Guias Lab. Bioquimica Profesor Domingo

Universidad de Pamplona - Ciudad Universitaria - Pamplona (Norte de Santander - Colombia)
Tels: (7) 5685303 - 5685304 - 5685305 Fax: 5682750 www.unipamplona.edu.co

La Academia al servicio de la Vida
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRACTICA N 1
PREPARACION DE SOLUCIONES
DOCENTE: DOMINGO CAMPO

OBJETIVOS

Adquirir destreza en la preparacin de soluciones de
cidos, bases y sales.
Familiarizar al estudiante con el uso de la probeta, la
pipeta, la bureta y el baln aforado.

FUNDAMENTOS TEORICOS

Existen diversas formas de expresar la concentracin de una solucin:
Porcentaje en peso: expresa los gramos de soluto contenidos en
100 g de solucin. por ejemplo, una solucin de NaCl al 5 % en
peso contiene 5 g de NaCl y 95 g de agua por cada 100 g de
solucin.

% en peso = g soluto / g solucin x100

Molaridad: se define como el nmero de moles de soluto por litro
de solucin.

M= N moles de soluto/ litros de solucin

Un litro de solucin acuosa de NaCl 1 M se puede preparar
adicionando un (1) mol de NaCl (58.5 g) a un baln aforado de un
litro y agregar agua hasta la marca.

Normalidad: se define como el nmero de equivalentes gramo de
soluto por litro de solucin.

N= N Eq- g soluto/ litros de solucin

Para preparar un litro de solucin de H2SO4 1N se debe agregar
un equivalente- gramo de H2SO4 (49 g) a un baln aforado de un
litro y adicionar agua hasta la marca.

Dilucin: con mucha frecuencia en el laboratorio se requiere
preparar una solucin diluida a partir de otra solucin de mayor
concentracin. Para diluir una solucin se debe agregar ms
solvente. El nmero de moles de soluto permanece constante
antes y despus de la disolucin.

Vc x Cc = Vd x Cd

Vc= volumen de la solucin concentrada
Mc= molaridad de la solucin concentrada
Vd= volumen de la solucin diluida
Md=molaridad de la solucin diluida

MATERIALES Y REACTIVOS

Vasos de 50 mL
Dos balones aforados de 100 mL
Vasos de 150 mL
Dos balones aforados de 250 mL
Vaso de 250 mL
Vidrio de reloj
Esptula
Embudo de vidrio
Balanza
Cinco rtulos
Probeta de 100 mL
NaCl comercial
Agitador de vidrio
NaOH en lentejas
3 frascos de 150 mL
H2SO4 concentrado
2 frascos de 300 mL
Frasco lavador
Pipeta graduada de 10 mL

PROCEDIMIENTO

Parte I. preparacin de 100 g de solucin de NaCl al 10 % en peso:
pese un vaso de precipitados de 150 mL con una precisin de 0.01 g.

Registre su peso y si retirarlo de la balanza agregue pequeas porciones
de NaCl hasta que el nuevo peso exceda al anterior en 10 g.

Mida 90 cc de agua destilada en una probeta (suponga que la densidad
del agua es 1 g/mL) y cuidando no perder una sola gota agrguelos al
vaso que contiene el NaCl. Agite suavemente con una varilla de vidrio
hasta que se disuelva toda la sal. Seguidamente transfiera la solucin con
ayuda de un embudo a un frasco, tpelo y rotlelo, indicando la
concentracin, la fecha y su nombre.

Parte II. Preparacin de 100 mL de solucin 2.0 M de NaCl: pese 11.69
g de NaCl siguiendo las instrucciones de la parte I. retire de la balanza el
vaso que contiene la sal, agregue entre 35 y 40 mL de agua destilada,
agite con cuidado hasta disolver toda la sal. Transfiera esta solucin con
la ayuda de un embudo a un baln aforado de 100 mL. Enjuague varias
veces las paredes del vaso utilizando un frasco lavador y agregue las
aguas del lavado al baln aforado. Seguidamente afore hasta la marca.
Tape el baln, agite y transfiera su contenido a un frasco previamente
rotulado.

Parte III. Preparacin de 100 mL de solucin 0.02 M de NaCl: mediante
clculos determine el volumen que debe tomarse de la solucin 2M para
preparar esta solucin, mdalo en una pipeta y depostelo en un baln
aforado de 100 mL, afore a la marca con agua destilada, agite, transfiera
su contenido a un frasco, tpelo y rotule como en el caso anterior.

Parte IV. Preparacin de 100 mL de solucin 0.1 M de NaOH: siga las
instrucciones de la parte III y prepare por dilucin esta solucin a partir de
una solucin de NaOH 1M. Rotule y guarde la solucin para la prctica
siguiente.

Parte V. preparacin de 100 mL de solucin 0.1 N de HCl: mediante
clculos determine que volumen de acido del 35% de pureza en peso y
densidad 1.13 g/mL debe tomarse para preparar 100 mL de solucin
0.2 N. mida este volumen en una probeta y transfiralo a un baln aforado
de 100 mL (el baln deber contener unos 50 mL de agua para evitar que
salpique), adicione agua destilada hasta la marca. Envase la solucin en
un frasco con tapa, rotlela y gurdela para la siguiente prctica.

RESULTADOS

1. Muestre todos los clculos que se requieren para preparar cada
una de las soluciones anteriores.

2. cuales serian las posibles fuentes de error al preparar las
anteriores soluciones?

PREGUNTAS Y EJERCICIOS

1. por qu deben guardarse en recipientes tapados las soluciones
de concentracin conocida?
2. cuntos gramos de NaOH se requieren parar preparar 250 mL de
solucin 0.2 M?
3. Explique cada uno de los pasos requeridos para preparar: (a) 500
mL de solucin 0.2 M de HCl a partir de HCl concentrado (36% en
peso de HCl y densidad 1.18 g/mL). (b) 2 L de NaOH 0.3 M a partir
de NaOH del 99.5 % de pureza en peso.
4. a qu volumen final deben diluirse 50 mL de NaOH 6M para
obtener una solucin 1M de NaOH . explique.

