GENETICA FORESTAL

Vicente Pocomucha Poma 1

CAPITULO IV
APROVECHAMIENTO DE LOS RECURSOS GENETICOS
4.1. INTRODUCCION
4.2. CENTROS DE ORIGEN
La variabilidad gentica es esencial para el mejoramiento de las plantas. Esta puede ser
natural o inducida. La variabilidad natural de una especie no se encuentra uniformemente
distribuida en la tierra si no que se concentra en regiones relativamente definidas.
En la segunda y tercera dcada del siglo pasado, el cientfico ruso Vavilov y sus colegas del
Instituto de plantas de Leningrado, desarrollaron la idea, despus de haber visitado y
colectado muestras de plantas del mundo entero, que cada cultivo tena un Centro Primario
de Diversidad, el cual era tambin su Centro de Origen.
Actualmente se considera que los centros de origen deben ser ms grandes
geogrficamente, y en muchos casos sobrepasa las fronteras de los pases, con bordes muy
difciles de definir.
Actualmente tambin se considera que hay otras razones que explican la concentracin de
variabilidad en un cultivo, por ejemplo la fisiografa de una regin o su aislamiento
geogrfico.
Caracterstica del Centro de origen
Segn la conclusin de Vavilov es la presencia de alelos dominantes, el aumento de la
frecuencia de los recesivos es a medida de que la diversidad disminua hacia la periferia,
debido a la endocria, aislamiento geogrfico y deriva gentica. Las periferias se podrn
desarrollar centros secundarios.
Especies Introducidas.
Se denominan especies introducidas al material gentico: cultivares mejorados, lneas
poblaciones en proceso de mejoramiento, etc, que no han sido trabajados en el pas, sino
que se reciben del extranjero, para su uso directo o para integrarlo a los programas de
mejoramiento.
En un concepto ms amplio, una introduccin puede ser cualquier genotipo de una especie
no originada o diversificada en el pas.
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Ejemplos:
El eucalipto es introducido de Australia.
La Casuarina y el Pino introducido del norte (Estados Unidos)
La teca de Asia.
La explicacin de las especies introducidas, es que pueden encontrar en su nuevo hbitat,
condiciones ptimas para su desarrollo, superiores a las de su ambiente original.
La especie se libre de sus enemigos naturales que han evolucionado con ella y se ve libre
del equilibrio con otras especies que se establece en el ambiente original. Ejemplo el
nmero de plagas importantes en los centros de origen siempre excede a las que se
encuentra en reas distantes.
El rendimiento de las especies casi siempre son los ms bajos dentro de su centro de
origen, donde los factores limitantes son numerosos y complejos.
Desventajas de especies introducidas
El movimiento del germoplasma arbreo es posiblemente el impacto ms grande del hombre
sobre los recursos genticos forestales, por que se ha introducido germoplasma invasora en
todas partes del mundo, eliminando completamente algunas especies nativas endmicas y
localmente otras especies.
La introduccin de Psidum guajava, por ejemplo, casi ha eliminado el bosque de
gimnosperma nativa de la Isla de San Cristbal de los Galpagos (Schofield, 1989).
Tambin la introduccin de germoplasma tipo sin espina de Pijuayo del Per a Brasil, e
hibridacin e introgresin con razas domesticadas nativas del Brasil estn destruyendo la
integridad gentica de algunas razas domesticadas valiosa del Brasil (Mora-Urpi et a., en
impresin).
La introduccin de nuevas plagas y enfermedades que producen nuevas presiones de
seleccin natural contra las especies nativas ha eliminado muchas poblaciones naturales no
tolerantes de varias especies arbreas. (Leding, 1992).
4.3. DIVERSIFICACIN DE ESPECIES FORESTALES
Para qu conservar los recursos genticos de los bosques?
"Las personas comunes podran preguntarse por qu son importantes los recursos de los
bosques -afirma el Secretario del Grupo de Expertos, Christel Palmberg-Lerche, de la FAO-.
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Qu no son muy parecidos todos los helechos o los lamos? Algunas personas sostienen
tambin que no hace falta tomar medidas activas de conservacin, y aseguran que la
diversidad sobrevivir con que las personas se abstengan de destruirla".
Pero la biodiversidad es importante porque sigue sin estudiarse una gran parte del potencial
de muchas plantas para obtener lea y otros productos, por ejemplo medicamentos. Y la
variacin gentica en las especies es importante porque el crecimiento y la resistencia a las
presiones, como los climas rigurosos y las enfermedades, depende de ella. Las poblaciones
de rboles genticamente uniformes no se darn tan bien en la diversidad de medios que
ocupan los bosques y afrontarn ms dificultades para adaptarse a los cambios que se
presentan en el medio ambiente. El fitomejoramiento intensivo fomenta la uniformidad, de
modo que es necesaria una reserva constante de genes nuevos para poder hacer frente a
posibles problemas.
Si no se cuida con esmero esta reserva gentica tambin puede verse amenazada por la
evolucin natural de los ecosistemas forestales. En lugares como Brasil, donde hay ms de
400 especies de rboles por hectrea, las condiciones y las pautas de un bosque son
importantes, por lo tanto, para conservar la diversidad.
En la naturaleza nada es esttico. Un bosque antiguo no es estable ni permanente, pero ah
han prosperado determinadas especies, en detrimento de muchas otras.
Prdida de hbitat
"Es difcil cuantificar y seguir las transformaciones que sufre la biodiversidad, comprendida
la diversidad gentica -explica Pierre Sigaud, experto de la FAO en recursos genticos
forestales-. Las medidas de la superficie forestal no nos dicen todo". Por ejemplo, las
plantaciones pueden desplazar los bosques naturales, con lo que se reduce la diversidad de
las especies. Pero con reducir las presiones ejercidas por la tala en lo que queda del bosque
natural se puede propiciar tanta diversidad como la que se destruye.
Incluso donde se pierden partes del bosque natural por el avance de la agricultura, la
