Mtodos de diagnstico en parasitologa

Parasitologa, 30 Noviembre
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Existe una gran diversidad de mtodos de diagnstico en parasitologa, pero daremos mayor
nfasis a aquellos que se utilizan en nuestro pas. Podemos distinguir dos tipos de mtodos:
- Los mtodos de rutina que se aplican diariamente en laboratorios qumicos.
- Los que se aplican bajo ciertas circunstancias pues son mtodos ms especficos. Por
ejemplo se realizan frente a la sospecha de alguna enfermedad parasitaria.
Cuando se solicita un examen al laboratorio de parasitologa?
Cuando exista evidencia en un paciente (sintomatologa) o algn tipo de lesin que haga
sospechar de una infeccin parasitaria. Pero como ya hemos visto, las lesiones o sintomatologa no
son tpicas ni especficas del dao de un determinado parasito, sino que responden a evidencias
relacionadas con otras enfermedades (como por ejemplo la diarrea que puede ser provocada por
parsitos pero que tambin es el resultado de bacterias u otras patologas). Por lo tanto, a pesar
de la sospecha la nica forma de confirmar la presencia de parsitos es en laboratorio.
Procedimiento.
Existe una sospecha con evidencia de contagio con parasito. Se
solicitan exmenes pertinentes al Laboratorio Clnico.
Debe cumplir con exigencias para su buen funcionamiento. Al
paciente se le practica algn tipo de examen. Para ello se le puede
pedir algunas muestra (como deposiciones, orina, sangre)
dependiendo de la infeccin que se este sospechando.
El diagnostico se informa lo que se observ en la muestra. Los
resultados llegan al medico tratante. Ej: se observan quistes de
Entamoeba histoltica.
El medico tratante es quien realiza el tratamiento contra el agente
que fue detectado en el laboratorio. Ej: el tratamiento se realizar
contra Entamoeba histoltica.
El tratamiento debe ser controlado para ver si fue efectivo. El
control se hace a nivel de paciente donde se ve si persiste la
sintomatologa y a nivel de laboratorio (exmenes) para ver si
persiste la infeccin.
En el tratamiento de las infecciones parasitarias se utilizan diversos frmacos, hay algunos que son
exclusivos contra un tipo de parasito. La mayora de las infecciones parasitarias pueden tratarse
con frmacos pero en algunos casos es necesario aplicar tcnicas quirrgicas para erradicar la
infeccin parasitaria.

Evidencia
Laboratorio Clnico
Diagnostico de Certeza
Tratamiento
Control del
Tratamiento
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Observamos un quiste Hidatdico que es provocada por un estado larvario de aspecto
vesicular lleno de lquido. Puede alcanzar un tamao cercano a una pelota de tenis (de 1-
10cm de dimetro). Este quiste fue extirpado del cerebro de una persona mediante
intervencin quirrgica.
El control de las infecciones depende del tipo de parasito. Por ejemplo en la infeccin de un
gusano nematodo llamado piduye (comnmente) el control hay que hacerlo siete das despus de
haber finalizado el tratamiento. En la teniasis el control se hace a los tres meses.
Si luego del control la sintomatologa persiste, se
deber modificar el tratamiento ya que puede
deberse a que es parasito bajo ciertas
circunstancias es mas resistente.
En muy importante realizar el control de una
infeccin parasitaria ya que el parasito podra
continuar en el organismo pero sin manifestar
sntomas. Sin embargo, los controles
habitualmente no se realizan (o sea se da el
tratamiento y fin, no se verifica la eliminacin del
parasito).













Mtodos de diagnostico
1) Mtodo directo: se buscan elementos del parasito. Observacin de estadios de desarrollo
del parasito (quistes, huevos, etc.) o sus componentes (antgenos especficos, DNA)
Observacin de algunos de los estadios de desarrollo de los parsitos. Por ejemplo:
quistes, trofozoitos, larvas, huevos, etc.
Mtodos
directos
Examen
Macroscpico
Examen
Microscpico
ojo desnudo (taxn rango superior)
Microscpico (taxn rango
inferior gnero, especie)
Muestras
Heces
Sangre
Orina
Flujo vaginal
Biopsias
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Bsqueda de antgenos parasitarios, ya que los antgenos son producto de los parsitos. Se
encuentran en excrementos, sangre o en otros lquidos biolgicos. El sistema inmune
responde a los antgenos que libera el parasito a travs de la formacin de anticuerpos.
Deteccin de DNA parasitario.
Pueden ser macroscpico o microscpico.

