Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola.

Captulo 2 1
2. Vida y muerte de los
microorganismos
2.1. Crecimiento
Es el incremento ordenado de todos los componentes de la clula viva, arribando a la
duplicacin de todas las estructuras, orgnulos y componentes celulares, as como la
biognesis de mitocondrias y cromoplastos cuando ciertos microorganismos se ven
sbitamente expuestos a las condiciones en que dichos orgnulos son esenciales. En la
mayora de los organismos unicelulares, la reproduccin es consecuencia del
crecimiento y lleva al incremento en el nmero de individuos de la poblacin, mientras
que en los pluricelulares el crecimiento conduce al aumento del tamao del organismo
(1). La figura 1 muestra una curva general del crecimiento de un microorganismo
unicelular .
Despus de la inoculacin de
una porcin de medio con unas
pocas clulas, transcurre un
perodo de tiempo (fase de
latencia) antes de que se
establezca una velocidad
constante de crecimiento, debido
a que el microorganismo tiene
una intensa actividad metablica
para adaptarse al nuevo medio
de cultivo antes de poder
duplicarse. Cuando el cultivo
alcanz una velocidad constante
de crecimiento se dice que est
en la fase exponencial debido a
que el nmero de clulas se
puede expresar como funcin de 2
n
, donde n es el nmero de ciclos de duplicacin
experimentado por la poblacin (3). Una bacteria originar cuatro clulas (2
2
) despus
de dos ciclos, dieciseis (2
4
) despus de cuatro ciclos, etc.
Cada clula de bacteria o levadura da, por escisin o gemacin, dos clulas y el
nmero inicial Xo de clulas (en el instante to=0) se convierte, despus de n
generaciones en un tiempo t, en X = Xo. 2
n

Como n representa el nmero de divisiones celulares durante el intervalo de tiempo t,
el tiempo de generacin g = t/ n, y X = Xo.2
t/ g
o sea ln X = ln Xo + t.ln 2/ g *
El trmino ln 2/ g es la velocidad especfica de crecimiento () de la poblacin o sea
= 0,69/ g
La ecuacin * puede escribirse bajo la forma lnX - lnXo = .t por lo tanto X = Xo.e

t
y dX/ dt = X
En el curso de la fase exponencial la velocidad especfica de crecimiento alcanza su
valor ms elevado (mx).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 2
En condiciones ideales el tiempo de generacin de las bacterias puede ser de 20
minutos, de esta forma una nica clula producir 2.097.152 bacterias al cabo de 7
horas.
Finalmente el cultivo entra en la fase estacionaria del crecimiento, en la que
permanece constante el nmero de clulas. Esta fase puede durar mucho tiempo, por
ejemplo dcadas en el caso de las bacterias endosporuladas, pero siempre ser seguida,
ms temprano o ms tarde, por la fase de muerte (3).
En los estudios de la cintica del crecimiento individual de los microorganismos
pluricelulares, tales como actinomicetos y mohos, se observ que:
a) la velocidad de extensin de las hifas cortas es proporcional a la longitud de las
mismas y a la velocidad especfica de crecimiento, es decir queestas hifas pueden
crecer exponencialmente;
b) cada pice hifal puede extenderse a una velocidad independiente de la velocidad
de aumento de la biomasa;
c) cuando la capacidad de la hifa para extenderse supera las posibilidades brindadas
por los puntos de crecimiento existentes, se generan otros nuevos (ramificacin) (4).
2.2. Tipos de nutricin
Los organismos fotosintticos y los que obtienen energa por oxidacin de
compuestos inorgnicos suelen usar generalmente CO2 como fuente nica o principal
de carbono (auttrofos). Pero, la mayora de los microorganismos del laboratorio son
heterotrficos, es decir necesitan fuentes de carbono orgnico y nitrgeno asimilables,
as como sales minerales y en ciertos casos vitaminas. Pueden sintetizar todos sus
constituyentes celulares a partir de un nico compuesto orgnico que sirve tanto de
fuente de carbono y de energa, y de una fuente inorgnica u orgnica de nitrgeno (1).