prdida gentica depender del alcance de la fragmentacin de lo que quede del bosque, es
decir, si ste se ha dividido en pequeos lotes forestales las especies pueden existir en
pequeos grupos y, en consecuencia, pueden quedar por debajo del nmero necesario para
subsistir y llegar a desaparecer.
Proteccin forestal para conservar la biodiversidad
La diversidad gentica mantiene sanos los bosques, asegura un grupo de expertos.
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Es necesario conservar los recursos genticos, y la mayor amenaza que sufren es la
prdida del bosque mismo. Esta es la opinin del Grupo de Expertos de la FAO en Recursos
Genticos Forestales, recientemente reunido en Roma.
Los bosques afrontan una gran variedad de peligros, desde la degradacin causada por los
incendios, hasta la deforestacin debida al avance de la agricultura. Estos peligros no slo
amenazan la agricultura como recurso productivo, sino que pueden reducir el nmero de
especies que lo pueblan, especialmente en las zonas tropicales, donde en una zona
reducida puede concentrarse una gran variedad de especies de rboles.
El origen de la diversidad en las selvas tropicales
Existen numerosas teoras que intentan explicar la mayor diversidad de especies de las
selvas tropicales (en relacin con otros ambientes). Una de las ms aceptadas en la
actualidad es la del refugio, segn la cual, durante las fases climticas adversas del
pleistoceno, ciertas plantas y animales resultaron divididos en subpoblaciones aisladas entre
si, lo que condujo a la llamada especiacin aloptrica (diferenciacin especfica de
poblaciones que ocupan distintos territorios, opuesta a la simptrico, propia de poblaciones
que viven en una misma rea) y el consecuente aislamiento gentico. La repeticin de este
proceso durante sucesivos ciclos climticos produjo un aumento en la diversificacin a lo
largo del tiempo y dio origen a los altos ndices de diversidad biolgica hoy encontrados en
las regiones tropicales.
En las selvas tropicales, el fenmeno descripto podra estar relacionado, adems, con la
existencia de un complejo mosaico de nichos ecolgicos diferentes (el conjunto de factores
fsicos y biticos de los que depende un ser vivo, como clima, alimentos, agua, enemigos.
etc.). En los trpicos, la mayora de las especies estn a salvo de situaciones climticas
extremas, que en las zonas templadas ocurren todos los aos; por ello se encuentran
adaptadas a condiciones ambientales mucho ms homogneas y estables y se caracterizan
por tener mrgenes de tolerancia (o nichos) mucho ms estrechos. En otras palabras,
pequeas modificaciones ambientales las afectan de manera marcada. En tal contexto, las
plantas de los trpicos han desarrollado sistemas de reproduccin algama (o fecundacin
cruzada, por la que el polen que fecunda una flor proviene de otra distinta, de la misma o de
diferente planta), que amplan su variabilidad gentica y, en consecuencia, su potencial
evolutivo. Esto podra explicar, de alguna manera, la especiacin extremadamente veloz que
se ha producido en algunos grupos taxonmicos. En ciertos valles aislados del bosque de
neblina se han podido identificar hasta cien endemismos o especies endmicas de plantas.
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Lo anterior intenta explicar el origen de la diversidad en funcin del aislamiento reproductivo
de poblaciones de plantas en relacin con variaciones en el ambiente. Sin embargo, la
coexistencia de especies distintas en un ambiente homogneo (por ejemplo, en un mismo
tipo de suelo) es tambin comn en las selvas tropicales. Con el objeto de entender este
fenmeno, se han postulado varios modelos de comportamiento, que incluyen distintos
factores como la competencia por los recursos, la mortandad diferencial de plantas por
accin de los herbvoros y los efectos olelopticos (consecuencias nocivas de una planta
sobre otra por secrecin de substancias txicas). Estos modelos se apoyan en la posible
existencia de fuerzas equilibradoras, capaces de mantener la diversidad en un rea
determinada.
4.4. CONSERVACION DEL MATERIAL GENETICO
Es evidente que no puede conservarse toda la variabilidad gentica en una especie
silvestre; y a la pregunta cunta? slo puede responderse la mayor cantidad factible.
No se conservarn todos los genotipos de la muestra inicial en las plantaciones de los
procedentes fondos de genes (o en cualquier otra coleccin). La seleccin natural a lo largo
de los aos inevitablemente ir eliminando algunos genotipos. En las plantaciones de
procedencias-fondos de genes, establecidas en diferentes areas o sitios geograficos, se
perdern genotipos diferentes segn las distintas condiciones ambientales en el que se
encuentren.
Aprovechamiento mximo en el centro de origen:
Resulta imposible predecir para qu caracteres especiales y mtodos fitogenticos se van a
emplear los fondos de genes de rboles forestales. Pero es cierto que ser preciso obtener
la mxima diversidad gentica si se quiere lograr el aprovechamiento mximo.
Para obtener el mximo provecho en el futuro, los fondos de genes de rboles forestales
deberan permitir la ms amplia diversidad posible de asociacin de genotipos en las
plantaciones destinadas a facilitar una extensa recombinacin de genes mediante la
polinizacin libre o, caso de ser necesario, la polinizacin libre artificial. Esta hibridacin
intraespecfica e interespecfica en masa en los fondos de genes proporcionara una fuente
prcticamente inagotable combinaciones de genes para la creacin de variedades
sintticas a lo largo de un prolongado perodo de aos; con ello se ahorraran muchos aos
de mejoramiento controlado.
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La semilla bajo un pequeo volumen, encierra en potencia a la planta entera ... e interviene
al mismo nivel de importancia que el clima y el suelo en el rendimiento posterior del cultivo.
Definicin:
Producto de la fusin del gameto masculino con el femenino y el desarrollo de ste a partir
del vulo. Lleva toda la informacin gentica necesaria para desarrollar a un nuevo
individuo.

