UNIVERSIDADE DE BRASLIA

INSTITUTO DE CINCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR
BIOQUMICA E BIOFSICA EXPERIMENTAL 121886 1/2014
PROFESSOR: NAPOLEO VALADARES










Componentes




Relatrio: Prtica 02 - Tampes




Braslia-DF
2014
SUMRIO

INTRODUO .................................................................................................................3
MATERIAIS E MTODOS..............................................................................................4
Materiais ....................................................................................................................... 4
Mtodos ........................................................................................................................ 5
DISCUSSO .....................................................................................................................6
Resultados: .................................................................................................................... 6
Discusso ...................................................................................................................... 8
CONCLUSO .................................................................................................................11
BIBLIOGRAFIA .............................................................................................................11


3

INTRODUO

Uma soluo dita tamponada quando ela resiste s variaes do pH, isto ,
quase no sofre variao quando adicionamos uma pequena quantidade de cido ou de
base, mesmo que sejam fortes.
As solues-tampo so de grande importncia nos processos biolgicos. As
clulas e os organismos mantm um pH citoslico e especfico, mantendo as
biomolculas no seu estado inico timo, usualmente ao redor do pH 7. Nos
organismos multicelulares, o pH dos fluidos extracelulares tambm estritamente
regulado. A constncia do pH alcanada principalmente pelos tampes biolgicos:
mistura de cidos fracos e suas bases conjugadas.
Segundo Brnsted, cidos so substncias capazes de doar prtons, e bases so
as substncias capazes de receb-los. Segundo essa definio, o HCl por exemplo
considerado um cido, pois pode dissociar-se, liberando prtons. De maneira geral, a
equao de dissociao de um cido :

O on ou molcula resultante dessa dissociao chamado de base conjugada do
cido, j que pode receber um prton, convertendo-se novamente no seu respectivo
cido conjugado.
cidos fortes so aqueles que se dissociam totalmente quando em solues
diludas, e os cidos fracos so os que se ionizam muito pouco. Um sistema tampo
constitudo por um cido fraco e sua base conjugada.
Dissociando o cido quando se adiciona um lcali ou associando prton e base
conjugada quando se adiciona um cido forte, o sistema-tampo previne variaes
acentuadas de pH. Esta propriedade consequncia da existncia concomitante das
formas cido e base conjugada e, embora a soma (HA+A) permanea sempre constante,
a concentrao das espcies varia de acordo com o tipo H
+
OH
-
- e a quantidade dos
ons adicionados.
A equao de Henderson-Hasselbach ser til, pois ela relaciona pH, constante
de dissociao do cido e as concentraes de cido e base conjugada, dessa forma:


4

Em que pK
a
log K
a
, sendo K
a
a constante de ionizao ou dissociao do
cido.
Por essa equao pode-se deduzir que o cido fraco constituir um tampo
adequado se o valor de seu pK
a
estiver dentro do intervalo compreendido por uma
unidade abaixo e uma unidade acima do valor de pH que se quer manter constante.
Assim:
pK
a
- 1 pH pK
a
+ 1
A eficincia de um tampo proporcional sua concentrao e mxima no pH
igual ao pK
a
.
Nas clulas e tecidos, os sistemas tampes fosfato e bicarbonato mantm os
fluidos intra e extracelulares no seu pH timo (fisiolgico) que usualmente est em
torno de 7. Enzimas geralmente trabalham otimamente nesse pH.

MATERIAIS E MTODOS

Materiais

- K
2
HPO
4
(MM = 174)
- KH
2
PO
4
(MM = 136)
- 01 balo volumtrico de 100 mL
- 01 bquer de 100 mL
- 01 pipeta de 2 mL
- 01 pipeta de 5 mL
- 01 pera
- 01 pisseta com gua destilada
- 01 pHmetro
- 01 proveta de 50 mL

5

- 50 mL de soluo de cido actico (MM = 60) 0,5 mol/L
- 50 mL de soluo de NaOH (MM = 40) 0,7 mol/L
- 50 mL de soluo de carbonato de sdio (MM = 106) 0,5 mol/L
- 10 mL de HCl (MM = 37) 0,6 mol/L
- 03 solues padro para calibrao do pHmetro.

