Ciclo de Krebs

FACULTAD DE CIENCIA E
INGENIERA EN ALIMENTOS
CARRERA DE INGENIERA
BIOQUMICA

BIOQUMICA II
Ing. CECILIA CARPIO
Catabolismo de protenas,
grasas y glcidos en las
tres etapas de la
respiracin celular
Visin general del
metabolismo oxidativo de
combustibles
NOMBRES
ALTERNATIVOS
Ciclo de Krebs
Ciclo del cido
ctrico
Ciclo del cido
tricarboxlico.
Rasgos generales del Ciclo de Krebs
Va metablica circular considerada el centro del
metabolismo celular.
El oxalacetato consumido en la primera etapa es
regenerado en la ltima etapa.
En los eucariotas todas las enzimas del Ciclo
estn en la mitocondria.
Los tomos de C de los 2 CO
2
produced en una
ronda del Ciclo no son los que ingresaron al Ciclo
como acetilo, estos salen del Ciclo en rondas
posteriores.
Algunos intermediarios son precursores de
otros compuestos.
MITOCONDRIA
Es un organelo de forma
ovalada, generalmente
de 2 m de largo y 0.5 m
de dimetro (del tamao
de una bacteria).
CICLO DE KREBS
Descarboxilacin oxidativa del piruvato
COMPLEJO MULTIENZIMTICO
Son grupos de enzimas asociadas no
covalentemente que catalizan dos o ms pasos
secuenciales en una va metablica. Estos
sistemas tienen las siguientes ventajas:
Se minimiza la distancia que tiene que difundir
el S entre los sitios activos y se incrementa la v
de reaccin.
Al canalizarse los intermediarios metablicos
entre enzimas sucesivas de la ruta reduce la
oportunidad de que stos reaccionen con otras
molculas (minimizar las reacciones laterales).
Las enzimas del complejo pueden ser
reguladas coordinadamente.


ENZIMAS Y COFACTORES DE LA
Descarboxilacin oxidativa del piruvato
E1: piruvato deshidrogenasa
E2: dihidrolipoil transacetilasa
E3: dihidrolipoil deshidrogenasa
COFACTORES
TPP
FAD
NAD
CoA
Lipoato
COFACTORES DE LA DESCARBOXILACIN
OXIDATIVA DEL PIRUVATO
1. TPP: contiene la vitamina tiamina (Vit B1).
COFACTORES DE LA DESCARBOXILACIN
OXIDATIVA DEL PIRUVATO
2. FAD: contiene la vitamina riboflavina (Vit. B2)
COFACTORES DE LA DESCARBOXILACIN
OXIDATIVA DEL PIRUVATO
3. NAD: contiene la nicotinamida (Vit B3)
COFACTORES DE LA DESCARBOXILACIN
OXIDATIVA DEL PIRUVATO
4. CoA: contiene el pantotenato (Vit B5)
COFACTORES DE LA DESCARBOXILACIN
OXIDATIVA DEL PIRUVATO
5. Lipoato: cido lipoico
Etapas para la descarboxilacin oxidativa del
piruvato
1. Eliminacin del C-1 del piruvato como CO
2
con formacin del
derivado hidroxietilo del TTP unido a E
1
.
2. Oxidacin del grupo hidroxietilo a acetato (tambin catalizado por
E
1
). Los dos e
-
producidos en la oxidacin reducen el disulfuro
S-S- del grupo lipoilo de E
2
originando 2 grupos tiol (SH).
El acetato se esterifica con uno de los grupos SH del lipoilo.
3. A continuacin el acetato se transesterifica con CoA y genera el
acetil-CoA.
4. Las dems reacciones catalizadas por E
3
del complejo, pasos (4)
y (5), son transferencias electrnicas que regeneran la forma
oxidada (disulfuro) del lipoilo de E
2
.
Los e
-
extraidos del grupo hidroxietilo formado a partir del
piruvato pasan al NAD
+
a travs del FAD.

Proceso de descarboxilacin oxidativa
del piruvato por el complejo de la
piruvato deshidrogenasa
CICLO DE KREBS
CICLO DE KREBS
Ciclo de Krebs (Resumen)
1. Condensacin: formacin de una molcula de 6 carbonos, el
citrato, mediante la reaccin entre oxaloacetato y acetil-CoA.
2. Deshidratacin e hidratacin: transformacin del citrato en
isocitrato .
3. Descarboxilacin oxidativa: deshidrogenacin del isocitrato y
eliminacin del primer CO
2
para formar -cetoglutarato de 5
carbonos (a travs del intermediario oxoglutarato).
4. Descarboxilacin oxidativa: eliminacin de una segunda
molcula de CO
2
para producir succinil-CoA, molcula de 4
tomos de C.
5. Fosforilacin a nivel de sustrato: formacin de GTP,
eliminacin de Co-A para generar solo succinato.
6. El succinato es convertido en oxaloacetato mediante una
secuencia de tres reacciones enzimticas: a) oxidacin de
succinato a fumarato por deshidrogenacin, b) hidratacin
del fumarato para obtener malato y c) deshidratacin del
Ciclo de Krebs (Resumen)
6. El succinato es convertido en oxaloacetato mediante una
secuencia de tres reacciones enzimticas:
a) oxidacin de succinato a fumarato por deshidrogenacin,
b) hidratacin del fumarato para obtener malato y
c) deshidrogenacin del malato con formacin de
oxaloacetato.


