SUMRIO

1 INTRODUO..........................................................................................................3
2 OBJETIVO.................................................................................................................7
3 MATERIAIS E MTODOS.........................................................................................8
3.1 Materiais.................................................................................................................8
3.2 Mtodos..................................................................................................................8
4 RESULTADOS..........................................................................................................9
5 DISCUSSO...........................................................................................................11
6 CONCLUSO..........................................................................................................12
7 REFERNCIAS.......................................................................................................13

INTRODUO
Os conhecimentos adquiridos com estudos bioqumicos aliados aos

conhecimentos das reas exatas como a qumica e a fsica permitiram o

desenvolvimento de inmeras tcnicas e metodologias analticas que se
difundiram a todos os laboratrios, sendo eles de pesquisas ou clnicos.
Segundo Cisternas et al. (2005, p.5), o emprego de tcnicas fsico-qumicas
serve tanto qumica quanto biologia e tem permitido reduzir a maioria dos
fenmenos celulares a termos moleculares. Assim, pode-se dizer que qualquer
evento descrito macroscopicamente, descrito pela anatomia e fisiologia, existe
uma razo microscpica, ao nvel celular, que por sua vez relaciona-se
intimamente com os mecanismos moleculares. Por sua vez, muitos desses
mecanismos foram descritos graas a pesquisas que fizeram o uso de
metodologias laboratoriais.
Estas ideias valem tanto para o normal como para o anormal, ou seja, as
patologias, que a muito foram descritas macro e microscopicamente tm
sempre, como causas, alteraes do funcionamento celular e seu mecanismo
metablico.
Ento, por meio do uso de tcnicas fsico-qumicas, as anlises clnicas
foram beneficiadas enormemente com os mtodos quantitativos de anlises
que utilizam, por exemplo, a espectrofotometria (CISTERNAS, et al. 2005).
Por exemplo, por meio da espectrofotometria aplicada s anlises
clnicas e por outras tecnologias, diretrizes da rea mdica foram sendo
estabelecidas e delineadas para a conduo de um diagnstico mais
consistente e assertivo, possibilitando assim um encaminhamento teraputico
eficaz. Segundo Cerri et al., (2004, p.2), responsveis pelo Projeto Diretrizes da
Associao Mdica Brasileira e Conselho Federal de Medicina, tais condutas
possuem o intuito de auxiliar nas decises mdicas e, consequentemente,
otimizar o cuidado aos pacientes.
A espectrofotometria uma tcnica analtica que avalia a capacidade
dos solutos de absorver luz em comprimentos de onda especficos. o mtodo
de anlises ptico mais usado nas investigaes biolgicas e fsico-qumicas.
O espectrofotmetro um instrumento que permite comparar a radiao

absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade

desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substncia.
A medida da luz absorvida permite inferir sobre a concentrao do soluto
em determinada soluo. Compostos desconhecidos podem ser identificados
por seus espectros caractersticos ao ultravioleta, visvel ou infravermelho.
Quando uma radiao eletromagntica, por exemplo, a luz visvel, incide
em uma soluo, se os ftons da radiao tm energia adequada, a energia
associada a essa radiao pode sofrer trs diferentes tipos de variaes: - ser
refletida nas interfaces entre o ar e a parede do frasco contendo a soluo
(cubeta); - ser dispersa por partculas presentes na soluo; - ser absorvida
pela soluo.
Nas

aplicaes

espectrofotomtricas,

quando

se

usa

energia

monocromtica em um simples comprimento de onda (), a frao de radiao

absorvida pela soluo, ignorando perdas por reflexo, ser funo da
concentrao da soluo e da espessura da soluo. Portanto, a quantidade de
energia transmitida diminui exponencialmente com o aumento da espessura
atravessada Lei de Lambert e o aumento da concentrao ou da
intensidade de cor da soluo Lei de Beer. A relao entre energia emergente
(I) e energia incidente (I0) indica a transmitncia (T) da soluo. Em
espectrofotometria, utiliza-se a absorbncia (A) como a intensidade de radiao
absorvida pela soluo, seguindo as leis de Lambert-Beer.
A determinao de concentrao de um soluto em uma soluoproblema por espectrofotometria envolve a comparao da absorbncia da
soluo-problema com uma soluo de referncia, na qual j se conhece a
concentrao do soluto. Em geral, utilizada uma soluo-padro com
diferentes concentraes (pontos), que tem sua absorbncia determinada.
Esses pontos so preparados diluindo-se a soluo-padro na
proporo necessria para a obteno das concentraes desejadas.
Com os valores de absorbncia e de concentrao conhecidos, pode-se
traar um grfico cujo perfil conhecido como curva-padro. Nesse grfico, a
reta, indica a proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da
absorbncia e a poro linear correspondente ao limite de sensibilidade do
mtodo espectrofotomtrico para o soluto em questo.