Metabolismo energtico de los microorganismos (1)
tipo de organismos dependientes de
fottrofos radiacin solar
fotolittrofos=auttrofos dadores de electrones inorgnicos
fotoorgantrofos dadores de electrones orgnicos
quimitrofos compuestos qumicos
quimiolittrofos=auttrofos oxidacin de compuestos inorgnicos
quimioorgantrofos=hetertrofos oxidacin o fermentacin de compuestos
. orgnicos

Algunas bacterias, por ejemplo Azotobacter que vive libre en el suelo, y Rhizobium que
crece como simbionte en los ndulos de la raz de leguminosas, as como
cianobacterias, pueden fijar el nitrgeno gaseoso de la atmsfera, es decir reducirlo
convirtindolo en nitrgeno orgnico. Por otra parte, las formas parsitas obligadas
obtienen del hospedador los complejos constituyentes de su materia viva (5).
En tanto que los sulfatos pueden ser utilizados por casi todas las bacterias y hongos,
los nitratos son a menudo menos adecuados como nutrientes. Sin embargo, la mayora
de los microorganismos hace uso del amonio como fuente nica o principal de
nitrgeno. Sin embargo, algunas bacterias requieren fuentes de azufre reducido, tal
como sulfuro o tiosulfato. Los organismos vivos necesitan tambin muchos otros
elementos, como fsforo, potasio, magnesio, manganeso, calcio, hierro, cobalto, cobre,
cinc y molibdeno (1)
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 3
2.3. Factores de crecimiento
Son los compuestos, necesarios en pequea cantidad, que debe suministrar el medio
para que tenga lugar el crecimiento de algunos microorganismos. Los organismos que
requieren un determinado factor de crecimiento son auxotrficos para ese compuesto.
Por ejemplo, Lactobacillus arabinosus crece normalmente en presencia de 10
-4
g/ mL de
biotina, pero no en ausencia de esta vitamina (6).
2.3.1. Factores orgnicos
Algunos microorganismos carecen de la capacidad de sintetizar ciertos aminocidos,
nucletidos o vitaminas. stos son generalmente aportados por los extractos de
levadura y carne, agregados al medio (3). A veces son adicionados en cantidades
demasiado elevadas interfiriendo en el metabolismo microbiano, por ejemplo, las
clulas de Corynebacterium glutamicum cultivadas en un medio rico en biotina no
excretan cido glutmico, mientras que si son suspendidas en un medio pobre en
biotina ocurre lo inverso. Generalmente los microorganismos requieren L-aminocidos,
por ejemplo Leuconostoc mesenteroides, pero algunas bacterias necesitan D-alanina (6).

Vitaminas del grupo B Funcin (1)
cido nicotnico (niacina) precursor de piridn-nucletidos (NAD y NADP)
cido pantotnico coenzima A
riboflavina (B2) flavn-nucletidos (FMN, FAD)
cido flico participa en transferencia de grupos metilo
biotina biosntesis de cidos grasos, fijacin de CO2
cobalamina (B12) sntesis de desoxirribosa y transferencia de
restos monocarbonados
piridoxal - piridoxina (B6) transformaciones de aminocidos y cetocidos
tiamina (B1) -descarboxilaciones

2.3.2. Factores minerales
La ausencia total de metales comporta la muerte o enfermedades carenciales en todos
los seres vivos, pero todo es cuestin de dosis pues, el efecto es beneficioso hasta un
cierto nivel, traspasado el cual se observan trastornos fisiolgicos. Algunos elementos
esenciales, por ejemplo cinc, cobre, cobalto, hierro, molibdeno, son necesarios para la
actividad de enzimas especficas (1). Adems, algunos seres vivos tienen requerimientos
minerales especiales, como el silicio que es parte esencial de la pared celular de las
diatomeas (7).
