AVALIAO DA BISSECO DE EMBRIES COM O OBJETIVO DE

ELEVAR A EFICCIA DA TCNICA DE TRANSFERNCIA DE

EMBRIES NA ESPCIE CAPRINA










TATIANA PARENTE NAPOLEO DO RGO





Dissertao apresentada ao Centro
de Cincias Agrrias, Universidade
Federal do Piau, para obteno do
ttulo de Mestre em Cincia Animal,
rea de Concentrao: Clnica
Mdico-Cirrgica de Animais de
Interesse Econmico.


Teresina
Estado do Piau Brasil
Setembro - 2005
AVALIAO DA BISSECO DE EMBRIES COM O OBJETIVO DE
ELEVAR A EFICCIA DA TCNICA DE TRANSFERNCIA DE
EMBRIES NA ESPCIE CAPRINA



TATIANA PARENTE NAPOLEO DO RGO
Mdica Veterinria




Orientador: Prof. Dr. Jos Adalmir Torres de Souza
Co-orientador: Prof. Dr. Rmulo Jos Vieira



Dissertao apresentada ao Centro
de Cincias Agrrias, Universidade
Federal do Piau, para obteno do
ttulo de Mestre em Cincia Animal,
rea de Concentrao: Clnica
Mdico-Cirrgica de Animais de
Interesse Econmico.


Teresina
Estado do Piau Brasil
Setembro - 2005
































Rgo, Tatiana Parente Napoleo do
R343a Avaliao da bisseco de embries com o objetivo
de elevar a eficcia da tcnica de transferncia de
embries na espcie caprina. / Tatiana Parente
Napoleo do Rgo. Teresina: UFPI, 2005.
90p.
Dissertao (Mestrado) UFPI.
1. Caprino-Reproduo. 2. Transferncia de
Embries. 3. Bisseco. I Ttulo



C.D.D. 636.39



iii
AVALIAO DA BISSECO DE EMBRIES COM O OBJETIVO DE
ELEVAR A EFICCIA DA TCNICA DE TRANSFERNCIA DE
EMBRIES NA ESPCIE CAPRINA





Tatiana Parente Napoleo do Rgo





Dissertao aprovada em: 21/09/2005



____________________________________________
Prof. Dr. Jos Adalmir Torres de Souza / UFPI
Orientador

____________________________________________
Prof. Dr. Rmulo Jos Vieira / UFPI
Examinador interno

____________________________________________
Prof. Dr. Alberto Lopes Gusmo / UFBA
Examinador externo




iv














Por que viestes to cedo?

Ainda era pequeno e indefeso, frgil e delicado. Chorava e muitas vezes eu no
entendia. Pedia e muitas vezes no sabia como atend-lo. Adoeceu e eu no tive
como cur-lo. Tirou minhas noites de sono e sadas, mas passou a se acalentar em
meu colo, a dormir em meus braos. Comeou a sorrir quando me olhava, a ficar
calmo quando de mim se aproximava, a me abraar quando estava bem e a me
abraar tambm quando no estava. Sabia como me pedir socorro e mais ainda
como retribuir, sabia que nossas vidas j eram uma s e que j ramos cmplices
das alegrias e preocupaes que nos cercavam, j sabia que ramos me e filho.
Agora sim, Jos Neto, entendo porque viestes na hora certa
Da mame que te ama





v
AGRADECIMENTOS ESPECIAIS



A Deus, Supremo criador, por ter me guiado e dado sabedoria para
concluir esta difcil etapa.
A minha me, Auristela Carvalho, por ser uma me maravilhosa e por
tantas vezes, alm de minha me, ter sido, tambm, me do meu filho.
Sem voc, me, este trabalho no existiria.
Ao meu pai, Joaquim Parente, exemplo de homem, profissional e,
especialmente, de pai, pela dedicao, pacincia, carinho e apoio
incondicional.
Ao Alexandre, Andra, Marina e Maristela, pela compreenso, incentivo
e amizade que me fizeram conhecer desde to cedo, o verdadeiro
significado da palavra irmo.
Ao meu marido, Flvio Napoleo, por ser um pai fantstico, um grande
amigo nos momentos difceis e, principalmente, um homem to
carinhoso e amoroso em todos os momentos. Te amo.
As minhas avs, Maria Vaz Parente e Maria Carvalho, e, ao meu av,
Teobaldo Parente, que me ensinaram a importncia de uma famlia.
Ao meu cunhado, Eduardo Lobo, e minha cunhada, Adriana Parente,
que so para mim, verdadeiros irmos.
A minha cunhada, Teresa Helena, pela ateno e apoio a mim
dedicados.
A todos os meus cunhados, cunhadas, sobrinhos, sobrinhas e amigos
que torcem por mim e se realizam com meu crescimento.


vi
AGRADECIMENTOS



Ao professor Jos Adalmir, meu orientador, profissional ntegro e dedicado,
que me proporcionou oportunidades singulares de aprendizado.
Ao Regivaldo Vieira, tcnico da Embrapa Recursos Genticos-CENARGEN
por me emprestar e ensinar com tanta pacincia e gentileza a manipular o
equipamento utilizado neste trabalho.
Universidade Federal do Piau, instituio onde conclu minha graduao,
por mais esta oportunidade.
Ao CNPq pelo apoio financeiro.
Ao professor Joo Batista, por todas as vezes que o procurei e fui recebida
com um sorriso e ateno- mesmo em momentos crticos. Meu muito
obrigado.
Ao professor Rmulo Vieira pelos valiosos ensinamentos.
Ao Lus, secretrio do Mestrado, que sempre me atendeu com pacincia.
A Fazenda Santo Antnio, na pessoa do Sr. Valter Alencar e Valter Neto por
aceitarem o desafio, terem acreditado nesta pesquisa, abrindo as portas de
sua propriedade para realizao deste trabalho.
Aos Mdicos Veterinrios Maria Vitria e Domingos Ribeiro, que me
ajudaram em toda esta jornada, sem vocs tudo seria muito difcil.
A todos os funcionrios da Fazenda Santo Antnio, que no mediram
esforos para ajudar e participaram de forma incansvel e dedicada neste
trabalho.
Ao amigo Leonardo por me atender carinhosamente, ajudando a conseguir
parte da literatura utilizada.
Ao amigo Joo Mendes por me ceder o material necessrio para meu
treinamento.
Ao Sinevaldo por me ajudar com a confeco das fotos apresentadas neste
trabalho.


vii
Aos colegas do Mestrado, em especial Dmis, Paull, Raimundo, Rmulo,
Ezequiel, Augusto, Clara e Aline, que com amizade e bom humor tornaram
as horas de pesquisa mais agradveis; e Snia, Lidiana e Romualdo pela
amizade.
Ao professor-amigo Nicodemos, pelo apoio e colaborao.
A todos os professores do Curso de Mestrado pelo aprendizado
proporcionado.
Aos funcionrios do CCA por tornarem esta casa melhor.


























viii

















Devemos aprender durante Devemos aprender durante Devemos aprender durante Devemos aprender durante
toda a vida, sem imaginar toda a vida, sem imaginar toda a vida, sem imaginar toda a vida, sem imaginar
que a sabedoria vem com a que a sabedoria vem com a que a sabedoria vem com a que a sabedoria vem com a
velhice. velhice. velhice. velhice.
Laquete Laquete Laquete Laquete












ix
SUMRIO



LISTA DE ABREVIATURAS................................................................. xi

LISTA DE TABELAS............................................................................. xii

LISTA DE FIGURAS ............................................................................. xiii

RESUMO............................................................................................... xiv

ABSTRACT........................................................................................... xv

1. INTRODUO................................................................................... 16

2. REVISO DE LITERATURA............................................................. 19

2.1. Transferncia de embries em caprinos......................................... 19

2.1.1. Seleo de doadoras e receptoras .............................................. 21

2.1.2 Seleo de reprodutores............................................................... 24

2.1.3. Sincronizao do estro entre doadoras e receptoras................... 24

2.1.4. Superovulao das doadoras ...................................................... 27

2.1.5. Cobertura e fecundao das doadoras........................................ 30

2.1.6. Desenvolvimento embrionrio...................................................... 32

2.1.7. Colheita de embries ................................................................... 34

2.1.7.1. Por laparotomia
............................................................................................................
35

2.1.7.2. Por laparoscopia....................................................................... 36

2.1.7.3. Por via transcervical.................................................................. 38

2.1.8. Avaliao das estruturas colhidas................................................ 40

2.1.9. Inovulao.................................................................................... 42

2.1.10. Fatores que afetam a sobrevivncia de embries transferidos.. 44


x
2.1.11. Diagnstico de gestao............................................................ 47

2.2. Bisseco de embries................................................................... 48

3. CAPITULO NICO............................................................................ 52

3.1. Resumo........................................................................................... 52

3.2. Abstract........................................................................................... 53

3.3. Introduo....................................................................................... 54

3.4. Material e Mtodos ......................................................................... 56

3.5. Resultados e Discusso ................................................................. 63

3.6. Concluses ..................................................................................... 74

3.7. Referncias Bibliogrficas............................................................... 74

4. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ................................................. 78





11
LISTA DE ABREVIATURAS


C - Graus Celsus
CIDR Dispositivo Intravaginal de Droga Interna Controlada
eCG Gonadotrofina Corinica Eqina
FGA - Acetato de Fluorogestona
FSH Hormnio Folculo Estimulante
FSHc Hormnio Folculo Estimulante de origem caprina
FSHo Hormnio Folculo Estimulante de origem ovina
FSHp - Hormnio Folculo Estimulante de origem porcina
g - gramas
GnRH - Hormnio Liberador de Gonadotrofinas
hCG Gonadotrofina Corinica Humana
IA - Inseminao Artificial
IETS Sociedade Internacional de Transferncia de Embries
LH Hormnio Luteinizante
MAP - Acetato de Medroxiprogesterona
MHz - Megahertz
mg - Miligrama
ml Mililtro
mm - milmetro
n- Nmero
PGF
2
- Prostaglandina F
2

PMSG Gonadotrofina Srica da gua Prenha
SRD - Sem Raa Definida
TE Transferncia de Embries
UI - Unidades Internacionais
US Ultrassom

2
Qui-quadrado
g - Micrograma


12
LISTA DE TABELAS



CAPITULO NICO:
Pgina

Tabela 1. Ocorrncia de gestao em receptoras inovuladas com
embries inteiros e bisseccionados .................................... 64
Tabela 2. Ocorrncia de gestao em receptoras inovuladas com
embries em estgio de mrula, inteiros e bisseccionados 65
Tabela 3. Ocorrncia de gestao em receptoras inovuladas com
embries em estgio de blastocisto, inteiros e
bisseccionados ..................................................................... 66
Tabela 4. Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao a partir da inovulao de embries inteiros e
bisseccionados ................................................................... 68
Tabela 5. Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao a partir da inovulao de embries em estgio
de mrula, inteiros e bisseccionados.................................. 69
Tabela 6.. Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao a partir da inovulao de embries em estgio
de blastocisto, inteiros e bisseccionados............................ 70
Tabela 7. Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao a partir da inovulao de embries em estgio
de blastocisto, bisseccionados, qualidade 1 e 2. ................ 71
Tabela 8. Influncia da sincronizao entre receptoras e doadoras
sobre o desenvolvimento de embries bisseccionados e
inteiros ................................................................................ 72





13

LISTA DE FIGURAS



CAPITULO NICO:
Pgina


Figura 1. Micromanipulador de embries composto por dois braos
apoiados sobre uma base adaptada a uma lupa
estereomicroscpica. ............................................................ 59
Figura 2. Detalhe dos braos do micromanipulador............................. 59
Figura 3. Seqncia da confeco artesanal da micropipeta de
suco................................................................................... 60
Figura 4. Seqncia da bisseco de um embrio ............................... 61









14
AVALIAO DA BISSECO DE EMBRIES COM OBJETIVO DE
ELEVAR A EFICCIA DA TCNICA DE TRANSFERNCIA DE
EMBRIES NA ESPCIE CAPRINA


Autor: TATIANA PARENTE NAPOLEO DO RGO
Orientador: Prof. Dr. JOS ADALMIR TORRES DE SOUZA


RESUMO


A bisseco de embries permite produzir animais geneticamente idnticos.
Em programas de transferncia de embries, possibilita elevar o nmero de
embries viveis de doadores de alto valor gentico. Objetivou-se, neste
trabalho, avaliar a utilizao da bisseco em programas de transferncia de
embries em caprinos. Utilizou-se 17 doadoras, sincronizadas com
progesterona e superovuladas com 250 UI de FSH/LH. Das 92 estruturas
recuperadas, 48 (mrulas ou blastocistos) de grau de qualidade 1 ou 2 foram
utilizadas. De cada trs embries obtidos de uma doadora, um foi
bisseccionado e as metades inovuladas na mesma receptora. Embries
inteiros foram inovulados aos pares. Para bisseco, utilizou-se um
micromanipulador composto por dois braos apoiados sobre uma base
adaptada a uma lupa. Das 16 receptoras inovuladas com embries inteiros,
nove (56,25%) apresentaram prenhez, sendo trs gestaes duplas (37,50%
do total dos embries transferidos). Das 16 que receberam hemi-embries,
quatro (25,00%) apresentaram gestaes simples e uma (6,25%) dupla
(totalizando 37,50% dos embries transferidos). No foi evidenciado
diferena estatstica significativa entre os grupos. Embries partidos em
estgio de mrula, independente do grau de qualidade, no resultaram em
gestao. Em estgio de blastocisto obteve-se ndice de 100,00% para os de
qualidade 1. Conclui-se que o estgio de mrula no indicado para
bisseco em caprinos e que quando bisseccionados embries em estgio
de blastocisto, qualidade 1 a tcnica se mostrou eficaz para elevar os
ndices gestacionais em programas de transferncia de embries em
caprinos.
PALAVRAS-CHAVE: bisseco, caprino, embrio




15
EVALUATION OF EMBRYOS BISECTION SO AS TO INCREASE
EFFICACY OF EMBRYO TRANSFER TECHNIQUE IN CAPRINE


Author: TATIANA PARENTE NAPOLEO DO RGO
Coordinator: Prof. Dr. JOS ADALMIR TORRES DE SOUZA


ABSTRACT


The bisection of embryos makes it possible for genetically identical animals
to be produced. In embryo transference programs it makes it possible to
increase the number of viable embryos from high genetic value donators.
The goal of this assignment was to evaluate the use of bisection in embryo
transference programs in caprine. Seventeen donators were synchronized
with progesterone and super ovulated with 250 UI of FSH/LH. From the 92
recovered structures, 48 (morula or blastocyst) of quality degree 1 and 2
were used. Of each three obtained embryos degree 1 or 2, one was
bisectioned and the halves were put into the same recipient. Integral
embryos were ovulated in pairs. For the bisection a micromanipulator was
used composed with two arms fixed to a basis adapted to a magnifying glass.
From the 16 recipients ovulated with entire embryos, nine (56.25%) got
pregnant, three with two embryos (37.50% of the transferred embryos total).
From the 16, which received hemi-embryos, four (25%) presented simple
pregnancy and one (6.25%) presented double pregnancy (totalizing 37, 50%
of the transferred embryos). There was no evidence of significant statistical
difference amongst the groups. Parted embryos while morula, regardless of
quality degree, did not result in pregnancy, but, while blastocyst, the obtained
index was 100% for quality 1 structures (P<0, 05). It can be concluded from
the data that the morula stage is not indicated for bisection in caprine, and
when bisectioned blastocyst degree 1, the technique proved to be efficient to
raise the pregnancy index in embryo transference programs in caprine.
Key words: bisection, caprine, and embryo.







