1984). A partir de ento, as caractersticas
clnicas marcantes da neuropatia diabtica foram precisamente delineadas, com
descries de perda dos reflexos tendinosos nos membros inferiores, semelhanas
clnicas com alguns casos de tabes dorsalis, a ocorrncia de dor espontnea,
particularmente noturna, e parestesias. Manifestaes motoras nos membros
inferiores foram tambm documentadas, bem como o envolvimento de nervos
cranianos. A natureza altamente varivel da neuropatia na diabete foi ento
apreciada em 1893 (THOMAS; ELIASSON, 1984) e surgiram classificaes para
padronizar todos os eventos nessa direo.
As Neuropatias Diabticas (NDs) esto entre as complicaes crnicas
mais comuns da DM, afetando mais de 50% dos pacientes. As NDs ocorrem como
conseqncia de todos os tipos de DM. As alteraes neuropticas afetam o sistema
nervoso somtico e o autonmico. Como resultado, as complicaes clnicas das
NDs so extremamente variadas, determinando importante perda da qualidade de
vida dos pacientes (AMERICAN DIABETES ASSOCIATION AND AMERICAN
ACADEMY OF NEUROLOGY, 1992).
As NDs tm sido definidas conforme a conferncia de consenso de San
Antonio: A neuropatia diabtica descreve uma desordem demonstrvel, tanto clinica
como subclinicamente, que ocorre na presena de diabetes mellitus sem outras
23
causas para neuropatia perifrica. As alteraes neuropticas da diabetes incluem
manifestaes no sistema nervoso somtico e /ou no autonmico. As neuropatias
diabticas no podem ser diagnosticadas com base num sintoma, sinal ou teste
nico. Um mnimo de duas anormalidades, entre sinais, sintomas, anormalidades de
conduo nervosa, testes quantitativos de sensibilidade ou testes autonmicos
quantitativos, so necessrias (AMERICAN DIABETES ASSOCIATION, 1988).
O calibre do nervo tem uma significncia funcional, pois ele o principal
determinante da velocidade de conduo nas fibras nervosas mielinizadas
(HOFFMAN et al., 1987).
Segundo Thomas e Eliasson (1984) alteraes no sistema nervoso
perifrico em animais geneticamente diabticos ou com diabete induzida
experimentalmente tm sido amplamente investigadas. Por outro lado, espera-se
que as alteraes encontradas em modelos animais possam reproduzir algumas das
alteraes da neuropatia diabtica humana precoce, levando a um melhor
entendimento sobre o mecanismo da doena (SHARMA; THOMAS, 1974).
Existem, pelo menos, quatro razes para se estudar as alteraes
patolgicas na neuropatia diabtica (DYCK; GIANNINI, 1996):
1) para caracterizar as alteraes patolgicas intersticiais do nervo, que no
podem ser inferidas por estudos clnicos ou eletrofisiolgicos;
2) para inferir mecanismos ou causas;
3) para correlacionar anormalidades morfomtricas com mudanas na
velocidade de conduo nervosa, testes sensoriais quantitativos e testes
quantitativos de anormalidades autonmicas;
4) para correlacionar achados neuropatolgicos com alteraes metablicas.
Na literatura sobre neuropatia diabtica, uma distino entre neuropatia
perifrica e autonmica tem sido feita, sem o reconhecimento de que a palavra
perifrica se refere ao sistema nervoso perifrico e no distribuio da
neuropatia. O sistema nervoso perifrico apresenta ambos os componentes:
somtico e autonmico. Embora o sistema nervoso autonmico seja
tradicionalmente referido como um sistema eferente, para inervao do msculo liso
visceral, interessante incluir as fibras aferentes viscerais que o acompanham.
24
Portanto, a neuropatia autonmica diabtica engloba mltiplos distrbios do sistema
motor, sensorial e das funes reflexas, afetando particularmente os sistemas
cardiovascular, gastrointestinal e urogenital. Em adio, existe ainda o prejuzo dos
mecanismos termoregulatrios sudomotor e vasomotor, da funo pupilar reflexa e
dos mecanismos do controle endcrino. No de interesse a classificao ou
separao das caractersticas clnicas em simpticas e/ou parassimpticas uma
vez que ambos os sistemas so envolvidos simultaneamente, apresentando leses
morfolgicas semelhantes (SATO et at., 2006).
Embora estudos morfolgicos tenham sido realizados em vrios nervos
perifricos de ratos diabticos induzidos com STZ, tais como sural (SHARMA;
THOMAS, 1974; SHARMA et al., 1985; SUGIMURA et al., 1980) fibular
(JAKOBSEN, 1979) e tibial (SHARMA; THOMAS, 1974; BROWN et al., 1980;
SHARMA; BAJADA; THOMAS et al., 1981), informaes sobre alteraes
patolgicas em nervos autonmicos so limitadas. A neuropatia diabtica acomete
tanto o sistema nervoso somtico (principalmente nervos sensitivos) como o sistema
nervoso autonmico tanto em humanos como em modelos experimentais. Do ponto
de vista de morbi-mortalidade da diabete, a neuropatia autonmica tem um papel
muito importante, principalmente quando compromete o controle autonmico
cardiovascular. Por algum tempo acreditou-se que a parte parassimptica do
sistema nervoso autonmico estava mais afetada pela diabete (MCDOWELL et al.,
1994; TOMILSON et al., 1992), no s em pacientes (ECKBERG et al., 1986;
LISHNER et al., 1987), mas tambm em modelos experimentais (CHANG; LUND,
1986; MAEDA et al., 1995a,b). Entretanto, h evidncias consistentes que a parte
simptica tambm bastante afetada na neuropatia autonmica diabtica (KAUL,
1999; STUMPEL et al., 1996).

25
1.4 Agente Diabetognico

Vrios agentes qumicos so citotxicos para as clulas beta do
pncreas, porm a estreptozotocina (STZ) tem sido sistematicamente investigada e
amplamente empregada para induzir diabete nos animais.
A estreptozotocina (STZ), isolada do Streptomyces achromogene, efetiva
contra organismos gram-positivos e gram-negativos e ao anti-tumoral descrita por
Evans et al., 1965 tem sido de grande interesse devido mimetizao da leso
pancretica decorrente da destruio das clulas beta, que ocorre na diabetes
mellitus insulino-dependente dos humanos, e por causar um diabete relativamente
permanente, til para estudos eletrofisiolgicos e morfolgicos longitudinais de
nervos perifricos na diabete experimental.
Os mecanismos de ao da STZ no so ainda completamente
compreendidos (MORDES; ROSSINI, 1981; MALAISSE, 1982), porm algumas
caractersticas gerais podem ser aferidas. O local de sua ao diabetognica a
clula beta do pncreas, sendo a ligao dessas substncias muito rpida. A STZ
pode ser seletivamente direcionada para as clulas produtoras de insulina devido
especial capacidade dessas clulas em reconhecer e metabolizar glicose
rapidamente. Estruturalmente, a STZ uma glicose com uma cadeia lateral
altamente reativa. Evidncias de danos pela STZ aparecem entre 30 minutos e 2
horas (SHARMA; THOMAS, 1999).
As alteraes metablicas que seguem a administrao da STZ foram
comparadas por Mansford e Opie (1968) que relataram que os animais injetados
com STZ, apesar de apresentarem pronunciada hiperglicemia, apresentam nveis
normais de corpos cetnicos sangneo, cidos graxos livres plasmticos e nveis
normais de intermedirios glicolticos, glicognio e citrato no corao perfundido.
Junod et al.(1969) estenderam e confirmaram essas observaes e tambm
demonstraram que a cetonria s aparece aps a injeo de uma alta dose de STZ.
A dose diabetognica efetiva da STZ normalmente 4 ou 5 vezes menor
que a dose letal. Entretanto, as doses efetivas ou letais da STZ variam
consideravelmente entre as espcies e so altamente sensveis idade, sexo e
26
estado nutricional dos animais (GOLD et al., 1981). Uma injeo nica,
intraperitoneal ou intravenosa de STZ, preferencialmente com os animais em jejum,
induz diabete experimental em ratos que pode ser mantido sem tratamento com
insulina por um ou dois anos (SHARMA; THOMAS, 1974; POWEL; KNOX; LEE,
1977; ZEMP; BESTETTI; ROSSI, 1981). Em geral, STZ mais eficaz e mais
especfica para as clulas beta do pncreas que o aloxane (RAKIETEN; RAKIETEN;
NADKARNI, 1963).

1.5 Imobilizao

Segundo Booth (1982), Falempin e Mounier (1998), Machida e Booth
(2004), a perda de massa muscular associada perda de fora uma das primeiras
e mais bvias modificaes que ocorrem como resultado da imobilizao. Isso se
correlacionaria com a reduo no tamanho do msculo e uma queda na tenso por
unidade de rea transversal do msculo. Essa perda mais acentuada nas
primeiras setenta e duas horas, com ndices de 14 a 17%. Tendo decorrido
aproximadamente uma semana, o ritmo de perda parece diminuir.
A velocidade de sntese protica comea a declinar seis horas aps o
incio da imobilizao. A conseqncia direta o aumento da fadigabilidade devido
menor capacidade oxidativa. Um dos possveis mecanismos de disparo das
mudanas subseqentes imobilizao a modificao do grau de atividade neural
sobre o tecido muscular (FALEMPIN; MOUNIER, 1998).
Atualmente, ao induzir atrofia muscular que se aproxime das condies
de restrio ao leito e hipoatividade, dois modelos so considerados mais
apropriados: a suspenso e a imobilizao. Em estudo comparativo entre os dois
modelos, ambos produzem redues significativas na massa do msculo sleo,
durao da contrao isomtrica e pico da tenso tetnica. Segundo Booth e Kelso
(1973), Itai, Kariya, Hoshino (2004) as tcnicas de inervao, transeco de raiz
neural ou medular, tenotomia, fixao das articulaes com pinos e castrao
27
utilizadas para mimetizar a hipoatividade apresentam particularidades que podem
alterar os ndices de atrofia quando comparados aos dois previamente citados.
Nesse mesmo estudo, relatado que a utilizao de imobilizao gessada permite a
integridade dos nervos, msculos e tendes, no invasiva e no permite que
ocorra a descarga sobre os membros imobilizados, tornando possvel estudar os
efeitos da diminuio do trabalho muscular em se opor gravidade, alm de ser um
procedimento que se aproxima das condies deparadas na prtica clnica e permitir
mais facilmente que se estudem os acontecimentos decorrentes do retorno s
atividades.
De acordo com Lundborg (2000), a leso do SNP pode ser resultante de
isquemia de vasos que irrigam o nervo, ou ainda seco, trao e compresso
nervosa. A compresso nervosa dada por meio de uma presso exgena que
causa um decrscimo do fluxo sanguneo e deformao estrutural das fibras
nervosas. Afinamento da bainha de mielina e desmielinizao focal so as
conseqncias observadas, levando a um bloqueio da conduo nervosa e, como
sintomas predominantes, conseqente perda da potncia muscular e sensibilidade
ao toque. As fibras mielinizadas de grosso calibre so mais susceptveis que as de
fino calibre ou no mielinizadas. Relata-se ainda que longos perodos de
compresso intensa possam gerar interrupo da membrana axonal, alm de
bainhas endoneurais e perineurais.

1.6 Potencial de Ao

O potencial de ao uma alterao rpida no potencial da membrana
seguida por um retorno ao potencial de repouso da membrana. O tamanho e a forma
dos potenciais de ao diferem de um tecido excitvel para outro (BERNE et al.,
2004). Este fato ocasionado por diferenas de concentrao de ons entre as
faces interna e externa da membrana que se mantm em equilbrio. Uma vez
alterado esse equilbrio, seja qual for o estmulo e desde que se atinja o limiar de
excitabilidade da membrana, pode-se produzir uma despolarizao com carter
28
regenerativo, do tipo tudo ou nada, a qual ser um potencial de ao que se propaga
por toda a fibra nervosa (BEST; TAYLOR, 1990).
O potencial de ao uma alterao abrupta do potencial de repouso da
membrana de um estado de eletronegatividade da face interna da membrana
citoplasmtica, para um estado de eletropositividade, uma vez excitada a fibra
nervosa. Devemos considerar a origem deste fenmeno a partir da permeabilidade
seletiva da membrana a alguns ons. Em repouso, a membrana mais permevel
aos ons K
+
, onde os valores de potencial de membrana (V
m
) se aproximam do valor
do potencial de equilbrio eletroqumico deste on. Uma vez excitada, essa
permeabilidade seletiva pode alterar-se, observando-se uma inverso da polaridade
da membrana e aumento de sua permeabilidade aos ons Na
+
. Este ltimo estado
faz com que os valores de potencial de membrana aproximem-se do valor do
potencial de equilbrio eletroqumico do Na
+
(HODGKIN; HUXLEY, 1939; HODGKIN;
KATZ, 1949).
No entanto, a condutncia aumentada aos ons Na
+
logo cessa e a
permeabilidade aos ons K
+
rapidamente aumentada, fazendo com que o potencial
de membrana retorne ao seu estado original de polaridade atravs dessa alterao
de canais de K
+
e, principalmente, atravs dos processos chamados inativao do
canal de Na
+
e regulao da bomba de Na
+
e

K
+
. O potencial de ao nervoso um
fenmeno muito rpido, da ordem de apenas alguns milissegundos (ms). A
amplitude do potencial de ao demonstrou ser amplamente dependente da
concentrao externa de Na
+
e insensvel diminuio do K
+
extracelular para
valores inferiores aos fisiolgicos (BEST; TAYLOR, 1990).
Durante o desenvolvimento do potencial de ao, h inicialmente um
influxo de Na
+
e, posteriormente um efluxo de K
+
na fibra, processo esse em que o
fluxo de ambos os ons obedece a um gradiente eletroqumico; favorecendo
inicialmente a despolarizao e, posteriormente, a repolarizao da membrana,
respectivamente. (HODGKIN; HUXLEY; KATZ et al., 1952; HODGKIN; HUXLEY,
1952a, b; HODGKIN; HUXLEY, 1964).

29
1.7 Potencial de Ao Composto

O potencial de ao composto (PAC) quando registrado de forma
extracelular, em diferentes pontos, num determinado tronco nervoso constitudo por
vrias fibras nervosas que conduzem a resposta ao estmulo aplicado com
diferentes amplitudes e velocidades. O pico registrado composto de picos
individuais de muitos axnios, variando no tamanho com a amplitude do estmulo,
pois ao aumentar o estmulo mais e mais axnios contribuem para o total do registro
(JUNGE, 1976; BEST; TAYLOR, 1990).
Erlanger e Gasser apud: Best e Taylor, 1990 demonstraram que o registro
do potencial de ao composto revelava a presena de at trs componentes , e
, que refletiam a atividade de diferentes tipos de fibras nervosas. Essas fibras foram
denominadas como grupos A, B e C (Tabela 1), levando-se em considerao
aspectos relacionados a sua velocidade de conduo, dimetro da fibra e amplitude
de resposta. Foi demonstrado que as fibras de dimetros maiores possuem uma
velocidade de conduo maior, maior amplitude de resposta eltrica, menor limiar de
excitao e menor durao da resposta e do perodo refratrio (HURSH, 1939;
GASSER, 1943).
As fibras do tipo A so todas mielinizadas, apresentam dimetros de 1 a
20 m e velocidades de conduo de 5 m/s ou menos, para as fibras menores, e at
120 m/s, para as maiores. Essas fibras possuem maior amplitude de resposta,
menor limiar de excitao, menor durao de resposta e perodo refratrio
igualmente menor. Este grupo de fibras o que quantitativamente mais contribui
para o PAC. Podem ocorrer em nervos somticos como o citico e o safeno. As
fibras do tipo B so mielinizadas, apresentam dimetros da ordem de 1 a 3 m e
velocidade de conduo de 3 a 15 m/s. Ocorrem apenas em nervos autonmicos
pr-ganglionares. As fibras do tipo C no so mielinizadas, apresentam dimetros
inferiores a 1 m e apresentam velocidades de conduo em torno de 2 m/s, sendo
encontradas principalmente em nervos cutneos e viscerais (BEST; TAYLOR, 1990).