2. 4. Transporte de solutos
El transporte de nutrientes a travs de la membrana citoplasmtica es especfico
porque son captados por la clula solamente aqullos para los cuales existe un sistema
transportador. Existen dos tipos principales de transporte. El primario comprende los
procesos que conducen a la transferencia de iones (H
+
, Na
+
, K
+
) produciendo
alteraciones en el potencial electroqumico. Las fuerzas que intervienen son el
transporte de electrones respiratorio o fotosinttico, o las bombas inicas dependientes
del ATP o de la descarboxilacin de metabolitos. El transporte secundario est guiado
por gradientes en el potencial electroqumico (9).
La difusin pasiva o simple est gobernada por el tamao molecular y las
propiedades lipoflicas del material, permitiendo la entrada de agua, toxinas no-polares
y ciertos inhibidores. La difusin facilitada se lleva cabo debido a la presencia de una
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permeasa especfica para el substrato y depende de la concentracin de substrato en el
medio. El nutriente no puede ser acumulado dentro de la clula.
El transporte activo y la trasladacin del grupo se parecen a la anterior en que
participan protenas especficas y difieren en que necesitan la provisin de energa. El
nutriente puede ser acumulado dentro de la clula. En el transporte activo la molcula
liberada en el interior de la clula es idntica a la del exterior, mientras que en la
trasladacin del grupo la molcula fue modificada durante el transporte, por ejemplo
por fosforilacin en el caso de un azcar (9).
Se distinguen diferentes procesos de transporte activo segn la va por la cual se
dispone de la energa necesaria: potencial protn, ATP o fosfoenolpiruvato. El
transporte de muchas substancias (azcares, iones inorgnicos y orgnicos) es
empujado por el potencial protn, La clula bacteriana mantiene dicho potencial por
bombeo constante de protones y otros iones (Na+) al exterior, en el cual intervienen
protenas de transporte localizadas en la membrana (9). Cada una de estas protenas
tiene una funcin especfica. Por ejemplo, una protena cataliza el transporte
simultneo de una molcula de azcar (lactosa, melibiosa o glucosa) y un protn en la
misma direccin, lo que se conoce como un simporte de dos (a veces ms) substancias.
Otras protenas
catalizan el transporte
simultneo de dos
substancias en
direcciones opuestas,
por ejemplo un protn
y otro in (Na+o un
cido orgnico), lo
que se llama
antiporte, como se
muestra en la figura 2.
En las clulas
procariticas la
entrada de azcares a
la clula es favorecida
por un simporte
acoplado a H
+
,
mientras que en las
eucariticas est casi
siempre acoplado a
Na
+
. Adems de los
sistemas de transporte
que dependen del potencial de la bomba de protones hay otros que dependen del ATP,
donde intervienen las protenas del espacio periplsmico en las proteobacterias (8) .
Cuando el transporte ocurre mediante trasladacin de grupos, la molcula
transportada es modificada qumicamente. Por ejemplo, la glucosa (manosa, fructosa u
otro azcar) es captada por el sistema fosfotransferasa dependiente del
fosfoenolpiruvato y se libera en el interior glucosa-6-fosfato (ver figura 2).
En condiciones aerobias y a pH 7,0 la concentracin del Fe
+++
es a lo sumo 10
-18
moles/ L pues se forma el hidrxido frrico casi insoluble, por lo que algunas bacterias
excretan substancias que tienden a solubilizar al hierro formando complejos con Fe+++
que permitan transportado. Tales substancias se denominan siderforos y son
compuestos fenlicos e hidroxamatos (9).
La levadura de cerveza posee distintos sistemas especficos para la captacin de cada
in metlico (Cu++, Fe+++, Mn+, Zn++). En el caso del hierro primero es reducido a
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 5
Fe++por las reductasas de la membrana citoplasmtica, luego interviene un sistema de
baja afinidad para su incorporacin a las clulas con hierro, pero cuando hay una
deficiencia limitante del crecimiento acta otro sistema de captacin de alta afinidad.
La levadura tambin tiene dos sistemas de captacin para la incorporacin de
manganeso. Por otra parte, en algunas bacterias patgenas la virulencia depende de la
capacidad del microorganismo para obtener iones metlicos del hospedador.
