Guiadepracticas Biologiacelularymolecular 130923170708 Phpapp02

II CICLO
LIMA - PER

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Biologa Celular y Molecular
Escuela Acadmica Profesional de Farmacia y Bioqumica

Elaborado y revisado por:
Blga. MSc. Juana del Carmen Caldern Snchez
Blga. MSc. Ethel Vania Mallqui Brito

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RECOMENDACIONES GENERALES

Normas bsicas de conducta en el laboratorio

Como todo ambiente de trabajo, el laboratorio tiene una serie de normas, que rige la conducta, deberes y obligaciones
del personal que labora en l y que en una sola palabra lo resumimos como BIOSEGURIDAD; por tal razn, es
responsabilidad del personal, respetar y hacer respetar stas normas en todo momento, a fin de evitar errores en las
investigaciones y/o accidentes. Las normas bsicas que debemos practicar siempre son las siguientes:

1 La hora de entrada tendr 5 minutos como mximo de tolerancia, despus de este tiempo, no se permitir al
acceso al laboratorio
2 Al entrar al laboratorio, el alumno deber ponerse la bata y abotonarla completamente, slo podr quitrsela al
salir de ste y deber recogerse el cabello para as poder efectuar el trabajo de laboratorio.
3 Las mesas debern estar siempre limpias y desocupadas, las mochilas debern ser colocadas en los cajones
debajo de las mesas de trabajo.
4 No comer ni fumar en el laboratorio, no introducirse ningn objeto a la boca.
5 Est PROHIBIDO el uso de telfonos celulares en el laboratorio y de cualquier otro artefacto que distraiga la
atencin del estudiante.
6 Limpiar y desinfectar el rea de trabajo antes y despus de usarla.
7 No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo deber efectuarse en su sitio sentado y en su equipo de
trabajo y hablar slo lo necesario con los compaeros. NO se debe jugar o fomentar el desorden en el laboratorio
8 Das antes de iniciar la prctica lea cuidadosamente que es lo que se va a realizar, si no entiende pregunte al
profesor. Si hay necesidad de llevar material biolgico para la realizacin de la prctica, es necesario conseguirlo
de lo contrario la prctica se suspender para todo el equipo.
9 Est PROHIBIDO absorber o pipetear cualquier tipo de sustancia con la boca. Usar propipetas (bombillas) u otro
dispensador.
10 El uso de guantes y mascarilla, estar restricto al tipo de prctica que se realice.
11 El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deber ser restringido a su uso indispensable. Las
agujas y otros elementos punzantes debern ser descartados en un recipiente resistente. Se debern evitar los
intentos de reintroducir las agujas descartadas en capuchones o de romperlas o doblarlas ya que esta conducta
produce aumento de la posibilidad de accidentes por pinchazos o salpicaduras. No usar tijeras con puntas muy
agudas. Por ningn concepto las agujas sern retapadas. El conjunto aguja-jeringa deber ser descartado
en el recipiente destinado a tal fin.
12 Asegurarse que los insumos, reactivos y soluciones estn debidamente ROTULADOS y que los frascos o
envases no estn deteriorados.
13 Dejar DESCONECTADOS los equipos y CERRADAS las llaves de gas y grifos.
14 Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra.
15 Lvese las manos con agua y jabn antes de salir del laboratorio.
16 Es obligacin de cada equipo entregar todo el material limpio.

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Prctica N 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD

INTRODUCCIN

La bioseguridad se define como un conjunto de normas diseadas para la proteccin del individuo, de la comunidad as
como del medio ambiente contra el contacto accidental con patgenos biolgicos, agentes fsicos o qumicos. El
personal de laboratorio debe cumplir con las normas de bioseguridad y los directivos de la institucin deben cumplir con
brindar las facilidades para que stas sean aplicadas.

OBJETIVO

Conocer las principales normas para proteger la salud de las personas que puedan estar expuestas a riesgos
relacionados con la exposicin a agentes biolgicos, qumicos, fsicos y otros en los laboratorios de ensayos
biomdicos y clnicos.

AGENTES DE RIESGO

Agentes biolgicos; transmitidos por ingestin, inhalacin, inoculacin y por contacto directo a travs de piel o
mucosas.
Agentes fsicos y mecnicos; como las temperaturas extremas, radiaciones ionizantes, contactos elctricos o
conexiones defectuosas y vidrios resquebrajados de recipientes daados.
Agentes qumicos; que pueden ser corrosivos, txicos, carcingenos, inflamables o explosivos.

NIVELES DE CONTENCIN

Cuando las prcticas de laboratorio no son suficientes para controlar los riesgos asociados a un agente o a un
procedimiento de laboratorio particular, es necesario aplicar medidas adicionales. Estas medidas corresponden a los
equipos de seguridad diseados para la proteccin del personal y prcticas de manejo adecuado (barrera primaria),
diseo de la instalacin y caractersticas de la infraestructura de los locales (barrera secundaria).

1. Contencin primaria:

Equipos de proteccin personal.
Tcnicas de laboratorio estndar y normas de higiene personal.
Inmunizacin.
Esterilizacin y desinfeccin de instrumentos y superficies.

2. Contencin secundaria

Se refiere al diseo y construccin de un laboratorio, contribuye a la proteccin del personal de laboratorio. Los
modos de transmisin en el laboratorio pueden ser insidiosos y algunas veces complicados, debido a que los
vehculos y rutas de transmisin difieren de los modos clsicos.