30
Tabela 01. Classificao das fibras nervosas de mamferos. A classificao do grupo
I a IV aplica-se somente a fibras sensoriais. Fonte: AIDLEY, 1998.

Tipo Grupo Dimetro (m) Velocidade de Conduo
(m/s)
Funo
A 15-20 50-120 Fibras motoras para msculo esqueltico
A Ia 15-20 70-120 Terminaes primrias no fuso muscular
A Ib 12-20 70-120 Aferentes no rgo tendinoso de Golgi
A II 5-10 30-70 Terminaes secundrias nos fusos musculares,
tato, presso
A 3-6 15-30 Inervao motora dos fusos musculares
A III 2-5 5-25 Receptores de presso e dor
B 3 3-15 Pr-ganglionares autonmicas
C 0.5-1 0.5-2 Ps-ganglionares autonmicas (no-mielinizadas)
C IV 0.5-1 0.5-2 Dor (no-mielinizadas)

1.8 Nervo Citico e Gnglio da Raiz Dorsal

O nervo citico origina-se dos segmentos espinhais L4 a L6, inervando
toda a regio dos membros inferiores e dividido abaixo da fossa popltea em trs
ramos: nervos tibial, peroneal e sural, sendo cada um destes dotado de diferentes
propores motoras, sensitivas e autonmicas. Traumatismos em cada um destes
braos do citico levam paralisia e anestesia de regies particulares (RODRIGUES
et al., 2004; VALERO-CABR et al., 2004; VALERO-CABR et al., 2002).
Funcionalmente, o nervo citico classificado como nervo misto,
contendo fibras motoras (eferentes) e sensitivas (aferentes) (NAVARRO; VERD,
2004).
31
As fibras nervosas aferentes podem ser mielinizadas ou no mielinizadas,
variando seu dimetro de 2 a 20 m. As mielinizadas so classificadas como A,
subtipo (Ib) via aferente do rgo tendinoso de Golgi e (Ia) terminaes primrias no
fuso muscular, possuindo dimetro mdio de 15 m e velocidade de conduo de
70-120 m/s; A com dimetro mdio de 8 m e velocidade de conduo mdia de 50
m/s tendo a funo principal de aferncia na propriocepo, tato e presso nos
msculos e articulaes; A so fibras sensitivas para temperatura e dor, dimetro
de 1-4 m e velocidade de conduo de 5-25 m/s. As no mielinizadas que so do
tipo C conduzem informao referente dor em uma velocidade de conduo mdia
com intervalo entre 0,5-2 m/s (BEST; TAYLOR, 1990; NOKES et al., 1991;
CATTERRAL; MACKIE apud GOODMAAN; GILMAN, 1996; AIDLEY, 1998).
As fibras motoras so originadas no motoneurnio localizado no corno
anterior da medula espinhal e estendem-se at a juno neuromuscular nos
msculos esquelticos; a maioria pode ser dividida em dois tipos: fibras eferentes
alfa (A), com dimetro varivel entre 10 e 17 m, as quais fazem sinapse com o
msculo esqueltico, tendo uma velocidade de conduo de 50-120 m/s e as fibras
motoras gama (A), de 3 a 8 m de dimetro, que inervam o fuso muscular com
velocidade de conduo de 15-30 m/s.
O aglomerado de corpos celulares de fibras sensoriais que est localizado
junto s razes dorsais de cada nervo espinhal denomina-se Gnglio da Raiz Dorsal
(GRD). Os gnglios das razes dorsais dos nervos espinhais contm clulas
satlites, vasos sanguneos, clulas de Schwann e corpos dos neurnios sensitivos
(PARENT, 1996). Estes se apresentam envoltos por uma cpsula de tecido
conjuntivo que contnua ao epineuro e perineuro dos nervos perifricos adjacentes.
A cpsula emite trabculas do tecido conjuntivo para o interior do gnglio e forma
um estroma muito vascularizado que, junto com os feixes de fibras nervosas, divide
os corpos das clulas nervosas em grupos de diferentes tamanhos (Figura 01,
DEVOR, 1999).
32

Figura 01 - Fotoneuromiografia do GRD. Mostrando corpos celulares (CB), tecido conjuntivo (CT) e
fibras nervosas (NF). HxE, 160X (ROSS et al., 2006).

Uma caracterstica do GRD a presena de capilares fenestrados,
diferentemente do SNC, que apresenta capilares contnuos, caracterizando a
barreira hemato-enceflica, a qual forma uma barreira para difuso de molculas
grandes dos vasos para o espao extracelular (ALLEN et al., 1994).
As clulas ganglionares, ou neurnios pseudo-unipolares apresentam um
prolongamento em forma de T, cujo ramo central penetra no tronco enceflico ou no
corno dorsal da medula espinal, enquanto o ramo perifrico entra no nervo perifrico
e forma as terminaes nervosas livres, ou inerva receptores sensoriais. Em alguns
neurnios, o ramo inicial do axnio segue um curso convoluto, tortuoso ou
enrolado, algumas vezes se espiralando ao redor do soma, o chamado glomrulo,
aumentando a extenso do axnio inicial (DEVOR, 1999; PARENT, 1996).
Os corpos celulares variam de tamanho (entre 15 e 100 m de dimetro),
so arredondados com um ncleo redondo, grande e de localizao central. Alm
disso, os corpos dos neurnios dos gnglios sensitivos no apresentam dendritos e
tambm no recebem sinapses, motivo pelo qual o gnglio sensitivo dito como um
33
acmulo de corpos de clulas nervosas com seus prolongamentos centrais e
perifricos (GENESER, 2003; PARENT, 1996).
Toda informao somatossensorial conduzida at o sistema nervoso
central (SNC) pelos neurnios do GRD, esses neurnios tm capacidade de
responder seletivamente a tipos especficos de estmulos (calor, frio, presso, dor)
devido a especializaes morfolgicas e moleculares dos seus terminais nervosos
(KANDEL et al., 2003). Devido localizao desses neurnios no GRD, onde h
ausncia de uma barreira sangue-nervo bem definida como no SNC, estas clulas
tornam-se mais susceptveis s variaes plasmticas de glicose, a qual quando em
nveis elevados causa danos celulares (ALLEN et al., 1994).
A velocidade de conduo dos neurnios do GRD estabelece uma
relao com a morfologia celular. O potencial de ao conduzido mais
rapidamente pelas clulas maiores que so classificadas como fibras A (30-55 m/s)
ou A (14-30 m/s); as clulas de tamanho intermedirio so classificadas como A
(2,2-8 m/s); as fibras do tipo C de conduo lenta (<1,4 m/s) relacionam-se s
menores clulas do GRD (HARPER; LAWSON, 1985a).
Os potenciais de ao evocados apresentam uma diferena entre os tipos
de clulas. As clulas A e A tem curta durao e as do tipo C e algumas A tem
longa durao, com uma inflexo na sua repolarizao (HARPER; LAWSON,
1985b).
As clulas do GRD possuem diferentes formas de PA apresentando
subtipos de canais inicos. Os PAs de longa durao expressam canais para Na
+

sensveis a tetrodoxina (TTX-S), as isoformas Na
v
1.8 e Na
v
1.9 dos canais para Na
+

resistentes a tetrodoxina (TTX-R) e canais para K
+
com ativao lenta. Clulas que
expressam canais para Na
+
TTX-S e canais para K
+
com ativao lenta apresentam
PA de durao intermediria e as clulas com PA de curta durao expressam as
isoformas Na
v
1.1 e Na
v
1.6 e Na
v
1.7 dos canais para Na
+
TTX-S, o Na
v
1.8 (TTX-R) e
canais para K
+
com ativao rpida (CAMPBELL, 1992; BLACK et al., 1996; FJELL
et al., 2000).

34
2 RELEVNCIA

Diariamente, milhares de pessoas so obrigadas a vivenciar situaes de
limitaes fsicas provisrias decorrentes de imobilizao de alguma parte de seu
corpo para restabelecer a funo orgnica. Consequentemente, este limite abrange
muito mais do que uma limitao funcional de um segmento corporal, podendo
resultar ao paciente uma restrio provisria de sua funo orgnica normal, vindo a
limit-lo quanto sua locomoo e suas atividades da vida diria. Esta situao
poder agravar-se quando o paciente for diabtico, devido a complicaes mais
graves que por ventura venham a surgir.
A Diabetes mellitus (DM) um problema importante e crescente em
Sade Pblica. Sua incidncia e prevalncia esto aumentando, alcanando
propores epidmicas. Est associado a complicaes que promovem a
produtividade, a qualidade de vida e a sobrevida dos indivduos. Alm disso,
acarreta altos custos para seu controle metablico e tratamento de suas
complicaes.
A neuropatia diabtica a complicao mais comum do DM,
compreendendo um conjunto de sndromes clnicas que afetam o sistema nervoso
sensitivo, motor e autonmico, de forma isolada ou difusa, de instalao aguda ou
crnica, de carter reversvel ou irreversvel, manifestando-se silenciosamente ou
com quadros sintomticos dramticos.
Apesar disso, poucos so os dados que se tem relacionando s
alteraes da conduo nervosa do nervo citico e do gnglio da raiz dorsal em
relao imobilizao e interao imobilizao/diabetes.
Tendo em vista esses fatos, pesquisas cientficas que contribuam na
busca de solues para portadores de diabetes imobilizados so extremamente
relevantes, tanto do ponto de vista cientfico, tecnolgico e financeiro como no ponto
de vista social.

35
3 OBJETIVOS

3.1 Objetivo Geral:

- Analisar as alteraes da excitabilidade do nervo citico e gnglios da
raiz dorsal dos ratos diabticos e no diabticos com imobilizao da pata traseira
direita.

3.2 Objetivos Especficos:

- Validar um protocolo de imobilizao, adaptando-o para ratos diabticos;
- Elucidar o efeito da imobilizao em ratos diabticos e no diabticos;
- Caracterizar e comparar a excitabilidade e o potencial de ao composto
do nervo citico da pata traseira direita imobilizada de ratos diabticos e no
diabticos, quantificando os seguintes parmetros de anlise: amplitude positiva das
componentes, amplitude pico-a-pico, velocidade de conduo das componentes,
reobase e cronaxia;
- Elucidar as alteraes na excitabilidade dos neurnios do gnglio da raiz
dorsal direito dos ratos com a pata traseira direita imobilizada, diabticos, diabticos
com a pata traseira direita imobilizada e no diabticos (controle), utilizando e
quantificando os seguintes parmetros do potencial de ao intracelular: corrente
limiar, resistncia de entrada da membrana celular, potencial de repouso, amplitude
do potencial de ao, durao desse potencial e inclinaes mximas ascendentes e
descendentes.

36
4 MATERIAIS E MTODOS

4.1 Delineamento Experimental

4.1.1 Materiais Biolgicos

tica na experimentao animal: os experimentos foram realizados
obedecendo aos princpios ticos sobre manipulao e utilizao de animais
experimentais regidos pelo Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA) e
estabelecidos pelo Comit de tica para o Uso de Animais (CEUA) da Universidade
Estadual do Cear, sendo aprovado sob protocolo n 08351783-9 de 26/08/2008.
Foram utilizados 56 (cinqenta e seis) ratos albinos, Rattus norvergicus,
variedade Wistar, do sexo masculino, adultos jovens (oito semanas de idade), com
massa corprea entre 200-320 gramas, provenientes do Biotrio do Instituto
Superior de Cincias Biomdicas (ISCB) da Universidade Estadual do Cear (UECE)
e da Universidade Federal do Cear (UFC). Durante o perodo experimental os
animais ficaram sob condies controladas de temperatura (22-25
o
C), ciclo claro-
escuro de doze horas, recebendo rao e gua ad libitum.

4.1.2 Grupos Experimentais

Os 56 (cinqenta e seis) animais foram distribudos em 4 grupos
experimentais, conforme descrito abaixo:

37
1 - Grupo Controle (C)
Neste grupo os animais, no incio do experimento, foram separados dos
demais, pesados, deixados nas gaiolas por seis semanas e depois foram
sacrificados.

2 - Grupo Imobilizado (I)
Composto por animais com as mesmas caractersticas fsicas do Grupo
Controle, mantidos nas gaiolas por quatro semanas, seguido de imobilizao do
membro posterior direito por mais duas semanas e depois sacrificados.

3 - Grupo Diabtico (D)
Os animais, quando jovens, foram induzidos ao quadro diabtico
conforme descrito e no incio do experimento, separados dos demais, pesados,
deixados nas gaiolas por seis semanas e depois sacrificados.

4 - Grupo Diabtico Imobilizado (DI)
Composto por animais com as mesmas caractersticas fsicas do Grupo
Diabtico, mantidos nas gaiolas por quatro semanas, seguido de imobilizao do
membro posterior direito por mais duas semanas e depois sacrificados.

4.1.3 Induo de Diabetes Experimental

Ratos Wistar do sexo masculino, pesando entre 200-320 gramas foram
induzidos quimicamente ao diabete por uma soluo de estreptozotocina (STZ) na
dose nica de 65 mg/kg de peso corporal, dissolvido em soluo de citrato de sdio
1M com pH 4,4 e injetado via intraperitoneal, como realizado no estudo de Fox et al.
(1999). Para isto, os animais permaneceram em jejum alimentar de 12 horas na
38
vspera da induo, com fornecimento de gua ad libitum. Aps 30 minutos da
injeo eles foram alimentados normalmente. Aps 48 horas da induo, amostras
de sangue foram coletadas atravs de uma pequena puno na poro distal da
cauda do animal, com a coleta de uma gota de sangue sobre a glicofita. A glicemia
foi ento confirmada no aparelho Accu-Chek Advantage (Roche
). Os animais com
glicemia maior ou igual a 200 mg/dl, foram considerados diabticos (includos no
grupo experimental) e aqueles com glicemia inferior foram descartados do
experimento. Outra observao importante para avaliar a diabete o elevado
consumo de gua, reduo de peso, alterao na pelagem e intensa diurese. O
nmero de mortes foi reduzido pela limpeza diria das gaiolas e manuteno de
gua nas garrafas. Pesagem e confirmao da diabete foram realizadas
semanalmente.