Mtodos

A) Tampo carbonato:
Primeiramente, colocamos, com o auxlio da pisseta, 50 mL de gua destilada no
bquer de 100 mL. Logo aps, adicionamos, vagarosamente ao bquer, 25 mL de
carbonato de sdio a 0,5 mol/L(medidos atravs da proveta de 50 mL). Adicionamos
posteriormente 10 mL de HCl a 0,6 mol/L medidos com o auxlio da pipeta de 5 mL.
Para finalizar a preparao do tampo, completamos o volume do bquer com 15 mL de
gua destilada. Assim, preparamos 100 mL de tampo carbonato e, logo aps, medimos
o seu pH utilizando o pHmetro.
B) Tampo fosfato:
Aps o procedimento anterior, descartamos a soluo tampo carbonato e
lavamos muito bem o bquer com gua destilada. Para o preparo do tampo fosfato,
dissolvemos em 20 mL de gua destilada, no bquer, 2,23 g de K
2
HPO
4
e 0,98 g de
KH
2
PO
4
, respectivamente (os dois sais j estavam devidamente pesados). Aps esse
processo, transferimos a soluo para um balo volumtrico de 100 mL e o
completamos com gua destilada. Para finalizar, aps lavarmos o pHmetro com gua
destilada e a secarmos o bulbo do eletrodo com papel toalha, medimos o pH do tampo
fosfato com o pHmetro.
C) Tampo acetato:
Antes de prepararmos 100 mL de tampo acetato 0,1 mol/L de pH = 4,82,
fizemos os clculos (que para fins didticos sero expostos nos Resultados e
Discusses) do volume de cido actico e de NaOH que sero utilizados. Assim,
chegamos a concluso que para atingirmos o pH desejado so preciso 20 mL de cido
actico e 7,72 mL de NaOH. Portanto, aps lavarmos o bquer adicionamos nele 40 mL
de gua destilada. Posteriormente, adicionamos, vagarosamente e sempre mexendo a
soluo, 20 mL de cido actico a 0,5 mol/L e 7,72 mL de NaOH a 0,7 mol/L,
respectivamente (o volume dessas duas ltimas solues foram medidos com o auxlio
da pipeta de 5 mL). Para finalizar medimos experimentalmente com o pHmetro o valor
do pH do tampo acetato 0,1 mol/L.

6

D) Nesta ltima parte do experimento, medimos os pH, por meio do pHmetro,
das trs solues padro. Entre as medies sempre lavamos o pHmetro e secamos o
bulbo de eletrodo com papel toalha.

DISCUSSO

Resultados:

A) Tampo Carbonato:


Carbonato de Sdio cido Clordrico

B) Tampo Fosfato:


Fosfato dipotssico Fosfato monopotssico

C) Tampo Acetato:


cido actico Hidrxido de Sdio


pH 9,4
pH 6,9
pH 4,9

7


Antes de medir experimentalmente o pH do tampo acetato, foi preciso que
calculssemos quais volumes de cido actico (CH
3
COOH) e hidrxido de sdio
(NaOH) eram precisos para o preparo dessa soluo tamponante.

I. C
1

1
C

,
1
,1 1

1
m de CH
3
COOH
II. pH pK
a
log

H

, , log

H
, log

H

-
1,1 H

III.
-
H ,1 1,1 H H ,1
[HA] = 0,046 mol/L

-
, mol/L

IV. CH
3
COOH CH
3
COO
-
+ H
+

0,046 0,054
NaOH Na
+
+ OH
-

0,054 0,054 0,054

V. C
1

1
C

,
1
, 1
V
1
7,72 mL de NaOH

Para o tampo foram utilizados, portanto, 20 mL de cido actico,
aproximadamente 8 mL de hidrxido de sdio e 72 mL de gua.




8


D) Solues padro:
Soluo padro
pH 4
Soluo padro
pH 7
Soluo padro
pH 9
pH 4,6 7,1 9,1

ncontramos valores diferentes para cada soluo padro por causa de algum
desses fatores erro de calibragem do pHmetro, soluo padro com pH diferente,
temperatura do laboratrio que pode alterar o pH ou erro de mensura dos prprios
alunos.
Discusso
1) Para cada um dos tampes, calcule o pH esperado, ou seja, qual o pH terico
para a dissoluo das quantidades especificadas de cada substncia. Busque
explicaes para a diferena entre os pHs medido e esperado.

