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ALGUNAS PROPIEDADES DE LA CUPROCLOROFILA OBTENIDA
DE LA MICROALGA Chlorella sp.

Teresita Romero Lpez
1
, Gerardo Surez Alvarez
1
y Doln Hernndez Martnez
2


(1) Centro de Investigaciones Pesqueras, 5
ta
Ave. y Calle 248 , Playa, Ciudad Habana, Cuba
(2) Organizacin Econmica Estatal Industrial de Alimentos (OEE INDAL), Asociacin INDIPES, Calle Hacendados, e/
Ave del Puerto y Lnea del Ferrocarril, Habana Vieja, Ciudad Habana, Cuba

RESUMEN

Este trabajo tiene como objetivo dar a conocer algunas informaciones acerca de las propiedades de la cuproclorofila obtenida
de la microalga Chlorella sp. por los especialistas del Centro de Investigaciones Pesqueras de Cuba y desarrollada en las
aguas residuales de las industrias procesadoras de mariscos y pescados. Para ello se tomaron pastas algales de diferentes
cultivos expuestos al aire libre, se le extrajo la clorofila y se realiz el proceso de transformacin de clorofila en cuproclorofila.
A esta ltima se le determin el pH, peso del licor, peso seco a 110C, porcentaje de slidos y el factor de conversin para el
clculo de la concentracin de cuproclorofila. Como resultado de obtuvo que el pH caracterstico del licor es cido, el peso de
898 g/L; el peso seco de 25 g/L; los slidos de 2,78% y el factor de conversin de 1,9.

Palabras clave: microalgas; cuproclorofila; aguas residuales; industria pesquera; Chlorella sp.

ABSTRACT
This work has as objective to know some information about the properties of copperchlorophyll derived from microalgae
Chlorella sp. developed in the waste waters of the fishing industries for Fishing Researcher Center specialists. We analyzed
differents pastes of algae exposed to the environmental conditions and cultivated in the open ponds, located in Havana city.
The chlorophyll was extracted and it was carried out the process of chlorophyll transformation in copperchlorophyll. To this last
one it was determined the pH, weight of the liquor, dry weight to 110 C, percentage of solids and the conversion factor for the
calculation of the copperchlorophyll concentration. As conclusion we obtained that the characteristic pH of the liquor is acid,
the weight of 898 g/l; the dry weight of 25 g/L; the solids of 2,78% and the conversion factor of 1,9.

Key words: microalgae; copperchlorophyll; waste waters; fishing industry; Chlorella sp.

INTRODUCCION

La clorofila, pigmento de las plantas verdes que apoya
el proceso de conversin de la energa solar y dixido
de carbono en oxgeno e hidratos de carbono, posee
como uno de sus derivados la cuproclorofila, de
reconocido poder bactericida y fungicida y que se
obtiene desplazando el ion magnesio del interior del
anillo porfirnico de la clorofila, y sustituyndolo
posteriormente por cobre.

Innumerables son los estudios que se han llevado a
cabo en diversas regiones del planeta, con el objetivo
de poner al servicio del hombre este pigmento, entre
los que cabe citar a J apn, Estados Unidos, Alemania,
Espaa y con menos desarrollo los pases de Amrica
Latina.

Se ha descubierto que el componente graso-soluble
de la clorofila se puede usar como fuente de vitamina
K que tiene un efecto antinflamatorio local y la fraccin
restante se puede usar para combatir toxinas
(Nutrimart, 2000).

El uso de la cuproclorofila se ha extendido
principalmente a problemas de colesterol, patgenos
intestinales, inflamacin, gastritis, hipertensin
(inducido por trastorno del rin), hemofilia, y tambin
en el campo de la cosmtica como desodorante
natural, capaz de combatir los malos olores (Kimura,
1980; Shinohara et al. 1985; Horiuchi y Fujikawa,
1987; Iwai, et al. 1990 ; Yako, 1990)

En Cuba se han realizado algunos trabajos
relacionados con los usos de la cuproclorofila extrada
de Chlorella sp. desarrollada en los efluentes de la
Industria Pesquera (Gispert et al. 1995 a,b; Romero y
Prez, 1999; Romero y Hernndez, 2000) con
resultados, que por su valor prctico, merecen la pena
continuar, por lo que en este trabajo se profundiza en
las investigaciones acerca de las propiedades y
obtencin de la cuproclorofila, atendiendo a las
mltiples posibilidades que brinda el pigmento tanto en
la industria farmacutica como en la cosmetologa.

MATERIALES Y METODOS

El estudio de las propiedades de la cuproclorofila se
realiz en el laboratorio de microalgas de la
Organizacin Econmica Estatal Industrial de
Romero et al.: Algunas propiedades de la cuproclorofila obtenida de la microalga Chlorella sp.