4.1.4 Tcnica de Imobilizao

Previamente os animais foram anestesiados com Cetamina 60 mg/kg e
Xilasina 8 mg/kg de peso do animal por via intraperitoneal, ataduras de algodo com
4 cm de largura foram utilizadas nas articulaes para prevenir a formao de
lceras de presso. Para os grupos imobilizados, o membro posterior direito foi
imobilizado com esparadrapo impermevel (marca Cremer com 10 cm de largura),
que incluram a pelve, quadril, joelho (ambos em extenso) e o tornozelo (em flexo
plantar). Em seguida os animais foram enfaixados com o esparadrapo de modo
convencional em pequenas tiras de 5 cm de largura e 15 cm de comprimento cada,
tiras diferentes para o membro e o tronco, sem muita presso de torque. A
imobilizao foi substituda quando danificada e mantida por duas semanas. Os
animais j divididos em seus respectivos grupos foram colocados em gaiolas
plsticas com livre acesso rao e gua. A imobilizao no impediu a locomoo
dentro da gaiola.
A imobilizao foi realizada quando os ratos completaram oito semanas
de vida permanecendo duas semanas de imobilizao.
39
4.1.5 Sacrifcio dos animais

Os animais foram sacrificados por concusso cerebral de acordo com a
Resoluo do Conselho Federal de Medicina Veterinria (CFMV) N 714,
20/06/2002, e em seguida pesados para posterior dissecao do nervo citico direito
para anlise do potencial de ao composto no sistema extracelular e dos gnglios
direitos da raiz dorsal no sistema intracelular.

4.1.6 Soluo

O nervo citico e gnglio da raiz dorsal foram nutridos com soluo de
Locke modificada, contendo a seguinte composio (em mM): NaCl: 140, KCl: 5,6;
MgCl
2
: 1,2; CaCl
2
: 2,2; Tris-Hidroximetil-Aminometano (TRIS): 10; Glicose: 10.
A soluo de Locke teve o pH ajustado para 7,4 0,01 utilizando
Hidrxido de sdio (NaOH) ou cido clordrico (HCl) temperatura ambiente.
Os sais que foram utilizados no preparo da soluo fisiolgica so de grau
de pureza analtica, obtidos das companhias Sigma Chemical Corporation (St. Louis,
Missouri, USA), Merck (Darmstadt, Germany) ou Reagen (Rio de Janeiro, RJ, Br).

4.1.7 Dissecao do nervo citico e montagem do sistema extracelular

O nervo citico direito dos ratos foi cuidadosamente submetido cirurgia
de disseco, sendo removido de sua origem e insero e imediatamente
acondicionado em soluo de Locke modificada at o momento de sua utilizao.
40
Em seguida, a cmara de registro (cmara de Harvard) foi preenchida
com 8 ml de soluo de Locke e o nervo foi posicionado horizontalmente sobre os
eletrodos de platina desta cmara. Manteve-se uma ala de aproximadamente 20
milmetros do nervo submerso na soluo a fim de que, por capilaridade, a soluo
fosse administrada ao tecido. A cmara foi mantida hermeticamente fechada para
evitar a desidratao da preparao.
Uma das extremidades do nervo foi eletricamente estimulada por pares
de eletrodos acoplados a um estimulador de Grass, modelo S-48 (Grass Instrument
Co., Quincy, MA, USA), atravs de uma unidade isoladora de estmulo Grass,
modelo SIU 4678 (Grass Instrument Co.). O pulso gerado pelo estimulador foi do
tipo onda quadrada, com amplitude de 40 Volts, durao de 100 microssegundos e
aplicados nas frequncias de 0.2, 20, 50, 100, 200, 300 e 400 Hertz.
O potencial de ao evocado foi coletado por eletrodos de registro na
outra extremidade do nervo. O sinal foi aumentado em 1000X por um amplificador
(AM 01/UECE) de alta impedncia de entrada e visualizado em osciloscpio
(KENWOOD, modelo CS4125).
Uma placa de interface anlogo-digital (A/D) (DIGIDATA 1322A)
transformou o sinal para tornar possvel a sua leitura e armazenamento em um
computador por meio do software Axoclamp (AxonScope, da Axon Instruments Inc.,
Foster City, CA, USA).
O nervo direito passou por um perodo de estabilizao do registro de 120
minutos, tempo este mais do que suficiente para que ocorra uma boa estabilizao
da amplitude do registro do potencial de ao composto. Considerou-se estabilizada
a preparao em que no houve variao na amplitude do PAC por mais de 30
minutos. Em seguida foi medida a reobase e a cronaxia. Posteriormente colhidos
registros de estmulos do potencial de ao composto com frequncias de 20, 50,
100, 200, 300, 400 Hz com intervalos entre as mesmas de 0,2 Hz, conforme Tabela
02.

41
Tabela 02. Protocolo experimental de coleta de registros de freqncias do
potencial de ao composto do nervo citico direito.

Freqncia (Hz) Tempo (min.) Tempo Acumulado (min.)
20 Hz 2 2
0,2 Hz 5 7
50 Hz 2 9
0,2 Hz 5 14
100 Hz 2 16
0,2 Hz 5 21
200Hz 2 23
0,2 Hz 5 28
300 Hz 2 30
0,2 Hz 5 35
400 Hz 2 37
0,2 Hz 5 42

O tempo total previsto para a coleta dos registros do nervo direito de cada
animal ser de aproximadamente 4 horas.

42

Figura 02. Esquema ilustrativo do setup para registro extracelular do potencial de ao
composto.

4.1.8 Dissecao do gnglio da raiz dorsal e montagem do sistema intracelular

Aps a remoo do nervo citico direito, foram dissecados os gnglios da
raiz dorsal a nvel dos segmentos L4 e L5, paravertebral direito. Em seguida foram
acondicionados em soluo de Locke e fixados sobre uma cmara de acrlico com
fundo Silgard. A cmara de registro foi montada sob uma lupa (modelo COLLEGE
STEREO, MLW Intermed, Schneiche, Alemanha), com aumento de 20X, para
auxiliar a fixao com microalfinetes inoxidveis e observao dos procedimentos do
gnglio da raiz dorsal.
A nutrio do tecido ocorreu atravs de perfuso por meio de fluxo por
gravidade, ajustado entre 1 a 1,5 ml/min, com soluo de Locke. Para minimizar os
efeitos de capacitncia do eletrodo, o nvel de lquido da cmara foi controlado na
menor altura possvel acima da superfcie do gnglio. Para a retirada de lquido da
cmara foi utilizada uma bomba de infuso, com uma de suas extremidades
43
conectada a um estreito tubo (para agir como um sugador de lquido) e a outra a um
depsito de descarte de soluo. Essa montagem foi instalada fora do local onde
estava a cmara, para evitar a adio de vibrao ao sistema. Por fim, a soluo
que ficou na cmara considerada como meio extracelular foi aterrada e, portanto,
atribudo valor do potencial igual a zero.
O impalamento dos neurnios do gnglio da raiz dorsal foi realizado com
microeletrodos de borossilicato (dimetro externo de 1,0 mm e interno de 0,5 mm),
que foram confeccionados por um puxador de micropipetas (modelo P-97, Sutter
Instrument, Novato, CA, EUA) e preenchidos com soluo de KCl 3M a fim de obter
resistncia entre 40 a 90M. Em seguida, o microeletrodo foi montado em um pr-
amplificador, que estava conectado a um eletrmero (modelo AXOCLAMP 2B, Axon
Instruments, Foster City, CA, EUA). A movimentao do eletrodo, bem como o
impalamento das clulas, foi realizada com um micromanipulador hidrulico (modelo
MWO-3, Narishige International Inc., Long Island, NY, EUA).
As propriedades eltricas da membrana foram registradas no modo de
clampeamento de corrente (current-clamp), no qual h fixao do valor da corrente a
ser injetada, de forma a medir as variaes de potencial advindo do sistema. Para
monitoramento do sinal, utilizamos dois osciloscpios: um para o monitoramento do
potencial de membrana (V
m
) e da corrente injetada (modelo 5111A, TEKTRONIX,
Beaverton, OR, EUA) e outro para monitoramento da carga e descarga do
microeletrodo (modelo HM303-6, HAMEG Instruments, Mainhausen, Alemanha).
Ambos os osciloscpios, bem como uma placa de interface A/D (modelo DIGIDATA
1200, Axon Intruments, Foster City, CA, EUA) estavam conectados s sadas do
eletrmero. A aquisio dos registros eletrofisiolgicos foi feita atravs de um
software (CLAMPEX, verso 6.0) e os dados armazenados em computador para
posterior anlise. O esquema do setup experimental est ilustrado na Figura 03

44

Figura 03. Esquema ilustrativo do setup para registro intracelular do potencial de ao dos
neurnios do gnglio da raiz dorsal.

4.1.9 Laboratrios

Os experimentos envolvendo os animais e anlises foram conduzidos nos
laboratrios: Bioqumica e Cultura de Clulas e de Eletrofisiologia, ambos nas
dependncias do Instituto Superior de Cincias Biomdicas (www.uece.br/cmacf)
pertencentes Universidade Estadual do Cear - UECE.

45
4.2 Anlise Eletrofisiolgica

As alteraes da excitabilidade e da condutibilidade nervosa foram
avaliadas atravs das mudanas observadas na amplitude pico-a-pico, na amplitude
positiva das componentes e na velocidade de conduo do potencial de ao
composto evocado. Para caracterizar o efeito da excitabilidade do nervo, foram
avaliados a reobase e a cronaxia. Os dados coletados para observao de possveis
alteraes nos parmetros acima citados foram analisados pelo mesmo software
Clampfit, da Axon Instruments Inc., Foster City, CA, USA.
A amplitude pico-a-pico foi estabelecida atravs da soma da maior
amplitude positiva com o mdulo da maior amplitude negativa atingidas no registro
do potencial de ao composto, proporcional ao nmero de axnios que conduzem o
impulso em uma dada velocidade (MEIRI et al., 1996).
A amplitude dos componentes foi estabelecida atravs da amplitude
mxima positiva de cada um dos trs componentes.
Em relao ao clculo da velocidade de conduo nervosa do PAC,
utilizamos a proporo entre a distncia percorrida pelo potencial de ao composto,
desde o eletrodo de estimulao que estava mais prximo do ponto de imerso do
nervo na soluo at o eletrodo de registro e o tempo decorrido at a finalizao
deste trajeto. Consideramos o intervalo entre o ponto inicial do artefato de estmulo
observado no grfico de registro, assim como, o ponto onde a inflexo ascendente
do grfico de potencial de ao composto atingiu 50 % de sua amplitude pico-a-pico
para definio de tempo. Para anlise da velocidade dos componentes utilizamos a
relao entre a distncia percorrida pelo PAC, como descrito anteriormente e o
intervalo entre o ponto inicial do artefato de estmulo e o pico positivo de cada
componente.
A curva de intensidade-durao com onda quadrada de voltagem-
constante foi usada para determinar reobase e cronaxia (HOLSHEIMER et al.,
2000). A reobase mensurada como a voltagem limiar para uma resposta ativa, com
uma longa durao do pulso (1000 s) e cronaxia como a durao limiar com um
pulso a uma voltagem igual ao dobro da reobase.
46
4.3 Tratamento Estatstico

Os resultados foram apresentados como mdia erro padro da mdia
(EPM). O nmero total de experimentos est representado pela letra n. A anlise
estatstica e os grficos foram realizados utilizando os softwares SigmaPlot
for
Windows (verso 10.0, Systat Software) e Prism
5 for Windows (verso 5.0,

GraphPad Software).
A significncia estatstica foi aceita quando os resultados apresentaram
probabilidade de ocorrncia da hiptese nula menor que 5% (p<0,05).
Nas comparaes realizadas entre duas amostras, foram utilizados o
teste t-student pareado ou no pareado. Para as comparaes mltiplas foi adotada
a Anlise de Varincia (ANOVA) one-way e two-way conforme apropriado,
respeitando-se as hipteses de normalidade da distribuio e homocedasticidade

47
5 RESULTADOS

5.1 Glicemia

A coleta sangunea foi realizada semanalmente, durante seis semanas
consecutivas utilizando o aparelho Accu-Chek Advantage (Roche
). Os animais dos
grupos diabtico e diabtico imobilizado foram induzidos com STZ na semana 1
(Figura 4). Identificou-se um aumento da mdia de glicemia nos grupos diabtico e
diabtico imobilizado comparados com os grupos controle e imobilizado. As mdias
erro padro de glicemia atingiram os seguintes valores: controle: 86,870,87 mg/dl;
imobilizado: 84,451,29 mg/dl; diabtico: 286,2913,45 mg/dl; diabtico imobilizado:
279,5614,01 mg/dl. As anlises estatsticas indicaram um grau de significncia
(p<0,05) entre os grupos: controle com diabtico e diabtico imobilizado; imobilizado
com diabtico e diabtico imobilizado.

48

Figura 04. Evoluo da mdia da glicemia nos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI), durante seis semanas aps induo da STZ. Os resultados expressos em
valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia do grupo controle com os grupos diabtico e diabtico imobilizado; #(p<0,05) do grupo
imobilizado com os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de animais. O
trao pontilhado indica a semana da imobilizao.

5.2 Massa Corprea

A Figura 05 representa a comparao do resultado da mdia da massa
corprea dos grupos controle, imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado durante
a quarta semana, onde foi realizada a imobilizao da pata traseira direita nos
grupos imobilizado e diabtico imobilizado e durante a sexta semana, onde foi o
sacrifcio dos animais. As mdias erro padro da massa corprea na quarta
semana nos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado foram
respectivamente 269,409,56 g; 298,819,26 g; 228,9011,17 g; 217,079,90 g e na
sexta de 320,429,90 g; 277,129,26 g; 199,2711,17 g; 190,929,90 g. As anlises
estatsticas indicaram um grau de significncia (p<0,05) na quarta semana entre os
Semanas
0 1 2 3 4 5 6 7
G
l
i
c
e
m
i
a

(
m
g
/
d
l
)
0
100
200
300
400
500
C (n=15)
I (n=16)
D (n=11)
DI (n=14)
*
*
*
*
*
*
#
#
#
#
#
#
49
grupos: controle com diabtico e diabtico imobilizado; imobilizado com diabtico e
diabtico imobilizado. J na sexta semana todos apresentaram diferena
estatisticamente significante (p<0,05) com o controle e o grupo imobilizado com os
grupos diabtico e diabtico imobilizado. Quando comparadas as semanas, o grupo
controle apresentou um ganho de massa corprea e nos grupos imobilizado,
diabtico e diabtico imobilizado um dficit da massa corprea.

Figura 05. Comparao da mdia da massa corprea dos grupos controle (C), imobilizado (I),
diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI), durante a quarta e sexta semana aps induo da STZ. Os
resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA).
*(p<0,05) representa significncia em relao ao grupo controle com os grupos diabtico e diabtico
imobilizado; #(p<0,05) do grupo controle com os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica
o nmero de animais.

5.3 Ingesto de rao

O controle da ingesto de rao diria iniciou-se em todos os grupos a
partir da semana de induo (semana 0 na Figura 06) de STZ nos grupos diabtico
e diabtico imobilizado, havendo acompanhamento dirio durante seis semanas
Semana
P
e
s
o

(
g
)
0
50
100
150
200
250
300
350
C (n=15)
I (n=16)
D (n=11)
DI (n=14)
*
*
*
*
#
*
#
#
#
6 4
50
consecutivas. Identificou-se um consumo alimentar semelhante entre os grupos
controle e imobilizado e entre os grupos diabticos e diabticos imobilizados a partir
da terceira semana. Os dois ltimos grupos mencionados tambm apresentaram um
consumo superior em relao ao controle e imobilizado, caracterizando o efeito da
diabetes. Durante o perodo de imobilizao correspondente entre a quarta e sexta
semana, os grupos imobilizado e diabtico imobilizado no apresentaram reduo
do consumo de rao. A mdia erro padro geral de todas as semanas apresentou
os seguintes valores: controle 33,092,16 g/dia/rato; imobilizado 31,651,68
g/dia/rato; diabtico 42,633,24 g/dia/rato; diabtico imobilizado 40,984,00
g/dia/rato. As anlises estatsticas para cada semana indicaram um grau de
significncia (p<0,05) a partir da terceira semana entre os grupos: controle com
diabtico e diabtico imobilizado; imobilizado com diabtico e diabtico imobilizado.