Desde el punto de vista agrcola se la puede definir como "todo grano, tubrculo, bulbo o parte
cualquiera de una planta que pueda ser usada para la propagacin de la misma".
Algunos de sus atributos
A.-Es un medio para la supervivencia de las especies:
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Generalmente las plantas que les dieron origen han muerto cuando ellas, al ser diseminadas
o sembradas encuentran condiciones favorables germinan y generan una planta igual a
aquella que las produjo.
B.-Es un medio para llevar vida de un lugar a otro:
Los hombres, los animales, el viento, transportan semillas de plantas a lugares donde ellas
no existen (colonizan nuevas reas).
Las semillas ms antiguas
- Nelumbian nucfera - 1000 3000 aos
- Lupinus articus - sobre 10000 aos
- Chenopodium album - 1700 aos
- Asperjula arvensis - 1700 aos

4.5. MTODOS DE CONSERVACIN DE RECURSOS FITOGENTICOS
La conservacin puede aplicarse en teora a tres niveles de organizacin: gnica, de
organismo y ecolgica. Con el avance de las tcnicas de ingeniera gentica, es posible que
en el futuro lleguen a establecerse bancos de ADN; sin embargo, por el momento los genes
se conservan agrupados en individuos o en ecosistemas.
Los mtodos de conservacin de recursos fitogenticos pueden clasificarse de esta forma
en dos grandes categoras:
Mtodos de conservacin ex situ.- la conservacin se realiza en los denominados
bancos de germoplasma
Mtodos de conservacin in situ. consisten en preservar las variedades o
poblaciones vegetales en sus hbitats originales.
CONSERVACIN EX SITU
La conservacin ex situ implica el desarrollo de colecciones de recursos fitogenticos y
presenta ventajas de tipo prctico frente a la conservacin in situ ya que, al concentrarse el
material gentico y la informacin asociada al mismo, se reducen costos, se mejora el
control y se facilita enormemente el suministro de material a cientficos y usuarios en
general. Sin embargo, este tipo de conservacin, por su carcter esttico, tiene el
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inconveniente intrnseco de no permitir la continuacin de los procesos evolutivos.
Asimismo, no se puede dejar de tener en cuenta el riesgo de prdida de materiales por
accidentes o por erosin gentica dentro del propio banco, aspecto que puede ser muy
importante si no existen medios suficientes para un adecuado desarrollo del trabajo y que ha
producido prdidas irremplazables en las colecciones de instituciones tan importantes y
emblemticas como el Instituto Vavilov de San Petersburgo.
Actualmente se estima que existen alrededor de 6 millones de muestras almacenadas en
todo el mundo en colecciones ex situ en ms de 1300 bancos de germoplasma (FAO, 1996).
El trabajo de los bancos de germoplasma comprende las actividades siguientes:
adquisicin del material
conservacin propiamente dicha
multiplicacin
caracterizacin/evaluacin
documentacin e intercambio.
Para designar a cada muestra diferente dentro de una coleccin se utiliza el trmino
entrada, aunque es frecuente tambin el empleo del anglicismo accesin.
Adquisicin del material
La adquisicin de muestras por parte de un banco de germoplasma puede realizarse
mediante expediciones de recoleccin o mediante donaciones de otros bancos.
Las recolecciones de germoplasma pueden ser de tipo especfico, cuando se busca un
material determinado, o de tipo general, cuando se lleva a cabo una recoleccin sistemtica
en un rea, sin hacer especial nfasis en especies particulares. .
La recoleccin puede realizarse en hbitats naturales, en campos de cultivo, directamente
de los agricultores o incluso en mercados locales, siendo siempre el principio fundamental
recoger la mxima cantidad de variabilidad en el mnimo nmero de muestras. Adems del
material es muy importante recoger lo ms detalladamente posible la informacin asociada
al mismo, incluyendo datos botnicos, datos referentes a la zona, usos, tcnicas de cultivo y
cualquier otra observacin de inters. No hay que olvidar que la informacin transmitida
oralmente a lo largo de generaciones de agricultores puede resultar extremadamente valiosa
y, al igual que el material gentico, est sometida a un gran riesgo de desaparicin.
La recoleccin racional y efectiva de recursos fitogenticos debe realizarse dentro de un
contexto de cooperacin nacional e internacional
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Conservacin
La conservacin puede clasificarse en las categoras siguientes:
Conservacin del organismo completo: Conservacin en campo
Conservacin de parte del organismo:
Conservacin de semillas
Conservacin de otros rganos con capacidad de regeneracin:
Conservacin de tejidos in vitro.
Conservacin en campo:
La conservacin mediante colecciones de plantas mantenidas en el campo se realiza
fundamentalmente en especies sexualmente estriles o que poseen semillas que no pueden
ser conservadas durante largos periodos de tiempo. Se emplea tambin en especies de
reproduccin vegetativa para el mantenimiento de clones y en aquellas que tardan mucho
en producir semilla, como es el caso de las forestales. Entre los cultivos que se conservan
en colecciones de este tipo se encuentran algunos de tanta importancia como la patata, la
mandioca, el ame, la batata, el pltano y los rboles frutales en general.
Las colecciones de plantas se mantienen en el campo, regenerndolas peridicamente a
intervalos que dependen de la duracin del ciclo de la planta. Este tipo de conservacin
necesita grandes extensiones de superficie, especialmente cuando se trata de rboles, y
requiere un coste de mantenimiento elevado sobre todo si las plantas necesitan
regeneraciones anuales o muy frecuentes. El riesgo de prdidas por ataque de plagas y
enfermedades, anomalas climticas u otros accidentes naturales es tambin mayor que en
otros tipos de conservacin.
Conservacin de semillas:
Este mtodo de conservacin es actualmente el ms utilizado en los bancos de
germoplasma, resultando el ms eficiente, econmico y seguro para la conservacin ex situ
de la mayora de las especies de las zonas templadas, cuyas semillas son capaces de
permanecer viables largo tiempo bajo determinadas condiciones (semillas ortodoxas).
La longevidad de las semillas ortodoxas puede aumentarse extraordinariamente
disminuyendo su contenido de humedad y la temperatura de almacenaje. Segn las reglas
empricas de Harrington (1965), la vida de la semilla se duplica por cada 5C de disminucin
de temperatura y por cada 1% de reduccin de su contenido en humedad, siendo ambos
efectos aditivos. La disminucin simultnea de estos dos factores permitira, al menos
tericamente, mantener durante cientos de aos la viabilidad de las semillas, siendo el
proceso utilizado mayoritariamente por los bancos.
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El proceso de conservacin de semillas comprende varias etapas sucesivas y se inicia con
el registro de las entradas y con las operaciones de limpieza requeridas en cada caso. Las
semillas se desecan a continuacin en un ambiente con baja humedad relativa hasta
alcanzar la humedad interna deseada, se envasan hermticamente y se almacenan en
cmaras frigorficas. La eleccin de recipientes adecuados es un aspecto crtico de la
conservacin y, de hecho, la prdida de hermeticidad durante el almacenaje ha sido
probablemente una de las mayores causas de erosin gentica de muchos y muy
importantes bancos de germoplasma.
Previamente al almacenaje debe evaluarse la viabilidad de las muestras, lo cual se hace
normalmente mediante ensayos de germinacin. La baja calidad de las semillas de partida
es un factor que influye negativamente en su longevidad, por lo que las muestras iniciales
deben tener porcentajes de germinacin lo ms elevados posible, tomndose normalmente
el 85% como valor umbral. La viabilidad de las entradas debe ser controlada peridicamente
para impedir un envejecimiento de las semillas que puede alterar sus caractersticas
genticas.).
El tipo de conservacin descrito anteriormente no es aplicable a todos los casos ya que
existen muchas especies, sobre todo de zonas clidas y hmedas, que poseen semillas,
denominadas recalcitrantes, que no admiten ni desecacin ni bajas temperaturas. Un
mtodo de conservacin alternativo an en fase de desarrollo pero que puede tener grandes
perspectivas de futuro en determinados casos, es la cro conservacin o almacenamiento en
nitrgeno lquido a -196C de semillas o embriones. En estas condiciones se logra la
detencin de los procesos metablicos, lo cual supone el bloqueo de los mecanismos
fisiolgicos responsables del envejecimiento y la prolongacin indefinida del periodo de
conservacin. Este mtodo presenta como ventajas el bajo coste de mantenimiento y la no
dependencia del suministro elctrico. No obstante, para evitar efectos letales, es necesario
desarrollar previamente para cada material los protocolos adecuados de congelacin y
descongelacin. La velocidad de estos procesos y el contenido inicial de humedad de las
semillas son los factores ms crticos a tener en cuenta.
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Conservacin de material vegetativo en el campo