16








1. INTRODUO


O primeiro animal domesticado pelo homem capaz de
produzir alimentos foi a cabra, h cerca de dez mil anos. Desde ento, tem
acompanhado a histria da humanidade, conforme atestam os relatos
histricos, mitolgicos e at bblicos, que mencionam os caprinos. Uma
variedade de produtos originada desta espcie, como: leite, carne, couro e
esterco, alm de sua utilizao como animal de trao (RIBEIRO, 1997).
A caprinocultura uma prtica pecuria de grande
importncia em todo o mundo, principalmente em pases subdesenvolvidos
ou em desenvolvimento devido capacidade de adaptao da espcie a
diferentes condies ambientais e a situaes edafoclimticas adversas,
permitindo que estes animais produzam, em locais onde outras espcies
dificilmente sobreviveriam (GUSMO et al., 2003).
Na regio Nordeste do Brasil, a caprinocultura
desenvolvida, basicamente, em sistema de criao extensivo. Esta criao
representa uma das principais atividades econmicas das reas mais secas
da regio, sendo a carne e o leite de caprinos, fontes de protena animal
para as populaes de baixa renda. A venda de animais vivos e/ou peles
constitui fonte adicional de recursos (MEDEIROS et al., 1994).
A criao de caprinos vem se desenvolvendo nos ltimos
anos a populao mundial da ordem de 783 milhes de cabeas, sendo o
rebanho da Amrica do Sul possuidor de 20,7 milhes de caprinos,


17
correspondendo a 2,7% da populao mundial. O rebanho brasileiro o
maior, com 9,1 milhes de animais, seguido pela Argentina, com 4,2 milhes
de cabeas e pelo Peru, com 1,9 milhes (FAOSTAT data, 2005).
O rebanho nacional tem predomnio numrico na regio
Nordeste que concentra 93% do efetivo em criao de caprinos, possuindo,
a Bahia, o maior rebanho com 3.572.318 cabeas, seguida pelo Estado de
Pernambuco com 1.511.906, e o Piau com um efetivo de 1.427.556 animais
(IBGE, 2003). Estes dados caracterizam a concentrao destes animais em
regies secas, onde outras espcies tm dificuldades de adaptao.
Apesar do importante crescimento e de sua contribuio
para o aumento da disponibilidade de produtos de origem animal, no Brasil,
a maior parte do rebanho caprino formada por animais sem raa definida
(SRD), que apresentam baixa produtividade, caracterizada por uma
deficiente capacidade reprodutiva e elevada mortalidade das crias. Estes
fatores so agravados, ainda, pela dificuldade de investimento e/ou
aceitao de tecnologias por parte dos produtores, alm do uso de mo-de-
obra desqualificada. Condies que limitam a explorao econmica desta
espcie, levando a necessidade de intensificao dos sistemas de produo,
que segundo Machado et al. (1996) deve-se associar melhoria nas
condies criatrias ao uso de animais geneticamente superiores.
O uso de biotcnicas nas reas de melhoramento gentico,
a adoo de um manejo mais eficiente na nutrio, na sade, principalmente
profiltica, e na reproduo, que objetivem maximizar o potencial dos
indivduos, iro permitir que a espcie caprina melhor contribua para o
desenvolvimento scio-econmico regional, fornecendo carne, pele, leite e
derivados de forma satisfatria, qualitativa e quantitativamente.
Dentre as biotcnicas disponveis para acelerar o
melhoramento gentico, esto a inseminao artificial (IA), que associada ou
no sincronizao do estro proporciona grande avano gentico, e a
transferncia de embries (TE), que favorece a disseminao rpida de
animais geneticamente superiores. A tcnica, alm de elevar a produtividade
desses animais, quando associada a criopreservao e a bisseco de


18
embries, disponibiliza a produtores, tcnicos e sociedade em geral, as
possibilidades de vencer as barreiras do tempo e do espao, tornando-se
procedimento de grande importncia (SIMPLCIO e SANTOS, 2000).
O domnio da transferncia de embries permitiu avanar
para novas reas da investigao cientfica, como as tcnicas de
micromanipulao e cultura de embries, que possibilitam a obteno de
animais de interesse cientfico, econmico e zootcnico. A
micromanipulao, oferece vrias opes de pesquisa: transferncia de
genes para obteno de animais transgnicos, estudo da relao entre
ncleo e citoplasma, determinao do sexo, micromanipulao de
blastmeros e bisseco de embries, esta ltima, para a obteno de
gmeos idnticos, a opo mais vivel (BEM et al., 1987).
A bisseco consiste na diviso de embries, atravs de
micromanipulao, obtendo-se produtos geneticamente iguais, chamados
gmeos monozigticos, ou gmeos verdadeiros. O nascimento de gmeos
monozigticos desejvel, seja para aumentar o efetivo do rebanho ou para
estudos experimentais em fisiologia da reproduo e gentica, uma vez que
possuem o mesmo patrimnio gentico (BEM, 1989).
A perspectiva de utilizao desta biotcnica extremamente
importante devido capacidade de maximizar a eficincia em programas
comerciais de TE, por permitir elevar o nmero de gestaes por colheita.
Objetivou-se, com este trabalho, avaliar a capacidade de
aumentar o nmero de produtos na espcie caprina a partir de embrio
original, atravs da utilizao da tcnica de bisseco e transferncia
imediata dos hemi-embries para as receptoras.
Este trabalho est apresentado como captulo nico,
intitulado Avaliao da bisseco de embries visando elevar a eficcia da
tcnica de transferncia de embries na espcie caprina.
O captulo est redigido na forma de artigo cientfico com
resumo, summary, introduo, material e mtodo, resultado e discusso e
concluso, obedecendo s normas da Revista Brasileira de Reproduo
Animal, qual ser submetido para publicao.


19








2. REVISO DE LITERATURA

2.1. Transferncia de embries em caprinos

A transferncia de embries (TE) uma biotcnica que
consiste na superovulao, retirada de embries de fmeas denominadas
doadoras e sua transferncia para animais de menor valor econmico e
gentico, as receptoras. (RIBEIRO, 1997).
O termo transferncia de embries engloba o conjunto de
atividades necessrias para que os embries sejam colhidos do tero das
doadoras e depositados no tero das receptoras para completarem o
perodo de gestao. Tem como principal finalidade aumentar o nmero de
produtos de animais geneticamente superiores sem risco de transmisso de
doenas infecto-contagiosas (REICHENBACH et al., 2002). Assume
potencial similar para as espcies caprina, ovina e bovina, podendo ser
utilizada na pesquisa, no melhoramento gentico, na conservao de
animais com risco de extino, na produo de animais livres de patgenos,
na formao de um banco de germoplasma e como base fundamental para o
desenvolvimento de outras tecnologias (FOOTE et al., 1987).
A idia de fazer uma fmea desenvolver um embrio colhido
de outra da mesma espcie bastante antiga e os coelhos foram os animais
selecionados por Heape em 1890 para realizar a primeira TE do mundo
(REICHENBACH et al., 2002). Nos pequenos ruminantes domsticos, a TE
foi realizada pela primeira vez na dcada de 30 por Warwick, Berry e


20
Horlacher (apud ANDRIOLI-PINHEIRO, 1993), ao estudarem a razo pela
qual as coberturas entre caprinos e ovinos nunca resultaram em gestao a
termo. Para isto, transferiram embries caprinos para o tero de ovelhas e
vice-versa e no obtiveram nascimentos.
No Brasil, as primeiras experincias em caprinos foram
realizadas na dcada de 80, com embries a fresco no estado de Minas
Gerais (CHOW et al., 1986). Os autores transferiram cinco embries da raa
Branca Alem para duas receptoras mestias e obtiveram uma prenhez,
mas que redundou no abortamento de dois fetos no 130 dia de gestao de
uma receptora que havia recebido dois embries. No entanto, o nascimento
de animais viveis de transferncia a fresco s foi descrito no Brasil em
1989, no Estado do Paran (SIMPLICIO e SANTOS, 2000).
Na Regio Nordeste, o nascimento de crias caprinas
oriundas de transferncia a fresco foi registrado em Pernambuco por
Wischral et al. (1989). Os autores utilizaram 11 cabras SRD, sendo quatro
doadoras e sete receptoras. A colheita e inovulao foram realizadas pelo
mtodo cirrgico. A mdia de embries viveis foi de 7,75 + 4,99, sendo
transferido um embrio para cada corno uterino das receptoras. Destas, trs
ficaram prenhes, resultando em dois cabritos saudveis e um natimorto.
A tcnica de TE tem um sentido bem mais amplo que a
simples deposio do embrio no tero da receptora. A alterao em
qualquer uma das etapas necessrias para sua realizao, que vo desde a
escolha do animal doador de embries at sua inovulao no novo tero e
posterior nascimento dos produtos, pode levar a resultados insatisfatrios.
Dentre os fatores que podem influenciar os resultados da TE
esto: a raa; o manejo, em especial da nutrio, da sade e reprodutivo; a
variao individual de doadoras e receptoras sincronizao do estro e
ovulao; a resposta dos ovrios s gonadotrofinas; tcnicas de colheita e
inovulao, a habilidade profissional; o estgio de desenvolvimento
embrionrio; a regresso precoce de corpos lteos; o nmero de embries
transferidos e de corpos lteos da receptora; a condio reprodutiva da
receptora; a sobrevivncia embrionria (OLIVEIRA, 1992; PEGORARO-


21
RUMPH et al., 1992; ANDRIOLI-PINHEIRO, 1993; ARAUJO, 1994; TRALDI
et al., 1995; LIMA et al, 1996; SIMPLCIO et al., 1998).

2.1.1. Seleo de doadoras e receptoras

um dos pontos crticos da TE devido a obrigatoriedade de
utilizar-se animais sem distrbios reprodutivos, com ciclo estral regular, bom
estado nutricional e com avaliao clnico-geral realizada freqentemente,
para evitar a incluso de animais com alteraes no sistema locomotor,
digestivo, linftico, urinrio, e, principalmente, no trato reprodutivo
(REICHENBACH et al., 2002).
As fmeas a serem utilizadas como doadoras de embries
precisam ser avaliadas sob diversos aspectos, pois o programa acelera
muito a reproduo das mesmas, tornando-se fundamental no apenas
selecionar bem as doadoras para no reproduzir problemas, como tambm
padronizar critrios de acompanhamento destes animais durante todo o
processo. No que se refere s receptoras, o ndice de nascimento de crias
saudveis por animal inovulado um componente fundamental neste tipo de
programa, o que as torna merecedoras de ateno especial, pois delas
depende o sucesso final da transferncia de embries.
De acordo com Fernandes (1999), em programas de TE,
geralmente, tem-se um cuidado extremado com as doadoras e relega-se as
receptoras a um segundo plano, porm, um dos principais pontos de
estrangulamento dessa tecnologia diz respeito a taxa de gestao das
receptoras, aps a transferncia de embries classificados como
morfologicamente viveis.
Animais pberes, que ainda no gestaram, podem ser
includos em programas de transferncia de embries como doadoras desde
que tenham adquirido massa muscular representativa de seu peso adulto e
apresentem desenvolvimento anatomo-fisiolgico que permita a realizao
dos procedimentos necessrios para a colheita dos embries. A utilizao
destes animais estimulada porque reduz o intervalo entre geraes e


22
acelera o melhoramento gentico. Deve-se atentar para a dificuldade em
introduzir o cateter de colheita por via transcervical, que pode comprometer
a eficincia da TE em algumas ocasies (REICHENBACH et al., 2002).
Os aspectos zootcnicos, reprodutivos, nutricionais e
sanitrios devem ser minuciosamente observados quando da elaborao de
um programa de TE, pois, tanto podem contribuir como prejudicar, em parte
ou em conjunto, o desenvolvimento do procedimento.
O aspecto zootcnico um parmetro importante que
necessita uma criteriosa avaliao no momento da seleo das doadoras,
haja vista a influncia gentica que exercero nas prximas geraes. Por
ser a transferncia de embries uma atividade comercial, fundamental
proporcionar retorno ao capital investido na implantao do programa,
fazendo-se necessrio que as doadoras estejam dentro dos padres
determinados pelas associaes das respectivas raas e possuam registro
nas associaes de criadores. Esses animais devem possuir produo
mdia superior a da populao, sendo dada ateno especial s
caractersticas da raa e de sua aptido (REICHENBACH et al., 2002).
O controle sanitrio deve ser rigoroso. Tanto doadoras
quanto receptoras devem ser oriundas de propriedades com rebanhos
hgidos, sem relatos, pelo menos nos ltimos seis meses, de doenas
infecto-contagiosas e, ao chegarem na nova propriedade, devem ser
vacinadas contra as doenas infecto-contagiosas existentes na regio. Endo
e ecto-parasitoses, devem ser combatidas (REICHENBACH et al., 2002). A
avaliao do estado de sade deve ser feita por de exames clnicos e
laboratoriais, quando da aquisio de animais, estes devem permanecer em
quarentena antes de serem incorporados ao programa. Sempre que
possvel, o proprietrio deve preparar seu prprio rebanho de receptoras,
pois, assim, conhecer seu histrico, evitando a introduo de novos
animais e, conseqentemente, de novas doenas.
O aspecto reprodutivo, pela sua importncia, requer um
exame ginecolgico minucioso, atentando para possibilidade de infeces,
inflamaes e mal-formaes do sistema reprodutor. Fatores como o


23
intervalo entre partos, a repetio ou mesmo, ausncia de cios, abortos,
ajudam a identificar possveis enfermidades.
No que se refere ao aspecto nutricional, importante frisar
que nutrio e reproduo possuem estreitos laos em qualquer sistema de
produo. A nutrio responsvel pela expresso e funcionamento de
rotas metablicas que permitiro ao animal expressar todo seu potencial
produtivo e reprodutivo (FERNANDES, 2003).
A deficincia nutritiva em fmeas reduz o aparecimento da
puberdade, secreo de hormnios, incidncia de estro, taxas de ovulao e
prenhez (RHIND, 1992). Leite e Stuth (1995) afirmaram que a deficincia de
protena e/ou energia retarda o crescimento e a puberdade, reduzindo a
fertilidade.
A correlao positiva entre a condio de nutrio das
doadoras e receptoras sobre o desempenho reprodutivo foi comprovada por
Oliveira (1992), ao evidenciar a importncia da suplementao energtico-
protica sobre o nmero de fmeas que respondeu ao tratamento
superovulatrio e a taxa de ovulao. Mani et al. (1994) ressaltaram que a
subnutrio das receptoras caprinas pode afetar negativamente a
porcentagem de gestao e a sobrevivncia dos embries.
Para as receptoras so considerados os mesmos aspectos
referidos s doadoras, exceo do zootcnico/gentico, por ser
dispensvel uma definio de padro racial. Outros aspectos a considerar
referem-se ao bom desempenho reprodutivo, habilidade materna, produo
leiteira e ausncia de defeitos nos aprumos e cascos (BONDURANT, 1986).
Deve ser lembrado que os animais precisam ser identificados de forma clara,
durvel e visvel para evitar manejo desnecessrio dos mesmos.
Em razo de sua importncia, merece ser enfatizado que as
condies sanitrias das doadoras, das receptoras e do prprio embrio
sobre os resultados de um programa de transferncia de embries, so
reconhecidas em todo o mundo. No Brasil, Simplcio e Santos (2000)
relataram a eficcia desta tcnica para o controle da introduo de doena
em regio indene ao usar embries criopreservados.


24
2.1.2. Seleo de reprodutores

Da mesma forma que as doadoras e receptoras, os
reprodutores devem receber todos os cuidados sanitrios e nutricionais. A
escolha de um macho para a reproduo deve ser acompanhada de critrios
rigorosos de seleo. Tal procedimento fundamental, tendo em vista que
as qualidades e os defeitos paternos so transmitidos aos descendentes,
pois o macho participa em condio de igualdade com a fmea na formao
da carga gentica (MEDEIROS et al., 1994).
O animal deve ser saudvel, no possuir doenas que
possam ser transmitidas pela cpula ou pelo smen, atravs da IA. Seus
rgos sexuais no devem apresentar qualquer anomalia. Os testculos
devem ser morfofisiologicamente normais, no deve possuir leses
prepuciais ou penianas. Deve apresentar boa libido, cascos sadios, bons
aprumos e ausncia de defeitos hereditrios. importante atentar para uma
boa caracterizao prpria da raa desejada e aspecto de masculinidade.
Sempre que possvel deve-se trabalhar com animais de boa capacidade
reprodutiva e fertilidade comprovada atravs de exame androlgico (Ibidem).
Na prtica da IA indispensvel a identificao do estro e a
correta aplicao do smen, devendo ser realizada por tcnico treinado, pois
seu uso incorreto pode acarretar srios riscos e insucessos como a reduo
da eficincia reprodutiva do rebanho, difuso de defeitos genticos e de
doenas da reproduo (MEDEIROS et al., 1994). importante trabalhar
com uma Central de Inseminao que oferea material gentico de animais
de comprovada capacidade reprodutiva e que consigam transmitir aos seus
descendentes os aspectos almejados (NUNES et al., 1997).