REFERENCIAS

1. BRICEO,Carlos Omar y RODRIGUEZ, Lilia. Qumica. 1 ed.,
Bogot: Editorial educativa,1993.p.409-415.
2. GARZON, Guillermo, Fundamentos de qumica general. 2 ed.,
Bogota: McGraw-Hill, 1989. P. 419-422.
3. RUSSELL, J. y LARENA, A. Qumica. 1 ed., Mxico: Prentice-Hall
hispanoamericana, 1989. P. 317-330.

PRACTICA N 2
DETERMINACIN DE ACIDEZ DE LA LECHE

OBJETIVOS:

Determinar la acidez total de la leche utilizando una valoracin
cido-base.
Determinar el contenido en cido lctico y buscar criterios que
indiquen si la leche se encuentra en condiciones adecuadas

FUNDAMENTO
La leche, por acuerdo internacional, se define como el producto del
ordeo regular y completo de vaca sana, bien alimentada y no fatigada y
desprovisto de calostro este ltimo corresponde a la primera leche que
produce la vaca que ha tenido un hijo. Se compone de 87% de agua,
siendo lo restante grasa, protenas (casena y lactoalbmina), sacarosa,
sales minerales como fosfatos, sulfatos, y cloruros. Es de reaccin
ligeramente alcalina y al mismo tiempo cida, por la presencia de fosfatos
y de dixido de carbono.
La grasa forma en la leche pequesimos glbulos, visibles slo al
microscopio, ms ligeros que el liquido y por eso asciende por el reposo,
originando la crema o nata. El aspecto blanco opaco tan caracterstico de
la leche se debe a la suspensin de la grasa en forma de estos glbulos
finsimos. Normalmente constituye desde el 3,5 hasta el 6,0% de la leche,
variando entre razas de vacas y el tipo de alimentacin. La casena es la
protena ms importante de leche se encuentra formando una mezcla
heterognea. Tiene la propiedad de coagularse en presencia de cidos,
originando la masa principal del queso. La concentracin en la leche vara
de 3,0 a 4,0%. Existe una estrecha relacin entre la cantidad de grasa y la
cantidad de protena en la leche cuanto mayor es la cantidad de grasa,
mayor es la cantidad de casena. La lactosa corresponde al glcido de la
leche (C12H22O11), se encuentra en disolucin y fermenta con facilidad,
dando origen principalmente al cido lctico, que como cido que es
provoca la coagulacin de la leche. Si se deja la leche en contacto con el
aire y la temperatura adecuada, se corta, lo que se debe al desarrollo de
bacterias lcticas como el bacilus lactici y el streptococus lactici, que
transforman la lactosa en 2 carbohidratos, la glucosa y galactosa, y
posteriormente stos en cido lctico. A pesar de que es un azcar, la
lactosa no se percibe por el sabor dulce. La concentracin de lactosa en
la leche es relativamente constante y promedia alrededor de 5,0% (4,8%-
5,2%). A diferencia de la concentracin de grasa en la leche, la

concentracin de lactosa es similar en todas las razas lecheras y no
puede alterarse fcilmente con prcticas de alimentacin. La acidez total
de la leche determina su calidad, ya que la leche de consumo humano
suele tener un pH comprendido entre 6,4 y 6,7. Sales minerales y
Vitaminas la parte ms importante de las sales minerales lo constituyen,
fosfatos, sulfatos, cloruros. La leche es una fuente excelente para la
mayora de los minerales requeridos para el crecimiento del lactante. La
digestibilidad del calcio y fsforo es generalmente alta, en parte debido a
que se encuentran en asociacin con la casena de la leche. Como
resultado, la leche es la mejor fuente de calcio para el crecimiento del
esqueleto del lactante y el mantenimiento de la integridad de los huesos
en el adulto.

MATERIAL:
3 Matraces Erlenmeyer.
Pipeta graduada de 10 mL.
Bureta graduada de 25 mL.
Soporte Universal.
Pinzas Para Bureta Doble.

REACTIVOS:
Hidrxido de sodio 0.1 M
Fenolftalena al 1%
Agua destilada
Muestra de Leche Fresca o Procesada (tres tipos como mnimo).

PROCEDIMIENTO

Se depositan 10 ml en un matraz erlenmeyer de 125 ml

Se aaden tres gotas de fenolftaleina como indicador.

Se titula la muestra con solucin 0.1 M de NaOH.

Se determina el volumen en mL de NaOH requeridos en la
titilacin. El color rosado deber permanecer por 15 seg.

Repetir todo una vez mas.

CALCULOS

Determinar la concentracin del cido lctico que contiene cada
una de las dos muestras de leche valoradas. La concentracin
final ser la media de los dos valores calculados anteriormente.
Buscar la frmula semidesarrollada del cido lctico, y con ella
determinar los gramos de cido lctico que contienen 100 cm
3
de
la leche analizada.
Buscar el contenido en cido lctico que debe tener una leche de
consumo, as como el valor habitual de su densidad. Compara con
el valor obtenido experimentalmente.

REFERENCIAS

Del Valle, M. Anglica. Mediciones y mtodos de separacin en el
laboratorio qumico. Ed. Pontificia Universidad Catlica de Chile. 1996

PRACTICA N 3
DETERMINACIN DEL pH Y PREPARACIN DE SOLUCIONES
AMORTIGUADORAS

OBJETIVO:
Aprender el uso correcto del pH metro y preparar soluciones con
diferentes valores de pH.

