PRACTICA NO.

8 DETERMINACIN DE CLAMYDIA TRACHOMATIS

FUNDAMENTO:
El examen est basado en la investigacin de Chlamydia trachomatis como
agente patgeno en el raspado conjuntival por lo que se emplea
inmunofluorescencia directa y tincin de Giemsa.
El kit ImmunoComb Chlamydia trachomatis IgG se basa en el principio del
ensayo inmunoenzimtico de fase slida. El peine ImmunoComb funciona como la
fase slida y consta de 12 proyecciones (dientes) sensibilizadas con antgenos
inactivados de C. trachomatis (punto inferior) e inmunoglobulina humana (punto
superior, sirviendo de control interno para verificar el funcionamiento apropiado de
los reactivos del kit). Todas las soluciones reactivas necesarias para la realizacin
de la prueba estn contenidas en los pocillos de la Bandeja de Desarrollo, que
tiene 6 filas (A-F) de 12 pocillos. La prueba es realizada pasando el Peine
sucesivamente de fila en fila de la Bandeja de Desarrollo.
ESQUEMA:













100 L de
disolvente
Incubar 20 min.
en un lugar
obscuro a
Remover la
solucin y lavar 4
veces con
Dispensar 100L de
la enzima conjugada
y reposar la solucin
Remover la solucin y
lavar con buffer, tirar
y dispensar 100L de
Incubar finalmente 10
minutos en lugar
obscuro por 10
Agregar 100L de
solucin stop
Observar y
comparar con
control (+) y (-)
+
muestra -
OBSERVACIONES:





Se realizo la prueba con el cuero del paciente al cual se le realizo el cultivo de
exudado conjuntival, debido a que el examen de IgG ELISA es un mtodo muy
rpido para la deteccin de anticuerpos contra Clamidydia trachomatis.





La prueba consista en verter 5 L del suero en un posito, el cual ya estaba
cubierto con Ag de Clamydia trachomatis, utilizando L, de reactivos en donde la
incubacin tena que llevarse acabo en un lugar carente de luz, debido a que la luz
puede afectar los resultados y dando por ende un falso positivo. Esta prueba nos
indicara la cantidad de Ac IgG producidos por el paciente.




Una vez aadido el stop se tenorio que leer en espectrofotmetro a 450 nm sin
embargo solo nos basamos en la observacin calorimtrica, debido a que las
muestra ocupadas fueron negativas, denotndose claramente, que la muestra es
negativa, debido a que el control positivo es de un color amarillo intenso y la
muestra es amarillo traslucido.

RESULTADOS:




Negativo
La C. trachomatis es considerada un parasito debido a que no puede sintetizar su
propio ATP, siendo dependiente total de las clulas, aun que puede adquirir la
forma adaptativa conocida como cuerpo elemental, su aislamiento es muy
costosos y tardado por lo que se recurren a otros mtodos para su deteccin como
reacciones Ag-Ac, el convertirse en un potente inmungeno, logra la estimulacin
de respuestas inmunes tanto humoral como celular siendo estas alteraciones
inmunes las que ayudan a su pueden deteccin.
CONCLUSIONES:
La realizacin de la practica fue concluida con xito, de las muestra analizadas
para la deteccin de IgG para Clamydia trachomatis, es auxiliar a la del exudado
conjuntival, siendo necesaria para el historial del paciente, tomando las
precauciones necesarias para evitar falsos positivos.
BIBLIOGRAFIA:
http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/ginecologia/Vol_45N3/infeccion.htm