2.1.3. Sincronizao do estro entre doadoras e receptoras

A sincronizao do estro consiste em intervir na atividade
reguladora do ciclo estral. Pode ser obtida de modo natural, atravs do efeito
provocado pela presena do macho e, artificialmente, atravs de tratamento


25
hormonal. Tem como finalidade a concentrao de estros em um curto
perodo e programao dos partos para as pocas mais convenientes,
obtendo-se animais homogneos para o abate e racionalizando o uso da
mo-de-obra (MEDEIROS et al., 1994). Permite, tambm, aprimorar o uso
de biotcnicas como a inseminao artificial e a transferncia de embries.
No que se refere a tecnologia de transferncia de embries,
a sincronizao objetiva adequar os estros de doadoras e receptoras,
permitindo a realizao de uma programao reprodutiva mais efetiva, por
tornar correspondente o estado fisiolgico destes animais. O controle do
estro e da ovulao um passo fundamental para a implementao de um
programa de transferncia de embries, pois torna o ambiente uterino da
receptora compatvel com o da doadora e, quanto maior for esta sincronia,
melhor para o embrio.
A sincronizao do estro pode ser alcanada atravs de
diferentes tratamentos (LIMA et al., 1997; SANTOS et al., 1999), entretanto,
na cabra, deve ser dado preferncia ao tratamento de durao curta,
mediante o emprego de progesterona natural ou sinttica por 9 a 11 dias em
associao a administrao de Prostaglandina F2 (PGF2) ou seus
anlogos sintticos e de Gonadotrofina Corinica Eqina (eCG) 48 antes da
retirada da progesterona.
Para sincronizao do estro de cabras, tm sido usado com
xito algumas drogas e/ou hormnios exgenos: prostaglandina e seus
anlogos sintticos, como o cloprostenol; progesterona e seus anlogos,
entre eles, o Acetato de Medroxiprogesterona (MAP), o acetato de
fluorogestona (FGA), dispositivo intravaginal de liberao de droga interna
controlada (CIDR), implante subcutneo de norgestomet (Syncro-mate B e
Crestar) (SOUSA, 1999). Alm desses, so usados, adicionalmente, o eCG
e a Gonadotrofina Corinica Humana (hCG).
Estes produtos apresentam mecanismos de ao distintos.
fundamental o seu conhecimento para que possam ser utilizados
convenientemente. A prostaglandina F2 e seus anlogos provocam
contraes uterinas e so luteolticos, permitindo uma programao


26
reprodutiva relacionada a poca da ovulao. A progesterona e seus
anlogos atuam regulando a extenso do ciclo estral e preparando o trato
reprodutivo para a implantao do zigoto. As gonadotrofinas hipofisrias
folculo estimulante e luteinizantes (FSH e LH) tm atividade estimulante do
crescimento folicular, secreo de estrgenos, e estimulante da ovulao e
da funo do corpo lteo (HAFEZ, 2004).
Dentre as metodologias citadas, uma das mais utilizadas no
Brasil para caprinos o protocolo de curta exposio ao progestgeno, feito
com esponjas intravaginais impregnadas com 50 mg de MAP por dez dias e
aplicao intramuscular de 100g de cloprostenol (prostaglandina sinttica)
e 200 UI de eCG no 8 dia (MACHADO e SIMPLCIO, 2001).
A resposta da sincronizao do estro e da ovulao pode
sofrer variao por influncia de vrios fatores, destacando-se dentre eles
fatores climticos, estado fisiolgico da fmea, estado de nutrio e sade
dos animais, perodo transcorrido entre o parto e a sincronizao, horrio de
remoo da esponja e as drogas utilizadas, assim como, suas dosagens
(SIMPLCIO et al., 1999).
A influncia do tipo de progestgeno sobre a ovulao foi
avaliada por Rabelo et al. (1999), ao compararem a taxa de ovulao em
cabras SRD sincronizadas com esponjas intravaginais impregnadas com
50mg de MAP e com 0,3 mg de implante auricular de norgestomet.
Concluram no ter havido diferena significativa entre os grupos
experimentais, podendo ambos os progestgenos serem utilizados em
programas de sincronizao do estro de cabras.
Greyling e Nest (2000) testaram a eficincia de diferentes
doses de progestgeno intravaginal para sincronizao do estro de cabras
em estao de monta e observaram que a durao do estro foi
significativamente mais curta no grupo controle, quando comparada aos
grupos que receberam esponjas impregnadas com 60 ou 30mg de MAP por
14 dias, mas no houve diferena significativa na taxa de gestao entre os
grupos estudados. Os autores concluram que esponjas impregnadas com a


27
metade da dose de MAP (30mg) foram to eficientes para sincronizar o estro
quanto as esponjas que continham 60mg de MAP.
A eficincia dos progestgenos Synchro-mate-B e CIDR,
novos ou reutilizados em combinao ou no com eCG e cloprostenol foi
testada por Oliveira et al. (2001). Os autores evidenciaram que no
necessrio a incluso de eCG para induo e sincronizao do estro em
cabras cclicas e que tanto o implante auricular como o dispositivo
intravaginal podem ser reutilizados com eficincia pelo menos uma vez.
Motlomelo et al. (2002) compararam a eficincia do MAP,
FGA e CIDR para sincronizar o estro de cabras e avaliaram a taxa de
fertilidade. Os autores concluram que os trs progestgenos usados
apresentaram eficincias semelhantes na sincronizao do estro e que no
houve diferena significativa quanto a sua durao. Tambm no foi
verificada diferena significativa quanto a taxa de gestao.
Em fmeas jovens que ainda no atingiram o peso adulto, os
dispositivos intravaginais podem causar desconforto ou reaes locais, que
tm como conseqncia respostas inflamatrias. Nestes casos, deve-se dar
preferncia a implantes subcutneos (HOLTZ, 2000).
importante lembrar que todos os mtodos de
sincronizao do estro tm custos financeiros associados a eles. Em adio
a estes, pode ocorrer, tambm, uma reduo na fertilidade e aumento nas
perdas reprodutivas. Por outro lado, nem todas as fmeas respondem a
manipulao hormonal. Em cabras, o uso repetido de eCG em conjunto ao
tratamento com progestgeno, resultou em reduo na fertilidade nos anos
subsequentes (SCHOENIAN, 1999).

2.1.4. Superovulao das doadoras

Fisiologicamente, a taxa mdia de ovulao em caprinos
de dois a trs ovcitos por ciclo (PINEDA, 1989). Entretanto, o nmero de
descendentes que uma fmea pode produzir durante a vida pode ser


28
extremamente aumentado, permitindo que ela fique temporariamente prenhe
por repetidas vezes, recolhendo-se os embries no incio da gestao e
transferindo-os para os tratos reprodutivos de outras fmeas que
completaro a gestao. O processo pode ser ainda mais ampliado se a
fmea for superovulada (HAFEZ, 2004).
A superovulao aumenta a produo de embries normais,
porm, em todas as espcies existem variaes individuais nas respostas
superovulatrias. Muitas doadoras no produzem embrio normal, enquanto
poucas produzem grande nmero de embries sem defeitos (HAFEZ, 2004).
Os tratamentos superovulatrios so utilizados nos
programas de transferncia de embries para aumentar os produtos de
animais de mrito superior. A resposta ovariana e a produo de embries
viveis aps a superovulao so variveis e quando se recuperam
embries anormais, difcil determinar se o defeito primrio ocorreu antes
ou aps o momento da ovulao (MILLER e ARMSTRONG, 1982).
Diversos so os protocolos existentes para superovular.
Apesar de no depender apenas dos hormnios utilizados, ateno especial
deve ser dada gonadotrofina usada, quanto origem, conservao,
dose, via de aplicao, praticidade de uso no protocolo e ao custo.
Dentre as gonadotrofinas, o hormnio folculo estimulante de origem caprina
(FSH-c), ovina (FSH-o) ou suna (FSH-p), em doses decrescentes, por um
perodo de trs a quatro dias e a gonadotrofina corinica eqina (eCG), em
dose nica, tm sido as mais utilizadas (LIMA, 1989).
Baril et al. (1989) conduziram um experimento preliminar
objetivando a superovulao em caprinos com FSH homlogo. Os autores
concluram que possvel a utilizao do FSH caprino no tratamento de
superovulao e que outros experimentos so necessrios para obteno da
dose tima e da freqncia de administrao adequada.
Ao comparar a resposta superovulatria de cabras tratadas
com uma nica injeo de FSH (12 mg), combinada a baixas doses de eCG
(200 UI) resposta de cabras tratadas com regime superovulatrio
convencional, baseado em mltiplas doses decrescentes de FSH, Batt et al.


29
(1993) concluram que o protocolo que utiliza injeo nica de FSH
combinado com eCG pode dar resultados similares ao regime convencional,
facilitando, assim, o tratamento superovulatrio.
De acordo com Guzik e Niemann (1995), fmeas
superovuladas podem apresentar um alto grau de variabilidade na resposta
ovulatria e uma baixa taxa de fertilizao. Esta variabilidade pode ser
inerente s gonadotrofinas disponveis para uso que so conhecidas por
conterem uma variao alta nas quantidades de FSH e LH.
A obteno de um nmero adequado de embries
geneticamente superiores depende da superovulao conseguida mediante
o emprego de gonodotrofinas exgenas. a partir do uso desses hormnios
que se possibilita o desenvolvimento de um maior nmero de folculos
ovarianos, levando a mltiplas ovulaes (SIMPLCIO et al., 2002).
Os princpios para induo da superovulao em caprinos
so os mesmos de bovinos e baseiam-se na administrao de uma
gonadotrofina folculo-estimulante. A primeira gonadotrofina mundialmente
utilizada para superovulao foi a gonadotrofina srica da gua prenha
(PMSG), atualmente denominada gonadotrofina corinica eqina (eCG),
administrada um a dois dias antes da remoo do progestgeno, em uma
nica injeo de 1000 a 2000UI , via intramuscular, devido a sua longa meia-
vida in vivo. Com a alta incidncia de folculos no ovulados e alteraes nos
eventos endcrinos que resultaram em uma baixa colheita de embries de
qualidade, seu uso tornou-se restrito (FREITAS, 2003).
Desde que as preparaes de FSH tornaram-se acessveis,
vrios estudos comparativos com eCG foram realizados. Nesses, o FSH
mostrou-se superior ao eCG em termos de ovulao, taxa de fecundao e
na produo de embries de boa qualidade (FREITAS, 2003).
Doadoras caprinas tratadas com FSH de origem suna,
apesar de mostrarem melhores respostas, quando o tratamento repetido
por vrias vezes, apresentam diminuio na resposta quanto taxa de
ovulao e ao nmero de embries viveis, devido a produo de anti-


30
corpos anti-FSH. Em contrapartida, o FSH de origem caprina ou ovina, no
desencadeia resposta imunolgica em caprinos (SIMPLCIO et al., 2002).
Cogni et al. (2003) afirmaram que a variabilidade na
resposta superovulatria s preparaes de FSH est relacionada ao
nmero de pequenos folculos antrais (2-3 mm) presentes no ovrio, e que o
nmero final de embries transferveis afetado negativamente pela
presena de grandes folculos (> 6 mm) no incio do tratamento.
Outro problema observado em caprinos a regresso
prematura do corpo lteo, cuja conseqncia uma baixa recuperao
embrionria e m qualidade dos embries colhidos (FREITAS, 2003).
A regresso prematura dos corpos lteos est associada a
superovulao de cabras, ocorrendo em 27% das doadoras. A baixa taxa de
recuperao dos embries pode ser conseqncia do transporte anormal
dos embries na tuba uterina (ISHWAR e MEMON, 1996).
De acordo com Tervit et al. (1983); Armstrong e Evans
(1984); Oliveira (1992); Andrioli-Pinheiro (1993), a presena de corpos lteos
regredidos em caprinos (colorao plida e tamanho reduzido) acarreta
diminuio da taxa de recuperao de embries. Como a regresso precoce
dos corpos lteos ocorre nos primeiros cinco dias aps o estro e as colheitas
so realizadas entre o sexto e o stimo dia, o transporte anormal dos
embries na tuba uterina, observado como consequncia da regresso
precoce dos corpos lteos, dificulta a chegada dos embries ao tero,
ocasionando um srio prejuzo TE em caprinos devido diminuio do
nmero de embries recuperados.

2.1.5. Cobertura e fecundao das doadoras

A fecundao o ato fisiolgico, no qual entram em contato
e se fundem numa nica clula o espermatozide e o vulo, dando origem
ao zigoto. De acordo com Gonzales (2002), a fecundao de doadoras pode
ser conseguida atravs de monta natural ou inseminao artificial, com
deposio do smen via transcervical ou diretamente no tero.


31
Em transferncia de embries, as fmeas destinadas a doar
os embries, devem ser observadas para a ocorrncia de estro a partir de 12
horas aps a remoo das esponjas ou implantes, podendo ser
artificialmente inseminadas entre 18 a 24 horas aps ter sido observado o
incio do estro ou serem cobertas durante o perodo de estro. A identificao
da fmea em estro pode ser realizada por observao direta dos animais,
contudo o uso de rufies indicado para que no haja perda do momento
certo de cobertura ou inseminao artificial (SIMPLCIO et al., 1999).
Recomenda-se realizar a cobertura em regime de monta
controlada, 10 a 12 horas aps o incio do estro e repeti-la obedecendo ao
mesmo intervalo at a no aceitao da monta. O reprodutor deve ter seus
parmetros zootcnicos, reprodutivos, nutricionais e sanitrios devidamente
avaliados antes da realizao da cobertura (SIMPLCIO et al., 1999).
A inseminao artificial uma tcnica da reproduo em que
a fmea fertilizada pela introduo do smen no sistema genital sem a
participao direta do macho (MEDEIROS et al., 1994). a tcnica mais
importante idealizada para o melhoramento gentico de animais, pois
permite que o smen de reprodutores selecionados tenha sua capacidade
de utilizao aumentada atravs da diluio e conservao, podendo
inseminar milhares de fmeas por ano (HAFEZ, 2004).
O smen caprino pode ser conservado sob refrigerao a
4C, para ser utilizado em um curto espao de tempo, congelado a 196C
em nitrognio lquido, o que possibilita sua utilizao por um longo perodo
de tempo, e pode ser, ainda, utilizado a fresco imediatamente aps a coleta,
puro ou diludo (NUNES, 2002).
A deposio do smen pode ser feita na vagina, na cervix
(deposio cranial ou caudal) e intrauterinamente, mais recomendada para
programas de TE, a inseminao no interior do tero, por laparoscopia, 18 a
24 horas aps a fmea ter manifestado estro (SIMPLCIO et al., 1999).
O smen fresco e resfriado apresentam fertilidade mais
elevada; o congelado preserva-se por um perodo de tempo indefinido e de


32
maior aplicabilidade quando comparado ao smen resfriado a 4C, cuja
viabilidade mxima de 48 horas (NUNES et al, 1997).
De acordo com Nunes (2002), a colheita do smen uma
tcnica simples e o ejaculado deve ser rigorosamente avaliado antes de ser
utilizado. Caractersticas como volume, cor, aspecto, concentrao,
turbilhonamento, motilidade individual progressiva e morfologia espermtica
devem estar dentro dos padres normais da espcie (CBRA, 1998).
Os ndices de fecundao obtidos em um programa de
inseminao artificial podem variar devido a alguns fatores, sendo os
principais a fertilidade dos reprodutores utilizados, os cuidados na colheita,
processamento e armazenamento do smen, a habilidade do tcnico
inseminador e o manejo das fmeas inseminadas (HAFEZ, 2004).
fundamental um acompanhamento criterioso nestas etapas para que as
taxas de fecundao sejam elevadas e, consequentemente, as de gestao.
Aps tratamento hormonal para induzir a superovulao, o
transporte e a sobrevivncia dos espermatozides nas vias genitais de
doadoras podem ser alterados (EVANS e ARMSTRONG, 1984). Portanto,
para qualquer mtodo de fecundao utilizado, deve-se escolher machos de
fertilidade alta, a fim de otimizar a taxa de fecundao dos ovcitos.

