GENERALIDADES

La implementacin de la inmunidad requiere el concurso de una serie de elementos

(antgenos, anticuerpos, receptores de clulas T, protenas de histocompatibilidad,
complejos de diferenciacin, linfocitos, macrfagos, neutrfilos, eosinfilos, basfilos,
mastocitos, citoquinas, etc.) que ejercen funciones promotoras, reguladoras o efectoras.
Los antgenos de origen externo (exgenos) requieren la asistencia de las protenas de
histocompatibilidad de clase I (PI) para estimular los receptores de los linfocitos
T cooperadores (Tco). Los antgenos de origen interno (endgenos) requieren la asistencia
de las protenas de clase II (PII) para estimular a los linfocitos T citxicos (TC). Los
complejos de diferenciacin asisten en esta estimulacin. Los anticuerpos actan como
receptores de antgenos para iniciar respuestas inmunes secundarias, activan el
complemento, facilitan la unin de clulas parasitolticas con los parsitos, inician
inflamaciones anafilcticas, y actan como efectores contra parsitos extracelulares. Los
linfocitos B producen anticuerpos y activan a los linfocitos Tco. Los linfocitos Tco
promueven y regulan las respuestas mediadas por clulas y las respuestas humorales
mediante la produccin de citoquinas. Los linfocitos TC Usan ciertas clulas parasitadas.
Los linfocitos T supresores (TS) inhiben la reproduccin de los linfocitos y terminan la
respuesta inmune. Los macrfagos inician la estimulacin de los linfocitos Tco, regulan la
respuesta mediadas por clulas o por anticuerpos, fagocitan parsitos pequeos, y lisan
parsitos grandes. Los neutrfilos y eosinfilos lisan parsitos grandes, estn cubiertos por
anticuerpos o factores del complemento.
Los basfilos y mastocitos capturan anticuerpos IgE y se degranulan cuando stos se
combinan con sus antigenos. La degranulacin causa una inflamacin anafctica que
atrae clulas, anticuerpos y complemento que expulsan o daan los parsitos
extracelulares.

CONTROL DE LAS REACCIONES INMUNES EN PARASITOLOGA
La evidencia sugiere que las respuestas del hospedero a la invasin por un parsito
proceden en la siguiente secuencia: 1. Reaccin de fase aguda, 2. Activacin de los
linfocitos Tco precursores (TcoP), 3. Reactivacin de los linfocitos Tco activados (TcoA), 4.
Activacin de los linfocitos Tco de tipo 1 o de tipo 2(Tcol o Tco2), 5. Respuesta inmune
mediada por clulas o por anticuerpos y 5. Resolucin de la infeccin, cronicidad o muerte
del hospedero.
La reaccin de fase aguda es una inflamacin inespecfica rica en macrfagos, neutrfilos y
linfocitos, mediada por la reproduccin de las interleuquinas(IL) 1,6,y 8, y el factor de
necrosis tumoral. Estas sustancias son liberadas por los macrfagos, endoteliocitos,
fibroblastos y plaquetas cuando son estimulados por la presencia o metabolitos de un
parsito.
Los TcoP son linfocitos Tco que son estimulados porla primera vez. Los estmulos son el
contacto con el antgeno que ha sido procesado por un macrfago y conjugado con una
protena de clase II y la IL-1 producida por el macrfago. Los TcoP se multiplican y
diferencian a TcoO. Citoquinas del macrfago y del linfocito TcoP mantienen y amplifican
la inflamacin existente.
Cuando los linfocitos TcoO son activados nuevamente por el mismo antigeno secretan una
serie de citoquinas, que estimulan las respuestas mediadas por clulas y humorales. El
estimulo antignico persistente los hace multiplicarse y diferenciarse hacia linfocitos Tcol
o Tco2.
Cuando los linfocitos Tcol reencuentran su antgeno especfico secretan citoquinas que
estimulan una inflamacin por macrfagos, linfocitos TC, y otras clulas (inmunidad
mediada por clulas). Cuando los linfocitos Tco2 reencuentran su antgeno especfico
secretan citoquinas que estimulan la produccin de anticuerpos y de una inflamacin rica
en eosinfilos y mastocitos (inmunidad humoral).
La implementacin de la inmunidad requiere el concurso de una serie de elementos
(antgenos, anticuerpos, receptores de clulas T, protenas de histocompatibilidad,
complejos de diferenciacin, linfocitos, macrfagos, neutrfilos, eosinfilos, basfilos,
mastocitos, citoquinas, etc.) que ejercen funciones promotoras, reguladoras o efectoras.
Los antgenos de origen externo (exgenos) requieren la asistencia de las protenas de
histocompatibilidad de clase I (PI) para estimular los receptores de los linfocitos T
cooperadores (Tco). Los antgenos de origen interno (endgenos) requieren la asistencia
de las protenas de clase II (PII) para estimular a los linfocitos T citxicos (TC). Los
complejos de diferenciacin asisten en esta estimulacin. Los anticuerpos actan como
receptores de antgenos para iniciar respuestas inmunes secundarias, activan el
complemento, facilitan la unin de clulas parasitolticas con los parsitos, inician
inflamaciones anafilcticas, y actan como efectores contra parsitos extracelulares. Los
linfocitos B producen anticuerpos y activan a los linfocitos Tco. Los linfocitos Tco
promueven y regulan las respuestas mediadas por clulas y las respuestas humorales
mediante la produccin de citoquinas. Los linfocitos TC Usan ciertas clulas parasitadas.
Los linfocitos T supresores (TS) inhiben la reproduccin de los linfocitos y terminan la
respuesta inmune. Los macrfagos inician la estimulacin de los linfocitos Tco, regulan la
respuesta mediadas por clulas o por anticuerpos, fagocitan parsitos pequeos, y lisan
parsitos grandes. Los neutrfilos y eosinfilos lisan parsitos grandes, estn cubiertos por
anticuerpos o factores del complemento.