No todas las especies se pueden conservar como semilla aunque se reproduzcan como
tales y menos si son de propagacin vegetativa. Las semillas recalcitrantes e intermedias,
an en condiciones ptimas, duran unas cuantas semanas por lo cual resulta ms fcil
conservarlas en campo o in vitro.
La conservacin en el campo se indica en especies perennes, arbreas, silvestres,
semidomesticadas, heterocigotas y aquellas con reproduccin vegetativa o con semillas de
vida corta o sensibles a la desecacin. Implica acondicionar el material (si se requiere),
multiplicarlo, elegir un sitio y prepararlo para la siembra, sembrar los materiales y registrar
informacin sobre la ubicacin de las accesiones.
Seleccin y preparacin del sitio

El sitio seleccionado para conservar el material en campo debe ser seguro y favorecer el
desarrollo de las plantas. Debe estar aislado para evitar ataques de plagas y enfermedades
pero ser de fcil acceso para las labores de manejo. La preparacin fsica y qumica del sitio
de siembra depende de los requerimientos de la especie y del nmero de accesiones que se
espera tener en el campo.
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Siembra del material en el campo

Llevar al campo plantas vigorosas en un nmero representativo de la variabilidad gentica
de las accesiones asegurar la continuidad de los materiales conservados. Las plantas se
dispondrn en el campo de manera que no intercambien polen para evitar que las
poblaciones pierdan el genotipo original. El sitio exacto donde se sembr cada accesin
debe quedar registrado en un mapa; las accesiones se deben identificar tanto en el campo
como en las plantas.
Acondicionamiento y propagacin de material vegetativo

El material vegetativo colectado se lava y desinfecta antes de propagarlo y llevarlo al sitio de
conservacin. La desinfeccin se puede hacer con bactericidas, fungicidas (bulbos y
rizomas) o termoterapia (estacas). Una vez desinfectado, el material vegetativo se propaga
en campo, en invernadero o in vitro. En campo y en invernaderos, las muestras se siembran
en semilleros o en potes y se dejan crecer hasta obtener plantas de las que se puedan
tomar nuevas muestras, repitiendo el procedimiento hasta llegar al nmero de plantas
necesario para establecer la coleccin en el sitio definitivo.
Si se desea propagar in vitro, las muestras se siembran en invernaderos, en suelos de
ptima calidad nutricional, y de las plantas resultantes preferiblemente de las ms jvenes
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se extraen explantes que se micropropagan in vitro hasta obtener plantas completas que se
llevan de nuevo a invernaderos, se siembran en suelo estril y 2 3 semanas despus se
trasladan al sitio definitivo en el campo.
La micropropagacin consiste en:
a) desinfectar el explante en una solucin de hipoclorito de sodio o de calcio, cloruro de
mercurio o etanol
b) sembrarlo en un medio de cultivo in vitro hasta que se produzcan nuevos brotes y
c) enraizair los brotes hasta obtener plantas completas.
La propagacin en campo e invernaderos es sencilla pero requiere tiempo y espacio y no
garantiza que las plantas obtenidas sean sanas y genticamente idnticas a las originales.
La propagacin in vitro resuelve estos problemas y permite propagar muchas especies,
incluso las que se reproducen por semilla, resultando ms conveniente.
CONSERVACIN IN VITRO
En los casos en que no se puede recurrir a la conservacin de semillas o interesa el
mantenimiento de clones, la conservacin mediante tcnicas de cultivo in vitro constituye
una alternativa a las colecciones de plantas, anteriormente comentadas. El cultivo in vitro de
rganos o fragmentos de rganos, tejidos o clulas aisladas se realiza siempre en un
ambiente asptico, sobre un medio nutritivo y bajo condiciones controladas.
Las tcnicas de conservacin por cultivo in vitro se empezaron a aplicar en los aos 80 y
actualmente se utilizan de forma sistemtica en la conservacin e intercambio de
germoplasma de especies como la patata, la mandioca o el pltano (Ashmore, 1997). El
cultivo in vitro presenta como ventajas su alta tasa de multiplicacin, el mantenimiento del
material vegetal libre de patgenos y sus bajos requerimientos de espacio frente a las
colecciones de campo.
Las estructuras vegetales de partida utilizadas para el almacenamiento in vitro han sido
preferentemente los pices y meristemos, ya que en ellos el riesgo de cambio gentico en el
material (variacin somaclonal) es mucho menor que cuando se emplean callos o
estructuras desorganizadas. El intervalo entre repicados se alarga disminuyendo el
crecimiento de los cultivos mediante diversos sistemas, si bien el ms utilizado es la
reduccin de la temperatura ambiente junto con el uso de un medio pobre en nutrientes. La
crioconservacin en nitrgeno lquido de material cultivado in vitro es tambin una
alternativa de almacenamiento an en fase de desarrollo.
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Almacenamiento y conservacin in vitro

