JNOMBRE? Estrada Vzquez Carlos.

TELEFONO: 362-4982.

MATRICULA: 8020 1530

hICENCIATURA: Ingeniera Bioqumica Industrial.

TRIMESTRE: 94 - I

HORAS SEMANA: 20.

~ITULO DEL TRABAJO: "Elaboracin deun Manual de Tcnicas analticasy

Mtodos experimentales, para la remocin por mtodos microbiolgicos de sulfuros en
corrientes gaseosas"

NOMBRE DEL ASESOR: M. en I.Q. Octavio Gonzlez Castillo.

LUGAR DE REALIZACION: Laboratorio R-011 del Grupode Tratamiento de aguas

residuales, en el Areade Microbiologa, del Departamentode Biotecnologa de la U A "
Iztapalapa.

FECHA DE INICIO: FEB. 22 - 93.

FECHA DE TERMINACION: AGO. 22 - 93.

FIRMA DEL ALUMNO:

E

393
i
 INDICE.

TEMA Pg.

OBJETIVOS GENERALES Y ESPECIFICOS 1

ANTECEDENTES. 2

INTRODUCCION. 3

JUSTIFICACION. 5

METODOLOGIA. 6

ACTIVIDADES REALIZADAS. 8

RESULTADOS Y CONCLUSIONES. 9
A. Cuadros resumen y Matrices de Seleccin. 10
B. Resumen subseccin anterior. 43
C. Conclusiones acerca de Cuadros resumen y Matrices de Selec. 44
D. Conclusiones Globales. 47

PROPUESTA DE M A N U A L , . 48

RECOMENDACIONES. 64

ANEXOS. 65
ANEXO No. 1. 66
ANEXONo. 2. 73

BBLIOGRAFIA. 116

11
 1

OSJETWOS GENERALES Y S?ECIFICOS.

Inicialmente propuse los siguientes objetivos generales:

a.- Integrar un Manual de Mtodos analticos para la cuantificacin

de compuestos
derivados de azufre ( S O ) y biomasa, el cual tendr aplicacin en elProyecto de remocin
biolgica de sulhros en corrientes gaseosas.
b.-Validar la metodologa de seguimiento de oxgeno disuelto en un cultivo microbiano
(pruebas de actividad).

Los objetivos especficos que se desprenden de los anteriores son:

1.- Seleccionar losMtodos de cuantificacin de HZS y CS;! en fase gaseosa.

2.- Seleccionar los Mtodos para la cuantificacin de sulhro de hidrgeno/sulhro,
disulfbro de carbono, tiosulfato, azufre elemental y sulfato en solucin acuosa (fase
lquida).
3 .- Seleccionar unMtodo para la cuantificacin de biomasa.
4.- Una vez efectuada la seleccin de todos los mtodos anteriores, llevar a cabo la
validacin de los mismos; esto implica en primera instancia haberconsiderado equipo,
material y reactivos con los que se contar (contemplado en la matrizde seleccin), y por
otro lado el proponer otro mtodo para llevar a cabo dicha comprobacin, el cual
obviamente como caracterstica imprescindible a tener,es que deber estar recomendado
como mtodo estndar en algn manualde referencia (por ejemplo Oficinasde estndares
o normas de cualquier pas,EPA, etc.).
5.-Proponer y llevar a cabo el procedimiento de validacin para las pruebas de actividad
(seguimiento de oxgeno disuelto en un cultivo microbiano).
 2

ANJECEDENTES.

En Enero de 1988, el Dr. Sergio Revah M. del Depto. de Ingeniera de Proceso e

Hidrulica, de la Div. CBI de la UAM-Iztapalapa, en colaboracincon Grupo CYDSA
inici el trabajo de investigacinpara evaluar la factibilidad tcnicade utilizar
microorganismos para la remocinde compuestos derivados delazufre en corrientes
gaseosas. Durante 1990 se opera una unidad experimental paraobtener datos de
escalamiento para la unidad piloto industrial.
Dentro de este proyecto, en su tesis de maestra, Gonzlez Castillo(1992) reporta la
caracterizacin deldesarrollo de la Tecnologa para la remocinde sulfbro de hidrgeno y
disulfbro decarbono de emisiones gaseosas residuales, en procesos de fabricacin de
fibras sintticas parala industria textil (nylon, rayn,etc.) <1,2,3>.
De esta forma, se han generado trabajos y proyectos para comprender mejor el proceso,
as como para su implementacin en eltratamiento de otros efluentes, por ejemploel
biogs.
De la revisin de la bibliografiade los procesos biolgicos para eltratamiento
microbiolgico de efluentes gaseosos contaminados con sulfuros<4-18>, as como de
trabajos especficosdesarrollados dentro del grupo de investigacin de la U N - I ,
abocado a generar alternativas biotecnolgicas parala remocin o eliminacin de estos
compuestos <19>, se desprende la observacin de que no se contaba con un manual
especfico de tcnicas analticas.Esto se fbndamenta en el hechode que en cada trabajo se
reportan diferentes mtodos para la determinacin de un compuesto en particular.
Aunque existen algunas publicacionesde mtodos analticos diversos(por ejemplo textos
de Qumica analtica<46>,<47>,<54>), o bien de mtodos analticos para utilizarse en una
rea en particular <20>,estos trabajos no hacen referencia a alguna metodologa para la
seleccin de los mtodos que proponen. Esto es, que al parecer estn proponiendo dichos
mtodos en base acriterios cualitativos, a faltade la referencia o las observaciones
pertinentes que deberan haber hecho.
 3

INTRODUCCION.

Las fermentaciones microbianasson los procesos biotecnolgicos msantiguos de los que

se tiene conocimiento. La biotecnologa puede definirse como "la evaluacin y uso de
agentes biolgicos (microorganismosy clulas vegetaleso animales) en la produccinde
bienes y servicios"; tiene un carcter multidisciplinario: es la conjuncinde las ciencias
biolgicas, las ciencias qumicas y la ingeniera <21,22,23,24,25,26>. Se ha diversificado
en gran medida lasreas de aplicacinde los procesos biotecnolgicos, de las cuales, lade
inters para este trabajo es el rea ambiental, esto es, lo referente a tratamiento de
efluentes (lquidos y gases), transformacin de residuos domsticosy abonos <23>;
especficamente el campode trabajo es el referente a tratamientode efluentes gaseosos.
Mxico pertenece al conjunto de naciones con una alta capacidadde transformacin del
planeta; se sita entre los diez pasesque producen mayor cantidadde gases de
invernadero (principalmente bixidode carbono). L a contaminacin delagua, el aire y el
suelo, as como la disposicin inadecuadade residuos slidos, es un fenmeno que aun no
se ha podido controlar en nuestro pas, a pesar de quedesde hace 20 aos se cuenta con
ordenamientos legalesque obligan al control de fbentes contaminantes<27>.
En lo que se refiere a la contaminacin del aire, el Instituto Nacional de Ecologa estima
que el 40% de las emisiones contaminantesse generan en tres reas metropolitanas del
pas: Mxico, Guadalajaray Monterrey, en tanto que en otras ciudades se presentan
condiciones crticas de contaminacin atmosfrica derivadas de fbentes industriales de
primer orden. En el pais son ya 17 ciudades lasque cuentan con redes automticas o
manuales de monitoreo de la calidad del aire; delos datos obtenidos se observan
problemas de partculas suspendidas en las ciudades industriales y ubicadas enla zona
rida del pas, pero tambin nivelesaltos de bixido de azufre, por la naturaleza de los
combustibles, monxidode carbono, por la antigedad tecnolgicay real de la flota
vehicular, y de ozono, el cual es particularmente importante en el Valle de Mxico
<27,28>.
La seleccin de un mtodo de control de las emisiones contaminantes implica un anlisis
detallado de las caractersticas del efluente gaseoso, as como del proceso de eliminacin
<28>. Los problemas de olor y toxicolgicos generados por la presenciade compuestos
derivados del azufre en efluentes gaseosos se conoce desde hace mucho tiempo
<28,29,30,37,48-50,53>; para solucionarlos se han utilizado muy diversos mtodos
basados todos en laspropiedades qumicas y fisicoqumicas de estos compuestos. Las
metodologas ms utilizadasdentro de este marco de referencia son los sistemas de
adsorcin a basede carbn activado, los sistemas de oxidacin qumicaque involucran el
lavado de la corriente gaseosa y la tecnologa de hierro quelatado. De lo anterior se
desprende que el s u h r o de hidrgeno puede ser adsorbido encarbn activado
impregnado conyoduro de potasio, en tanto que el disulfbro de carbono se puede
adsorber en carbn activado de poro fino; sin embargo al final del proceso tendremos el
problema de regeneracin o de disposicin del carbn utilizado.En el caso en que se
decida quemarlos compuestos de azufre, el problema se convierte en uno de disposicin
del bixido de azufre. La desventaja de estos procedimientos es su costo operativo poco
 4

atractivo y en los ms de los casos, la solucin al problema noes terminal dado que se
generan otros desechos conflictivos. En los ltimos aos se han desarrollado sistemas
biolgicos, que se presentan como una alternativamuy interesante para el control de
emisiones atmosfricaso el tratamiento de gases de proceso; tienen la ventaja de que dan
una solucin terminalal problema; ademslos procesos desarrollados han resultado ser
sumamente econmicos<29, 30>.
 5

JUST/F/CAC/ON.

Como se hace notar en la introduccin, el tratamiento de efluentes gaseosos contaminados

con compuestos derivados del Azufre, adquiere gran relevanciapor los problemas que
generan.
A lo largode todoel proceso que implica la generacinde tecnologa (desde estudios de
laboratorio, hasta el diseo y construccin de equipo), se hace necesariocontar con los
mtodos analticos y experimentales que nos permitan tener lacerteza, de que el trabajo
que se est realizando se lleva a cabo de forma correcta.
Lo anterior implica tanto el control del proceso, es decir, el seguimiento delgrado de
remocin o eliminacin del(o los) compuesto(s) de inters, hasta el control de la calidad
de los productos finales del proceso. Por otro lado, con los datos obtenidos de lo antes
sealado, se pueden realizar otras actividades tales como estudios de optimizacin y otros.
De lo expuesto en los prrafos precedentes, se desprende el inters de contar con un
Manual de tcnicas analticasy mtodos experimentales, como herramienta bsica para el
desarrollo de estos proyectos.
 6

METODOLOGIA.

De acuerdo a lo estipulado en elcronograma de actividades del proyecto inicial,

primeramente llev acabo una investigacin bibliogrfica,que incluy revisar los artculos
de procesos de tratamiento microbiolgico de efluentes contaminados concompuestos de
Azufre (sulfato, sulfbro de hidrgeno/sulhro, tiosulfato, disulfbro de carbono y otros), de
los cuales obtuve las referenciaspara la determinacin y seguimiento de dichos
compuestos a lo largo de los experimentos descritos <4-18>;este material me fbe
proporcionado por el asesor de este trabajo, el Mtro. Octavio Gonzlez.
Por otrolado, esta etapa la desarroll consultandoel Current Contents y The Engenering
Index Biotechnology& Bioengenering Abstracts, de los cualesobtuve referencias ms
recientes sobre tratamiento de efluentes contaminados concompuestos de azufre por
mtodos microbiolgicos, ascomo mtodos de determinacin cuantitativade los
compuestos de azufre que se estipularon enel proyecto inicial.
Una vez recopilada la informacin (Mtodos analticos), procedimos agenerar un formato
de anlisis de artculos que incluye cuatro incisos generales:
1.- Puntos generales.
2.- Metodologa.
3 .- Resultados.
4.- Crtica y comentarios.
Cada uno de estos incisos incluye una seriede subindices, con lo cual la informacin
contenida encada artculo, quedaba completamente desglosada en losaspectos de
metodologa que nos interesaba para poder establecer comparaciones entre ellos.
De esta forma generamosla forma presentada en el formato No. 1; a partir de sta se
integraron los resmenes.
Para poder realizar un anlisis ms detalladode la informacin asobtenida de cada
artculo, formulamos una seriede cuadros resumen, que en esencia contienenlos puntos
que integran el formulario de anlisis antes descrito. Los cuadros resumen generados se
presentan en losformatos Nos. 2, 3 y 4;estos formatos estn en el inciso A de la seccin
de RESULTADOS Y CONCLUSIONES.
Para la seleccin final delmtodo con mejores caractersticas, del conjuntode mtodos
analizados, decidimos formular una matriz de seleccin; esta matriz debera de contener
criterios, los cualescorresponderan directamente con losdatos delos cuadros resumen, o
bien que implicasenvarios de dichos datos; para que la seleccin realizada nosde un
resultado cuantitativo, cada criterio tendr un cierto valor, el cual se relaciona
directamente conun factor de ponderacin <3 1>. De esta forma, la seleccinde un
mtodo en particular, dejara deestar sujeta a la aplicacinde criterios cualitativos (tales
como "parece muy sencillo", "megusta este mtodo" u otros), que posiblemente nos
haran perder de vista algunascaractersticas de los mtodos, que bajo ciertas
circunstancias podran ser relevantes para su aplicacin. La matrizde seleccin generada a
partir de lo anterior, se presenta en el formato No. 5.
En cuanto a los criterios considerados tanto en los cuadros resumen como enla matriz de
seleccin, se presentan los siguientes comentarios:
 7

Tiempo de realizacin: este criterio resulta de tomar encuenta el contar con

resultados en un determinado tiempo, o bien de la cantidad de muestras que se puedan
procesar por unidadde tiempo.
Precisin: aqu se consideran los datos estadsticos reportados (desviacin
estndar, RSD, otros), para un rango de trabajo especificado,que nos indican la magnitud
del error aleatorio (es una medida de dispersin asociada afactores extrnsecos tales como
analista, equipo, reactivos, patrones, otros) <2, 32, 33>.
Exactitud: en este caso se toma en cuenta el lmite dedeteccin, as como el % de
Recuperacin enmuestras fortificadas; con estos datos se tiene la magnitud asociada al
error sistemtico (es decir, se obtiene la medida de la posicin asociada a factores
intrnsecos como variablesoperativas, separacin, extraccin, otros) <32, 33>.
Facilidad de aplicacin: eneste caso se toma en cuenta condicionesde anlisis y
naturaleza de las operaciones involucradas en la metodologa (filtrar, titular, parmetros de
instrumentos de anlisis, etc.)
Condiciones de anlisis: paraeste caso los datos en los que se pone atencin son
pH, temperatura y otros, que en un momento dado tengan relevancia encuanto a
seguridad tanto para el analista como para el material y equipo utilizado.
Similitud a muestra manejada: eneste caso se pone atencin al tipo de material al
que se ha aplicado el mtodo (muestra de origen biolgicoo inorgnico), as como
comentarios del(1os) autor(es) en cuanto a su aplicacin enotro tipo de materiales
(modificaciones necesarias).
Productividad: este factor es relevante en fimcin de la cantidadde muestras a
procesar, as como de la rapidez con que se generen resultados.
Validacin: eneste caso se toma en consideracinsi el mtodo ha sido validado;
esto con el propsito de tomar en cuenta en un momento dado las necesidadesde tener
que implementar procedimientosde validacin.
Riesgos a la salud: este criterio est relacionado con condiciones de anlisis y el
tipo de reactivos a utilizar,que tengan un riesgo potencial para la salud del analista.
Manejo de residuos: aqu se toma en cuenta si en elartculo se comenta sobre la
disposicin de los residuos generados.
Aprovechamiento de infraestructura existente: para este criterio se toma en
consideracin el material,los reactivos y los equipos conlos que se cuenta; enhncin de
esos datos se har una evaluacinde la factibilidadde aplicar el mtodo en cuestin, con
los recursos disponibles.
Costos (de operacidde inversin): este criterio est muy relacionado con el
anterior, ya que en hncin de la disponibilidad de recursos materiales, se har una
evaluacin de los costos asociados tanto a compra de tales recursos de ser necesario, as
como al consumo de los mismos.
 8

ACTIVIDADESREALIZADAS.

El cronograma de actividades deldesarrollo de este trabajo, se representa en la figura No.

l . Las actividades a las que se hace referenciaestn enlistadas a continuacin:
A.- Formulacin del proyecto inicial.
B.- Investigacin bibliogrfica.
C.- Formulacin del formato para anlisis de artculos.
D.- Revisin de los artculos de procesos para la remocin de sulfbros (material
proporcionado por el asesor).
E.- En esta etapa se efecta el anlisis de los artculos demtodos de determinacin de los
compuestos propuestos para el manual y, se hace la formulacinde los cuadros resumen
de los mismos; se formula la matriz de seleccin de mtodos para cada compuesto, a partir
de la cual se tendr un mtodo para integrar el manual.
F.- Integracin de reporte final.
 9

RESULTADOS Y CONCLUSIONES.
 10

A-- En esta seccin se presentan los formatos generadospara el

anlisis de artculos, cuadros resumeny matriz de seleccin.
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 43

B.- Cuadros resumeny matrices de seleccin obtenidos

por compuesto, a partir
de los artculos analizados:

1: Para TIOSULFATO se revisaron 5 artculos <34 a 38>; los cuadros resumen de los
artculos se presentan en loscuadros Nos. 1, 2 y 3; la matriz de seleccin de mtodos se
presenta en el cuadro No. 4.

2: Para BIOMASA se analizaron 5 artculos <39 a 43>, cuyoscuadros resumen se

presentan en los cuadros No. 5 a 10; la matriz de seleccin de mtodos generada se
presenta en el cuadro No. 1 1.

3: Para DISULFURO DE CARBONO se analizaron 2artculos <44 y 45>; los cuadros

resumen de estos artculos se presentan en los cuadros Nos. 12, 13 y 14, en tanto que la
matriz de seleccin se presenta en el cuadro No. 15.

4: Para SULFUR0 DE HIDROGENO/SULFURO se revisaron 9 artculos <46 a 54>, de

los que se obtuvieron los cuadros resumen presentados en los cuadros Nos. 16 a 21,
mientras que la matriz de seleccin generada se presenta en los cuadros Nos. 22 y 23.

5: Para AZUFRE se revisaron 7 artculos <55 a 61>; los cuadros resumen de estos se
presentan en los cuadros Nos. 24 a 26 y la matriz de seleccin obtenida se presenta en el
cuadro No. 27.

6: Para SULFATO se analizaron 6 artculos <62 a 67>, de los que se generaron los
cuadros resumen presentados en los cuadros Nos. 28 a 31, mientras que la matriz de
seleccin de mtodos se presenta en el cuadro No. 32.
 44

C- Conclusiones en base a los datos

de los cuadros resumen y la matriz de
seleccin obtenidospara cada compuesto:

1: Para TIOSULFATO:
a.- Del cuadro No. 4 observamos queel mtodo con mayor puntuacin esel que
corresponde a la referencia <36> con 642 (Mtodo No. 3); le siguen losmtodos
propuestos en las referencias <38> y <34> con 541 (Mtodo No. 5) y 532 (Mtodo NO.
1) respectivamente.
b.- Del mismo cuadro se pueden hacer las siguientes observaciones: los criterios
para los cualeses mejor respecto a los otros son condiciones de anlisis y validacin; los
criterios para los cualesest en desventajarespecto a los otros, son precisin (no presenta
datos) y similitud a muestra manejada; encuanto al resto de los criterios presenta
resultados similares con algunode los dos, pero en ningncaso con los dos a la vez.
c.- Del cuadro No. 2 vemos que el mtodo con mayor puntajees volumtrico
redox, en tanto que los otros dos son espectrofotomtricos (Cuadro No. 4); tambin se
puede ver que se public recientemente(Cuadro No. 2).
d.- Aunque se realiz una evaluacin preliminar en cuanto a infraestructura
existente, los datos no se presentan en la matriz de seleccin;de sta se encontr que para
los mtodos considerados no se contaba con reactivos y/o conequipo, por lo cual no se
pudo iniciar la fase experimental,de acuerdo a lo planeado inicialmente.