Figura 06. Evoluo da ingesto de rao nos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI), durante seis semanas aps induo da STZ. Os resultados expressos em
significncia do grupo controle com os grupos diabtico e diabtico imobilizado; #(p<0,05) do grupo
imobilizado com os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de animais. O
trao pontilhado indica a semana da imobilizao.

Semanas
0 1 2 3 4 5 6 7
C
o
n
s
u
m
o

M
d
i
o

R
a
o

(
g
/
d
i
a
/
r
a
t
o
)
0
10
20
30
40
50
60
70
C (n=15)
I (n=16)
D (n=11)
DI (n=14)
*
*
* *
#
#
# #
51
5.4 Registro Extracelular

5.4.1 Caracterizao

A formao do potencial de ao composto (PAC) apresentou at trs
componentes de onda, porm com o aumento da frequncia de estmulo a partir de
100Hz a terceira componente no foi apresentada em 74% do total dos registros.
Como o estudo foi realizado para as freqncias 0,2Hz, 20Hz, 50Hz, 100Hz, 200Hz,
300Hz e 400Hz, a terceira componente foi desconsiderada para este estudo.

5.4.2 Traados eletrofisiolgicos das componentes do potencial de ao composto
do nervo citico direito

Os traados eletrofisiolgicos representativos do potencial de ao
composto dos grupos diabtico (Figura 07C) e diabtico imobilizado (Figura 07D)
mostraram uma tendncia de prevalncia da segunda componente positiva possuir
uma amplitude superior que as demais, caracterizando uma predominncia de fibras
nervosas sensitivas. No grupo controle (Figura 07A) houve uma tendncia da
amplitude da primeira componente positiva ser superior que as demais,
caracterizando uma predominncia das fibras nervosas motoras. No grupo
imobilizado (Figura 07B) houve uma tendncia da amplitude da segunda
componente ser igual ou superior amplitude da primeira componente.

52

Figura 07. Traados eletrofisiolgicos representativos do potencial de ao composto (PAC) do nervo
citico direito dos grupos controle (A), imobilizado (B), diabtico (C), diabtico imobilizado (D). A seta
() indica o artefato.
A
1,13 mV
0,67 ms
B
C
D
53
5.4.3 Anlise eletrofisiolgica da amplitude positiva da 1 componente do potencial
de ao composto do nervo citico direito

Na anlise da amplitude positiva da 1 componente do PAC, os resultados
apresentados na Tabela 03 (Apndice I), representam a distribuio das mdias
erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado em
relao as frequncias de estmulo. O aumento da frequncia de estmulo
apresentou uma diminuio da curva em todos os grupos e os valores da amplitude
dos grupos imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado foram inferiores comparados
com o grupo controle (Figura 08). Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05) dos grupos imobilizado e diabtico em relao ao grupo controle nas
frequncias de 0,2 Hz at 100 Hz. Nas frequncias de 200 Hz, 300 Hz e 400 Hz no
houve diferena estatisticamente significante.

Figura 08. Amplitude positiva da 1 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos controle
(C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos
animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos esto
apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa significncia entre controle e
imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz; #(p<0,05) entre controle e diabtico
nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz. O n indica o nmero de nervos citicos direito de
ratos.

Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
A
m
p
l
i
t
u
d
e

P
o
s
i
t
i
v
a

d
a

1

C
o
m
p
o
n
e
n
t
e

(
m
V
)
0
2
4
6
8
C (n=13)
I (n=15)
D (n=8)
DI (n=13)
*
*
*
*
#
#
#
#
54
5.4.4 Anlise eletrofisiolgica da amplitude positiva da 2 componente do potencial
de ao composto do nervo citico direito

Na anlise da amplitude positiva da 2 componente do PAC, os resultados
apresentados na Tabela 04 (Apndice II), representam a distribuio das mdias
erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado em
relao as frequncias de estmulo. O aumento da frequncia de estmulo
apresentou uma diminuio da curva em todos os grupos e os valores da amplitude
dos grupos imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado foram significativamente
superiores comparados com o grupo controle (Figura 09). Houve diferena
estatisticamente significante (p<0,05) comparando o grupo diabtico imobilizado em
relao ao controle nas frequncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e nas frequncias de
100 Hz, 200 Hz, 300 Hz e 400 Hz no houve diferena estatisticamente significante.
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
A
m
p
l
i
t
u
d
e

P
o
s
i
t
i
v
a

d
a

2

C
o
m
p
o
n
e
n
t
e

(
m
V
)
0
2
4
6
8
C (n=13)
I (n=14)
D (n=7)
DI (n=10)

Figura 09. Amplitude positiva da 2 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos controle
(C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos
apresentados como mdia EPM (ANOVA). (p<0,05) representa significncia entre controle e
diabtico imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz e 50 Hz. O n indica o nmero de nervos
citicos direito de ratos.
55
5.4.5 Anlise eletrofisiolgica da amplitude pico-a-pico do potencial de ao
composto do nervo citico direito

Na anlise da amplitude pico-a-pico do PAC, os resultados apresentados
na Tabela 05 (Apndice III), representam a distribuio das mdias erro padro
dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado em relao s
frequncias de estmulo. O aumento da frequncia de estmulo apresentou uma
diminuio da curva em todos os grupos e os valores da amplitude dos grupos
imobilizado e diabtico imobilizado foram inferiores comparados com o grupo
controle (Figura 10). J o grupo diabtico imobilizado foi superior ao grupo controle
at a frequncia de 50 Hz por apresentar uma maior hiperpolarizao e
consequentemente elevou a amplitude pico a pico, mantendo o resultado
semelhante ao grupo controle em 100 Hz e 200 Hz. Aps esta frequncia
comportou-se semelhante aos grupos diabtico e diabtico imobilizado. Houve
diferena estatisticamente significante (p<0,05) comparando o grupo diabtico
imobilizado com os grupos imobilizado e diabtico na frequncia de 0,2 Hz. J nas
frequncias de 20 Hz e 50 Hz houve diferena estatstica entre diabtico imobilizado
e diabtico. Nas demais frequncias no houve diferena estatstica.
56

Figura 10. Amplitude pico-a-pico do PAC, em nervo citico direito dos grupos controle (C),
imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos
apresentados como mdia EPM (ANOVA). (p<0,05) representa significncia entre diabtico
imobilizado e imobilizado na freqncia de 0,2 Hz; (p<0,05) entre diabtico imobilizado e diabtico
nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz e 50 Hz. O n indica o nmero de nervos citicos direito de ratos.

5.4.6 Anlise eletrofisiolgica da velocidade de conduo da 1 componente do

Na anlise da velocidade de conduo da 1 componente do PAC, os
resultados apresentados na Tabela 06 (Apndice IV), representam a distribuio das
mdias erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico
imobilizado em relao s frequncias de estmulo. Na comparao entre os grupos,
observou-se uma reduo no imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado, em
relao ao grupo controle (Figura 11), havendo diferena estatisticamente
significante (p<0,05) nas freqncias de 0,2 Hz at 100 Hz do grupo controle em
relao aos grupos imobilizado e diabtico imobilizado. Observou-se uma tendncia
Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
A
m
p
l
i
t
u
d
e

P
i
c
o

a

P
i
c
o

(
m
V
)
0
2
4
6
8
10
C (n=15)
I (n=16)
D (n=8)
DI (n=9)

57
de reduo da velocidade de conduo dos grupos diabtico, imobilizado e diabtico
imobilizado em relao ao controle.

Figura 11. Velocidade de conduo da 1 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos
controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado
imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos
esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa significncia entre controle e
imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz; #(p<0,05) entre controle e diabtico
imobilizado nas freqncias de 0,2 Hz, 20 Hz, 50 Hz e 100 Hz. O n indica o nmero de nervos

Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
V
e
l
o
c
i
d
a
d
e

d
e

C
o
n
d
u
o

d
a

1

C
o
m
p
o
n
e
n
t
e

(
m
/
s
)
40
60
80
100
120
C (n=15)
I (n=15)
D (n=8)
DI (n=14)
*
*
#
#
#
#
*
*
58
5.4.7 Anlise eletrofisiolgica da velocidade de conduo da 2 componente do

Na anlise da velocidade de conduo da 2 componente do PAC, os
resultados apresentados na Tabela 7 (Apndice V), representam a distribuio das
mdias erro padro dos grupos controle, imobilizado, diabtico, diabtico
imobilizado em relao s frequncias de estmulo. Embora houvesse uma discreta
reduo das velocidades de conduo dos grupos em relao ao grupo controle
(Figura 12), no houve diferena estatisticamente significante.

Figura 12. Velocidade de conduo da 2 componente do PAC, em nervo citico direito dos grupos
controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado
imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores absolutos
esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). No houve significncia estatstica com p<0,05. O
n indica o nmero de nervos citicos direito de ratos.

Frequncia (Hz)
0 100 200 300 400
V
e
l
o
c
i
d
a
d
e

d
e

C
o
n
d
u
o

d
a

2

C
o
m
p
o
n
e
n
t
e

(
m
/
s
)
0
20
40
60
C (n=14)
I (n=9)
D (n=8)
DI (n=13)
59
5.4.8 Anlise eletrofisiolgica da reobase e cronaxia do nervo citico direito

Na anlise da reobase, o resultado apresentado na Figura 13, obteve-se
no grupo controle a mdia erro padro de 3,130,05 volts, no grupo imobilizado
2,840,06 volts, no grupo diabtico 2,730,08 volts e no grupo diabtico imobilizado
3,230,10 volts. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) entre os
grupos controle e imobilizado, controle e diabtico, imobilizado e diabtico
imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado. Na Figura 14 correspondente a
cronaxia, obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 52,311,95 s, no
grupo imobilizado de 59,712,79 s, no grupo diabtico de 50,572,08 s e no grupo
diabtico imobilizado de 59,751,41 s, havendo diferena estatisticamente
significante com p<0,05 entre os seguintes grupos: controle e imobilizado;
imobilizado e diabtico; diabtico e diabtico imobilizado.

Figura 13. Reobase em nervo citico direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao.
Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA).
*(p<0,05) representa significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos
imobilizado e diabtico imobilizado; #(p<0,05) entre os grupos diabtico e diabtico imobilizado;
(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico. O n indica o nmero de nervos citicos direito de
ratos.

C
I
D
D
I
0
1
2
3
4
I (n=15)
C (n=13)
D (n=6)
DI (n=13)
Grupos
R
e
o
b
a
s
e

(
v
o
l
t
s
)
#

**
*
60

Figura 14. Cronaxia em nervo citico direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e
diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao.
Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA).
*(p<0,05) representa significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos
imobilizado e diabtico; #(p<0,05) entre os grupos diabtico e diabtico imobilizado. O n indica o
nmero de nervos citicos direito de ratos.

5.5 Registro Intracelular

5.5.1 Caracterizao e distribuio dos neurnios

Este estudo foi baseado nos dados de neurnios do GRD que foram
classificados como sem inflexo (N
si
) (Figura 15A) e com inflexo (N
ci
) (Figura 15B),
na fase de repolarizao do PA, para os grupos controle, imobilizado, diabtico e
diabtico imobilizado.
Os neurnios sem inflexo apresentaram valores superiores para os
parmetros corrente limiar, potencial de repouso, dV/dt ascendente e dV/dt
descendente comparados com os neurnios com inflexo. J os parmetros
C
I
D
D
I
0
20
40
60
80
C (n=13)
I (n=14)
D (n=7)
DI (n=12)
Grupos
C
r
o
n
a
x
i
a

(
u
s
)
#
*
**
61
resistncia de entrada, amplitude e durao do PA apresentam valores inferiores,
conforme descritos nas Tabelas 08 e 09 (Apndice VI e VII).

Figura 15. Traados representativos da derivada do potencial de ao nos neurnios sem inflexo
(N
si
)(A) e com inflexo (N
ci
)(B). A seta indica a inflexo presente na fase de repolarizao dos
neurnios com inflexo.

A
B
7 mV
2 ms
62
5.5.2 Anlise eletrofisiolgica da corrente limiar

Na anlise da corrente limiar do GRD direito, os resultados apresentados
na Figura 16A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
). Nesses neurnios,
obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 2,040,17 nA, no grupo
imobilizado 1,320,19 nA, no grupo diabtico 1,190,13 nA e no grupo diabtico
imobilizado 1,110,17 nA. Na Figura 16B, correspondente aos neurnios com
inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 1,490,23 nA,
no grupo imobilizado 0,890,10 nA, no grupo diabtico 0,810,13 nA e no grupo
diabtico imobilizado 0,840,10 nA. Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05) nos neurnios com e sem inflexo, entre o grupo controle e os grupos
imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado, observando-se em ambas as figuras
uma reduo das mdias em relao ao grupo controle.

63

Figura 16. Corrente limiar avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B) do GRD direito
dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito foi o
lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores
absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa significncia entre
os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico; #(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos gnglios da raiz dorsal
de ratos.

B
*
#
**
Neurnios N
ci

C
I
D
D
I
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
C (n=25)
I (n=32)
D (n=20)
DI (n=30)
Grupos
C
o
r
r
e
n
t
e

L
i
m
i
a
r

(
n
A
)
A
Neurnios N
si

C
I
D
D
I
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
C (n=29)
I (n=14)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
C
o
r
r
e
n
t
e

L
i
m
i
a
r

(
n
A
)
*
#
**
64
5.5.3 Anlise eletrofisiolgica da resistncia de entrada

Na resistncia de entrada do GRD direito, os resultados apresentados na
Figura 17A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
), obteve-se no grupo
controle a mdia erro padro de 6,600,78 M, no grupo imobilizado 7,541,88
M, no grupo diabtico 13,001,41 M e no grupo diabtico imobilizado 14,772,12
M. Na Figura 17B, correspondente aos neurnios com inflexo (N
ci
), obteve-se no
grupo controle a mdia erro padro de 10,241,47 M, no grupo imobilizado
14,551,75 M, no grupo diabtico 22,932,77 M e no grupo diabtico imobilizado
24,503,37 M. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si

(Figura 17A) e N
ci
(Figura 17B) entre os seguintes grupos: controle e diabtico;
controle e diabtico imobilizado; imobilizado e diabtico imobilizado. Pode-se
observar que em ambas as figuras apresentaram uma tendncia de aumento das
mdias em relao ao grupo controle e so inversamente proporcionais aos
respectivos resultados da corrente limiar (Figura 16AB).

65

Figura 17. Resistncia de entrada avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B) do
GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado
direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em
significncia entre os grupos controle e diabtico; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico
imobilizado; #(p<0,05) entre os grupos imobilizado e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de
clulas dos gnglios da raiz dorsal de ratos.