FUNDAMENTO:
El pH de una solucin acuosa se define como el logaritmo negativo de la
concentracin molar de hidrogeniones (H3O
+
). La determinacin de pH es
muy importante, ya que influencia de manera directa en la carga de la
molcula y en su actividad biolgica. El producto inico del agua es la
base de la escala del pH propuesta por Srensen (:kW=[ H+][-OH ] = 10
-
14
pH = -log [ H
+
]). La escala de pH permite expresar la concentracin de
iones hidronio (protn hidratado) comprendida entre 1M y 1X10
-14
M,
extremos que corresponden a pH 0 y 14, la neutralidad es igual a pH 7.0.
La manera mas conveniente y exacta de determinar el pH es usando un
electrodo de vidrio. Este electrodo depende del intercambio de iones en
las capas hidratadas formadas sobre la superficie del electrodo de vidrio.
Generalmente se utiliza vidrio compuesto de aproximadamente 22% de
Na2O, 6% de CaO y 72% de SiO2. Este vidrio muestra una especificidad
hacia los iones hidrgeno hasta un pH de cerca de 9; a valores mayores
de pH, la membrana se vuelve sensible a iones sodio y otros iones
alcalinos. Esto se evita empleando membranas construidas con vidrio en
que el sodio se reemplaza por litio. El electrodo de vidrio debe
mantenerse en agua destilada o en solucin de KCl saturada para evitar
el crecimiento de microorganismos. En el electrodo de vidrio est
presente un electrodo de referencia interno de plata/cloruro de plata
(Ag/AgCl) rodeado por un electrolito de HCl 0.1M. Este electrodo de
referencia interno produce un potencial estacionario.
El electrodo de vidrio acta como una batera cuyo voltaje depende la
actividad del H
+
de la solucin en que est sumergida. En el pHmetro, el
electrodo de vidrio y el electrodo de referencia de calomel, estn
diseados para que a pH 7 d un potencial cero. Antes de medirse el pH
de una solucin desconocida el pHmetro se estandariza con soluciones
amortiguadoras de pH conocidos. El voltaje depende de la temperatura,
por lo que los potencimetros tienen un control de ajuste para la
temperatura de la solucin. Los electrodos de vidrio son frgiles y caros,
por lo tanto deben manejarse con cuidado. Si se mide el pH de soluciones
de protenas, se puede formar una capa delgada en el electrodo; puede

removerse sumergiendo en HCl 0.1N, y despus limpiando con
detergente diludo y enjuagando con agua. Por otro lado, las soluciones
amortiguadoras (buffers o soluciones tampn), son aquellas capaces de
mantener el pH dentro de un rango de variacin mnima. Estn formadas
generalmente por un cido dbil y su base conjugada cuando se trabaja a
pHs por debajo de 7. En el caso de pHs alcalinos se usa una base dbil
con su cido conjugado respectivo. La eficiencia de una solucin
reguladora est regida por dos factores: (a) La concentracin total del
regulador (suma de las concentraciones del cido dbil y de la sal).
Cuanto ms concentrado sea un regulador, ms tolerante ser a la
adicin de cidos o bases fuerte. (b) Por la relacin existente entre la
base conjugada y el cido. Cuando esta relacin es igual a 1, la solucin
reguladora tiene su mxima eficiencia. Este valor se alcanza cuando el pH
del regulador es igual al pKa de cido. La E=ecuacin de Henderson y
Hasselbalch, es muy til para la preparacin de las soluciones
amortiguadoras. (pH = pKa + log [sal]/ [cido]). El pH ms adecuado para
que una solucin amortiguadora funcione eficientemente, es cuando se
encuentra en un rango de pH igual a su pKa +1

MATERIALES
Potencimetro, pipetas pasteur, probetas de 200 ml, vaso de precipitados
de 250 ml, piseta con agua, agitador magnticas, esptula. Muestras para
determinar pH:
leche, jugo, etc.(suministrado por los estudiantes)

REACTIVOS
KCl saturado; Solucin estndar pH 4, pH 7 y pH 10; Solucin de cido
brico 0.1 M; Solucin de NaOH 10M, HCl concentrado, cido actico,
acetato de sodio, EDTA, KH2PO4, K2HPO4.

MTODOS
Uso del pH metro y medicin del pH
El electrodo del pHmetro siempre debe estar sumergido en una solucin
de KCl o agua destilada. Enjuagar el electrodo con agua destilada y secar
(Fig.1A).
Ajustar el pHmetro primero a pH 7, despus a 4 y finalmente a 10 con
soluciones reguladoras comerciales. Entre cada pH enjuagar con agua
destilada (Fig.2B).
Determinar el pH de varias muestras como leche, jugos, refrescos, etc,


FIGURA 1. Representacin esquemtica de un pH-metro.

Preparacin de diferentes soluciones

Preparar 50 mL de una solucin reguladora de acetato de sodio 50
mM, pH 5. Para realizar esto, primero debes calcular cuantos
gramos de acetato de sodio se necesitan, disolverlos en menos de
50 ml de agua destilada (por ejemplo 30mL) y ajustar el pH a 5 con
cido actico. Usar la formula M= (n/V) = (mPM)/V (M= molaridad,
m=masa en gr, P.M.= peso molecular y V= volumen en litros) para
hacerlos clculos.

Preparar 50 mL de una solucin reguladora de fosfatos (de
potasio) 100 mM, pH 6. El H3PO4 tiene tres constantes de
ionizacin y por lo tanto tres valores de pKa. Se toman las
especies inicas que tengan un valor de pKa mas cercano a pH 6
(H2PO4
-1
HPO4
-2
)

Usaremos la siguiente tabla para preparar la solucin amortiguadora
Tabla 1. Preparacin de solucin reguladora de fosfato a pHs entre 5.8 y
6.2

Hasta aqu se han preparado 10 ml de una solucin 1M, utilizar frmula
C1V1=C2V2

(C=concentracin, V=Volumen) para preparar 50mL a 100 mM


Preparar 50 ml de EDTA 0.5 M pH 8
Calcular cuntos gramos de EDTA necesitas, poner en 30 ml, comenzar a
disolver con agitador magntico y tratar de ajustar el pH cercano a 8 (el
EDTA comenzar a disolverse) y adicionar poco a poco ms agua. Ajustar
a pH 8 y aforar a 50 ml.

Cuestionario

1. Porque el pH del potencimetro se ajusta primero a pH 7 y no a 4 o
10?
2. Porque el electrodo se tiene que mantener en una solucin de KCl
saturado? En caso de no contar en el laboratorio con KCl, Que otros
compuestos pueden usarse?
3. Si quisieras preparar un buffer de fosfatos de potasio pH 11, que sales
seleccionaras?
4. El buffer de acetato de sodio que preparaste est a un pH que se
puede considerar adecuado para servir como solucin reguladora?
.Explica tu respuesta.
5. En la preparacin del acetato de sodio, cual es el cido y cual la base
conjugada.