2: Para BIOMASA:
a.- Del cuadro No. 1 1 vemosque el mtodo con mayor puntuacin,es uno de los
dos propuestos (2-11) en la referencia <40>, con666; le siguen el mtodo (2-1) de la
misma referencia con 659, el mtodo de la referencia <41>(No. 3) con 599 y con el
mismo puntaje, los mtodos (1-1) de la referencia <39>y (4-1) de la referencia <42> con
529.
b.- Del mismo cuadro se puede observar que el nico criterio en el que tiene mayor
puntuacin es en precisin, al igual que el mtodo (2-1); respecto al criterio referente a
muestra manejada presenta una valoracin ligeramente menor respecto a los mtodos con
mejor puntuacin(5-1, 5-IIa y 5-IIb); en cuanto al resto de los criterios se puede ver que
en la mayora de ellos, el mtodo (2-1)tiene puntajes iguales alde mejor puntuacin.
c.- Del cuadro No. 7 vemos que los mtodos propuestos en la referencia <40> son
espectrofotomtricos, al igual que los propuestos en las referencias<39> y <42>, en tanto
que el mtodo de la referencia <41> es colorimtrico(Cuadro No. 4); tambin podemos
observar que la referencia <39>es la que se public ms recientemente(Cuadro No. 2).
d.- Del cuadro No. 5 se observa que en los mtodos de la referencia <40>se
trabaj con solucionesproteicas, es decir, que estn cuantificando concentracin de
protena en la solucin; en mtodo
el de la referencia <41>se reporta que trabajaron con
muestras de agua, en las cualeslo que hacen es obtener el nmero de microorganismos
por unidad de volumen.
 45
3: Para DISULFURO DE CARBONO:
a.- Del cuadro No. 15 se observa que el mtodo reportado en la referencia <44>
(No. 2) tiene la mayor puntuacincon 466, en tanto que el otro mtodo tiene un puntaje
de 422 <45> (No. 1).
b.- Del mismo cuadro vemos que los criterios en los que aventaja al otro mtodo
son en precisin, en exactitudy en facilidad de aplicacin, teniendo puntuaciones similares
en el resto de los criterios. Tambin se puede observar que los dos mtodos no heron
calificados enlos criterios de tiempo de realizacin y productividad, debido aque en
ninguno de los dos se reporta el tiempo de retencin para el disulhro de carbono.
c.- Del cuadro No. 13 vemos que ambos mtodos corresponden a cromatografia
de gases (Cuadro No. 4). Es conveniente resaltar, apropsito de lo sealado en el inciso
anterior, que en este tipo de metodologias tambin se debe de tomar en consideracinel
tiempo necesario para estabilizarel aparato, es decir, obtener unarespuesta estable a lo
largo de las corridas de anlisis.

4: Para SULFUR0 DE HIDROGENO/SULFUROS:

a.- Del cuadro No. 22 observamos que el mtodo con mayor puntuacin, es el que
corresponde a la referencia<48> con 637 (No. 3); le siguen los mtodos de las referencias
<54> con 576 (No. 9-I), <51> con 544 (No. 6) y <53> con 537 (No. 8).
b.- Del mismo cuadro vemos que el mtodo con mayor puntajees el que tiene
mayor nmero criterios con valoraciones altas; el criterio para el cual es elnico con valor
alto es el de manejo de residuos
c.- Del cuadro No. 16 se puede ver que enel mtodo de mayor puntuacin<48>
trabajaron con muestrasde digeridos vegetales, es decir, que conste se puede determinar
sulhro o sulhro de hidrgeno en solucin;los mtodos de las referencias<5 1> y <54>
reportan haber trabajado con muestras de aire y de gases respectivamente. Lo anterior es
relevante dado que en el proyecto inicial se plante la determinacin de sulhros tanto en
fase lquida como en fase gaseosa; por consiguiente el mtodo de la referencia<48> se
utilizara para trabajar con muestras lquidas, en
tanto que el mtodo de la referencia <5 1>
se utilizara para muestras en fase gaseosa.
d.- Del cuadro No. 18 podemos ver que el mtodo con mayor puntuacin
corresponde a espectrometra de absorcin atmica, losmtodos de la referencia <54>
son espectrofotomtrico (9-1) y colorimtrico (9-II), el de la referencia <5 1> es
espectrofotomtrico y el de la referencia <53> es espectrofluorimtrico (Cuadro No. 4).
Los mtodos de las referencias<48> y <53> (que se aplican a muestras en fase lquida),
de acuerdo a lo anterior requieren de equipo caro lo cual podra influirde manera decisiva
en su aplicacin.
 46
5: Para AZUFRE:
a.- Del cuadro No. 27 vemos que el mtodo No. 3 <57> tiene la mayor
puntuacin, con 629; los mtodos que le siguen son elNo. 1-b <SS>, con 614 y el No. 6
<60> con 557. Tambin podemos observar que el No. 3 tiene el mayor nmerode
criterios con valoraciones elevadas, sin embargoel resto de los criterios tienen
puntuaciones con diferencias mnimas respecto a los mtodos con mejores valores.
b.- Del cuadro No. 24 se puede ver que en el mtodo No. 3 se manejaron muestras
de azufre en disolventes orgnicos,el No. 1-b manejaron agua y extractos de vegetales y
en el No. 6 se procesaron muestras de derivados de petrleo.
c.- Del cuadro No, 25 vemos que los mtodos Nos. 1-a, 1-b, 2, 3 y 5 corresponden
a referencias recientes(Cuadro No. 2); el No. 3 es volumtrico redox,los Nos. 1-b y 6 son
espectrofotomtricos (Cuadro No. 4).

6: Para SULFATO:
a.- Del cuadro No. 32 vemos que el mtodo No. 6 <67> obtiene la mayor
puntuacin con 600, le siguen los mtodos Nos. 4 <65> con 575y 5 <66> con 565;
tambin podemos observar que aunque tiene el mayor puntaje, no tiene el mayor nmero
de criterios con mejores calificaciones(No. 4), pero presenta mejores calificacionesen los
criterios de exactitud y muestra manejada. Se puede apreciar tambinque las diferencias
de puntuacin entre ellos no es muy grande; inclusive el No. 3-c tiene una puntuacinmuy
cercana alos anteriores.
b.- Del cuadro No. 28 se observa que el mtodo No. 6 trabajo con muestras
biolgicas, elNo. 4 muestras de agua y el No. 5 soluciones acuosas de sulfato.
c.- Del cuadro No. 30 vemos que los tres mtodos anteriores son de referencias
recientes (Cuadro No. 2); para elNo. 6 se requiere de un espectrmetro de absorcin
atmica, en tanto que los mtodos Nos. 4 y 5 son espectrofotomtricos (Cuadro No. 4).
De lo anterior el mejor mtodo requiere de un equipo caro, resultando que los que le
siguen son ms accesibles eneste sentido.
 47
D.-Conclusiones globules.

I: De los objetivos planteados al inicio de

este trabajo, faltaron por cubrir la
validacin de los mtodos (fase experimental)y la validacin para las pruebasde actividad;
esto se debi hndamentalmente a la falta de reactivos y equipo para la validacin de los
mtodos analticos y a la conclusin delperiodo propuesto para la realizacin de este
proyecto.

11: La evaluacin de la infraestructura existentese realiz de manera parcial, esto

es, que solo se llev a cabo paralos mtodos de determinacin de tiosulfato, cuando estos
estuvieron apunto. Para el resto de los compuestos considerados no se llev a efecto
debido a la conclusin del periodo de realizacin.

111: Tampoco se hizo la evaluacin de los costos debidos a insumosy equipo,

debido a lo sealado en el punto
anterior. De lo hasta aqu expuesto se puede concluir,
que este proyecto se debi haberpropuesto para un periodo de realizacin mayor,

IV: De los resultados para disulhro de carbono, es importante hacer notar el

hecho de que solamente se analizaron dos mtodos; esto resulta importante desde el punto
de vista de que, para considerar que el proceso de seleccin ha cumplido con su objetivo,
es necesario que la muestra (mtodos) sea mayor, esto es que haya representatividad.

V: La metodologa desarrollada en este trabajo resulta ser una herramienta original

y con amplias perspectivas para ser aplicada en la seleccinde mtodos analticos; cabe
hacer notar que en base a las referencias revisadas(Procesos de remocin de sulhros <4-
1S>, libros de texto de Anlisis Qumico general<46,47,54>y especfico para alguna
aplicacin en particular<20>, <30>) se lleg a lo anterior, debido quea los autores de
stas no reportan la forma como decidieron aplicar las tcnicas analticasque requirieron,
para el seguimiento de los procesos, o bien como los autores de los libros decidieron
incluir los mtodos analticos que conforman tales obras.
 48

E.- Propuesta de Manual.

En este inciso de RESULTADOS Y CONCLUSIONES, se

presentan los protocolos de los mtodos con las ms altas
puntuaciones, apartir de la matriz de seleccinde mtodos,
elaborada para cadacompuesto revisado.
En los mtodos se encuentran las siguientes abreviaturas:
mcl= microlitros
mcg= microgramos
 49

M E T O D O No. 1 <36>.

COMPUESTO A DETERMINAR: Tiosulfato [S203-].

FUNDAMENTO: Las reacciones de semicelda que se verificanson:

a.- para el oxidante (RNBr = NBSA o NBP):
RNBr + H' + 2e- <=E=====> + Br-
b.- para el reductor:
2 s203- <=======> S406; + 2e-

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

Reactivos:
> NBP (N-Bromoftalimida)o NBSA (N-Bromosacarina). Para su
preparacin consultar<1>.
> KI slido.
Preparacin de las soluciones stock de reactivo oxidante: disolver 11.3 g de NBP
(o 13.1 g de NE3SA) en 1 litro de cido actico anhidro, conservndolas enfrascos mbar;
se estandarizan iodometricamente con Dicloroamina-T <2>.
Material:
i.- cristalera para preparacin de soluciones: vasos de precipitados, vidrios
de reloj, probetas, matraces erlen-meyer, fiascos mbar.
ii.- cristalera para la titulacin: bureta, matraces erlen-meyer, pipetas
graduadas, pipetas volumtricas, probetas, soporte universal, pinzas para bureta.

PROCEDIMIENTO.
1.- Colocar una alcuotade muestra en unvaso de precipitadosde 1O0 d.
2.- Si la muestra est en solucin en un disolvente orgnico, diluircon agua para
hacer que la concentracin del disolvente sea menor del50% v/v.
3.- Agregar aproximadamente50 mg de U.
4.- Titular con el reactivo oxidimtrico (NBP o NBSA). Para la titulacin visual,la
aparicin de un color amarillo plido, se toma como el punto final. Para la titulacin
potenciomtrica se describe el procedimiento en<3>.

CALCULOS.
Del volumen gastado de reactivo oxidante se obtiene la cantidad de reaccionante,
con la cual se calcula la concentracin de tiosulfato en base a las reaccionesde semicelda
que se llevan a cabo.

BIBLIOGRAFIA.
1.- Das, C.M. & P. Indrasenan. I.J. Food Sci. Technol.22, 1987:339 - 344.
2.- Jacob, T.T. & C.G.R. Nair. Talanta 19. 1972:347.
3.- Nair, C.G.R.& P. Indrasenan. Talanta 23, 1976:239.
 50

M E T O D O No. 2 <40>.

COMPUESTO A DETERMINAR: Biomasa ( en base acontenido de protena).

FUNDAMENTO: El mtodo se basa en la observacinde que el Azul brillante

Coomassie G-250 existe endos formas diferentesde color, rojo y azul; la forma roja es
transformada a la azul,cuando se liga el colorante a una protena. El complejo proteina-
colorante tiene un coeficientede extincin alto, debido alo cual presenta una alta
sensibilidad en la determinacinde protena.

REACTIVOS, MATERIAL,Y EQUIPO.

Reactivos:
> Azul brillante CoomassieG-250.
> Etanol al 95%.
> Soh. al 85% (p/v) de cido fosfrico.
> Buffer.
> Albmina srica bovina.
> Soln. O. 15 M de Cloruro de Sodio.
Preparacin del reactivo colorante: se disuelven 100 mg de azul brillante en50 m1
de etanol al 95%; a esta solucin se le agregan100 m1 de cido fosfrico al 85%; se diluye
a un volumen final de 1 litro.
Material:
i.- cristalera para la preparacin de soluciones: vasos de precipitados,
probetas, pisetas, vidrio de reloj, matraces aforados.
ii.- cristalera para correr el procedimiento: tubos de ensaye 12x100,
gradilla, pipetas graduadas, celdas de 1 ml.
Equipo:
Espectrofotmetro (Spectronic 200 de Bausch & Lomb).

PROCEDIMIENTO.
1.- Colocar O. 1 ml de la muestra (con una concentracin de 1 a 10 mcg de
protena) en un tubo de ensaye 12x100 m m .
2.- Agregar 1 ml de reactivo (colorante) y mezclar por inversin o en vrtex.
3.-Determinar la absorbancia a595 nm, despus de dos minutos (pero antes de 1
hr),contra un blanco preparado con O. 1 m1 de buffer, mezclado de la misma forma que la
muestra, con 1 m1 de reactivo.
4.- Preparar una curva de calibracin de acuerdo a lo antes expuesto, graficando
concentracin de protena contra absorbancia, en la cualpor interpolacin se obtiene la
concentracin de la muestra.
 225782
51

M E T O D O No. 3 <45>.

COMPUESTO A DETERMINAR: Disulhro de Carbono [CS,].

FUNDAMENTO: Elmtodo se basa en la absorcin deldisulhro de carbono, en

carbn activadode cscara de coco y posterior desorbcin contolueno; a partir de la
solucin en tolueno, se realiza la determinacin porcromatografia de gases.

REACTIVOS, MATERIALY EQUIPO.

Reactivos:
>Disulfbro de Carbono grado cromatogrfico.
>Toheno grado cromatogrfico.
>Oxgeno purificado.
>Nitrgeno o Helio purificado.
>Hidrgeno prepurificado.
>Aire, filtrado y comprimido.
>Solucin stock para calibracin (0.0253 mg/mcl): diluir0.253 g de disulfbro de
carbono (0.200 ml a 20C) a 10 ml con tolueno.
Material y Equipo:
>Cristalera parala preparacin de soluciones: vasos de precipitados,
probetas, matraces aforados, pipetas graduadas de 10, 5 y 1 ml.
>Muestreador:
a.- tubo de secado: tubo de vidrio, de 7 cm de long., 6 mm de dimetro exterior y
4 mm de dimetro interior; con una seccin simple de 270 mg de sulfato de sodio anhidro
granular entre dos tapones de lana de vidrio.
b.- tubo de absorcin: tubo de vidrio, de 7 cm de long., 6 mm de dimetro
exterior, selladoa la flama enlos extremos y con tapas de plstico, conteniendo dos
secciones de carbn activado de cscara de coco (frente 100 mg; posterior= 50 mg)
separadas por un tapn de espuma de uretano de 2 mm de espesor. Un tapn de lana de
vidrio precede la seccin frontal y un tapn de espuma de uretano de 3 mm sigue en la
seccin posterior. La presin a travs del tubo a 1 Vmin de flujo de aire debe ser menor a
3.4 kPa. Disponible comercialmente.
>Bomba personal de muestreado, 0.01 a 0.2 Vmin, con conectores de tubo flexible.
>Tubo PTFE, 5 mm de dimetro interior.
BRefi-igerante, a 0C.
>Cromatgrafo de gases, FPD con filtro para azufre,integrador y columna, segn
condiciones del aparato.
NOTA: una vlvula para eliminarel pico de disolvente cuando se eluye de la
columna es usualmente un elemento de proteccin del detector.
>Viales, de vidrio, de 25 ml, con tapas PTFE.
>Matraces volumtricos de 10 d.
>Jeringa, de 10 mcl, legible a O. 1 mcl.
>Pipetas de 5 y 10 ml.
 52

PROCEDIMIENTO.

>Muestreo:
1.- Calibrar cada bomba de muestreado con un muestreador representativo en
lnea.
2.- Rompa las terminales delmuestreador inmediatamente antes del muestreado.
Unir el muestreador a la bombade muestreado con tubo flexible. Conecte el tubo de
secado a la seccin frontal deltubo de carbn con una seccinde 20 mm de tubo PTFE.
3.- Muestrear a una tasa de flujo perfectamente conocidaentre 0.01 y 0.2 Vmin
para un tamao demuestra total de 2 a 25 litros.
NOTA: las muestras deben sertomadas arriba de 1 Vmin si la humedad ambiental es baja.
4.-Mantenga el tubo de secado conectado al tubo de carbn durante el transporte.
Refrigerar (OOC) para prevenir migracin del disulfbro decarbono a la seccin posterior.
Tape los extremos abiertos. Empaque de forma segura para el transporte.

>Preparacin de la Muestra:
5.- Separe y descargue el tubo de secado. Coloque las seccionesfrontal y posterior
del tubo muestreador en viales separados. Descargue los tapones de lana de vidrio y de
espuma.
6.- Pipetee 1.O m1 de tolueno en cada vial; tapar cada vial.
7.- Permita reposar durante 60 min con agitacin ocasional.
>Calibracin y control de calidad:
8.- Calibrar diariamentecon por lo menos5 estndares de trabajo.
a.- Agregue cantidadesconocidas de solucin stock de calibracin atolueno en matraces
volumtricos de 1O ml y diluya hasta la marca para preparar soluciones en el rangode 0.02
a 0.5 mg CS2/ml.
b.- Analice junto con muestras y blancos (pasos 11 y 12).
c.- Prepare una grfcade calibracin ( /rea de pico vsmg CS2).
9.- Determine la eficienciade desorbcin (DE) por lo menos una vez paracada
lote de carbn utilizado paramuestreado en el rangode inters. Prepare tres tubos para
cada uno de los 5 niveles mstres de medios blancos.
a.- Remueva y descargue la seccinposterior del absorbentede un muestreador de medio
blanco.
b.- Inyecte una cantidad conocida(1 a 20 mcl) de solucin stock de calibracin
directamente enla seccin frontal del absorbente con una jeringa graduada en mcl.
c.- Tape el tubo. Permita reposar durante la noche.
d.- Desorber (pasos 5 a 7) y analizar junto con estndares de trabajo (pasos 11 y 12).
e.- Prepare una grficade DE vs mg CS2 recuperados.
10.- Analice tres grupos secretos para control de calidad ytres grupos de analistas
para asegurar que la grfica de calibraciny la grficaDE estn bajocontrol.
 53

>Determinacin:
1 1.- Fijar el cromatgrafo de gases de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante y a las condicionesque se anotan ms abajo. Inyecte unaalcuota de muestra
manualmente o con automuestreador.
NOTA 1: el tiempo de retencin para eltolueno es aproximadamente de 30 min, el cual
puede ser reducidopor programacin de temperatura.
NOTA 2: si el rea de pico es superior al rango linealde los estndares de trabajo, diluya
una alcuota de muestra desorbida con tolueno, reanalice y aplique un factor de dilucin
apropiado en los clculos.
12.- Mida elrea de pico.
Condiciones del aparato:
a.- Volumen de inyeccin: 5 mcl
b .- Temperaturas:
Inyector 150C
Detector 145C
Columna 3 0C
c.- Gas acarreador: Nitrgeno o Helio, a un flujode 20 d m i n
d.- Columna: de vidrio, 2 m x 6 mm de dimetro ext., 5% OV 17 sobre GasChrom Q
malla 80/100 o equivalente.