Los basfilos y mastocitos capturan anticuerpos IgE y se degranulan cuando stos se
combinan con sus antigenos. La degranulacin causa una inflamacin anafctica que
atrae clulas, anticuerpos y complemento que expulsan o daan los parsitos
extracelulares.
INMUNIDAD HUMORAL Y CELULAR, SUSTANCIAS HUMORALES
INESPECFICAS
En la seccin previa se han descrito los principales componentes del sistema inmunitario.
en esta se resume con las caractersticas mas importantes de las respuestas inmunitarias
normales esta visin general servir como base de la descripcin posterior de las
enfermedades causadas por unas respuestas inmunitarias deficientes o incontroladas.
RESPUESTA INMUNITARIA INNATA TEMPRANA A LOS MICROBIOS:
Las principales barreras entre los huspedes y su entorno son los epitelios de la piel, el
tubo digestivo y el aparato respiratorio.
Normalmente los microbios infecciosos entran por alguna de esas vas e intentan colonizar
a los huspedes. Los mecanismos de la inmunidad innata actan en cada paso que da el
microbio cuando intenta invadir al husped. En el punto de entrada, el epitelio acta en
cada paso que da el microbio Cuando intenta invadir al husped. En el punto de entrada,
el epitelio acta como barrera fsica contra las infecciones y para eliminar los microbios
mediante la produccin de antibiticos peptdicos y las acciones de los linfocitos
intraepiteliales si los microbios pueden sobrevivir y atravesar esos epitelios, se
encontraran clulas fago citicas, incluidos los neutrfilos, que son reclutados con rapidez
desde la sangre hasta los tejidos, y macrfagos que viven en los tejidos bajo el epitelio. La
funcin de esas clulas fago citicas consiste en ingerir los microbios y destruirlos mediante
la produccin de sustancias microbicidas. En respuesta a reconocimiento de los microbios,
los fagocitos, las CD y muchos otros tipos de clulas segregan protenas denominadas
citosinas (descritas mas adelante), que favorecen la inflamacin y muerte microbiana, al
mismo tiempo que potencien las respuestas inmunitarias protectoras. Las clulas utilizan
varios receptores para detectar los microbios. Entre ellos, los mas importantes son los
receptores de tipo toll (TLR), que reciben este nombre por su homologa con la protena
TOLL de drosofila que reconoce los componentes bacterianos y vricos, las clulas NK
matan las clulas infectadas por virus y producen la citosina IFN psilon activadora de
macrfagos. Si los microbios entran en la sangre, muchas protenas plasmticas, incluida
la del sistema de complemento, los reconoce y se activan y sus productos los matan y
revisten (opsonisan) para la fagocitosis. Adems de combatir las infecciones, las
respuestas inmunitarias innatas estimulas la inmunidad adaptativa posterior de modo que
se proporcionan las seales que son esenciales para iniciar la respuesta de los linfocitos T
y B especficas del antgeno
CAPTURA Y PRESENTACIN DE ANTGENOS MICROBIANOS
Los microbios que entran a travs de los epitelios son capturados, junto con sus antgenos
proteicos, por la CD que residen en esos epitelios y por debajo de ellos. La CD portadoras
del antgeno migran hacia los ganglios linfticos que drenan los tejidos. Los tejidos
proteicos son digeridos por enzimas proteolticas de las CPA para generar pptidos que
son mostrados en la superficie de la CPA ligados a las molculas de CPH. Los antgenos de
compartimentos celulares distintos son presentados por diferentes molculas de CPH y
reconocidos por sub poblaciones de linfocitos T tambin distintas. Los antgenos que son
ingeridos a partir del medio ambiente extracelular son procesados en las vesculas
endosmicas y lisosmicas, y se muestran unidas a las molculas de CPH de clase II, los
linfocitos T colaboradores CD4 + reconocen los pptidos asociados a la clase II, que,
generalmente, derivan de protenas ingeridas. En contraste, los antgenos en el citoplasma
son mostrados por las molculas de CPH de clase I y reconocidos por los linfocitos T
citotoxicos CD8, porque CD8 se une a molculas del CPH de clase I. sta segregacin de
diferentes antgenos es clave para las funciones especializadas de los linfocitos T CD4 y
CD8, como se describe ms adelante, las dos clases de linfocitos T estn diseadas para
combatir a los microbios que se localizan en los diferentes compartimentos celulares. Los
antgenos proteicos, as como los polisacridos y otros antgenos no proteicos, son
tambin reconocidos por los linfocitos B en los folculos linfticos de los rganos linfoides
perifricos.
En el momento que los antgenos de un microbio son reconocidos por los linfocitos T y B,
los microbios desencadenas una respuesta inmunitaria innata. sta activa la CPA para
expresar molculas coestimuladoras, y segregan citosinas que estimulan la proliferacin y
diferenciacin de linfocitos T. los estimuladores principales de linfocitos T son las
molculas B7 que se expresan en la CPA y reconocidas por el receptor CD28 en los
linfocitos T indiferenciados. La respuesta inmunitaria innata, algunos microbios y
polisacridos tambin da lugar a la activacin del complemento, generando producto de
degradacin que favorecen la proliferacin y diferenciacin de linfocito B. as el antgeno y
las molculas producidas durante las respuestas inmunitarias innatas funcionan en
cooperacin para evitar linfocitos especficos de antgenos.

ANTGENOS PARASITARIOS
Desde principios de siglo han sido objeto de investigacin las actividades biolgicas
einmunolgicas de los antgenos parasitarios,y se ha descubierto que las acciones
recprocasentre antgenos y anticuerpos son mltiplesy complejas, particularmente en
lashelmintiasis (1 II ) . El lquido hidatdicoprocedente de quistes de Echinucoccus
granulosus fue utilizado como antgeno en la prueba de fijacin del complemento (FC) en
1906 (39). Desde entonces, la serologa de parsitos ha aumentado en variedad de
pruebas normalizadas y en clases y tipos deantigenos utilizados. Muchas pruebas
serolgicashan carecido de especificidad, pero actualmente se dispone de pruebas
especficas para algunas infecciones de parsitos (SO). Persiste la necesidad de mejorar en
este dominio. Casi sin excepcin, los antgenos empleados han sido mezclas de muchos
componentes. Se han efectuado investigaciones para aislar y caracterizar los antgenos
parasitarios para el diagnstico.
