10 Cromatografia Geral

1 Departamento de Qu Departamento de Qu mica mica Qu Qu mica Analitica mica Analitica
Principles of Instrumental Analysis

Skoog, West, Holler, Nieman
Thomson Learning; ISBN: 0030020786
Teoria Geral de Cromatografia
Usada abundantemente
Conjunto de tcnicas
Separao muito eficiente
Michael Tswett 1906
Cromatografia
Usada por Tswett para separar pigmentos de plantas.
Desde 1906 a 1941 pouco utilizao se deu tcnica.
Em 1941 Martin e Synge pretenderam separar amino-cidos da l
por extraco em contra-corrente (o que no conseguiram).
Desenvolveram a Cromatografia de Partio.
Em 1952, A.J.P. Martin e R.L.M.Synge receberam o Prmio Nobel
devido ao trabalho desenvolvido em Cromatografia de partio lquido-
lquido.
Em 1952 comeou a Cromatografia em Fase Gasosa.
Em 1938 comeou a Cromatografia em Canada Fina (TLC).
Cromatografia um mtodo
fsico de separao, na qual os
componentes a serem separados
se encontram distribudos entre
duas fases, sendo uma delas uma
fase estacionria de grande
superfcie, e a outra um fluido que
circula atravs ou por a
primeira.
Todas as cromatografias so
baseadas num tempo de reteno
ou num tempo de permanncia
diferente para os vrios solutos.
mvel
estacionria
Os vrios nomes dados s diferentes tcnicas cromatogrficas, so
inconsistentes:
papel e gel devido ao suporte cromatografico.
absoro e partio devido ao tipo de processo fsico.
gasosa devido ao estado da fase mvel.
em coluna devido ao meio fsico em que se processa.
fase reversa porque ao contrrio do normal (?)
ascendente devido ao caminho dos solventes.
Classificao dos Mtodos Cromatogrficos
Os mtodos cromatogrficos podem ser de dois tipos:
- cromatografia em coluna a fase estacionria encontra-se dentro
de uma coluna e a fase mvel passa atravs da coluna ou sob presso
ou pela fora da gravidade. Quanto natureza da fase mvel, podemos
dividir a cromatografia em coluna em:
- cromatografia lquida
- cromatografia gasosa
- cromatografia de fludos super-crticos
Tanto a cromatografia lquida como a gasosa ainda podem ser
classificadas quanto natureza da fase estacionria e quanto ao tipo de
equilbrio entre as duas fases
- cromatografia planar cromatografia em papel ou em camada
fina.
Classificao dos Mtodos Cromatogrficos em Coluna
Classificao Geral fase estacionria Equilbrio
cromat. lquida lq. adsorvido num slido
slido
resina permuta inica
partio
adsoro
permuta inica
cromat. fase gasosa lq. adsorvido num slido
slido
partio
adsoro
cromat. fludo supercrtico esp. orgnicas ligadas a
uma superfcie slida
partio
Processo Cromatogrfico
Exemplo: processo em coluna Cromatograma
Representao grfica das
concentraes dos solutos em
funo do tempo
enchimento
da coluna
amostra
f. mvel
A
B
t
0
t
1
t
2
t
3
Descrio de um Processo Cromatogrfico
a coluna empacotada com a fase estacionria.
a amostra dissolvida na fase mvel carregada na coluna.
a fase movl passada continuamente pela coluna arrastando a
amostra.
os componentes da amostra so separados e eludos.
quanto mais solvel um componente na fase mvel, mais depressa
eluda.
um componente completamente insolvel na fase mvel ficar no
topo da coluna.
Eluio processo de remoo de todos os componentes da coluna.
Eluente solvente usado (fase mvel) para remover os componentes
da coluna (fase estacionria).