CALCULOS.
1.- Determine la masa (corregida por DE), en mg, de CS2 encontrado en las
secciones de absorbente muestra frontal (Wf) y posterior (Wb), y el promediode las
secciones del absorbente en blancofrontal (Bf) y posterior (Bb).
NOTA: si Wb > WE/ 10, reporte como ruptura y posible prdidade muestra.
2.- Calcule la concentracin, C, de CS2 en el volumen de aire muestreado, V(1):
(Wf + Wb - Bf - Bb) * 1000
c = """""""~""~""""""""- mg/m3
V
 54

M E T 0 0 0 No. 4 <48>.

COMPUESTO A DETERMINAR: Sulhros (fase lquida).

FUNDAMENTO: Este mtodo se basa en la conversin delcatin o anin a

determinar, en una especie molecular voltil, seguida porla determinacin de SU
absorbancia molecular en fasegaseosa; concretamente se hace reaccionar los ionessulhro
con cido clorhdrico3M y el sulhro dehidrgeno liberadoes arrastrado por una
corriente de aire dentro de un separador gas-lquido, midindosela absorbancia a 200 m,
utilizando una lmparade ctodo falso ie deuterio.

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

Reactivos:
>Solucin stock de sulhro de 500 mcg/ml: se prepara disolviendo 1.875 g
de sulhro de sodio nonahidratado en500 ml de solucin al 25% de SAOB (Buffer
antioxidante de sulhro). Los estndares de trabajo se preparan el da quese van a utilizar,
por el mnimo nmero posible depasos de dilucin.
>Solucin 3M de Acido clorhdrico.
>SAOB: se prepara con las siguientes concentracionesde compuestos: 2
moVl de NaOH, 0.2 moVl de cido ascrbico y 0.2 molA de EDTA.
Material y Equipo:
>Cristalera para la preparacinde soluciones: vidriosde reloj, vasos de
precipitados, probetas.
>Espectrmetro de absorcin atmica Shandon SouthernA3600, con lmpara de
ctodo falso de deuterio. Fue modificado colocando la clula de absorcin (de cuarzo y 13
cm de long.), en la posicin delquemador.
>Registrador de carta Auto-graph S
>Medidor de flujo conectado a un Controlador de flujo Brooks NO. 8943 (Brooks
Instruments, Hatfield, PA, USA).
>Muestreador Technicon 11.
>Bomba . . . . . Technicon.

PROCEDIMIENTO.
1.- Los parmetros de operacin de las diferentespartes del instrumento y el
mltiple son las siguientes:
>Espectrmetro:
- long. de onda 200 nm
- modo Absorbancia
- corriente de lmpara 10.0 mA
- anchura de rendija 0.5 mm
- banda 3.0 nm
>Registrador:
- sensitividad 2.5 a 1O0 mV mxima
- velocidad de la carta 5 .O mdmin
 55

>Bomba y muestreador automtico:

- ciclo de muestreado 45.0 S
- ciclo de lavado 45.0 S
- flujo de aire O. 6 ml/min
- flujo de HC13M 0.23 d m i n
- veloc. de muestra o lavado 1.O ml/min
- flujo gas acarreador 13.3 d m i n
- serpentn de mezclado 29.0 vueltas
Se permite que el instrumento se caliente por un periodode 5 min., con la agujade
muestreado en la posicin de "lavado". Los tubos del mltiple se sumergieron en
recipientes de reactivo apropiado, permitindose el flujo de dichas soluciones. Con una
tasa de flujo del gas acarreador fijada a 13.3 ml/min, se permite llenar con aire la clulade
absorcin. Despus de que el sistema ha sido completamente equilibrado,se ajustan el
cero del instrumento y el registrador.
2.- Las muestras se suministran al mltiplepor un muestreador Technicon11, con
capacidad para 40 muestras.
3.- Las soluciones (muestras y HCl) se transportan con una bomba hastael
serpentn de mezclado,antes de entrar al separador gas-lquido.
4.-El separador gas-lquido se construy, despus de varios experimentos
preliminares, de una piezaT de vidrio, conectada a la clula de absorcin por mediode
una punta de pipeta y un tubo de calibre estrecho (DI=0.82 m).
5.- El sulhro de hidrgeno liberado (formado)es arrastrado por el gas acarreador
al flujo interno de la clula de absorcin, la cualest alineada en la vaptica del
espectrmetro.
6.- Una vez que el muestreador h e cargado se arranc e inici el anlisis. Los
valores de absorbancia de los estndares fueron medidos parapreparar una grfica de
calibracin.
 S6

M E T O D O No. 5 6 1 s .

COMPUESTO A DETERMINAR: Sulhro de Hidrgeno (fase gas).

FUNDAMENTO: El sulfurode hidrgeno es colectado por aspirado de un

volumen medido de aire a travs de una suspensin alcalinade hidrxido de cadmio; el
sulfbro es precipitado como sulfbrode cadmio para evitar su oxidacin con el aire, la cual
ocurre rpidamente en una solucinacuosa alcalina. Se agrega STRactan 10 a la solucin
de hidrxido de cadmio para minimizar la fotodescomposicin del sulfuro de cadmio
precipitado. El sulfbro colectado es subsecuentemente determinadopor medicin
espectrofotomtrica del azul de metileno producido porla reaccin del sulfbro con una
solucin cidade N,N-dimetil-p-fenilendiaminay cloruro frrico.

REACTIVOS, MATERIALY EQUIPO.

Reactivos:
Todos los reactivos son grado reactivo analtico; debenestar en refrigeracin
cuando no se utilicen.
>Solucin stock de Amina-Acido sulfiirico: agregue 50 ml de cido
sulfiirico concentrado a 30 ml de agua y enfriar; disolver12 g de clorhidrato de N,N-
dimetil-p-fenilendiamina(para-aminodimetilanilina)(redestilada si es necesario) en el
cido. No diluir. Esta solucin puede ser almacenada indefinidamente bajo refrigeracin.
Se puede utilizar 1O. 5 g del oxalato cuando no se cuente con el clorhidrato.
>Solucin Testigo de amina: diluya 25 ml de la solucin stock a 1 litro con
solucin de cido sulfiirico 1: l .
>Solucin de Cloruro frrico: disuelva 100 g de cloruro frrico
hexahidratado enagua y diluya a 100 ml.
>Etano1 al 95%.
>STRactan 10 (-Arabinogalactan_). Disponible de Chicago Scientific,Inc.,
7 16 W. Irving Park Road, Bensenville, IL 60 106. -Arabinogalactan- vendido bajo el
nombre de otras marcas puede ser utilizado.
>Solucin de STRactan-Sulfato de cadmio: disolver8.6 g de sulfato de
cadmio octahidratado en aproximadamente600 ml de agua. Agregue 20 g de STRactan
10 y diluya a 1 litro.
>Solucin de Hidrxido de sodio: disuelva 0.6 g de hidrxido de sodio en
aproximadamente 600 ml de agua y diluya a 1 litro.
>Solucin de absorcin de STRactan 10-Hidrxido de cadmio: esta
solucin de absorcines preparada pipeteando 5 ml de solucin de STRactan-Sulfato de
cadmio y 5 m1 de solucin de Hidrxido de sodio directamente enel tubo incidente y
mezclando; esta solucin es estable por 3 a 5 das.
>Solucin estndar de Sulfbro de sodio:coloque 35.28 g de Sulfbro de
sodio nonahidratado en unmatraz volumtrico de 1 litroy agregue suficiente agua
destilada librede oxgeno para llevar el volumen a 1 litro. Almacene bajo atmsfera de
Nitrgeno y refrigeracin. Estandarice con soluciones valoradas de Iodo y Tiosulfato en
un matraz de iodo bajo una atmsfera de nitrgeno para minimizar la oxidacin poraire.
 57

La concentracin aproximadade la solucin de sulfbro deberde ser 4700 mcg de

sulfuro/ml de solucin. Laconcentracin exacta debe ser determinadapor valoracin
iodo-tiosulfato inmediatamenteantes de su dilucin.
>Solucin de trabajo de Sulfko de sodio: diluya 25 ml de la solucin stock
con 250 m1 de agua libre de oxgeno. Esta solucin contiene aproximadamente el sulfbro
equivalente a 500 mcg/ml de sulhro de hidrgeno. Prepare la solucin de trabajo al
momento de ser utilizada.La concentracin actual de esta solucin puede ser determinada
a partir de los resultados de titulacin de la solucin estndar. Para resultados ms seguros
en la determinacin iodomtricade sulhro en solucin acuosa, es recomendable el
siguiente procedimientogeneral:
1.- Reemplace el oxgeno del matraz con un gas inerte como el bixidode carbono o
nitrgeno.
2.- Agregue un exceso de solucin valorada de iodo, acidifique y titule por retroceso con
solucin valoradade tiosulfato, utilizando almidn como indicador.
Material y Equipo:
>Equipo de Muestreo. La unidad de muestreo para el mtodo de coleccin con
tubo incidente, consiste de los siguientes componentes:
1.- Tubo incidentede vidrio, graduado de 25 m,l para recibir el gas, conteniendo la
solucin de absorcin o reactivo; el tubo debe estar envuelto en papel aluminio para
proteger la muestra de exposicin a la luz.
2.- Bomba de muestreo calibradacon un flujo determinado, con una variacin de
ms/menos 5%, a la tasa de flujo recomendada. La bomba es protegida de salpicaduras o
agua de condensacin,por un tubo de absorcin semiempacado con untapn de lana de
vidrio e insertado entre el brazo de salida deltubo incidente y la bomba.
3.-Un medidor integralde volumen, tal como unrotmetro, capaz de medir 2 litros de
aire aun flujo de 0.2 Vmin con una precisin demdmenos 5%. En lugar de ste se puede
utilizar una aguja hipodrmica calibrada como orificio crtico si la bombaes capaz de
mantener una presin diferencial delorden de 0.7 atmsferas atravs de la aguja.
4.- Termmetro.
5.- Manmetro.
6.- Cronmetro.
>Cristalera para la preparacinde soluciones.
Xolormetro con filtro rojo o espectrofotmetro a 670 nm.
>Celdas, de 1 cm de paso.

PROCEDIMIENTO.
1.- Limpieza del equipo. Toda la cristalera debeestar perfectamente limpia; se
recomienda el siguiente procedimiento:
l . 1.- Lavar con solucinde detergente en agua del grifo, enjuagando enseguida conagua
del grifoy agua destilada.
1.2.- Colocar el material en cido ntricoconc. o en solucin de este cido 1: 1, por 30
min., enjuagandodespus con agua del grifo, agua destilada y finalmente con agua doble
destilada.
 58

2.- Coleccin y transporte de muestras.

2.1.- Prepare 1O m1 de solucin de absorcin, de acuerdo con lo descrito en la seccin de
reactivos, en el tubo incidente; la adicin de 5 ml de etanol al 95% a esta solucin, antes
de iniciar la aspiracin,controla la formacin de espuma por espaciode 2 horas;
adicionalmente se pueden colocar dos discos de tefln sobre laentrada de aire del tubo
incidente a unaaltura de aproximadamente 1 a 2 pulgadasde la parte superior deltubo.
Envolver el tubo con aluminio.
2.2.- Conecte el tubo incidente (enel tubo de absorcin) ala bomba de muestreado, con
una pieza corta de tubo flexible.
2.3.- El aire muestreado no debe estar pasando a travs de otro tubo o equipo antes de
entrar al tubo incidente.
2.4.- Se recomienda un tamao de muestra de 2 litros; muestrepor 10 min. a unflujo de
0.2 Vmin. La tasa de flujo debe ser conocida con una precisinde mslmenos 5%.
2.5.- Encienda la bomba para iniciar la coleccin de la muestra. Se debe tener cuidado de
medir lo ms precisamente posible latasa de flujo y el tiempo o volumen.
2.6.- Se debe registrar la temperatura y presin atmosfricaal inicio del muestreo; si la
lectura de presin no se puede obtener, registrar la elevacin.
2.7.- Despus de concluido el muestreo, los vstagos de los tubos incidentes no deben ser
removidos, yaque contienen depsitos de sulhro de cadmio; es necesario transportar los
incidentes con los vstagos sellados enlas salidas de stos, con parafina u otra cubierta
que no sea de caucho; lasjuntas esmeriladas debenestar selladas paraasegurar un cierre
hermtico.
2.8.- Asegrese de minimizar derramamientoso prdidas por evaporacin alo largo del
proceso; refrigere lasmuestras si el anlisis no se va a realizar en eltranscurso del da.
2.9.- Siempre que sea posible, se recomienda hacerla entrega de las muestras al
laboratorio. De otra forma, casos especiales detransporte de tubos incidentes diseados
por N O S H deben serutilizados para el transporte de muestras.
2.10.- Un tubo incidente "blanco"debe ser manipulado comolos otros demuestras
(llenado, selladoy transporte), excepto que no se muestrea aire atravs de este tubo
incidente.

3.- Anlisis.
3.1.- Remueva completamente losdepsitos de la parte superior del incidente al fondo del
tubo. Transfiera la soluciny depsitos en el fondo del tubo incidente a unmatraz
volumtrico de 250 ml. Usando 50 ml de agua destilada, enjuagueel fondo del tubo dos
veces con ayuda de un gendarme de cubierta de caucho limpio o una varilla de vidrio;
agregue las solucionesde enjuagado al matraz volumtrico.Con la ayuda del gendarme,
lave el exterior del vstago del incidente con20 ml de agua destilada y agregue los lavados
al matraz y drene 20 m1 de agua destilada al interior del matraz para evitar
depsitos en las
paredes. El volumen total de agua de lavado debe de ser de 90 m l .
3.2.- Agregue 15 ml de solucin de ensayo de amina a travs de la entrada del tubo
incidente al matraz volumtrico;esto es necesario para disolverel sulfhro de cadmio
depositado en el interiorde la entrada del tubo. Mezcle moderadamentepara evitar
prdidas de sulfhro de hidrgeno.
 59

3.3.- Agregue 0.5 ml de solucin de cloruro frrico y mezcle; aforar con agua destilada.
Permita reposar por 20 minutos.
3.4.- Prepare una solucinde referencia acero de la misma manera utilizandoun volumen
de solucin de absorcin de 10 ml, a travs de la cual no ha sido aspirado aire.
3.5.- Mida la absorbancia del colordesarrollado a 670 nm en un espectrofotmetro o en
un colormetro, fijado a 100% de transmitancia contra un cero de referencia (blanco).

4.- Calibracin.
4.1.- Coloque 10 ml de solucin de absorcin dentro de cada uno de los rnatraces
volumtricos de la serie. Agregue solucinestndar de sulfiro equivalente a O, 20, 40, 80,
120, 160 mcg de sulfbro de hidrgeno en los diferentes matraces.
4.2.- Agregue 90 m1 de agua destilada.
4.3.- Agregue 15 ml de solucin de ensayode amina-cido acada uno de los matraces y
mezcle moderadamente.
4.4.- Agregue 0.5 m1 de solucin de cloruro frrico a cada matraz. Mezcle, afore y permita
reposar por 20 min.
4.5.- Determine la absorbancia en unespectrofotmetro a 670 nm contra una solucin de
referencia librede sulfkros.
4.6.- Prepare una curva estndar de absorbancia vs mcg de sulfino de hidrgeno.
4.7.- La curva de calibracin se puede preparar utilizando soluciones gaseosas; la
descripcin del procedimientose puede consultar en la referencia original <5 1>.

CALCULOS.
1.- Utilizando lacurva estndar de absorbancia vs mcg de H A determine la
concentracin de la muestra, interpolando la lectura de absorbancia en dichacurva.
2.- La concentracin de sulfiro de hidrgeno en el aire muestreado puede ser
expresada en mgl m3 ,la cual es numricamente igual a mcg/l.
 60

3.- Otra forma de expresar la concentracin, es ppm (partes por milln).

24.45 760 (T+ 273)

ppm = mg/m3 * _________ * ______ * _________ -----
PM P 298
Donde:
P = presindelaire muestreado (mm Hg)
T = temperatura delaire
muestreado (C)
24.45 = volumen molar (Vmol) a 25Cy 760 mm Hg
PM = peso molecular del H2S (glmol)
760 = presin estndar (m Hg)
298 = temperatura estndar (K)
 61

M E T O D O No. 6 6 7 s .

COMPUESTO A DETERMINAR: Azufre.

FUNDAMENTO: Consultar el mismo apartado en el Mtodo No. 1

REACTIVOS, MATERIAL,Y EQUIPO.

Reactivos:
>Cloroformo o n-heptano.
>Solucin de Sulfito de sodio 1M.
>Etanol.
>Formaldehdo, solucin al40%.
>Para completar listade reactivos y en cuanto a materialy equipo, consultar el
mismo apartado en el Mtodo No. 1.

PROCEDIMIENTO.
1.- El azufre elemental (3 a 20 mg) inicialmente es,convertidoen tiosulfato; el
slido se disuelve completamente encloroformo o en n-heptano (3 - 5 m l ) .
2.- Se agrega 5 m1 de sulfito de sodio 1M
3. - Agregar etanol en pequeas cantidades, agitando la mezclade reaccin, hasta
homogeneizar el lquidoobtenido.
4.-El tiosulfato producido es titulado de acuerdo al procedimiento delMtodo
No. 1, despus de agregar 10 ml de solucin de formaldehdo al 40% para enmascarar el
exceso de sulfito.

CALCULOS.
Consultar el mismo apartado en el Mtodo No. I

BIBLIOGRAFIA.
Consultar el mismo apartado en el Mtodo No. l.
 62
M E T O D O No. 7 <67>.

COMPUESTO A DETERMINAR: Sulfato.

FUNDAMENTO: Este mtodo para la determinacin de sulfato inorgnico,se

basa en la formacinde un complejo estable con iones cobre en un medio casineutro. Este
complejo se extrae con isobutil metilcetona en presencia de un disolvente polar.El
extracto se analiza directamente paracobre (por lo tanto indirectamente para sulfato) por
Espectrometra de flama de absorcin atmica (AAS).

REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

Reactivos:
>Solucin estndar de Cu (11), 3250 mcg/ml de Cu (11): se prepara
disolviendo cloruro cprico (Sarabhai, Baroda, India) en 100 ml de agua destilada y
estandarizada con solucin de EDTA <I>.
>Soluciones de trabajo de Cu: se preparan por dilucin apartir de la
solucin stock.
>Solucin stock al 10% de Clorhidrato de hidroxilamina:se prepara
disolviendo 50 g de la sal en 500 ml de agua.
>Buffer Tris, pH 6.5: preparado por mezclado de cantidades adecuadas de
solucin O. 1M de tris(hidroximeti1)aminometano (SD, Boisar, India; reactivogrado
analtico) y solucin O. 1M de HCl para obtener el pH deseado.
>Solucin de Neocuprin: se prepara disolviendo 3.154 g de neocuprin
(Fluka, Buchs, Switzerland) en1 litro de isobutil metil cetona.
>Solucin de Sulfato: se prepara disolviendo sulfato de sodio anhidro
(Sigma, St. Louis, MO, USA) en agua destilada y valorndose gravimetricamente<I>
(aproximadamente 1450 mcg/d respecto a sulfato).
>Isobutil metil cetona (IBMK).
>Metanol.
>Solucin de Acetato de uranilo al 1.S%.
Material y Equipo:
>Cristalera para preparacinde soluciones.
>Cristalera para correr el mtodo.
Xentrhga.
>Espectrmetro de flama de absorcin atmica, Shimadzu modelo646. Las
condiciones de operacin del aparato son las siguientes:
- Corriente de lalmpara de cobre 7.0 mA
- Longitud
onda de 324.7 nm
- Ancho de rendija 0.38 nm
- Altura
flama
de la 4.0 mm
- Tasaflujo
acetileno
de
del 1.5 Vmin
- Tasa deaire
del
flujo 10.0 Vmin
>Medidor digitalde pH, Delta Electronics modelo T-MS 30.
 63

PROCEDIMJENTO.
1.- Preparacin de la muestra.
l . 1.- Se coloca 0.3 a 1.O m1 de muestra en un tubo de centrfuga conteniendo1.O
ml de solucin de acetato de uranilo al 1.5% y 3 .O m1 de agua destilada.
1.2.-Se agita la mezcla y se centrifbga.
1.3.- El precipitado se trata con 0.4 ml de solucin de acetato de uranilo y 3.0 ml
de agua destilada; se centrifuga.
1.4.-Los sobrenadantes libres de protena se mezclan y se diluyen a 25 ml con
agua destilada.
1.5.- Blanco-procesado: se prepara tomando agua destilada en lugarde la muestra,
aplicndole el tratamiento antes descrito; el volumen final se lleva a 25 ml.
2.- Anlisis.
2.1 .- Se agregan en un embudode separacin las siguientes soluciones en el orden
que se especifican: 1 .O ml de solucin de cloruro de cobre (11) (aproximadamente 180
mcg/ml con respecto al cobre); 1.O m1 de solucin al 10% de clorhidrato de hidroxilamina,
diluido a 10 m1 con agua destilada (ajustar el pH a 6.5 con solucin de amoniaco); 0.7 ml
de solucin buffer Tris(pH 6.5); I .O m1 de solucin de neocuprin; 1 .O ml de solucin
muestra (para el blanco, se utiliza 1 .O m1 de solucin blanco-precesada); 1.5 ml de
metano1 y 6.0 ml de IBMK.
2.2.- La mezcla se agit por 1 min, permitindose reposar por 5 min.
2.3.- Una vez separadas las fases, la acuosa se descarga yla orgnica se lava con
2.0 m1 de solucin buffer Tris yse diluye a 10 ml con I B M K .
2.4.- Se mide la absorbancia aspirando la fase orgnica al interior del instrumento,
contra un blanco. La concentracinde cobre se relacion conla concentracin de sulfato.

BIBLIOGRAFIA.
1.-Vogel, A.I. 1978. VOGEL'S TEXTBOOK OF QUANTITATIVE INORGANIC
ANALYSIS. 4"Edicin. Longman, London. pp 504.
 64

RECOMENDACIONES.

I.-Una actividad inmediataque debe seguir aeste trabajo, es la validacinde los

mtodos analticos que se incluyen en el manual. Aunque la mayora de ellosreportan
haber sido validados, es conveniente comprobarlos bajo las condicionesde trabajo que se
tendrn, sobre todo en aspectos como tipo de muestra, condiciones de anlisisy algn
otro que resulte ser relevantedurante el desarrollo del mtodo.

H.- Otra actividad a realizar es la evaluacinde infraestructura existente y costos;

con estos criterios ya definidos, se anotaran las ponderaciones enla matriz de seleccin,
con los cual es posible que se tengan variacionesde puntuacin paralos mtodos, es decir,
que algn otro mtodo podra resultar convalores mayores, que los que obtuvieron los
mtodos de la seleccin hechaen este trabajo.

In.-Se deber proponer y llevar a cabo unprotocolo de validacin de la prueba de

actividad (seguimiento deloxgeno disuelto en un cultivo microbiano).

1V.-Tambin se debe considerar la necesidad deobtener ms referenciasde

mtodos para determinacinde disulhro de carbono, tanto para asegurar que el proceso
de seleccin tiene validez estadstica,como para contar, en un momentodado, con otros
mtodos alternos, con los cualesse pueda disear un protocolo de validacin del mtodo
con mayor puntuacin.
 65

ANEXOS.
 66

A N E X O N o . 1.

En esta seccin sepresentan el cronograma de actividades y los

formatos usados para el anlisis, resumeny matrices de seleccin de
los artculos.
 -67-

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 73

A N E X O N o . 2.

En esta seccin se presentan algunos resmenes losde

artculos revisados, a partir los
de cuales se han seleccionado los
mtodos analticos, quese proponen para integrar el Manual. Estos
resmenes se ajustan al formato de anlisis de artculos, que se
presenta en el formatoNo. 1 , del AnexoNo. I
 74

223582
M E T O D O No. 1

1.a. . Smith, P.K., et al. MEASUREMENT OF PROTEIN USING BICINCHONINIC

ACID. Anal. Biochem. 180, 1985: 76-85.

1.b. . PROTEINA.

1.c.iii. Lo que los autores pretenden es mejorar el mtodo de la reaccin de Biuret,

utilizando el sistema indicador del cido bicinconinico(BCA) para monitorear el
Cu++producido; hacen mencin que este reactivo ha sido utilizado para monitdrear
sustancias capaces de reducir Cu2+a Cu', tales como cido rico y glucosa. De acuerdo con
lo anterior los autores hacen notar que este es un mtodo novedoso para la determinacin de
protena basado en el uso de un reactivo de deteccinalternativo, el BCA.

2.a. . La sal sdica del cido bicinconinicoes un compuesto estable, soluble enagua capaz
de formar un complejo intensamenteprpura con el ion cuproso (Cu") en un ambiente
alcalino. Este reactivo es la base del mtodo analtico capazde monitorear Cu' producido en
la reaccin de protena con Cu2+alcalino (reaccin de Biuret). El color producido en esta
reaccin es establey se incrementade manera proporcionalsobre un amplio rango de
incrementos de concentraciones de protena.
Las reacciones que se verifican son:

El complejo BCA-CU'es un cromforo estable, altamentecoloreado con una absorbancia

mxima a 562 nm.

2.b.i. Esun mtodo instrumental en elque el instrumento de anlisis que se utiliza es un

espectrofotmetro.

2.b.ii. Se presentan dos procedimientos:

1. PROCEDIMIENTO ESTANDAR.
I. l . Mezclar un volumende muestra (estndar o por determinar) con 20 volmenes de
reactivo de trabajo (S-WR) en un tubo de ensaye. Por conveniencia rutinariamente una
relacin de volmenes de 100 pL de muestra y 2 mL de S-WR; sin embargo, cualquier
mltiplo de estas cantidades puede ser utilizado.
1.2. Aun cuando el color procede a desarrollarse inmediatamentea temperatura ambiente, se
incuban las muestrasa 60C por 30 minutos.
1.3. Transcurrido el tiempo de incubacin se enfi-an los tubos a temperatura ambiente.
1.4. Se determina la absorbanciaa 562 nm. L a concentracin de la muestra se determina de
una grficade calibracin (Conc. vs Abs.) obtenida parasoluciones estndar de protena.
 75

11. PROCEDIMIENTO MICRO.

11.l . Mezclar un volumende muestra o estndar con un volumen de microreactivo de trabajo
(M-WR) en un tubo de ensaye.
11.2. Incubar los tubos a 60C por 60 minutos.
11.3.Enfriar a temperatura ambiente los tubos, transcurrido el tiempo de incubacin.
11.4. Medir la absorbanciaa 562 nm. La concentracin de la muestra se determina de la
curva de calibracin Correspondiente, preparadade forma similar a lo descrito en el
procedimiento estndar.

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

REACTIVOS:
Procedimiento estndar:
* Reactivo A: solucin acuosa de los siguientescompuestos:
BCA-Na2 1.O%
Na2C03.H20 2.0%
Na2-tartrato O. 16%
NaOH 0.4%
NaHC03 0.95%
Ajustar el pH a 11.25 con solucin al 50% de NaOH o con NaHC03 slido.
* Reactivo B: solucin acuosa al 4% de CuS04.5H20 en agua desionizada.
* Reactivo estndar de trabajo (S-WR): se prepara mezclando 1O0 volmenes de reactivo A
con dos volmenes de reactivo B;es de color verde.
Procedimiento micro:
* Microreactivo A (MA): solucin acuosade los siguientes compuestos:
Na2HC03.H20 8.0%
NaOH 1.6%
Na2-tartrato 1.6%
Ajustar el pH a 11.25 con NaHC03.
* Microreactivo B (MB): solucin acuosa al 4% de BCA-Na2 en agua desionizada.
* Microreactivo C (MC): se prepara mezclando 4 volmenes de solucin acuosa al 4% de
CuS04.5H20, con 100 volmenes de M B .
* Microreactivo de trabajo (M-WR): se prepara mezclando 1 volumen de MC con 1
volumen de MA.

MATERIAL:
Para ambos procedimientos:
i- Cristalera para la preparacin de reactivos (vaso de ppdo., vidrios de reloj, probetas,
pipetas, esptula, otros).
ii-Material para correr el mtodo: tubos de ensaye (12xl00mm), gradilla, celdas de 1 cm de
paso.

EQUIPO:
Para ambos procedimientos:
*Espectrofotmetro
 76

*Bao mara de temperatura controlada.

2.b.i~.Para el procedimiento estndar:

Temperatura de trabajo 6O0C/3O min;pH de trabajo 1 1.25; longitud de onda para la
determinacin: 562 nm.
Para el procedimiento micro:
Temperatura de trabajo 6O0C/6Ominutos; pH del reactivo de trabajo: 1 1.25; longitud
de onda para determinaciones: 562 nm.

3 .a. Solucin de protenas.

3.b. Para el procedimiento estndar se encuentra que el rango de trabajo reportado es 100-
1200 mg/ml; no reportan ni o ni %RSD.
Para el procedimiento microse reporta que el rango de trabajo es de 0.5 a 100
mg/ml, pero no se reporta ni o ni % RSD.

3.c. De acuerdo al punto anterior para el procedimiento estndar, el lmite de deteccin es

100 mghnl; no se reporta % de recuperacin.
Para el procedimiento microde acuerdo al punto anterior, el lmite de deteccin es
de 0.5mg/ml; sin embargo aunqueno estn especificados % de recuperacin, del estudio de
compuestos que pueden interferir se observaque el % de recuperacin que consideran
ptimo es de 96 a 104%.

3 .d. Tiempo de realizacin estimado parael procedimiento estndar es de 45 minutos.

Para el procedimiento micro el tiempo estimadode realizacin es de 1 hora 20
minutos.

3.e.i. Para ambos procedimientostodos los reactivos son ms o menos comunes, a

excepcin del cido bicinconinico (sal sdica) (BCA-Na2), el cual podra ser caro.

3.e.ii. En ambos casos ms o menos apreciable(se requiere de un espectroftometro y un

bao mara de temperatura controlada).

3.f. Los autores reportan que para ambos procedimientos,se podra trabajar fcilmentecon
30 muestras para leer en 10 minutos sin prdida de exactitud o precisin delmtodo.

4.a. Del estudio de compuestos que interfieren en los ensayos tanto para BCA (mtodo
propuesto) como el de Lowry, encontraron que este mtodo presenta una mejor tolerancia a
los detergentes, lo cual lo hace ms ventajoso respecto al de Lowry; otros compuestos como
la quinidina - HCl4M o la Urea 3M interfieren muy poco en este mtodo. Sin embargoes
ms sensitivo a interferenciasde azcares reductores y presenta los mismos problemasque el
de Lowry para el caso del EDTA como interferencia.
 77

4.b. De acuerdo al punto anterior y a otros estudios realizados (como estabilidad del
reactivo y color, variaciones de protena a protena), los cuales se compararon contra el
mtodo de Lowry, entonces se considera que el mtodo propuesto esta validado.

4.c.
 78

M E T O D O N o . 2.

1.a. . Bradford, M. M. A RAPID AND SENSITIVE MET13OD FOR THE

QUANTITATION OF MICROGRAMS QUANTITIES OF PROTEIN
UTILIZING THE PRINCIPLE PROTEIN-DYE BINDING. Anal.
Biochem. 72, 19761248 - 254.

1.b. . PROTEINA.

1.c.iv. Estemtodo se propone como una nueva tcnicaque tiene ventajas tales como:
respecto a los procedimientos de Lowry y del ensayo de Biuret, se eliminan en gran medida
problemas de interferencias; este es un procedimiento sencillo y rpido, en contraste con
los anteriores y algunos otros procedimientos modificadospropuestos, as como similares a
este (tcnicas de ligando colorante), que han resultado ser ms complicadosy requieren un
tiempo considerable para su realizacin.

2.a. . Este mtodo est basado en la observacin de que el azul brillante coomasie G-250
existe en 2 formas diferentesde color, rojo y azu;lla forma roja esconvertida a la azul
cuando se liga el colorante a una protena. El complejo pretena-colorante tieneun
coeficiente de extincin alto, conlo cual presenta una alta sensibilidad en
la determinacin
de protena.

2.b.i. Mtodo instrumental para el que se requiere de un espectrofotmetro.

2.b.ii. El autor propone dos procedimientos; en el primer mtodo que se describe, la

concentracin de protena en la muestra est en el rango de 1O a 1O0 mg (METODO I), en
tanto que en el segundo mtodo la concentracin de protena en la muestra est en el rango
de 1 a 10 mg (METODO 11).

METODO I:
a. Colocar un volumen de O. 1 m1 de la solucinde protena (10 - 100 mg) en untubo de
ensaye 12x1O0 mm; ajustar el volumen aO. 1 m1 con un buffer apropiado.
b. Agregar 5m1 del reactivo para protena(colorante) y mezclar por inversin o en vrtex.
c. Medir la absorbancia a 595nm despus de 2 minutos (y antes de 1 hora), en celdas de3
ml, contra un blanco preparado con O. 1 m1 de buffer mezcladocon 5 ml del reactivo.
d. Se prepara una curva de calibracin graficando concentracin de protena contra
absorbancia.
 79

METODO 11:
a- Colocar O. 1 m1 de solucin de protena (muestra), de una concentracin de 1 a 10 mg, en
un tubo de ensaye 12x1O0 m; ajustar el volumen a O. 1 ml con un buffer apropiado.
b- Se agrega 1 m1 del reactivo (colorante) y mezclar por inversin o en vrtex.
c- Determinar la absorbanciaa 595 nm, despus de 2 minutos (pero antes de 1 hora), contra
un blanco preparado con O. 1 ml del buffer, mezclados con 1 m1 del reactivo.
d- Preparar una curva patrn graficando concentracin de protena contra absorbancia.

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

REACTIVOS:
* Azul brillante coomassie G-250
* Etanol95%
* Solucin al 85% (w/v) de cido fosfrico
* Buffer
* Albmina bovina srica
* Solucin O. 15M de NaCl
MATERIAL:
i. Cristalera para la preparacinde soluciones (vasos de pdo., probetas, piseta, vidrio de
reloj, matraces aforados).
ii.Cristalera para correr el procedimiento (tubos de ensaye 12x100 mm, gradilla , pipetas ,
celdas 3 ml ).
iii. Para el mtodo I1 se requiere de celdasde 1 d.

EQUIPO:
* Espectrofotmetro (spectronic 200 de Bausch& Lomb)
PREPARACION DEL REACTIVO:
Se disuelven 100 mg del colorante (Azul brillante Coomassie G-250)en 50 m1 de
etanol al 95% ; a esta solucin , agregar 100 ml de solucin al 85% (wh) de cido
fosfrico; la solucin resultante es diluida a un volumen final de 1 1 ( Las concentraciones
finales en el reactivo son: A z u l brillante Coomassie G-250 0.01% (w/v), cido fosfrico
8.5% (wh)).

2.b.i~.Temperatura ambiente; no se hace ninguna indicacin encuanto al pH,pero como el

reactivo se prepara en medio cido,supongo que la solucin final para determinacin tiene
un pH cido. Absorbancia de trabajo: 595 nm.

3 .a. . Solucin de protena en solucin O. 15 M de NaCl.

3.b. . El rango de trabajo para el mtodo I es de 10-100 mg de protenas en un volumen de
hasta O. 1 ml; esto correspondera, en el volumen finalde ensayo, a un rangode
concentraciones de 2 mg/ml a 20 mg/ml. El autor reporta haber encontrado una desviacin
estndar relativa de 1.27.
Para el mtodo I1 el rango de trabajo estipuladoes de 1 a 10 mg en un volumen de
hasta O. 1 ml; esto correspondera, en el volumen final del ensayo, a unrango de
concentraciones de 1 a 10 mg/ml. La desviacin estndar relativa es la misma que para el
ensayo del mtodo I.

3.c. . El lmite de deteccin que el autor encontr para el mtodo I, es de 2 mg/ml de

protena en el volumen finalde ensayo.
Por otro lado el lmite de deteccin del mtodo 11, de acuerdo a lo anterior (3.b) es
de 1 mg/ml de protena en el volumen final de ensayo.

3.d. . Se estima que se requiere de 5 a 1O minutos para correr el procedimiento para ambos
mtodos.

3.e.. Losreactivos Azul brillante coomassieG-250, albmina bovina srica sonpoco

comunes en cualquier laboratorio, por lo que tal vez son caros.

3.e.ii. Se requiere de un espectrofotmetro.

3.f . De acuerdo al tiempo de realizacin y a los pasos del procedimientome parece que
podra procesarse aproximadamente 50 muestras /hora /analista para ambos procedimientos.

4.a. . El autor encontr que los compuestos que ms interfieren son los detergentes a altas
concentraciones (p. ej. tritn X-100 al 1%, SDS al 17%, Homosol al 1%). Los efectos
menores observados pata Tris 2M, cido actico; 2-mercaptoetanol 1M; Sacarosa 1M;
Glicerol 99%; EDTA O. 1M y trazas de detergente (Tritn X-100 O. 1%, SDS O. 1% y
Homosol O. l%), se pueden eliminar fcilmentecorriendo un control en buffer apropiado con
el ensayo.

4.b. . El autor realiz un estudio de los patrones de respuesta de diferentes protenasal

correr el mtodo propuesto, comparando losresultados con el patrn obtenido con el
mtodo de Lowry. Encontr que son muy similares. Con este estudio considero que el
mtodo propuesto queda validado.

4.c
 81

M E T O D O N o . 3.

1.a. . Wallis, Craig, et al. RAPID DETERMINATION OF BACTERIA IN

COOLING-TOWER WATERWITH THE BIO-MATIC ANALYSER.
Departament of Virolom and Epidemiology, Baylor Collegeof
Medicine, Houston. and Drew ChemicalCorporation, Boonton.

1.b. . BIOMASA (conteo de bacterias con una analizador).