Se analizarn algunos de estos estudios.
El uso de antgenos parasitarios no se ha limitado a la serologa. Tambin se han utilizado
para estimular la resistencia del husped. Inicialmente, se inyectaron materiales
parasitarios homogeneizados, en bruto, para estimular la inmunidad. Los primeros
investigadores hicieron distincin entre los antgenos somticos obtenidos del cuerpo del
parsito y los antgenos secretores y excretores de los organismos vivos. Se considera a
estos ltimos como los importantes en cuanto a inmunidad. Al disponerse de mejores
tcnicas para el anlisis antignico, las diferencias entre estas dos clases de antgenos
resultaron menos significativas. Hoy clasificamos a los inmungenos parasitarios en
antgenos funcionales y no funcionales. Soulsby analiz muy sagazmente esta
materia. Los antgenos funcionales son los que interesan y, cuando se hayan aislado y
caracterizado por completo, se podr sintetizarlos, o unir un grupo inmungeno sinttico
a un portador biolgico, para fines de vacunacin. Las estimulantes reflexiones de Dineen
y Damian sobre la relacin entre parsito y husped, indican que la reaccin inmunitaria
del husped puede ejercer un efecto selectivo sobre los parsitos que tienen menor
disparidad antignica con el husped. El parsito puede entonces considerarse como un
injerto tisular afortunado que no provoca una reaccin de rechazo por parte del
husped. En una relacin satisfactoria entre husped y parsito, ambos deben
compartirse muchos determinantes antignicos. Si esto es cierto, entonces tienen amplia
signifkacin biolgica los antgenos encu- biertos y la imitacin molecular entre
parsito y husped. La diferenciacin entre los elementos componentes husped y
parsito es importante en la obtencin de antgenos para estudios serolgicos e
inmunolgicos. Antigenos parasitarios no especficos de reaccin cruzada
Los antgenos con gran especificidad en helmintologa son los polisacridos de numerosas
especies que muestran actividad de grupo sanguneo. La actividad biolgica de estos
antgenos fue analizada por Oliver- Gonzlez (87), quien ha aportado muchas de las
observaciones en este campo. Un examen ms reciente es el que llev a cabo Danrian
(26). Campbell (19) analiz el polisacrido del Ascaris suum y hall hexosas y glucosa pero
no cido hexurnico, pentosas, cetosas ni manosas. Kagan et al., tampoco pudieron hallar
pentosa en extractos de polisacridos de A. suum. Se ha notticado que el polisacrido de
Ascaris contiene antgenos de grupo sanguneo del sistema AB0 (86, 113). Oliver-Gonzlez
y Kent (89) presentaron pruebas de que la sustancia A, semejante al isoaglutingeno,
preparada de la cutcula de A. suum, es serolgicamente afn a la colagenasa de
Clostridium. Esos autores analizaron el material de Ascaris en cuanto a su accin especfica
y grado de actvidad inhibitoria frente a las isoaglutmnas A, en sueros humanos de Ios
grupos sanguneos 0 y B, en pruebas de hemaghrtinacin con antisueros frente al factor
de grupo sanguneo y clulas cubiertas de colagenasa, y mediante el anlisis por difusin
en gel. Esto es un ejemplo de sustancias antignicas de reaccin cruzada que se
encuentran en organismos con lejana relacin filogentica que reaccionan
antignicamente en pruebas serolgicas. La colagenasa procedente del Clostridium y el
extracto semejante a la colagenasa obtenido de la cutcula de A. Eumbricoides causaron la
muerte a perros con una reaccin anafilactoide, y ambas sustancias produjeron una
histopatologa similar, como se observ en la autopsia. La naturaleza antignica de
algunos materiales parasitarios se ha llegado a conocer por deduccin y no por
aislamiento directo ni caracterizacin, Otro ejemplo de antgeno compartido entre un
helminto y un microrganismo es el que ofrece la relacin existente entre Trichinella
spiralis y Salmonella typhi (124,125). Como se conoce la estructura antignica de la
especie Salmonella, se ensay una prueba de aglutinacin con dversas Salmonella y un
suero antitriquinoso. Los principales antgenos de reaccin cruzada comprendidos en
estas pruebas fueron el antgeno somtico 12 de Salmonella y, en menor medida, el
antgeno somtico 9. Mediante el antgeno somtico 12 de Salmonella se inmunizaron
satisfactoriamente ratones y ratas contra la infeccin experimental de larvas de T, spiralis.
El antgeno somtico 12 de S. typhi se ha caracterizado por poseer dos molculas de
hidrato de carbono, una que termina en glucosa y la segunda en ramnosa (71) . Heidelberg
et al. (45) describieron otro caso de reactividad cruzada entre Ascaris y pneumococos
(Diplococcus pneumoniae) . Se considera que el glicgeno de Ascaris est relacionado
estrechamente con el glicgeno de los mamferos, compuesto de 12-13 cadenasde glucosil
Ligadas en a (1-6) con numerosas partes de la rama CX (I-%) y con un peso molecular
medio del orden de 9 x 106. Debido al enlace 1-4, l-6, el glicgeno de Ascaris tendr
reacciones cruzadas con varios antisueros de neumococos. Sawada et al. (98, PP) aislaron,
de1 Clonorchis sinensis, una poliglucosa antignicamente activa. El antigeno fue aislado
despus de deslipidiiacin con ter dietlico y extraccin en agua destilada. Se pas luego
el material concentrado por una columna Sephadex G-100, una columna de celulosa CM y
una columna de dietilamnoetilico Sephadex A-50, y se desproteiniz por ex- traccin en
fenol al 90 por ciento. El antgeno de hidrato de carbono puriikado contena 90.6% de
glucosa y quiz 1% de pentosa, ms cantidades insigniikantes de cido nucleico y fsforo.