REFERENCIAS

Wilson, K., and Walker, J. 2000. Principles and Techniques of practical
Biochemistry. Fifth edition. Cambridge University Press.

Robert, JF., and White B.J. 1990. Biochemical techniques theory and
practice. 1st edition. Waveland Press, Inc. USA.

Douglas A. Skoog and Donald M. West.1971.Principles of Instrumental
Analysis. Holt, Rinehart and Winston, Inc.

Rodney F. Boyer.1986. Modern Experimental Biochemistry. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc.

Sambrook, J., E.F. Fritsch and T. Maniatis. 1989. Molecular cloning. A
laboratory Manual. Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press

PRACTICA N 4
PROPIEDADES INICAS DE LOS AMINOCIDOS

OBJETIVO:
Demostrar las propiedades cido-base de los aminocidos.

FUNDAMENTO:
Todos los aminocidos son anfolitos los cuales contienen al menos un
grupo funcional acdico (carboxilo) y uno bsico (a-amino). Algunos
aminocidos contienen otros grupos que se ionizan fcilmente: grupos
amino, carboxilo, phidroxifenilo, sulfihidrilo, guanidino e imidazol. El
carcter inico de los polipptidos y las protenas es en gran parte debido
a estos grupos adicionales ionizables debido a que los grupo alfa-amino y
carboxilo de los aminocidos participan en los enlaces peptdicos. En esta
prctica se estudia la reaccin de aminocidos cuando se adiciona un
cido o una base y se observa el cambio de pH. Adems, despus de
cada adicin de cido o base durante una titulacin, los resultados se
pueden predecir por el uso de la ecuacin general de Henderson-
Hasselbalch.


Muestras de aminocidos en polvo, NaOH 1N, HCl 1N, amortiguadores
estndar. Balanza analtica, pH metro, barra y agitador magntico, bureta,
pinzas para bureta, soporte, esptula, 8 vasos de precipitados de 100 ml,
embudo.

PROCEDIMIENTO

Titulacin de aminocidos desconocidos.
Pesar cerca de 400 mg de muestra y disolverla en 20 ml de H2O en un
vaso de precipitado. Introducir una barra magntica y colocarlo en una
placa de agitacin, as como el electrodo para medir pH. Titular la muestra
disuelta desconocida con HCl 1N, registrando las lecturas de la bureta y el
pH a intervalos frecuentes hasta que la solucin alcance un pH de 1.0.
Observe y registre la solubilidad de la muestra durante la titulacin. Titular
otros 20 ml de agua (blanco) con HCl 1N, gota a gota en las primeras 10
gotas y de dos en dos gotas las siguientes 10 gotas. Finalmente de cuatro
en cuatro gotas hasta que la solucin alcance pH de 1.0 Registrar el pH y
el volumen del cido despus de cada adicin. Disolver otra muestra (otra
vez aproximadamente 400 mg en 20 ml de agua) y titular la muestra con

NaOH 1N de la misma manera que para la titulacin con cido hasta que
el pH de la solucin llegue a12. Observe y registre la solubilidad de la
muestra durante la titulacin. Tambin titular a 20 ml de agua (blanco) con
NaOH 1N hasta pH 12.0 de manera similar que el primer blanco.

REPORTE
Hacer una tabla de resultados para cada titulacin:
Muestra con NaOH, Agua con NaOH, Muestra con HCl, Agua con
HCl.
Dibujar la curva de titulacin verdadera siguiendo el siguiente
procedimiento: Para determinar la curva de titulacin verdadera de
cualquier sustancia, se debe medir cunto cido o base se
consume al titular el solvente (agua) en cada pH y entonces restar
esta cantidad de la cantidad total de cido o base consumida para
alcanzar ese pH:

Titulacin del lado cido. Construccin de la grfica
El siguiente ejemplo con el lado cido de la titulacin de un aminocido
ilustra uno de varios de los mtodos disponibles para corregir por dilucin.
Para la muestra y el blanco de agua, graficar el volumen del cido
adicionado contra el pH alcanzado (Fig. 1). De la grfica o de los datos
originales, preparar una tabla como la Tabla 1. Restar el volumen del
cido requerido para llevar el blanco de agua a cualquier pH del volumen
del cido requerido para llevar la muestra al mismo pH. La diferencia
representa la cantidad de cido consumida en la titulacin de la muestra
solamente. Usando los datos de su tabla, graficar el pH contra el nmero
de equivalentes de cido necesario para titular la muestra del aminocido
a cualquier pH (ver Fig. 2).

Titulacin del lado bsico.
Para corregir por dilucin el lado bsico de la curva se puede aplicar un
mtodo similar.

Preparar una curva de titulacin completa y corregida para el
aminocido titulado.


El nmero de equivalentes de cido o base consumidos al pasar a travs
de la inflexin de una curva, como en la Fig. 2, representa la cantidad de
cido requerida para titular un grupo ionizable en la cantidad del
aminocido que se ha ensayado. El punto final de la titulacin se debe
reconocer como el punto en que se eleva (o cae) drsticamente el pH con
la adicin del titulante. Este punto generalmente se determina con ms
precisin de la curva de titulacin del aminocido con la base.

Cuestionario
1. Usando la ecuacin de Henderson Hasselbalch, calcular el pKa de
cada grupo ionizable titulado.
2. Coincide con el pKa reportado en los libros?
3. Cmo se podra confirmar la identidad del aminocido?

4. Dibujar la curva que se esperara en la titulacin del cido asprtico y la
que se esperara en la titulacin de la lisina, sealando las especies
predominantes en cada regin.

REFERENCIA
Clark, J.M and R. L. Switzer. 1977. Experimental Biochemistry. W.H.
Freeman and Company

PRACTICA N 5
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LA CASENA

OBJETIVO:
Determinar el punto isoelctrico de la casena.