Eludos conjunto das componentes separadas e a respectiva fase
mvel.
Efeito da velocidade de migrao e alargamento das bandas
distncia
t
2
t
3
o alargamento das
bandas inevitvel
Apesar de o alargamento das bandas ser inevitvel, possvel encontrar
condies experimentais que resultam numa melhor resoluo do
cromatograma.
A eficincia de uma coluna cromatogrfica em separar dois
componentes depende em parte da velocidade relativa com que as duas
espcies so eludas. Estas velocidades dependem do equilbrio de
distribuio das vrias espcies entre a fase mvel e a fase estacionria.
fase mvel
fase estacionria
est
D
mvel
C
K
C
=
Coeficiente de Partio
C
est
concentrao na fase estacionria
C
mvel
concentrao na fase mvel
Quanto maior o valor de K
D
mais tempo o soluto permanece na fase
estacionria.
A fraco de tempo total que uma molcula passa na fase mvel est
directamente relacionada com a fraco da populao total presente
na fase mvel:
n molculas f. mvel
fraco de tempo na f. mvel =
n total de molculas
M M
M
M M E E
C V
t
C V C V
=
+
1
1
M M
M M
M
M M E E E
D
M M M M M
C V
C V
t
C V C V V
K
C V C V V
= =
+ +
K
D
'
1
1 K
=
+
'
E
D
M
V
K K
V
=
Factor de Capacidade
'
E E
M M
C V
K
C V
=
n moles f. estacionria
n moles f. mvel
d-nos uma medida do comportamento do soluto num
determinado processo cromatogrfico.
'
K
O soluto entra no processo cromatogrfico e move-se da fase mvel
para a fase estacionria.
A velocidade de eluio, pode ser relacionada com a velocidade linear
da fase mvel.
u - velocidade linear da fase mvel
velocidade de eluio = u . t
M
A velocidade de eluio depende de:
velocidade da fase mvel, u
razo dos volumes da fase estacionria e da fase mvel
coeficiente de distribuio, K
D
'
1
1
vel u
K
=
+
Para um dado processo cromatogrfico, a velocidade da fase mvel e a
razo V
E
/V
M
so constantes. A razo porque os solutos so eludos com
velocidades diferentes devido ao facto de terem diferentes valores de
K
D
.
O tempo que leva um componente a atravessar uma coluna de
comprimento L, o tempo de reteno, t
R
:
t
M
tempo da fase mvel, tempo requerido para a fase mvel atravessar
a coluna.
'
(1 )
R R
comprimento L
t t
velocidade u
= = + K
Tempo de Reteno
'
(1 )
R M
t t K = +
Por convenincia, usa-se muitas vezes o parmetro de volume de
reteno, pois uma grandeza que indica a quantidade de volume da
fase mvel que necessria para eluir o soluto.
Sabendo que: volume = tempo x caudal
temos:
V
M
volume morto (vazio) da coluna. o espao da coluna no
ocupado pela fase estacionria.
V
E
volume da fase estacionria
R R
V t F =
'
(1 )
E
R M M D M
M
V
V V K V K V
V
= + = +
R M D E
V V K V = +
Volume de Reteno
O tempo de reteno depende do tipo de coluna e condies
experimentais (temperatura, caudal, etc). Este efeito de variveis
operacionais pode ser eliminado se os valores forem referidos a uma
substncia padro.
A substncia padro tem que ser medida nas mesmas condies
experimentais.
Antes de se calcular a razo de dois tempos de reteno necessrio
subtrair o tempo requerido para eluir um componente no retardado.
Todos os componentes tm que atravessar o comprimento L da coluna,
pelo que passam uma mesma fraco de tempo na fase mvel. Sendo
assim, o que interessa ter em conta o tempo que passam na fase
estacionria.
* * *
R M R M D
R M R M D
t t V V K
t t V V K