Foram analisados no laboratrio os seguintes exames bioqumicos:

Glicose: A glicose a principal fonte de carboidrato do organismo e sua
concentrao srica est intimamente ligada ao da insulina. Aps uma
refeio rica em carboidratos, a glicose que absorvida para o sangue causa
uma rpida secreo de insulina. Esta, por sua vez, provoca a captao,
armazenamento e uso rpido da glicose por quase todos os tecidos corporais,
especialmente pelos msculos, tecido adiposo e fgado. Valores elevados de
glicose ocorrem nos vrios tipos de diabetes primria,

nos estados de

intolerncia glicose e nas diabetes secundrias a vrias doenas

(hipertireoidismo,

hiperpituitarismo,

hiperadrenocorticismo,

etc).

Valores

diminudos de glicose ocorrem nas hipoglicemias que tm vrias causas.

Quando a ocorrncia de sintomas de hipoglicemia relacionada alimentao,
duas formas de hipoglicemia podem ser definidas, hipoglicemia do jejum e
hipoglicemia ps-prandial.
Colesterol total: O colesterol o principal esterol do organismo, estando
presente em todas as clulas como um componente estrutural das membranas
e das lipoprotenas (HDL, VLDL e principalmente LDL). tambm o precursor
na formao dos hormnios esterides pelas gnadas e crtex adrenal. Cerca
de 70 a 75% do colesterol plasmtico encontra-se na forma de ster e 25 a
30% existe como colesterol livre. Alm do colesterol absorvido a cada dia pelo
tubo gastrintestinal, que denominado colesterol exgeno, grande quantidade
designada como colesterol endgeno formada no fgado e outros tecidos.
Diversos estudos epidemiolgicos e experimentais comprovam uma correlao
positiva entre os nveis do colesterol, mais precisamente do colesterol LDL e o
risco de doena arterial coronariana (DAC). Ao contrrio, os nveis de colesterol
HDL so inversamente proporcionais ao risco de DAC.Valores aumentados de
colesterol so encontrados na nefrose, no hipotireoidismo, nas doenas
colestticas do fgado e nas hiperlipoproteinemias dos tipos IIa, IIb e III.Nveis
diminudos so encontrados no hipertireoidismo, doenas consuntivas e
desnutrio crnica. O nvel de colesterol srico, juntamente com a hipertenso
e o fumo, constituem fatores de risco de aterosclerose e doena arterial
coronariana (DAC).

Colesterol HDL: As lipoprotenas de lata densidade (HDL = High Density

Lipoproteins) exercem uma ao importante na concentrao do colesterol nos
tecidos. Atuam ainda no retorno do colesterol dos tecidos perifricos para o
fgado. A taxa de Colesterol HDL mantm uma relao inversa com o fator de
risco de DAC (Doena Arterial Coronariana), isto , quanto maior o seu teor na
circulao menor o risco de DAC. Deste modo, o colesterol HDL exerce um
efeito protetor contra a aterosclerose. A prevalncia da enfermidade
coronariana muito maior em indivduos com nveis reduzidos de HDL do que
em indivduos com teores elevados. Ao contrrio, a taxa de Colesterol LDL est
diretamente relacionada com o fator de risco de DAC, isto , quando maior o
seu teor na circulao maior a probabilidade do individuo desenvolver essa
doena. O colesterol, a hipertenso arterial, o fumo e a intolerncia glicose
so quatro grandes fatores para o desenvolvimento da DAC. Exerccios fsicos
podem aumentar o Colesterol HDL, assim como algumas drogas: lovastatina,
cido nicotnico, ciclofenil, cimetidina, etanol, estrognios, terbutalina. Valores
baixos de Colesterol HDL so encontrados em indivduos obesos, de vida
sedentria, fumantes, diabticos, na colestase, hepatopatia, arterioclerose,
coronariopatia, etc.
O presente estudo tem por objetivo discorrer a respeito dos fundamentos
da tcnica de espectrofotometria e sua aplicao nas anlises clnicas.
Adicionalmente, o mesmo apresenta e discute metodologias analticas padro,
seus princpios e interpretaes em patolgicas que acometem o ser humano.

OBJETIVO
Realizao da tcnica de espectrofotometria para a dosagem de glicose,

colesterol e HDL em uma amostra de sangue, de forma a compreender e se

familiarizar com esse tipo de ensaio comum em laboratrios clnicos, discutindo
as interpretaes patolgicas que acometem o ser humano partir dos
resultados.

MATERIAIS E MTODOS
3.1 Materiais

9 tubos de ensaio;
2 pipetas;
2 peras;
Reagent de cor;
Padro;
3 soros de paciente;
Espectrofotmetro.