1.c.iii. En este artculo los autores describen unaparato que comentanque tiene las mejores
caractersticas respecto a otros (2 para precisar: el Biometer y el Bactometer) existentes.

2.a. . La prueba est basada en hacer pasar la muestrade agua a travs de un intercambiador
de resina para remover cromatos y otros pigmentos (comoherrumbre) que puedan
absorberse en la membrana bacteriana, previniendo de este modo el teido de las bacterias
atrapadas. El material que soporta la resina tambinacta como un clarificador debidoa que
remueve partculasque podran atascar el filtro. Despus de tratar las bacteriasy la
herrumbre atrapadas en la membrana, con un removedorde herrumbre, las bacterias pueden
ser teidas.El filtro es tratado con un sistema decolorantes que tien las bacteriasy la
superficie delfiltro; el filtro y las bacteriasson tratadas en seguida para decolorar
selectivamente el filtro; de esta forma los resultados corresponden nicamente a las bacterias
teidas. En base a la intensidad delcolor de una superficiedel filtro de 10 mm de dimetro,
la concentracin de bacterias enla muestra puede ser determinada.

2.b.i. Mtodo instrumental: se trata de un aparato analizador, que se basa en elteido de los
microorganismos para su cuantificacin.

2.b.ii. PROCEDIMIENTO.

2.b.iii. El aparato analizador y los consumibles se surten en un kit; por tanto no se describen
los diferentes reactivos utilizados (colorante, removedor, etc.).

2.b.i~.De acuerdo al procedimiento de uso del analizador, infiero que se trabaja a

temperatura ambiente; tampoco se hace referencia al pH al cual se lleva a cabo la
determinacin.

3.a. . Muestras de agua de torres de enfriamiento.

3.b. . Los autores no indican rango de trabajo, ni o o %RSD [al parecer no realizan un
anlisis estadstico de sus resultados; tampoco indican cuantas repeticiones hicieron para
obtener dichos resultados (cuantos experimentos hicieron?)].

3.c. . El lmite de deteccin que reportan para el analizador es de lo2 CFU/mL [unidades
formadoras de colonias por mililitro (colony-forming unitsper mililiter)].
 82

3.d. . Una muestra se puedeprocesar en 1 a 2 minutos.

3.e.ii. Tanto consumibles como el aparato analizador seobtienen en un kit; portanto

considero que el precio para obtenerlo debe ser alto.

3.f.. De acuerdo a la rapidez para procesar una muestray considerando la preparacin del
aparato entre una y otra muestra, considero que se podran analizar aproximadamente 15
muestraskordanalizador.

4.a. . Los compuestos capaces de teir los microorganismoso bien de reaccionar con el
colorante utilizado ocasionanresultados errneos en la cuantificacin. Por esto las muestras
se someten a clarificacin sobre resinas. Cuandolas muestras estn muy concentradas en
colorantes de metales pesados o herrumbre, los autores recomiendan diluir 1: 10 con agua
estril, procesndola como cualquierotra muestra; con esto reportan haber obtenidobuenos
resultados que concuerdan con los estndares por cuenta en placa.

4.b. . Los resultados obtenidos, con el analizador, los compararon con cuentas en placa, a
diferentes sistemasde tratamiento de muestras. Con esto considero que los autores han
validado losresultados obtenidos con el analizador.

4.c. . No se indica la fechade publicacin de este documento de descripcin del analizador,

pero por la bibliografia que reportan supongo que debe de ser posterior a 1980.
 83
METODO No. 1

1.a. . Vogel, A.I. 1978. TEXTBOOK OR QUANTITATIVE INORGANIC ANALYSIS.4"

pp 384 a 387.
Edicin, Longman Group Limited, London.

1.b. . SULFUROS [S=].

un de
1.c. . Es un mtodo de libro de texto, del cual no se da referencia a si se trata
procedimiento nuevo, o modificado, etc.

2.a. . Estn propuestos dos procedimientos:

I. METODO A.
Cuando un exceso de arsenito de sodio, solucin estndar, es tratada con solucin
de sulhro de hidrgeno y el medio de reaccin se acidificacon cido clorhdrico, se
obtiene un precipitado de sulfbro de arsnico (III), de acuerdo a la siguiente reaccin:
As203 + 3 H2S -------> A S ~ &+ 3 H20
El exceso de xido de arsnico (111) es determinado con solucinO. 1 N de iodo,
utilizando almidn como indicador.
11. METODO B.
El yodato de potasio al reaccionar con un agente reductor, en medio
moderadamente cido (o alcalino), libera iodo de acuerdo a la siguiente reaccinde
semicelda:
IO3- + 5 1- + 6 H' > 3 12 + 3 H20
-___-__
El iodo liberado se titula con solucin O. 1 N de tiosulfato de potasio (el iodo liberado es
equivalente al yodato no utilizado).
2.b.i. Ambos procedimientos son mtodos volumtricos redox (titulacin iodomtrica).

2.b.ii. PROCEDIMIENTOS.
METODO A:
1-1. Coloque 50 m1 de solucin estndar O. 1 N de Arsenito de sodio en un matraz
volumtrico de 250 ml; agregue 20 m1 de la muestra.
1-2. Agregar a la mezcla anterior suficiente cido clorhdrico, para asegurar que la
solucin sea cida; se formaun precipitado de color amarillo de sulfbro de arsnico (111)
[el lquido de la disolucin tambin escoloreado]. Llevar el volumen hasta la marca del
aforo y agitar vigorosamente.
1-3. Filtrar a travs de papel filtro 1O0 m1 del lquido de la disolucin, neutralizar con
bicarbonato de sodio y titular con la solucin estndarO. 1 N de iodo, hasta aparicinde
una coloracin azul con el almidn.
1-4. La cantidad residual de xido de arsnico (111), se determina deducindola de la
empleada en los 50 m1 iniciales de la solucinestndar.
 84
METODO B:
11-1.Mezclar 10 ml de muestra (que contenga aproximadamente2.5 mg de sulfbro) con
15 ml de solucin O. 1 N de yodato de potasio y 10 m1 de solucin 10 M de hidrxido de
sodio, en un vaso de precipitados de 100 ml.
11-2. Hervir la disolucin por 10 minutos.
11-3. Enfriar a temperatura ambiente y agregar 5 m1 de solucin al 5% de yoduro de
potasio y 20 m1 de solucin 4 M de cido sulfiirico.
11-4. Titular el iodo liberado con solucin estndar O. 1 N de tiosulfato de sodio.

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIAL,Y EQUIPO.

REACTIVOS:
METODO A:
>Solucin 0.1 N de Arsenito de sodio.
>Solucin deBicarbonato de sodio.
>Solucin de Acido clorhdrico.
>Solucin estndar O. 1 N de Iodo.
>Solucin indicadora de Almidn.
METODO B:
>Solucin O. 1 N de Yodato de potasio.
>Solucin 10 M de Hidrxido de sodio.
>Solucin al 5% de Yoduro de potasio.
MATERIAL:
Para ambos procedimientosse requiere:
Cristalera para la preparacin de las disoluciones.
Cristalera para desarrollar el mtodo (filtracin, calentamiento, titulacin).

METODO A: temperatura ambiente; pH cido (se neutraliza antes de la titulacin).

2.b.i~.
METODO B: se calienta a ebullicinla mezcla de reaccin; la reaccin se lleva acabo en
medio alcalinoy la titulacin se efecta a pHcido.

3.a. . Ambos procedimientos se aplican a soluciones acuosas de sulhros (Acido

sulfhdrico).

3.b. . Para los dos mtodos no se indica rango de trabajo; tampoco se reporta anlisis
estadstico de resultados.

3.c. . METODO A: no se reporta lmite de deteccin. METODO B: no est reportado el

lmite de deteccin; nicamente enfatizanen el protocolo, que la mezcla tenga una
concentracin aproximadade 2.5 mg de sulhro, sin aclarar si como mximo o como
mnimo.

3.d. . Para ambos procedimientos, me parece que se empleara aproximadamente 30

minutos enaplicarlos a una muestra.
 85
3.e.i. En ninguno de los dos procedimientos se sealan caractersticas de los reactivos, por
lo que supongo deben ser grado reactivo analtico.

3.e.ii. No se requiere de equipo para anlisis instrumental.

3 .f. . Para ambos procedimientos,tomando en consideracinel tiempo de realizacin y los

operaciones del protocolo, me parece que la capacidadde anlisis es regular, esto es, que
se podran procesar entre 10 a 20 muestras en 1 hora.

4.a. . En ninguno de los procedimientos se indica que compuestos pueden interferir enlos
ensayos.

4.b. . En ambos casos no se indica si los procedimientos heron validados.

4.c. . En el protocolo A se utiliza cido clorhdricoy arsenito de sodio, en tanto que en el

B se utiliza hidrxidode sodio y la mezcla de reaccin se calienta a ebullicin; por
consiguiente los riesgos a la saludson de consideracin.
En cuanto a las interferencias para los ensayos, con toda seguridad se puede considerar lo
expuesto en la referencia <38> (Mtodo No. 5 para determinacin de tiosulfato), dado
que estos son procedimientosiodomtricos.
No se comenta sobre la disposicino tratamiento de las mezclas residuales de los ensayos.
 86
M E T O D ON o . 2

1.a. . Furman, N.H. ULTRAMICRODETERMINATION ORSULFIDES IN AIR.

En: Furman, N.H. (ed.). 1975. STANDARD METHODSOF
CHEMICAL ANALYSIS (Vol. I). 6" Edicin. RobertE. Krieger
Publishing Co. Inc., New York.pp 1048 a 1049.

1.b. . SULFUROS [S: H*S].

1.c.ii. Este procedimiento es una modificacin a uncaso particular delMtodo del azul del
metileno.

2.a. . El sulfuro de hidrgeno u otros sulfuros a determinar (enpartes por billn) en

muestras de aire, se podr realizar haciendo pasar un flujo dela muestra (burbujear) a
travs de una mezcla de absorcin (solucin de Hidrxido de Cadmio), contenida en un
tubo incidente Greenburg-Smith;la concentracin del sulhro atrapado se estima por el
mtodo del azul del metileno.Estn propuestos 2 procedimientos:I.- para bajas
concentraciones de sulhro, 11.-para altas concentraciones de sulfuro (ms de 20 ppb).

2.b.i. Ambos procedimientos son instrumentales, pudiendo hacerse la determinacin

colorimtricamente o espectrofotomtricamente.

2.b.ii. PROCEDIMIENTOS.
METODO I:
I-a. Colorimtrico:
I-a-1 . Coloque 50 m1 de mezcla de absorcin en eltubo incidente y pasar aire atravs del
aparato por 30 minutos, a una velocidadde flujo de 1 R3/min.
I-a-2. Agregar 0.6 m1 de solucin de ensayo de amina y 1 gota de solucin de Cloruro
frrico en el tubo incidente, agitando despus de cada adicin.
I-a-3. Transferir a un matraz volumtrico de 50 ml, aforar y permitir reposar por 30
minutos.
I-a-4. A 45 m1 de la mezcla de absorcin, en un matraz volumtricode 50 ml, agregue
reactivo de prueba de amina y solucin de cloruro frrico, agitando despus de cada
adicin, aforary reposar por 30 minutos. Se utiliza como solucin blanco para calibrarel
aparato (fijar a 100% de transmitancia).
I-a-5. Leer la absorbancia de la muestray determinar la concentracinde sulhro de
hidrgeno de la curva de trabajo. Para calcular laspartes por billn (ppb) del sulhro de
hidrgeno, usar la siguiente ecuacin:
mcg de H2S * (719)
ppb E S = _________-________________
Vol (L)
Este clculo est determinado empricamente a 25C y 760 mm de Hg, usando el factor
7 19; paracorregir para otras condiciones de temperatura y presin, se usar la ecuacin
de la ley de los gases ideales.
 87
I-b: Espestrofotomtrico:
I-b- l . Se toman alcuotas de 25 ml,tanto de la mezcla finalde la muestra, como de la
solucin de referencia (blanco).
I-b-2. Las lecturas se debern hacer a670 nm.
I-b-3. Los clculo finales se multiplican por dos.

METODO 11:
11-1. Coloque 10 m1 de mezcla de absorcin enel tubo incidente pequeoy aspire a un
flujo de O. 1 R3/min a travs de la mezcla, por aproximadamente 15 minutos.
11-2. Agregue 0.6 ml de solucin de prueba de amina y 1 gota de solucin de cloruro
frrico, agitando despus de cada adicin.
11-3. Transfiera a un matraz volumtricode 25 m,l para la determinacin
espectrofotomtrica, o un matraz volumtrico de50 m1 para la determinacin
colorimtrica.
11-4. Diluir hasta el aforo y reposar por 30 minutos.
11-5. Repita el procedimiento (sinla aspiracin), para la preparacin de la solucin de
referencia (blanco).
11-6. Ajuste al aparato a cero (con el blanco)y lea la absorbanciade la muestra. Interpole
en las curvas de trabajo para obtener la cantidad de sulhro de hidrgeno y calcule las ppb,
como se indic en el procedimientoanterior.
Preparacin de las curvas de calibracin (o de trabajo): puesto que se utilizaron dos
mtodos para la estimacinde la cantidad de azul de metileno formado, se debern
preparar dos curvas de calibracin: unacon el colormetro (Klett-Summerson)y otra con
el espetrofotmetro (Coleman).

1.- Para el colormetro:

1-a. Agregue O, 1, 3, 5, 7 y 9 mcg de sulhro de hidrgeno a matraces volumtricos de50
ml, que contienen 45 ml de mezcla de absorcinde hidrxido de cadmio.
1-b. Agregar0.6 m1 de solucin de prueba de amina y 1gota de solucin de cloruro
frrico, agitando despus de cada adicin; diluya hastael aforo y dejar reposar por 30
minutos.
1-c. Con la 1" solucin (blanco) ajustar el aparato a cero de absorbancia; previamentese
ha colocado el filtro rojo al colormetro.
1-d. Lea al absorbancia de las soluciones; graficar absorbancia vs concentracin de sulfiu-o
de hidrgeno (en mcg).

2.- Para el espectrofotmetro:

2-a. Agregue O, 1, 2, 3 y 4 mcg de sulfuro de hidrgeno a matraces volumtricosde 25
ml, conteniendo 20 ml de mezcla de absorcin.
2-b. Agregue 0.6 ml de solucin de prueba de amina y 1 gota de solucin de cloruro
frrico; agitar despus de cada adicin; diluir hasta elaforo y dejar reposar por 30
minutos.
2-c. Fijar el aparato a 670 nm; con la la solucin (blanco) calibrarel aparato a cero de
absorbancia.
 88
2-d. Lea la absorbancia delresto de las soluciones; graficar absorbanciavs concentracin
(en mcg) de sulfbro de hidrgeno.

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

* REACTIVOS:
>Solucin stock de amina-cido sulfiirico: agregue 50 ml de cido sulfiirico concentrado a
30 ml de agua y enfhar; agregar 12 gde N,N-dimetil-p-fenilendiamina;agitar hasta que la
disolucin seacompleta.
>Solucin de ensayode amina-cido sulfiirico: diluya25 m1 de la solucin stock a 1 litro
con solucin 1:1 de cido sul&rico.
>Solucin de cloruro frrico: disolver 100 g cloruro frrico hexahidratado en suficiente
agua para preparar 100 m1 de disolucin.
>Mezcla de absorcin: disolver 4.3 g de sulfato de cadmio octahidratado en agua.
Disolver 0.3 g hidrxido de sodio en agua, agregarla ala disolucin de cadmio y diluir a 1
litro. Agitar perfectamente antes de usarla.
* MATERIAL:
Cristalera para la preparacin de soluciones (vasos de precipitados, vidrios de reloj,
matraces aforados, probetas).
Tubos de ensaye; gradilla.
Tubos incidentes grande y pequeo Greenburg-Smith.
* EQUIPO:
Colormetro y/o espectrofotmetro.

2.b.i~.Temperatura ambiente; el sulibro se atrapa en una solucin alcalina, porlo que el

pH al que se realiza el ensayo es alcalino.

3 .a. . Se aplic a muestrasde aire (gases); sin embargo, en el procedimientose indica que
se puede aplicar a cualquier material, del cual sea posible liberar
el sulfbro como sulhro
de hidrgeno.

3.b. . No se especifica rango de trabajo. Tampoco reportan estudios estadsticos de

resultados.

3.c. . METODO I: No se especifica lmitede deteccin; solo se resalta que este

procedimiento puede detectar concentracionesmenores a 20 ppb.
METODO 11: Para este procedimiento tampoco se indica lmite de deteccin; sin embargo
se hace nfasisque se aplica a muestrascon concentraciones mayores a 20 ppb, por lo que
estoy considerando este valor como lmitede deteccin de este procedimiento.
3 .d. Para ambos procedimientos, considero que se requiere de aproximadamente 1.25
,

horas, para aplicarlo enel anlisis de una muestra.

3.e.i. Aunque no est especificado, los compuestos utilizados, con seguridad deben ser
grado reactivo analtico.
 89
3.e.ii. Se requiere de un colormetro o de un espectrofotmetro, los cuales son aparatos
relativamente comunes enlos laboratorios de anlisis.

3.f. . Tomando en consideracin que el procesamiento de las muestras no es complicado

para ambos mtodos, a pesarde que el tiempo de realizacin es apreciable, me parece que
se puede tener una capacidad regularde anlisis de muestras, es decir, procesar de 10 a 20
muestras en unahora.

4.a. . No se indica que compuestos pueden interferir enel ensayo.

4.b. . No est indicado si el mtodo (los dos procedimientos) h e validado.

4.c. . Se trabaja con sustancias corrosivas (cido sulfirico, hidrxido de sodio), por lo
cual losriesgos a la saludson de consideracin.
No se indica acerca de la disposicino tratamiento de las mezclas residualesde los
ensayos.
Al ser un mtodo propuesto en un libro detexto, deja varios puntos del resumen
sin datos concretos para llevar a cabo las comparaciones con los otros mtodos de
anlisis, durante el proceso de seleccin.
En cuanto a la preparacinde las curvas patrn,de la consulta del artculo de
referencia (Jacobs, M.B., et al 1957), encontr que el reactivo utilizado es una solucin
stock de sulhro dehidrgeno (1 m1 = 1O0 mcg de sulhro de hidrgeno) preparada de la
siguiente forma: disolver 0.71 g de sulhro de sodio nonahidratado en 1 litro de agua,
estandarizando y ajustando con soluciones valoradas de iodo y tiosulfato. La referencia
antes citada es:
Jacobs, M.B., et al. A n d . Chem. 29(9)1957:1349 - 1351.
 90
METODO No. 3

1.a. . Arowolo, T.A. & M.S. Cresser. AUTOMATED DETERMINATIONOF

SULPHIDE BY GAS-PHASE MOLECULAR ABSORPTION
SPECTROMETRY. AmJvbYt116(6)91:595 - 599.

1.b. . SULFUROS [S'].

1.c.ii. Se describe la automatizacin del mtodode Espectrometra de absorcin molecular

en fase gas (GPMAS), para la determinacin de sulfbros,el cual resulta rpidoy
especfico; este procedimiento ya se haba utilizado con anterioridad en la determinacin
de otros componentes de muestras biolgicas(por ejemplo nitrgeno), porlo que aqu se
describe la modificacin del mismo aotro caso.