2) Mtodos indirectos: Evidencia indirecta de la presencia de parsitos (anticuerpos)
(especificidad de los Ag).
Muestras
Sangre: podemos buscar malaria.
Orina: encontramos Trichomonas vaginalis.
Biopsia: se busca en cortes histolgicos la presencia de parsitos.
Microscopia de luz: para parsitos muy pequeos. Puede ser un examen directo o por
concentracin.
En el caso Trypanosoma cruzi se extrae una gota de sangre
(del dedo) se va a un portaobjeto y se observa al
microscopio. Este seria un examen microscpico directo.
El examen directo se puede realizar sobre una muestra
fresca o sobre ya fijada (el parasito muere pero mantiene
su estructura).
En la muestra los parsitos se pueden concentrar:
Por ejemplo por centrifugacin
Por el mtodo de sedimentacin: concentracin por decantacin (separacin por
diferencia de densidades) en un medio lquido o centrifugacin. Los elementos se
concentran en el sedimento
Mtodos de flotacin: utilizan soluciones de mayor densidad que los estadios parasitarios,
lo que permite que floten y se recojan en la superficie del lquido.
En chile se utiliza:
Mtodo de telemann modificado: permite detectar
huevos y larvas de parsitos, quistes. La muestra es
tamizada, se le agrega ter (elimina la grasa de los
excrementos), se centrifuga y se obtiene un
sedimento. Se realizan 4 preparaciones teidas (a
base de lugol, formalina y)

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Mtodo de sedimentacin fenol-alcohol-formalina o Burrows o PAF: tiene como ventaja
que detecta los estados de trofozoitos, adems de detectar quistes y larvas. Las muestras
del paciente (excremento) que vienen en el fijador se homogenizan, se tamizan y se
centrifugan. Se obtiene un sedimento del cual se hacen dos preparados. A lo que queda de
sedimento se le agrega ter (limpia las grasas que hay en los excrementos) y se vuelve a
centrifugar, del sedimento que queda se realizan otras dos preparaciones. Es decir, en
total se observaran 4 preparaciones.
Mtodo de sedimentacin pida en copa cnica: es de uso especifico
Mtodos de flotacin de uso especfico



Requisitos para la recoleccin de muestra de Heces: son
muestras frescas (recin emitidas) que se colocan en el lquido
fijador. Debe ser fresca la que se pone en el fijador porque los
trofozoitos podran morirse a temperatura ambiental. La
cantidad de muestra debera ser de 1-5gr y luego agregar
lquido fijador con csp llenar el frasquito. No importa que el
frasquito sea estril porque no se buscan bacterias. La
muestra puede ser recolectada en cualquier hora del da.



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Test de Graham
Es un test especfico para los piduyes. Son nematodos de 1cm de largo, vive en el intestino grueso.
Las hembras durante la noche migran hacia el ano y depositan sus huevos que quedan adheridos a
la piel perianal. La tcnica consiste en aplicar en la regin perianal una cinta adhesiva en la
maana (antes de lavarse). La cinta adhesiva se pega en el portaobjeto y se examina.

Exmenes seriados
Es la aplicacin simultnea de uno o ms mtodos en dos o ms muestras clnicas de un paciente
recolectada en diferentes periodos de tiempo (cada cierto nmero de horas, cada cierto nmero
de das, etc). Por ejemplo, recolectamos una mezcla da por medio (lunes, mircoles, viernes) para
tener 3 muestras. Algunos pueden ser consecutivos (5 das, 10 das, etc).
El examen seriado permite determinar si los
parsitos estn disminuyendo o se estn
incrementando (durante el tratamiento). Por
ejemplo en intervalos de 15 das, obtenemos
datos de 256 y 1000 lo que significa que el
parasito esta multiplicndose activamente.
En toxoplasmosis es importante hacer examen
seriado porque el en algunas fases el parasito esta
enquistado y no ocasiona dao.