2.1.6. Desenvolvimento embrionrio

Aps a fecundao e, conseqente formao do zigoto,
inicia-se um processo de sucessivas divises celulares, denominado
clivagem. Estas divises so sincrnicas de modo que ao trmino de cada
clivagem ocorre uma duplicao do nmero de blastmeros, levando ao
desenvolvimento do embrio. Todavia, durante a primeira semana de
desenvolvimento observado pequeno aumento no dimetro embrionrio
atribudo ao volume dos blastmeros que diminui, praticamente pela metade
aps as clivagens, ao mesmo tempo em que ocorre aumento gradual da
fora de coeso intracelular (REICHENBACH et al., 2002).


33
Embries caprinos permanecem na tuba uterina at o quarto
dia aps a cobertura. Este tempo necessrio para permitir ao tero
preparar-se para a funo nutritiva. Inicialmente, ocorre diviso do zigoto em
dois blastmeros, continuando a segmentao durante todo o transporte do
embrio no oviduto. Em geral, quando chegam ao tero encontram-se em
estgio de 16 clulas, denominado mrula. At este estgio, a fora de
coeso entre os blastmeros no intensa, o que permite uma separao
mecnica de cada blastmero em experimentos com embries nessa fase
de desenvolvimento (FREITAS E SIMPLCIO, 2002b).
Do quinto ao sexto dia, com as divises e aumento da fora
de coeso intracelular, os blastmeros aproximam-se mais uns dos outros,
dando um aspecto compacto ao embrio chamado, neste estgio, de mrula
compacta. A partir de ento, os blastmeros no podem mais ser
identificados individualmente. Neste estgio, apesar do tamanho externo do
embrio no ter sido alterado quando comparado ao tamanho do estgio de
duas clulas, o material gentico presente j tem um aumento bastante
significativo (FREITAS E SIMPLCIO, 2002b).
No decorrer das divises celulares, o tamanho dos
blastmeros diminui. Entre o sexto e o stimo dia tem incio a formao da
blastocele e o embrio denominado blastocisto inicial, constitudo por dois
tipos celulares distintos: o embrioblasto, responsvel pela formao feto e o
trofoblasto, que originar os envoltrios fetais (REICHENBACH et al., 2002).
O desenvolvimento da blastocele com a proliferao dos
blastmeros determinam aumento do dimetro embrionrio e diminuio do
espao perivitelineo. A diferenciao celular continua, a blastocele aumenta
e o embrio denominado blastocisto (REICHENBACH et al., 2002).
importante lembrar que neste estgio de diferenciao, o
concepto muito susceptvel a efeitos externos, como drogas, doenas,
radiao, que podem interromper o processo de diferenciao e resultar em
deformidades, anormalidades, abortos ou absoro (SILVEIRA, 2004).
A expanso da blastocele leva ao desaparecimento do
espao perivitelneo e ao aumento do embrio que passa a ser chamado


34
blastocisto expandido. Nesse estgio, o embrioblasto apresenta sua massa
celular presente em um dos plos do embrio e o trofoblasto localizado
perifericamente blastocele (REICHENBACH et al., 2002).
Como conseqncia da expanso da blastocele, a zona
pelcida torna-se delgada e sofre aumento da tenso superficial, culminando
com seu rompimento e ecloso das clulas embrionrias, passando a ser
chamado blastocisto eclodido (REICHENBACH et al., 2002).
Aps ser liberado da zona pelcida, o embrio aumenta
rapidamente de tamanho para entrar em uma fase de alongamento, neste
estgio, o trofoblasto sintetiza protenas denominadas trofoblastinas que se
opem a atividade luteoltica da prostaglandina secretada pelo tero. Com a
manuteno da sntese e secreo de progesterona, o embrio ir implantar-
se na parede terina entre o 14 e o 16 dia aps a fecundao, sendo
considerado o perodo embrionrio at 34 dias, e o perodo fetal desta data
at o trmino da gestao (FREITAS E SIMPLCIO, 2002b).
Atravs das protenas produzidas, o embrio assinala a sua
presena no sistema materno, necessrio para a manuteno do corpo
lteo, produo de progesterona e para a continuao do desenvolvimento
do endomtrio, que permitem o estabelecimento de uma gestao. A
implantao permite que o embrio e o endomtrio atinjam contato ntimo
para a troca de nutrientes e a comunicao endcrina. (HAFEZ, 2004).
Conhecer a estrutura embriolgica em suas distintas fases
de desenvolvimento importante para a tomada de decises, como o caso
da determinao do dia de colheita, fundamental para a micromanipulao
dos embries.

2.1.7. Colheita de embries

Os embries podem ser colhidos das trompas ou do tero.
Nas trompas, permanecem por trs a quatro dias aps o estro, migrando
ento para o tero. Embries uterinos, so colhidos com maior freqncia


35
pois quando transferidos resultam em melhores ndices de gestao e
podem ser congelados com mais sucesso (NEWCOMB e ROWSON, 1975).
Existem, basicamente, trs tcnicas de colheita de embries
em caprinos descritas na literatura: laparotomia, laparoscopia e a colheita via
transcervical. Estes mtodos apresentam resultados diferentes quanto ao
nmero de embries recuperados e aos danos causados ao sistema genital
da doadora (ANDRIOLI et al., 1999).

2.1.7.1. Por laparotomia

A laparotomia um mtodo cirrgico utilizado para colheita
de embries, originalmente descrito por Hunter, Adams e Rowson (1955).
Consiste em uma inciso na linha mdio ventral, da cavidade abdominal que
permite realizar a lavagem dos ovidutos e cornos uterinos, por introduo de
uma agulha hipodrmica na juno tero-tubrica e administrao de uma
soluo de lavagem, recolhida na base dos cornos uterinos com auxlio de
uma agulha, sendo a perda da soluo para o corpo do tero evitada atravs
do bloqueio obtido por presso realizada com os dedos. Com esse
procedimento os autores obtiveram uma taxa de recuperao de embries
na lavagem dos ovidutos e cornos uterinos de 57,8 e 50%, respectivamente.
A colheita por laparotomia foi a primeira a ser empregada
em caprinos e apresenta boa taxa de recuperao de embries. Porm,
pode acarretar aderncias ao sistema genital, comprometendo, s vezes, a
vida reprodutiva do animal, o que limita o uso de doadoras de alto valor
gentico em repetidas colheitas (ANDRIOLI et al., 1999).
No procedimento desta tcnica, os animais devem ser
mantidos em jejum slido e hdrico a partir de 24 horas antes da colheita,
pois sero submetidos anestesia geral e permanecero em decbito
dorsal, para realizao de inciso sobre a linha mdio-ventral, na regio
ventral do abdome, frente das glndulas mamrias.
Para Baril et al. (1989), apesar da taxa de recuperao de
embries ser maior pela laparotomia do que quando se utiliza a laparoscopia


36
(85% e 62%, respectivamente), esta vantagem imediata tem importncia
reduzida em razo da ocorrncia de aderncias no trato reprodutivo.
De acordo com Bari et al. (2000), todos os mtodos
cirrgicos de colheita de embries geralmente garantem mais de 80% de
recuperao na primeira lavagem. Entretanto, a formao de aderncias
ps-operatrias pode limitar a utilizao desta tcnica em animais
valorizados geneticamente.
Ao comparar a taxa de recuperao de embries pelos
mtodos cirrgico e transcervical em programa de transferncia de embries
em caprinos da raa Boer, Silva et al. (2003) colheram, pelo mtodo
cirrgico, 350 embries (21,87 embries/doadora) e, por via transcervical,
recuperaram 157 embries (7,35 embries/doadora). Os autores concluram
que a tcnica de colheita pelo mtodo cirrgico apresentou ndice de
recuperao de embries superior a tcnica transcervical.
Em caprinos, o mtodo de colheita mais utilizado a
laparotomia, mas devido s restries causadas pelas aderncias, o uso da
doadora fica limitado a um nmero reduzido de vezes, o que tende a tornar a
laparoscopia e a colheita pela via transcervical as tcnicas de preferncia
(PEGORARO-RUMPF et al., 1992; ANDRIOLLI-PINHEIRO, 1993).

2.1.7.2. Por laparoscopia

Tcnicas no-cirrgicas de colheita de embries, so
desejveis sob vrios aspectos: reduzem as possibilidades de formao de
aderncias do trato reprodutivo da doadora, h menor risco decorrente da
interveno e maior probabilidade e praticidade na recuperao repetida em
uma mesma doadora (HAFEZ, 2004). Entretanto, sua prtica requer
equipamentos especficos e treinamento profissional, nem sempre factveis.
A tcnica de colheita por laparoscopia, descrita por Mckelvey
e Robinson (1984), consiste na realizao de trs incises na regio ventral
do abdome: uma sobre a linha mdia, a cinco centmetros do bere, e as
outras duas a dez centmetros de bere e eqidistantes trs centmetros da


37
linha mdia. Nas duas incises eqidistantes so introduzidos a pina de
manipulao e o laparoscpio. Na outra, introduzida uma agulha,
denominada, agulha de Verres utilizada para perfurao da base do corno
uterino, fixado pela pina de manipulao. No orifcio perfurado feito a
introduo de um catter de trs vias, com um balo que, inflado, impede a
passagem da soluo de lavagem, introduzida e recuperada pelo prprio
catter. Os autores recuperaram dois embries, um de cada uma das duas
fmeas que apresentavam um corpo lteo.
Este tipo de tcnica requer o uso de anestesia geral e os
animais devem ser contidos com a cabea em nvel mais baixo e em
decbito dorsal, em uma mesa inclinada de 30 a 60 graus, para melhor
visualizao do trato genital. Para facilitar o manuseio interno, a cavidade
abdominal deve ser inflada com CO2.
Ao comparar a colheita e inovulao de embries por via
transcervical e por laparoscopia em cabras, Flores-Foxworth et al. (1992)
constataram que a tcnica de colheita por laparoscopia teve uma taxa de
recuperao significativamente mais alta, contudo no encontraram
diferena na taxa de gestao ao inovular embries pelas duas tcnicas.
O procedimento laparoscpico supera o problema de
aderncias e oferece vantagens em termos de sade animal, mas est
associado a baixas taxas de recuperao de embries e tecnicamente
mais difcil de executar, segundo Bari et al. (2000). Estes mesmos autores
compararam o procedimento de lavagem pelo mtodo laparoscpico original
a uma verso modificada, onde duas alteraes foram feitas: imediatamente
antes da lavagem foi inserido 10ml da soluo de lavagem no cateter de
Foley, para se certificar que estaria com a extremidade desobstruda; a
segunda modificao foi a introduo de um procedimento de lavagem
initerrupto usando inicialmente 30ml do meio de lavagem, posteriormente,
30ml de ar e, 30ml do meio, novamente. Os autores conseguiram um
aumento na taxa de recuperao de embries de 69% no mtodo original,
para 83% quando realizado o procedimento modificado.


38
Andriolli et al. (1999) compararam a eficincia e o efeito de
consecutivas colheitas de embries na espcie caprina pelos mtodos de
laparotomia, laparoscopia e transcervical. As taxas mdias de recuperao
de embries foram 27,3, 81,1 e 57,1%, respectivamente, mostrando ser o
mtodo da laparoscopia o mais eficiente na recuperao de embries. Com
base nos danos causados ao sistema genital das doadoras aps a segunda
colheita, os autores concluram que a tcnica laparoscpica e a transcervical
permitem o uso de doadoras em repetidas colheitas, o que no ocorre com a
colheita por laparotomia que causa aderncia no sistema genital e rgos
circunvizinhos em 100% dos casos.

2.1.7.3. Por via transcervical

A colheita de embries em cabras, que at recentemente era
realizada predominantemente pelo mtodo cirrgico ou laparoscpico,
limitando o nmero de vezes que uma doadora pudesse ser utilizada, devido
ao estresse e formao de aderncias, obteve um significativo avano aps
a introduo da tcnica de colheita transcervical (GUSMO et al., 2003).
Em caprinos, a primeira colheita de embries pela via
transcervical foi realizada por Bondurant et al. (1984). Os autores dilataram a
crvix das doadoras com um expansor cervical denominado Laminaria
Japonica, utilizado em obstetrcia humana para curetagem uterina. O
procedimento de lavagem foi realizado com os animais em estao, sob
anestesia epidural. Nos oito animais testados, a passagem do cateter
atravs da crvix foi conseguida sem grandes dificuldades, mas embries
foram recuperados de apenas duas doadoras.
Com o objetivo de colher embries em caprinos,
minimizando as seqelas da laparotomia, Oliveira et al. (1991) realizaram
colheita pelo mtodo transcervical, e recuperaram 68,5% das estruturas e
89,7% do lquido utilizado para lavagem, e concluram que a colheita de
embries por via transcervical apresentou resultados satisfatrios.


39
Pereira et al. (1991) utilizando pinas de Allis para tracionar
a crvix at o vestbulo vaginal, com o objetivo de facilitar a passagem do
cateter de Foley, obtiveram uma taxa de recuperao embrionria de 39,6%.
Suyadi et al. (2000) realizaram colheitas de embries pela
via transcervical baseados na tcnica descrita por Pereira et al. (1996), com
algumas modificaes: usaram um dispositivo para conter a doadora durante
a lavagem, com cateter desprovido de balo e um orifcio mais amplo foi
feito para drenar o meio de lavagem, realizada de forma initerrupta. Os
autores fizeram uso de prostaglandina F2 em dois momentos distintos que
antecederam a coleta: oito e 24 horas. Os resultados obtidos foram reduo
no nmero de pessoas necessrias para conteno das doadoras e
minimizao do estresse dos animais, assim como reduo no tempo gasto
para as colheitas e aumento na taxa de recuperao de embries.
Segundo Suyadi et al. (2000), cabras nulparas, mesmo
apresentando desenvolvimento corporal mximo, mostram taxas de
recuperao de embries insatisfatrias em colheitas pela via transcervical.
O desenvolvimento de tcnicas menos invasivas para
colheita e inovulao de embries, tornou-se uma necessidade devido s
repetidas colheitas cirrgicas no mesmo animal contriburem para a reduo
da fecundao e da taxa de recuperao de embries. Dessa forma, a
colheita via transcervical tende a ampliar o uso da TE em caprinos tornando-
se a tcnica de preferncia para a espcie (SIMPLCIO et al., 2002).
Visando melhorar a colheita embrionria por via transcervical
em caprinos, Androukovitch et al. (2002) utilizaram uma sonda uretral
humana. Os percentuais obtidos relativos passagem da crvice, embries
colhidos e volume de lquido recuperado foram 83,3%, 81,15% e 94,3%
respectivamente. Os autores concluram que a sonda uretral humana
viabilizou o processo de colheita de embries em cabras plurparas,
limitando-se sua utilizao em fmeas nulparas ou primparas.
Machado et al. (2002) realizaram colheitas de embries por
via transcervical em caprinos da raa Boer, utilizando sete doadoras em


40
duas colheitas sucessivas, recuperando uma mdia de 9,5 estruturas por
doadora, e concluram ser este um mtodo prtico e rpido.
Com o objetivo de verificar a taxa de recuperao
embrionria por via transcervical em cabras da raa Saanen, Lima-Verde et
al. (2003), superovularam 20 doadoras. A crvix foi permevel em 61,5%
das cabras e a taxa de recuperao embrionria foi de 53,2%. Os autores
concluram que a tcnica mostrou-se prtica e vivel, contudo, deve-se
buscar aperfeioar a passagem cervical para elevar a taxa de colheita.