= = =

reteno relativa
ou
factor de selectividade
* substncia padro
Outro parmetro utilizado nas tcnicas cromatogrficas razo de
reteno, R
f
:
Este parmetro pode ser escrito de modos diferentes:
M
f
M E
t
R
t t
=
+
Razo de Reteno
R
f
= 1 soluto no retido
R
f
= 0 soluto no solvel na
f. mvel
soluto M M
f
M solvente
d t V v
R
v t d V
= = = =
d - distncia
R
F
tempo tempo
r
e
s
p
o
s
t
a
r
e
s
p
o
s
t
a
Forma do Cromatograma
Ideal No ideal
Um processo tanto mais eficiente quanto mais perto estiver do
cromatograma ideal.
Mtodos para descrever a eficincia de uma Coluna
Existem dois termos que usados como uma medida quantitativa da
eficincia de uma cromatografia em coluna:
altura dos pratos tericos, H
nmero de pratos tericos, N
Teoria dos Pratos Tericos
Esta teoria tem grande analogia com o processo de destilao e
mtodo de extraco descontnua em contra-corrente.
Prato Terico - comprimento de coluna que
necessrio para se atingir o equlbrio entre duas
fases.
O processo cromatogrfico um exemplo do
mtodo de Craig. Os pratos tericos
correspondero s unidades (ampolas) de
transferncia. Cada caixa um prato terico.
Ver exemplo da figura seguinte.
Modelo para a Separao Cromatogrfica
Espcie A (D
A
=0.5) dissolve-se igualmente na fase est. e na fase mvel
Espcie B (D
B
=0.33) dissolve-se 75% na fase mvel
6
5
4
3
2
1A 1
1B
1
2
3
4
5
6
6
5
4
1 1/8A
1/64B
1/8A 3
3/64B
2 1/4A
3/32B
1/4A 2
9/32B
3 1/8A
9/64B
1/8A 1
27/64B
4
5
6
6
5
4
3
2
1 1/2A
1/4B
1/2A 1
3/4B
2
3
4
5
6
6
5
4
3
1 1/4A
1/16B
1/4A 2
3/16B
2 1/4A
3/16B
1/4A 1
9/16B
3
4
5
6
Grfico da distribuio de A e B ao longo da coluna aps 5 adies de
solvente
B ao ser mais solvel na fase mvel, sa
1 da coluna e espalha-se menos
originando uma banda mais estreita.
B
A
Quanto maior o nmero de pratos tericos , mais eficiente o processo
cromatogrfico. O nmero de pratos tericos, N
t
, pode ser obtido atravs
do cromatograma, utilizando as expresses:
2
16
R
t
t
N
w

=

nmero de pratos
tericos
w largura da banda
t
R
tempo de reteno
w
1/2
largura a meia altura
ATENO s unidades de t
R
e w
2
1
2
5.54
R
t
w
t
N

=

O nmero de pratos tericos no depende s do comprimento da
coluna, mas tambm de quase todos as variveis existentes na
cromatografia (Ex: solvente, fase estacionria, temperatura, caudal)
Para um dado t
R
, quanto maior o nmero de pratos tericos calculado
menor a largura do pico (mais perto do ideal).
Como se aumenta o nmero de pratos tericos?
- Aumentando o comprimento da coluna. N
T
directamente
proporcional a L. Se se duplicar o comprimento L, duplica-se N
T
e t
R
.
No entanto, todos os picos ficaro mais afastados uns dos outros, mas
tambm mais largos por um factor de 2.
- Dimuindo a altura de cada prato terico, ou seja aumentando o
nmero de pratos tericos por unidade de comprimento.
H (abreviatura de HETP) Height Equivalent to a Theoretical Plate
Como variar o valor de H?
Quanto menor a altura do prato terico, mais estreita a banda obtida
no cromatograma. Van Deemter demonstrou que o alargamento de
uma banda devido soma de vrios efeitos inter-dependentes :
- A - empacotamento da coluna ou estrutura da fase estacionria.
- B difuso do soluto (gradiente de concentrao) das altas para as
baixas concentraes.
- C equilbrio entre fase mvel e fase estacionria.
2
16
T R
L L w
H
N t

= =

H - altura equivalente do prato
terico
A difuso de Eddy
B difuso longitudinal
fase mvel
fase est.
C transferncia de massa
H = + +
contribuio
de percursos
no ideais
contribuio
situao de
no equilbrio
contribuio
de difuso ao
longo da
coluna
Difuso de
Eddy
Difuso
longitudinal
transferncia
de massa
H = A + B/u + Cu
Equao de
Van Deemter
u velocidade da fase mvel (caudal)
A, B e C so constantes para uma dada coluna e uma dada fase
estacionria.
Os fenmenos que provocam alargamento nas bandas, uns so
proporcionais ao caudal, outros inversamente proporcionais ao caudal e
outros independentes do caudal, como se pode ver na Figura seguinte:
Representao grfica da Equao de Van Deemter
caudal
H
H = A + B/u + Cu
Cu
B/u
A
Em colunas empacotadas no laboratrio, os trs termos da equao
de Van Deemter contribuem para o alargamento das bandas.
Para colunas de HPLC, o termo A=0.
Como a difuso longitudinal em gases muito mais rpida do que em
lquidos, o parmetro B, tem valores mais elevados em cromatografia
de fase gasosa do em cromatografia lquida, razo pela qual o caudal
ptimo em cromatografia de fase gasosa mais elevado do que em
cromatografia lquida.
A transferncia de massa diminui com o aumento de temperatura,
devido ao aumento do coeficiente de difuso do soluto na fase
estacionria. O aumento de temperatura permite aumentar o caudal
sem diminuio da resoluo.
Como calcular o valor dos parmetros A, B e C da equao de Van
Deemter?
Obter 3 cromatogramas a 3 diferentes velocidades da fase mvel.
Calcular para cada velocidade, o valor de H:
e resolver o sistema de 3 equaes a 3 incgnitas (A, B e C).
Como calcular a velocidade ptima da fase mvel?
A velocidade ptima corresponde ao valor mnimo de H (dH/du)=0.
2
16
R
L w
H
t