Que ocurre si luego de un control, el medico examina al paciente y este muestra sintomatologa, sin embargo el
examen (de control) informa que no hay presencia de parsito?
Se podra pensar que la sintomatologa oriento hacia un mal diagnostico, pero este no es el ya que
aqu estamos hablando de control (es decir, el laboratorio clnico ya haba afirmado la presencia
de parasito y luego el paciente fue sometido a tratamiento). Entonces lo que esta ocurriendo es
que el examen que se esta realizando solo busca elementos del parasito (por ejemplo la bsqueda
de huevos), entonces dependiendo de las etapas y caractersticas del parasito, podra ocurrir que
no se estn detectando los elementos del parasito. Sin embargo, el parasito contina en el
organismo y hay que buscar otros mtodos o exmenes para dar con su paradero.
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Por ejemplo, si un paciente tiene sntomas que hacen pensar que se trata de piduyes se le realiza
un examen para ver huevos de piduyes. Ahora, el examen puede informar que no hay presencia de
huevos, por lo tanto tenderamos a pensar que no hay presencia de parsitos. Sin embargo, el
paciente contina con sntomas. Lo anterior, puede ser causado porque solo las hembras
depositan huevos en cambio los machos no. Por lo tanto la infeccin esta siendo provocado por un
piduye macho y habra que identificarlo con otro tipo de examen.
Nomenclatura
La organizacin mundial de la salud recomienda que las infecciones parasitarias tengan una
terminacin de iasis. Esta terminacin se agrega el nombre del taxn ej: amebiasis. Sin embargo la
federacin mundial de parasitlogos recomienza la terminacin iosis, ej: amebiosis, teniosis. Aun
no se ponen de acuerdo, por lo tanto deberan buscar las parasitologas por ambos nombres.
Mtodos parasitolgicos aplicados en laboratorios
Este es un estudio que se hizo en EE.UU el 2004 en 455 laboratorios. En un 58% los laboratorios
usan mtodos de concentracin para el diagnostico de parsitos intestinales. 35% aplica serologa
y el 1% aplica tcnicas moleculares.
De ellos el 41% mtodos de tincin, 36% hace preparaciones frescas antes del mtodo de
concentracin (que es efectiva cuando el laboratorio esta dentro del mismo hospital).




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En chile, ac tenemos 433 laboratorios. El 51% aplica el mtodo de Barrow, o mtodo de PAF; el
17% aplica el mtodo de Teleman, 19% aplica el mtodo de Ziehl Neelsen y otros no dan
informacin sobre qu mtodos aplican en el diagnostico.
Ventajas de la microscopa de heces:
Confirmacin del diagnostico.
Sensible en la mayora de las infecciones (recoleccin apropiada y N de muestra)
Especifico.
Procedimiento simple.
Econmico.
Las tcnicas Moleculares, tienen un mayor costo pero, son altamente sensibles y especificas.
Requisitos para un laboratorio de Microscopia de heces.
Entrenamiento avanzado en Microscopa de heces, la persona que hace los diagnsticos
debe tener un conocimiento adecuado.
El laboratorio debe tener un control interno y externo de calidad.
Recoleccin.
Procesamiento.
Reactivos.
Registro e informe de resultados.
Bioseguridad.
De repente los exmenes pueden dar todos negativos, la persona que prepara los reactivos, sino
prepara adecuadamente los fijadores, no habr buenos resultados en el diagnostico. El laboratorio
debe contar con bibliotecas parasitarias, para tenerlos como referencia, porque hay algunos
parsitos que no son frecuentes, este material de referencia consiste en:
Heces con estadios parasitarios.
Preparaciones permanentes de trofozotos y quistes.
Preparacin de helmintos y artrpodos (adultos y larvas).
Cortes de tejidos con parsitos.
Otros requisitos
Tener instrumentos adecuados (microscopio, escala micromtrica, centrfugas, manuales,
atlas, textos, etc.)
Reactivos de buena calidad.
Mtodos estandarizados.
Educacin contina del personal de laboratorio.

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Resumen.