CICLO DE KREBS
1. Formacin del citrato
Enzima que
cataliza
condensaciones
sin emplear ATP
CICLO DE KREBS
2. Formacin de isocitrato va cis-aconitato
CICLO DE KREBS
3. Descarboxilacin oxidativa: oxidacin del
isocitrato a CO
2
y -cetoglutarato
CICLO DE KREBS
4. Descarboxilacin oxidativa: oxidacin del
-cetoglutarato a succinil-CoA y CO
2

CICLO DE KREBS
5. Convercin de succinil-CoA en succinato
con fosforilacin a nivel de sustrato
CICLO DE KREBS
6. Deshidrogenacin para la oxidacin de
succinato a fumarato
CICLO DE KREBS
7. Hidratacin
de fumarato a
malato
CICLO DE KREBS
8. Oxidacin de malato a oxalacetato por
deshidrogenacin
Coservacin de la energa liberada en la
oxidacin del acetil-CoA
Los dos tomos de C que ingresaron al Ciclo salen
como CO
2
luego de la oxidacin del isocitrato y del
-cetoglutarato. La energa liberada en este proceso
se conserva:
a. Reduciendo tres NAD
+
b. Reduciendo un FAD
c. Produciendo un GTP ATP (son interconvertibles).
El ciclo genera directamente slo un ATP por vuelta
pero el flujo de e
-
hacia la cadena respiratoria va
NADH y FADH
2
permiten la formacin de 2.5 y 1.5
moles de ATP
,
respectivamente en el paso de los
electrones al oxgeno.