El conoci miento de los genes que generan los sistemas de captacin de iones metlicos
de los microorganismos permite obtener vegetales transgnicos que aprovechan mejor
los nutrientes del suelo o secuestran metales txicos como, por ejemplo unas plantas
donde se haba expresado un gen que les posibilit convertir el Hg
++
en Hg
o
(11).
2.5. Factores ambientales
El suelo, o material de la superficie terrestre en el que se sustenta la vida vegetal, es
uno de los sitios ms dinmicos en interacciones biolgicas de la naturaleza.
Comprende organismos vivos, minerales disgregados, agua, aire y materia orgnica
muerta. El agua y el aire representan aproximadamente la mitad del volumen del suelo
(12).
2.5.1. Agua y presin osmtica
La disponibilidad de agua en el ambiente se expresa indirectamente en trminos de
actividad del agua (aw), la que se define como la razn entre la presin de vapor de
agua del substrato o solucin (p) y la presin de vapor del agua pura (po) a la misma
temperatura, es decir, aw = p/ po
Este concepto se asocia al de humedad relativa de la atmsfera en equilibrio con el
sistema, de la siguiente manera HRE = aw . 100
La mayor parte de las bacterias no crecen a una aw por debajo de 0,91 mientras que los
mohos pueden desarrollarse con cifras de 0,80. Los valores ms bajos obtenidos para
arqueobacterias halfilas son del orden de 0,75 mientras que los mohos xerfilos
(amantes de la sequedad) y las levaduras osmfilas (que prefieren presiones osmticas
elevadas) se multiplican muy lentamente an con valores de 0,65 y 0,60
respectivamente. Los lmites de aw dentro de los cuales hay crecimiento, son ms
amplios a la temperatura ptima de multiplicacin. La capacidad de los organismos
para crecer a una temperatura dada, disminuye a medida que se reduce l a aw. La
presencia de ciertos elementos nutritivos ampla los lmites de aw dentro de los cuales
los organismos pueden sobrevivir (3).
La presin osmtica () est relacionada con la actividad del agua a travs una
expresin = -RT.ln aw/ v que comprende a la constante de los gases (R), la
temperatura absoluta (T), el logaritmo natural de la actividad del agua (aw) y el
volumen molar parcial del agua (v ) (3).
El potencial agua de un suelo es la suma de los potenciales osmtico, matricial (o
capilar) y gravitacional. La humedad relativa de la fase vapor en equilibrio con el suelo
es tambin una medida indirecta del potencial agua.
El potencial osmtico de la solucin del suelo ( ) puede expresarse mediante la
ecuacin =-RT m / 10
9
donde es la densidad del agua, los iones por
molcula de soluto, m la molalidad, el coeficiente osmtico a la molalidad m y la
temperatura TK.
El potencial matricial () est dado por la ecuacin =(RT ln p/ po) / 10
6
M
donde M es el peso molecular del agua.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 6
El trmino capacidad de campo se refiere al contenido en agua de un suelo, drenado
despus de la saturacin, cuando la velocidad de la prdida de agua debida a la
gravedad es pequea. No es una medida precisa (12).
Las bacterias mantienen siempre su osmolaridad muy por encima de la del medio, y
estn protegidas por una pared celular capaz de resistir una considerable presin
osmtica interna (1). En contraposicin a la diversidad de concentraciones de potasio y
sodio en los distintos ambientes, los organismos vivos contienen potasio a una
concentracin ms elevada que la del medio externo. Adems de neutralizar las cargas
negativas de la clula yde regular la funcin enzimtica, el potasio acta como un
soluto implicado en la regulacin osmtica de algunos organismos Algunos
organismos halfilos que viven en ambientes de alta salinidad sdica, por ejemplo
Halobacterium, son la excepcin a esta regla (10). Los organismos que son capaces de
crecer a elevadas concentraciones de azcar se denominan osmfilos.