FUNDAMENTO:
La casena representa el 80% de las protenas presentes en la leche y el
2,7% en composicin de la leche lquida, hay varios tipos de casena que
son s1, ; estas protenas precipitan del lquido cuando esta
toma un pH cido de 4,6.
El pH en el que precipitan las protenas se denomina punto isoelctrico
(pI), ya que se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas
presentando una carga neta de 0 y la protena presenta su mxima
posibilidad para ser precipitada ya que la partculas se agregan. Debido a
la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden
existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y
aninicos, y as cada protena tendr un pI diferente.

BSQUEDA DE INFORMACIN:
- Consulte la importancia industrial de la casena
- Cul es el pI de la casena?
- Consulte el valor del punto isoelctrico de tres protenas de inters.

Materiales por grupo:
- Nueve tubos de ensayo
- Dos vasos de precipitados de
50ml
- Una gradilla para tubos de
ensayo
- Un erlenemyer de 250ml
- Un erlenmeyer de 150ml
- probeta de 50ml
- Dos pipetas graduadas de
5,0ml
- Dos pipeta graduada de 1,0 ml
- Dos pipetas graduadas de
10,0ml

- Dos vasos de precipitado de
50ml
- Agitador de vidrio
- Embudo de vidrio mediano
- Vidrio de reloj
- Papel de filtro flujo rpido
- Dos goteros de plstico
- Agua destilada
- cido actico 0,01N
- cido actico 0,1N
- cido actico 1,0N
- NaOH 1N
- ter etlico
- Etanol al 70%
- Potencimetro
- Leche entera corriente ( *)
- Papel indicador universal
- Rollo de toallas absorbentes ( *)
(*)proporcionado por el
estudiante

PROCEDIMIENTO:

A. Aislamiento de la casena:
Caliente en un vaso de precipitados 150ml de agua destilada a 38C,
aada 50ml de leche y luego gota a gota y con agitacin, adicione cido
actico 2M hasta que observe que se forma un precipitado (la leche se
corta). Deje sedimentar, decante y filtre sobre papel de filtro rpido, luego
lave el precipitado con 20ml de etanol en el mismo filtro y seque el
precipitado colocando varias toallas de papel absorbente.
Coloque el precipitado en un vaso de precipitados pequeo previamente
pesado, vuelva a pesar el vaso con el precipitado y luego adicione 5ml/g
de ter etlico, filtre nuevamente. Deseche el sobrenadante y queda un
precipitado blanco de fcil manipulacin.

B. Preparacin de la casena:
Coloque 250 mg de casena en un erlenmeyer de 150ml, agregue 20ml de
agua destilada y 5 ml de NaOH 1N; agite hasta lograr una solucin total
de la casena. Una vez disuelta la casena, adicione 5 ml de cido actico
1N y diluya con agua destilada hasta 50ml y mezcle bien. La solucin
debe ser clara y limpia y si no es as, debe volver a filtrar.
C. pI de la casena:
En nueve tubos de ensayo limpio y seco adicione exactamente los
volmenes de los reactivos segn la siguiente tabla:


Confirme el valor de pH resultante de cada tubo con un potencimetro o
con papel indicador universal.
Luego agregue a cada tubo 1ml de la solucin de casena, agite
inmediatamente el contenido del tubo y djelo reposar durante 20
minutos.
Usando una escala cualitativa de cruces (0 a 5 cruces), registre el grado
de turbidez de cada tubo, el mayor grado de turbidez, significa que hay un
mayor contenido de precipitado y ser el valor de pH ms cercano al
punto isoelctrico de la protena.

PARA EL DESARROLLO DEL INFORME
- Discuta los datos obtenidos e indique cual es el pI de la casena
- Representa las formas inicas y calcule el valor del pI para algunos
aminocidos y algunos pptidos que le indique el profesor.

REFERENCIA
Miller D.D. 2001. Qumica de Alimentos, Manual de Laboratorio. Limusa
Wiley, Mxico.

PRACTICA N 6
ENSAYOS PARA PROTENAS

OBJETIVO:

FUNDAMENTO:



REACTIVOS

ANALISIS CUALITATIVOS

Para aminocidos




Consulta

NOTA: LOS ESTUDIANTES DEBEN LLEVAR GUANTES,
TAPABOCAS, TOALLAS ABSORBENTES, 3 HUEVOS, FOSFOROS Y
UN PEDAZO DE TELA.

PRACTICA N 7
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

OBJETIVOS:
Estudiar algunas de las condiciones que afectan la actividad enzimtica
de alfa-amilasa.

BUSQUEDA DE INFORMACIN
- Que es la a-amilasa y que reaccin cataliza
- Aplicacin industrial de la a-amilasa
- Fundamento de las reacciones de Lugol y Fehling.


-30 tubos de ensayo
- Gradilla
- 4 pipetas graduadas de 5ml
- 2 pipetas graduadas de 10ml
- Un termmetro
- Un erlenmeyer de 250ml
- Una placa de calentamiento
- Un aro con nuez
- Tres vaso de precipitados de
250ml
- Una pinza para tubos de
ensayo
- Dos baos de mara (35 y
50C)
- Reactivo de Lugol (250ml)
- Reactivo de Fehling A (350ml)
- Reactivo de Fehling B (350ml)
- Acido clorhdrico 1N (200ml)
- Hidroxido de sodio 1N (200ml)
- Buffer fosfatos pH 5.0 (200ml)
- Buffer fosfato pH 7,2 (200ml)
- Solucin de a-amilasa
comercial 5000 unidades SKB
0,6 g/100ml y diluir 1/100 (500ml)
- Solucin de almidn al 1% ( 2,0
litros)
- Agua destilada

PROCEDIMIENTO

1. Efecto de la temperatura:
Coloque en 4 tubos de ensayo 10ml de solucin de almidn, 2ml de
solucin del buffer pH 7,2 e incbelos a temperaturas diferentes segn lo
indicado en la tabla 1. A cada uno de ellos coloque 2ml de la solucin de
a-amilasa agite y tome 1ml de mezcla de reaccin cada minuto y
distribyalos en 2 tubos de ensayo (0,5ml en cada uno). Un tubo de
ensayo contiene 1ml de reactivo de Lugol y el segundo tubo de ensayo
contiene 1 ml de reactivo de Fehling. Anote si la reaccin en cada tubo
de ensayo es positiva o negativa. Utilice un blanco de reactivos en cada
caso.


