Efecto de las condiciones de cultivo sobre la biodegradacin del azocolorante

Naranja II en un sistema combinado anxico/xico. Gutirrez, Rodrguez, Rodrguez y Barragn

EFECTO DE LAS CONDICIONES DE CULTIVO SOBRE LA
BIODEGRADACIN DEL AZOCOLORANTE NARANJA II EN UN
SISTEMA COMBINADO ANXICO/XICO.

(1)
Carolina Gutirrez L,
(2)
Odn Rodrguez N.,
(3)
Felipe N. Rodrguez,
(4)
Blanca E. Barragn
(1)
Ingeniera en Sistemas Ambientales
(2
Laboratorio de la gestin de la calidad del aire,
(3)
Laboratorio de la
gestin de la calidad del agua,
(4)
Laboratorio de la gestin de residuos peligrosos, Departamento de Ingeniera
en Sistemas Ambientales. Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas. Av. Wilfredo Massieu S/N. Col Unidad
Profesional Adolfo Lpez Mateos. CP 07735
bbarraga59@yahoo.com

RESUMEN

Durante el procesamiento de textiles, la ineficacia del teido, conduce a la eliminacin de grandes cantidades los
colorantes textiles sobre las aguas de desecho de la planta. Se estima que del 10 al 15 % de los colorantes son
eliminados durante los procesos de teido, lo que causa un gran problema de contaminacin ambiental. De los
colorantes aplicados en la industria textil, los azocolorantes ocupan el 70% de la cantidad total utilizada.
Los colorantes azo, son compuestos orgnicos recalcitrantes que requieren la combinacin de procesos
anaerobios y aerobios para alcanzar su completa degradacin (mineralizacin). Con el uso secuencial de
procesos anaerobios y aerobios puede lograrse la mineralizacin de los azocolorantes, aplicando generalmente
consorcios microbianos.
Existen pocos reportes que muestren la capacidad de microorganismos facultativos para mineralizar colorantes
azoicos, as como el efecto de las condiciones de cultivo. En el presente trabajo, se aplic un diseo factorial de
2
3
para analizar el efecto de la agitacin, presencia de nutrientes y presencia de oxigeno en el medio sobre la
degradacin de Naranja II y el acido sulfanlico, uno de sus productos de reduccin del Naranja II, por medio de
Enterobacter sp. De acuerdo con los resultados, la cepa reduce el Naranja II en condiciones anxicas pero no
tiene efecto significativo sobre el Ac. sulfanlico en las mismas condiciones, que es degradado en condiciones
xicas. La presencia de nutrientes no es significativa en ninguno de las dos condiciones, lo que sugiere que
Enterobacter sp. es capaz de utilizar Naranja II como nica fuente de carbono y energa.

Palabras clave: Enterobacter sp., azocolorantes, anxico-oxico, diseo factorial

SUMMARY

During the textile processing, the inefficiency of dyeing, leads to the elimination of great amounts of textile dyes
in the wastewater. It is considered that 10 to 15% of the dyes are eliminated during the dyeing processes, which
causes a great problem of environmental pollution. The azodyes represent the 70% the total amount of the dyes
applied in the textile industry. The azodyes, are recalcitrant organic compounds that require the combination of
anaerobic and aerobic processes to reach their complete degradation (mineralization). With the sequential use of
anaerobic and aerobic processes the mineralization of the azodyes can be obtained, applying generally microbial
consortia. There are a few reports about the capacity of facultative microorganisms to mineralize azodyes, as well
as the effect of the culture conditions. In the present work, a factorial design of 2
3
was applied to analyze the
effect of the agitation, aeration and presence of nutrients on the degradation of Orange II and sulfanlic acid, one
of its products of reduction of Orange II, by Enterobacter sp. According with the results, this strain reduces
Orange II in anoxic conditions, but it does not have significant effect on the sulphanilic acid in the same
conditions, which is degraded in oxic conditions. The presence of nutrients is not significant in both conditions,
which suggests Enterobacter sp. is able to use Orange II as sole source of carbon and energy.