TIPOS DE LABORATORIO CON RELACIN AL NIVEL DE BIOSEGURIDAD (NBS)

NBS 1: Microorganismos con muy pocas probabilidades de causar enfermedad humana o animal, agentes
biolgicos del grupo 1, ejemplo: virus de vegetales, Saccharomyces cerevisiae.
NBS 2: Riesgo individual moderado y riesgo limitado para la comunidad, agentes de riesgo tipo 2, ejemplo:
Staphylococcus epidermidis, Salmonella sp.

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NBS 3: Riesgo individual alto y moderado para la comunidad, agentes de riesgo tipo 3, ejemplo: M. tuberculosis,
Brucella sp, Influenza AN1H1.
NBS 4: Alto riesgo individual como comunitario, agentes peligrosos y exticos. El laboratorio tiene caractersticas
especiales de ingeniera y diseo para evitar la diseminacin de los microorganismos en el medio ambiente.
Agentes biolgicos del grupo 4. Ejemplo: Arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa, Machupo, Ebola,
Hantavirus y el VIH.

CONCEPTOS BSICOS EN BIOSEGURIDAD

LIMPIEZA: Es la eliminacin fsica de sangre, fluidos corporales o cualquier material extrao visible de la piel u
objetos inanimados.

DESINFECCIN: Es la destruccin de la infectividad potencial de un material determinado. Es til con la aplicacin
de desinfectantes sobre superficies, ejemplo: Hipoclorito de sodio 10%, glutaraldehido 2%, cido paractico o fenol
10%. Para la desinfeccin de manos y piel, se utilizan productos menos txicos que los anteriores, ejemplo: alcohol
yodado 2%, clorheximida 1% o etanol al 70%. Puede hacerse tambin por ebullicin.

ESTERILIZACIN: Se define como la ausencia total de microorganismos viables, incluyendo las esporas fngicas
o bacterianas. Se puede lograr por mtodos fsicos como la temperatura: por calor seco (horno) calor hmedo
(autoclave) y; en fro por filtracin y centrifugacin. Las radiaciones mtodos fsicos tiles para la esterilizacin de
plsticos, sondas y alimentos. La esterilizacin por mtodos qumicos se puede hacer con xido de etileno o
perxido de hidrgeno.

PARMETROS DE PROTECCIN RADIOLGICA

RADIACTIVIDAD: Fenmeno que consiste en la emisin de radiaciones que poseen ciertos elementos (ejemplo:
radio, uranio, etc.) los cuales son capaces de atravesar capas metlicas delgadas e ionizar gases. RIESGO

RADIOLGICO: Es la probabilidad de sufrir dao por efecto de las radiaciones provenientes de un material
radiactivo (cobalto 60) o un equipo generador de las mismas (rayos X). Los riesgos radiolgicos, son para nuestros
sentidos impalpables, invisibles, inodoros y no pueden ser detectados sino con la ayuda de aparatos especiales.
Existen dos clases de riesgo radiolgico:

IRRADIACIN: Cuando el cuerpo o parte del cuerpo de un individuo est sometido a las radiaciones emitidas.
Puede ser interna o externa (ms comn).

Proteccin contra irradiacin interna
Depende de las propiedades qumicas de la sustancia incorporada y cuya eliminacin depender del
perodo de semidesintegracin del material. Otra consideracin importante, es la utilizacin de
vestimentas y equipos especiales.

Proteccin contra irradiacin externa
Existen tres parmetros que permiten una mejor proteccin:

a. Tiempo: til si se limita el tiempo de exposicin y si se considera la utilizacin del decaimiento
radiactivo.
b. Distancia: Alejamiento de la fuente radiactiva y uso de telepinzas robots, etc.
c. Blindaje: Proteccin fsica con materiales de plomo, hormign, agua pesada, aluminio etc.

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CONTAMINACIN: Consiste En el contacto fsico directo con material radiactivo. Puede ser externa o interna
(ms comn).

Reglas para evitar la contaminacin por radiacin
No manipular material radiactivo sin guantes.
No pipetear lquidos bajo ninguna circunstancia.
No fumar comer, beber o maquillarse dentro de la zona de riesgo.
No utilizar objetos personales.
Lavarse las manos con frecuencia.
Proveer recipientes reservados para los residuos radiactivos.
No dejar subsistir una contaminacin que pueda ser fcilmente eliminada.

CUESTIONARIO

1. Elaborar una relacin de 20 microorganismos y ubicar el NBS al que pertenecen.

2. Qu es radioterapia y cmo se administra?

3. Qu alimentos actualmente son irradiados y son consumidos por el hombre?.

4. Investigue 5 equipos de proteccin para el personal y 5 equipos de seguridad para un laboratorio, mencione su
uso y/o utilidad

5. Cul es el manejo y disposicin de residuos contaminantes?

Escriba las referencias bibliogrficas.

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Prctica N 2
MICROSCOPA PTICA

INTRODUCCIN

El perfeccionamiento del microscopio ptico ha contribuido a lograr avances significativos en los estudios citolgicos,
como mediciones celulares o cuantificacin de clulas en las muestras.

Con el microscopio ptico podemos ver las clulas y algunas de sus estructuras en virtud de su capacidad para
interaccionar con los colorantes, siendo el poder de resolucin bajo. Sin embargo con el microscopio electrnico,
podemos estudiar las diversas estructuras y su funcin, incluso elementos subcelulares debido a su alto poder de
resolucin.

El microscopio ptico consta de tres sistemas: el mecnico, el ptico y el de iluminacin, cada uno de los cuales
presentan una funcin y cuidados especficos. Al ser el microscopio un aparato de precisin, requiere que se maneje y
cuide de manera muy especial y rigurosa.