En el anlisis espectrogrfico infrarrojo, la poliglucosa de C. sinensis ofreci un espectro
casi idntico al de la poliglucosa aislada de Mycobacterium tuberculosis. Algunos
antgenos procedentes de micobacterias presentaron reacciones cruzadas en pruebas
serolgicas de Leishmania (83). En un informe reciente (129) se indicaba que el BCG
podra sustituir a Mycobacterium butyricum, anteriormente utilizado en pruebas
serolgicas de la leishmaniosis. Desde que Yamaguchi (130) notitic en 19 12 la existencia
del antgeno Forssman en las larvas del Gnathosoma spinigerum, se ha demostrado que lo
contienen otros vermes parsitos, inclusive las larvas de T. spiralis (7?), y que se
encuentra tambin en la tercera fase de las larvas de Oesophugostomum dentatum (1 I
O), Hymenolepis diminuta (43) y Schistosoma mansoni (88, 28). Biguet et al. (12)
demostraron la existencia de protena C reactiva en 13 especies, por 10 menos, de
helmintos, inclusive nematodos, trematodos y cestodos. La protena C reactiva est
distribuida muy extensamente en I el reino animal. La existencia de antgenos de reaccin
cruzada en parsitos de especies distintas puede obedecer a diversas causas. La ms obvia
se funda en la reactividad cruzada que es de esperar si los parsitos son filogenticamente
afmes. Otras causas pueden depender simplemente de la existencia fortuitade antgenos
similares entre organismos no a6nes. Sin embargo, si los parsitos tienen huspedes
comunes y, por consiguiente, son afines desde el punto de vista ecolgico, la reactividad
cruzada puede fundarse, incluso, en otras bases. Recientemente se han expuesto dos
hiptesis alternativas para explicar este fenmeno: Damian (26) indic que la causa poda
ser la evoIucin convergente de antgenos encubiertos, y Schad (100) opin que el
desarrollo de inmunidad cruzada no recproca poda ejercer un efecto significativo sobre
la distribucin de un parsito. Por el hecho de poseer antgenos de reaccin cruzada, un
parsito puede ejercer un efecto limitador sobre la distribucin de otro mediante la
respuesta inmunitaria del husped. En el presente trabajo se estudian diversos ejemplos
de esas relaciones parasitarias. Los antgenos del husped existentes en el parsito
pueden constituir un campo definitivo de no especificidad. Kagan et al. (58) demostraron
que el suero de pacientes con una serie de enfermedades del colgenocontena
anticuerpos que experimentaban reaccionescruzadas no especticas con antgenos del
husped que se encuentran en el liquido hidatdico del equinococo. IdenMcacin qumica
de antfgenos de Helminto La identificacin qumica de antgenos parasitarios ha seguido
un curso emprico. En la mayora de los casos, se han utilizado las tcnicas que han
resultado tiles en el aislamiento de antgenos microbianos. Diversos grupos han
investigado los componentes antignicos activos en la prueba defijacin del complemento
para Ia esquistosomiasis . Rieber et aE. (93) separaron de vermes adultos sus fracciones de
lpidos, hidratos de carbono y protenas. Como era de esperar, Idos de las cinco fracciones
de lpidos fijaron el complemento con suero siftltico, pero fueron inactivas frente a los
anticuerpos de esquistosomas. La fraccin de carbohidratos no result reactiva. La
fraccin de protenas insolubles en cido (que puede precipitarse en sulfato amnico
saturado al 30%) contena el componente antignico. Este antgeno era
electroforticamente homogneo. Sleeman (104) prepar un extracto de vermes adultos
de esquistosoma con desoxicolato de calcio, reactivo empleado tambin por Schneider et
al. , efectuando seguidamente el fraccionamiento con etanol y la precipitacin con calcio.
En el anlisis qumico de este antgeno se observ que contena protenas y lpidos en una
proporcin de 2.5: 1. El antgeno purificado no contena hidratos de carbono y despus de
la hidrlisis cida result negativo a purinas y pirimidinas. Como se aplic el mtodo de
Cohn para aislar la fraccin III-O, Sleeman sugiri que el antgeno poda ser una
betalipoprotena o una euglobulina pobre en lpidos. tena alfa del suero humano. La
lipoprotena activa constituy el 2% del peso de los helmintos en seco; su constante de
sedimentacin era de 4.9s y su peso molecular de 193,000 (65-67). De las cercarias y
huevos de S. mansoni, Smithers y Williamson (107, 127) extrajeronun material
polisacrido antignico. Un anlisis extenso indic que el antgeno era un polisacrido
glucano de propiedades semejantes al glucgeno. Un antgeno similar fue preparado
para la prueba intradrmica por Pellegrino et al. (92), de cercarias de S. mansoni. Estos
investigadores dedujeron de sus estudios que algunos componentes qumicos distintos de
los hidratos de carbono intervenan activamente en la prueba cutnea del esquistosoma.