3.2

Mtodos

Teste de glicemia
Em um tubo branco colocamos um mililitro de reagente de cor, no tubo padro
colocamos um mililitro de reagente de cor e dez microlitros da soluo padro,
no tubo teste colocamos um mililitro de reagente de cor e dez microlitros do
soro do paciente, colocamos em banho Maria a trinta e sete graus por dez
minutos, aps fizemos a leitura no espectrofotmetro a 510 nanmetros.
Teste de colesterol
Em um tubo branco colocamos um mililitro de reagente de cor, no tubo padro
colocamos um mililitro de reagente de cor e dez microlitros da soluo padro,
no tubo teste colocamos um mililitro de reagente de cor e dez microlitros do
soro do paciente, colocamos em banho Maria a trinta e sete graus por dez
minutos, aps fizemos a leitura no espectrofotmetro a 510 nanmetros.
Teste de HDL
Em um tubo branco colocamos um mililitro de reagente de cor, no tubo padro
colocamos um mililitro de reagente de cor e dez microlitros da soluo padro,
no tubo teste colocamos um mililitro de reagente de cor e dez microlitros do

soro do paciente, colocamos em banho Maria a trinta e sete graus por dez
minutos, aps fizemos a leitura no espectrofotmetro a 510 nanmetros.
4

RESULTADOS
Aps medir a absorbncia de todas as amostras (glicemia, colesterol e

HDL colesterol) no espectrofotmetro o grupo apresentou os seguintes

resultados:
Amostra

Absorbncia

Glicose Padro

0,112

Glicose Total

0,326

Resultado

291,07

Tab. 1
Glicose= Abs. 0,326 . 100 = 291,07mg/dl
-----------------------Abs. 0,112
V. R ; Normal 65 99mg/dl *Calculo Glicose (mg/dl) Absorbncia teste
Absorbncia padro 100 , Deixamos em repouso este procedimento em uma
incubadora no banho Maria por 10 minutos.
Dessa amostra de Glicemia testada, em seu resultado final o valor
acima do V.Real.
Amostra

Absorbncia

Colesterol Padro

0,393

Colesterol Total

0,146

Resultado

74,300

Tab. 2
Colesterol Total= Abs. 0,146 . 200 = 74,300mg/dl
------------------------Abs. 0,393
9

V. R. : Normal <160 mg/dl *Calculo Colesterol (mg/dl) Absorbncia teste

Absorbcia padro 200 Deixamos em repouso este procedimento em uma
incubadora no banho Maria por 10 minutos.
Dessa amostra de Colesterol Total testada, em seu resultado final o valor
esta dentro do V. R. .
Amostra

Absorbncia

Colesterol HDL Padro

1,666

Colesterol HDL Total

1,500

Resultado

36,01

Tab. 3
Colesterol HDL=

Abs. 1,500 .40 = 36,01 mg/dl

--------------------Abs. 1,666

V. R. : Homem > 65mg/dl

Indefinido

> 60mg/dl *Calculo Colesterol HDL (mg/dl) Absorbncia

teste Absorbncia padro 40. Deixamos em repouso este procedimento em

uma incubadora no banho Maria por 10 minutos.
Dessa amostra de Colesterol HDL testada, em seu resultado final esta
dentro do V. R. .

10

Discusso

As analises foram realizadas com sucesso, e com equipamento eficaz, porm

no foi identificada qual a amostra que foi usada, assim chegamos no
resultado, mas no foi possvel identific-la.

11

CONCLUSO
Determinamos a dosagem da glicose e o resultado apresentou-se

satisfatrio na anlise realizada.

O valor obtido foi= 291mg/dl, o valor est acima da especificao, no
status de normalidade de um individuo (entre 65-99mg/dl).
Quando o nvel de glicose est muito alto, ocorre a hiperglicemia e deve
ser feito o controle, pois a hiperglicemia em um exame de sangue que
representa quadro de diabetes (se o exame for realizado em jejum).
E quando esse nvel estiver baixo o quadro de hipoglicemia que
tambm deve ser controlado para que no haja evoluo.
Determinamos a dosagem do colesterol e o resultado apresentou-se
satisfatrio na anlise realizada, o valor obtido foi= 74mg/dl.
Determinamos a dosagem do HDL, e o resultado apresentou-se
satisfatrio na anlise realizada, o valor obtido foi= 36mg/dl.
Durante todo o tempo notou-se que, para a obteno de resultados
confiveis, imprescindvel seguir todos os procedimentos necessrios
adequadamente, conforme descritos na bula dos kits, juntamente a muita
ateno e disposio.

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REFERNCIAS

http://pt.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometria <Acesso em 19 de maro de

2014.>
CERRI, G.G., JATENE, F.B.; NOBRE, M.R.; CUCE, BERNARDO, W.M.
Introduo. Projeto Diretrizes. Associao Mdica Brasileira e Conselho
Federal

de

Medicina.

Disponvel

em

<http://www.projetodiretrizes.org.br/projeto_diretrizes/texto_introdutorio.pdf>
Acesso em 19 de maro de 2014.
CISTERNAS, J.R.; VARGAS, J.; MONTE, O. Fundamentos de Bioqumica
Experimental. So Paulo: Editora Atheneu, 2005.
NELSON, David L.; COX, Michael M. Lehninger Princpios de Bioqumica. 3
ed. So Paulo: SAVIER, 2002
SBC. Sociedade Brasileira de Cardiologia. Resumo das III Diretrizes Brasileiras
sobre Dislipidemias e Diretriz de Preveno da Aterosclerose da Sociedade
Brasileira de Cardiologia. Arq. Bras. Cardiol. 2001; 77:1-48

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