Con respecto al rendimiento del mtodo del PAF y el de Teleman Modificado (MTM); en
Entamoeba histolytica, un 100% de los trofozotos fueron diagnosticados por el mtodo del PAF
(de un total de 250 muestras analizadas) mientras que el mtodo de Teleman tuvo un muy bajo
rendimiento.
En el mtodo del PAF, hay una fase A y una fase B. En la fase A, se detecta mayor cantidad de
trofozotos; y en la fase B, se detectan una mayor cantidad de quistes y tambin de huevos. Por
eso es necesario hacer las dos fases.
En el diagnstico de E. vermicularis (tcnica de Graham), se pone una cinta adhesiva sobre un
porta objeto, se despega y se aplica en los mrgenes del ano? Y luego se vuelve a pegar y se lleva
al laboratorio. Entonces a alguien se le ocurri, que si uno levanta la cinta adhesiva y agrega una
gota de tolueno, la preparacin queda ms limpia y es ms fcil detectar los huevos; sin embargo
no es recomendable debido a la toxicidad del tolueno.


LABORATORIO.
Recoleccin de muestras.
Transporte de muestras.
Nmero de muestras.
Mtodos de concentracin.
Entrenamiento contino.
Control de calidad
(interno/externo).
Recursos instrumentales
(micrmetro) e insumos de
laboratorio.
Bioseguridad.
Resultados insuficientes.
Mdico.
Apata hacia los informes de
laboratorio.
Tratamientos empricos, es decir,
hacer tratamientos sin los exmenes
correspondientes.
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Recoleccin de muestras en el diagnstico de Malaria.
En el diagnstico de malaria es importante saber cuntas muestras hay que analizar. Un paciente
con malaria, es un paciente de urgencia, debe ser inmediatamente hospitalizado e
inmediatamente debe iniciarse la bsqueda del parsito para hacer el tratamiento lo antes
posible. Entonces, ese paciente que se ingresa se le debe tomar una muestra y hacer dos frotis de
sangre teido y, adems hacer dos gotas gruesas. Esto se colecta cada 6 u 8 horas por 3 das, y
esto se va examinando para buscar los parsitos de la malaria.
Cuando se inicia el tratamiento, hay que repetir esto a las 24, 48 y 72 horas, y eso permite ver si el
tratamiento est siendo efectivo, de lo contrario se debe cambiar el medicamento ya que ste, no
est siendo efectivo.
Cmo se mide la cantidad de parsitos? Para ello, se cuenta un cierto nmero de glbulos rojos,
500 a 2000 glbulos rojos, y se ve cuntos de ellos estn parasitados y cuantos no estn
parasitados; por ejemplo, si cuentas 500 y tienes 100 glbulos parasitados, haces la divisin y lo
multiplicas por 100 para sacar el porcentaje y se va viendo si ste disminuye o no en el transcurso
del tiempo.
Inmunodiagnstico:
Se aplica en el suero, plasma, LCR, saliva.
Se buscan anticuerpos, antgenos (mtodos indirectos) se utiliza cuando el parasito esta en algn
tejido donde es difcil obtener una muestra; por ejemplo, un parasito que se encuentra en el
cerebro, en el hgado, vas biliares, etc. Para esto la tcnica de Elisa es bastante buena, ya que es
muy especifica
Si se encuentra una prueba serolgica positiva, significa que el paciente realmente est infectado
y, el mdico tratante debe relacionarlo con los sntomas del paciente para iniciar el tratamiento
correcto.
Anticuerpos, antgenos.
Clulas sensibilizadas, como linfocitos.
Complejos Ag/Ac.
Molculas efectoras: citoquinas y complemento.
En Chile, alrededor de 40 especies endoparsitos ms frecuentes, un 17,5 % se diagnostica con el
mtodo de serologa; un 65% por mtodos directos, como la microscopa; y otro 17,5% se
diagnostica combinando serologa y los mtodos directos
Sensibilidad.
Proporcin de exmenes verdaderamente positivos que son correctamente identificados por un
prueba de diagnostico.
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Especificidad: proporcin de exmenes verdaderamente negativos que son correctamente
identificados por una prueba diagnstica.
Inmunoelectrotransferencia.
1. Confirma resultados positivos o dudosos de la prueba de Elisa.
2. Determina el o los antgenos especficos contra el cual est dirigido el o los anticuerpos.
Electroforesis en gel.
Transferencia a papel de nitrocelulosa.
Reaccin con suero problema.
Requisitos en un mtodo de diagnostico de laboratorio.
Bajo costo.
Alta sensibilidad.
Alta especifidad.
Mayor rapidez.
Alta disponibilidad.