210
Alimentos (OEE INDAL), sita en Ciudad de la Habana
por los especialistas del Centro de Investigaciones
Pesqueras (CIP). Para ello se procesaron 12 muestras
de algas pertenecientes a diferentes cultivos de
Chlorella sp. desarrollados en los residuales lquidos
de la Industria Pesquera Cubana, segn lo seala
Romero (1998).

La extraccin de la clorofila, se realiz desplazando el
ion magnesio que se encuentra atrapado en el interior
del anillo porfirnico mediante la accin del HCl al 10%
de concentracin.

La cuproclorofila que se forma como producto de la
accin de la sal de acetato de cobre sobre la feofitina,
se realiz a 70 C, segn lo propuesto por Romero
(2000).

Al licor verde brillante y de olor caracterstico muy
penetrante, se le midi el pH, el peso que fue
correlacionado con el peso de la clorofila, el peso
despus de haber sido sometido el producto a un
proceso de secado de 110 C por 24 horas y el
porcentaje de slidos presentes en el pigmento.

Para determinar la concentracin de la cuproclorofila,
sin necesidad de lecturas espectrofotomtricas, se
calcul un factor que permite hallar la concentracin
del pigmento con el auxilio de la concentracin de
clorofila y que a su vez pudiera usarse en caso
contrario. Para el clculo de este factor, se utilizaron
pastas de microalgas de 16 cultivos diferentes, 12 de
los cuales correspondieron a las muestras utilizadas
para el estudio de las propiedades de la cuproclorofila,
a las que se le extrajo la clorofila, transformndose
posteriormente una parte del material en
cuproclorofila, procedindose finalmente al anlisis de
ambos extractos alcohlicos en el espectrofotmetro,
con lecturas a 649 y 664 nm, siguiendo las
indicaciones de Harmutk (1987) y aplicando la misma
ecuacin desarrollada por el autor para determinar la
concentracin de dichos licores.
Con los valores de concentracin resultantes, se
estableci una relacin, que permiti determinar
finalmente el factor de conversin de clorofila a
cuproclorofila.

RESULTADOS Y DISCUSION

pH

Los valores de pH de las 12 muestras estudiadas,
marcadamente cidos, oscilaron en un intervalo entre
2,5 y 3,77 con una media de 3,07 (Tabla 1) muy
prximos a los reportados por Romero y Hernndez
(2000) en los estudios de estabilidad de la
cuproclorofila, donde el valor ms alto fue de 2,17
alcanzado inmediatamente despus de la extraccin
de la cuproclorofila y el ms bajo de 1,82 al cabo de 12
meses de permanencia del licor a temperatura
ambiente.

Para la aplicacin de este pigmento en la lucha contra
los organismos patgenos que se han encontrado en
estudios in vitro (Romero y Prez, 1999), el carcter
cido de la disolucin es una caracterstica a favor,
debido a que a la gran mayora de las bacterias y
hongos investigados no les favorece el medio cido
para su supervivencia, por lo que el pH de la
cuproclorofila no resulta un factor limitante para estos
fines.

Peso del licor

Como consecuencia de la evaluacin realizada a la
cuproclorofila, se obtuvo un incremento en peso del
2,45% con respecto a la clorofila, que representa unos
22 g/L, considerando que el peso del litro de clorofila
es de 876 g como promedio y el de cuproclorofila de
898 g (Tabla 1).

Segn el anlisis tendencial realizado con los valores
que aparecen en la Fig. 1, el coeficiente de
determinacin R
2
fue de 0,91 lo que evidencia el buen
ajuste de los datos y la relacin tan significativa entre
una variable y otra.

Esta informacin es muy importante a la hora de dar
un estimado del volumen del licor expresado en peso,
porque evidentemente, para los pigmentos de estudio,
el peso no se corresponde con la relacin conocida
para el agua destilada que tiene un peso especfico de
0,99987 kg/dm
2
(Grytz, 1964); de ah que se haga la
referencia de que un litro de agua destilada pese 1 kg
y que no es vlido para todas las sustancias lquidas
como desacertadamente se infiere en numerosas
ocasiones, donde se aplica esta relacin sin un
anlisis previo.

Tabla 1: Estadsticos encontrados a partir del licor de
cuproclorofila.

ESTADISTICO n X DE Error tpico
Peso del licor
(g/L)
12 898,0 0,045 0,013
Peso del licor
seco
(g/L)
12 25,0 0,081 0,023
Slidos en el
licor (%)
12 2,78 0,923 0,266
pH del licor 12 3,07 0,536 0,154

El peso de la cuproclorofila, despus de haber sido
expuesta por 24 horas a 110C, report una media de
25 g/L, valor que se utiliza para el clculo del
porcentaje de slidos que existe en la muestra y que
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resulta de gran utilidad a la hora de establecer
cualquier estudio preclnico o clnico con el producto,
tanto en animales como en el propio hombre (Tabla 1).
Esta concentracin de slidos, en las 12 muestras
estudiadas, promedi 2,78%, considerando que el
peso del litro de cuproclorofila es de 0,898 kg como se
sealara anteriormente.