Keyword: Enterobacter sp, azodyes, Orange II, anoxic-oxic, factorial design





Efecto de las condiciones de cultivo sobre la biodegradacin del azocolorante
Naranja II en un sistema combinado anxico/xico. Gutirrez, Rodrguez, Rodrguez y Barragn


INTRODUCCIN

Debido a la creciente explosin demogrfica y lo
que esto demanda, a partir de la revolucin
industrial, con la aparicin de las maquinas, en
general los recursos tanto renovables como no
renovables se han visto afectados en cantidad y en
calidad.

Ao con ao se reportan valores mas bajos del agua
disponible para el consumo humano, esto derivado
de la contaminacin a cuerpos de agua dulce tales
como ros, lagos, etc. Esto es principalmente por las
descargas de aguas residuales con condiciones no
controladas por parte de industrias y poblaciones
enteras.

Desde siempre la humanidad ha utilizado colorantes
para pintar y teir su cuerpo, pieles y ropa. Hasta a
mediados del siglo XIX todos los colorantes
utilizados eran de origen natural. Los colorantes
naturales por su origen orgnico han adquirido a
travs del tiempo una gran importancia por sus
mltiples utilidades especialmente con los
colorantes textiles, estos son aromticos y en su
mayora obtenidos de plantas, de insectos y de
algunos hongos.

La importancia de los colorantes naturales en la
industria textil desapareci con el uso de los
colorantes sintticos empleados en distintas fibras.
La produccin de nuevas fibras textiles y de
colorantes sintticos trajo consigo problemas de
salud en un pequeo porcentaje del publico usuario
quien ha presentado reacciones alrgicas a las fibras
y colorantes antes mencionados.

Durante los ltimos 10 o 15 aos, el uso de los
colorantes sintticos en el mbito mundial se ha
incrementado en forma casi explosiva, debido a la
exigencia de su utilizacin en las industrias
alimenticias, farmacuticas y cosmticas
establecidas por las legislaciones de los diferentes
pases.

La mayora de los colorantes se deben a la
absorcin de ciertas longitudes de onda de luz
visible por los compuestos orgnicos, antes de que
se desarrollaran las teoras de las transiciones
electrnicas, se haba observado que ciertos tipos de
estructuras orgnicas tendan a originar color
mientras que otras no. Estas estructuras parciales
necesarias para la aparicin de color (que no son si
no grupos insaturados capaces de experimentar
transiciones o n- ) fueron denominas
cromforos, termino creado en 1876 a partir de las
races griegas chroma, color y foros, soportar.

Se observ tambin que la presencia de algunos
otros grupos daba lugar a una intensificacin de
color. Estos grupos fueron denominados
auxocromos (del griego auxanein, aumentar).
Actualmente sabemos que estos grupos auxocromos
son entidades que no pueden experimentar
transiciones pero si transiciones de electrones
n.

Los azocolorantes son un grupo extenso de
colorantes sintticos que se forman a partir de la
anilina, todos los compuestos azo tienen la frmula
general de un colorante pero con la caracterstica
del grupo - N=N en medio de dos anillos
aromticos: Ar-N=N-Ar.
La eliminacin de estos compuestos se da por dos
mecanismos:
Reduccin: es una reaccin qumica
correspondiente a la accin de un cuerpo
oxidante sobre un cuerpo reductor, que da
lugar a la reduccin del oxidante y a la
oxidacin del reductor. Al reducirse la
especie qumica gana uno o ms
electrones.
Mineralizacin: es la degradacin de
materia orgnica a dixido de carbono,
agua o hidrcidos, xido o sales minerales
de otros elementos existentes, que se da
por la accin de los microorganismos
degradadores de los ecosistemas.
La reduccin de los azo-colorantes se da
preferentemente en condiciones anxicas (medios
sin oxgeno) y la mineralizacin de las aminas
resultantes en condiciones xicas (medios con
oxgeno). Con el uso secuencial de procesos
anaerobios y aerobios puede lograrse la
mineralizacin de los azocolorantes, aplicando
generalmente consorcios microbianos.
Existen pocos reportes que muestren la capacidad
de microorganismos facultativos para mineralizar
colorantes azoicos, as como el efecto de las
condiciones de cultivo. En el presente trabajo, se
aplic un diseo factorial de 2
3
para analizar el
efecto de la agitacin, presencia de nutrientes y
presencia de oxgeno en el medio sobre la
degradacin de Naranja II y el cido sulfanlico, uno
de los productos de reduccin del Naranja II, por
Revista Sistemas Ambientales, Vol. 1, No. 2, 2007 p. 40-47