2.a. . El mtodo se basa en la conversin del catino anin a determinar, en una especie
molecular voltil, seguidapor su determinacin de su absorbancia molecular en fase
gaseosa; concretamente, se hace reaccionar los iones sulbro con cido clorhdrico3 M y
el sulfbro de hidrgeno liberadoes arrastrado por una corriente de aire al interior de un
separador gas-lquido, determinndose la absorbancia 200 a nm, usando una lmparade
ctodo falso de deuterio.
2.b.i. Instrumental; se requiere de un espectrmetro de absorcin atmica.

2.b.ii. PROCEDIMIENTO.
a,- Las muestras son suministradas al mltiple por un muestreador TechniconI1 con
capacidad para40 muestras.
b.- Las soluciones reactivo(muestras y cido clorhdrico)son suministradas por una
bomba Technicony mezcladas en el serpentnde mezclado, antes de entrar al separador
gas-lquido.
c.- El separador gas-lquido se construy, despus de varios experimentos preliminares,de
una pieza T de vidrio conectado a la clula de absorcin por una punta de pipetay un tubo
de calibre estrecho (D.I. = 0.82 m).
d.- El sulfbro de hidrgeno liberado(formado) es arrastrado por el gas acarreador al flujo
interno de la clula de absorcin, la cual fbe alineada en la va ptica del espectrmetro.
e.- Una vez que el muestreador est cargado se arranca y el anlisis inicia.Los valores de
absorbancia de los estndares se determinan parapreparar una grfica de calibracin. Los
parmetros de operacin de las diferentespartes del instrumento y el mltiple son las
siguientes:
Espectrrnetro:
longitud de onda: 200.0 nm
modo: Absorbancia
corriente delmpara: 10.0 mA
ancho de rendija: 0.5 mm
banda: 3.0 mm
 91
Registrador:
sensitividad 2.5 a 100 mV mxima
0 velocidad de la carta 5 .O mdmin
Bomba y muestreador automtico:
ciclo de muestreado 45.0 seg
ciclo de lavado 45.0 seg
flujo de aire 0.6 mVmin
0 flujode HCl3M 0.23 d m i n
velocidad de muestra o lavado 1.O d m i n
flujo gas acarreador (aire) 13.3 ml/min
serpentn de mezclado 29.0 vueltas

2.b.iii. REACTIVOS,MATERIAL, Y EQUIPO.

* REACTIVOS:
Todos los compuestos deben ser grado reactivo analticoy deaereados; se utiliza agua
desionizada entodas las etapas del anlisis.
>Solucin stock de sulhro de 500 mcg/ml: se prepara disolviendo 1.875 g de sulhro de
sodio nonahidratado en500 ml de solucin al 25% de buffer antioxidante de sulhros
(SAOB). Los estndares de trabajo se preparan cada da en SAOB 25%, al por el mnimo
nmero de pasos posible.
>Solucin 3M de cido clorhdrico.
>Buffer antioxidante de sulhros (SAOB): 2 moVdm3 de hidrxido de sodio; 0.2 mol/dm3
de cido ascrbico; 0.2 mol/dm3 de EDTA.
* MATERIAL:
Cristalera parala preparacin de disoluciones: vasos de precipitados, vidrios de reloj,
probetas, matraces volumtricos.
* EQUIPO:
Espectrmetro de absorcin atmica (Shandon Southern A 3600), con lmpara de
ctodo falso de deuterio y Registrador de carta (Auto-graph S). El espectrmetro se
modific colocando la clula de absorcin (de cuarzo y 13 cm de longitud), enel lugar
que ocupara el quemador.
Bomba y muestreador automtico.
Medidor de flujo conectado a un controlador de flujo Brooks No. 8943 (Brooks
Instrument, Hatfield, PA, USA).

2.b.iv. No hay ninguna indicacin respecto al pH; sin embargo,como se est utilizando un
buffer (SAOB), el pH debe estar definido en un cierto valor.

3.a. . Este mtodo se ha aplicado a la determinacin de sulfatos-sulhros en vegetales; los

autores resaltan que para establecer este procedimiento utilizaron muestrasde mezclas de
hierbas (pasto y trbol), para io cual efectuaron una digestin, modificandoel mtodo
propuesto por Johnson y Nishita 1952, para convertir el azufre en sulhro de hidrgeno.
 92
3.b. . Realizaron el siguiente anlisis estadsticode resultados:
hicieron 10 determinaciones para4 soluciones estndar de diferentes concentraciones [2,
4, 12 y 20 mcg/ml de sulfbro], para los cuales obtuvieron una Desviacin
estndar relativa
(RSD) de 3.3, 3.3, 1.4y 1.5% respectivamente (laRSD promedio es de 2.735%).

3.c. . El lmite de deteccin que reportan para el mtodo es de0.06 mcg/ml de sulfbro. No
reportan haber realizado estudios de recuperacin.

3.d. . De acuerdo a la capacidad de anlisis quereportan para este procedimiento,

tenemos que una muestrase puede procesar en aproximadamente3 minutos.

3.e.i. Se requiere de reactivos grado analtico, lo cual implica gastos de consideracin.

3.e.ii. De acuerdo al equipo que se requiere, la inversina realizar es alta (espectrmetro,
bomba y muestreador automtico asociados al mltiple, controlador de flujo, tanque de
aire comprimido),ya que no es muy comn enlos laboratorios de anlisis.

3.f. . Reportan una capacidad de anlisis de 20 muestras a tratar en 1 hora.

4.a. . Los estudios se realizaron con soluciones con una concentracin de 20 mcg/ml de S=
y 500 mcg/ml del posible interferente; se observ que los aniones cloruro, yoduro,
bromuro, fosfato, sulfato, nitrato y carbonato no interfieren enel ensayo; el nitrito si
interfiere. Los cationes Na', K', Al (111), Ca (11), Mn (11), Mg (11) y Zn (11) no afectan la
determinacin de sulfuro; el Ni(I1)y el Cd (11) mostraron un efecto marginal, en tanto que
el Fe (111) y el Cr (VI) causaron un depresin sustancial en la seal del sulkro; el Co (11) a
una concentracin de 100 mcg/ml caus una depresin casicompleta de la sealde
sulfbro, en tanto que el Cu (11) a una concentracin igualcaus una depresin total.

4.b. . En cuanto a este punto, analizaron 6 muestras (tablaNo. 4) por duplicado, de una
mezcla de hierbas (pastohrbol) aplicando el mtodoreportado en este artculo y el
mtodo del azul de metileno de Johnson y Nishita 1952;de la comparacin de resultados,
encontraron que estn muy prximos.

4.c. . El mltiple es un dispositivo simple; cualquier instrumentode absorcin atmica

puede ser empleado.El mtodo puede ser aplicadoa la determinacin de azufre total en
extractos de suelo, utilizando el procedimiento del azul de metileno modificadode
Tabatabai y Bremmer 1970, por conversin de las diferentesformas de azufre del suelo en
sulhro de hidrgeno, el cuales colectado y determinado mediante elprotocolo
desarrollado por los autores.
Las referencias mencionadas para complementar este resumen son:
Johnson, C.M. &H. Nishita. Anal. Chem. 24. 1952:736.
Tabatabai, M.A. & J.M.Bremer. Soil Sci. Soc. Am. Proc. 34. 1970:62.
 93
METODO No. 4

1.a. . Ogasawara, Y., et al. DETEFMINATION OF TRACE AMOUNTS OF

SULPHIDE IN HUMAN RED BLOOD CELLSBY HIGH-
PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY WITH
FLUORIMETRIC DETECTION AFTERDEWATIZATION
WITH p-PHENYLENEDIAMINEAND IRON (111). ALWZYS~
116(12)91:1359 - 1363.

1.b. . SULFUROS [S=].

1.c.iii.Los autores hacen referenciade varios trabajos como antecedentes, en cuanto a la

metodologa (HPLC en fase reversa), as como al uso de reactivos para derivatizacin
(por ejemplo N,N-dimetil-p-phenylenediamine). De lo anterior podemos decir que el
mtodo que se propone en este artculo es un procedimiento con mejores caractersticas
que los referidos.

2.a. . El sulfbro reacciona especficamente con p-fenilendiamina(o sus anlogos

sustituidos) en presencia de iones Fe (111) en condiciones cidas, para formar derivados
triazinados; la tionina es el derivado correspondiente, obtenidode la reaccin del sulhro
con p-fenilendiamina.

2.b.i. Esun mtodo instrumental, cuyo equipo de trabajo es un HPLC, previamente, la

muestra es tratada para obtener un derivado (derivatizacin), el cual
es cuantificado enel
cromatgrafo.

2.b.ii. PRCEDIMIENTO.
I. Pretratamiento de muestras.
I- l . La sangre total, con heparina como anticoagulante, fue centrifbgada por 15 minutos a
1700 g.
1-2. Las clulas empacadas(eritrocitos) se separan del plasma, lavndolasdos veces con
solucin isotnica salina.
1-3. Las muestras finalesfberon preparadas agregando alcuotasde 50 mcl de las
soluciones estndar de sulfbro, correspondientes a0.5, 5.0 y 50 mcM a los eritrocitos (1
ml) y mezclando vigorosamente.
1-4. Enseguida se us una clula Conwayde microdifbsin para continuar con el
pretratamiento de las muestras de eritrocitos: en el centro del pozo de la clula se coloc
un volumen de 1 ml de solucin de hidrxido de sodio O. 1 M conteniendo 5 mM de
EDTA y 2 m M de glicerol.
1-5. Se coloca 1 ml de solucin diluida (1+9) de cido sulfiirico en un lado en el exterior
del pozo.
1-6. En el otro extremo del exterior delpozo se coloca 1 m1 de muestra de eritrocitos.
1-7. Se sella la clula con grasa para vaco.
 94
1-8. La clulase coloca en un agitador rotatorio a baja velocidadpor 1 hora; un volumen
de 500 mcl de la solucin de hidrxido de sodio 0.1 M conteniendo el sulhro de
hidrgeno atrapado se usa como muestra del mtodopropuesto.
H. Derivatizacin.
11-a. A 500 mcl de muestra colocados en un tubo de polietilenode 1.5 m1 con tapa
roscada se le agreg 400 mcl de solucin 12.5 mM de p-fenilendiamina y 100 mcl de
solucin frrica40m M .

11-b. El tubo se cerr inmediatamente y cuidadosamente invertido 2veces. Se observ que

una agitacinvigorosa resulta en una prdida desulhro debido a que se volatiliza
rpidamente.
11-c. Despus de un periodo de 10 minutos de reaccin, una alcuotade esta solucin h e
inyectada enel sistema HPLC usando una asade muestre0 de 100 mcl. Las medidas de las
reas de los picos fueron realizadas para construir una grfica de calibracin.
Condiciones del SistemaHPLC:
>Detector de fluorescencia:
Excitacin 600 nm
Emisin 623 nm
Mximafluorescencia 64 mV (soln. std. O. 1 pM)
5 12 mV (1 .O pM;tionina derivat.)
>Cromatgrafo:
Columna: Merck Hiber pre empacada Li Chrospher RP-8 (tapada al final) r250x4.0
mm de D.I.].
Fase mvil: Acetonitrilo-Bufferde fosfato de sodio 50 mh4 (pH 4.0) conteniendo (1+1)
SDS 40 m M .

Velocidad de flujo: 1 ml/min.

Volumen de la inyeccin: 100 pl.

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIAL Y EQUIPO.

REACTIVOS:
>Acetonitrile, metanos y agua grado HPLC (Merck).
>SDS (reactivo ion-apareado) grado HPLC (Tokyo kasei kogyo).
>Muestra patrn (autntica) de Tionina (Aldrich); la solucinestndar se prepar por
dilucin apropiada de una solucin stock 1 m M con el eluente.
>Clorhidrato de p-fenilendiamina (Tokio kasei kogyo): las soluciones de trabajo se
prepararon semanalmente disolviendo0.226 g de clorhidrato en 100 m1 de agua destilada,
desionizada.
>Solucin frrica: solucinde trabajo 40 m M , preparada cada semana, disolviendo0.54 g
de cloruro frrico hexahidratado en 50 ml de cido clorhdrico diluido(l+l).
>Solucin stock de sulhro: solucin 10 mM preparada semanalmente, disolviendo sulhro
de sodio nonahidratado en solucin O. 1 M de hidrxido de sodio, conteniendo 5 mM y 2
mM de glicerol; la solucin h e almacenada enfrascos de polietileno obscuro y
estandarizada, por titulacin iodomtricaantes de usarla (@HA 1985). Las soluciones
estndar de trabajo de sulfur0 (0.02 a 6.0 mcM) heron preparadas diariamente, por
 95
diluciones seriadasde la solucin stock con solucinO. 1 M de hidrxido de sodio recin
preparada con agua hervida, destiladay desionizada.
Todas las soluciones(stock y de trabajo) se almacenan en refrigeracina 4C.
>Fase mvil: preparada mezclando acetonitriloy buffer de fosfato de sodio 50 m M (pH
4.0) [ 1+1], agregndoles el reactivo ion-apareado dodecilsulfatode sodio (SDS), siendo
la concentracin finalde SDS de 40 m M . Todas las fases mvilesheron filtradas a travs
de membrana de 0.45 pm de poro y degasificados bajo vaco(a presin reducida) enun
bao ultrasnico antes de utilizarlas.
MATERIAL:
i. Cristalera parala preparacin de soluciones (vasos de precipitados, probetas, matraces
erlen-meyer, vidrios de reloj, pisetas).
ii. Frascos reactivo de vidrio y de plstico.
iii. Micropipetas.
iv. Tubo de polietileno de 1.5 m1 con tapa roscada.
v. Asa de muestra de 100 yL.
EQUIPO:
>Sistema HPLC:
Bomba Hitachi Modelo L-6000 (Tokio, Japn).
Vlvula de inyeccin Rheodyne (Catati, CA, USA), con asa muestreadora de 100 yL.
Columna pre empacada Li ChrospherRP-8 (tapada al final) Merck Hiber ( 5 mcm,
250~4.0mm de D.I.,con guarda columna Li ChrospherW-8 (encapsulada) [5 mcm].
Espectrmetro de fluorescencia Hitachi F-1050con una clula de flujo de 12 mcl fijado
a longitudes de onda de excitacin y emisin de 600 y 623 nm respectivamente.
Integrador Hitachi L-2500 para medir el rea de los picos.
>Clula de microdifbsin Conway (de vidrio) [ShibataKagaku (Tokio, Japn)].

No hay ninguna observacin encuanto a la temperatura de trabajo, por lo que

2.b.i~.
supongo que se est trabajando a temperatura ambiente (+/- 25OC). Reportan un pH
ptimo de operacin de 1.O. Las concentraciones ptimasde los reactivos que
recomiendan son: 4.0 mM para el reactivo frrico y 5.0 mM para la fenilendiamina.

3.a. . Este mtodo se aplic en muestrasde eritrocitos de sangre humana.

3 .b. . El rango de trabajo que reportan es de 0.0 1 a 3 .O pM de sulfbro. Del anlisis

estadstico de resultados obtuvieron: una desviacin estndar relativa (RSD) de 2.54%
(para n=5) a 0.02 yMy 1.74% (para n=5) a 1.O yM;de estos resultados, se obtiene una
RSD promedio de 2.14%.

3.c. El lmite de deteccin determinado es de 1.5 nM (48 pg/ml). No reportan estudios de

recuperacin.
 96
3.d. . De acuerdo al procesamiento de la muestra y al tiempo que se requiere para su
anlisis en el cromatgrafo, se estima que una muestra se puede analizar en
aproximadamente l .5 horas.
3.e.i. Los reactivos utilizados son grado reactivo analticoy grado HPLC, por lo que se
infiere que los costos por consumo de reactivos son altos.

3.e.ii. Se requiere de un HPLC,equipado con un espectrofotmetro de fluorescencia

como detector; en consecuencia,los costos de inversin en equipo son altos.

3.f. . De acuerdo a las operaciones implicadas en la preparacinde la muestra (que son

simples, aun cuando se consume tiempo)y a que es relativamente rpido el anlisis en el
cromatgrafo, me parece que se pueden procesar varias muestras en poco tiempo.
Adems los autores hacen la observacin,de que una vez realizada la reaccin de
derivatizacin, la muestrase pudo mantener por lo menos durante una semana sin perder
estabilidad.

4.a. . Los aniones inorgnicostiosulfato, yoduro, hexacianoferrato (11) y hexacianoferrato

(III), as como la cisteina, glutatin reducido, 2-mercaptoetanol y nitrito interfieren en
la
determinacin de sulfbro en este mtodo.

4.b. .

4.c. .
 97
M E T O D ON o . 1

1.a. . Sorbo, Bo. A COLORlMETRICMETHOD FOR THEDETERMINATION OF

THIOSULFATE.Biochem. Biophvs. Acta 23, 1957:412-416.

1.b. . TIOSULFATO.
I

1.c. . El autor lo plantea como tcnica nueva, aplicable a muestras de sistemas biolgicos; hace
notar que el mtodo iodomtrico clsico no es aplicable en algunos de estos casos debido a la
presencia de compuestos reducidos; tambin resalta que existen
otros mtodos parala
y tardados.
determinacin de tiosulfato, pero con la desventaja de ser laboriosos

2.a. . El mtodo se basa en

la conversin del tiosulfato a tiocianato, en presencia de iones
cobre. El mecanismo de reaccin se desconoce, pero probablemente involucra la formacinde
un complejo cobre-tiosulfato-cianuro,el cual se descompone rpidamente, produciendo
tiocianato.

2.b.i. Es un mtodo colorimtrico.

2.b.ii.PROCEDIMIENTO:
a.- La muestra puede ser usada directamente para andisis si est libre de compuestos
amortiguadores;de otra forma deberser desarrollado el colorazul de la timolfialeina, el cual
puede ser utilizado como indicador interno.
b.- A 4.2 ml de muestra (que contiene aproximadamente 1.5 peq de tiosulfato),
agregar 0.5 ml de cianuro de potasio.
c.- Mezclar.
d.- Agregar 0.3 ml de cloruro de cobre(11).
e.- Un precipitado formado lentamente, se disuelve al agregar 0.5 ml del reactivo de
nitrato frrico(IMP0RTANTE: antes la de adicin del cloruro de cobre la mezcla deber
mezclarse inmediatamente, para evitar que el precipitado formado no se disuelva
completamente con el reactivo frrico).
f.- Determinar la absorbancia a 460 m.
g.- Correr un blanco preparado de la siguiente forma: a otra alcuota de muestra
agregar primero el reactivo frrico, seguido del cianuro de potasioy el cloruro de cobre.
h.- 1 peq de tiosulfato daun valor de absorbancia corregidade alrededor de 0.58.

2.b.iii. REACTIVOS,MATERIAL Y EQUIPO.

* REACTIVOS:
>Solucin O. 1M de cianuro de potasio.
>Solucin O. 1M de cloruro de cobre.
>Reactivo de nitratofrrico: 100 g de nitrato frrico nonahidratado
se disuelven en200 ml de
cido ntrico al65%, dorando a 1000ml con agua destilada.
Todos los compuestos utilizados, deben ser grado reactivo analtico.
 98
* MAmRrAL:
Cristalera para la preparacin de soluciones.
* EQUrPO:
Espectrofotmetro, con celdillas de1 cm de paso.

2.b.i~.La reaccin se lleva a cabo a temperatura ambiente (el cloruro de cobre acta como
catalizador); pH entre9 a 1l .