A
Neurnios N
si

C
I
D
D
I
0
10
20
30
C (n=28)
I (n=13)
D (n=13)
DI (n=19)
Grupos
R
e
s
i
s
t
n
c
i
a

d
e

e
n
t
r
a
d
a

(
M
)
**

#
Neurnios N
ci

B
C
I
D
D
I
0
10
20
30
C (n=25)
I (n=33)
D (n=18)
DI (n=31)
Grupos
R
e
s
i
s
t
n
c
i
a

d
e

e
n
t
r
a
d
a

(
M
)
#
**

66
5.5.4 Anlise eletrofisiolgica do potencial de repouso

Na Figura 18A representando o potencial de repouso do GRD direito
dos neurnios sem inflexo, apresentou mdia erro padro nos grupos controle de
-64,831,75 mV, imobilizado -65,692,47 mV, diabtico -67,333,49 mV e diabtico
imobilizado -57,261,69 mV. Na Figura 18B, representando o potencial de repouso
do GRD direito dos neurnios com inflexo apresentou mdia erro padro nos
grupos controle de -60,222,22 mV, imobilizado -57,002,01 mV, diabtico
-57,002,85 mV e diabtico imobilizado -54,832,05 mV. No houve diferena
estatisticamente significante (p<0,05).

67

Figura 18. Potencial de repouso avaliado nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B) do GRD
direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O lado direito
foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos em valores
absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). No houve significncia com p<0,05. n
indica o nmero de clulas dos gnglios da raiz dorsal de ratos.

C
I
D
D
I
-80
-60
-40
-20
0
C (n=29)
I (n=13)
D (n=12)
DI (n=19)
Grupos
P
o
t
e
n
c
i
a
l

d
e

R
e
p
o
u
s
o

(
m
V
)
Neurnios N
si

A
C
I
D
D
I
-80
-60
-40
-20
0
C (n=27)
I (n=31)
D (n=17)
DI (n=30)
Grupos
P
o
t
e
n
c
i
a
l

d
e

R
e
p
o
u
s
o

(
m
V
)
Neurnios N
ci
B
68
5.5.5 Anlise eletrofisiolgica da amplitude do potencial de ao

Na amplitude do potencial de ao do GRD direito, os resultados
apresentados na Figura 19A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
),
obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 75,921,75 mV, no grupo
imobilizado 64,222,79 mV, no grupo diabtico 61,133,53 mV e no grupo diabtico
imobilizado 63,862,85 mV. Na Figura 19B, correspondente aos neurnios com
inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 82,703,05 mV,
no grupo imobilizado 71,751,81 mV, no grupo diabtico 68,832,84 mV e no grupo
diabtico imobilizado 72,172,82 mV. Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05) nos N
si
(Figura 19A) e N
ci
(Figura 19B), entre o grupo controle e os grupos
imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado.

69

Figura 19. Amplitude do potencial de ao avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo
(B) do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI).
O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos
em valores absolutos esto apresentados como mdia EPM (ANOVA). *(p<0,05) representa
significncia entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico;
#(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos
gnglios da raiz dorsal de ratos.

C
I
D
D
I
0
20
40
60
80
100
C (n=29)
I (n=14)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
A
m
p
l
i
t
u
d
e

d
o

P
o
t
e
n
c
i
a
l

d
e

A
o

(
m
V
)
Neurnios N
si

A
*
#
**
*
#
**
Neurnios N
ci

B
C
I
D
D
I
0
20
40
60
80
100
C (n=27)
I (n=34)
D (n=21)
DI (n=32)
Grupos
A
m
p
l
i
t
u
d
e

d
o

P
o
t
e
n
c
i
a
l

d
e

A
o

(
m
V
)
70
5.5.6 Anlise eletrofisiolgica da inclinao mxima ascendente (dV/dT
asc
)

Na dV/dt
asc
do GRD direito, os resultados apresentados na Figura 20A,
correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
), obteve-se no grupo controle a
mdia erro padro de 192,6010,26 V/s, no grupo imobilizado 136,6014,44 V/s,
no grupo diabtico 127,4012,29 V/s e no grupo diabtico imobilizado 145,6012,44
V/s. Na Figura 20B, correspondente aos neurnios com inflexo (N
ci
), obteve-se no
grupo controle a mdia erro padro de 128,8013,83 V/s, no grupo imobilizado
86,045,42 V/s, no grupo diabtico 67,4810,19 V/s e no grupo diabtico imobilizado
92,347,30 V/s. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si

(Figura 20A) e N
ci
(Figura 20B), entre o grupo controle e os grupos imobilizado,
diabtico e diabtico imobilizado.

71

Figura 20. Inclinao mxima ascendente avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B)
do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O
lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos

Neurnios N
si

A
*
#
**
C
I
D
D
I
0
50
100
150
200
250
C (n=27)
I (n=12)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o

M
x
i
m
a

A
s
c
e
n
d
e
n
t
e

(
V
/
s
)
C
I
D
D
I
0
50
100
150
200
250
C (n=26)
I (n=33)
D (n=20)
DI (n=31)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o

M
x
i
m
a

A
s
c
e
n
d
e
n
t
e

(
V
/
s
)
*
#
**
Neurnios N
ci

B
72
5.5.7 Anlise eletrofisiolgica da inclinao mxima descendente (dV/dT
desc
)

Na dV/dt
desc
do GRD direito, os resultados apresentados na Figura 21A,
correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
), obteve-se no grupo controle a
mdia erro padro de -122,95,70 V/s, no grupo imobilizado -93,006,80 V/s, no
grupo diabtico -88,466,83 V/s e no grupo diabtico imobilizado -100,205,83 V/s.
Na Figura 21B, correspondente aos neurnios com inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo
controle a mdia erro padro de -66,356,39 V/s, no grupo imobilizado -47,912,78
V/s, no grupo diabtico -40,332,42 V/s e no grupo diabtico imobilizado -49,194,09
V/s. Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si
(Figura 21A) e N
ci
(Figura 21B), entre o grupo controle e os grupos imobilizado, diabtico e diabtico
imobilizado.

73

Figura 21. Inclinao mxima descendente avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo
(B) do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI).
O lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos

*
#
**
A
Neurnios N
si

C
I
D
D
I
-150
-100
-50
0
C (n=28)
I (n=13)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o

M
x
i
m
a

D
e
s
c
e
n
d
e
n
t
e

(
V
/
s
)
C
I
D
D
I
-150
-100
-50
0
C (n=27)
I (n=31)
D (n=21)
DI (n=29)
Grupos
I
n
c
l
i
n
a
o

M
x
i
m
a

D
e
s
c
e
n
d
e
n
t
e

(
V
/
s
)
*
#
**
B Neurnios N
ci

74
5.5.8 Anlise eletrofisiolgica da durao do potencial de ao

Na durao do potencial de ao do GRD direito, os resultados
apresentados na Figura 22A, correspondentes aos neurnios sem inflexo (N
si
),
obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 0,710,02 ms, no grupo
imobilizado 0,840,10 ms, no grupo diabtico 1,010,06 ms e no grupo diabtico
imobilizado 0,960,07 ms. Na Figura 22B, correspondente aos neurnios com
inflexo (N
ci
), obteve-se no grupo controle a mdia erro padro de 2,040,17 ms,
no grupo imobilizado 2,750,21 ms, no grupo diabtico 3,240,30 ms e no grupo
diabtico imobilizado 3,140,33 ms. Houve diferena estatisticamente significante
(p<0,05), nos N
si
Houve diferena estatisticamente significante (p<0,05) nos N
si

(Figura 22A) e N
ci
(Figura 22B), entre o grupo controle e os grupos diabtico e
diabtico imobilizado.

75

Figura 22. Durao do potencial de ao avaliada nos neurnios sem inflexo (A) e com inflexo (B)
do GRD direito dos grupos controle (C), imobilizado (I), diabtico (D) e diabtico imobilizado (DI). O
lado direito foi o lado imobilizado nos animais submetidos imobilizao. Os resultados expressos
significncia entre os grupos controle e diabtico; **(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico
imobilizado. O n indica o nmero de clulas dos gnglios da raiz dorsal de ratos.