=

Resoluo
A resoluo de uma coluna, fornece uma medida quantitativa da
capacidade dessa coluna separar 2 solutos.
R=0.75
R=1.0
R=1.5
( ) ( )
2
R R
B A
A B
t t
R
w w

=
+
( )
2
B A
A B
V V
R
w w
=
+
Relao entre Resoluo e caractersticas de um Soluto
Dois solutos A e B com tempos de reteno de tal modo que:
w
A
w
B
w
sabendo que:
resoluo:
relembrando que: t
R
= t
M
(1+K) = t
M
+ t
M
K
2
2
16
R
T
t
N
w
=
4
R
T
t
w
N
=
( ) ( )
R R
B A
t t
R
w
=
( ) ( )
( )
4
R R T
B A
R
B
t t N
R
t
=
' '
'
4
T
M M B M M A
M M B
N
t t K t t K
R
t t K
+ +
=
+
reteno relativa
dividindo ambos os termos por K

B
:
( )
( )
' '
'
1 4
M B A
T
M B
t K K
N
R
t K
=
+
' '
'
1 4
T
B A
B
N
K K
R
K
=
+
'
'
B
A
K
K
=
'
'
'
1 4
B
B
T
B
K
K
N
R
K
=
+
' '
'
1 4
B B
T
B
K K
N
R
K
=
+
'
'
1
1 4
B
T
B
K
N
R
K

=
+
'
'
1
1 4
T
B
B
N
K
R
K

=

+

Por vezes torna-se til, saber qual o nmero de pratos tericos
necessrios para se obter uma determinada resoluo:
Uma vez obtido um nmero de N
T
para uma dada resoluo, se se
considerar que H (alturado prato) constante, necessrio modificar o
comprimento L da coluna: H = L/N
T
Esta a nica forma de se obter tal valor. As grandezas e K mantm-
se constantes apesar de mudanas nos valores de L e N
T
.
Quando os dois solutos A e B so muito difceis de separar (K
A
K
B
) as
equaes tomam a forma:
2
2
'
2
'
1
16
1
B
T
B
K
N R
K
+

=

'
'
1
B
A
K
K
=
' ' '
A B
K K K
( )
'
'
1
1 4
T
N
K
R
K

=

+

2
2
'
2
'
1 1
16
1
T
K
N R
K
+

=

Relao entre Resoluo e o Tempo de Reteno
u velocidade da fase mvel
substituindo em:
vem:
Esta expresso permite saber o tempo necessrio para separar (eluir) um
componente, com uma dada resoluo.
R
comprimento L
t
velocidade v
= =
( )
B
R
B
L
v
t
=
'
1
1
B
B
v u
K

=

+

T
L N H =
( )
( )
'
1
T B
R
B
N H K
t
u
+
=
2
2
'
2
'
1
16
1
B
T
B
K
N R
K
+

=

( )
( )
3
2 '
2
2
'
1
16
1
B
R
B
K
R H
t
u
K
+

=

Optimizao de uma Coluna
As equaes so constitudas por 3 partes:
1 - O termo um parmetro de selectividade que depende
unicamente das propriedades de dois solutos.
2 - Termo que contm K que depende das propriedades do soluto da
coluna.
3 - N
T
relacionada com os efeitos cinticos que influenciam a largura
das bandas.
( )
( )
3
'
2
'
2
2
1
16
1
B
B
R
K
K
R H
t
u
+