medio de el microorganismo facultativo
Enterobacter sp.
El Naranja II es un azocolorante de formula qumica
C
16
H
11
N
2
NaO
4
S, peso molecular: 350,32mol/gr,
estado fsico: polvo amarillo, punto de fusin: 164
o
C, solubilidad en agua: soluble (116 g/l), cdigo de
identificacin: salud: 1, inflamabilidad: 0,
reactividad: 0.







El mecanismo de reduccin microbiolgica de dicho compuesto es el siguiente:

Reduccin del Azo colorante Naranja II.
La medicin de la amina formada en la reduccin es
poco viable, por lo que un mtodo mas conveniente
para medir la mineralizacin del azocolorante, es
valorando la aparicin y disminucin del cido
sulfanlico.

El mecanismo de mineralizacin del colorante a
partir de su reduccin y la consecuente formacin
de c. sulfanlico es:


Mineralizacin del cido sulfanlico.

Para la remocin de los colorantes en los efluentes
de agua se han planteado diversas tcnicas las
cuales abarcan desde tratamientos fisicoqumicos
como son: filtracin con membrana, coagulacin /
floculacin, precipitacin, flotacin, absorcin,
intercambio inico, extraccin por par inico,
mineralizacin ultrasnica, electrlisis, oxidacin
fotocataltica, as como reduccin qumica; por otra
parte se encuentran las tcnicas biolgicas que
incluyen la biosorcin y biodegradacin bacteriana
y fngica en tratamientos aerobios, anaerobios y
anxicos.
cido sulfanlico
O
2
H
2
O +H
+
+CO
2
+NO
-3
+SO
4
2-

H2O
cido sulfanlico

Rombo de Seguridad del
Azo Colorante Naranja II
Estructura del Azo Colorante
Naranja II
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Naranja II en un sistema combinado anxico/xico. Gutirrez, Rodrguez, Rodrguez y Barragn



Para el caso de los tratamientos fisicoqumicos, se
debe tener otro tratamiento o realizar una
disposicin final del residuo, lo cual solo cambia el
lugar la contaminacin mas no el problema real, por
lo que pueden llegar a ser demasiado costosos o no
viables. (P. van der Zee Frank, 2002).

As, las tcnicas mencionadas de forma individual
no proporcionan una eficiencia de decoloracin
aceptable por lo que se han investigado otros
procesos como el de adsorcin-biodegradacin que
han dado buenos resultados (Barragn et al., 2007).
A pesar de ello se requiere un mayor estudio sobre
las condiciones de proceso que garanticen la
transformacin de los contaminantes a subproductos
no txicos o mejor an hacia su la mineralizacin.


Es precisamente de este punto de donde estriba la
importancia del presente proyecto; ya que al
plantear una mineralizacin del mineralizacin del
Naranja II se pretende la eliminacin del mismo sin
generacin de productos ms txicos o
contaminantes al medio ambiente y a la salud
humana.

Se sabe por las investigaciones realizadas por
ONeill C, et al. (2000) que la decoloracin de lo
azocolorantes se da en condiciones anxicas y la
eliminacin de las aminas resultantes de dicho
proceso se da en condiciones xicas, por lo que es
clave para el planteamiento de cualquier sistema de
tratamiento para estos compuestos basados en estas
condiciones es tener el conocimiento de las
variables a controlar para alcanzar la mayor
eficiencia, para lo cual se requiere de un estudio
multifactorial entre las principales variables que
afectan el crecimiento, reproduccin y metabolismo
de la especie bacteriana en estudio a fin de
seleccionar las variables que controlan
significativamente el proceso (agitacin, nutriente y
oxgeno), tomando como modelo al azocolorante
Naranja II.

Objetivo

Determinar mediante un diseo factorial el efecto de
la presencia de nutrientes, agitacin y oxgeno en la
mineralizacin del azocolorante Naranja II
utilizando la bacteria facultativa Enterobacter sp.