2. Efecto del pH
Coloque en 4 tubos de ensayo 10ml de la solucin de almidn e incbelo
a temperatura de 35C, a cada tubo adicione 2ml de las soluciones de
diferente pH y luego 2 ml de la solucin de a-amilasa.

Agite y tome un mililitro de mezcla de reaccin y distribyalos en dos
tubos de ensayo (0,5ml cada uno). Un tubo de ensayo contiene 1ml de
reactivo de Lugol y en otro tubo de ensayo contiene 1ml del reactivo de
Fehling. Anote si la reaccin en cada tubo de ensayo es positiva o
negativa, utilice un blanco de reactivos en cada caso.

3. Efecto del tiempo
Coloque en un erlenmeyer de 250ml, 25ml de solucin de almidn, 10ml
de la solucin buffer pH 7,2 e incbelo a 35C por 3minutos, luego
adicione 2ml de la solucin de enzima y agite. Tome 1ml de mezcla de
reaccin segn el tiempo especificado y distribyalos en dos tubos de
ensayo (0,5ml cada uno); un tubo contiene 1ml de Lugol y el otro tubo 1ml
de Fehling. Anote si la reaccin en cada tubo es positiva o negativa y
anote el tiempo en que se agota el almidn.

PARA EL INFORME

- Datos y observaciones debidamente tabuladas
- Identificar bajo qu condiciones de temperatura y pH, la enzima tiene su
mejor actividad (mayor velocidad de reaccin)
- Identificar en que tiempo termina la enzima de degradar el almidn en el
procedimiento 3

REFERENCIAS

- Bohinski, R.C. Bioqumica. ADDISON-WESLEY IBEROAMERICANA,
S.A., Wilmington,
1991.
- Plummer, D.T. Bioqumica prctica. Mxico, Mc Graw Hill
Latinoamericana, 1981

PRACTICA N 8
RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIN DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS:
Reconocer los carbohidratos por medio de reacciones coloreadas
de carcter cualitativo.
Diferenciar Hexosas de pentosas
Diferenciar e identificar azucares reductores y no reductores
Diferenciar monosacridos, disacridos y polisacaridos
Diferenciar aldosas de cetosa

FUNDAMENTO:
Los carbohidratos tambin llamados azcares, osas o sacridos, son
polihidrxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos polimricos que
por hidrlisis producen polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas.

Segn el nmero de unidades de azcares sencillos que posean se
clasifican en:

MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser
ALDOSAS cuando contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando
contienen el grupo cetona. Los monosacridos naturales pertenecen a la
serie D de los azcares y pueden tener entre tres y hasta siete tomos de
carbono.

DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre
s por enlaces
glucosdicos.

OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos
tambin por enlaces
glucosdicos.

POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de
unidades de azcar sencillo ligadas entre s.

De acuerdo con lo anterior, adems de reconocer si un compuesto
pertenece a la familia de los
carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacrido
tipo aldosa o cetosa, si es fcilmente oxidable o no, es decir si es un

AZCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco tomos de carbono
(pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si es disacrido o
polisacrido.
Una secuencia que permite hacer el reconocimiento y diferenciacin de
carbohidratos se esquematiza en la FIGURA 1.

Ensayo de Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento
general de carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se
hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se
convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales
reaccionan con -naftol formando un color prpura violeta.

Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de
carbohidratos reductores, al igual que el reactivo de Felhing, el de
Benedict contiene ion cprico en medio alcalino que se reduce hasta
xido cuproso en presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetlico
libre.

Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos
y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce
hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los
disacridos.

Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo
y yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por
la formacin de una coloracin azlvioleta intensa y el glicgeno y las
dextrinas por formacin de coloracin roja.

Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es especfico para cetosas y se basa
en la conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior
condensacin con resorcinol formando as complejos coloreados
.
Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el
cual forma complejos de coloracin slo con las pentosas.

De otro lado una propiedad importante que permite identificar los
carbohidratos, y determinar el grado de pureza de los mismos,
particularmente monosacrios es la rotacin ptica ocasionada por la
presencia de centros asimtricos o quirales en la estructura molecular, los
cuales desvan el plano de luz polarizada. Esta propiedad no es exclusiva
de los carbohidratos pues la presentan todas aquellas sustancias
denominadas ptimamente activas, por tener en su estructura centros
quirales.

Para la medicin de la rotacin ptica los factores importantes a tener en
cuenta son: La longitud de onda de luz polarizada, la cantidad de material
ptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando se usa. Los
cambios en la temperatura ocasionan solo pequeas variaciones en las
medidas de la rotacin.

TEMAS DE CONSULTA

Elabore el preinforme con las siguientes indicaciones:

Frmulas estructurales en proyeccin de FISHER y de HAWORTH
de la glucosa, galactosa, fructosa, ribosa.
Frmula estructural en proyeccin de HAWORTH de la sacarosa.
Breve descripcin de los polisacridos: almidn y glicgeno.
Reacciones de oxidacin de monosacridos reductores, ilustradas
con la estructura en proyeccin de FISHER de la glucosa.
Funciones e importancia biolgica de los carbohidratos.
Fundamentos de polarimetra que debe incluir: diferenciacin entre
luz monocromatica y luz polarizada. Funcionamiento y partes del
polarmetro.
Extraccin y refinamiento del azcar de caa (sacarosa).
Aplicaciones industriales de la celulosa.
Construya las tablas de identificacin y diferenciacin de azucares
(Ver tabla 1)

Tabla N1: Identificacin de monosacridos
Compuesto Formula Reactivo Observaciones Rxn
Qumica

MATERIALES Y
REACTIVOS
16 tubos de ensayo
Una pipeta graduada de 1
ml
Una pipeta graduada de 5
m
Un vaso de precipitados
de 500ml
Una varilla de vidrio
Una gradilla para tubos
de ensayo
Una pinza metlica para
tubo de ensayo
Soporte, aro con nuez,
malla y mechero.
Una esptula
Perlas de vidrio
Alfa-naftol al 10%

cido clorhdrico
concentrado
cido sulfrico
concentrado
Reactivo de Fehling A
Reactivo de Felhing B
Reactivo de Tollens
Reactivo de Seliwanoff
Reactivo de Bial
Lugol
Soluciones acuosas al
1% de: almidn,
glicgeno, sacarosa,
maltosa, glucosa,
galactosa,
fructosa, ribosa,
arabinosa.
Solucin de glucosa al
10%.
Solucin de sacarosa al
10%.
Solucin fructosa al 10%.
Solucin de sacarosa al
10% en cido clorhdrico
0.5M

PROCEDIMIENTO

Realice los ensayos que se describen a continuacin, en tubos de
ensayo LIMPIOS Y SECOS, con las soluciones patrn de los
carbohidratos que se indican en cada caso y la muestra problema.