Kagan y Goodchild (55)) evaluaron el contenido de polisacridos de una serie de antgenos
que se ajustaban a un contenido similar de nitrgeno y mostraban una reactividad
semejante en la piel (las zonas papulosas en 25 individuos infectados no eran
significativamente diferentes). El contenido de hidratos de carbono no present
,correlacin con la actividad intradrmica. Gazzinelli et al. (38) fraccionaron extracto de
cercarias en una columna de Sephadex dietilaminoetlico A-50 y observaron que la
fraccin ms activa en las pruebas intradrmicas no contena polisacridos. Maekava y
Kushibe (73, 74) aislaron y caracterizaron un antgeno procedente de un extracto
calentado de F. hepatica, mediante precipitacin por sulfato amnico y tratamiento con
fenol, seguidos de extraccin con acetato potsico y etanol. Se analiz ms ampliamente
uno de los componentes antignicos, que result estar compuesto de cido ribonucleico
(95 % ) y pequeas cantidades de pptidos. Este antgeno era un reactivo intradrmico
muy potente en el ganado (75) y anteriormente haba sido cristalizado por estos autores,
(76). Babadzhauov y Tukhmanyants (5) prepararon un antgeno serolgico desprovisto de
protenas y de material polisacrido que contuviera lpidos. Se han estudiado
ampliamente los complejos protenicos de los helmintos. Kent (59) revis sus trabajos
anteriores sobre el aislamiento de protenas procedentes de Moniezia expansa,
Hymenolepis diminuta y Raillietina cesticillus. En sus estudios sobre A. suum (60, 61) se
aislaron cinco fracciones de protena mediante la cromatografa en celulosa
dietilaminoetlica. Todas las fracciones resultaron ser complejos de glicoprotena que
contenan glucosa y ribosa con distintos aminocidos. Las dos fracciones con mayor
contenido de hidratos de carbono fueron las ms antignicas. En sus trabajos con larvas
de T. spiralis, Kent (62) aisl cuatro fracciones antignicas glicoprotenicas mediante
cromatografa en columna.
De la Fasciola hepatica se aisl una lipo- Se han estudiado ampliamente los antprotena
mediante precipitacin con sulfato genos de T. spiralis. Witebsky et al. (128)
de dextran; la purificacin final se efectu por prepararon un antgeno para fijacin del
ultracentrifugacin diferencial en un medio complemento calentando un extracto de
larsalino
de alta densidad. El anlisis inmuno- vas en un bao de agua en ebullicin. Melqumico
electrofortico indic una fraccin cher (79) prepar fracciones solubles e inpura.
El antgeno fue inmunognico y de solubles en cido, de un extracto de larvas
composicin qumica similar a la lipopro- liofilizadas en proceso de
deslipidizacin.Labzoffsky et al. (70) aislaron ocho fracciones procedentes de larvas con
una extraccin de pirimidina. El anlisis qumico revel caractersticas de glicoprotena e
hidratos de carbono. Los antgenos reaccionaron en forma distinta a los anticuerpos
circulantes en el suero de conejos, en fases diferentes de la infeccin. Sleeman y Muschel
(106) fraccionaron el antgeno lar-vario en sus componentes solubles e insolubles en
etanol. Es interesante que Witebsky utilizara su antgeno hervido en dos diluciones (1: 2 y
1: 20) para lograr el mximo de sensibilidad en la prueba de fijacin del complemento.
Esas diluciones correspondieron a las fracciones de Sleeman y Muschel en lo que se
refiere a reactividad serolgica. El antgeno soluble en etanol absorbi las aglutininas de S.
typhosa existentes en el suero de enfermos de triquinosis. El anlisis qumico de estos
antgenos (105) revel que el antgeno soluble en etanol era una glicoprotena (75% de
protena y 15% de hidrato de carbono), con la parte carbohidratada compuesta
exclusivamente de unidades de glucosa. Teniendo en cuenta los estudios de Weiner y
Neely (125) sera de esperar que se hallara tambin alguna ramnosa. Los intentos de
separacin de la protena y los hidratos de carbono dieron por resultado la
desnaturahzacin del antgeno. El antgeno insoluble en etanol era una nucleoprotena
con la parte de cido nucleico compuesta de cido desoxirribonucleico (60% ) y protena (
14% ) . La protena era la sustancia antignica del complejo. Tanner y Gregory (121)
analizaron por inmunoelectroforesis extractos de larvas de T. spiralis. Tanner (119)
descubri que si bien la mayora de antgenos de la triquina eran protenas que podan
precipitarse con un 5% de cido tricloroactico, el antgeno principal no poda precipitarse
de esa forma y contena algunos polisacridos. Este componente tena un punto
isoelctrico similar al de la globulina gamma y era termolbil. En estudios de
susceptibilidad de enzimas (120) qued identificado como una mucoprotena. La enzima
especfica utilizada para degradar este antgeno fue la lisozima mucoprotemasa. Los
antgenos de la especie Echinococcus (lquido hidatdico, esclex y membranas) han sido
materiales muy aceptados para los anlisis antignicos. Se seleccion el lquido hidatdico
de E. granulosus en los primeros trabajos de anlisis de antgenos porque era un lquido
biolgico con fuerte antigenicidad y sus perftles electroforticos en papel ofrecan
semejanza notable con los correspondientes al suero del husped (42). Hasta la fecha
hemos identificado 19 componentes antignicos en lquido hidatdico ovino (24). Se han
descrito por lo menos dos polisacridos (2, 64), as como productos terminales del
metabolismo de hidratos de carbono y protenas (1) . Algunos investigadores han aislado
antgenos polisacridos de la membrana laminada y, probablemente, de la germinal.