METODOLOGA

Se prepararon los medios de cultivo para el anlisis
factorial: nutritivo y mineral con Naranja II, as
como nutritivo y mineral con ac. sulfanlico, con la
siguiente composicin:

Medio Tratamiento Nutrientes
(1)
Sales
(2)
Naranja II Sulfanlico
NARANJ A II
Con nutirentes 30mg
Sin nutrientes 30mg
Acido
Sulfanlico
Con nutrientes 30mg
Sin nutrientes 30mg


(1)
Nutrientes
110mg/L Extracto de Carne
30mg/L de Urea

(2)
Sales
28mg/L K
2
HPO
4

7mg/L NaCl
4mg/L CaCL
2mg/L MgSO
4

30mg/L Naranja II cido sulfanlico

Una vez preparados los medios a cada matraz se le
agregaron 20mL del medio (1/3 de su capacidad),
los que se sometieron a ambiente anxico se
sellaron con tapones de hule y arillos de aluminio
para evitar infiltraciones de oxgeno y se realiz el
cambio de atmsfera con nitrgeno.

Para los matraces cuyo tratamiento fue xico se
agrego la misma cantidad de medio y solo se
taparon con algodn y capuchones de aluminio.

Con los matraces ya listos se inocul con 1mL de
concentrado de clulas en condiciones de asepsia.
Se separaron los que serian sometidos a agitacin y
Revista Sistemas Ambientales, Vol. 1, No. 2, 2007 p. 40-47


fueron puestos en una incubadora a 96 rpm a una
temperatura de 30C, misma temperatura a la que se
mantuvieron los matraces que no requeran
agitacin

Se realiz la toma de lecturas iniciales de
absorbancia para las variables de respuesta
mediante una espectrofotmetro a diferentes
longitudes de onda, para Naranja II a 480nm, Acido
sulfanlico a 247 nm y biomasa a 600nm. Los
tratamientos se mantuvieron por 21 das y se
obtuvieron las lecturas finales de las variables de
respuesta, con dichas lecturas de absorbancia se
obtuvieron las concentraciones por medio de la
curva tipo de cada una de las variables.

Por ltimo se procedi al anlisis de los resultados
obtenidos por medio de un software estadstico.

RESULTADOS Y DISCUSIN

El estudio multifactorial aplicado tanto Naranja II
como a cido sulfanlico arrojo los datos que en las
siguientes tablas se presenta, cabe mencionar que en
la tabla 1 se presentan los datos del % de remocin
y de la concentracin de cido sulfanlico presente
en el tratamiento de Naranja II ya que el producto
de la reduccin del colorante es el cido sulfanlico.

Tabla 1.Tratamientos con Naranja II
Porcentaje de remocin de Naranja II, y concentracin de cido sulfanlico
Naranja II sulfanlico Naranja II sulfanlico
TRATAMIENTO % R [mg/L] TRATAMIENTO % R [mg/L]
ANOXICO/SA/CN 33,070,91 17,8380,477 XICO/SA/CN 4,310,93 6,6090,109
ANOXICO/SA/SN 32,233,83 17,0730,939 XICO/SA/SN 7,561,06 9,5330,541
ANOXICO/CA/CN 38,024,37 18,3170,430 XICO/CA/CN 4,481,22 10,0210,819
/ANOXICOCA/SN 30,321,03 18,4780,969 XICO/CA/SN 4,190,95 8,4700,964

En la grafica 1 se puede observar que en los medios
anxicos el porcentaje de remocin del colorantes
es mucho mayor que en el caso de postratamientos
anxicos, lo cual se ve corroborado con las
concentraciones de acido sulfanlico que se
formaron en los medios por la reduccin del
Naranja II

Grafica 1. Resultados para el tratamiento con Naranja II

MULTIFACTORIAL NARANJA II
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
SA/CN SA/SN CA/CN CA/SN
TRATAMIENTO
% de Remocin de Naranja II ANOXICO mg/L de Acido Sulfanilico Formado ANOXICO
% de Remosin OXICO mg/L de ACIDO Sulfanilico Formado OXICO
Efecto de las condiciones de cultivo sobre la biodegradacin del azocolorante
Naranja II en un sistema combinado anxico/xico. Gutirrez, Rodrguez, Rodrguez y Barragn


En la tabla 2 se muestran los resultados obtenidos
para los distintos sistemas con cido sulfanlico,
expresados como % de remocin que se refiere a la
transformacin del cido.