El cultivo de tejidos permite conservar in vitro un amplio rango de especies en diversos tipos
de muestra como plantas completas, semillas, retoos, yemas, pices caulinares,
meristemas, vulos, embriones, clulas en suspensin, protoplastos, anteras, polen y ADN.
La conservacin in vitro de germoplasma se centra en controlar el crecimiento normal de
explantes viables reducindolo o detenindolo manipulando ya sea la constitucin del
medio de cultivo y/o las condiciones de almacenamiento.

Al igual que en la conservacin en campo, el material se acondiciona, se siembra in vitro
en este caso y se lleva al sitio de conservacin. El acondicionamiento consiste en
desinfectar las muestras y lavarlas posteriormente con agua destilada para eliminar los
residuos de desinfectante. Las soluciones desinfectantes ms utilizadas son la de hipoclorito
de sodio (NaOCl) al 1-3%, la de hipoclorito de calcio (Ca(OCl)2) al 6-12%, la de cloruro de
mercurio (HgCl2) al 0.1-1.5% y la de etanol al 70%. De la muestra limpia se extraen los
explantes (cuanto ms pequeos, mejor), se siembran en medios de cultivo y en recipientes
de vidrio, y se someten a una de dos formas de conservacin in vitro: crecimiento lento o
crioconservacin. En ambos casos el medio y el ambiente de conservacin debern ser
estriles y las condiciones de almacenamiento controladas. A continuacin describiremos
las dos formas de almacenar germoplasma in vitro
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Crecimiento lento
.
El crecimiento lento consiste en reducir el desarrollo del explante modificando el medio de
cultivo y/o las condiciones en que se lo mantiene. A travs del medio de cultivo, el
crecimiento se puede reducir aumentando el potencial osmtico (agregando manitol, prolina,
glicerol o sacarosa), adicionando inhibidores de crecimiento (cido abcsico) y reduciendo o
suprimiendo los nutrientes que el explante necesita para crecer (carbono y nitrgeno). El
crecimiento tambin se limita controlando las condiciones en que se almacenan las
muestras, ya sea utilizando envases pequeos o reduciendo la temperatura, la ilumincacin
y la presin parcial de oxgeno. Reducir la temperatura es la forma ms efectiva para
controlar el crecimiento de los explantes en tanto reduce la actividad metablica, pero como
es igualmente importante asegurar y mantener una baja tasa de crecimiento que permita
conservar los explantes viables durante el mayor tiempo posible, conviene utilizar una
combinacin de mtodos.
Las muestras en crecimiento lento se mantienen en cmaras con baja temperatura durante
perodos que pueden variar de unos meses a varios aos (generalmente dos). La
temperatura depender de la especie y la variedad aunque la mayora de cultivos in vitro se
mantiene a temperaturas entre 20 y 30C; temperaturas menores pueden reducir an ms el
crecimiento de algunas especies pero afectar negativamente otras. Algunas especies del
gnero Prunus, por ejemplo, se conservan bien a 3C mientras que temperaturas inferiores
a 15C destruyen rpidamente explantes de Musa spp.), y aquellas inferiores a 18C
deterioran variedades de yuca .
El material conservado en crecimiento lento necesita renovarse cada cierto tiempo en tanto
ha continuado creciendo as sea lentamente. Las muestras se micropropagan y se
transfieren a un medio de recuperacin y fortalecimiento. Cuando los nuevos explantes se
han establecido, se propagan nuevamente y se llevan de nuevo al medio de conservacin.
Un ejemplo de la aplicacin exitosa de esta metodologa lo constituye el caso de la yuca en
CIAT, Colombia, donde se conservan alrededor de 6017 accesiones .
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Crioconservacin