3 .a. . Este mtodo se comprob en la determinacin de tiosulfato

en orina; al autor tambin
afirma quees aplicable a muestras de sangre.

3.b. . Est reportadoun rango de trabajo de

0.0 a 4x104 M de tiosulfato, para determinar el
la absorbancia.No reporta haber realizado anlisis estadstico
efecto de la concentracin sobre
de resultados.

3.c. . El lmitede deteccin que reporta es de0.05 peq en un volumen final de 5 m l . NO

reporta haber realizado estudios de recuperacin.

3.d. . El mtodoes muy rpido (la reaccinse efecta en15 seg). Por consiguiente me parece
que una muestrase puede procesar en5 min.

3.e.i.Los reactivos utilizados son grado reactivo analtico,

lo cual implicacostos a considerar.

todos los laboratorios.

3 .e.. Se requierede un espectrofotmetro, quees un aparato comn en

3.f. . De acuerdoal inciso 3.d se puede inferir, que la capacidad de anlisis debe ser alta, esto
es, se pueden procesar ms de 20 muestras en una hora.

4.a. . Como interferencia positivas (otra fbente de formacin de tiosulfato), menciona los
a
politionatos, describiendo un procedimiento para corregir la concentracin total de tiosulfato a
la concentracin real;otra son los iones sulfbro,los que recomienda precipitar con iones
cadmio; otros compuestos ti01 tambin recomienda eliminar con cadmio.
Como interferencia negativas (innuyen sobreel desarrollo del color), estn los iones
fosfato [a concentracin de O.OlM] que reducen el color en 25%; un el zinc auna
concentracin de0.01M inhibe la conversin de tiosulfato a tiocianato en 60%,
un con lo cual
se afecta el desarrollo de color (el cadmio a lamisma concentracin slo influye enun lo%,
por lo que se prefiere sobre el zinc para la eliminacinde sufiros y compuestos tiol); los iones
sulfito afectan en un 30%, debido a que reducen la concentracin de iones cobre, cuandosu
concentracin es mayor de 0.01M.
El bicarbonato a una concentracin 0.01Mde o el cloruro deamonio a una
concentracin deO. l M , utilizados como amortiguadores apH de 10.4, no interfieren en el
ensayo.
4.b. . El autor no reporta haber validado el mtodo.
 99
4.c. . No indica procedimiento para la eliminacin de interferencia negativas. El trabajar con
cianuro de potasio implicaun alto riesgo para el analista, al realizar la determinacin.
No hay referencia acerca del tratamientoo disposicin delas mezclas residuales delos
ensayos.
 1O0
METODO No. 2.

1.a. . Pierson, R.H.DETERMINTIONS OF THIOSULFATE AND N I T R I T E .

Anal. Chem. 26~2)
1954:3 15-320.

1.b. . TIOSULFATO.

1.c. . Por lo expuesto porel autor, se trata de

un procedimiento nuevo. Menciona que aunque
existen mtodos para la determinacin de tiosulfato o nitrito en solucin amoniacal, cada uno
de ellos como nico compuesto a determinar, no son aplicables cuando ambos compuestos se
encuentran en la misma muestra.

2.a. . El autor presenta dos procedimientos:

a: Determinacin de tiosulfato en muestras de soluciones amoniacalesloque contienen
junto con nitrito, pero que estn libresde subros y sulfitos.
b: Determinacin de tiosulfato en soluciones desufiro amoniacal, libres de nitritos y
sulfitos.
El mtodo (a) se basa el entratamiento dela solucin que contiene el tiosulfatoy el
nitrito, con nitrato de plata bajo condiciones cuidadosamente controladaspH ;el tiosulfato
de
produce sulfbro de plata cuantitativamente, en tanto que el nitrito no es afectado. La
determinacin de tiosulfato se completa midiendo la platasulfur0
del de plata precipitado,
disolvindolo en cido ntricoy titulando con tiocianato de amonio, de acuerdoal
procedimiento de Volhard.
El mtodo (b)se hndamenta en la remocin de sulfuros, polisulfbros hidrosubros
e
como sufiro de hidrgenoy azufre elemental, por burbujeo de nitrgeno a travs de la
solucin que ha sido amortiguada.
y el nitrito, con nitrato
2.b.i. a:Este mtodo combina una separacin gravimtrica del tiosulfato
de platay una determinacin volumtrica del tiosulfato (titulacin con tiocianato de
amonio).
b: Despusde la eliminacin desukros, la determinacinde tiosulfato see f d a
mediante una titulacin iodomtrica.

2.b.ii. PROCEDIMIENTOS:
METODO A:
a-1.- Coloque en un vaso de precipitados 600 de ml (que contiene20 ml de solucin
buffer de acetato de amonio y aproximadamente 100 ml de agua destilada),la muestra (2 a 50
ml segn el contenido esperado de nitrito y tiosulfato).
a-2.- Insertarla "mosca"y colocar el recipiente sobre el agitador magntico, aplicando
agitacin relativamente vigorosa; insertar tambin el electrodo de calomel conectado al
potencimetro.
a-3 .- Ajustar el pHde la disolucin entre7.5 y 8.0, agregando cido acticoal 10% o
hidrxido deamonio al 2%.
a-4.- Coloque sobre el vaso de precipitados 2 buretas: una conteniendo nitrato de plata
O. 1M y la otra con hidrxido de amonio al 2%.
 101
a-5.- Iniciela adicin del nitrato, agregando unos mililitros cada vez, y como el pH
decrece, adicionar unas gotas de hidrxido de amonio para mantener la solucin de reaccin a
un pH entre7.1 y 7.5; continuar agregando el nitrato y el hidrxido en incrementos pequeos
hasta quetodo el tiosulfato haya reaccionado.Al principio se forma un precipitado blanco o
amarillento, pero luego se obscurece hasta tomar un color negro caracterstico del s u h o de
plata. Cuando se agrega un exceso moderado de nitrato de plata (2 a 5%), el suhro coagular
y en ese momento se debe detener rpidamente la agitacin; probar sobre el lquido
sobrenadante para exceso de nitrato de plata, colocando unas gotas de ste sobreun vidrio
claro o una placa con mancha negra y agregarle una gota de tiocianato amonio de O. 1M
(precipitado blanco). Cuando la prueba es positiva, agregar un exceso del 5% sobre la cantidad
ya agregadade nitrato. &tar por 5 a 10 minutos ms.
a-6.- Retire el electrodoy la mosca limpindolos con un pedazo de papel filtro, para
remover las trazas adheridas suhro de de plata; colocar este papel la en solucin que contiene
el s u h - 0 precipitado, agregar 2 ml de solucinal 2% de hidrxido de amonio y dejar
reaccionar por 10 a 15 minutos.
a-7.- Filtrar a travs de papel Whatman No. 1 y lavar5 a 6 veces con agua destilada. El
filtrado se reserva para determinacinde nitrito, en tanto que el precipitado se utiliza para
medir el tiosulfato de acuerdo al siguiente procedimiento.
a-8.- Determinacin de tiosulfato: lave otra vez el sulfur0 precipitado, con chorro de
agua destilada en el vasode precipitados en el que se llev a cabo la precipitacin; ajustar el
volumen a aproximadamente 100 ml y llevar a ebullicin el lquido.
a-9.- Enfiiar por 15 minutos y filtrar a travs del papel filtro previamente utilizado para
la filtracin del sulfbro o r i d ; lavar con agua destilada, hasta que el filtrado de prueba
negativa para presencia de plata con tiocianatoamonio de o solucin de cido clorhdrico.
a-10.- Transfiera el papel filtro con el precipitado de sulfur0 de alplata vaso de
precipitados en el que se realiz la precipitacin; agregue 1O a 15ml de cido ntrico
concentrado y una cantidad igualagua de destilada; caliente la mezcla hasta ebullicin
incipiente y mantngala a esta temperatura hasta que todo el sukro de plata se haya disuelto
(aproximadamente 15 a 20 minutos), entonces agregue alrededorde 1O0 ml de agua destilada
y hierva la solucin por30 minutos. Haga que el volumen total sea de aproximadamente 150
ml y deje reposar por10 minutos.
a- 1l .- Filtre la solucin a travsde papel WhatmanNo. 1 y lave algunas veces con
agua destilada.
a- 12.- Agregue unasgotas de sulfato fnico-amnico (indicador) y titule con
tiocianato deamonio O. 1M hasta virede coloracin a rosa plido.
 102
a- 13.- En base a la siguiente reaccin:
2 AgNO3 + Na2S203 + Hz0 ---------> Ag2S + 2 NaN03 + H2SO4
1 mol de tiosulfato requiere 2 moles de plata.
1 ml de tiocianatode amonio O. 1M = 1 ml de nitratode plata O. 1M = 5.606 mg de tiosulfato.
Entonces:
5.606*M*T
O
o/ de tiosulfato= ---_____----_---
w
donde:
M= molaridad de la solucinde tiocianato de amonio.
T= ml del titulante.
W= peso de la muestra eng.

METODO B:
b-l.- Coloque una muestra de tamao apropiado (2 a 50 ml segn la concentracin de
tiosulfato), en un matraz erlen-meyer de 300 ml que contenga 20ml de solucin buffer de
acetato de amonio y alrededor de 40 a de agua destilada.
50 ml
b-2.- Por medio de un tubo de vidrio, burbujear nitrgeno a de travs
la solucin
anterior a una tasa ligeramente vigorosa y elevar gradualmente la temperatura,60hasta a 65C;
mantener la temperatura en este rango y continuar el tratamiento con nitrgeno, hasta queno
haya ms desprendimientode sulfbro de hidrgeno, cual lo se comprueba con papel de acetato
de plomo (la operacin de burbujear se lleva de 60 a 90 minutos).
b-3.- Lavarel tubo de burbujeo y el termmetro, con agua destilada y retirarlos del
matraz; enfiiar la disolucin a temperatura ambiente.
b-4.- Filtrar la solucin a travs de papel filtro Whatman No. 1 o No. 42; seleccionar el
No. 1 si el azufie tiene apariencia de cogulo, o el No. 42 en caso contrario. El filtrado debe
ser perfiitamente claro.
b-5.- Lavar el precipitado o4 5 veces con agua destilada.
b-6.- Acidificar el filtrado con cido actico al 10% (comprobando con papel tornasol)
y enseguida agregue aproximadamente50 ml de cido.
b-7.- Tituleel tiosulfato iodomtricamente utilizando solucin valorada de iodo y,
almidn como indicador.
b-8.- 1ml de solucin de iodoO. 1M = 1 ml de solucin de tiosulfatoO. 1M = 11.21mg
de tiosulfato.
Entonces:
1 1.21*M*T
O
o/ de tiosulf-to = ___--_--------
w
donde:
M= molaridad de la solucin de iodo.
T= volumen de titulante utilizado, en
ml.
W= peso dela muestra eng.
 103
2.b.iii.REACTIVOS,MATERIAL Y EQUIPO.
METODO A:
* REACTNOS:
>Solucin buffer de acetato deamonio al 25% (ajustandoel pH entre
7.5 a 7.7 con hidrxido de amonio).
>Solucin al 10% de cido actico.
>Solucin al 2% de hidrxido de amonio.
>Solucin valoradaO. 1M de nitrato de plata
(preparada conun estndar primario)
>Solucin valoradaO. 1M de tiocianato de amonio.
>Acid0 ntrico concentrado, grado reactivo.
>Solucin 1:3 de cido sulrico.

>Solucin saturada de sulfato frrico-amnico (indicador).

"MATERIAL:
y para titulacin.
Cristalera para la preparacin de soluciones, para filtracin
* EQUIPO:
- Potencimetro con electrodo de calomel.
- Parrilla elctrica con agitador magntico integrado.
METODO B:
* REACTIVOS:
>Solucin buffer de acetato de amonio al 25%.
>Solucin al 10% de cido actico.
>Solucin valorada de iodo0.01 a O. 1M (segn la concentracin de
tiosulfato).
>Solucin indicadora de almidn.
>Papel testigode acetato de plomo.
>Papel tornasol.
>Cilidro de gas nitrgeno libre de oxgeno.
"MATERIAL:
Cristalera para preparacin de soluciones
y para titulacin
* EQUIPO:
- Parrilla elctrica.
2.b.i~.METODO A: El control del pH (7.1 7.5)
a en la separacin del nitritoy el tiosulfato, es
un punto crtico; en el procedimiento
de determinacin de tiosulfato se lleva a ebullicin la
mezcla de reaccin dos veces.
METODO B: El rango de operacinde pH es 7.5 a 7.7;el burbujeo de nitrgeno, se
de 60 a 65OC para la eliminacinde suhros.
hace estandola solucin a una temperatura
 104
3.a. . METODO A: En este casoel mtodo se aplic a soluciones acuosas amoniacales, libres
de sulfur0y sulfito.
METODO B: Se aplic en soluciones acuosas de sulhro de amonio libres de nitrito y
de de sodioo
sulfito; elautor afirma que es posible aplicarlo a soluciones acuosassulfino
su&ro de potasio.

3.b. . METODO A: El rango de trabajo para tiosulfatoh e de 14.0 a 280.1m g d . Del anlisis
estadstico de sus resultados encontr una desviacin estndar0.46.
de
METODO B: El rango de aplicacin en este caso h e de 0.017 a 0.263 M.En este
caso determin% de desviacin estndar, encontrando un valor de 0.7%.

3.c. . METODO A: El autor reporta que encontr manera de consistente, valores de

recuperacin entre99 a 101%, para las diferentes concentracioneslasa que aplicel mtodo.
De acuerdo al rango de trabajo, infiero que el lmite de deteccin es de m 14.0
gd.
METODO B: Para este mtodo,el autor afirma que el porcentaje de recuperacin para
h e de 98.9 a 100.6%.Al igual que en elcaso anterior,el limite de
las series a las que lo aplic,
deteccin, de acuerdo al rango de trabajo, ser de 0.017M.

3.d. . METODO A: En el proceso de separacin del nitrito y el sulfito se estiman30 minutos

para realizarlo; la determinacin
de tiosulfato (tratamiento del precipitado y titulacin) se
realiza en aproximadamente 1 hora.Por lo tanto la aplicacin del mtodo a una muestra
requiere de aproximadamentel .5 horas.
METODO B: El tiempo estimado para el burbujeo de nitrgeno es60dea 90
minutos; considerando el tiempo para tener la mezcla de reaccin a la temperatura
recomendada para el paso antes mencionado, enfriamiento, filtracin y llevar a cabo la
titulacin, podemos estimar un tiempo aproximado 30 deminutos. Por la tanto el tiempo total
para aplicar el mtodo a una muestra, ser de aproximadamente 2 horas.

3.e.i.METODO A: Se requiere deun estndar primario de nitratode plata; los dems

reactivos utilizados son grado reactivo.
METODO B: LOScompuestos utilizados son grado reactivo; se requiere de un cilindro
de nitrgeno comprimido, libre de oxgeno.

3.e.G. METODOA: Se necesita un potencimetroy una parrilla con agitador magntico

integrado.
METODO B: Se utiliza una parrilla elctrica.

3.f . De acuerdo a los tiempos de realizacin

y las operacionesde cada uno de los
se podrian
procedimientos, me parece que la capacidad de anlisis ser baja, es decir, que
procesar unas5 muestras por hora aproximadamente.
 105
4.a. . METODO A: Este mtodo no es aplicable a soluciones que contengan sulfur0o sulfito.
Cantidades moderadamente altas de iones cloruro no interfieren.
METODO B: Este mtodo no es aplicable si la muestra contienes a t o o nitrito. El
procedimiento contempla la remocin desufiros, polisulfbros e hidrosulhros, comosuhro
de hidrgeno y azufie elemental.

4.b. . Para los dos procedimientos, el autor no reporta haberlos validado.

4.c. . Para el mtodo (a), el autor hace mencin deun mtodo rpido de filtracin aplicable en
R.H. A n a l . Chem. 25,
caso de tener dificultades, indicando la siguiente referencia: Pierson,
1953 : 1939. Pare estemismo mtodo, no indica como eliminar las interferencias, en caso de
estar presentes en la muestra,ni como influyen en la determinacin.
Para el mtodo(b), tampoco indica como tratar las inte~erenciassi estn contenidas en
la muestra, ni la forma como afectan el desarrollo del mtodo; nicamente hace notar que, en
caso de estar presente el sulfito, es parcialmente removido con lossulhros.
El trabajar con tiocianato de amonio, cido ntrico
y cido sulfiirico en ambos
al desarrollarlos.
procedimientos, implica un alto riesgo para la salud del analista,
El autor no hace referencia acerca de disposicino tratamiento de mezclas residuales
de los ensayos.
 106
METODO No. 3

1.a. . Das C., Mohana. DETERMINATIONOF SOME SULPHUR COMPOUNDS

WITH N-BROMOIMIDES. Talantu 38(3)91:347-350.

1.b. . TIOSULFATO.

1 .c.i.De acuerdo a lo expuesto por

el autor, en este artculo se proponen varios
procedimientos para la determinacin de compuestos derivados del azufre, con reactivos que
se han comprobado con muchsimos otros compuestos; esto implica la aplicacin de
procedimientos existentes a sustratos donde no se haban aplicado.

2.a. . La reaccin de semicelda para el reactivo oxidante es:

RHBr + H' + 2e- < > RNH + Br-
donde RNBr puede ser NBP o NBSA.
oxida a tetrationatoen laotra reaccin de semicelda:
Por otro lado, el tiosulfato se
2 s203- > S406; + 2e-
~

"""""

2.b.i. Es un mtodo en elque seefkcta una titulacin que puedeser visual o potenciomtrica
(titulacin redox).

2.b.ii. PROCEDIMIENTO.
a.- Se coloca una alcuota de muestra en un vaso de precipitados
de 100 ml.
b.- Se diluye con agua para hacer que la concentracin del disolvente orgnico sea
menor al50% v/v.
c.- Agregar aproximadamente50 mg de yoduro de potasio.
o NBSA). Para la titulacin visual,
d.- Titular con el reactivo oxidimtrico (NBP la
aparicin de un color amarillo plido,se toma comoel punto final.

2.b.iii. REACTIVOS,MATERIAL Y EQUIPO.

* REACTIVOS:
>NBP (N-bromofialimida)o NBSA (N-bromosacarina): las soluciones stock
se preparan disolviendo 1 1.3 g de NBP(o 13.1g de NBSA) enun litro de cid0 actico
anhidro y, almacenar en frascos mbar; para su estandarizacin se utiliz un mtodo
iodomtrico con dicloroamina-T (segnT.J. Jacob y C.G.R.Nair 1972). El autor reporta que
existen mtodos para la preparacinde los reactivos en el laboratorio(C.M. Das y P.
Indrasenan 1984).
>Yoduro de potasio (slido).
* MATERIAL:
Cristalera para la preparacin de solucionesy para la titulacin.
 107
2.b.i~.No reporta condiciones particulares de anlisis, de loseque
puede inferir que nohay
restricciones respecto al control
de pH; la temperaturaes ambiente. Para la titulacin
la se describe la metodologa(C.G.R.
potenciomtrica cita la referencia enque Nair y P.
Indrasenan 1976).

3.a. . Del procedimiento podemos observar, que el mtodo se est aplicando a disoluciones de
tiosulfato en medio acuosoo en medio orgnico.

se aplicb el mtodo, es de0.92 a 1.76m o l de tiosulfato.