2.1.8. Avaliao das estruturas colhidas

Aps a colheita, as estruturas devem ser avaliadas e
classificadas em estereomicroscpio, utilizando-se uma pipeta para mov-
las no meio de cultura a fim de examinar sua morfologia (HAFEZ, 2004).
Abe et al. (2002) afirmaram que a qualidade dos embries
um fator determinante para o sucesso em um procedimento de transferncia
de embries. Diversos mtodos para avali-los tm sido relatados, como por
exemplo: mensurao de atividade enzimtica, dosagem de glicose, mancha
de live-dead, teste de excluso de corante, que podem ser usados para
predizer a sobrevivncia embrionria aps a transferncia, mas estes
mtodos requerem equipamento complexo e um perodo de cultivo
prolongado do embrio in vitro. Desse modo, so pouco valorizados para
transferncia sob condies de fazenda.
Atualmente, o parmetro morfolgico, que envolve anlise
da forma, cor, tamanho dos blastmeros, do espao perivitelneo, nmero de
clulas extrusadas e degeneradas tem sido amplamente usado para avaliar
a qualidade dos embries em programas de TE (ABE et al., 2002).
Como a avaliao dos embries baseia-se em aspectos
morfolgicos, durante o exame, deve-se mov-los afim de observar todos os
ngulos, pois alguma irregularidade pode passar desapercebida em uma
posio fixa do embrio (BREBION e CHESN, 1995).


41
Etapa de suma importncia, a avaliao e classificao dos
embries requer tcnico bem treinado e qualificado, pois inovular embries
degenerados alm de baixar o ndice de prenhez, aumenta os custos da TE.
Deve ser considerado, a condio da zona pelcida, que deve estar ntegra,
sem fissuras e perfeitamente esfrica, garantindo a proteo do embrio. No
que se refere ao dia da colheita, os embries no devem apresentar atraso
no seu desenvolvimento superior a 48 horas, caso contrrio devem ser
eliminados (BREBION e CHESN, 1995).
Abe et al. (2002) afirmam que a classificao dos embries,
apesar de possuir nomenclatura definida, o aspecto mais subjetivo e
qualitativo de uma transferncia, podendo variar de um tcnico para outro.
Sistemas codificadores padronizados para uso na descrio
do estgio de desenvolvimento e qualidade do embrio foram formulados e
so recomendados de modo que o cdigo para estgio de desenvolvimento
numrico, variando de 1 (ocito no fecundado ou embrio de uma clula)
a 9 (blastocisto expandido eclodido). O cdigo para a qualidade do embrio
tambm numrico e baseado na integridade morfolgica dos embries,
variando de 1 a 4, como segue (IETS, 1999):
# Embrio Grau 1 (Excelente ou Bom): esfrico, blastmeros
com forma bem definida, cor, tamanho e densidade uniformes. Embrio
compatvel com o estdio de desenvolvimento esperado, e com, pelo menos,
85% do material celular de massa embrionria intacta;
# Embrio Grau 2 (Regular): irregularidades moderadas na
forma geral da massa embrionria ou no tamanho, cor e densidade das
clulas individuais. Ao menos 50% do material celular deve compor uma
massa embrionria vivel e intacta;
# Embrio Grau 3 (Pobre): irregularidades maiores na forma
da massa embrionria ou no tamanho, cor e densidade das clulas
individuais. Ao menos 25% do material celular deve formar uma massa
embrionria vivel, intacta;
# Embrio Grau 4 (Morto ou Degenerado): embries em
degenerao, ocitos ou embries de uma clula: no viveis.


42
A avaliao quanto ao estdio de desenvolvimento segue as
recomendaes do Manual da Sociedade Internacional de Transferncia de
Embries (IETS, 1999):
Embries em qualquer estgio, de uma clula ao blastocisto
eclodido, podem desenvolver-se a termo em seguida transferncia para
um ambiente adequado. Porm, ndices de sucesso podem ser mais baixos
nos estgios iniciais ou muito tardios de desenvolvimento (HAFEZ, 2004).
Agrawal e Bhattacharyya (1982) ressaltaram que a colheita
de embries em caprinos deve ser realizada entre o 6 e o 8 dia do ciclo
estral (dia do estro = dia zero) favorecendo a obteno de embries em
estdio de mrula e blastocisto. Caso se destinem exclusivamente a
criopreservao, devem ser colhidos entre o 6,5 e o 7 dia, pois a partir do
8 dia ocorre uma elevada incidncia de blastocistos eclodidos, que
indesejvel do ponto de vista sanitrio (SIMPLCIO e SANTOS, 2000).

2.1.9. Inovulao

Inovulao uma palavra tcnica proposta por BEATTY em
1950, que consiste na deposio do embrio no tero de uma receptora em
circunstncias semelhantes ao da doadora, por mtodos cirrgicos ou no
(BEM, 1989).
Os embries podem ser transferidos para o tero das
receptoras via transcervical, por tcnica de laparotomia, laparoscopia ou por
semi-laparoscopia, no segundo caso, os animais devem ser anestesiados e
o trato reprodutivo exteriorizado atravs de uma inciso na linha mdio
ventral que permita visualizar o corpo lteo (ISHWAR e MEMON, 1996).
A inovulao laparoscpica foi testada inicialmente em
cabras usando-se tubos de metal e de polietileno semelhantes aos usados
em inseminao artificial, obtendo-se o nascimento de um cabrito a partir de
seis embries inovulados (OTSUKI e SOMA, 1964).
De acordo com Mckelvey et al. (1985), a exteriorizao do
trato reprodutivo para a transferncia de embries, envolve algum grau de


43
trauma cirrgico e freqentemente leva a formao de aderncias ps-
operatrias, com comprometimento do tero e/ou ovrio. Estes fatores tm
encorajado ao desenvolvimento de mtodos no-cirrgicos de transferncia
de embries em receptoras, nas diversas espcies domsticas.
Em grandes ruminantes, a manipulao do trato genital pelo
reto facilita a passagem do cateter contendo o embrio atravs do canal
cervical para o tero, assim como a avaliao dos ovrios. Em pequenos
ruminantes, o trato genital no pode ser palpado pelo reto e a atividade
ovariana no pode ser avaliada sem visualizao dos ovrios.
De acordo com Baril (1995) excetuando-se a transferncia
por via transcervical, cuja eficcia baixa, as taxas de sucesso no diferem
quando os embries so inovulados por laparotomia ou sob controle
laparoscpico. Todavia, a transferncia de embries por endoscopia mais
rpida e menos traumatizante que por laparotomia.
Baril (1995) afirmou que a taxa de sobrevivncia embrionria
e de pario so maiores ao inovular dois embries por receptora quando
comparado a um s, alm de utilizar um menor nmero de receptoras.
Para Salles et al. (1996), a laparoscpica permite a
visualizao do ovrio que contm o corpo lteo e do local de deposio dos
embries. Os autores afirmaram, ainda, que a inovulao deve ser realizada
no corno uterino ipsilateral ao ovrio portador do corpo lteo funcional, e que
a tcnica usada no influencia no percentual de gestao.
Para Freitas (2003), a inovulao, tem valorizado o uso de
mtodos no cirrgicos por questo de bem-estar animal, alm do que, o
uso da semi-laparoscopia, onde apenas a parte do corno uterino que vai
receber os embries exteriorizada, reduz o tempo para a transferncia e a
taxa de concepo similar a obtida com a laparotomia.
Deve ser destacado que um dos fatores que afetam o
resultado da TE a sincronizao entre o estgio de desenvolvimento do
embrio e do trato reprodutivo da receptora. Em cabras, a taxa de gestao
cai drasticamente se esta diferena for maior que 48 horas (HAFEZ, 2004).


44
Para Simplcio e Santos (2000), a assincronia entre o
estgio fisiolgico da doadora com o da receptora no deve ser superior a
24 horas. Os autores ressaltaram, ainda, que a transferncia de dois
embries por receptora resultou em maior sobrevivncia que um ou trs.

2.1.10. Fatores que afetam a sobrevivncia de embries transferidos

A taxa de sobrevivncia dos embries aps a inovulao
prxima de 50%, porem vrios parmetros podem faz-la variar (BARIL,
1995). Fatores como condio corporal, taxa de ovulao das receptoras,
nmero de embries inovulados por fmea, inovulao uni e bilateral;
qualidade morfolgica dos embries, local de inovulao e pelo sincronismo
entre a idade dos embries e a fase de preparao da receptora influenciam
a sobrevivncia embrionria (SIMPLCIO e SANTOS, 2000).
Condio corporal: o melhor parmetro de avaliao para
definir se as fmeas devem ou no ser submetidas cobertura, inseminao
artificial ou incorporadas a um programa de TE. A mensurao da condio
corprea consiste na atribuio de um escore, numa escala de 1 a 5, de
acordo com o grau de distribuio do msculo e tecido adiposo ao longo de
algumas partes do corpo (SIMPLCIO et al., 1999).
Animais que apresentam escores 1 e 5 devem ser
descartados para fins reprodutivos, pelo menos, temporariamente, pois estas
condies interferem com a fertilidade, sendo desejado para programas de
TE, animais com escore corporal 3 e 4 (SIMPLCIO et al., 1999).
De acordo com Freitas e Simplcio (2002b), a subnutrio em
cabras submetidas a sincronizao do estro retarda o aparecimento do
estro, reduz a taxa de ovulao e influencia a sobrevivncia embrionria.
Mani et al. (1994) ressaltaram que a subnutrio das receptoras pode afetar
negativamente a porcentagem de gestao e a sobrevivncia dos embries.
Taxa de ovulao das receptoras: A taxa de sobrevivncia de
embries na raa Angor mais elevada quando a transferncia realizada
para receptoras com dois corpos lteos que com um s, pois, sabe-se que a


45
gestao da cabra corpo lteo dependente, isto , a placenta no tem
participao na manuteno da gestao e a presena de dois corpos lteos
acarreta no aumento nos nveis de progesterona, hormnio responsvel pela
manuteno da gestao. Deve-se considerar a qualidade dos corpos lteos
quanto morfologia e colorao (ARMSTRONG et al., 1983) .
Nmero de embries inovulados por fmea: recomendvel
transferir dois embries por receptora, sugerindo que haja um sinergismo
entre os embries, levando a um incremento nos sinais envolvidos com o
processo do reconhecimento e/ou melhoria nas aes anti-luteolticas,
levando a manuteno do corpo lteo (FREITAS E SIMPLCIO, 2002b).
Na poca apropriada, o embrio produz protenas para
assinalar sua presena no sistema materno, necessrio para a manuteno
do corpo lteo, produo de progesterona e continuao do
desenvolvimento do endomtrio, que permitem o estabelecimento da
gestao, denominado reconhecimento materno da gestao. A fixao
permite que o embrio e o endomtrio atinjam um contato ntimo para troca
de nutrientes e comunicao endcrina. Caso o concepto falhe em assinalar
sua presena, a funo do corpo lteo termina pela ao luteoltica da
prostaglandina do endomtrio, fazendo com que a fmea reinicie o ciclo.
Acredita-se que a presena de dois embries pode aumentar a quantidade
de protenas envolvidas com o reconhecimento da gestao, aumentando,
assim, suas chances de sobrevivncia (HAFEZ, 2004).
Inovulao uni e bilateral: Inovulao unilateral o termo que
define a transferncia do(s) embrio(es) para o mesmo corno uterino,
enquanto na bilateral, h transferncia de um embrio para cada um dos
cornos. Esta ltima no contribui para a melhoria na porcentagem de
sucesso em um programa de transferncia de embries, alm de dificultar o
processo. De acordo com Iswar e Memon (1996), a sobrevivncia de
embries caprinos gmeos transferidos significativamente maior quando a
inovulao unilateral e que deve ser realizada no corno uterino ipsilateral
ao ovrio apresentando pelo menos um corpo lteo funcional.


46
Qualidade morfolgica dos embries: Embries que no
possuem alterao morfolgica, apresentam taxa de sobrevivncia superior
quela de embries com alteraes na sua estrutura. Contudo, embries
que apresentam alteraes morfolgicas leves podero ser transferidos a
fresco (FREITAS E SIMPLCIO, 2002b).
Bari et al. (2003) avaliaram a influncia da qualidade de
embries graus 1 a 4 transferidos a fresco, sobre a sobrevivncia
embrionria e concluram que no houve diferena estatstica entre a taxa
de sobrevivncia para embries de qualidade 1 e 2, mas que embries de
graus de qualidade 3 e 4 tiveram taxa de sobrevivncia inferior, diferindo
estatisticamente quando comparados com embries de qualidade 1 e 2.
Local de inovulao: Freitas e Simplcio (2002b), ao
considerarem o estgio de desenvolvimento, concluram que embries
colhidos antes do estgio de mrula devem ser transferidos para as tubas
uterinas, enquanto, aqueles com mais de 16 clulas devem ser inovulados
no tero. Averil e Rowson (apud ISWAR E MEMON, 1996) relataram que
nenhum embrio de duas clulas e somente 16% dos embries ovinos de
quatro clulas desenvolveram-se quando transferidos para o corno uterino.
Sincronismo entre a idade dos embries e o estagio do ciclo
das receptoras: Eventos associados a produo de progesterona pelo corpo
lteo e produo de protenas pelo embrio, resultam na inibio de
PGF2 pelo endomtrio, fundamental para a manuteno da gestao.
Portanto, quanto maior a sincronizao entre o estgio fisiolgico da
receptora e a idade do embrio, maior ser a probabilidade de sucesso da
inovulao. Espera-se que ocorra um aumento na porcentagem de prenhez
quando o momento do incio do estro das doadoras coincide o mais prximo
com o das receptoras (FREITAS E SIMPLCIO, 2002b).
Armstrong et al. (1982), demonstraram a importncia da
sincronizao ao comparar a sobrevivncia de embries com a assincronia
entre doadoras e receptoras. Os resultados mostraram no haver diferena
quando o grau de assincronia do estro das receptoras no excedeu 24
horas, seja antes ou aps o incio do estro das doadoras.


47
2.1.11. Diagnstico de gestao

O diagnstico de prenhez dentro de um programa avanado
de reproduo programada impe-se como uma biotcnica muito importante,
no apenas no aspecto zootcnico mas, tambm no tocante avaliao dos
custos. Existem vrios mtodos de diagnstico aplicveis aos pequenos
ruminantes domsticos descritos na literatura. Entretanto, reduzido o
nmero dos mtodos que permitem o diagnstico precoce e, alguns so
poucos prticos e exigem equipamentos sofisticados alm de pessoal de alta
qualificao tcnico cientfica (SIMPLCIO et al., 2002).
Atualmente encontram-se a disposio vrios procedimentos
bioqumicos e fsicos de eficcia reconhecida, dentre eles podem ser citados
a bipsia vaginal, radiografia, laparotomia, laparoscopia, dosagem hormonal,
determinao de antgeno especfico da gestao, mtodos ultra-snicos.
Existem, ainda, mtodos clnicos mas no so considerados precoces,
como, por exemplo, a palpao abdominal (FREITAS E SIMPLCIO, 2002a).
Segundo Brebion e Chesn (1995), os procedimentos que
permitem o diagnstico precoce de gestao representam um interesse
especial para serem aplicados s receptoras de embries. As tecnologias
elaboradas para diagnosticar com maior certeza o estado de gestao e o
nmero de fetos so indicadas em casos de receptoras de embries.
Em caprinos, o diagnstico de prenhez atravs da
ultrassonografia (US) apresenta grande importncia de ordem prtica em
funo da limitao anatmica para a avaliao do sistema genital atravs
da palpao retal (ANDRIOLLI et al, 1997), alm de ser prtico, eficaz e
seguro, permite o diagnstico j aos 21 dias aps o ltimo estro seguido da
fecundao (SIMPLCIO et al., 2002).
Vieira (2001) realizou diagnostico ultrassonogrfico em
cabras plurparas aos 14, 21, 28 e 35 dias aps a IA e concluiu ser possvel
visualizar a vescula embrionria com 50% de sensibilidade aos 14 dias aps
a IA e identificar os batimentos cardacos aos 21 dias e o feto aos 35 dias
com 100% de sensibilidade.


48
Segundo Buckrell (1988), a eficincia da utilizao da US
para o diagnostico de prenhez, depende: a) do tipo de transdutor (linear ou
setorial); b) da frequncia do transdutor (7,5; 5 ou 3,5MHz); c) do estgio da
gestao; d) da regio onde se realizou a varredura (retal, flanco, abdmen
e inguinal); e) qualidade da imagem; e f) experincia do operador.
A introduo da US na reproduo animal, particularmente
nas espcies eqina e bovina, e, mais recentemente, caprina e ovina,
permitiu o esclarecimento de muitos dos mecanismos que regulam a
reproduo, tendo por base o estudo precioso da dinmica do crescimento
folicular. A utilizao da US no diagnstico de gestao e monitoramento da
viabilidade do embrio e do feto, muito tem contribudo para aumentar a
eficincia reprodutiva dos rebanhos. Com freqncia, modernos aparelhos e
acessrios so colocados disposio dos profissionais, credenciando-os
para um trabalho tcnico de maior confiabilidade (NASCIMENTO, 2004).