C
I
D
D
I
0
1
2
3
4
C (n=29)
I (n=14)
D (n=14)
DI (n=19)
Grupos
D
u
r
a
o

d
o

p
o
t
e
n
c
i
a
l

d
e

a
o

(
m
s
)
Neurnios N
si

A
#
**
Neurnios N
ci

B
C
I
D
D
I
0
1
2
3
4
C (n=24)
I (n=32)
D (n=21)
DI (n=30)
Grupos
D
u
r
a
o

d
o

p
o
t
e
n
c
i
a
l

d
e

a
o

(
m
s
)
#
**
76
6 DISCUSSO

A imobilizao de um membro do corpo acarreta limitaes fsicas
provisrias podendo resultar numa alterao de sua funcionalidade. Entretanto, esta
situao poder agravar-se quando o paciente for diabtico. Tendo em vista poucos
estudos relatados na literatura correlacionando imobilizao e diabetes, o
Laboratrio de Eletrofisiologia da Universidade Estadual do Cear (UECE), props
investigar a caracterizao dos efeitos da imobilizao e da interao
imobilizao/diabetes em animais experimentais, avaliando os parmetros
eletrofisiolgicos do nervo citico e gnglio da raiz dorsal, os quais podem contribuir
para um melhor entendimento dos efeitos da imobilizao e da interao
imobilizao/diabetes.
No presente trabalho optou-se pelo estudo da imobilizao da pata direita
de ratos associada ou no ao diabetes experimental, tendo como base a anlise de
quatro grupos experimentais: controle, imobilizado, diabtico, diabtico imobilizado,
acompanhados por um perodo de seis semanas, sendo as primeiras quatro
semanas de diabetes e mais duas semanas de imobilizao.
O mtodo proposto de imobilizao por Carvalho (2001), no foi adotado
por apresentar o aparecimento de edemas na regio imobilizada. Ento, o mtodo
de imobilizao foi alterado utilizando esparadrapo impermevel que envolveu o
membro posterior direito. A imobilizao realizada nos grupos imobilizado e
diabtico imobilizado foi mantida por duas semanas, sendo necessria a
manuteno em virtude da diurese e desgaste do esparadrapo.
A induo do diabetes experimental utilizando-se de substncias qumicas
que destroem seletivamente as clulas do pncreas extremamente conveniente,
e de fcil manuseio devido s suas semelhanas clnicas, laboratoriais e
histopatolgicas com o diabetes do ser humano (GREENE et al., 1975; JAKOBSEN,
1976; MERING; MINKOWSKI, 1889; HETHERINGTON; RANSON, 1940; MORDES;
ROSSINI, 1985). Por essa razo, em nosso trabalho foi utilizada a droga
streptozotocina.
Os animais do grupo controle e imobilizado apresentaram mdias de
glicemia de jejum compatveis com o metabolismo normal da glicose na espcie, em
77
todo perodo experimental. J, os grupos diabtico e diabtico imobilizado
mostraram nveis glicmicos significantemente elevados, decorrentes do diabetes
induzido pela estreptozotocina (SPADELLA et al., 1996, 1998, 2000, 2002, 2005;
LERCO et al., 2006).
Na anlise da massa corprea ao final das seis semanas do perodo
experimental, houve um dficit da massa corporal em relao a idade, nos grupos
imobilizado e diabtico imobilizado em relao aos grupos controle e diabtico,
devido possivelmente, a atrofia muscular decorrente da imobilizao da pata traseira
direita.
A ingesta alimentar apresentou-se alterada nos grupos diabtico e
diabtico imobilizado. A polifagia, produzida em resposta diminuio relativa ou
absoluta de glicose no interior das clulas, em decorrncia da reduo na produo
e/ou ao da insulina (COSTA; ALMEIDA NETO, 2004), um sinal detectado nos
ratos diabticos utilizados neste estudo. Nos animais do grupo diabtico e diabtico
imobilizado, os valores da varivel ingesto alimentar foram maiores que os
apresentados pelos grupos controle e imobilizado, respectivamente.
Quando analisada a ingesta alimentar os grupos imobilizado e diabtico
imobilizado no deixaram de consumir o alimento comparados aos grupos controle e
diabtico, confirmando assim que, durante as duas semanas de imobilizao, os
animais no deixaram de se alimentar.
Os dados obtidos dos parmetros eletrofisiolgicos demonstraram que de
uma maneira geral houve uma reduo da primeira componente do potencial de
ao composto da fibra do nervo citico e uma tendncia ao aumento da segunda
componente para os grupos imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado
comparados com o grupo controle. A diminuio da primeira componente
provavelmente devida ao comprometimento das fibras motoras decorrentes das
alteraes da imobilizao e da diabetes. Como no presente estudo utilizamos
apenas o nervo, esta alterao da primeira componente mostra uma alterao
primria do citico. Este um aspecto importante a ressaltar, pois sabido que com
a imobilizao, h uma reduo de unidades motoras distais em junes
neuromusculares, como tambm, alterao do mecanismo de disparo subsequentes
imobilizao, que representam modificao do grau de atividade neural, vista
atravs da eletroneuromiografia sobre o tecido muscular, podendo ter alterao no
78
sistema nervoso perifrico, gerando um padro de leses degenerativas que
comeam nos terminais distais, resultando em alteraes sensitivas (McCOMAS et
al., 1971). Por outro lado o aumento na segunda componente do PAC do nervo
citico pode representar um aumento da excitabilidade de neurnios sensoriais, que
inclui componentes inflamatrios a nvel tecidual. Esse aumento da excitabilidade
quando relacionado ao gnglio da raiz dorsal (GRD), devido ao aumento de canais
de sdio e clcio ao nvel celular (NOKES et al., 1991; CATTERALL et al., 2001;
HONG; WILEY, 2006).
O nervo citico constitudo em sua maior parte por fibras do tipo A,
segundo a classificao de Erlanger e Gasser, apresentando os subtipos A, A, A,
A e fibras do tipo C. Estas fibras apresentam dimetros, velocidades, limiar de
excitabilidade e possivelmente populaes de canais de Na
+
diferentes (NOKES et
al., 1991; CATTERALL; MACKIE, 1996; JUNGE, 1976). A primeira componente do
potencial de ao constituda pelas respostas das fibras do tipo A e A. A
segunda e terceira componentes so constitudas por respostas de fibras sensoriais
e motoras (A e A).
A amplitude pico-a-pico reflete a quantidade de fibras que esto sendo
despolarizadas simultaneamente. Os resultados apresentados demonstraram que
um aumento da frequncia de estmulo gera uma diminuio da amplitude do sinal
de todos os grupos. Os valores da amplitude dos grupos imobilizado e diabtico
foram inferiores, comparados com o grupo controle. No grupo diabtico imobilizado
ocorreu o inverso, sendo superior ao grupo controle at a frequncia de 50 Hz por
apresentar uma maior amplitude negativa. Ainda no temos explicao para o fato
da amplitude pico-a-pico no grupo diabtico imobilizado ser superior ao grupo
controle nas frequncias de estimulao de 0,2 Hz a 50 Hz.
Os valores da velocidade de conduo da primeira componente do nervo
citico direito foram menores nos grupos diabtico imobilizado, imobilizado e
diabtico em relao ao controle. Havendo diferena estatisticamente significante
(p<0,05) nos grupos imobilizado e diabtico imobilizado em relao ao controle nas
frequncias de 0,2 Hz at 100 Hz. J a velocidade de conduo da segunda
componente, embora houvesse uma discreta reduo das velocidades de conduo
dos grupos em relao ao grupo controle, no foi significante.
79
A alterao do axnio pode ser originada de dois grandes grupos:
degenerao axonal e desmielinizao (LUNDBORG, 2000). Malone et al. (1996)
encontraram uma diminuio do dimetro da fibra nervosa, da espessura da bainha
de mielina e do nmero de fibras mielinizadas de maior calibre, em animais com
diabetes induzido na 6 semana de vida. Esses dados esto de acordo com a
reduo da amplitude e da velocidade de conduo do primeiro componente do PAC
aqui documentadas. Os animais em processo de maturao, tanto estrutural quanto
funcional, do nervo perifrico, e expostos hiperglicemia crnica, apresentaram
maiores alteraes patolgicas quando comparados aos ratos com nervos j
maduros e submetidos s mesmas condies experimentais. Os autores sugerem
que modelos-animais de neuropatia diabtica que utilizem ratos com o sistema
nervoso ainda imaturo podem no ser apropriados para compreender o processo
que comumente ocorrem em humanos, os quais tornam-se diabticos aps a
maturao dos nervos perifricos. No presente estudo trabalhamos com ratos
maturos (iniciando com ratos de oito semanas) e as alteraes eletrofisiolgicas
encontradas so coerentes com o que se esperaria das alteraes morfolgicas
escrita por Malone et al. (1996).
Os nervos mielinizados apresentam uma conduo saltatria do potencial
de ao, pois a excitabilidade destes nervos est localizada nos ndulos de Ranvier.
A mielina age como um conjunto de resistores e capacitores em paralelo, sem
participao direta na gerao do potencial de ao (FALK; STALBERG, 1995). Nos
segmentos desmielinizados ou durante a remielinizao parcial, a diminuio da
espessura de mielina resulta em um aumento da capacitncia e condutncia
internodal, resultando na perda ou diminuio de corrente local. As falhas para se
ativar o ndulo de Ranvier subseqente resultam em bloqueio de conduo, porm
quando h um retorno da funo, os impulsos se propagam mais lentamente do que
o normal, porque a corrente dissipada despende um maior tempo para gerar um
potencial de ao (KIMURA, 1984).
A velocidade de conduo nervosa em um nervo saudvel depende do
dimetro da fibra nervosa, da relao entre o dimetro do axnio e da bainha de
mielina e da distncia entre os ndulos de Ranvier (FALK; STALBERG, 1995). A
desmielinizao segmentar das fibras nervosas, comum no diabetes, produz um
bloqueio do impulso nervoso, o qual restabelecido aps o incio do processo de
80
remielinizao. No processo de remielinizao das fibras nervosas so gerados
novos ndulos de Ranvier, os quais apresentam uma menor distncia entre si,
resultando em uma mudana das caractersticas funcionais do nervo correspondente
(FALK; STALBERG, 1995; HILBURN, 1996).
Segundo Karsidag et al. (2005) as alteraes de conduo nervosa so
mais freqentes nas fibras mielinizadas de maior dimetro nos estgios iniciais do
diabetes, embora tambm haja um envolvimento das fibras desmielinizadas e
mielinizadas de menor calibre, especialmente nas extremidades inferiores. As
alteraes da conduo nervosa no presente estudo parecem haver sido mais
profundas nos axnios de maior dimetro (aqueles com maior velocidade de
conduo). Este achado concorda com os dados de Karsidag et al. (2005).
Em relao aos nervos dos ratos que sofreram apenas imobilizao, as
alteraes neuronais eletrofisiolgicas so muito semelhantes aquelas do animal
diabtico. No encontramos na literatura dados de alteraes neurais morfolgicas
por imobilizao com protocolo similar ao nosso, aqui empregado. Contudo a
similaridade das alteraes funcionais com o diabetes demonstra que a imobilizao
pode causar modificaes importantes do nervo.
Durante a imobilizao h um perodo adaptativo funcional do organismo
em reorganizar esta velocidade de conduo, j que possivelmente h uma atrofia
na estrutura muscular. E quando h interao diabetes/imobilizao sugere-se haver
uma reduo da velocidade de conduo tambm pela alterao metablica e
sistmica do organismo. Um dado dos nossos achados nos pareceu surpreendente,
trata-se do conspcuo aumento da amplitude da segunda componente do PAC. No
temos ainda uma explicao clara para este fenmeno. Uma hiptese que nos
parece atraente, contudo, aquela de que fibras de velocidade de conduo de
primeira componente passarem a ter velocidade de conduo de segunda
componente, e assim passarem a reforar a amplitude da segunda componente. A
velocidade de conduo pode ser diminuda por reduo da corrente de Na
+
ou por
aumento da capacitncia de membrana, como j discutido. Mas, independentemente
da origem da reduo, ela iria aumentar o nmero de potenciais com velocidade de
segunda componente.
A reobase a intensidade mnima necessria para se obter uma
despolarizao da fibra atravs de um impulso de longa durao. Em nosso estudo,
81
houve uma reduo das mdias nos grupos diabtico e imobilizado em relao ao
controle, resultando um aumento da excitabilidade nervosa. Este aumento da
excitabilidade no nervo citico est correlacionado com a reduo da corrente limiar
no gnglio da raiz dorsal que sofre alteraes dos canais de sdio e potssio. No
grupo diabtico imobilizado observou-se o inverso, apresentando um aumento da
mdia comparada com os demais grupos. Uma hiptese para explicar este aumento
da reobase no grupo diabtico imobilizado que talvez o curso temporal das
alteraes seja acelerado, pois sabido da literatura que no incio da diabetes h
aumento da excitabilidade e depois, com a progresso da doena h uma
diminuio.
Os resultados da cronaxia demonstraram um aumento da mdia nos
grupos que sofreram imobilizao (imobilizado, diabtico imobilizado) em relao
aos grupos controle e diabtico, havendo diferena estatisticamente significante
entre os grupos controle e imobilizado; imobilizado e diabtico; diabtico e diabtico
imobilizado. O aumento da cronaxia do nervo pode-se originar de uma diminuio da
mielinizao do axnio ou de uma diminuio de canais de sdio no nodo de
Ranvier. No presente estudo, com a imobilizao houve uma tendncia do aumento
da excitabilidade (diminuio da reobase) e aumento da cronaxia. Esse dado
poderia sugerir que haveria diminuio na imobilizao, mas esta hiptese necessita
de confirmao por estudos morfolgicos.
A forma do potencial de ao registrado intracelularmente est
relacionada com a modalidade sensorial conduzida pelo neurnio. McCarthy e
Lawson (1987) mostraram que os neurnios do gnglio da raiz dorsal que
expressam substncia P e gene relacionado calcitonina (dois peptdeos ligados a
nocicepo) esto associados com os PAs que apresentam uma inflexo na fase de
repolarizao. Estes neurnios, por sua vez, esto relacionados com as clulas de
menor dimetro que conduzem lentamente o PA, sendo representados
predominantemente por neurnios sensoriais do tipo A e C. Os PAs sem inflexo
caracterizam neurnios de grande dimetro do tipo A/ muitos dos quais so
mecanoceptores (McCARTHY; LAWSON, 1997; DJOUHRI et al., 1998; RUSH et al.,
2007). Com base na informao contida na literatura cientfica e a construo do
plano de fase desses neurnios, ns classificamos N
si
como neurnios
mecanoceptores e N
ci
como nociceptores.
82
Estudos anteriores demonstraram que os neurnios nociceptivos
apresentaram durao e amplitude maiores do que os neurnios mecanoceptivos.
Estas observaes esto de acordo com os valores de controle obtidos por ns
neste estudo, o que sugere uma classificao fidedigna dos nossos estudos.
Em relao a corrente limiar no GRD, houve uma reduo das mdias
dos grupos imobilizado, diabtico e diabtico imobilizado comparados com o grupo
controle. Este fato deve-se ao aumento da excitabilidade provavelmente devida e
alterao nos canais de sdio e/ou potssio.
As alteraes nos canais de sdio e potssio podem implicar alteraes
do fluxo de ons do fluxo inico normalmente a membrana citoplasmtica, em
repouso, mais permevel aos ons K
+
e os valores de potencial de membrana
aproximam-se do valor do potencial eletroqumico deste on (HODGKIN; HUXLEY,
1939; HODGKIN; KATZ, 1949). Quando a membrana excitada, ocorre o aumento
de sua condutncia ao Na
+
, direcionando esse on para o interior da clula a favor
de um gradiente eletroqumico. Esse processo promove uma despolarizao. Esta,
ao atingir o limiar de excitabilidade, desencadeia o potencial de ao, considerado
como a resposta tipo tudo ou nada, que se propaga por toda a fibra nervosa (BEST;
TAYLOR, 1990; BERNE; LEVY, 2004). O potencial de ao ocorre com uma
inverso no potencial de membrana, aproximando-o do valor do potencial
eletroqumico do Na
+
(HODGKIN; HUXLEY, 1939; HODGKIN; KATZ, 1949). Dessa
forma, para que haja o potencial de ao neural, necessrio que haja um grande
aumento da condutncia ao Na
+
em relao condutncia ao K
+
. Assim, o aumento
da excitabilidade no neurossoma do GRD do rato diabtico imobilizado deve-se ao
aumento do nmero de canais de Na
+
da membrana ou alteraes dos parmetros
cinticos dos canais de Na
+
ou uma diminuio da condutncia de membrana ao K
+
ou ambos. No presente estudo, como houve tendncia aumento na resistncia de
entrada da membrana, muito provvel que tenha havido uma diminuio na
condutncia ao K
+
, a qual contribui para o aumento da excitabilidade.
Coincidentemente com a fase de repolarizao do PA, a condutncia
aumentada aos ons Na
+
logo cessa e a permeabilidade aos ons K
+
rapidamente
restaurada, fazendo com que o potencial de membrana retorne ao seu estado
original de negatividade atravs da abertura dos canais de K
+
e, principalmente,
atravs de um processo chamado inativao do canal de Na
+
. O potencial de ao
83
nervoso um fenmeno muito rpido, da ordem de apenas alguns milissegundos. A
amplitude do potencial de ao demonstrou ser amplamente dependente da
concentrao externa de Na
+
e insensvel diminuio do K
+
extracelular para
valores inferiores aos fisiolgicos (BEST; TAYLOR, 1990).
No que concerne resistncia de entrada da membrana do GRD, os
resultados demonstraram uma tendncia a aumento dos grupos diabtico
imobilizado, diabtico e imobilizado em relao ao controle, semelhante durao
do PA. Este fato deve-se muito provavelmente ao fechamento dos canais de
potssio, o que causa a diminuio da permeabilidade dos ons potssio, aumento
da durao do PA e da excitabilidade.
Uma diminuio da condutncia ao K
+
pode resultar ou no na alterao
do potencial de repouso. Isso se deve a que algumas condutncia ao K
+
, como a da
corrente M, podem no incluir a voltagem transmembrana ao potencial de repouso
na sua faixa da modificao do estado da ativao dependente de voltagem. No
presente estudo houve uma tendncia alterao do potencial de repouso apenas
nos neurnios sem inflexo do grupo diabtico imobilizado em relao ao controle.
Esses dados sugerem, portanto que a alterao da condutncia ao K
+
, se real,
ocorreu apenas para uma condutncia que no contribuiu de maneira importante
para o potencial de repouso. Uma candidata atraente a corrente M de potssio.
Esta corrente M (I
M
) carreada por ons potssio, ativada e desativada lentamente e
no possui mecanismo de inativao. Essa corrente est ligada ao controle da
gerao do PA, pois ela atua na repolarizao da membrana celular em direo ao
valor de repouso do potencial de membrana. Alm disso, a inibio da I
M
resulta em
pequena ou nula despolarizao, aumento da resistncia da membrana e um
conspcuo aumento na excitabilidade celular (IKEDA; KAMMERMEIER, 2002).
O potencial de ao foi alterado. Houve uma tendncia reduo
significante e da dV/dT mxima ascendente e da dV/dT mxima descendente,
sugerindo diminuio dos canais de Na
+
e fechamento de canais de K
+
. Esse dado
corrobora que o aumento da excitabilidade foi devido a uma diminuio da
condutncia ao potssio, tornando assim tambm mais lenta a repolarizao e
aumento da durao.

84
7 CONCLUSO

1. Houve uma reduo da amplitude e da velocidade de conduo da 1 componente
do potencial de ao composto da fibra do nervo citico e um aumento da 2
componente em relao ao controle para os grupos imobilizados, diabticos e
diabticos imobilizados. Sugerindo um comprometimento das fibras motoras
decorrentes das alteraes da imobilizao e da diabetes, e um aumento da
excitabilidade dos neurnios sensoriais.

2. Houve de uma maneira geral uma tendncia a aumento da excitabilidade medida
atravs de vrios parmetros, que possivelmente resulta de uma diminuio da
condutncia de repouso ao potssio, j que nos neurossomas do GRD houve
aumento da resistncia de membrana e diminuio da dV/dT ascendente e dV/dT
descendente.

3. Devido a no alterao do potencial de repouso, sugere-se que a alterao da
excitabilidade se deva principalmente ao bloqueio da corrente M de potssio.

85
REFERNCIAS

AIDLEY, D. J. The physiology of excitable cells. 4 ed. Cambridge: Cambridge
University Press 35 71, 1998.

ALLEN, D. T.; KIERNAN, J. A. Permeation of proteins from the blood into peripheral
nerves and ganglia. Neuroscience, 59: 755-764, 1994.

AMERICAN DIABETES ASSOCIATION AND AMERICAN ACADEMY OF
NEUROLOGY. Proceedings of a consensus development conference on
standardized measures in diabetic neuropathy. Diabetes Care; 15:1080-107, 1992.

AMERICAN DIABETES ASSOCIATION. American Academy of Neurology Report
and recommendations of the San Antonio Conference on Diabetic Neuropathy
Consensus Statement. Diabetes Care;11:592-7, 1988.

ARDUINO, F. Diabetes Mellitus e suas complicaes. Ed. Rio de Janeiro; p.249-341,
v.1, 1980.

BEHMER, O. A.; TOLOSA, E. M. C.; NETO, A. G. F.; RODRIGUES, C. J. Manual de
Tcnicas para Histologia Normal e Patolgica. 2.ed. Barueri: Manole, 2003.

BERNE, R. M.; LEVY, M. N.; KOEPPEN, B. M.; STANTON, B. A. Physiology. 5
th

edition. Ed. Mosby, St. louis, USA, 2004.

BEST, C.; TAYLOR, N. Physiological basis of medical practice. 12 ed. Baltimore:
Willians & Wilkins. 24-46, 1990.

BLACK, J. A.; DIB-HAJJ, S.; McNABOLA, K.; JESTE, S.; RIZZO, M. A.; KOCSIS, J.
D.; WAXMAN, S. G. Spinal sensory neurons express multiple sodium channel -
subunit mRNAs. Molecular Brain Research, v. 43, p.117-131,1996.

BOOTH, F. W. Effect of immobilization on skeletal muscle. J Appl. Physiol. 52 (2)
1113-1118, 1982.

BOOTH, F. W.; KELSO, J. R. Production of rat muscle atrophy by cast fixation.
Journal of Applied Physiology, Bethesda, v. 34 p. 404-406, March,1973.

86
BROWN, M. J.; SUMNER, A. J.; GREENE, D. A.; DIAMOND, S. M.; ASBURY, A. K.
Distal neuropathy in experimental diabetes mellitus. Ann Neurol; 8: 168-78, 1980.

BROWNLEE, M. Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications.
Nature ; 414:813-20, 2001.

CAMPBELL, D. T. Large and small vertebrate sensory neurons express different Na
+

and K
+
channel subtypes. Neurobiology, v. 89, p. 9569-9573, 1992.

CARVALHO, C. M. M. Efeitos da imobilizao e do exerccio fsico em algumas
propriedades mecnicas do msculo esqueltico. Dissertao (Mestrado)
Interunidades em Bioengenharia, Universidade de So Paulo, 2001.