Agosin et al. (2) separaron por electroforesis los antgenos polisacridos en dos
componentes, y observaron una movilidad similar a la del glucgeno. El segundo contena
glucosamina y galactosa. Kilejian et al. (64) aislaron un mucopolisacrido. Trabajando en
nuestro laboratorio, lograron revestir partculas de ltex con este antgeno y advirtieron
que reaccionaba con sueros procedentes de animales inmunizados, pero no con sueros
procedentes de infeccin. Magath (77) notific que un antgeno de equinococo reactivo
en la prueba de fijacin del complemento se mova como una globulina gamma mediante
inmunoelectroforesis. Paulette- Venrell et al. (90) notificaron que su antigen0 se mova en
un campo inmunoelectrofortico como las globulinas beta y gamma. Harari et aE. (44)
identihcaron un componente inmunolgicamente activo en lquido hidatdico, como una
protena globulinoide. Pautrizel y Sarrean (91) han identificado glicolpidos y
glicoprotenas en antgenos de lquido hidatdico. Los antgenos de Echi ~zococcus fueron
estudiados recientemente por Kagan y Agosin (51) . Anlisis de antgenos de helminto por
difusin en gel e inmunoelectroforesis La caracterizacin de antgenos parsitos mediante
los diversos mtodos de difusin en gel ha puesto de manifiesto su complejidad y ha
proporcionado una prueba til para su purificacin. Las tcnicas son relativamente
sencillas y no requieren equipo complicado, pero ofrecen algunas limitaciones: el nmero
de lineas observadas en una prueba de precipitina en gel de agar representa nmeros
mnimos de componentes antignicos que se hallan en equivalencia. Por tanto, es
importante evaluar varias diluciones de antgeno o ms raramente, de antisuero, para
obtener el mximo desarrollo de complejos antignicos. La introduccin de antgenos
parasitarios marcados con istopos radiactivos ha extendido la utilidad de esta tcnica en
los estudios parasitolgicos (34). La validez de la prueba de difusin en gel suele estar
limitada por el contenido de anticuerpos de los antisueros utilizados. Los antisueros
preparados en conejos a base de algunos helmintos se obtuvieron en nuestro laboratorio
inyectando a los conejos 2 mg de antgeno IioIilizado, suspendido en 0.5 ml de solucin
salina con una cantidad igual de adyuvante completo de Freund. Se administraron a un
conejo seis inyecciones en un perodo de tres semanas, o sea, un total de 12 mg de
antgeno. Se crey que se estaban inyectando grandes dosis de antgeno pero Biguet y
Capron administran 20 mg de antgeno por inoculacin (14). En los antgenos que
evaluaron, los antisueros utlizados despus de seis meses o un ao de inmunizacin
contienen muchos ms anticuerpos de componentes principales y mnimos. Por esta
razn, Biguet et al. (19) notificaron tantas reacciones cruzadas entre las especies de
cestodos, helmintos y nematodos. La diferenciacin de especies estrechamente afines
tambin resulta difcil con tales antisueros compuestos (13). Damian demostr por lo
menos cuatro antgenos comunes al S. mansoni adulto y al husped ratn de laboratorio
(28). Adems, se demostr una hemolisina de Forssman en suero antiesquistosoma de
conejo. Capron et al. (20) analizaron las diversas fases del ciclo vital del esquistosoma.
Estos investigadores consiguieron demostrar la existencia de 21 antgenos en extractos de
gusanos adultos, ll compartidos por el adulto y el huevo, 14 con cercarias y 12 con
productos de excrecin y secrecin. Hubo cuatro bandas comunes al parsito y al criceto
husped y cinco comunes al parsito y al caracol husped (Australorbis glabratus).
Mediante extractos de S. mansoni marcados con PE1, Dusanic y Lewert (34) lograron
diferenciar 5 6 complejos de antgeno y anticuerpo, por electroforesis con acetato de
celulosa, en comparacin con dos a cinco lneas demostrables en las pruebas de
precipitina en gel de agar con los mismos sueros. Capron et aE. revisaron sus trabajos
sobre anlisis por difusin en gel de S. haematobium, S. japonicum y S. mansoni, que
haban terminado en 1962, y pudieron encontrar 19 de las 12 fracciones
inmunoelectroforticas de S. mansoni comunes a S. haematobium y 10 antgenos
comunes a S. japonicum. El anlisis de un gran nmero de sueros procedentes de
individuos infectados indic por lo menos nueve bandas de precipitina en el suero de
enfermos de esquistosomiasis mansoni, seis en el de pacientes de esquistosomiasis
haematobium y siete en el de esquistosomiasis japonicum. En la esquistosomiasis
mansoni experimental, esos investigadores encontraron 18 precipitinas antiadulto, 10
anticercaria y por lo menos 10 antihuevo. Damian (27) y Sadun et aE. (94) llevaron a cabo
estudios similares de imnunodifusin del antgeno de esquistosoma. Dodin et al. (32)
observaron, mediante la tcnica de Ouchterlony y la inrnunoelectroforesis, de seis a ocho
bandas de nrecinitina en los sueros de pacientes sometidos a tratamiento. Ofrece gran
inters el hecho de que al sptimo da de tratamiento pudieran observar antgeno
circulante en el suero de dichos pacientes. Este antgeno paso al sector andico de la
reaccin. Krorunan (68) analiz un extracto de cercarias de S. mansoni y pudo
descomponerlo en tres componentes mediante la cromatografa en celulosa
dietilaminoetilica. La cresta 1 se movi 35 mm en sentido andico y reaccion con
antisuero humano; la cresta 2 se movi 22 mm y la cresta 3, 14 mm. Los dos ltimos
componentes no resultaron activos en pruebas de diagnstico. Caetano da Silva y
Guimares Ferri (17) observaron de una a cuatro bandas de precipitina en el suero del
78% de los pacientes de esquistosomiasis hepatosplnica, en comparacin con una banda
en slo el 38 % de los pacientes de esquistosomiasis hepatointestinal. En un segundo
trabajo (18), estos autores publican datos acerca de una tcnica inmunoelectrofortica
inversa. El suero fue fraccionado en un campo elctrico y tratado con antgeno de S.