2.2. Bisseco

Em espcies domsticas, o nascimento de gmeos
dizigticos acontece quando mais de um vulo liberado sendo, ento,
fertilizados por diferentes espermatozides, resultando no nascimento de
gmeos no idnticos. Casos em que um nico vulo fertilizado origina dois
descendentes idnticos tambm podem ocorrer, levando ao nascimento dos
chamados gmeos monozigticos (HAFEZ, 2004).
A incidncia de gmeos monozigticos de forma natural
rara e encontra-se documentada em poucas espcies tais como a humana e
a bovina; geralmente, os gmeos monozigticos originam-se aps a
implantao quando a massa celular interna diferencia-se em duas linhas
primitivas, formando dois produtos idnticos (Ibdem).
A produo de gmeos monozigticos pode tambm ser
atingida por micromanipulao dos embries atravs de separao
microcirurgica, a partir de embries de duas clulas (HAFEZ, 2004).


49
A micromanipulao de embries inclui um conjunto de
tcnicas importantes que possibilitam obter animais de interesse cientfico,
econmico e zootcnico. Dentro da tcnica, vrias so as opes de
pesquisa: transferncia de genes para obteno de animais transgnicos,
estudo da relao entre ncleo e citoplasma, determinao do sexo,
micromanipulao de blastmeros e a bisseco de embries, para a
obteno de gmeos idnticos, a opo mais vivel (BEM et al., 1987).
A bisseco de embries a biotcnica atravs da qual, um
embrio em estgio inicial de desenvolvimento, mecanicamente dividido,
preferencialmente em duas partes iguais. Para sua execuo, necessria
uma seleo morfolgica dos embries visando identificar os que,
potencialmente, sobrevivero ao processo da bisseco e da transferncia
das metades embrionrias para as receptoras (REICHENBACH et al., 2002).
De acordo com Brebion e Chesn (1995), esta biotcnica
permite elevar o nmero de embries disponveis de uma doadora atravs
da diviso em duas ou mais partes embries em estgio de mrula
compacta ou blastocisto, pois um dos principais fatores que limitam a
eficcia da TE o escasso nmero de embries produzidos pela doadora.
A diviso de embries foi realizada, inicialmente, em animais
de laboratrio. O primeiro relato de xito com essa tcnica foi citado por
Nicholas e Rall em 1942 (apud MELO, 2004) utilizando no procedimento
embries de ratos. Mullen et al. (1970) publicaram o nascimento de gmeos
monozigticos da espcie Mus musculus a partir da separao de
blastmeros em embries de duas clulas.
Em animais domsticos, os primeiros trabalhos de bisseco
de embries foram realizados com ovelhas (WILLADSEN, 1979) e bovinos
(WILLADSEN e POLGE, 1981). Esses autores usaram tcnicas complexas,
selando as incises feitas na zona pelcida durante a micromanipulao
com Agar gel e passando os hemi-embries por hospedeiros intermedirios.
Em eqinos, os primeiros trabalhos surgiram na dcada de
80 (ALLEN e PASHEN, 1984). poca, a tcnica de bisseco utilizava
vrios instrumentos e adotava a reintroduo dos hemi-enbries em


50
membranas pelcidas e cultivo in vitro ou in vivo antes da transferncia, o
que limitava sua aplicao (SILVEIRA, 2004).
No Brasil, em 1986, foi transferido para uma vaca mestia
Chianina-Nelore, o primeiro par de hemi-embries bovinos da Amrica
Latina, pela equipe EMBRAPA-CENARGEN, atravs da bisseco de um
embrio originrio da raa Indubrasil Vermelho. Como resultado nasceram,
em 1987, dois bezerros machos, geneticamente idnticos (BEM, 1989).
Em 2001 nasceram, os primeiros caprinos gerados no Brasil
com a tcnica de bisseco. Foram partidos nove embries e inovuladas
duas metades por receptora. Das nove que receberam os hemi-embries,
duas deram origem a trs crias (SALLES, 2001)
Segundo Bem et al. (1987), a bisseco de embries, alm
de aumentar o nmero de produtos por embrio original, oriundo de
doadores (machos e fmeas) geneticamente desejveis, tambm
importante para a pesquisa envolvendo a gentica (herdabilidade, relao
gentipo-fentipo), fisiologia (endocrinologia, alimentao, teraputica) e
etologia (habilidade materna e comportamento sexual).
Atravs da bisseco e utilizando-se apenas embries de
boa qualidade, possvel atingir, com a transferncia dos hemi-embries,
100% de gestaes, tendo em mdia 25% de possibilidade de haver, entre
os nascidos, um par de gmeos idnticos (REICHENBACH et al., 2002).
Uma simplificao importante do mtodo de bisseco foi
relatada por Voelkel et al. (1984), que, estudando bovinos, demonstraram
que os hemi-embries provenientes de mrula compactada ou blastocisto
no tm necessidade de serem reinseridos em uma zona pelcida para seu
desenvolvimento in vivo.
Com a evoluo da tcnica, os pesquisadores simplificaram
a metodologia da bisseco de embries de bovinos (OZIL et al., 1982;
LAMBERTH et al., 1983; OZIL, 1983, WILLIAMS et al., 1982). Nestes
trabalhos ficou evidente que apenas 30 a 40% da massa celular total refaz
um indivduo normal, portanto, possvel, por micromanipulao dividir


51
embries em duas ou mais partes, transferi-las para receptoras e obter
gmeos, trigmeos ou quadrigmeos.
No Brasil, o instrumental para bisseco foi simplificado,
baseando-se na utilizao de dois microinstrumentos artesanais: uma pipeta
de aspirao fabricada com um bico de Bunsen, que serve para posicionar e
manter o embrio imvel; e um fragmento de lmina que serve para dividir o
embrio. Estes instrumentos devem ser adaptados ao brao de um
micromanipulador, o que favorece a execuo prtica da tcnica de
bipartio embrionria (BEM, 1989).
A tcnica de bisseco embrionria de interesse para uma
srie de aplicaes em programas de melhoramento animal: possibilita a
retirada de clulas embrionrias no momento da bisseco, facilitando a
realizao do diagnstico pr-implantativo, que permite identificar se o
embrio portador de alguma anomalia gentica, verificar caractersticas
genticas desejveis e sexar os embries (REICHENBACH et al., 2002).
O uso de gmeos idnticos pode permitir, ainda, uma melhor
seleo de gentipos, atravs de investigaes mais exatas sobre as
interaes gentipo e meio ambiente. O teste de prognie com gmeos
idnticos pode incrementar a seleo animal por aumentar a exatido dos
clculos dos valores zootcnicos e diminuir o nmero de animais que teriam
que ser testados, e conseqentemente, o custo desta seleo, alm do
aumento da velocidade de seleo (Ibdem).
De acordo com Reichenbach et al. (2002), resultados
estatsticos mais precisos podem ser alcanados com gmeos idnticos,
permitindo avanos mais rpidos e mais especficos na pesquisa de doenas
genticas. Os autores afirmaram, ainda, que as influncias do meio
ambiente para as diversas caractersticas dos animais poderiam ser
determinadas com maior preciso. Do mesmo modo, estudos sobre a ao
dos medicamentos e de seus efeitos colaterais poderiam ser melhor
estudados com gmeos idnticos.




52








3. CAPTULO NICO


AVALIAO DA BISSECO DE EMBRIES COM O OBJETIVO DE
ELEVAR A EFICCIA DA TCNICA DE TRANSFERNCIA DE
EMBRIES NA ESPCIE CAPRINA
(Evaluation of embryos bisection so as to increase efficacy of embryo
transfer technique in caprine)

RGO, T.P.N
1
; SOUZA, J.A.T
2
1
Ps-graduanda do Curso de Mestrado em Cincia Animal da Universidade
Federal do Piau (UFPI)
2
Prof. Dr. do Curso do Mestrado em Cincia Animal da UFPI. - adalmir@ufpi.br


RESUMO


Este trabalho teve por objetivo avaliar a utilizao da tcnica de bisseco
visando elevar a eficcia da transferncia de embries em caprinos.
Dezessete doadoras foram sincronizadas com progesterona natural durante
11 dias e superovuladas com 250 UI de FSH/LH. As receptoras foram
sincronizadas com progestgeno por 11 dias e receberam 300 UI de eCG e
75g de Cloprostenol no dia nove. As colheitas foram realizadas via
transcervical, sete dias aps a primeira cobertura. Das 92 estruturas
recuperadas, 48 (mrulas ou blastocistos) de grau de qualidade 1 e 2 foram
utilizadas. De cada trs embries obtidos graus 1 ou 2, um foi bisseccionado


53
e as metades inovuladas na mesma receptora. Embries inteiros foram
inovulados aos pares. Das 16 receptoras inovuladas com embries inteiros,
nove (56,25%) apresentaram prenhez, sendo trs com dois embries
(37,50% do total de embries transferidos). Das 16 que receberam hemi-
embries, quatro (25,00%) apresentaram gestaes simples e uma (6,25%)
apresentou gestao dupla (totalizando 37,50% dos embries transferidos).
Embries partidos em estgio de mrula, independente do grau de
qualidade, no resultaram em gestao, j em estgio de blastocisto o ndice
obtido foi 100,00% para estruturas de qualidade 1 (P<0,05). Os dados
permitem concluir que o estgio de mrula no indicado para bisseco
em caprinos, e que quando bisseccionados embries em estgio de
blastocisto, grau 1 a tcnica se mostrou eficaz para elevar os ndices
gestacionais em programa de transferncia de embries em caprinos.
PALAVRAS-CHAVE: bisseco, caprino, embrio


ABSTRACT


This assignment aimed to evaluate the use of bisection technique in order to
enhance efficacy of embryo transfer in caprine. Seventeen donators were
synchronized with natural progesterone during 11 days and super ovulated
with 250 UI of FSH/LH. The recipients were synchronized progestogen for 11
days and received 300 UI of eCG and 75g of cloprostenol on the eleventh
day. The harvest was done transcervically, seven days after the first
copulation. From the 92 recovered structures, 48 (morula or blastocyst) of
quality degree 1 and 2 were used. Of each three obtained embryos degree 1
or 2, one was bisectioned and the halves were put into the same recipient.
Integral embryos were ovulated in pairs. From the 16 recipients ovulated with
entire embryos, nine (56.25%) got pregnant, three with two embryos (37.50%
of the transferred embryos total). From the 16, which received hemi-embryos,
four (25%) presented simple pregnancy and one (6.25%) presented double
pregnancy (totalizing 37, 50% of the transferred embryos). Parted embryos
while morula, regardless of quality degree, did not result in pregnancy, but,
while blastocyst, the obtained index was 100% for quality 1 structures (P<0,
05). It can be concluded from the data that the morula stage is not indicated
for bisection in caprine, and when bisectioned blastocyst degree 1, the
technique proved to be efficient to raise the pregnancy index in embryo
transference programs in caprine.
Key words: bisection, caprine, embryo.





54
INTRODUO


A necessidade de elevar a produo animal exige que os
contnuos avanos tecnolgicos, em embriologia, promovam um
melhoramento na eficincia da utilizao de embries. A incorporao da
tecnologia de micromanipulao, especialmente a bisseco de embries,
tem permitido aumentar as taxas de gestao de produtos de doadoras
especficas. Atravs da bisseco, pode haver uma propagao de animais
desejados de forma mais rpida, levando a um grande progresso em
programas comerciais de transferncia de embries (GRAY et al., 1991).
A bisseco a biotcnica atravs da qual, com
equipamento de micromanipulao apropriado, um embrio em estgio
inicial de desenvolvimento, mecanicamente dividido, preferencialmente em
duas partes iguais. Para execuo desta tcnica, necessria uma seleo
morfolgica dos embries visando identificar os que, potencialmente,
sobrevivero ao processo da bisseco e a transferncia imediata das
metades embrionrias para as receptoras (REICHENBACH et al., 2002).
Em bovinos, apresenta importncia especial, pois alm de
possibilitar um aumento no efetivo do rebanho, evita o aparecimento do free-
martinismo, caracterstico da espcie, pois gmeos oriundos de bisseco
possuem o mesmo sexo o que impede esta ocorrncia (MELO, 2004).
Tsunoda et al. (1984) dividiram embries caprinos em
estgio de mrula compacta e blastocisto inicial, cultivaram in vivo e
transferiram para seis receptoras, das quais duas ficaram prenhes.
De acordo com Udy (1987), embries de cabras so
aparentemente mais frgeis e mais difceis de serem manipulados quando
comparados aos de outras espcies, como ovinos e bovinos. provvel que
estas condies ocorram devido as aderncias intercelulares mais fracas em
estgio de mrula quando comparado o mesmo estgio em outras espcies
e a zona pelcida de embries de cabras ser mais flexvel o que torna sua
bisseco relativamente difcil.


55
Ao avaliar a taxa de sobrevivncia de embries de ovelhas
colhidos entre os dias cinco e oito, seccionados em duas partes e
transferidos para um ou os dois cornos uterinos com ovrio portador de
corpo lteo, Maurer (1988) concluiu que a sobrevivncia de hemi-embries
maior quando as metades so inovuladas em um mesmo corno uterino e
que melhores resultados de gestao ocorrem com embries colhidos nos
dias sete e oito. Quando colhidos no dia cinco no sobrevivem a bisseco.
Mckinnon (1999) afirmou que, aps a bisseco, comumente
um gmeo usado como controle e o outro destinado a um teste
especfico. A reduo do nmero de animais experimentais, permitida pelo
uso de gmeos idnticos, diminui os custos e o uso excessivo de animais.
Para o autor, outra importncia da tcnica, o possvel aumento no nmero
de gestaes a partir dos embries originais, em bovinos; a tcnica resulta
em aproximadamente 50% a mais de prenhez quando comparada com a
transferncia de embries inteiros.
Skrzyszowska e Smorag (1989) afirmaram que muitos
fatores influenciam a viabilidade de embries bisseccionados, como a
qualidade e o estgio de desenvolvimento do embrio, o mtodo de diviso
e o nmero de hemi-embries transferidos. Os autores, afirmaram, ainda,
que embora teoricamente um hemi-embrio deva ter a metade do nmero de
clulas do embrio original, na prtica, este nmero reduzido devido a
perda de uma certa quantidade de clulas no processo de diviso. No caso
de blastocistos, clulas do embrioblasto e do trofoblasto so perdidas.
Ao avaliar o percentual de perda celular aps a bisseco
em embries de ratos, ovelhas e vacas, em estgio de blastocisto
Skrzyszowska e Smorag (1989) encontraram uma mdia de 13,8%; 13,2% e
12,7% para embries de ratos, ovelhas e vacas, respectivamente.
Para Wood e Trounson (2000), o sucesso na bisseco de
embries maior quando se utiliza blastocisto que mrulas. Isto
provavelmente ocorra, devido ao fato de existir maior quantidade de clulas
neste estgio, que facilitam o desenvolvimento do embrio e o
estabelecimento da gestao. Os autores afirmaram, ainda, que para


56
realizao desta tcnica, no se deve utilizar embries de baixa qualidade,
que tenham poucas clulas ou algum outro tipo de defeito celular, pois, aps
a transferncia, tero poucas chances de resultar em gestao.
A incorporao da bisseco em programas comerciais de
transferncia de embries reflete um grande entusiasmo nestes
procedimentos que podem melhorar a eficincia reprodutiva de nossos
rebanhos. Para utilizao comercial da bisseco importante avaliar a
relao risco/benefcio quando aplicada esta tecnologia. A sofisticao da
tecnologia de bisseco embrionria, tem permitido, juntamente com o
congelamento, a manuteno da metade da massa celular de um embrio
para futuras avaliaes de gentipo, e outras utilidades (GRAY et al., 1991).
De acordo com Yang e Anderson (1992), a combinao da
da bisseco de embries com a bipsia para a sexagem e criopreservao
de embries favorecero a utilidade comercial desses procedimentos.
A expectativa que tem gerado as informaes divulgadas
justificam a necessidade de dar continuidade s pesquisas nessa rea de
conhecimento. Objetivou-se, com este trabalho, avaliar a capacidade de
aumentar o nmero de produtos a partir de embrio original na espcie
caprina, atravs da utilizao da tcnica de bisseco de embries colhidos,
partidos em duas metades e transferidos imediatamente para as receptoras.