3.b. . El rango de trabajo en el que
No est reportado que hayase realizado anlisis estadstico de resultados.

3.c. . El lmite de deteccin reportado es de

0.92 mmol, de acuerdo a lo anotado en el punto
anterior. Los porcentajes de recuperacin determinados para doslos reactivos titulantes, para
10 repeticiones, es: para NBP 100%f 0.2, paraNBSA 99.9% f O. l .

3.d. . De acuerdoal procedimiento, me parece que el mtodo se puede aplicar

unaamuestra
en aproximadamente 15 min.

3.e.i. Se recomienda eluso de compuestos grado reactivo.

3.e.ii.En caso de realizar la titulacin potenciomtrca, se requiereunde

potencimetro.

3.f. . De lo expuesto en el inciso 3.d, podemos ver que el mtodo tiene una alta capacidad de
anlisis, esto es que se pueden procesar aproximadamente 20 muestras
o quizs ms en una
hora.

4.a. . Por las caractersticas inherentes de los mtodos oxidmtricos,el potencial redox en un
valor crtico a tomar en consideracin;por consiguiente, las interferencias tpicas son:Fe (11),
As (m), Sb (m), cido ascrbico, hidracina, semicarbazida.

4.b. . El mtodo que utiliz para validar este procedimientodeestitulacin

el con dicromato,
cuya referencia esel texto deA. I. Vogel 1969; reporta haber determinado un% de
recuperacin de 1O l.l.
 108
4.c. . Se hace notar que los N-halocompuestos presentan como desventaja su para
uso el ser
muy inestables, siendolos ms estables los propuestos para este mtodo.
No se indica tratamiento para interferencias, en caso de tenerlas presentes
la en
muestra.
Falta informacin sobre toxicologa de los reactivos oxidimtricos utilizados; por lo
anterior supongo que los riesgos hande ser minimos.
El autor no reporta sobre disposicino tratamiento de las mezclas residuales de los
ensayos.
Referencias a consultar para ampliar lo expuesto en el resumen de este artculo:
* Jacob, T.J. y C.G.R.Nair. Talanta 19. 1972:347.
* Das, C.M.y P.Indrasenan. Int. J. F d S c i . Technol. 22. 1987: 239.
* Nair, C.G.R.y P.Indrasenan. Talanta 23. 1976:239.
 109
M E T O D ON o . 4.

1.a. . Brodersen, K. & U. Werner. INDIRECT DETERMINATION

OF TRACES
OF THIOSULPHATE BY DIFFERENTIAL-PULSE
POLAROGRAPHY. Talanta 38(7)91:785 a 788.

1.b. . TIOSULFATO.

1.c.iii.En el artculo se seala como antecedentes, el desarrollo de mtodos especficos

es ser
polarogrficos y voltamtricos para la determinacin de tiosulfato, cuya caracterstica
sensitivos y selectivos. Con base en esto,
se puede decir que los autores estn proponiendo
un
mtodo con mejores caractersticas respecto a aquellos
ya existentes. Adems comentan que su
mtodo es alternativo para la determinacin indirecta de trazas de tiosulfato por polarografa
pulso-diferencial (DPP).

2.a. . En este artculose proponen dos mtodos para la determinacin indirectade tiosulfato
por DPP; en ambos casos, est implicada la oxidacin previa del con tiosulfato
iodo:
a: en medio cido hasta tetrationato, obtenindose1 equivalente de yodato,
b: en medio alcalino hasta sulfato, obtenindose8 equivalentes de yodato.
En ambos procedimientos, el yodato resultante es determinado por DPP.
2.b.i. Ambos procedimientos son mtodos instrumentales: polarogrficos.

2.b.ii. PROCEDIMIENTOS.
a: Procedimiento tetrationato [METODO 11.
a- l.Coloque en un embudo de separacin 1de O0 ml, una alcuota de muestra
conteniendo entre3.5 a 60mcg de tiosulfato.
a-2. Agregue0.4 ml de solucin de iodo, diluya con 5 ml de aguay agregue 5 ml de
cloroformo. Agite perfectamente por 2 minutos y permita la separacinde fases en un minuto.
a-3. Descargue la capa de cloroformo y elimine los restos de iodo suspendido la en
capa acuosa, por extraccin con5 porciones de5 ml de cloroformo, agitando vigorosamente
por 1 minuto cada vez.
a-4. Transfiera cuantitativamente la capa acuosa a un matraz erlen-meyerO0de ml,1
agregue l .5 ml de acetato de sodio2M, 1 ml de agua de bromo saturada y agite la mezcla por
3 minutos.
a-5. Destruya el exceso de bromuro por adicin gota a gota de cido frmico
(aproximadamente 0.25 ml) y ajuste el pH a 3 S . Transfiera a un matraz dorado de 25 ml y
diluya con agua hasta la marca.
a-6. Enjuague los electrodosy h p i e la clula con unos cuantos mililitros de solucin
testigo, enseguida pipetee alrededor de10 ml dentro dela clula del electrodo. Deaerear por
medio de una comente de nitrgeno puro, por un perodo4 de minutos.
a-7. Registreel polarograma pulso-diferencial del yodato a temperatura ambiente, a un
flujo de unagota por segundo, una amplitud de pulso de 50 mV, una tasa de registro de
potencial de2 mV/seg dentro del rango de -0.20 a -0.75 Vy, 20 pA de deflexinm x i m a .
 110
a-8. Prepareuna curva de calibracin entre4.0 a 96 mcg aplicando el mismo
procedimiento; graficar la corriente
de pico (PA) contra peso de yodatoo tiosulfato en mcg
(100 mcg de yodato= 64.1 mcg de tiosulfato).

b: Procedimiento sulfato [METODO 21.

b- 1. Mezcle 5 ml de hidrxidode sodio 1M y 0.5 ml de solucin de iodo en un
embudo de separacin de 100 ml; agregue una alcuota de la muestra, conteniendo entre
2.8 a
45 mcg de tiosulfato.
b-2. Agite perfectamente por 2 minutos. Despus de 5 minutos agregue3.5 ml de
cido sulfrico 2My 8.5 ml de cloroformo; agitar por1 minuto y reposar 1 minuto ms, para
permitir la separacinde las fases.
b-3. Descargue la capa de cloroformo y remueva las trazas de iodo por extraccin con
5 porciones de8.5 ml de cloroformo, agitando vigorosamente por 1 minuto cada vez.
b-4. Transfiera cuantitativamente la capa acuosa a un matraz erlen-meyer 100de
ml,
agregue l. 5 ml de hidrxido de sodio5N seguido de3 ml de acetato de sodio 2M para obtener
un pH de alrededor de 8. Agregue 1 ml de agua deBromo saturada y agite la mezcla por5
minutos. Agregue cidofrmico gota a gota (aproximadamente 0.8ml) para destruirel exceso
de bromoy ajuste el pHde la solucin a un valor de 3.5.
b-5. Transfiera cuantitativamente la disolucinuna matraz dorado de 1O0 ml y diluir
con agua hasta la marca.
b-6. Registreel polarograma pulso-diferencial del yodato bajo las condiciones dadas
para el procedimiento anterior, pero use una sensibilidad cercana a 100 pA a mxima
deflexin.
b-7. Prepare una curva de calibracin 30 de a 600mcg de yodato de acuerdo a este
procedimiento, grdcando comente de pico (PA)contra peso de yodato (mcg) [ 100 mcgde
yodato = 8.02 mcg de tiosulfato].

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIALY EQUIPO (Para ambos mtodos).

* REACTIVOS:
>Tiosulfato de sodio: solucin2x10 M (preparada y estabilizada por adicin
de 0.02 gde carbonato de sodio para cada 200 ml). La solucin fue estable por 2 semanas y
frecuentemente se estandariz con solucin de yodato de potasio.
>Yodato de potasio: solucin O. 1 N (preparada a partir de ampollas patrn y
diluida a0.01 a 0.001N, segn se necesit para estandarizacin y para la calibracin de las
curvas polarogriicas).
>Solucin de iodo en cloroformo:1.2 mg/ml.
>Cloroformo.
>Solucin de acetato de sodio 2M.
>Solucin de cido frmico 50%al v/v.
>Solucin saturada de agua de bromo.
>Soluciones de hidrxido de sodio 1M y 5M.
>Solucin de cidosulfirico 2M.
Todos 10s r-eactivos sonde alto grado analtico.El agua entodos los casos deber ser
desmineralizada, doble destilada.
 111
* MATERIAL:
- Cristalera para la preparacin
de soluciones.
- Cristalera parael desarrollo de los mtodos.
* EQUIPO:
+ Analizador polarogrfico/voltmetro desnudo
(PAR),Modelo 264-4
equipado con un sistemade 3 electrodos PAR Modelo 303 A compuesto de: 1 electrodo de
goteo esttico de mercurio(SMDE) como electrodo de trabajo,1 electrodo de referencia
AgAgC1 (O. 1 M KCl)y como electrodo contador un alambre de platino; una celda electrodo
de 10 ml; un registrador ModeloRE 0089 X-Y y un agitador Modelo 305.
+ Potencimetro microprocesador"WTW" Modelo 95 (Alemania), equipado I
y precisin de +/- 0.01
con electrodo combinado de vidrio con censor integral de temperatura
+ Micropipeta Eppendorf con una exactitudfde O. 1 pL, para volmenes de
10 a 100 pL.
+ Micropipeta Brand (Alemania) con una exactitud fde0.5 pL, para
volmenes de 200 a 1000 pL.

2.b.i~.
En ambos procedimientos, inicialmente las mezclas de reaccin tienen un pH alcalino
(aproximadamente de8), para finalmente ser ajustado 3.5.
a La temperatura de trabajo es a
temperatura ambiente.

3.a. . No est especificado;al parecer se trata de soluciones acuosas

de tiosulfato.

3.b. . Los rangos de trabajo que reportan son:

a. METODO 1 : 3.5 a 56.5 pg de tiosulfato,
b. METODO 2: 2.8 a 45.0 pg de tiosulfato.
(RSD) determinadas son:
Las desviaciones estndar relativas
a.METOD0 1:RSD=1.375,
b.METOD0 2:RSD= 1.4.

3.c. . Los autores afirman queel lmite de deteccin para ambos mtodos
es de 0.02 mcg/ml de
tiosulfato. En cuanto a los estudios de recuperacin, reportan porcentajes de recuperacin para
ambos procedimientos de1OO. 1%, para 8 repeticiones.

3.d. . El tiempo para procesar una muestra, para ambos procedimientos, es30deminutos, es
decir, que son relativamente rpidos.

3.e.i.Los reactivos utilizados son de alto grado analtico y

y el agua debe ser desmineralizada
doble destilada, lo cual implica que costos
los son altos.

3 .e.ii. Debido a que se requiere

de equipo poco comn en los laboratorios,
se infiere queeste
procedimiento escostoso y por consiguiente es alta la inversin
por este concepto.
 112
(igual)
3.f . De acuerdo al tiempo de realizacin de ambos mtodos y a las operaciones delos
procedimientos, me pareceque se tendr una capacidad bajq esto es, un manejo 5dea 10
muestras por hora.
4.a. . Todos los aniones y cationes capaces de reaccionar con el iodo por oxido-reduccin,
liberando yoduro, interfieren en la determinacin. Sin embargo
el sulfato, que es un producto
de reaccin en unode los procedimientos, no interfiere.

4.b. . No reportan que hayan validadolos procedimientos propuestos.

4.c. . No indican como tratar los compuestos que interfierenel en

ensayo, cuando estn
presentes en la muestra.
Se trabaja con reactivos corrosivos (hidrxido de sodio, cido sulfiirico)
y txicos
(cloroformo), porlo que los riesgos a la salud son altos.
o tratamiento de residuosde los ensayos.
No est reportado acerca de disposicin
 113
METODO No. 5.

1 .a. . Koh,T., K. Kitami & Y. Yonemura. SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION

OF THIOSULFATE BY ITS OXIDATION WITHIODATE.Am].Sci. 7(1)91:81
-85.

I .b. . TIOSULFATO.

1.c.iii. De lo expuesto el
en artculo como antecedentes, donde se indica que existen mtodos
espectofotomtricos que utilizan como reactivos de anlisis, yiodo
otros compuestos @or
ejemplo cianuros) para la determinacin
de tiosulfato, podemos decir que el procedimiento
aqu propuesto es un mtodo al que se lehan hecho mejoras.

2.a. . El tiosulfato puede ser oxidado porel yodato a sulfato de acuerdolaa siguiente reaccin:
3 S203= + 4 10; + 3 HZ0 ------> 6 S 2 0 6 + 4 I- + 6 IT
en mediohertemente cido. Cuando se agregaun cido a la mezclay un exceso de yoduro, el
iodo equivalente al yodato produce triiodatode acuerdo a la siguiente reaccin:
10; + 8 1- + 6 -------> 3 I< + 3 H20
A partir de lo anterior se desarroll el mtodo para la determinacin de tiosulfato, en el cual el
iodo producido porel exceso de yodato,es medido espectrofotomtricamente como triiodato
a 350 m.

2.b.i. Este procedimiento es un mtodo instrumental, en el que se utiliza un espectrofotmetro.

2.b.ii. PROCEDIMIENTO.
a. Coloque en un matraz volumtrico de 50 m ,l I O ml de muestra (con una
concentracin superior a 5x10A-5 M de tiosulfato).
b. Agregue 3 ml de solucin5 M de cido sulfricoy 4.2 ml de solucin estndar de
yodato 1x 1O N (1x 105/6 M).
c. Colocar el matraz en un baio mara a y40C permitir que reaccione por30 minutos
(para quese oxide completamente el tiosulfato a sulfato).
d. Despus deeste tiempo, se agregan 5 ml de solucin 5 M de cido actico,5 ml de
solucin 6 M de hidrxido de sodioy 1 ml de solucin 1 M de yoduro de potasio (de esta
manera el iodo equivalente al yodato es transformado).
e. Despus de diluir hastael aforo con agua, mezcle perfectamentey medir la
absorbancia de la solucin contra un blanco de agua 350an m .
f. Para la curvade calibracinse trata una sene de diluciones estndarde acuerdo a los
pasos anteriores.

2.b.iii. REACTIVOS, MATERIAL,Y EQUIPO.

* REACTIVOS:
Todos los compuestos a utiluar son grado reactivo analtico;
el agua utilizada, en
todos los casos (preparacin de soluciones, desarrollo del mtodo) es doble destilada.
 114
>Solucin de tiosulfato: una solucin aproximadamente O. 1 M, se prepara
disolviendo una cantidad conocidade tiosulfato de sodio pentahidratado en agua libre de
oxgeno, conteniendo una pequea cantidad (0.01% w/v) de carbonatode sodio como
estabilizante. Esta solucinh e estandarizada por iodometra, una semana despus de su
preparacin. Las soluciones estndarde trabajo de tiosulfato,heron preparadas por diluciones
apropiadas de la solucin estndar con agua libre de oxgeno.
>Solucin estndar deyodato: una solucinO. 1 N (O. 1/6M) de yodatose
prepara por disolucin de 3.567 g de yodatode potasio (con una pureza de 99.98%) en yagua
diluida a 1O00 ml(1 L). Las soluciones estndar de trabajo se obtienen por diluciones
adecuadas con agua.
>Solucin 5 M de cido sulfrico.
>Solucin 5 M de cido actico.
>Solucin 6 M de hidrxido de sodio.
>Solucin 1 Mde yoduro de potasio.
* MATERIAL:
- Cristalera para la preparacin de soluciones (vasos de precipitados, matraces
dorados, probetas, pipetas, vidrios de reloj, etc.).
- Cristalera para el desarrollo del mtodo (matraces
dorados, tubos de ensaye,
gradilla, pipetas, etc.).
* EQUIPO:
>Espectrofotmetro (Shimadzu, Model UV-240).
>Celdas de cuarzo de 1 cm.
>Bao mara de temperatura controlada.

2.b.i~.La temperatura de trabajo es de 40C; se esta llevando a cabo la reaccin en medio

fbertemente cido; la longitud de onda de trabajo esnm350
(que corresponde ala
absorbitividad molar del triiodato).

3.a. . El procedimiento se aplic a muestras

de agua de fbentes termalesdeylagos.

3.b. . El rango de trabajo para la aplicacin del mtodo es 4x10"-7 a 4.3x10A-5(0.045 Ma

4.82 ppm).
A partir de11 resultados (n=ll) para una alcuota de10 ml de solucin estndarde tiosulfato
de 2.5x10A-5 M (28.0 mcg de tiosulfato), obtuvieron una desviacin estndarO. 1de1 y una
RSD = 0.41%.

3.c. . Como no indican un valor

de lirmte de deteccin, estoy considerando que el lmite
0.045esppm.
inferior del rango de trabajo corresponde a ese valor, es decir,
3.d. . Considero que para desarrollarel mtodo con una muestra, se llevara a cabo en
aproximadamente 45 minutos.

3.e.i. Se utilizan reactivos grado reactivo analtico, los cuales tienen costos apreciables.
 115
UV con celdas de cuarzoy, un bao marade
3.e.ii. Se requiere de un espectrofotmetro
temperatura controlada, lo cual implica costos de inversin altos.

3.f . De acuerdo a las operaciones del protocolo

y el tiempo de realizacin, me parece que la
capacidad de andisis es regular, esto es, que se pueden manipular 10 a de
20 muestras en1
hora.

4.a. . Por las caractersticas del mtodo, los iones capaces de oxidar el tiosulfato el yoduroy o
A s el Cu (U),Fe (111) y el
reducir el yodato, interfieren en la determinacin del tiosulfato.
nitrito (los que oxidan al yoduro ylo al tiosulfato), dan errores negativos cuando estn
presentes en pequeas cantidades;sin embargo, el Fe(III) h e tolerado en cantidades de hasta
1O0 mcg y el nitrito hasta10000 mcg (el primero se puede enmascarar con fluoruro [ 1 ml de
solucin deNaF 0.2 M] y el segundose puede descomponer agregando1 ml de cido
amidosulfnico 0.5 M).
El suEto y el sufiro, los cuales reducenel yodato, dan errores positivos en cantidades
tan bajas como1O mcg; sin embargo, estas interferencias en cantidades de hasta 1O0 mcg
pueden ser eliminadas por burbujeo de nitrgeno a travs de la muestra por 30 minutos a una
tasa de flujode 400 d m n
i ,despus de la adicin de cido sulfrico 5M (3 ml).
En la tablaNo. 1 se muestran resultados paraotros iones.

No. 2 (recuperacin), los autores comentan que los

4.b. . De los resultados de la tabla
compararon varios de esos resultados, con determinaciones con otros 2 mtodos (1 : Mtodo
del electrodo ion-selectivoy 2: Mtodo cataltico), encontrando una buena concordancia entre
ellos. Por lo tanto considero queel mtodo est validado.

el Pb (II), el Mn (II) y el Fe (II) no

4.c. . De la tablaNo. 1 se observa que interferencias como
los comentan aun cuando tienen influencia grande (errores negativos altos).
Al estar trabajando con sustancias corrosivas (hidrxido de sodio, cido sulfrico,
cido actico)y potencialmente txicas (tiosulfato), podemosinferir que los riesgos a la salud
son altos.
No se reporta sobrela disposicino tratamiento de mezclas residuales de los ensayos.
 116

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