Com os valores de pH obtidos, montou-se a seguinte tabela:

Tampo carbonato Tampo fosfato Tampo acetato
pH 9,40 6,96 4,91

Segundo a equao de Henderson-Hasselbalch
pH pK
a
log

H

Tampo carbonato:
pH 1, log
,
,
pH 1,
Tampo fosfato:

m
1

,
1
,1

,
1


9

H
m
1

,
1
,1

,
1

pH , log

,
1

,
1

pH ,
Tampo acetato:
pH , log
,
,
pH ,1
Todos os pHs medidos estavam um pouco abaixo ou acima do esperado. sso
pode ter sido causado, entre outros fatores, pela impurea dos reagentes pela
impreciso dos instrumentos utiliados bquer, pHmetro, pipeta eou pela inabilidade
dos alunos que estavam realizando o experimento.
2) O que quer dizer a concentrao molar de um tampo?

A concentrao molar de um tampo expressa em molaridade e representa a
soma aritmtica das concentraes dos dois componentes do tampo (cido + base).
Concentrao do tampo H

3) As solues preparadas so bons tampes? Isso depende de qu?

As solues so consideradas bons tampes caso impeam grandes variaes do
valor de pH, mesmo com a adio de pequenas quantidades de cidos ou bases.
A ao tamponante est restrita, entretanto, ao intervalo de pH no qual as
concentraes do cido fraco ou da base fraca que compe o sistema e o seu on comum
so suficientes para compensar a adio de um cido ou base. Desse modo, quanto
maior a concentrao molar de um tampo, maior a disponibilidade das espcies
capazes de doar ou receber prtons e maior a sua eficincia.
Dentro desse intervalo, existe um valor de pH em que exatamente 50% do total
inicial do cido esto associados e os 50% restantes esto na forma de sua base
conjugada. Esse valor coincide com o pK
a
do cido constituinte do tampo e onde o
sistema tem sua eficincia mxima, uma vez que, nessa situao, existem,
simultaneamente, as maiores concentraes possveis de cido e base conjugada.

10


4) As solues preparadas so bons tampes para o citossol?

Sabendo que um sistema-tampo funcional numa faixa de pH que varia uma
unidade acima ou abaixo de seu pK
a
- (pK
a
1) a (pK
a
+ 1) -, um bom tampo para o
citossol (pH 7) seria aquele com pK
a
prximo de 7. Entre os tampes preparados o
que melhor se encaixa nessa restrio o tampo fosfato, que tem pK
a
7,45 e,
portanto, eficaz em pHs de 6,45 a 8,45.

5) Como seria possvel preparar 100 ml de tampo fosfato se no existisse o sal
K
2
HPO
4
no laboratrio?

Poderiam ser utilizados, para tanto, o sal KH
2
PO
4
e uma base forte, que retiraria
prtons do meio, aumentado o pH e possibilitando, assim, o equilbrio do tampo
fosfato no pK
a3
:

6) Acelerar a respirao contribui para o aumento ou para a diminuio do pH
sanguneo?

Acelerar a respirao permite a diminuio da concentrao plasmtica de CO
2
.
Assim, no equilbrio haver deslocamento para a direita no sentido de formao do gs
carbnico que est sendo liberado.
CO
3
2-
+ 2H
+
H
+
+ HCO
3
-
H
2
CO
3
H
2
O + CO
2
Consequentemente, a concentrao de H
+
diminui, o que ocasiona um aumento
do pH sanguneo. A hiperventilao pulmonar acelerao da respirao -, portanto,
contribui para o aumento do pH sanguneo alcalose - pH acima de 7,45).


11

O quadro oposto, a desacelerao da respirao e consequentes aumento da
concentrao de CO
2
e de H
+
que ocasionam a diminuio do pH sanguneo, chamado
de acidose.

CONCLUSO

Na aula experimental, atravs da observao e anlise dos resultados obtidos,
pudemos ampliar o conhecimento sobre sistemas tampo, os quais so fundamentais
para o impedimento de grandes variaes de pH em solues quando estas so
acrescidas de outros cidos ou bases.
Para tanto fez-se necessrio compreender a aplicao prtica da equao de
Henderson-Hasselbalch, que relaciona pH, constante de dissociao e concentraes dos
reagentes, como no terceiro procedimento em que foram realizados clculos para
descobrir quantidade de reagentes a serem utilizados no preparo do tampo acetato.
Conclumos que existem diversos mtodos confeco de sistemas tampo e que
estes regulam uma faixa que se mantem constante. Eles desempenham um papel muito
importante nos seres humanos, a regulao do pH do sangue no ponto ideal prximo a
7,4.

BIBLIOGRAFIA

-MARZZOCO Anita; TORRES B. Bayardo. Bioqumica Bsica. 3 Ed. 2007.
-NELSON L. David; COX M. Michael. Lehninger Princpios de Bioqumica. 3 Ed.
200211