OBJETIVOS

1. Valorar la importancia del microscopio como instrumento bsico para el estudio e investigacin en las Ciencias
Biolgicas y afines.
2. Familiarizar al alumno con el microscopio, reconocer sus partes y funcin de cada una de ellas.
3. Adiestrar al alumno con la interpretacin de las microfotografas, calcular sus dimensiones reales.

CONCEPTOS BSICOS

Contraste: Relacin entre la iluminacin mxima y mnima de un objeto.
Poder de resolucin: Capacidad para poder distinguir dos objetos (puntos) como distintos y separados en vez de
manchas borrosas (permite distinguir detalles finos).
Amplificacin: Es la proporcin entre el tamao de la imagen que se ve al microscopio y el tamao real del
objeto.

MATERIALES

Microscopio ptico
Papel impreso de peridico Letra e recortada de algn peridico
Lamina con muestra clnica fijada 10
Lmina portaobjetos y cubreobjetos
Algodn, alcohol, goteros, agua destilada.

CONSIDERACIONES

Se ejercitar al alumno el uso y manejo del microscopio ptico.

1 Manejo del microscopio ptico
2 Conectar el microscopio a una toma de corriente.
3 Prender el microscopio.
4 Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina completamente.
5 Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
6 Comenzar la observacin con objetivo de menor aumento. Si la preparacin es de bacterias emplear el
objetivo de mayor aumento (objetivo de inmersin, ver punto 9).

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7 Para realizar el enfoque:

a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo macromtrico. Esto debe
hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo
en la preparacin pudindose daar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparacin con el
macromtrico y, cuando se observe algo ntido la muestra, girar el micromtrico hasta obtener un
enfoque fino.
8 Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un
poco el micromtrico para lograr el enfoque fino.
9 El empleo del objetivo de inmersin es siempre utilizando aceite de inmersin.

PROCEDIMIENTO I
Identificar en el microscopio compuesto, las partes que se mencionan a continuacin y anotar las funciones de cada
una de ellas:
Sistema ptico: Lente ocular y Lente objetivo
Sistema de iluminacin: Fuente de luz o Espejos, Condensador, Diafragma
Sistema mecnico: Tubo o Brazo, Pinzas o carro, Tornillo micromtrico, Tornillo Macromtrico, Revolver,
Platina, Base o pie

PROCEDIMIENTO II

A. Observacin de la letra e
En un portaobjetos limpio y seco colocar una letra e recortada de alguna impresin, cubrir con una gota de
agua y colocar el cubreobjeto, retirar el exceso de agua con un poco de algodn. Enfocar la muestra
Observar al microscopio, primero con el objetivo de menor aumento (4X 10X) y por ltimo con el objetivo de
(40X).

B. Observacin de la muestra clnica fijada
Colocar en la platina la muestra clnica fijada. Enfocar la muestra
Observar al microscopio, primero con el objetivo de menor aumento (4X 10X) y por ltimo con el objetivo de
(40X).
OBSERVACIONES

Observacin de la letra e

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Observacin de la muestra clnica fijada

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RESPONDA A LAS SIGUIENTES PREGUNTAS

1. En qu posicin se observa la letra e al microscopio? ______________________________________________
2. Mueva la lmina hacia adelante. Hacia dnde se mueve la letra? ______________________________________
3. Mueva la lmina hacia la derecha. Hacia dnde se mueve la letra? _____________________________________

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PARTES DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO

CUESTIONARIO

1. Cules son los sistemas que conforman un microscopio?

2. A qu se llama Lmite de Resolucin?

3. Qu funcin tiene el aceite de inmersin cuando se observa con el objetivo de 100 aumentos?

4. Cul es el fundamento del microscopio electrnico para observar imgenes de mayores aumentos?

Escriba la fuente de informacin.

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Prctica N 3
INTERPRETACIN DE MICROFOTOGRAFAS

Para estimar el tamao de alguna estructura celular en la microfotografa, realice los siguientes pasos:

1 Localice la magnificacin de la microfotografa : M
2 Utilice regla milimetrada y mida la estructura : Y
3 Realice la siguiente operacin:

Magnificacin de microfotografa (X) = 50 000
Medida de la estructura (Y) = 0,3 mm

DESARROLLO

1 micra es la milsima parte de un milmetro y 1 centmetro est formado por 10 milmetros; entonces si
multiplicas 1000 x 10 = 10000 micras , que es lo que hay en 1 centmetro.

Por lo tanto la estructura en estudio mide:

Aplicando conversiones:

PROCEDIMIENTO

Mida las siguientes microfotografas:

1 mm 1 000
X mm 50 000
mm
( )( mm)

50 mm

mm

mm
0,006

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Prctica N 4
DIFERENCIA ENTRE CLULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

INTRODUCCIN

La clula constituye la unidad biolgica de los seres vivos. Representa la mnima estructura necesaria para que se
pueda observar la totalidad de las manifestaciones caractersticas de la vida incluyendo la reproduccin. Por lo tanto la
clula constituye el primer nivel en el que puede llevarse a cabo la unidad de un sistema vivo completo.

Existen clulas procariotas como las bacterias donde el material gentico no se encuentra limitado por una membrana,
no presenta organelas membranosas, presenta una pared celular rgida. Estn adaptadas a vivir en una gran variedad
de ambientes. Para diferenciarlas es importante reconocer la forma y la tcnica de coloracin diferencial de Gram.

Las clulas eucariotas presentan una estructura ms compleja, con ncleo y organelas membranosas.

OBJETIVOS

1. Adquirir la destreza en el uso del microscopio ptico.
2. Aprender las tcnicas de preparacin de frotis, fijacin y coloraciones ms utilizadas en el estudio microscpico de
cultivos bacterianos, raspados o hisopados.
3. Identificar las principales formas bacterianas.
4. Observar e identificar la morfologa de las clulas.