CATTERALL, W.; MACKIE, K. Local anesthesic., 1996. In: GOODMAAN, L.S;
GLILMAN, A. The pharmacological basis of therapeutics. 9.ed. USA: Mcgraw-Hill
Companies Inc., p.95-166, 2001.

CATTERALL, W.; MACKIE, K. Local anesthesic. In: GOODMAAN, L.S; GILMAN, A.
The pharmacological basis of therapeutics. 9.ed. USA: Mcgraw-Hill Companies Inc.,
p.331-347, 1996.

CHANG, S. K; LUNG, D. D. Alterations in the baroreceptor reflex control of heart rate
in strptozotocin diabetic rats. J Molec Cell Cardiol; 18: 617-24, 1986.

COSTA, A. A., ALMEIDA NETO, J. S. Manual de diabetes: educao, alimentao,
medicamentos e atividades fsicas. 4.ed. So Paulo: Savier, p.204, 2004.

DEVOR, M. Unexplained peculiarities of the dorsal root ganglion. Pain Supplement,
6: S27-S35, 1999.

DJOUHRI, L.; JBLEAZARD, L.; LAWSON S. N. Association of somatic action
potencial shape with sensory receptive properties in guinea-pig dorsal root ganglion
neurons. Journl of Physiology, v. 513, p. 857-872, 1998.

DYCK, P. J; GIANNINI, C. Phatologic alteration in the diabetic neuropaties of human.
Neurophatol Exp Neurol; 55: 1181-93, 1996.

DYCK, P. J; LAIS, A.; KARNES, J. L.; OBRIEN P.; RIZZA R. Fiber loss is primary
and multifocal in sural nerves in diabetic polyneuropathy. Ann Neurol; 19(5):425-39,
1986.
87
ECKBERG, D. L.; HARKINS, S. W.; FRISCH, J. M.; MUSGRAVE, G. E.; GARDNER,
D. F. Baroreflex control of plasma norepinephrine and heart rate period in healthy
subjects and diabetic patients. J Clin Invest; 78: 366-74, 1986.

EVANS, J. S.; GERRTSEN, G. C.; MANN, K. M.; OWEN, S. P. Antitumor and
hyperglycemic activity of streptozotocin (NSC-37917) and its cofactor, U-15, 774.
Cancer Chemother Rep; 48: 1-6, 1965.

FACER, P. et al. Differential expression of the capsaicin receptor TRPV1 and related
novel receptors TRPV3, TRPV4 and TRPM8 in normal human tissues and changes
in traumatic and diabetic neuropathy.BMC Neurology, 7-11, 2007.

FALCK, B.; STALBERG, E. Motor nerve conduction studies: measurement principles
and interpretation of findings. Journal of Clinical Neurophysiology. v.12, p.254-79,
1995.

FALEMPIN, M.; MOUNIER, Y. Muscle atrophy associated with microgravity in rat:
basic data for countermeasures. Acta Astronautica. 42, 489-502, 1998.

FELDMAN, E. L. Oxidative stress and diabetic neuropathy: a new understanding of
an old problem. J Clin Invest; 111:431-3, 2003.

FJELL, J.; HJELMSTROM, P.; HORMUZDIAR, W.; MILENKOVIC, M.; AGLIECO, F.;
TYRRELL, L.; DIB-HAJJ, S.; WAXMAN, S. G.; BLACK, J. A. Localization of the
tetrodotoxin-resistant sodium channel NaN in nociceptors. Neuroreport, v. 11, p. 199-
202, 2000.

FOX, A.; EASTWOOD, C.; GENTRY, C.; MANNING, D.; URBAN, L. Critical
evaluation of the streptozotocin model of painful diabetic neuropathy in the rat. Pain.
81:307316, 1999.

GASSER, H. S. Pain-producing impulses in peripheral nerves. Assoc. Res. Nerv.
Ment. Dis., Proc. 23: 44 62, 1943.

GENESER, F. Histologia, com bases biomoleculares. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2003.

GOLD, G.; MANNING, M.; HELDT, A.; NOWLAIN, R.; PETTIT, J. R.; GRODSKY, G.
M. Diabetes induced with multiple subdiabetogenic doses of streptozotocin. Lack of
protection by exogenous superoxide dismutase. Diabetes; 30: 634-8, 1981.

88
GRENNE, D. A.; JESUS Jr.; P. V.; WINEGRAD, A. I. Effect of insulin and dietary
myoinositol on impaired peripheral motor nerve conduction velocity in acute
streptozotocin diabetes. J. clin. Invest., v.55, p.1326-36, 1975.

GREENE, D. A.; STEVENS, M. J.; OBROSOVA, I.; FELDMAN, E. L. Glucoseinduced
oxidative stress and programmed cell death in diabetic neuropathy. Eur J Pharmacol;
375(1-3):217-25, 1999.

HARPER, A.A.; LAWSON, S.N. Conduction velocity is related to morphological cell
type in rat dorsal root ganglion neurons. The Journal of Physiology, v. 359: p. 31-46,
1985a.

HARPER, A. A.; LAWSON, S. N. Eletrical properties of rat dorsal root ganglion
neurons with different peripheral nerve conduction velocities. Journal of Physiology,
v. 359, p.47-63, 1985.

HETHERINGTON, A. W.; RANSON, S. W. Hipothalamic lesions and adiposity in the
rat. Anat. Rec., v.78, p.149-53, 1940.

HILBURN, J. W. General principles and use of electrodiagnostic studies in carpal and
cubital tunnel syndromes: with special attention to pitfalls and interpretation. Hand
Clinics, v.12, p.205-21, 1996.

HODGKIN, A. L.; HUXLEY, A. F. The ionic basis of nervours conduction. Science
145: 1148 1154, 1964.

HODGKIN, A. L.; HUXLEY, A. F.; KATZ, B. Measurement of current-voltage relations
in the membrane of giant axon of Loligo. Journal of Physiology (London) 116: 424
448, 1952.

HODGKIN, A. L.; HUXLEY, A. F. Currents carried by sodium and potassium ions
through the membrane of the giant axon of Loligo. Journal of Physiology (London)
116: 449 472, 1952a.

HODGKIN, A. L.; HUXLEY, A. F. A quantitative description of membrane current and
its aplication to conduction and excitation in nerve. Journal of Physiology (London)
117: 500 544, 1952b.

HODGKIN, A. L.; KATZ, B. The effect of sodium ions on the eletrical activity of the
giant axon of of the squid. Journal of Physiology, 108: 37 77, 1949.

89
HODGKIN, A. L.; HUXLEY A. F. Action potencials recorded from inside a nerve
fiber. Nature London. 144: 710 711, 1939.

HOFFMAN, P. N.; CLEVELAND, D. W.; GRIFFIN, J. W.; LANDES, P. W; COWAN,
N. J.; PRICE, D. L. Neurofilament gene expression: A major determinant of axonal
caliber. Neurobiology. Maio, Vol 84 pag 3472-3476, 1987.

HOLSHEIMER, J. D.; DIJKSTRA, E. A.; DEMEULEMEESTER, H.; NUTIM, B.
Chronaxy calculated from current-duration and voltage-duration data. Journal of
Neuroscience Methods, 97: 47-50, 2000.

HONG, S.; WILEY, J. W. Altered expression and function of sodium channels in large
DRG neurons and myelinated A-fibers in early diabetic neuropathy in the rat.
Biochemical and Biophysical Research Communications 339, 652-660, 2006.

HURSH, J. B. Conduction velocity and diameter of nerve fibers. American Journal of
physiology 127 (1): 131 139, 1939.

IKEDA, S. R.; KAMMERMEIER, P. J. M current mystery messenger revealed?
Neuron, vol. 35, n 3, pg. 411-412, 2002.

ITAI, Y.; KARIYA, Y.; HOSHINO, Y. Morphologicl changes in rat hindlimb muscle
fibers during recovery from disuse athropy. Acta Physiol. Scand. (181) 217-324,
2004.

JAKOBSEN, J. Axonal dwindling in early experimental diabetes: a study of isolated
nerve fibres. Diabetologia, v.12, p.547-53, 1976.

JAKOBSEN, J. Early and preventable changes of peripheral nerve structure and
function in insulin-deficient diabetic rats. J Neurol Neurosurg Psychiatr;42: 509-18,
1979.

JUNGE, D. Nerve and muscle excitation. Massachusetts: Sinauer Associates Inc. 7-
21, 1976.

JUNOD, A.; LAMBERT, A. E.; STAUFFACHER, W.; RENOLD, A. E. Diabetogenic
action of streptozotocin: relationship of dose to metabolic response. J Clin Invest;
48:2129-39, 1969.

KANDEL, E. R.; SCHWARTZ, J. H.; JESSEL, T. M. Princpios da Neurocincia. So
Paulo: Manole , 2003.
90
KARSIDAG, S.; MORALI, S.; SARGIN, M.; SALMAN, K.; KARSIDAG, K.; US, O. The
electrophysiological findings of subclinical neuropathy in patients with recently
diagnosed type 1 diabetes mellitus. Diabetes Res. Clin. Pract., v.67, p.211-9, 2005.

KASPER, C. E.; XUN L. Expression of titin in skeletal muscle varies with hind-limb
unloading. Biological Research for Nursing (2) 2 107-115, 2000.

KAUL, C. L. Role of sympathetic nervous system in experimental hypertension and
diabetes mellitus. Clin Exp Hypert; 21: 95-112, 1999.

KIMURA, J Principles and pitfalls of nerve conduction studies. Ann. Neurol., v.16,
p.415-29, 1984.

KING, K. M. A history of insulin: from discovery to modern alternatives. Br J Nurs.;
12(19):1137-41, 2003.

LAUN, I. C. Diabetes Gestacional. Rio de Janeiro: Revinter; p.05-55.v.1, 1993.

LERCO, M. M.; MACEDO, C. S.; SILVA, R. J.; PINHEIRO, D. O.; SPADELLA, C. T.
The and slit number of podocyte diaphragm is decresed in experimental diabetic
nephropathy. Acta Cir. Bras., v.21, p.87-91, 2006.

LIMA-ACCIOLY, P. M.; LAVOR-PORTO, P. R.; CAVALCANTE, F. S.; MAGALHES,
P. J.; LAHLOU, S.; MORAIS, S. M.; LEAL-CARDOSO, J. H. Essencial oil Crton
nepetaefolius and its main constituent, 1,8-cineole, block excitability of rat sciatic
nerve in vitro. Clinical and Experimental Pharmacological and Physiology, v. 33, p.
1158 1163, 2006.

LISHNER, M.; AKSERROD, S.; DIVON, M.; RAVID, M. Spectral analysis of heart
rate fluctuation. A non-invasive sensitive method for the early diagnosis of autonomic
neuropathy in diabetes mellitus. J Auton Nerv Syst; 19: 119-25, 1987.

LUNDBORG, G. A. 25-year perspective of peripheral nerve surgery: evolving
neuroscientific concepts and clinical significance. J. Hand Surg, v. 25A, p.391-414,
2000.

MACHIDA, S.; BOOTH, F. W. Regrowth of skeletal muscle atrophied from inactivity.
Md. Sci. Sports Exerc. 36 (1), 52-59, 2004.

91
MAEDA, C. Y.; FERNANDES, T. G.; LUTHIER, F.; IRIGOYEN, M. C. Streptozotocin
diabetes changes arterial pressure and baroreflex sensitivity in rats. Braz J Med Biol
Res; 28: 497-501, 1995a.

MAEDA, C. Y.; FERNANDES, T. G.; TIMM, H. B.; IRIGOYEN, M. C. Autonomic
dysfunction in short term experimental diabetes. Ypertension; 26: 1100-4, 1995b.

MALAISSE, W. J. Alloxan toxicity to the pancreatic B-cell. A new hypothesis.
Biochem Pharmacol; 31: 3527-34, 1982.

MALONE, J. I.; LOWITT, S.; KORTHALS, J. K.; SALEM, A.; MIRANDA, C. The effect
of hyperglycemia on nerve conduction and structure is age dependent. Diabetes,
v.45, p. 209-15, 1996.

MANSFORD, K. R. L.; OPIE, L. Comparison of metabolic abnormalities in diabetes
mellitus induced by streptozotocin or alloxan. Lancet; 1: 670-1, 1968.

MCCARTHY, P. W.; LAWSON, S. N. Differing action potencial shapes in rat dorsal
root ganglion neurons related to their substance P and calcitonin generelated peptide
immunoreactivity. Journal of Comparative Neurology, v. 388, p. 541-549, 1997.

MCCOMAS, A. J.; FAWCETT, P. R. W.; CAMPBELL, M. J. Electrophysiological
estimation of the number of motor units within a human muscle. J Neuro Neurosurg
Psychiatry; 34:121-31, 1971.

MCDOWELL, T. S.; HAJDUCZOK, G.; ABBOUD , F. M.; CHAPLEAU, M. W.
Baroreflex disfunction in diabetes mellitus. I. Selective impairment of
parasympathetic control of heart rate. Am J Physiol Heart Circ Physiol; 266: 235-43,
1994.

MEIRI, K. F.; PEKINER, C.; DENT, E. W.; ROBERTS, R. E.; MCLEAN, W. G. Altered
GAP-43 immunoreactivity in regenerating sciatic nerve of diabetic rats. Diabetes 45,
199204, 1996.

MENDEZ, J. D.; RAMOS, H. G. Animals models in diabetes research. Arch Med Res;
25:367-75, 1995.

MERING, J. V.; MINKOWSKI, O. Diabetes mellitus nach pankrease x stirpation.
Arch. Exp. Pathol. Pharmacol., v.26, p.371-87, 1889.

92
MORDES, J. P.; ROSSINI, A. A. Animal models of diabetes. Am J Med; 70: 353-60,
1981.

MORDES, J. P.; ROSSINI, A. A., Animal model of diabetes mellitus. In: MARBLE, A.,
KRALL, L.P., BRADLEY, R.F., CHRISTLIEB, A.R., SOELDNER, J.S. (Eds) Joslins
diabetes mellitus. Philadelphia: Lea & Febiger, p.110-37, 1985.

NAVARRO, X.; VERD, E. Brain damage and repair. From molecular research to
clinical therapy. In: HERDEGEN, T.; DELGADO-GARCIA, J.M. eds. Cell transplants
and artificial guides for nerve repair. Klumer Dordrecht/Boston/London Academic
Publishers, 2004, pp. 451-471.

NOKES, L. D. M.; DANIEL. D.; FLINT, T.; BARASI, S. Investigations into the analysis
of the rate of decay of the compound actions potentials recorded from the rat sciatic
nerve after death: Significance for the prediction of the post-mortem period. Forensic
science International 50 (1): 75 85, 1991.

PARENT, A. Carpenters human neuroanatomy. Baltimore: Williams & Wilkins, 1996.

POWELL, H.; KNOX, D.; LEE, S. Alloxan diabetic neuropathy. Electron microscopic
studies. Neurology; 27: 60-6, 1977.

RAKIETEN, N.; RAKIETEN, M.; NADKARNI, A. Antitumor and hyperglycemic activity
of streptozotocin (NSC-37917) and its cofactor, U-15, 774. Cancer Chemother
Rep.;29:91-8, 1963.

RODRGUES, F. J.; VALERO-CABR, A.; NAVARRO, X. Regeneration and
functional recovery following peripheral nerve injury. Drug Discovery Today: Disease
Models, v. 1, p. 177-185, 2004.