MATERIAL E MTODOS


O experimento foi realizado na Fazenda Santo Antnio,
localizada no municpio de Campo Maior, Regio Norte do Estado do Piau,
com latitude 0449' 40''S e longitude 4210'07W, pluviometria mdia anual
na regio, da ordem de 1305mm e temperatura variando entre 28 a 35C
(CEPRO, 1990).
Foram utilizadas doze cabras da raa Boer e cinco da raa
Anglonubiana, nulparas ou plurparas, com idade variando entre dez meses


57
e trs anos, como doadoras de embries e, como receptoras, 113 cabras
mestias Anglonubiana x Boer, Anglonubiana x Toggenburg, primparas ou
plurparas. Dois machos da raa Boer e dois da raa Anglonubiana, de
fertilidade comprovada foram utilizados como reprodutores.
Durante o perodo experimental, as doadoras foram
mantidas, no turno da manh, em piquetes com predominncia de capim
andropgon, capim mimoso e unha-de-gato. O resto do tempo
permaneceram em baias apropriadas recebendo volumoso de feno de tiffton
e rama nativa (crioli), alm de gua e sal mineral
1
vontade, e
suplementao diria de 400g de rao composta de 40% de milho, 30% de
soja, 20% de feno de tiffton e 10% de farelo de trigo para cada doadora. As
receptoras permaneceram em pastagem nativa durante o dia, recebendo
como suplemento, 300g de rao por receptora, de composio semelhante
rao das doadoras, alm de sal mineral
1
e gua vontade.
Nas doadoras a sincronizao do ciclo estral foi obtida
atravs de um dispositivo intravaginal contendo 0,33g de progesterona
2
por
um perodo de 11 dias. Para superovulao utilizou-se 250 UI da associao
FSH-LH
3
, administrada via intramuscular a partir do dia nove, considerando
a colocao do implante de progesterona como dia zero, em seis doses
decrescentes, a intervalos de 12 horas, por um perodo de trs dias. No
ltimo dia de aplicao da gonadotrofina, administrou-se 100g de
cloprostenol
4
via intramuscular, sendo, ento, monitoradas quanto ao incio
do estro, em intervalos de seis horas, utilizando-se rufies vasectomizados.
Caracterizada a manifestao do estro, as doadoras foram
cobertas at no mais aceitarem o macho. Doze horas aps a ltima
cobertura, foi reintroduzido o dispositivo intravaginal de progesterona
2
, afim
de prevenir a ocorrncia de regresso prematura de corpos lteos. Os
dispositivos foram removidos no dia anterior a colheita.

1
Caprinofs tortuga, Brasil.
2
CIDR-Pharmacia, Brasil.
3
Pluset- Calier S.A.,Espanha.
4
Ciosin-Shering-Coopers, Brasil.


58
As receptoras tiveram o ciclo estral sincronizado atravs de
esponjas intravaginais impregnadas com 60mg de acetato de
medroxiprogesterona
5
, mantidas por 11 dias. No dia nove, considerando a
data da colocao da esponja dia zero, administrou-se 300 UI de
gonadotrofina corinica eqina
6
e 75g de cloprostenol
4
, via intramuscular. A
deteco do estro foi realizada por rufies, apresentados a cada 12 horas.
A colheita dos embries foi realizada por lavagem uterina
utilizando-se, aproximadamente, 240ml de Soluo Salina Fosfatada
Tamponada (D-PBS)
7
por doadora, via transcervical, sete dias aps a
manifestao de estro. Os animais foram submetidos a jejum hdrico e slido
por 14 horas antes da colheita. Aps tricotomia da regio do perneo e vulva,
o animal foi colocado em maca de conteno e a cauda suspensa por um
funcionrio. Com auxlio de uma pina de Pozzi (24cm), a crvix foi fixada e
tracionada e um cateter de via nica, desprovido de balo (Rusch, nmero
10 ou 12), guiado por um mandril de ao, foi introduzido no tero. Aps
introduzido o cateter, o mandril foi retirado e iniciou-se a lavagem uterina.
Com o objetivo de facilitar o retorno do meio de lavagem, o cateter foi
levemente movimentado para frente e para trs e o lavado uterino recolhido
em filtro coletor
8
.
Ao trmino da lavagem, o filtro foi levado ao laboratrio, o
meio transferido para placa de Petri e observado em esteriomicroscpio com
a finalidade de procurar as estruturas. Ao serem identificados, os embries
foram transferidos, com auxlio de um tom cat acoplado a uma seringa de
1ml, para uma nova placa, submetidos a trs banhos consecutivos em D-
PBS
7
e transferidos para outra placa contendo meio de manuteno
9
. Em
seguida, foram avaliados e classificados de acordo com a Sociedade
Internacional de Transferncia de Embries (IETS, 1999).

5
Progespon Syntex S.A. , Argentina.
6
Folligon Intervet, Brasil.
7
Dulbecco Modificado- Cultilab Mat Cult Cel LTDA, Brasil.

8
Coletor de embrio milipore estril Nutricell, Brasil.
9
Holding 0,4% BSA Cultilab Mat Cult Cel LTDA, Brasil.


59
Foram utilizados embries em estgio de mrula e
blastocisto, de graus de qualidade 1 e 2 segundo a IETS.
No processo de bisseco, utilizou-se um micromanipulador
de embries (Figura 1), modelo microtorno, composto por dois braos
apoiados sobre uma base adaptada a uma lupa estereomicroscpica. Na
extremidade de um dos braos, foi acoplada uma micropipeta de suco e
na extremidade do outro brao foi acoplada uma lmina japonesa (Biocut-
Fujihira Industry) utilizada para realizar o corte dos embries (Figura 2).









Figura 1 Micromanipulador de embries composto por dois
braos apoiados sobre uma base adaptada a uma lupa
estereomicroscpica.

(A) (B)









Figura 2. (A) Detalhe do brao do micromanipulador cuja extremidade
acoplada lmina para realizar o corte do embrio, (B) Detalhe do brao do
micromanipulador cuja extremidade acoplada micropipeta de suco.


60
(A) (B)
A micropipeta de suco foi produzida artesanalmente por
estiramento de um capilar, em chama de lamparina. A curvatura e
arredondamento da borda foram obtidas com chama de isqueiro gs
(Figura 3), cujo dimetro interno estimado em aproximadamente a metade
do dimetro do embrio que de cerca de 200m em fase de blastocisto.








Figura 3 Seqncia da confeco artesanal de uma micropipeta de
suco: (A) Estiramento em chama de lamparina, (B) corte do capilar com
ponta de diamante, (C) Curvatura da micropipeta e (D) Micropipeta pronta.

Cada embrio destinado bisseco foi colocado em uma
placa de Petri, contendo D-PBS
7
, fixado e posicionado pela micropipeta de
suco atravs de presso negativa, enquanto a lmina era disposta central
e dorsalmente ao embrio para proceder ao corte (Figura 4) em um nico
movimento para baixo at seu encontro com o fundo da placa. Em seguida,
leves movimentos para frente e para trs foram realizados com a finalidade
de separar os hemi-embries.
(D)
(C)


61
Antes da seco o embrio era posicionado de modo que,
no momento do corte, cada hemi-embrio ficasse com aproximadamente
50% do total de clulas. No momento do corte, a presso exercida pela
micropipeta era retirada, evitando-se que os hemi-embries fossem
sugados.
Figura 4 Seqncia da bisseco de um embrio: (A) Fixao do embrio
com a micropipeta de suco, (B) Posicionamento da lmina para realizar a
seco do embrio.

Concretizada a separao das duas metades, era
adicionado meio de manuteno
9
para que os hemi-embries no ficassem
aderidos na placa de petri, micropipeta ou lmina.
Os hemi-embries foram envasados em tom cat contendo
meio de manuteno
9
, aspirando, pequena quantidade do meio, em seguida,
pequena coluna de ar, pequena quantidade do meio contendo uma das
metades, nova coluna de ar, nova coluna de meio contendo a outra metade,
outra coluna de ar e a ltima coluna de meio, para serem inovulados.
No processo de inovulao de embries inteiros foram
utilizadas receptoras cuja assincronia com a doadora correspondente no foi
superior a 24 horas. Para inovulao de hemi-embries utilizou-se
receptoras que manifestaram estro -12 a +36 horas aps o incio do estro
das doadoras, mas, de acordo com Reichenbach et al. (2002), para obter-se
um melhor percentual de gestao aps a bisseco, deve-se utilizar
receptoras que tenham iniciado estro 12 a 36 horas aps doadora
correspondente, pois com a bisseco ocorre um atraso no desenvolvimento
das metades embrionrias. Alm disso, sendo a massa celular das duas
(A) (B)


62
metades menor que a de embries inteiros, existe necessidade de um
perodo adicional para sua recuperao de aproximadamente 12 a 36 horas.
As receptoras foram submetidas a jejum hdrico e slido por
24 horas antes das transferncias. Para as inovulaes, realizadas por semi-
laparoscopia, as receptoras tiveram a regio abdominal tricotomizada e
higienizada. Utilizou-se para anestesia, uma associao de 250mg de
cloridrato de ketamina a 5%
10
e de 20mg de cloridrato de xilazina 2%
11

adicionado a 19ml de soluo fisiolgica. Foi aplicado 1ml da soluo para
cada 10Kg de peso vivo, por via endovenosa e em seguida, os animais
foram colocados na maca de conteno para inovulao.
Na regio tricotomizada, procedeu-se antissepsia com lcool
iodado a 10%. Para facilitar a passagem dos trocateres, que permitiram a
entrada da pina de manipulao e da tica do laparoscpio, realizou-se
anestesia local com lidocana a 2%
12
e uma pequena inciso de 2cm. Aps a
visualizao do tero, os ovrios foram avaliados, apenas receptoras que
possuam pelo menos um ovrio portador de um corpo lteo funcional foram
utilizadas. Para inovular os embries, o corno uterino ipsilateral ao ovrio
portador do corpo lteo foi exteriorizado e um pequeno orifcio foi feito, para
introduzir a ponta do tom cat e injetar o meio contendo os embries.
Concluda a inovulao, realizou-se a sutura utilizando-se fio de nylon
13
.
O procedimento ps-operatrio constou da administrao de
oxitetraciclina
14
e aplicao local por cinco dias de Ungento Pearson
15
.
De cada trs embries obtidos em estgio de mrula ou
blastocisto, grau 1 ou 2 de uma doadora, um foi bisseccionado e as metades
inovuladas em uma mesma receptora, cuja assincronia com relao ao estro
da doadora correspondente foi de -12 a +36 horas. Os embries inteiros
foram inovulados em nmero de dois em receptoras que apresentaram incio
do estro em intervalos de 12 a + 24 horas.

10
Ketamina 5% - F. A. Cristlia, Brasil.
11
Rompun Bayer do Brasil S.A.
12
Anestsico L Pearson Pearson Sade Animal Ltda, Brasil.
13
Linha de nylon GRILON Ltda-Brasil.
14
Terramicina LA Laboratrio Pfizer Ltda, Brasil.


63
Aps as inovulaes, as receptoras utilizadas foram
identificadas e permaneceram no sistema de manejo citado para as
doadoras at a data do US. Os animais positivos, foram mantidos neste
sistema, os demais soltos na propriedade.
O diagnostico de gestao foi realizado atravs de ultra-
sonografia (Scaner 100 Piemedical com transdutor abdominal de 5 MHz) 30
a 45 dias aps as inovulaes.
A anlise estatstica dos resultados deste trabalho foi
realizada atravs do teste do Qui-quadrado (
2
).


RESULTADOS E DISCUSSO


Das 17 doadoras submetidas ao programa, duas no
manifestaram estro, trs apresentaram estro prolongado e em uma que
manifestou estro e teve o tero lavado, no houve recuperao de
estruturas. As demais, 11 doadoras permitiram a recuperao de 92
estruturas, o que perfaz uma mdia de 8,36 estruturas por doadora.
A transposio da crvix foi obtida em 100% das tentativas
de passagem, resultados estes superiores aos de Andriolli et al. (1999),
Androukovitch et al. (2002) e Lima-Verde et al. (2003) que obtiveram
permeabilidade cervical em 73,3; 83,3 e 61,5% das tentativas de
ultrapassagem da crvix, respectivamente.
Das 92 estruturas recuperadas, 48 embries em estgio de
mrula e blastocisto, graus 1 ou 2 foram utilizados. As demais estruturas no
foram contabilizadas.
Do total de 48 embries utilizados, 32 foram inovulados
inteiros, aos pares, em 16 receptoras. Os demais foram seccionados em

15
Ungento Pearson Pearson Sade Animal Ltda-Brasil


64
duas metades, sendo inovuladas juntas as metades correspondentes a um
embrio em um mesmo animal, totalizando, tambm, 16 receptoras.
A tabela 1 mostra que no houve diferena estatstica
significativa quando comparados os grupos de embries inteiros e
bisseccionados no que diz respeito a ocorrncia de gestao.
Tabela 1 Ocorrncia de gestao em receptoras inovuladas com embries
inteiros e bisseccionados. Campo Maior-PI, 2005.
G E S T A O
E M B R I E S
Positiva Negativa
Inteiros 9/16 (56,25%)
a
7/16 (43,75%)
a

Bisseccionados 5/16 (31,25%)
a
11/16 (68,75%)
a

Total 14/32 (43,75%) 18/32 (56,25%)
Percentuais seguidos da mesma letra, na coluna, no diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P>0,05).