MATERIALES

Microscopio ptico Lminas portaobjetos, cubreobjetos
Azul de metileno Aceite de inmersin
Recipiente para las tinciones Soporte para las preparaciones
Lminas coloreadas Picetas
Mecheros Hisopos, mondadientes
Algodn Alcohol
Goteros, pipetas
Batera de coloracin Gram (cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina)

MATERIAL BIOLGICO

Epitelio bucal Alba dental Biolactol (presentacin farmacolgica).

PROCEDIMIENTO

I. PREPARACIN DE FROTIS
1. Los portaobjetos deben estar limpios y libres de grasa.
2. Marcar cada portaobjeto a ser utilizado.
3. Colocar una gota de agua en el centro de cada portaobjeto.

a. Frotis de mucosa bucal: Con el hisopo frotar suavemente la cavidad bucal y extenderlo en el centro del
portaobjeto.
b. Frotis de sarro dentario: Con el mondadiente obtener sarro dentario y extenderlo en el centro del
portaobjeto.
c. Frotis de cultivo bacteriano: Con la ayuda de un gotero colocar una gota en el centro del portaobjeto y
cuidadosamente extenderlo.

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II. FIJACIN DEL FROTIS
1. Con la ayuda de un mechero fijar al calor.

III. COLORACIN
1. Los frotis con Biolactol y sarro dentario, proceder a realizar la coloracin Gram:
Agregar cantidad suficiente de cristal violeta x 2 trascurrido el tiempo enjuagar con agua y con ayuda de
la pizeta.
Agregar lugol x 2 transcurrido el tiempo eliminar el excedente (NO ENJUAGAR).
Decolorar con alcohol-acetona, tantas veces sea necesario (hasta obtener una muestra libre de
colorante).
Contracolorear con safranina x2 transcurrido el tiempo enjuagar y secar al calor con ayuda del mechero.

2. Frotis con hisopado bucal colorear con azul de metileno enjuagar con agua y secar al calor con ayuda
del mechero.

IV. OBSERVACIN
1. Colocar los portaobjetos en la platina y ubicar las preparaciones con el objetivo de menor aumento 10X.
2. Para la observacin cambiar con el objetivo de 100X agregando una gota de aceite de inmersin.
3. Dibujar lo observado.

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CUESTIONARIO

1. Fundamente la coloracin Gram.

2. Fundamente 5 mtodos de coloracin para la observacin de clula eucariota.

3. Escriba diferencias entre clula procariota y eucariota.

4. Qu estructuras ha podido identificar?. Precise sus respuestas en cada esquema.


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Prctica N 5
PERMEABILIDAD CELULAR FUNDAMENTO

INTRODUCCIN

La prctica se fundamenta que en clulas animales y clulas vegetales, se dan los procesos de intercambio de
solutos y solventes con su medio ambiente a travs de sus membranas asegurando as los procesos de
smosis. Pero, adems de membranas, las clulas vegetales presentan pared celular hacia el lado externo de
la misma Esta pared porosa que brinda sostn y proteccin est formada por las secreciones celulares,
bsicamente carbohidratos, los cuales son los sillares del compuesto orgnico ms abundante en la
naturaleza, la celulosa.

OBJETIVOS

1. Identificar la presencia de pared celular de la clula vegetal y otros componentes con ayuda de ciertos
colorantes.
2. Identificar los eritrocitos humanos.
3. Evidenciar el proceso de smosis con soluciones isotnicas, hipertnicas e hipotnicas en clula vegetal y
animal.

MATERIALES

Lminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos
Hoja de Gilette Solucin de NaCl 0,2%, 0,9% y 5% (100 ml c/u)
Azul de metileno Lugol
Pizetas Goteros
Lancetas Algodn, alcohol, guantes de ltex.

MUESTRA BIOLGICA

Bulbo Allium cepa (cebolla). Glbulos rojos

PROCEDIMIENTO

I. RECONOCIMIENTO CELULAR

1.1. Estructura vegetal
1 Realizar cortes muy finos de la epidermis de cebolla.
2 Colocar la muestra sobre lmina portaobjeto y adicionar una gota de agua.
3 Colocar la laminilla y observar al microscopio 10x y 40x.
4 Finalizada la observacin levantar con cuidado la laminilla y aadir gotas de azul de metileno o
lugol
5 Observar al microscopio 10x y 40x.
6 Dibujar lo observado, especificando sus partes.

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1.2. Eritrocitos
1 Limpiar el pulpejo del dedo de la mano con algodn y alcohol.
2 Con la ayuda de una lanceta introducir en la zona desinfectada.
3 Colocar una gota de sangre en una lmina portaobjeto previamente desengrasada.
4 Observar a 40X.
5 Dibujar lo observado, especificando partes.

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II. PROCESO DE SMOSIS

2.1. Clula vegetal
1 Colocar 3 muestras finas del catfilo de Allium cepa sobre lminas portaobjetos.
2 Agregar varias gotas de las diferentes soluciones de cloruro de sodio a cada muestra (0,2%,
09% y 5%), por separado. ROTULAR LAS MUESTRAS.
3 Colocar laminilla cubreobjetos y observar al microscopio (10x y 40x).
4 Levantar cuidadosamente la laminilla y adicionar 1 gota de azul de metileno. Observar a 10x y
40x.
5 Dibujar lo observado, especificando partes y procesos.