La crioconservacin consiste en colocar los explantes en nitrgeno lquido (-196C) para
detener su crecimiento pero conservando la viabilidad y la estabilidad gentica y fisiolgica.
Es una tcnica reciente y con buenas perspectivas, pues permite almacenar por perodos
indefinidos cualquier especie que tolere y sobreviva al congelamiento. Por esta razn,
resulta particularmente til para conservar especies de semilla no ortodoxa o de
reproduccin vegetativa, difciles de conservar en cmaras o en campo).
La crioconservacin consiste en a) cultivar el explante in vitro (precrecimiento), b) desecarlo
al mnimo permisible segn la especie, c) tratarlo con crioprotectores (glicerol, sacarosa,
manitol, prolina, polietilenglicol) para evitar la cristalizacin de lquidos intracelulares, d)
congelarlo en nitrgeno lquido, e) almacenarlo, f) descongelarlo y g) tratarlo para recuperar
plantas viables.
El xito de la crioconservacin depende de la reaccin de la especie al congelamiento por lo
que requiere protocolos especficos. Existen diversas tcnicas como la deshidratacin -
encapsulacin, la vitrificacin, la encapsulacin-vitrificacin, la desecacin, el
precrecimiento, el precrecimiento-desecacin y el goteo-congelamiento pero las
investigaciones en este campo, como las que realiza el CIP (Per) con papas tolerantes al
congelamiento y el CIAT con yuca, todava se basan en el ensayo y el error. La metodologa
tiene limitantes siendo las principales la dificultad y el tiempo requeridos para regenerar
plantas completas a partir de las estructuras conservadas.
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El cultivo in vitro cobra cada vez mayor importancia como herramienta de conservacin e
intercambio de germoplasma porque permite mantener un amplio rango de especies, en
diversidad de muestras sanas y en poco espacio, e intercambiarlas fcilmente. Sin embargo,
requiere tecnologa y conocimientos an en desarrollo, protocolos para cada especie y
recursos considerables por lo que conviene evaluar la alternativa de conservar germoplasma
in vitro frente a otras opciones de conservacin, y aplicarla principalmente en aquellas
especies difciles de conservar como semilla o en campo.
CONSERVACIN IN SITU
Idealmente, la forma ms apropiada de conservar una entidad biolgica es dentro del
ecosistema del que naturalmente forma parte. En la conservacin in situ no slo se
preservan cada uno de los componentes del ecosistema sino tambin todas sus relaciones
recprocas y se permite la continuacin de los procesos evolutivos de las plantas.
La conservacin in situ resulta especialmente adecuada en las especies silvestres y
presenta menos problemas que en las plantas cultivadas debido a que sus habitats son
ecosistemas naturales en los que no interviene la accin humana. La conservacin in situ de
las especies silvestres implica la adecuada proteccin y gestin de los ecosistemas en los
que habitan y, para ello, existen un gran nmero de figuras de salvaguardia de espacios
naturales (parque natural, parque nacional, reservas, etc.). Los costes de este tipo de
conservacin disminuyen cuando en la zona protegida estn concentradas diferentes
especies. Contrariamente, cuando las reas de distribucin de las plantas son demasiado
extensas el establecimiento de medidas de proteccin se dificulta por su coste y su
interferencia con otras actividades humanas.
Desde una perspectiva real, la conservacin en finca de variedades locales parece poco
viable si no se realiza con un enfoque de utilizacin. En este sentido, el desarrollo de
sistemas agrcolas sin grandes insumos, ms respetuosos con el medio ambiente y ms
diversificados, ms sostenibles en resumen, ofrece buenas expectativas para revalorizar y
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preservar la diversidad gentica contenida en los cultivares tradicionales, especialmente
adaptados a este tipo de agricultura.
Asimismo, las variedades locales pueden ofrecer unas caractersticas de calidad
organolptica en cuanto a diversidad de sabores, aromas, aspecto, etc., que son valoradas
cada vez ms positivamente, al menos en un sector de poblacin dentro del mundo
desarrollado.
La conservacin in situ y ex situ, en sus diversas modalidades, deben considerarse como
mtodos complementarios y no excluyentes para lograr el objetivo comn de preservar los
recursos fitogenticos, siendo necesaria la colaboracin y coordinacin entre los distintos
sectores implicados -instituciones, bancos de germoplasma, agricultores, grupos sociales,
etc- para conseguir una integracin armnica y equilibrada de ambas estrategias.
4.6. ALMACENAMIENTO Y COSERVACION DE SEMILLAS:
El almacenamiento es la conservacin de semillas viables desde que son recolectadas del
rbol hasta el momento de su siembra.
Los objetivos que se persiguen con este almacenamiento son:
conservar la capacidad germinativa
protegerlas de los agentes que provocan daos como: aves, roedores, insectos y
hongos
finalmente para disponer de un stock.
Los factores que ms influyen en el perodo de almacenamiento de las semillas son su
contenido de humedad y la temperatura de almacenamiento.
En base a esto se reconocen dos grandes grupos: ortodoxas y recalcitrantes.
Las semillas ortodoxas
Las semillas ortodoxas pueden tolerar la desecacin y las temperaturas de congelamiento.
Hanson (1984) sugiri que era ms exacto y de mayor significado llamar a las semillas
ortodoxas como tolerantes a la desecacin.
Son aquellas cuyo contenido de humedad es posible bajarlo a valores entre 5 a 10 % y
guardarlas a temperaturas bajo cero sin daarlas, y por lo tanto es posible su conservacin
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Vicente Pocomucha Poma 19
por perodos largos sin perder su capacidad germinativa. Esta capacidad para tolerar la
desecacin se debe principalmente a que por el proceso normal de maduracin, estas
semillas van perdiendo humedad y es as que cuando son dispersadas desde el rbol, o
bien cuando an permanecen en l estando maduras, su contenido de humedad es bajo
Estas semillas pueden ser desecadas hasta contenidos de humedad muy bajos sin sufrir
daos, al menos hasta un nivel de humedad constante que se mantenga en equilibrio con
una humedad ambiental relativa de 10% (a este valor las semillas con almidn tienen un
contenido de humedad cercano a 5%, en tanto que las semillas grasas tienen valores de 2 a
3%).
Sus longevidades aumentan cuando disminuye el contenido de humedad y con la
temperatura durante el almacenamiento, en una forma cuantificable y predecible. .
Al segundo grupo pertenecen las semillas que no se pueden secar hasta llegar a bajos
contenidos de humedad ya que pierden viabilidad. Al contrario de las semillas ortodoxas
este tipo de semillas llegan al estado de madurez con altos contenidos de humedad. Por lo
tanto su almacenamiento es factible solo por cortos perodos y en lo posible deben ser
sembradas inmediatamente.
Colecciones de Semillas Ortodoxas