Ensayo de Molisch:
Soluciones patrn de carbohidratos: ARABINOSA, GLUCOSA,
FRUCTOSA, SACAROSA Y ALMIDN.

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato
y agregue 0.2 mL de -naftol al 10%, mezcle bien y luego adicione
CUIDADOSAMENTE POR LAS PAREDES DEL TUBO, 1 mL de cido
sulfrico concentrado, la formacin de un anillo violeta en la interfase
es prueba positiva para carbohidratos.

Ensayo de Lugo:
Soluciones patrn de carbohidratos: ALMIDN Y GLICGENO.

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y
agregue 0.2 ml de Lugol, mezcle y observe la formacin de los colores
rojo para glicgeno, azul-violeta para almidn como pruebas positivas.

Ensayo de Benedict:
Soluciones patrn de carbohidratos: GLUCOSA, MALTOSA Y
SACAROSA.

agregue 0.1 ml del reactivo de Benedict, caliente al bao mara. La

formacin de un precipitado amarillo o rojizo, es prueba positiva para
carbohidratos reductores.

Ensayo de Barfoed:
Soluciones patrn de carbohidratos: GLUCOSA, MALTOSA Y
SACAROSA.

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato
y agregue 2 ml del reactivo de Barfoed, caliente en bao mara a
ebullicin. La formacin de un precipitado rojo entre 5 y 7 minutos, es
prueba positiva para MONOSACRIDOS REDUCTORES. Si el
precipitado se forma entre 10 y 12 minutos, la prueba es positiva para
DISACRIDOS REDUCTORES.

Ensayo de Seliwanoff:
Soluciones patrn de carbohidratos: FRUCTUOSA Y GLUCOSA.
agregue 2 ml del reactivo de Seliwanoff, caliente en bao mara a
ebullicin por dos minutos. La formacin de una coloracin roja es
prueba positiva para cetosas.

Ensayo de Bial:
Soluciones patrn de carbohidratos: RIBOSA, ARABINOSA Y
GLUCOSA.
agregue 3 ml del reactivo de Bial, caliente en bao mara a ebullicin y
observe. La formacin de una coloracin verdosa es prueba positiva
para pentosas.

Muestra problema
El profesor le asignar una muestra problema para identificar y
clasificar.
En un papel escriba el nmero de la muestra problema, las reacciones
que utiliz y los resultados que obtuvo, diga si el problema
corresponde a: un monosacrido, un disacridos, un polisacrido, un
pentosa, una hexosa una cetosa una aldosa o una combinacin de
alguno de ellos y entrguelo antes de terminar el laboratorio. Use las
indicaciones de la Figura 1 para realizar las pruebas.

PARA EL INFORME
Elabore tablas con los resultados de los ensayos realizados.

Anlisis de los resultados obtenidos en cada ensayo para la muestra
problema, comparando con los resultados obtenidos para las
soluciones patrn de carbohidrato correspondiente.
Con base en el anlisis, caracterizar la sustancia problema; si es
polisacrido, disacrido, monosacrido. En caso de ser disacrido o
monosacrido si es o no reductor. Si se trata de un monosacrido
indicar si es aldopentosa, cetopentosa, aldohexosa o cetohexosa.
Describa el anlisis y las reacciones que sigui para identificar la
muestra problema, si ya conoce el nombre del compuesto problema
discuta los resultaos reportados.

REFERENCIAS

Hart H., Craine L. y Hart. D. Qumica Orgnica. McGraw Hill. Novena
edicin. Espaa. 1997.
McMurry, J. Qumica Orgnica. Quinta edicin, Thomson editores, Mxico,
2001
The Merck Index: an encyclopedia of chemical. Drugs and Biologicals.
Budavari S. Guide for safety in the Chemical Laboratory.
Carey Francis A. Qumica Orgnica Mc Graw Hill , Tercera Edicin .
Espaa. 2000


PRACTICA N 9
RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS

OBJETIVOS:
Identifique algunos lpidos mediante el uso de algunas
propiedades de los lpidos.
Reconozca a los lpidos mediante sus propiedades fisicoqumicas
Identifique cualitativamente a los lpidos mediante tincin con
Sudan II.
Elabore un jabn mediante la reaccin de saponificacin de una
grasa.
Obtenga colesterol a partir de tejido nervioso.
Identifique el colesterol mediante pruebas colorimtricas
cualitativas