A. Clula vegetal en SOLUCIN ISOTNICA

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B. Clula vegetal en SOLUCIN HIPERTNICA

C. Clula vegetal en SOLUCIN HIPOTNICA

2.2. Eritrocitos
1 Colocar 3 muestras con una gota de sangre sobre lminas portaobjetos.
2 Agregar varias gotas de las diferentes soluciones de cloruro de sodio a cada muestra, por
separado. ROTULAR LAS MUESTRAS.
3 Colocar laminilla cubreobjetos y observar al microscopio (10x y 40x)
4 Dibujar lo observado, especificando partes y procesos.

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A. Eritrocito en SOLUCIN ISOTNICA

B. Eritrocito en SOLUCIN HIPERTNICA

C. Eritrocito en SOLUCIN HIPOTNICA

CUESTIONARIO

1. Qu funcin cumple el azul de metileno en sta prctica?.

2. Describa las diferencias del proceso de permeabilidad en clula animal y vegetal.

3. Por qu los eritrocitos se lisan?.


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Prctica N 6
OBSERVACIN CLULA ANIMAL TEJIDO ADIPOSO

FUNDAMENTO

El tejido adiposo es uno de los tejidos ms abundante, representa alrededor del 15-20% del peso corporal del
hombre y del 20 25% del peso corporal en mujeres. Los adipocitos almacenan energa en forma de
triglicridos. Debido a la baja densidad de estas molculas y su alto valor calrico, el tejido adiposo es muy
eficiente en la funcin de almacenaje de energa.

TEJIDO EPITELIAL

Fundamento
El epitelio es un tejido compuesto por clulas muy prximas entre s, sin sustancia intercelular y es avascular.
Los epitelios recubren todas las superficies libres del organismo, tanto internas como externas. La superficie
externa representa la epidermis, recubre todos los pasajes internos como el tubo digestivo, vas areas y vas
urogenitales. Durante el desarrollo embrionario los epitelios pueden producir prolongaciones en el tejido
conectivo subyacente y formar glndulas, pudiendo dividirse en epitelio de revestimiento y epitelio
glandular.

MATERIALES

Microscopio ptico Centrfuga
Tubos de ensayo Gradilla
Bistur Lminas portaobjetos y laminillas
Formol, sudan III, Azul de metileno, Cristal violeta Pipetas
Pizetas Mecheros
Goteros, alcohol, algodn, guantes de ltex Soporte para preparaciones
Bandeja para coloraciones

PROCEDIMIENTO

I. TEJIDO ADIPOSO
1 Con ayuda de un bistur, cortar una fina capa de tocino, colocarla sobre una lmina portaobjetos y
cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4.
2 Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudn III. Dejar actuar unos .
3 Volver a lavar la preparacin con agua, cubrirla con cubreobjeto y observar al microscopio 10X y 40X.
4 Esquematice los resultados de su observacin que justifique los objetivos especficos planteados.

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II. CLULAS EPITELIALES

2.1. Muestra de orina
1 En un tubo de ensayo colocar aproximadamente 5ml de orina.
2 Centrifugar a 3000 rpm x (contrapesar los tubos en la centrfuga).
3 Eliminar el sobrenadante.
4 Colocar en un portaobjeto una gota del sedimento con la ayuda de un gotero, cubrir con laminilla
5 Observar 10X y 40X.
6 En otro portaobjetos colocar una gota del sedimento y fijar al calor.
7 Colorear con cristal violeta por 4 enjuagar el exceso con la ayuda de la pizeta secar al calor y
enfocar campo a 10X y observar a 100X.
8 Esquematizar sus observaciones, especificar lo observado que justifique los objetivos
planteados.

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2.2. Muestra raspado epitelial
1 Con mucho cuidado realizar un raspado de piel con el bistur y colocarlo sobre un portaobjeto.
2 Colorear con azul de metileno.
3 Cubrir con una laminilla.
4 Enfocar campo a 10X y observar a 100X.
5 Dibujar sus observaciones, especificando lo observado.

CUESTIONARIO

1. Fundamente la aplicacin del sudan III.

2. Describa el tejido adiposo.

3. Qu funcin cumple el cristal violeta en esta prctica?.

4. Escriba la clasificacin del tejido epitelial.


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Prctica N 7
OBSERVACIN MITOCONDRIAS FERMENTACIN

FUNDAMENTO

Frecuentemente se ha definido la respiracin como el intercambio de oxgeno y dixido de carbono entre un
organismo vivo y el medio. Existen procesos en los que no se consumen oxgeno, aunque se libera dixido de
carbono. Estos son los llamados procesos anaerbicos. La fermentacin es uno de ellos. Aquellos procesos en
que hay un consumo de oxigeno son procesos aerbicos.

Sin embargo lo ms caracterstico de la respiracin no es el intercambio de gases, sino la liberacin de energa
que ocurre durante el proceso, anaerbico y aerbico, y de la cual depende, en ltima instancia el
funcionamiento orgnico. Para que esto ocurra el organismo vivo debe utilizar un combustible, un sistema
enzimtico y un sistema de transferencia energtica. El combustible generalmente es el carbohidrato, pero
puede ser tambin una grasa o una protena, en ese orden. El sistema enzimtico est dentro de la clula y el
sistema de transferencia lo constituye los enlaces de alta energa de molculas de tipo nucletido,
principalmente ATP.

OBJETIVOS

Establecer los procesos celulares implicados en la respiracin y reconocer a las mitocondrias.