Para la conservacin de semillas ortodoxas (semillas de fcil almacenamiento a baja
temperatura y baja humedad) se tienen dos cmaras de almacenamiento: una para corto
plazo (5C y 35% de humedad relativa) y una de largo plazo (-17C). Las muestras de
semillas se conservan en bolsas impermeables con un contenido de humedad entre 5 y 7%.
Bajo estas condiciones se conservan semillas de aproximadamente 90 especies.
Peridicamente se realizan pruebas de germinacin para determinar la necesidad de
regeneracin de las muestras de semillas almacenadas.
Colecciones de semillas ortodoxas
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Grupo de plantas Gnero / Especie Nmero de
accesiones
disponibles
Granos /
Pseudocereales
199
Amaranthus spp. 199
Leguminosas de grano 115
Cajanus cajan (Gandul) 5
Canavalia ensiformis (Haba de caballo;
frijol espada)
8
Lablab spp. (Lablab, frijol trepador) 17
Phaseolus spp. (Frijol) 61
Psophocarpus spp. (Frijol alado) 5
Vigna spp. 19
Hortalizas 1443
Capsicum spp. ( Chile ) 881
Crotalaria spp. (Chipiln) 5
Cucurbita spp. (Ayote) 310
Lagenaria siceraria (Calabaza) 23
Lycopersicon spp. (Tomate) 168
Physalis spp. (Tomate de cscara,
etc.)
9
Solanum spp. (Naranjilla, etc.) 47
Races 55
Pachyrhizus spp. (Jcama) 55
Forestales Aproximadamente 30 especies 60 lotes
Almacenamiento de semillas ortodoxas
Las semillas ortodoxas se almacenan mejor cuando su contenido de humedad disminuye. El
contenido de humedad ptimo puede ser ligeramente diferente entre especies, por lo que
una manera sencilla de reducirlo, aproximadamente hasta el nivel ptimo para la mayora de
las especies, consiste en colocar stas a una temperatura ambiente de alrededor de 15 a
19C, expuestas a una atmsfera con humedad relativa de alrededor de 18 o 20% durante
un mes. Esto se logra usando una cmara de deshidratacin fresca o desecadores de
campana de vidrio provistos de slica-gel deshidratada o almina activada. Las campanas
deben ser colocadas en un cuarto fresco.
Una instalacin dedicada al almacenamiento de semillas debe estar provista de un cuarto de
secado, con aire acondicionado y deshumidificadores, para destinarlo al proceso continuo
de deshidratacin de muestras de semillas. Debe recordarse que las semillas nunca deben
secarse con calor, pues pocas sobreviven a estas condiciones.
Muchas semillas resisten una deshidratacin muy profunda; en esos casos, el
almacenamiento se realiza en tubos de cristal que contengan una sustancia deshidratante
como el slica-gel. Tambin el hidrxido de sodio es un deshidratante muy utilizado para
otros propsitos, pero nunca debe usarse con semillas.
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Vicente Pocomucha Poma 21
Cuando las semillas estn secas deben colocarse en contenedores o recipientes
hermticamente cerrados y etiquetados, precisando el nombre de la planta, la fecha, el lugar
de recoleccin y otros datos importantes. Los bancos de semillas emplean diferentes clases
de recipientes, como frascos hermticos de cristal o de metal y tubos de cristal cerrados a
fuego. Los bancos de semillas importantes utilizan preferentemente bolsas gruesas de
polietileno selladas a fuego dentro de sobres de papel de aluminio.


Vista parcial del interior de la cmara frigorfica del Centro de Semillas y rboles Forestales, utilizada
para el almacenamiento de semillas, dentro de recipientes metlicos, tapados, para aislarlas de la
humedad ambiente.
Para instalaciones relativamente pequeas de almacenamiento de semillas, son muy
convenientes los viales de vidrio cerrados a fuego que contengan a las semillas, separadas
de la sustancia deshidratante por medio de un algodn , ya que con ello se evita la
humidificacin accidental de las muestras. La muestra inicial de semillas se distribuye en
varios viales, de manera que se cuente con material para almacenamiento prolongado, para
almacenamiento temporal y para intercambio, sin riesgo de que al abrir y cerrar los
recipientes se humedezcan las semillas accidentalmente.


mpula de vidrio sellada a fuego para almacenar semillas desecadas a baja
temperatura.


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Mtodo para almacenar semillas ortodoxas en mpulas de vidrio


Las semillas ortodoxas se pueden almacenar en un congelador domstico de tipo horizontal
o vertical, pero deben evitarse los cambios prolongados de temperatura durante fallas
elctricas mediante el empleo de un generador que se encienda automticamente al ocurrir
la falla elctrica. El procedimiento de almacenar las semillas en viales cerrados a fuego es el
ms adecuado cuando no se dispone de un cuarto especial refrigerado para abrir los
recipientes, ya que es posible dejar que los viales gradualmente tomen la temperatura
ambiente antes de proceder a abrirlos, y slo una pequea muestra de semillas es expuesta
cuando se requiere extraer algunas semillas del banco. En cualquier caso, ya se trate de un
almacn de semillas pequeo o de un gran proyecto de importancia nacional, es
indispensable una poltica estable de conservacin del germoplasma, un administrador y
personal bien preparado e interesado en el proyecto, as como un apoyo econmico
continuo para asegurar la perpetuacin de la instalacin y su buen funcionamiento.