FUNDAMENTO
Los lpidos, son un grupo de compuestos qumicamente diversos, solubles
en solventes orgnicos (como cloroformo, metanol o benceno), y casi
insolubles en agua. La mayora de los organismos, los utilizan como
reservorios de molculas fcilmente utilizables para producir energa
(aceites y grasas). Los mamferos, los acumulamos como grasas, y los
peces como ceras; en las plantas se almacenan en forma de aceites
protectores con aromas y sabores caractersticos. Los fosfolpidos y
esteroles constituyen alrededor de la mitad de la masa de las membranas
biolgicas. Entre los lpidos tambin se encuentran cofactores de
enzimas, acarreadores de electrones, pigmentos que absorben luz,
agentes emulsificantes, algunas vitaminas y hormonas, mensajeros
intracelulares y todos los componentes no protecos de las membranas
celulares.
Los lpidos, pueden ser separados fcilmente de otras biomolculas por
extraccin con solventes orgnicos y pueden ser separados por tcnicas
experimentales como la cromatografa de adsorcin, cromatografa de
placa fina y cromatografa de fase reversa. La funcin biolgica ms
importante de losa lpidos es la de formar a las membranas celulares, que
en mayor o menor grado, contienen lpidos en su estructura. En ciertas
membranas, la presencia de lpidos especficos permite realizar funciones
especializadas, como en las clulas nerviosas de los mamferos. La
mayora de las funciones de los lpidos, se deben a sus propiedades de
autoagregacin , que permite tambin su interaccin con otras

biomolculas. De hecho, los lpidos casi nunca se encuentran en estado
libre, generalmente estn unidos a otros compuestos como carbohidratos
(formando glucolpidos) o a protenas (formando lipoprotenas).
Estas importantes biomolculas se clasifican generalmente en: Lpidos
saponificables y no saponificables.
Adems de los anteriores, existen lpidos anfipticos en cuya molcula
existe una regin polar opuesta a otra apolar. Estos lpidos forman las
bicapas lipdicas de las membranas celulares y estabilizan las emulsiones
(liquido disperso en un lquido).

10 Tubos de ensayo
Gradilla
Varillas de vidrio
Mechero parrilla
Vasos de precipitados
Pipetas
Morteros de porcelana limpios y
secos
Esptula
Placa de vidrio
Embudos de vidrio
Papel filtro
Solucin de NaOH al 20%
Solucin de Sudn III
Tinta china roja (*)
ter, cloroformo o acetona
Aceite de oliva (*)
20 gramos de Yeso (*)
50 g de sesos de animal
desmenuzados (*)
Cloroformo
cido sulfrico concentrado
cido actico
Anhdrido actico

(*) PROPORCIONADO POR EL ESTUDIANTE
OJO: TRAER GUANTES Y TAPABOCAS

PROCEDIMIENTO

SAPONIFICACIN
Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico
descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y
cidos grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del
hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o
potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los
triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas)
que dan lugar a la formacin de cidos grasos y glicerina.

Tcnica:
a) Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al
20%.
. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30
minutos.

. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior
clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina
formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una
superior lipdica de aceite inalterado

TINCIN
Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el
colorante Sudn III.

Tcnica:
. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de
aceite.
. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
. Agitar ambos tubos y dejar reposar
. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que
aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el
aceite no estar teido.

SOLUBILIDAD
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella
se dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto
lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin
de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita
sobre el agua.

Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como
el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc.

Tcnica:
. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.
. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente
orgnico,
. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.

. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter
y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor
densidad.

AISLAMIENTO DE COLESTEROL DEL TEJIDO NERVIOSO

Tcnica:
3 gramos de cerebro desmenuzado se tritura cuidadosamente en un
mortero con 6 g de yeso.
La masa espesa obtenida se aplica con ayuda de una esptula sobre la
capsula de porcelana en forma de capa fina y luego llevar a 40C en una
mufla. La masa reseca se separa de la placa con un escarpelo en un
mortero seco y se tritura convirtindola en polvo.
El polvo se traslada a un tuvo de ensayo, se le vierten 6 ml de cloroformo,
se agita cuidadosamente durante 5 ml y se filtra. El filtrado obtenido se
utiliza para las reacciones coloreadas de reconocimiento del colesterol.

REACCIONES COLOREADAS DEL COLESTEROL
El principio del mtodo. Bajo la accin de los agentes deshidratantes el
colesterol se transforma en un hidrocarburo con dobles enlaces
conjugados: el colesterileno, que al interaccionar con el cido sulfrico y
el anhdrido actico, da compuestos complejos intensamente coloreados.
Reacciones semejantes son caractersticas tambin para otros esteroles.

REACCIN CON EL ACIDO SULFRICO.

Reaccin de Schiff: en un tuvo de ensayo seco se vierte 1 ml de extracto
de colesterol en cloroformo y con cuidado, por la pared, se hace deslizar
1ml de cido sulfrico concentrado. En el contacto de los lquidos se
observa la aparicin de un anillo de color rojo.

Reaccin de Salkovsky: En un tubo de ensayo seco se vierte 1ml de
extracto de colesterol en cloroformo y 1ml de cido sulfrico. Los lquidos
se mezclan agitando el tubo de ensayo. Al separarse las capas, el
extracto superior de cloroformo resulta coloreado de rojo y el inferior de
un color rojo amarillento con fluorescencia verde. Si al extracto inferior del
lquido se le aade 1ml de cido actico, aparece una coloracin roja
rosada, mientras que la fluorescencia se mantiene.

REACCIN CON ANHDRIDO ACTICO Y CIDO SULFRICO

Reaccin de Liebermann-Burkhardt: En un tubo de ensayo se vierten 2
ml de extracto de colesterol en cloroformo, se aaden gota a gota 10 ml

de anhdrido actico, 2 gotas de cido sulfrico, y se mezcla todo
cuidadosamente. El lquido adquiere primero una coloracin roja, luego
una violeta, azul y, por ltimo, verde.

PARA EL INFORME
Reportar los resultados de todos y cada uno de los ensayos obtenidos.
Concluir en base a la experiencia adquirida en el laboratorio sobre el
desarrollo de esta prctica si los objetivos se cumplieron.

CUESTIONARIO
Qu son los jabones?
Cmo se pueden obtener los jabones?
Por qu en la saponificacin del aceite la glicerina aparece en la fase
acuosa?
Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica
a qu se debe la diferencia entre ambos resultados.
Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos
minutos de reposo?, Y que ocurre con la de benceno y aceite?

REFERENCIAS

V. Chechetkin, V.I. Voronianski, G.G. Pokusay, Practicas de Bioqumica
del ganado y aves de corral, Editorial Mir-Moscu, 1994, paginas 128-149.
E. Vazquez-Contreras, Bioqumica y Biologoga Molecular en lnea.
Instituto de
Qumica-UNAM.
http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/tipos%20lipidos.html.

Guias Lab. Bioquimica Profesor Domingo

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