CICLO DE KREBS
Productos de una vuelta del ciclo del cido ctrico
ROLES DEL CICLO DE KREBS
El papel del ciclo del cido ctrico en el
metabolismo no se reduce a la oxidacin del
acetato procedente del catabolismo de glcidos,
cidos grasos y aminocidos, sino que
proporciona precursores para numerosas vas
biosintticas.
Intermediarios biosintticos del ciclo del cido
ctrico
En aerobios el ciclo es una va anfiblica: sirve para
procesos catablicos y anablicos.
Catabolismo: oxidacin de glcidos, cidos grasos y
amino cidos.
Anabolismo: precursores para biosntesis.
Oxalacetato y -cetoglutarato: son precursores del
aspartato y glutamato, respectivamente por
transaminacin; y a partir de estos AA se forman otros
AA y nucletidos de pirimidina (Asp) y purina (Glu).
En el caso del Asp se originan la Asn y las pirimidinas
y a partir del Glu se forman la Gln, Pro y Arg as como
las purinas.
Intermediarios biosintticos del ciclo del
cido ctrico
El Oxaloacetato puede tambin producir Glucosa
(gluconeognesis) va PEP y otros AA como la Gly,
Ser, Cys, Phe, Tyr y Trp.
CICLO DE KREBS
Papel del ciclo del cido ctrico en el anabolismo
Intermediarios biosintticos del ciclo del
cido ctrico
Succinil CoA: es el intermediario para la sntesis del
anillo de porfirina de los grupos hemo que transportan
O
2
en la hemoglobina y mioglobina y transportan
electrones en los citocromos.
Citrato (m.o.): tiene mltiples aplicaciones
comerciales y es el precursor de cidos grasos y
esteroles.
Hemo
Reacciones anaplerticas (reposicin).
Todas estas reacciones convierten piruvato o
fosfoenolpiruvato en oxalacetato o malato cuando el
ciclo carece de oxalacetato u otro intermediario.
La carboxilacin del piruvato requiere ATP y de la
piruvato carboxilasa, enzima alostrica activada por
Acetil CoA, o del enzima mlico; y para producir PEP se
necesita de la PEP carboxiquinasa o de la carboxilasa
activada por F1,6 bisfosfato.
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
Est regulado a 2 niveles:
1. Conversin del piruvato en acetil-CoA, la reaccin
del Complejo de la piruvato deshidrogenasa.
2. La entrada del acetil-CoA en el ciclo, la reaccin
de la citrato sintasa.
Tambin est regulado:
a nivel de las reacciones de la isocitrato deshidrogenasa y
la -cetoglutarato deshidrogenasa, y
por la disponibilidad de intermediarios de otras vas que
producen acetil-CoA como la oxidacin de cidos grasos y
ciertos aminocidos.
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
El complejo de la piruvato deshidrogenasa est
regulado por: mecanismos alostricos
(inhibicin por producto) y covalentes.
En mamferos es inhibida por acetil-CoA y NADH,
los productos de la reaccin catalizada por el
complejo y por ATP.
La inhibicin alostrica de la oxidacin del
piruvato se incrementa por la disponibilidad de
cidos grasos de cadena larga.
El ciclo se activa mediante el AMP, CoA y NAD
+
.
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
En mamferos la regulacin alostrica del
complejo de la PDH se complementa por
modificacin covalente de 2 protenas:
Es inhibido por fosforilacin reversible
de un residuo de Ser en una de las 2
subunidades de E1 por una quinasa,
activada alostricamente por ATP.
Es activado por hidrlisis del fosforilo de
E1, catalizada por una fosfoproten
fosfatasa.
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
En eucariotas, la E1 del complejo de la piruvato
deshidrogenasa es inactivada por la fosforilacin
especfica de uno de los residuos de Ser catalizada por la
piruvato deshidrogenasa quinasa y se reactiva por
hidrlisis del grupo fosforilo aadido a E1 mediante la
accin de la piruvato deshidrogenasa fosfatasa.
Activada por insulina
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS EN
PLANTAS
Complejo de la piruvato deshidrogenasa
(mecanismos alostricos y covalentes)
En plantas el complejo est localizado en la
matriz mitocondrial y en los plstidos:
o es inhibido por NADH y acetil-CoA (productos
del complejo).
o La enzima mitocondrial tambin est regulada
por fosforilacin reversible (piruvato inhibe la
quinasa y el NH
4
la activa).
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
Complejo de la piruvato deshidrogenasa
en E. coli (mecanismos alostricos)
El complejo de la PDH en esta bacteria est
bajo regulacin alostrica de forma similar
a la enzima de los mamferos, pero no
parece estar regulado por fosforilacin.
CICLO DE KREBS
Regulacin del flujo de metabolitos a travs del ciclo
REGULACIN DEL CICLO DE KREBS
Regulacin en sus etapas exergnicas
(citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y
-cetoglutarato deshidrogenasa)
Factores que regulan la velocidad:
Disponibilidad de sustratos para la Citrato
sintasa: acetil-CoA y oxaloacetato.
Inhibicin de los 3 pasos del ciclo por
productos acumulados (NADH, succinil-CoA,
citrato y ATP).
Retroinhibicin alostrica de enzimas que
catalizan etapas tempranas del Ciclo.
CICLO DEL GLIOXILATO
Los vertebrados no pueden convertir cidos grasos,
ciertos aminocidos, o el acetato en glcidos.
En plantas, invertebrados y en algunos m.o.
(incluidos E. coli y levadura), el ciclo del
glioxilato produce compuestos de 4 C a partir de
acetato.
En plantas, las enzimas del ciclo del glioxilato se
encuentran en orgnulos, glioxisomas, unidos a
la membrana.
Las enzimas comunes a los 2 ciclos tienen 2
isozimas: mitocondrial y de los glioxisomas.
CICLO DEL GLIOXILATO
Glioxisomas se desarrollan en semillas
ricas en lpidos durante la germinacin
antes que las plantas sean capaces de
sintetizar glucosa por fotosntesis.
Contienen adems las enzimas necesarias
para la degradacin de cidos grasos de
los aceites de las semillas.
CICLO DEL GLIOXILATO
La formacin de citrato e isocitrato es igual que en
el Ciclo de Krebs.
El siguiente paso es la ruptura del isocitrato en
succinato y glioxilato (Enzima: isocitrato liasa).
Condensacin del glioxilato con otra acetil-CoA
para dar malato (Enz. malato sintasa).
Oxidacin del malato a oxalacetato (Enz. malato
deshidrogenasa).
Consumo: 2 acetil-CoA. Producto 1 succinato
2Acetil-CoA+NAD
+
+2H
2
O succinato + 2CoA +
NADH + H
+
CICLO DEL
GLIOXILATO
REGULACIN COORDINADA DE LOS CICLOS
DE KREBS Y DEL GLIOXILATO
En estas conversiones participan 4 vas diferentes:
1. Degradacin de cidos grasos (glioxisomas).
2. El ciclo del glioxilato (glioxisomas).
3. Ciclo de Krebs (mitocondrias).
4. Gluconeognesis (citosol).
El Isocitrato es el intermediario clave que conecta
los 2 ciclos.
La Isocitrato deshidrogenasa se regula por
modificacin covalente (fosforilacin).
REGULACIN COORDINADA
DE LOS CICLOS DE
KREBS Y DEL GLIOXILATO
La regulacin de la actividad de la
isocitrato deshidrogenasa determina
la distribucin del isocitrato entre los
dos ciclos.
Cuando se inactiva la enzima por
fosforilacin (por una quinasa
especfica) el isocitrato se dirige a las
reacciones biosintticas y al Ciclo del
glioxilato.
Cuando la enzima se activa por
desfosforilacin (por una fosfatasa
especfica), el isocitrato entra al Ciclo
de Krebs y se produce ATP.
FORMACIN DE ATP A PARTIR DE GLUCOSA