INTRODUCCION

El cido ribonucleico (ARN) y el cido desoxirribonucleico (ADN) son macromolculas

que intervienen en el almacenamiento y la transferencia de la informacin gentica,
son componentes fundamentales de la clula y constituyen entre el 5 y 10% del
proceso. Normalmente no se encuentran solos si no que se encuentran formando
nucleoprotenas, ya que suelen unirse a determinados tipos de estas como las
histonas.

El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el ncleo, mitocondrias y
cloroplastos, mientras que el ADN se sita fundamentalmente en el ncleo de la clula
y tambin en cloroplastos mitocondrias en pequeas cantidades. Los grupos fosfato
secundarios que se repiten en el DNA y constituyen los puentes entre nucletidos
adyacentes, tienen un pK bastante bajo y se ionizan por completo a pH bastante
superior a 4. El DNA es el almacn de la informacin gentica, mientras que el RNA
es el que interviene en la expresin de esa informacin.

El ADN se desnaturaliza fcilmente y debe trabajarse con cuidado para obtener un
producto estructuralmente semejante al encontrado en la clula. Debe eliminarse la
tensin mecnica y condiciones fsicas y qumicas extremas y deben inhibirse las
nucleasas. Se puede agregar citrato de sodio para ligar Ca++ y Mg++ los cuales son
cofactores de las DNasa. Las nucleoprotenas son solubles en agua y soluciones de
alta concentracin inica, pero son insolubles en soluciones de baja concentracin
inica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extraccin.
Las nucleoprotenas de DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, pero
son insolubles en soluciones salinas diluidas.

Una fuente importante de nucleoprotenas son los tejidos ricos en ncleos (leucocitos,
espermatozoides, clulas hepticas, etc.). En soluciones salinas concentradas las
desoxirribonucleoprotenas forman disoluciones muy viscosas y se solubilizan en
soluciones salinas diluidas.


Al ser precipitadas, las nucleoprotenas se sedimentan en forma de hilos. Una de las
tcnicas empleadas para diferenciar nucleoprotenas de DNA de las nucleoprotenas
de RNA es la reaccin con difenilamina, que frente a las nucleoprotenas de DNA da
una coloracin azul a diferencia del color verde que da frente a las nucleoprotenas de
RNA.

Se ha empleado frecuentemente la reaccin de difenilamina de Dische, esta depende
de la formacin de color azul al calentar DNA con difenilamina en disolucin acida. La
presencia de azcar reducido se detecta ms en los nucletidos de purina que en los
de piridina. Para incrementar la sensibilidad de la reaccin y reducir la interferencia de
otros compuestos se aade acetaldehdo y se deja quela reaccin se lleve a cabo a
100C la reaccin transcurra durante varias horas a 30C.
En presencia de NaCl 1M la polilisina interacciona especficamente con el DNBA rico
en A + T pudiendo precipitarlo de una mezcla con DNA rico en G+C. por otra parte la
poliarginina interacciona preferentemente con el DNA rico en G+C.

La concentracin de ADN en la muestra se puede estimar con la reaccin de la
difenilamina. Este colorante reacciona selectivamente con 2-desoxipentosas. En
disolucin cida la desoxipentosa se convierte en el altamente reactivo -
hidroxilevulnaldehdo que reacciona con la difenilamina para dar un compuesto azul.
Una curva patrn de concentraciones conocidas de DNA nos permitir determinar el
contenido en DNA del problema por interpolacin sobre la recta patrn de las
densidades pticas de la disolucin problema.

MATERIALES Y REACTIVOS.
Hgado de rata
Mortero con pistilo
Vidrio de reloj
Vaso de precipitados de
500 ml
Vaso de precipitado de
250 ml
Bureta
Tubos para centrfuga
Pinzas para tubo de
ensaye
Bao mara
Gradilla
Pipetas de 5 y 10 ml
NaCl 1 N
Agua destilada
Reactivo de difenilamina
NaOH al 4%
FICHAS DE SEGURIDAD
DIFENILAMINA



CLORURO DE SODIO NaCl




HIDROXIDO DE SODIO NaOH




PROCEDIMIENTO

1) DE NUCLEOPROTEINA DE DNA
1. Pesar 10g de hgado de conejo, triturarlo durante 10-15 minutos, agregando
poco a poco 70 ml de NaCl.
2. Transferir la solucin a tubos para centrfuga. Centrifugar los tubos durante
10 minutos a 2500 rpm.
3. Decante el lquido cobre la probeta y mida el volumen obtenido.
4. En el vaso de precipitado de 500 ml agregue una relacin de 6 ml de agua
por ml de sobrenadante obtenido.
5. Vierta lentamente el sobrenadante en el agua que est en el vaso de
precipitado y girando lentamente con la varilla de madera trate de enrollar los
hilos de nucleoprotena.