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Condiciones para almacenar semillas ortodoxas

Las semillas se pueden almacenar en cmara durante diferentes perodos larga, mediana y
corta plazos. Las condiciones de almacenamiento para mantener las muestras viables se
determinan de acuerdo con la especie, el objetivo de conservarla y el tiempo de
almacenamiento proyectado. La cmara de almacenamiento deber mantener constantes la
temperatura, la humedad relativa y la intensidad de la luz mediante equipos de refrigeracin,
deshumidificacin y control de horas luz.
La mayora de especies de semilla ortodoxa se pueden conservar por tiempo indefinido a
temperaturas entre 10 y 20C, con un contenido de humedad de 3-7% y una viabilidad no
inferior al 85%. Las semillas conservadas en estas condiciones se mantienen durante 70-
100 aos aproximadamente.
Si el objetivo es conservar las semillas a mediano plazo (10-20 aos, mximo 30), se las
puede mantener a temperaturas entre 0 y 15C (generalmente 1-4C), con contenidos de
humedad entre 3 y 7% y una viabilidad no inferior al 65%. Si el material se va a utilizar a
corto plazo, la semilla se puede almacenar en cuartos con aire acondicionado.
La cmara de almacenamiento debe ser hermtica y diseada para las muestras que
almacenar, el perodo durante el cual permanecern en ella y el clima de la zona donde se
establecer. En general, se recomienda construirlas con paneles prefabricados de acero
galvanizado, unidos con espuma de poliuretano y aislantes que protejan el germoplasma de
las condiciones externas. Cada cmara deber tener dos sistemas de refrigeracin
independientes, un suministro de energa constante y estable, e instrumentos de verificacin
como termmetros de mercurio y de bulbo hmedo y seco. Informacin sobre la
infraestructura y equipos requeridos se puede encontrar en el manual para disear
instalaciones de almacenamiento de semilla.
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Las semillas recalcitrantes
Su tiempo de vida es corto.
Las semillas recalcitrantes mueren si sus contenidos de humedad se reducen por debajo de
un valor critico relativamente alto (12 31%).
Se si mantienen en condicin hmeda, pueden retener su habilidad de germinar por un
periodo corto de tiempo, el cual varia tpicamente de pocas semanas hasta pocos meses.
Mucho de los rboles frutales, especies maderables y cultivos son sensibles a la
desecacin, sensibles al dao por enfriamiento a bajas temperaturas, (King y Roberts,
1979).
Muchas semillas recalcitrantes no toleran temperaturas de congelamiento.
Por ejemplo:
Hevea brasiliensis y Nephelium lappaceum.
Theobroma cacao no toleran ni la temperatura de 15C.
En contraste con las semillas ortodoxas, las recalcitrantes no pueden ser desecadas por
debajo de un punto relativamente alto en el contenido de humedad sin causarles dao. A
pesar de que existe gran variacin en el contenido de humedad crtico entre las especies,
bajo el cual la viabilidad se reduce, algunas especies comienzan a morir rpidamente aun en
equilibrio con una humedad relativa ambiental de 98-99%, y la mayora de las semillas
muere cuando su contenido de humedad est en equilibrio con una humedad ambiental de
60-70% (que corresponde a un contenido de humedad de 16-30% sobre el peso fresco).
Todava no existe un mtodo satisfactorio para mantener la viabilidad de las semillas de
estas especies, en particular las de origen tropical, por arriba de un periodo corto, menor a
un ao.
Para la conservacin de semillas ortodoxas (semillas de fcil almacenamiento a baja
temperatura y baja humedad) se tienen dos cmaras de almacenamiento: una para corto
plazo (5C y 35% de humedad relativa) y una de largo plazo (-17C). Las muestras de
semillas se conservan en bolsas impermeables con un contenido de humedad entre 5 y 7%.
Bajo estas condiciones se conservan semillas de aproximadamente 90 especies.
Peridicamente se realizan pruebas de germinacin para determinar la necesidad de
regeneracin de las muestras de semillas almacenadas.
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Tipos de semillas recalcitrantes
Especies de hbitat acuticos
Especies arbreas de semillas grandes.
Cultivos tropicales. Como el cacao, caucho y coco
Frutales.- mango, langostino
Especies maderables tropicales de la familia Dipterocarpaceae y Araucariaceae
De climas templados.- roble y la castaa.
Pruebas sencillas para definir si una semilla es ortodoxa o recalcitrante
A pesar de que es posible hacer presunciones acerca del comportamiento de una especie
de semilla en almacenamiento basndose en su tamao, apariencia, historia de vida y
filogenia, es necesario hacer pruebas para saber con precisin el comportamiento de cada
especie en particular. La prueba se inicia dividiendo una porcin de semillas en dos partes
iguales. Se prueba la viabilidad de una de las fracciones de semillas frescas y la otra mitad
se somete a una desecacin gradual y cuidadosa antes de probar su viabilidad. Para
completar, una prueba adicional que se realiza antes y despus de someter las semillas a
congelacin, indicar si las semillas que toleran la desecacin son ortodoxas verdaderas o
intermedias.
Pruebas para determinar semillas ortodoxas y recalcitrantes



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Ejemplos de semillas recalcitrantes (a) Araucaria araucana, "araucaria"; (b) Cryptocarya alba,
"peumo" y (c) Aextoxicum punctatum, "olivillo"

Bibliografa
http://www.ipgri.cgiar.org/training/exsitu/web/arr_condiciones_semillas_ortodoxas.ht
m
-http://www.uchile.cl/facultades/cs_forestales/publicaciones/cesaf/n2/3.htm
-http://www.uchile.cl/facultades/cs_forestales/publicaciones/cesaf/n14/1.html
-http://www.chlorischile.cl/bancosemillas/bancosem.htm
-http://www.semicol.com.co/Inf_tecnica.htm
-http://orbita.starmedia.com/~fitotecnia1/semilla2.html
-http://www.euroseeds.com/60/conservacion.htm
-http://www.fao.org/WAICENT/FaoInfo/Agricult/AGP/AGPS/GpaSP/gpaact6s.htm
http://lectura.ilce.edu.mx:3000/biblioteca/sites/ciencia/volumen3/ciencia3/157/htm/se
c_5.htm
-http://iufro.boku.ac.at/iufro/iufronet/d2/wu20900/news58spn.htm
-http://www.gobcan.es/medioambiente/biodiversidad/librorojo/exsitu.html