MATERIALES Y EQUIPOS

Pasas Levadura de pan
Papel filtro Lminas
Laminillas Hisopos
Frascos de vidrio con tapn Tubos de ensayo de 16 X 150 mm
Vaso de precipitado de 100 cc Gradilla para tubos de ensayo
Solucin Azul de Bromotimol Verde de Janus
Microscopio compuesto

PROCEDIMIENTO

A. Proceso de fermentacin
1 1 semana previa a la prctica obtenga un trozado de pasas en agua y macrelo en un frasco con
tapa hermtica. Llvelo el da de la prctica al laboratorio.
2 Prepare el papel filtro con la solucin de azul de Bromotimol, dejndolo secar.
3 Destape el frasco, reconozca el aroma y luego aplique firmemente el papel filtro.
4 Observe y registre el cambio de coloracin del papel.

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B. Observacin de mitocondrias
1 Obtenga una muestra de epitelio de la cavidad bucal con un hisopo.
2 Realice el frotis en la forma usual y deje secar al medio ambiente.
3 Cubra la muestra con verde Janus durante 5 minutos.
4 Elimine el exceso de colorante y deje secar al medio ambiente.
5 Observe al microscopio 10X y 40X, las mitocondrias y descrbalas.
6 Dibuje sus observaciones.

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Cuestionario
1. Explique para que empleamos el indicador azul de Bromotimol, en la experiencia de fermentacin
realizada.

2. Enumere los ejemplos de aplicacin prctica del proceso de fermentacin.

3. Explique el fundamento de emplear el colorante verde de Janus.

Escriba la fuente de informacin

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Prctica N 8
OBSERVACIN CLULA VEGETAL

FUNDAMENTO

Por lo general las clulas animales son translcidas al microscopio ptico debido a su bajo contraste con su
entorno, sin embargo dada su capacidad tintorial con determinados colorantes se pueden apreciar algunas de
sus estructuras como algunas organelas, las cuales segn sus propiedades qumicas, reaccionaran con
algunos colorantes bajo determinadas condiciones. Sin embargo las clulas vegetales si contrastan con su
entorno, debido a la presencia de plastidios que contienen diferentes pigmentos. El plastidio ms conocido es
el CLOROPLASTO con su pigmento CLOROFILA, pero existen otros plastidios conocidos como cromoplastos
los cuales presentan otro tipo de pigmentos.

Los plastidios son orgnulos exclusivos de vegetales, provistos de una doble membrana, y tienen como funcin
el almacn y la sntesis de sustancias.

Pueden ser:

A. Indiferenciados:
a) Proplastos: son el origen de los dems plastidios.
b) Etioplasto: proplastos diferenciados en ausencia de luz.

B. Diferenciados:
a) Cloroplastos: fotosintticamente activos.
b) Cromoplastos: fotosintticamente inactivos o poco activos.
c) Leucoplastos:
Amiloplastos: acumulan almidn.
Oleplastos: acumulan lpidos.
Proteinoplastos: acumulan protenas.

La EPIDERMIS es un tejido formado por una nica capa de clulas unidas entre s, sin dejar espacios
intercelulares. Se encuentra en las hojas, tallo y races de las plantas jvenes. Sus clulas no poseen
cloroplastos y pueden estar engrosadas exteriormente con materiales lipdicos, formando una capa
impermeable llamada cutina. Cuando esto es as, la capa de cutina impide el necesario intercambio de agua y
gases con la atmsfera, por lo que aparecen, especialmente en el envs de las hojas, unas estructuras
denominadas estomas que hacen posible ese intercambio. Los estomas poseen mecanismos que regulan su
apertura y cierre.

OBJETIVOS

1. Observar la morfologa tpica de las clulas vegetales.
2. Observar y distinguir las diversas organelas celulares en clulas vegetales.
3. Observar la presencia de estomas.

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MATERIALES

Microscopio ptico Lminas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos Lugol
Hoja de Gilette Pizeta
Algodn, alcohol

MATERIAL BIOLGICO

Elodea sp. (Planta de acuario). Daucus carota (zanahoria).
Licopersicum esculentum (tomate). Capsicum frutensis (aj).
Solanum tuberosum (papa). Allium ampeloprasum var porrum (poro).

PROCEDIMIENTO

A. Observacin de cloroplastos
1 Tomar una hoja de Elodea sp y colocarlo sobre una lmina portaobjeto con una gota de agua.
2 Cubrir con laminilla.
3 Observar a 10X y 40X.
4 Dibujar lo observado, especificando partes y organelas.

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B. Observacin de cromoplastos

1 Realizar cortes muy finos de las muestras biolgicas
2 Colocar cada corte sobre una gota de agua.
4 Observar a 10X y 40X.
5 Dibujar lo observado.

NOTA: La observacin del tomate es con la pulpa, tomando una pequea porcin y presionarlo con ayuda
de la yema de los dedos sobre una laminilla.

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C. Observacin de leucoplastos
1 Realizar cortes muy finos de la papa.
2 Sobre una gota de agua colocar la muestra.

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6 Levantar cuidadosamente la laminilla y agregar una gota de lugol.

D. Observacin de estomas (poro)
1 Realizar cortes muy finos de la epidermis de la hoja de poro (parte blanca) y colocarla sobre una
lmina portaobjeto.
2 Colocar dos o tres gotas de agua.
3 Tener precaucin que sea una capa incolora y que est perfectamente extendida.
4 Examinar la preparacin al microscopio 10x y 40x.
5 Al igual que el procedimiento anterior colocar una gota de azul de metileno
6 Observar al microscopio 10x y 40x.
7 Esquematizar sus observaciones, especificando partes que justifique los objetivos planteados.