2) REACCIN DE RECONOCIMIENTO DE DNA
1. Filtre el precipitado de nucleoprotenas obtenido anteriormente.
2. Tome una pequea cantidad del precipitado y disulvalo en un tubo de
ensaye con 1 ml de NaOH al 4%.
3. Aada 1 ml de reactivo de difenilamina y ponga el tubo durante 15 o 20
minutos en bao mara hirviendo.
4. La aparicin de una coloracin azul indica la presencia de DNA.






AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEINA DE DNA
OBSERVACIONES Y RESULTADOS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

Mediante el empleo de esta tcnica primero se indujo el rompimiento de las
membranas celulares para liberar los ncleos y despus se coloc en una solucin
hipertnica (NaCl) lo cual produjo que se estallaran las membranas para que se
liberara el DNA y se centrifugo para que se separara el DNA del resto de los
orgnulos, mediante esta tcnica se permite la formacin de pequeos hilos de la
nucleoprotena del DNA que se evidencio al colocar el sobrenadante en el medio
acuoso.

CONCLUSION
De acuerdo a lo obtenido experimentalmente se pudo observar la formacin de los
pequeos hilos de DNA, que es el propsito principal de la prctica, lo cual comprueba
el proceso para el aislamiento de la nucleoprotena de DNA presente en el hgado y
que posteriormente fue empleada en la siguiente parte experimental.








REACCION DE RECONOCIMIENTO DE DNA
OBSERVACIONES Y RESULTADOS Y DISCUSIN DE RESULTADOS



Despus del proceso del aislamiento del DNA, una porcin del material aislado se hiso
reaccionar con el reactivo difenilamina el cual origina que la cadena lineal de una
desoxipentosa se convierte a la forma -hidroxilevulinoaldehido altamente reactiva,
que reacciona con difenilamina para dar un complejo azul, lo cual evidencia la
presencia del ADN.
CONCLUSION
Al trmino de la parte experimental se puede concluir que mediante esta tcnica, se
permiti evidenciar de una forma cualitativa la presencia del DNA mediante la
presencia de una coloracin tenue de color azul gracias a la formacin de un complejo
con el reactivo de difenilamina, con lo que se puede concluir que se alcanz en
propsito de la prctica, determinar la presencia del DNA




CUESTIONARIO

1.- ESCRIBA A ESTRUCTURA DE LOS 4 NUCLETIDOS QUE PODEMOS
ENCONTRAR EN EL DNA.
El nucletido en el ADN consiste en un azcar (desoxiribosa), una de cuatro bases
(citosina (C), timina (T), adenina (A), guanina (G)), y fosfato. La citosina y la timina son
bases pirimdicas o pirimidinas, mientras que la adenina y la guanina son bases pricas o
purinas. El azcar y la base juntas, constituyen un nuclesido.



2.- QU FUNCIN TIENEN LOS CROMOSOMAS?
La funcin de los cromosomas consiste en facilitar el reparto de la informacin
gentica contenida en el ADN de la clula madre a las hijas.


3.- CUL ES LA COMPOSICIN DE LOS CROMOSOMAS?
Los cromosomas son estructuras en forma de bastn que aparecen en el momento de
la reproduccin celular, en la divisin del ncleo. Estn constituidas qumicamente por
ADN ms histonas, puesto que son simplemente cromatina condensada.

4.- QU DIFERENCIA EXISTE ENTRE LOS NUCLETIDOS DE DNA Y LOS DE
RNA?
La adenina y la timina son complementarias (A=T), unindose gracias a dos puentes
de hidrgeno, mientras que la guanina y la citocina (G=C) se unen mediante tres
puentes de Hidrgeno, dado que en el ARN no existe TIMINA la complementariedad
se establece entre adenina y URACILO (A=U) mediante dos puentes de hidrgeno.


CONCLUSIN GENERAL
De acuerdo con los objetivos planteados se pudo observar al as nucleoprotenas con
la formacin de hilos de color blanco en el vaso de precipitado, al agregarle agua; y
tambin se pudo observar si era DNA o RNA mediante el reactivo de difenilamina
observando un color azul (en peste caso) para DNA. y verde para RNA.