mansoni. Se observaron bandas de precipitina en las posiciones IgM e IgG. Kent (63)
analiz extractos de adultos y cercanas por 10 que respecta a protenas, hidratos de
carbono y lpidos. Consigui demostrar que una parte considerable del antgeno liofilizado
es hidrosoluble. Mediante la iumunoelectroforesis se descubrieron 10 sistemas
protenicos en adultos y ocho en cercanas. Se demostr Ia existencia de un antgeno que
experimentaba reaccin cruzada con la T. spiralis. Biguet et al. (10) lograron demostrar la
existencia de ocho protenas, cinco glucoproteuas y una lipoprotena en extractos de
ejemplares adultos de S, mansoni. StahI et al. (li) pudieron demostrar la existencia de
anticuerpos contra complejos de antgeno y anticuerpo en huevo. En un trabajo (53) se
pudo demostrar, mediante anlisis en gel de agar, la existencia de 7 antgenos especficos
de gusano adulto, 3 de cercaria y 5 de huevo. En total, mediante el anhsis de difusin en
gel de Ouchterlony, se demostr Ia existencia de 25 bandas antignicas diferentes. Se
Ilevaron a cabo anhsis de antgenos preparados por diversos mtodos tales como la
deslipidizacin con ter anhidro (antgeno de Chaffee), ter de petrleo (antgeno de
Melcher) y extracto crudo. En estos extractos, se compartieron cinco de los siete
antgenos de adulto. Estudios inmunoelectroforticos de antisueros preparados en
conejos, indicaron la complejidad de nuestros extractos de esquistosoma. Por
electroforesis se obtuvo un extracto de S. mansoni adulto, que contena 0.87 mg N/ml,
con uu suero preparado a base de1 antgeno crudo (figura 1).8 Con el mismo suero se
obtuvo un extracto de gusanos adultos preparado segn Ia tcnica de Melcher (79) (figura
2). Se identillcaron por lo menos 16 componentes en el extracto crudo y ll componentes
en el extracto de Melcher. Un extracto de cercaria deslipidizado (preparado por extraccin
con ter anhidro) tratado con el mismo antisuero revel por lo menos 18 componentes
(figura 3). EI mismo antgeno, tratado con un suero adulto an&Chaffee, mostr una
configuracin ligeramente diferente (figura 4). Los estudios de absorcin indicaron que
todas las bandas, con la posible excepcin de una, son compartidas por las cercarias y el
adulto. Un anlisis inmunoelectrofortico de antgeno de F. hepatica, realizado por Biguet
et al., seal Ia existencia de 7 fracciones protenicas, 2 glicoprotenas y 6 Iipoprotenas.
De las 15 fracciones observadas con antisuero de conejo, 5 fueron especficas. Szaffarski
et al. (117) intentaron caracterizar una mucoprotena antignica preparada con cido
sulfosahchco, utilizando papana y rivanol, sin alcanzar xito alguno. Capron et al.
identificaron la protena C reactiva en salina estabilizada y antgenos preparados por
extraccin alcalina y cida, despus de la deslipidizacin (tipo Melcher), eran de carcter
cuantitativo y no cualitativo. Dymowska et al. (35) desintegraron larvas de T. spiraZis en
un bloque de almidn y analizaron 26 fracciones protenicas. De 9 a 14 de estas fracciones
resultaron ser serolgicamente activas. Contenan fosfatasa cida y hialuronidasa. La
estructura antignica de la T. spiralis fue analizada detenidamente por Biguet et al. (14).
Con antisueros obtenidos por inmunizacin en conejos, se identificaron 19 componentes
antignicos y, con antisueros procedentes de conejos infectados, 10 bandas. Asimismo, se
estudi el aspecto de los anticuerpos en el suero durante el curso de la infeccin. Se IIeg
a Ia cifra total de 19 componentes antignicos despus de cinco semanas de inmunizacin
en conejos. Lupasco et al. (72), Moore (80) y Dusanic (33) efectuaron recientemente
estudios sobre la espec&idad de 10s antigenos de T. spiralis. En nuestros propios estudios
inmunoelectroforticos realizados con un antgeno Iarvario de T. spiralis, preparado
mediante la tcnica de Melcher (79), con un contenido de 2.34 mg N/ml, identificamos 12
bandas en suero procedente de conejos infectados, 5 bandas en suero humano de
diagnstico, ll bandas con uu antisuero preparado a base de un antgeno metablico y 16
bandas en el autisuero de un conejo inmunizado. La reaccin de este antgeno, producida
por electroforesis con un suero humano de diagnstico (1401) y un antisuero de conejo
inmunizado (extracto crudo D) , indica la complejidad de 10s anticuerpos de este suero y
una falta de identidad en las bandas, lo cual fue observado porque no se unieron despus
de tres das de incubacin (figura 5). En la figura 6, se indica el desarrollo antignico de
este antgeno con el suero de dos conejos infectados. Advirtase la diferencia en los
rasgos formados en el sector catdico de la reaccin. La figura 7 muestra el antgeno
obtenido de un antisuero preparado a base de antgeno Iarvario crudo; despus de tres
das de incubacin, los componentes antignicos comunes se unieron y adhirieron. En la
figura 8, un suero de conejo infectado (N26) y un antisuero de conejo (extracto crudo D)
se utilizaron para producir la reaccin destinada a descubrir 10s componentes comunes
en esas manchas formadas por difusin; nicamente se compartan dos o tres bandas de
antgeno y anticuerpo. En la figura 9, un suero humano de diagnstico (1401) y un suero
de conejo infectado (N26) sirvieron para formar el trazo antignico; slo las bandas cuatro
y siete son comunes. En la figura 10, puede observarse una similitud de contornos entre el
suero de conejo infectado antes mencionado (N20) y un suero de conejo inmunizado (LXS)
preparado a base de secreciones metablicas de larvas (antgeno LXS) . En la figura ll, se
compara el antisuero LXS con el antisuero crudo de larvas, con muy pocos indicios de que
exista una participacin antignica de los componentes. En Ia figura 12, el antisuero LXS se
compara con un suero humano de diagnstico y, al parecer, uno de los componentes se
comparte. Segn indica este tipo de anlisis, es muy grande la complejidad antignica de
un extracto deslipidizado de larvas de T. spiralis. En la totalidad de las reacciones, slo
unos pocos componentes se comparten claramente; los restantes pueden ser diferentes.