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CUESTIONARIO

1. Qu pigmentos presentan las muestras biolgicas en estudio?. Fundamente su respuesta.

2. Describa la composicin de la clorofila.

3. Qu importancia tienen los amiloplastos?. Fundamente su respuesta.

4. Describa importancia de los estomas. Fundamente su respuesta.


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Prctica N 9
EXTRACCIN Y SEPARACIN CROMATOGRFICA DE PIGMENTOS FOTOSINTTICOS

FUNDAMENTO

La clorofila es el pigmento verde que est presente en las especies vegetales fotosintticas. No se encuentra
difundida en el citoplasma, sino en los cloroplastos. Estos que son de formas variadas, estn constituidos por
una trama de estructura proteica sobre la cual estn fijados los pigmentos fotosintticos, clorofila y pigmentos
accesorios. Estos pigmentos presentan un grado diferente de solubilidad en los disolventes lo que permite su
separacin cuando una solucin de las mismas asciende por capilaridad a travs de una tira de papel poroso
(papel de cromatografa o de filtro) dispuesta verticalmente sobre una pelcula de disolventes orgnicos (por
ejemplo etanol-bencina), ya que las ms solubles se desplazarn a mayor velocidad, pues acompaarn
fcilmente al disolvente a medida que ste asciende. Las menos solubles avanzarn menos en la tira de papel
de filtro. Aparecern, por tanto, varias bandas de diferentes colores que estarn ms o menos alejados de la
disolucin alcohlica segn la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseern diferente
grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolucin.

OBJETIVOS

Extraer los pigmentos fotosintticos y separarlos mediante la tcnica de cromatografa en papel.

MATERIALES Y EQUIPOS

Mortero Embudo
Matraz Papel de filtro (paso rpido y paso lento)
Placa Petri Tubo de ensayo
Gradillas Alcohol 96
Bencina Hojas de espinaca

PROCEDIMIENTO

1 Lavar las hojas de espinacas, retirar las nervaduras y ponerlas en un mortero, junto con el alcohol.
2 Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y el disolvente adquiera un color verde intenso. Filtrar
con un embudo y papel de filtro.
3 Colocar el filtrado en una placa Petri y sobre ella colocar un rectngulo de unos 15 centmetros de ancho
por 10 centmetros de alto doblado en V (papel filtro) para que se mantenga en pie sobre la placa de Petri.
4 Dejar as el montaje y esperar un tiempo breve. Los pigmentos se irn separando segn su adsorcin.

RESULTADOS

Observar en el papel donde se ha efectuado la cromatografa hasta cuatro bandas o zonas (ver figura) que
corresponden a los distintos pigmentos fotosintticos presentes en las hojas. Segn su grado de solubilidad
con los solventes se reconocen estas bandas y en este orden:

1 Clorofila b
2 Clorofila a
3 Xantofila
4 Carotenos

Dibujar en cada caso la placa con los resultados obtenidos.

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CUESTIONARIO

1. Qu es el Rf y como se aplica para la cromatografa en capa fina?

2. Qu otras variantes de esta tcnica pueden emplearse para la separacin de sustancias?

Escribir la fuente de informacin.

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}
Prctica N 10
OBSERVACIN MORFOLGICA DEL NCLEO CELULAR

INTRODUCCIN

Uno de los rasgos distintivos del dominio Eucaria, es la presencia del ncleo, que siendo de diferente tamao y
forma se encuentra rodeado por una envoltura nuclear, encerrando toda LA INFORMACIN GENTICA
contenida en el ADN y gracias a diversos eventos citolgicos moleculares, es capaz de duplicarse y transmitir
una copia exacta a las clulas hijas. Uno de estos eventos moleculares es la mitosis, la cual es un tipo de
reproduccin asexual indirecta en la que se pueden observar las distintas fases conocidas y caractersticas de
este tipo de reproduccin que dura apenas dos horas del ciclo celular completo; tambin la produccin de
gametos es parte importante del desarrollo celular mediante la gametognesis.

Para nuestro estudio hemos decidido tomar como muestra las clulas sanguneas sometidas a una coloracin
especial permiten diferenciar las diferentes formas y tamaos de los leucocitos.

OBJETIVOS

1. Ensayar las tcnicas de coloracin para la observacin microscpica de clulas sanguneas.
2. Observar e identificar la morfologa de las clulas sanguneas.
3. Adiestrar al alumno en las tcnicas hematolgicas.

MATERIALES

Lancetas Algodn
Etanol 96 Metanol
Colorante Wright
Pizetas Lminas portaobjetos
Soporte para coloracin Bandeja para coloracin
Microscopio ptico Aceite de inmersin
Lminas fijadas

MATERIAL BIOLGICO

Muestra de sangre humana

PROCEDIMIENTO

1 Limpiar la yema del dedo de un alumno con algodn y alcohol.
2 Aplicar un piquete con la punta de la lanceta en ngulo recto.
3 Descartar la lanceta.
4 Presionar la yema del dedo colocando una gota de sangre sobre el portaobjeto.
5 Realizar un frotis (pelcula muy delgada) con ayuda de una lmina biselada, en ngulo de 45 y dejar
secar a temperatura ambiente
6 Fijar la muestra con metanol y dejar secar al medio ambiente
7 Colorear con la solucin Wrigth . Enjuagar con agua corriente y dejar secar.
8 Observar al microscopio con el objetivo de inmersin.
9 Dibujar lo observado, especificando morfologa nuclear y tamao aproximado.

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OBSERVACIN MICROSCPICA

1 Al microscopio se vern con un dominio predominante los glbulos rojos, teidos de rojo (enucleados).
2 Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia del ncleo, teido de morado.
Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos, Monocitos, Neutrfilos, Basfilos y Eosinflios.
3 En un frotis sanguneo tambin se puede observar plaquetas (derivan de la fragmentacin de los
megacariocitos precursores).
4 Dibujar lo observado

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CUESTIONARIO

1. Por qu los glbulos rojos del humano no tienen ncleo? Fundamente su respuesta.

2. En qu consiste un hemograma, qu parmetros se toma en cuenta y por qu es importante para el ser
humano?

3. Qu es hematopoyesis? Esquematice.

Escriba la fuente de informacin.