ROSS, M.; PAWLINA, W. Histology a text and atlas, with correlated cell and
molecular biology. Baltimore: Lippincott Williams & Wilkins, 2006.

RUBIN, R. R.; PEYROT M. Was Willis right? Thoughts on the interaction of
depression and diabetes. Diabetes/Metabolism Research and Reviews, 18, 173-175,
2002.

RUSH, A. M.; CUMMINS, T. R.; WAXMAN, S.G. Multiple sodium channels and their
roles in electrogenesis within dorsal root ganglion neurons. Journal of Physiology, v.
579, p. 1-14, 2007.

93
SARTORELLI, D. S.; FRANCO, L. J. Tendncias do diabetes mellitus no Brasil: o
papel da transio nutricional. Cad. Sade Pblica, Rio de Janeiro, 19 (sup.1): S29-
S36, 2003.

SATO, K. L.; MIGLIACCIO, V.; CARMO, J. M.; OLIVETI, M. C. D. B. B.; FERREIRA,
R. S; FAZAN, V. P. S. Diabete como modelo de neuropatia autonmica. X Simpsio
Brasileiro de Fisiologia Cardiovascular. Medicina, Ribeiro Preto, 39 (1): 28-38,
jan./mar. 2006.

SHARMA, A. K.; BAJADA, S.; THOMAS, P. K. Influence of streptozotocin-induced
diabetes on myelinated nerve fiber maturation and on body growth in the rat. Acta
Neuropathol; 53: 257-65, 1981.

SHARMA, A. K.; DUGUID, I. G. M.; BLANCHARD, D. S.; THOMAS, P. K. The effect
of insulin treatment on myelinated nerve fibre maturation and integrity and on body
growth in streptozotocindiabetic rats. J Neurol Sci; 67: 285-97, 1985.

SHARMA, A. K.; THOMAS, P. K. Peripheral nerve structure and function in
experimental diabetes. J Neurol Sci; 23: 1-5, 1974.

SHARMA, A. K.; THOMAS, P. K. Animal models: pathology and pathophysiology. In:
DYCK, P.J.; THOMAS, P.K. eds. Diabetic europathy, 2nd ed, Philadelphia: WB
Saunders Company, p. 237-52, 1999.

SKYLER J. S.; RAPTIS S. Symposium on biosyntetic human insulin. Diabetes Care;
4:139-264, 1981.

SOCIEDADE BRASILEIRA DE DIABETES. Consenso brasileiro sobre diabetes
2002: diagnstico e classificao do diabetes melito e tratamento do diabetes melito
tipo 2. Rio de Janeiro: Diagraphic, 2002.

SPADELLA, C. T.; MERCADANTE, M. C.;SCHELLINI, S. A., MACHADO, J. L.;
OLIVEIRA, W. K.; BACCHI, C. E. Effect of pancreas transplantation on the
prevention of nephropathy in alloxan-induced rats. Braz. J. Med. Biol. Res., v.29,
p.1019-24,1996.

SPADELLA, C. T.; SCHELLINI, S. A.; BACCHI, C. E. Pancreas transplantation
versus islet transplantation versus insulin therapy in the prevention of nephropathy in
alloxaninduced diabetic rats. Transplant. Prooceed., v.30, p.327-9, 1998.

SPADELLA, C. T.; SCHELLINI, S. A.; CARAMORI, C. A.; BACCHI, C. E.
Relationship between endocrine function and digital image quantitation of the
94
pancreatic-insulin, and glucagons positive cell masses in normal, alloxan-diabetic,
and heterotopic pancreas transplantation rats. Transplant. Proc., v.32, p.2820-23,
2000.

SPADELLA, C. T., MACHADO, J. L., CARAMORI, C. A., GREGORIO, E. A.
Successful islet transplantation does not prevent the development of neuropathy in
alloxan-induced diabetic rats. Transplant. Proc., v.34, p.1296-300, 2002.

SPADELLA, C. T.; MACEDO, C. S.; MACHADO, J. L.; SCHELLINI, S. A.;
PADOVANNI, C.R. Comparative study among five different treatments on the clinical
and laboratory changes in rats with alloxan-induced diabetes. Acta Cir. Bras., v.20,
p.46-54, 2005.

STEVENS, M. J.; FELDMAN, E. L.; GREENE, D. A. The aetiology of diabetic
neuropathy the combined roles of metabolic and vascular defects. Diabet Med; 12
(7):566-79, 1995.

STUMPEL, F.; KUCERA, T.; BAZOTTE, R.; PUSCHEL, G. P. Loss of regulation by
sympathetic hepatic nerves of liver metabolism and hemodynamics in chronically
streptozotocin-diabetic rats. Diabetologia; 39: 161-5, 1996.

SUGIMURA, K.; WINDEBANK, A. J.; NATARAJAN, V.;LAMBERT, E. H.; SCHMIDT,
H. O.; DYCK, P. J. Interstitial hyperosmolarity may cause axis cilinder shrinkage in
streptozotocin-diabetic nerve. J Neuropathol Exp Neurol; 39: 710-21, 1980.

SZALAI, J. P.; HUNTER, R. T. Walking track analysis: A long-term assessment of
peripheral nerve recovery. Plast Reconstr Surg, v.89, p.251-258, 1992.

THOMAS, P. K.; ELIASSON, S. G. Diabetic neuropathy. In: DYCK, P. J, THOMAS,
P. K.; LAMBERT, E. H.; BUNGE, R. eds. Peripheral neuropathy, 2nd ed.
Phyladelphia: WB Saunders Company ; p. 1773-810, 1984.

TOMILSON, K. C.; GARDINER, S. M.; HEBDEN, A.; BENNETTI, T. Functional
consequences of streptozotocin-induced diabetes mellitus, with particular reference
to the cardiovascular system. Pharmacol Rev; 44: 103-50, 1992.

VALERO-CABR, A.; NAVARRO, X. Functional impact of axonal misdirection on
muscle reinnervation after peripheral nerve resection and graft or tube repair. J
Neurotrauma, v. 19, p. 1475-1485, 2002.

95
VALERO-CABR, A.; TSIRONIS, K.; SKOURAS, E.; NAVARRO, X.; NEISS, W.F.
Peripheral and spinal motor reorganization alter nerve injury and repair. J
Neurotrauma, v. 21, p. 95-108, 2004.

WAINSBERG, J.; MAGALHES, R. R.; GONALVES, J. E. Aspectos funcionais do
autotransplante de ilhotas de Langerhans no bao. Estudo experimental em ces.
Acta Cirurg Bras, v. 2, n. 4, p. 121-127, 1987.

WILD, S.; ROGLIC, G.; GREEN, A.; SICREE, R.; KING, H. Global prevalence of
diabetes. Estimates for the year 2000 and projections for 2030. Diabetes Care.;
27(5): 1047-53, 2004.

WORLD HEALTH ORGANIZATION. Definition, diagnosis and classification of
diabetes mellitus and its complications. Report of a WHO consultation. Part 1:
diagnosis and classification of diabetes mellitus, 1999.

UMEDA, M.; OHKUBO, T.; ONO, J., FUKUIZUMI, T.; KITAMURA, K. Molecular and
immunohistochemical studies in expression of voltage-dependent Ca
2+
channels in
dorsal root ganglia from from streptozotocin-induced diabetic mice. Life Science 79,
2006.

ZEMP, C.; BESTETTI, G.; ROSSI, G. L. Morphological and morphometric study of
nerves from rats with streptozotocin-induced diabetes mellitus. Acta Neuropathol; 53:
99-106, 1981.

96

APNDICES

97
APNDICE I

Tabela 03. Amplitude positiva da 1 componente do potencial de ao composto, em
diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de ratos. Os resultados
expressos em valores absolutos esto apresentados como mdia erro padro da
mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos.

Freqncias
(Hz)
Controle
(n=13)
Imobilizado
(n=15)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=13)
0,2 6,870,67 4,480,48 * 5,290,77 5,730,53
20 7,180,71 4,650,46 * 4,940,67 # 5,460,58
50 6,740,70 4,190,43 * 4,230,61 # 4,810,55
100 5,510,62 3,150,37 * 3,070,51 # 3,630,49
200 3,010,37 1,650,27 1,820,44 2,430,29
300 1,660,19 0,800,11 0,880,20 0,800,19
400 1,290,15 0,620,12 0,740,19 0,900,25
Estatistiscamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; #(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico.

98
APNDICE II

Tabela 04. Amplitude positiva da 2 componente do potencial de ao composto, em
diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de ratos. Os resultados
mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos.

Freqncias
(Hz)
Controle
(n=13)
Imobilizado
(n=14)
Diabtico
(n=7)
Diabtico
Imobilizado
(n=10)
0,2 3,100,31 4,870,70 4,620,75 5,241,06
20 3,040,31 4,900,66 4,160,61 4,580,90
50 2,740,29 4,460,61 3,510,55 3,930,78
100 2,200,28 3,280,47 2,460,44 2,720,55
200 0,880,18 1,620,29 1,430,40 1,820,35
300 0,160,06 0,260,10 0,260,13 0,390,12
400 0,200,16 0,020,02 0,170,11 0,350,28
Estatisticamente significante: (p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado.

99
APNDICE III

Tabela 05. Amplitude pico-a-pico do potencial de ao composto, em diferentes
frequncias de estimulao no nervo citico direito de ratos. Os resultados
mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos. O n
indica a quantidade de nervos citicos direito de ratos.

Freqncias
(Hz)
Controle
(n=15)
Imobilizado
(n=16)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=9)
0,2 7,270,78 6,290,81 6,020,62 8,740,69
20 7,520,82 6,350,79 5,690,55 8,330,70
50 7,040,80 5,910,78 4,870,51 7,420,69
100 5,730,72 4,370,63 3,450,46 5,660,65
200 3,110,43 2,140,40 1,950,43 3,110,30
300 1,870,31 1,010,15 0,980,23 1,220,17
400 1,360,17 0,760,15 0,870,22 1,080,27
Estatisticamente significante: (p<0,05) entre os grupos diabtico e imobilizado; (p<0,05) entre os
grupos diabtico imobilizado e diabtico.

100
APNDICE IV

Tabela 06. Velocidade de conduo da 1 componente do potencial de ao
composto, em diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de
ratos. Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como
mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos

Freqncias
(Hz)
Controle
(n=15)
Imobilizado
(n=15)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=14)
0,2 93,637,48 79,145,58 * 85,865,67 73,394,95 #
20 87,684,88 73,206,12 * 83,245,06 71,814,59 #
50 84,494,90 70,045,99 * 77,434,69 68,614,44 #
100 76,574,75 60,925,45 * 75,261,58 61,173,95 #
200 62,154,09 52,393,70 60,084,20 50,133,00
300 57,993,48 50,084,24 51,996,42 51,144,13
400 62,764,88 60,355,05 58,045,35 59,4010,68
Estatisticamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; #(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico imobilizado.

101
APNDICE V

Tabela 07. Velocidade de conduo da 2 componente do potencial de ao
composto, em diferentes frequncias de estimulao no nervo citico direito de
ratos. Os resultados expressos em valores absolutos esto apresentados como
mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica a quantidade de nervos

Freqncias
(Hz)
Controle
(n=14)
Imobilizado
(n=9)
Diabtico
(n=8)
Diabtico
Imobilizado
(n=13)
0,2 32,461,54 29,852,67 32,163,32 34,922,10
20 31,271,46 30,853,08 30,743,21 33,762,04
50 29,721,49 29,092,94 28,473,00 31,831,77
100 26,901,40 25,152,63 25,422,92 28,331,83
200 21,511,15 21,092,17 21,373,95 23,781,40
300 25,161,25 20,943,73 15,085,75 23,180,66
400 11,874,70 13,488,41 15,739,60 19,077,01

102
APNDICE VI

Tabela 08. Distribuio dos parmetros eletrofisiolgicos do registro intracelular dos
neurnios sem inflexo. Os resultados, expressos em valores absolutos, esto
representados com a mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica o nmero
de amostras.

Parmetros Eletrofisiolgicos Neurnios sem inflexo
C
si
I
si
D
si
DI
si

Corrente Limiar (nA)
2,040,17
(n=29)
1,320,19*
(n=14)
1,190,13**
(n=14)
1,110,17
#

(n=19)
Resistncia (M) 6,600,78
(n=28)
7,541,88
(n=13)
13,001,41
**

(n=13)
14,772,12
#

(n=19)
Potencial de Repouso (mV) -64,831,75
(n=29)
-65,692,47
(n=13)
-67,333,49
(n=12)
-57,261,69
(n=19)
Amplitude PA
(mV)
75,921,75
(n=29)
64,222,79*
(n=14)
61,133,53**
(n=12)
63,862,85
#

(n=18)
dV/dt
asc

(V/s)
192,6010,26
(n=27)
136,6014,44*
(n=12)
127,4012,29
**

(n=14)
145,6012,44
#

(n=19)
dV/dt
desc

(V/s)
-122,905,70
(n=28)
-93,006,80*
(n=13)
-88,466,83
**

(n=14)
-100,205,83
#

(n=19)
Durao PA
(ms)
0,710,02
(n=29)
0,840,10
(n=14)
1,010,06
**

(n=14)
0,960,07
#

(n=19)
Estatisticamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico; #(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado; (p<0,05)
entre os grupos imobilizado e diabtico imobilizado.

103
APNDICE VII

Tabela 09. Distribuio dos parmetros eletrofisiolgicos do registro intracelular dos
neurnios com inflexo. Os resultados, expressos em valores absolutos, esto
representados com a mdia erro padro da mdia (ANOVA). O n indica o nmero
de amostras.

Parmetros Eletrofisiolgicos Neurnios com inflexo
C
ci
I
ci
D
ci
DI
ci

Corrente Limiar (nA)
1,380,21
(n=25)
1,080,13*
(n=32)
0,970,18**
(n=19)
0,840,10
#

(n=30)
Resistncia (M) 13,752,08
(n=25)
17,562,32
(n=33)
24,282,94
**

(n=18)
24,503,37
#

(n=31)
Potencial de Repouso (mV) -60,222,22
(n=27)
-57,002,01
(n=31)
-57,002,85
(n=17)
-54,832,05
(n=30)
Amplitude PA
(mV)
82,703,05
(n=27)
78,092,24*
(n=34)
71,762,91
**

(n=21)
73,533,04
#

(n=30)
dV/dt
asc

(V/s)
121,1011,91
(n=26)
106,507,28*
(n=33)
58,354,76
**

(n=20)
104,8011,01
#

(n=31)
dV/dt
desc

(V/s)
-60,896,02
(n=27)
-56,843,55*
(n=31)
-46,483,97**
(n=21)
-67,696,47
#

(n=29)
Durao PA
(ms)
2,420,23
(n=24)
2,480,21
(n=32)
3,130,30**
(n=21)
3,420,36
#

(n=30)
Estatisticamente significante: *(p<0,05) entre os grupos controle e imobilizado; **(p<0,05) entre os
grupos controle e diabtico; #(p<0,05) entre os grupos controle e diabtico imobilizado; (p<0,05)
entre os grupos imobilizado e diabtico imobilizado.

Análise Dos Parâmetros Eletrofisiológicos Do Nervo Ciático e Ganglio Da Raiz Dorsal Decorrentes de Um Período de Imobilização Da Pata Traseira Direita de Ratos Diabéticos

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEAR

JAMILLE SOARES MOREIRA ALVES

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