Kagan (48), Kagan et al. (56), Soulsby (109)) y HuutIey y Moreland (46) notificaron el
anIisis de tejidos y extractos de Ascaris mediante gel de agar. Tormo y Chordi (123)
prepararon extractos de polisacridos y protenas de A. suum para su anlisis
inmunoelectrofortico. Mediante sus antisueros fueron observados, en total, 20
componentes antignicos. De este grupo, slo 7 componentes antignicos fueron halIados
en sueros de animales infectados y en infecciones naturales de1 ser humano. gente del
ngulo formado por esta lnea con el canalillo del antgeno es igual a la raz cuadrada de la
razn de los coeficientes de difusin de antgeno y anticuerpo. Cuando se utiliza
anticuerpo humano o de conejo, puede calcularse el coeficiente de difusin del antgeno
de prueba. En 7 componentes de lquido hidatdico ensayados con un antisuero de conejo,
se obtuvieron valores comprendidos entre 3.2 y 7.2 x 1O-7 cm2/seg.
De 4 componentes parasitarios obtenidos en un anlisis de sueros humanos, 3 tuvieron
coeficientes de difusin de 1.6, 1.7 y 2.0~ lo- cm2/seg. Respecto a estos antgenos de
diagnstico, los datos relativos al coeficiente de difusin sealan que los pesos
moleculares se aproximan a un milln (3). del T. cruzi. Se han estudiado los exoantgenos o
antgenos secretores producidos por T. cruzi y se ha descrito una glicoprotena (122).
Williamson y Brown (126) y Brown y Williamson (16) estudiaron la composicin qumica
de un tripanosoma africano. Los organismos Leishmania deben compartir un antgeno
comn con las micobacterias, porque estas ltimas han sido utilizadas por algunos
investigadores en Amrica del Sur como antgeno de diagnstico en la prueba de fijacin
del complemento para la leishmaniosis. Sin embargo, no se pudo aislar ni caracterizar este
antgeno en estudios de difusin en gel (52 ) . En estudios recientes acerca de la
separacin cromatogrfica de antgenos de diagnstico se puso de relieve la importancia
del ensayo de difusin en gel. Si bien la cromatografa en columna de lquido hidatdico de
E, granulosus y E. multilocularis (18, 82) pareci separar los componentes del husped de
los del parsito, el anlisis en gel de agar indic que no se produjo la separacin completa
de los dos grupos, porque mediante las tcnicas de seleccin molecular no pueden
separarse muchos de los antgenos al y 0~2, parecidos a la globulina, que tienen su origen
en el husped y emigran con antgenos parasitarios similares. Algunas especies de
protozoos han sido estudiadas por anlisis inmunoelectrofortico y en gel de agar. Krupp
(69) evalu recientemente ll antgenos amibianos pormedio de la inmunoelectroforesis, y
se observaron semejanzas entre algunas cepas de Entamoeba histolytica de alta y baja
patogenicidad. Goldman y Siddique (40) analizaron dos subcepas de E. histolytica e
indicaron cierta disparidad antignica. Los estudios de Schneider y Hertig (101) en 16
cepas de Leishmania indicaron que en Panam existan dos grupos inmunolgicos de
leishmaniosis humana, con amplia distribucin geogrfica. Garca (37) seal que la L.
tropica tena tres componentes termolbiles y uno termoestable. Antgenos de los
protozoos Se han aislado del Trypanosoma cruzi polisacridos antignicamente reactivos
(41). Fife y Kent (36) separaron los componentes de protena y polisacridos del T. cruzi y
evaluaron su sensibilidad y especificidad en la prueba de fijacin del complemento. Los
antgenos fraccionados resultaron ms especficos que el extracto crudo, pero menos
sensibles. El componente protenico fue el antgeno mejor y de empleo ms econmico.
Von Brand (15) analiz Nussenzweig et al. (85) separaron una serie de cepas de T. cruzi en
tres grupos antignicos, por medio de pruebas de aglutinacin y precipitina en agar. En los
grupos A y B se obtuvieron reacciones de sustancias especficas tanto de tipo como de
grupo. En un anlisis ulterior (84) se estudiaron 23 cepas y se demostr que si bien la
mayora de las cepas humanas son del tipo A, algunas eran del tipo B. En los anlisis
antignicos de plasmodios efectuados mediante inmunoelectroforesis y gel de agar por
Spira y Zuckerman los datos relativos a la composicin qumica se observaron 7-
componentes en extractos de P. vinckei. Zuckerman (133) compar P. vinckei y P. berghei,
y encontr varios componentes antignicos comunes. Utilizando geles de poliacrilamida,
Sodeman y Meuwissen (108) encontraron por lo menos 21 bandas en extractos de P.
berghei. Tambin han sido descritos de 3 a 12 antgenos participantes en extractos de
plasmodios (7, 8, 29, 103, 25). Chavin (23) encontr de 10 a 15 bandas en extractos de P.
berghei en gel de poliacrilamida, de 4 a 7 lneas por inmunoelectroforesis y de 8 a 10
lneas por doble difusin en tubos. Un aspecto interesante del trabajo de Chavin fue la
presencia de todas las bandas de inmunoelectroforesis en el sector andico del campo
elctrico. La protena de hemoglobina de ratn comprenda una parte importante del
extracto. Los componentes parasitarios tenan movilidad electrofortica dentro de los
lmites comprendidos entre beta y albmina y no pudieron separarse de los componentes
del husped. Dihcultades semejantes se observaron en fraccionamientos de lquido
hidatdico, al separar los componentes del husped y el parsito mediante cromatografa
con intercambio de iones (81, 82). Spira y Zuckerman (115) han extendido el anlisis de las
especies de plasmodios por electroforesis de disco, en lo que respecta a 7 especies de
plasmodios. Se observaron diferencias entre todas las especies, y es evidente su
complejidad qufmica por el gran nmero de componentes obtenidos en las preparaciones
de aquellas.