61


62


Prctica N 11
ESTUDIO DEL CARIOTIPO HUMANO

Fundamento
Se denomina cariotipo al conjunto de cromosomas de una especie determinada. Su determinacin se realiza
observando durante la metafase la dotacin cromosmica de una clula y la obtencin de una fotografa de
esta observacin permite investigaciones genticas sobre ese individuo o esa especie.

La dotacin cromosmica normal de la especie humana es de 46,XX para las mujeres y de 46, XY para los
varones. En el cariotipo humano los cromosomas se ordenan de mayor a menor. Hay cromosomas grandes,
medianos y pequeos. Al ordenar los cromosomas se constituyen 7 grupos atendiendo no slo al tamao sino
tambin a la forma de las parejas cromosmicas, dentro del cariotipo humano podemos encontrar cromosomas
metacntricos (tienen los dos brazos aproximadamente iguales en longitud), submetacntricos (con un brazo
ms pequeo que otro) y acrocntricos (con un brazo corto muy pequeo).

Concretamente en el cariotipo humano hay 7 grupos de cromosomas. Dentro de cada grupo vamos a ordenar y
reconocer los cromosomas con la ayuda de un idiograma. Un idiograma es la representacin esquemtica del
tamao, forma y patrn de bandas de todo el complemento cromosmico, los cromosomas se sitan alineados
por el centrmero y con el brazo largo siempre hacia abajo.

Los grupos que comprende el cariotipo humano son los siguientes:

A. Cromosomas grandes
Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacntricos
Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos

B. Cromosomas medianos
Grupo C, (cromosomas 7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas X), submetacntricos
Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15) acrocntricos

C. Cromosomas pequeos
Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacntricos
Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos
Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocntricos Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan
de sus grupos correspondientes y se ponen juntos, al final del cariotipo.

OBJETIVOS

1. Reconocer los cromosomas humanos.
2. Elaborar un cariotipo a partir de una fotografa y saber determinar las anomalas cromosmicas ms
frecuentes.

63


CARIOTIPO HUMANO

PROCEDIMIENTO

1. Coloca en su respectivo par homlogo

64


Los tcnicos de los laboratorios compilan los cariotipos y despus usan una notacin especfica para
caracterizar su cariotipo. Esta notacin incluye el nmero total de cromosomas, los cromosomas de sexo y
algunas cromosomas extras o perdidos. Por ejemplo, 47, XY, +18 indica que el paciente tiene 47 cromosomas,
es masculino y tiene un cromosoma 18 extra. 46, XX es una mujer con un nmero normal de cromosomas. 47,
XXY es un paciente con un cromosoma de sexo extra.

En la siguiente tabla aparece informacin sobre alteraciones cromosmicas ms frecuentes en la especie
humana.

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Cariotipo Paciente 1

Turner

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CARIOTIPO 1

Nmero de cromosomas : ____________________
Sexo : ____________________
Cariotipo del individuo : ____________________
Tipo de desorden :____________________

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Paciente 2

Tri 21

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CARIOTIPO 1

Nmero de cromosomas : ____________________
Sexo : ____________________
Cariotipo del individuo : ____________________
Tipo de desorden :____________________

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ANEXOS

COMPOSICIN DE COLORANTES Y SUSTANCIAS

1. Alcohol-cido: decolorante para tincin
Ziehl Neelsen
cido clorhdrico concentrado 3 ml
Etanol 95% 97 ml
2. Lugol: solucin de yodo para tincin Gram
Yodo 1g Yoduro potsico 2 gs
Agua destilada 100 ml
3. Azul de metileno: colorante de contraste
Azul de metileno 1 g
4. Safranina saturada
Safranina 2,5gs.
Alcohol etlico 100ml
5. Cristal violeta: para tincin Gram y tincin
simple
Cristal violeta 0,5 g
6. Wright solucin stock
Clorhidrato de azul de metileno 9 gs
Carbonato de sodio al 5% 100 ml
Eosina 1g Agua destilada 150 ml
7. Sudan III
Sudan III 3 g
Alcohol etlico 100 ml

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Watson, J. (2008). Molecular Bilogy of the Gene. Espaa: Mdica Panamericana. (Quinta edicin).

2. Casco V. et al. Compendio de Biologa Celular y Molecular 2009. Hallado en:
http://uader.edu.ar/fcvs/biblioteca/info_interes/compendio_2009.pdf
Acceso enero 2012.

3. Alberts, B. (2006). Introduccin a la Biologa Celular. Espaa: Mdica Panamericana. (Segunda edicin).

4. Karp, G (2005). Biologa Celular y Molecular. Mxico: Mc. Graw Hill. (Cuarta edicin).

5. Luque, J. (2001). Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica. Harcourt.

6. De Robertis, E. (2000). Biologa Celular y Molecular. Argentina: El Ateneo.

7. Berkaloff, A. (1983). Biologa y Fisiologa Celular. Espaa: Omega.

8. Productos qumicos. Hallado en:
http://chemicalland21.com/specialtychem/finechem/sudan%20iii.htm.
Acceso enero 2012.

9. Biologa Celular y Molecular. Hallado en:
http://biociencias.bq.uam.es/master_biologia_molecular_celular/.
Acceso enero 2012.

10. Manual de Biologa Celular y Molecular. Hallado en:
http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/.
Acceso enero 2012.

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