=

'
'
1
1 4
T
B
B
N
K
R
K

=

+

Para optimizar as condies de uma coluna, no esquecer que os
parmetros fundamentais (, Ke H ou N
T
) podem ser mexidos de
uma forma independente.
e K podem ser mexidos, mudando a temperatura, ou a
composio da fase mvel.
N
T
pode ser mudado directamente, mudando L e
H pode ser mudado alterando a velocidade (caudal), o tamanho das
partculas de resina, etc.
Exemplo:
Dois solutos A e B tm t
R
A
=16.4 min. e t
R
B
=17.63 min (w
A
=1.11min. e
w
B
=1.21 min). A coluna mede 30 cm e otempo da fase mvel de
1.3 min. Calcular:
a) Resoluo
b) N
T
mdio
c) H
d) L para R = 1.5
e) t
RB
necessrio para eluir o soluto B com novo L
f) o valor de H para R=1.5
Resoluo:
a) R=1.06
( )
2 17.63 16.40
1.06
1.11 1.21
R

= =
+
b)
N
T
= 3445
c) H = 8.7x10
-3
cm
d) K e no mudam com o aumento de N
T
e L
( )
2
2
17.63
16 3397
1.21
T
B
N = =
( )
2
2
16.4
16 3493
1.11
T
A
N = =
3493 3397
3445
2
T
N
+
= =
3
30
8.7 10
3445
T
L
H cm
N
= = =
2
2
'
2
'
1
16
1
B
T
B
K
N R
K
+

=

( ) ( )( )
2
1
1
16 ...... ...... constante
T
N R =
( ) ( )( )
2
2
2
16 ...... ...... constante
T
N R =
1- coluna original
2 nova coluna
( )
( ) ( )
1
1
2
2 2
3445 1.06
1.5
T
T T
N
R
R
N N
= =
(N
T
)
2
= 6.9x10
3
como L=NH
L= 6.9x10
3
x 8.7x10
-3
= 60 cm
L = 60 cm
e) da expresso com t
R
e resoluo:
(t
R
)
2
= 35 min (o tempo de reteno passa a ser 2 vezes maior)
f)
( )
( )
( )
( )
( )
( )
( )
2 2
1
1
2 2
2 2 2
1.06
17.63
1.5
R
R R
t R
t t
R
= =
( )
( )
2
2 3
1 1
2
2
2 2 2
1.06
8.7 10
1.5
RB
RB
t R H x
t R H H
= =
H
2
= 4.3x10
-3
cm (a altura do prato terico diminui para metade).
Variao de H
Analisando a alnea f) do exemplo anterior verifica-se que possvel
melhorar a resoluo, sem aumentar o valor de t
R
, dimuindo o valor de
H.
Diminuio do valor de H:
reduzir a viscosidade da fase mvel (aumentando a temperatura).
reduzir o tamanho das partculas.
reduzir a velocidade de eluio.
Variao de K
B
O aumento do valor de K
B
, produz um aumento de resoluo (com
aumento do tempo de eluio).
O valor de K mexido na fase gasosa por aumento da temperatura. Em
fase lquida, mudando a composio da fase mvel.
'
'
1
B
B
K
R Q
K
=
+
( )
( )
3
'
'
2
'
1
B
RB
B
K
t Q
K
+
=
- valores de K>7 so de evitar. A
resoluo pouco aumenta e o t
R
aumenta pronunciadamente.
- t
R
mnimo obtido para K = 2.
- habitualmente trabalha-se com
valores de K entre 1 e 5.
Variao de
Quando se aproxima da unidade, optimizar K e aumentar N
T
pode
no ser suficiente para uma boa separao.
Assim necessrio mexer em mantendo k entre 1 e 10.
1) Mudar a fase mvel (composio)
2) Mudar o pH da fase mvel
3) Mudar a temperatura
4) Mudar a fase estacionria ?
5) Adicionar espcies qumicas fase estacionria
melhor a soluo 1. pior a 5.

10 Cromatografia Geral

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

10 Cromatografia Geral

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

1 Departamento de Qu Departamento de Qu mica mica Qu Qu mica Analitica mica Analitica

Principles of Instrumental Analysis

dividindo ambos os termos por K

You might also like