Fig. 1: Relacin existente entre el peso de la clorofila y
la cuproclorofila.

Factor de conversin

Ntese por los valores de la Tabla 2, que la
concentracin de clorofila es aproximadamente la
mitad de la concentracin de la cuproclorofila y que
estos clculos llevan a la idea de que numricamente
se puede establecer un factor que pueda usarse para
tener una nocin de la concentracin del pigmento
con el que se est operando.

En la Tabla 3 se puede apreciar lo anteriormente
expuesto, obtenindose un factor de 1,9 como
producto de la relacin de la concentracin de la
cuproclorofila contra la concentracin de clorofila, y
que corresponde al valor por el cual debe
multiplicarse la concentracin de clorofila para
determinar la concentracin de cuproclorofila, sin
necesidad de acudir a las lecturas en el
espectrofotmetro. Este factor es muy importante
conocerlo, ya que se convierte en una herramienta de
trabajo muy til, que logra disminuir el tiempo que se
pudiera dedicar a las lecturas y clculos del pigmento.

Una ecuacin de regresin entre la concentracin de
clorofila como variable independiente contra la
concentracin de cuproclorofila como variable
dependiente, demostr que existe una buena
correlacin entre los valores analizados, con un
coeficiente de determinacin R
2
de 0,9228 (Fig. 2),
corroborando as que este factor es representativo
para los fines que se persiguieron con la inves-
tigacin.
Tabla 2: Concentraciones de clorofila y cuproclorofila
segn valores de absorbancia.

A
664
Clorofila
A
649
Clorofila
Concentracin
(mg/L)
0,441 0,225 739
0,268 0,137 450
0,362 0,175 585
0,37 0,176 591
0,163 0,104 320
0,18 0,121 367
0,415 0,185 635
0,259 0,135 440
0,456 0,169 621
0,208 0,114 366
0,478 0,255 826
0,339 0,169 559
0,402 0,2 662
0,24 0,12 397
0,441 0,24 772
0,404 0,15 551
Cuproclorofila Cuproclorofila
0,368 0,561 1455
0,195 0,274 719
0,26 0,407 1052
0,266 0,38 994
0,152 0,229 595
0,141 0,208 542
0,322 0,503 1300
0,221 0,335 869
0,287 0,472 1212
0,293 0,484 1242
0,386 0,627 1613
0,273 0,421 1090
0,321 0,504 1302
0,21 0,3 785
0,349 0,54 1398
0,293 0,484 1242


CONCLUSIONES

1- La transformacin de la clorofila en cuproclorofila,
bajo las condiciones de cultivo ensayadas, slo
requiere de HCl (10%) y la sal de acetato de cobre.

2- El pH del licor de cuproclorofila se report como
cido; el peso de 898 g/l; el peso seco de 25 g/l; los
slidos de 2,78% y el factor de conversin de 1,9.

3- El factor de conversin de 1,9 facilita el clculo de la
concentracin de cuproclorofila, conociendo la
concentracin de clorofila, sin necesidad de acudir a
las lecturas tradicionales en el espectrofotmetro.


R
2
= 0.9097
8.85
8.9
8.95
9
9.05
8.55 8.6 8.65 8.7 8.75 8.8 8.85 8.9
Peso de clorofila (g)
P
e
s
o

d
e

c
u
p
r
o
c
l
o
r
o
f
i
l
a

(
g
)
Romero et al.: Algunas propiedades de la cuproclorofila obtenida de la microalga Chlorella sp.


212

Tabla 3: Relacin entre la clorofila y la cuproclorofila
para elclculo del factor de conversin.


Clorofila
(mg/L)
Cuproclorofila
(mg/L)
Cuproclorofila/Clorofila
738,7 1452,4 1,97
449,5 718,1 1,60
583,8 1051,4 1,80
590,9 999,9 1,69
319,2 654,5 2,05
366,6 542,4 1,48
634,3 1300,9 2,05
440,4 869,6 1,97
620,9 1212,1 1,95
366,2 628,7 1,72
825,8 1612,7 1,95
559,0 1090,1 1,95
662,0 1302,0 1,97
396,6 785,0 1,98
772,5 1397,7 1,81
550,5 1242,0 2,26
Factor =1,9



Fig. 2: Relacin existente entre la clorofila y la
cuproclorofila

AGRADECIMIENTOS

Se agradece la colaboracin de los tcnicos del
Centro de Investigaciones Pesqueras, que brindaron
su apoyo en las lecturas de las muestras en el
espectrofotmetro, as como a los especialistas de la
OEE, INDAL.

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R
2
= 0.9097
8.85
8.9
8.95
9
9.05
8.55 8.6 8.65 8.7 8.75 8.8 8.85 8.9
Peso de clorofila (g)
P
e
s
o

d
e

c
u
p
r
o
c
l
o
r
o
f
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l
a

(
g
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Aceptado 13 de enero del 2002