A ocorrncia de 56,25% (9/16) de gestao em embries
inteiros e 31,25% (5/16) em embries bisseccionados so semelhantes aos
relatados por Leibo e Rall (1987), que no encontraram diferena estatstica
significativa na taxa de gestao entre os dois grupos. Por outro lado,
diferem dos resultados descritos por Maurer (1988), que ao comparar a taxa
de sobrevivncia de embries inteiros e hemi-embries obteve, 86,4% de
gestao (44/51) para o primeiro e 41,8% (67/160) para o segundo grupo.
Diversos fatores podem afetar a sobrevivncia de embries
transferidos. Para minimizar a influncia desses fatores, foram utilizadas
apenas receptoras de escore corporal 3 e 4, cujos ovrios apresentavam um
ou dois corpos lteos funcionais, inovulando-se os embries, classificados
de grau de qualidade 1 ou 2, sempre aos pares, no mesmo corno uterino.
Apesar de no ter sido evidenciado diferenas estatsticas
significativas entre as gestaes em receptoras inovuladas com embries
inteiros e bisseccionados, uma aparente diferena em valores percentuais foi
observada, que pode estar associada ao processo de bisseco. Williams et


65
al. (1984) afirmaram que a taxa de gestao em embries bisseccionados
dependente do estgio de desenvolvimento embriognico. Para Bredback
(1995), o mtodo de transferncia dos hemi-embries, as perdas celulares
ocorridas com a diviso embrionria e o estgio de sincronia com a
receptora podem afetar a viabilidade embrionria aps a bisseco.
Beckett et al. (1999), relataram que a sobrevivncia de
embries caprinos bisseccionados em receptoras mais baixa que a de
embries inteiros, esta reduo pode ser atribuda a perda da viabilidade
celular aps a bisseco, falha na capacidade de hemi-embries emitirem
sinais necessrios a manuteno da gestao, ou estes fatores combinados.
Para que os possveis fatores que afetam a sobrevivncia
embrionria pudessem ser melhor explicados, a tabela 1 foi desmembrada
nas tabelas que se seguem.
A ocorrncia de gestao quando comparados embries em
estgio de mrula inteiros e bisseccionados est apresentada na tabela 2,
sendo observado diferenas estatsticas significativas.
Tabela 2 Ocorrncia de gestao em receptoras inovuladas com embries
em estgio de mrula, inteiros e bisseccionados. Campo Maior-
PI, 2005.
G E S T A O
E M B R I E S
Positiva Negativa
Mrulas inteiras 4/7 (57,14%)
a
3/7 (42,86%)
a

Mrulas bisseccionadas 0/7 (00,00%)
b
7/7 (100,00%)
b

Total 4/14 (28,57%) 10/14 (71,43%)
Percentuais seguidos de letras diferentes, na coluna, diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P<0,05).
Pode ser observado que em 57,14% das fmeas que
receberam embries em estgio de mrula, inteiros, ocorreu gestao, j
nas receptoras inovuladas com embries bisseccionados neste mesmo
estgio de desenvolvimento no foi diagnosticado prenhez. Estes resultados
so semelhantes aos obtidos por Tsunoda et al. (1985), que dividiram 22


66
embries caprinos em estgio de mrula, mas no obtiveram gestao. O
mesmo ocorreu com Maurer (1988), que observou que embries colhidos e
bisseccionados no dia cinco no sobreviviam aps a inovulao.
Em bovinos, Williams et al. (1984) obtiveram 16 e 60% de
gestao utilizando para bisseco embries em estgio de mrula e
blastocisto, respectivamente. Os autores mencionaram que a ruptura da
zona pelcida de embries em estgio de mrula foi o fator principal para os
baixos ndices gestacionais encontrados.
Udy (1987) afirmou que a fora de coeso intercelular de
embries caprinos, em estgio de mrula, inferior quando comparado o
mesmo estgio em outras espcies, causando maior perda celular no
momento da bisseco, tendo como conseqncia menor quantidade de
clulas para dar continuidade ao desenvolvimento embrionrio e menor
emisso dos sinais necessrios ao reconhecimento materno da gestao.
Ao comparar a ocorrncia de gestao em receptoras
inovuladas com embries em estgio de blastocisto, inteiros e
bisseccionados, no foi evidenciada diferena estatstica significativa
conforme dados apresentado na tabela 3.
Tabela 3 Ocorrncia de gestao em receptoras inovuladas com embries
em estgio de blastocisto, inteiros e bisseccionados. Campo
MaiorPI, 2005.
G E S T A O
E M B R I E S
Positiva Negativa
Blastocistos inteiros 5/9 (55,55%)
a
4/9 (44,45%)
a

Blastocistos bisseccionados 5/9 (55,55%)
a
4/9 (44,45%)
a

Total 10/18 (55,55%) 8/18 (44,45%)
Percentuais seguidos da mesma letra, na coluna, no diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P>0,05).

A ocorrncia de igual nmero de gestaes quando
inovulados embries em estgio de blastocisto, inteiros e bisseccionados,


67
sugere que neste estgio, hemi-embries tm a mesma capacidade de se
desenvolver que embries inteiros.
Deve ser mencionado que a gestao em receptoras
inovuladas tanto com blastocistos inteiros quanto bissecconados s ocorreu
para embries grau 1. De um total de seis receptoras inovuladas com
blastocistos bisseccionados grau 1, cinco apresentaram gestao (83,33%
das receptoras), sendo uma dupla, o que totaliza o desenvolvimento de
100% do nmero de embries originais para este estgio e grau de
qualidade, evidenciando que aqueles com melhor qualidade morfolgica tm
maior capacidade de desenvolvimento. Estes resultados, foram superiores
aos obtidos por Szll e Hudson (1991), cujo percentual de receptoras
gestantes aps a inovulao de hemi-embries nas mesmas condies, foi
de 50% (58/115).
Armas et al. (1992) avaliaram o efeito da qualidade do
embrio em estgio de blastocisto na viabilidade de hemi-embries
produzidos por bisseco e obtiveram maior taxa de gestao quando
blastocistos de excelente qualidade (grau 1) foram utilizados (91,6% de
gestao) quando comparados a blastocistos grau 2 (79,0% de gestao).
Das sete receptoras inovuladas com blastocistos inteiros, grau
1, cinco apresentaram gestao (71,42% das receptoras), sendo uma dupla.
Este achado est de acordo com Freitas e Simplcio (2002b), que ressaltam
que a qualidade dos embries no momento da inovulao afeta os ndices
de gestao, com taxa de sobrevivncia superior inerente queles que no
possuem alteraes em sua morfologia.
O estgio de blastocisto apresenta uma maior quantidade de
massa celular em comparao com o estgio de mrula. Quando
consideradas as perdas ocorridas devido a bisseco, aproximadamente
14% (SKRZYSZOWSKA e SMORAG, 1989), tero maiores chances de
desenvolvimento e se tiver excelente qualidade morfolgica, o maior nmero
de clulas viveis favorecero a implantao de uma gestao.


68
A tabela 4 compara o total de embries inteiros e
bisseccionados diagnosticados aos 30- 45 dias de gestao, mostrando no
haver diferena estatstica significativa entre os dois grupos.
Tabela 4 Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao partir da inovulao de embries inteiros e
bisseccionados. Campo MaiorPI, 2005.
E M B R I E S P R O D U T O S D I A G N O S T I C A D O S
Inteiros 12/32 (37,50%)
a

Bisseccionados 6/16 (37,50%)
a

Total 18/48 (37,50%)
Percentuais seguidos da mesma letra, na coluna, no diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P>0,05).

Apesar do ndice gestacional de receptoras inovuladas com
embries bisseccionados em estgio de mrula ter sido zero, houve
proporo equivalente aos produtos diagnosticados. No grupo de embries
inovulados inteiros, obteve-se 12 produtos de um total de 32 embries
(37,5%), enquanto no grupo bisseccionado obteve-se 6 produtos de um total
de 16 embries (37,5%). Diversos fatores influenciam na sobrevivncia
embrionria quando inovulados embries inteiros, o mesmo ocorre com os
bisseccionados, o que pode acarretar em ndices pouco favorveis.
Em termos prticos, apesar de existir uma tendncia da taxa
de gestaes a partir da inovulao de hemi-embres ser menor que quando
inovulados embries inteiros, a duplicao das chances de gestao
compensam esta tendncia (SIVEIRA, 2004). No presente estudo, se
apenas embries em estgio de blastocisto tivessem sido utilizados, haveria
uma maior probabilidade da quantidade de produtos diagnosticados de
embries bisseccionados ser superior de inteiros.
Os dados apresentados na tabela 5 mostram diferenas
estatsticas significativas quando comparados os produtos diagnosticados
aps a inovulao de mrulas caprinas inteiras com bisseccionadas.


69
Tabela 5 Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao a partir da inovulao de embries em estgio de
mrula, inteiros e bisseccionados. Campo MaiorPI, 2005.
E M B R I E S P R O D U T O S D I A G N O S T I C A D O S
Mrulas inteiras 6/14 (42,85%)
a

Mrulas bisseccionadas 0/7 (00,00%)
b

Total 6/21 (28,57%)
Percentuais seguidos de letras diferentes, na coluna, diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P<0,05).

Pode ser observado que, ao inovular mrulas inteiras,
42,85% (6/14) do total de embries utilizados neste estgio foi diagnosticado
aos 30-45 dias aps a transferncia. No que se refere a inovulao de
embries bisseccionados, neste mesmo estgio de desenvolvimento, o
diagnosticado foi de 0% (0/7).
De acordo com Udy (1987), os ndices gestacionais obtidos
em caprinos so superiores quando se utiliza, para bisseco, embries em
estgio de blastocisto, evitando-se a utilizao de mrulas. Segundo o autor,
nesta espcie, as aderncias intercelulares de embries no referido estgio,
so fracas em comparao com outras espcies, levando a uma maior perda
celular como conseqncia da bisseco e uma maior dificuldade no
estabelecimento da gestao. Outro problema citado pelo autor uma maior
flexibilidade da zona pelcida de embries desta espcie o que dificulta o
corte, podendo promover o esmagamento do embrio.
Os resultados contidos na tabela 6 evidenciam no haver
diferenas estatsticas significativas entre o total de produtos diagnosticados
ao serem inovulados embries em estgio de blastocisto, inteiros e
bisseccionados.




70
Tabela 6 Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de
gestao a partir da inovulao de embries em estgio de
blastocisto, inteiros e bisseccionados. Campo MaiorPI, 2005.
E M B R I E S P R O D U T O S D I A G N O S T I C A D O S
Blastocistos inteiros 6/18 (33,34%)
a

Blastocistos bisseccionados. 6/9 (66,66%)
a

Total 12/27(44,45%)
Percentuais seguidos da mesma letra, na coluna, no diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P>0,05).

Mesmo no sendo observado diferena estatstica
significativa entre os grupos estudados, uma aparente diferena percentual
foi encontrada, pois 33,34% (6/18) dos embries inteiros inovulados em
estgio de .blastocisto desenvolveram-se, enquanto 66,66% (6/9) dos
embries bisseccionados neste estgio, isto , o dobro do obtido para
embries inteiros, foram diagnosticados positivos aos 30 45 dias aps as
transferncias.
Estes resultados sugerem que a ocorrncia de gestaes
no um parmetro completo quando se deseja avaliar a capacidade da
tcnica de bisseco gerar produtos a partir do embrio original. E, tambm,
que blastocistos bisseccionados, principalmente os de grau de qualidade 1,
podem resultar em uma maior quantidade de produtos quando comparados,
em mesmo nmero, com a inovulao de embries inteiros.
A tabela 7 faz referncia aos produtos diagnosticados aos 30
45 dias de gestao, quando inovulados blastocistos bisseccionados graus
1 e 2, evidenciando a influncia da qualidade do embrio no total de
produtos.





71
Tabela 7 Nmero de produtos diagnosticados aos 30 45 dias de gestao
a partir da inovulao de embries em estgio de blastocisto,
bisseccionados, qualidade 1 e 2. Campo MaiorPI, 2005.
E M B R I E S P R O D U T O S D I A G N O S T I C A D O S
Blastocistos bisseccionados, 1 6/6 (100%)
a

Blastocistos bisseccionados, 2 0/3 (00,00%)
b

Total 6/9(66,66%)
Percentuais seguidos de letras diferentes, na coluna, diferem estatisticamente entre si pelo
teste
2
a 5% de probabilidade (P<0,05).

Houve diferena estatstica significativa quando comparados o
total de produtos diagnosticados aos 30-45 dias de gestao, a partir do
embrio original. Aps a inovulao de embries bisseccionados em estgio
de blastocisto com diferentes graus de qualidade, no foi observado
desenvolvimento naqueles grau 2 (0/3), enquanto o nmero de produtos
obtidos quando utilizados apenas blastocistos grau 1 foi igual ao total de
embries originais bisseccionados, ou seja, foram obtidos seis produtos de
um total de seis blastocistos partidos (6/6), mostrando um aproveitamento de
100% dos embries. importante lembrar que este total proveniente de
uma gestao dupla, alm de quatro simples, uma vez que em um dos
casos desse grupo estudado a prenhez no foi confirmada.
Ao considerar apenas o nmero de embries de grau de
qualidade 1 em estgio de blastocisto, a tcnica de bisseco possibilitou
um incremento de 100% no nmero de produtos obtidos. Isto demonstra que
o sucesso da transferncia de embries em caprinos pode ser maximizado
ao se utilizar a tcnica de bisseco de embries, desde que o estgio de
desenvolvimento e a qualidade dos embries destinados a bisseco sejam
bem avaliados.
A tabela 8 mostra a influncia da sincronizao entre o
estado fisiolgico das receptoras em relao ao das doadoras, no total de
produtos diagnosticados a partir de embries bisseccionados e inteiros, nos
estgios de mrula e blastocisto.


72
Tabela 8 - Influncia da sincronizao entre receptoras e doadoras sobre o
nmero de produtos diagnosticados a partir de embries
bisseccionados e inteiros. Campo MaiorPI, 2005.
EMBRIES BISSECCIONADOS EMBRIES INTEIROS
ASSINCRONIA
(Horas)
Inovulados Diagnosticados Inovulados Diagnosticados
- 12 4 0
0 0 0
+ 12 8 2
+ 24 14 4
24 + 2 0
4 0
0 0
16 7
8 6
0 0
Total 28 6 28 13


importante a observao na tabela 8 de que tanto
embries inteiros quanto bisseccionados, quando inovulados em receptoras
que manifestaram estro 12 horas antes da doadora correspondente, no
apresentaram desenvolvimento (0/4) em ambos os grupos estudados.
Quando a assincronia foi de 12 horas aps o estro da doadora (+12), 25%
dos embries bisseccionados inovulados evoluram (2/8), enquanto em
embries inteiros foi observado um desenvolvimento de 43,75% (7/16). Em
receptoras que manifestaram estro at 24 horas (+24) aps a doadora
correspondente houve desenvolvimento de 28,60% (4/14) e 75% (6/8), para
embries bisseccionados e embries inteiros, respectivamente. Desta forma,
o intervalo de assincronia de 0 at + 24 horas, em ambos os grupos
estudados, o que concentra maior nmero de produtos diagnosticados.
Alm do total de inovulaes apresentado nesta tabela, mais quatro
embries inteiros e quatro bisseccionados foram inovulados em receptoras
cuja assincronia foi de -24, mas no foi diagnosticado gestao em nenhum
dos casos.
Estes resultados esto de acordo com Simplcio e Santos
(2000), quando afirmaram que a sobrevivncia embrionria influenciada,


73
entre outros fatores, pelo sincronismo entre idade dos embries e estado
fisiolgico das receptoras, que no deve ser superior a 24 horas.
Armstrong et al. (1982), tambm relataram no haver
diferena na sobrevivncia de embries inteiros quando o grau de
assincronia do estro das receptoras com o das doadoras no excedeu 24
horas
Para Freitas e Simplcio 2002b, ao utilizar-se embries
inteiros, quanto maior for a sincronizao entre o estagio fisiolgico da
receptora e o estgio de desenvolvimento do embrio, maior ser a
probabilidade de sucesso aps a inovulao. Segundo esses autores, o
aumento na porcentagem de prenhez ocorre quando o momento do incio do
estro das doadoras coincide o mais prximo possvel com o incio do estro
das receptoras
No que se refere a utilizao de receptoras para inovulao
de hemi-embries, Reichenbach et al. (2002), afirmaram que para a
transferncia de embries bisseccionados, pode-se obter melhores
resultados de gestao se o estro das receptoras tiver ocorrido entre 12 e 24
horas aps o das doadoras. Segundo esses autores, depois da bisseco,
ocorre um atraso no desenvolvimento das metades embrionrias em
decorrncia das injrias provocadas pela seco. Alm disso, sendo a
massa celular das metades embrionrias bem menores do que a de
embries intactos, existe a necessidade de um perodo adicional para a sua
recuperao. O tempo necessrio para que as metades embrionrias de boa
qualidade atinjam uma velocidade de desenvolvimento normal de
aproximadamente 12 a 36 horas, variando em funo da qualidade dos
embries.
Neste trabalho no foi realizado uma avaliao dos ovrios
das receptoras aps as inovulaes, no sendo possvel identificar uma
ocorrncia de regresso nos corpos lteos e, conseqentemente, sua
influncia nas taxas de gestaes encontradas.




74
CONCLUSES


Os resultados do presente estudo permitem concluir que:
O estgio de desenvolvimento embrionrio influenciou na
taxa de gestao quando se utilizou embries caprinos bisseccionados,
sendo mais favorveis os resultados obtidos aps inovulao de hemi-
embries em estgio de blastocisto.
A qualidade do embrio influenciou na taxa de gestao
quando se utilizou embries caprinos bisseccionados, sendo superiores as
taxas obtidas com estruturas de grau de qualidade 1.
O estgio de mrula, em caprinos, independente do grau de
qualidade, no deve ser indicado para bisseco.
Embries caprinos, em estgio de blastocisto com grau de
qualidade 1, podem apresentar taxa de desenvolvimento embrionrio aps a
bisseco, de at 100% a partir do embrio original.
Embries inteiros e bisseccionados apresentaram melhores
ndices de desenvolvimento quando inovulados em receptoras cuja
assincronia do estro com a doadora correspondente foi de +12 a +24 horas.
A tcnica de bisseco exige habilidade e equipamento
sofisticado, alm de um maior nmero de animais para avaliao de sua
eficcia.


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