Tabla 2. Tratamientos con cido sulfanlico
Promedios tratamiento cido sulfanlico
sulfanlico
TRATAMIENTO % Remocin TRATAMIENTO % Remocin
ANOXICO/SA/CN 11,921,97 XICO/SA/CN 39,652,2224
ANOXICO/SA/SN 20,550,91 XICO/SA/SN 32,621,5114
ANOXICO/CA/CN 21,720,61 XICO/CA/CN 30,770,2494
/ANOXICOCA/SN 18,020,79 XICO/CA/SN 25,561,3182


Grafica 2. Resultados para el tratamiento con acido sufanlico

En el caso de la remocin de cido sulfanlico se
puede observar que, por el contrario que en el caso
de Naranja II el mayor porcentaje este se da en
condiciones xicas jugando entones, la presencio o
ausencia de oxigeno un papel fundamental en la
mineralizacin del colorante Naranja II.

Los resultados de biomasa para ambas sustancias se
muestran en las graficas 3 y 4:
MULTIFACTORIAL AC. SULFANILICO
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
SA/CN SA/SN CA/CN CA/SN
Tratamiento
%

d
e

R
e
m
o
s
i

n
ANXICO XICO
Revista Sistemas Ambientales, Vol. 1, No. 2, 2007 p. 40-47


Grafica 3. Biomasa en tratamientos con Naranja II


Grafica 4. Biomasa en tratamientos con acido sulfanlico

Biomasa Multifactorial Ac.Sulfanilico
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
A
N

X
I
C
O
/
S
A
/
C
N
A
N

X
I
C
O
/
S
A
/
S
N

X
I
C
O
/
S
A
/
C
N

X
I
C
O
/
S
A
/
S
N
A
N

X
I
C
O
/
C
A
/
C
N
A
N

X
I
C
O
/
C
A
/
S
N

X
I
C
O
/
C
A
/
C
N

X
I
C
O
/
C
A
/
S
N

A
b
s
.
Biomasa Multifactorial Naranja II
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
A
N

X
I
C
O
/
S
A
/
C
N
A
N

X
I
C
O
/
S
A
/
S
N

X
I
C
O
/
S
A
/
C
N

X
I
C
O
/
S
A
/
S
N
A
N

X
I
C
O
/
C
A
/
C
N
A
N

X
I
C
O
/
C
A
/
S
N

X
I
C
O
/
C
A
/
C
N

X
I
C
O
/
C
A
/
S
N

A
b
s
.
Efecto de las condiciones de cultivo sobre la biodegradacin del azocolorante
Naranja II en un sistema combinado anxico/xico. Gutirrez, Rodrguez, Rodrguez y Barragn


Por ultimo se puede observar en las graficas 3 y 4
que el mayor crecimiento bacteriano se dio en las
condiciones optimas de reduccin tanto para el
colorante Naranja II (anxico) y para el cido
sulfanlico (oxico) incrementndose esta tendencia
con la presencia de nutrientes.

CONCLUSIONES

Despus de desarrollada la fase experimental del
proyecto se obtuvo que:

Para la reduccin del azocolorante Naranja
II es necesario que el medio no tenga
presencia de oxgeno, es decir un medio
Anxico.

Para la transformacin del cido sulfanlico
es necesario que en el medio haya la
presencia de oxgeno, es decir un medio
xico.

La presencia o no de agitacin o nutrientes
no tienen un efecto significativo (p>0.05)
en la reduccin ni en la mineralizacin del
Naranja II y c. sulfanlico
respectivamente.

La presencia de nutrientes no es
significativa (p>0.05), en ninguno de las
dos condiciones, lo que sugiere que
Enterobacter sp. es capaz de utilizar al
colorante como nica fuente de carbono y
energa.


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