Basados en sus respuestas, o tolerancia, a la sequedad los microorganismos se pueden
distribuir entre tres grupos definidos por el potencial agua () ptimo y mnimo para
el crecimiento:
grupo 1. ptimo 0.1 MPa, mnimo alrededor de 2MPa; contiene algunos hongos y
una variedad de bacterias Gram-negativas;
grupo 2. ptimo alrededor de 1 MPa, mnimo alrededor 5MPa; contiene
principalmente zigomicetos, bacterias Gram-negativas y actinomicetos;
grupo 3. ptimo alrededor de 1MPa, mnimo 10 a 15 MPa; contiene una variedad de
ascomicetos y basidiomicetos y bacterias Gram-positivas (12).
2.5.2. Tensin superficial
La tensin superficial de los medios de cultivo afecta al desarrollo de un
microorganismo. Por ejemplo BaciIIus subtilis tiende a crecer en la superficie a modo de
pelcula o velo en los medios corrientes con una tensin superficial entre 57 y 63 dinas,
pero si se disminuye a menos de 40 dinas por el agregado de un detergente crece en
forma difusa (13). La humectabilidad es funcin de la tensin superficial. Las soluciones
de detergentes pueden penetrar en grietas y espacios muy pequeos e incluso hasta el
centro de los agregados de bacterias, donde el agua quedara por encima sin mostrar
penetracin alguna.
2.5.3. pH
El pH del medio puede influir sobre la expresin de genes y regular el transporte de
protones, la degradacin de los aminocidos, la adaptacin a condiciones acdicas o
bsicas y an la virulencia. Las clulas perciben los cambios del pH ambiente a travs
de diferentes mecanismos. La protonacn y desprotonacin de los aminocidos
inducida por el pH, puede alterar la estructura protenica secundaria y por lo tanto la
funcin que seala el cambio. La clula puede responder slo a una de las formas de las
molculas de seal. Por ejemplo, los cidos orgnicos atraviesan la membrana
citoplasmtica solamente en la forma protonada y un aumento de la concentracin
intracelular indicara un incremento en la acidez ambiental. El gradiente de protones a
travs de la membrana puede servir, por s mismo, como un sensor para ajustar los
procesos dependientes de la energa (8).
El pH intracelular puede ser mantenido sobre un valor crtico en el cual las protenas
internas se desnaturalizan irreversiblemente. En Salmonella typhimurium hay tres
mecanismos para mantener el pH interno compatible con la vida: la respuesta
homeosttica, la respuesta de tolerancia al cido y la sntesis de protenas de shock
acdico (14).
A pH ambiental mayor que 6,0 las clulas bacterianas ajustan su pH interno a travs
de la respuesta homeosttica modulando la actividad de las bombas de protones,
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 7
antiportes y simportes, para aumentar la velocidad a la cual los protones son expelidos
del citoplasma. El mecanismo homeosttico es constitutivo y funciona en presencia de
inhibidores de la sntesis proteica.
La respuesta de tolerancia al cido es iniciada por un pH externo de 5,5 a 6,0. Este
mecanismo es sensible a los inhibidores de la sntesis proteica y puede mantener el pH
interno por sobre 5,0 teniendo el pH externo valores tan bajos como 4,0. La prdida de
la actividad ATPasa, causada por las mutaciones que desorganizan genes o los
inhibidores metabl icos, anula la respuesta de tolerancia al cido pero no el mecanismo
homeosttico. Esta respuesta tambin puede conferir proteccin cruzada frente a otros
agentes ambientales de estrs.
La sntesis de protenas de shock acdico es la tercera va por la que la clula regula
el pH interno. Esta sntesis es generada por un pH ambiental de 3,0 a 5,0 proveyendo
un conjunto de protenas reguladoras distintas de las protenas de la respuesta de
tolerancia al cido.

Rango de pH para el crecimiento (2)
Bacterias lmite inferior ptimo lmite superior
Thiobacillus thiooxidans 0,5 2,0-3,5 6,0
Azotobacter sp. 5,5 7,0-7,5 8,5
Erwinia carotovora 5,6 7,1 9,3
Clorobium limicola 6,0 6,8 7,0
Thermus aquaticus 6,0 7,5-7,8 9,5
Nitrobacter spp. 6,6 7,6-8,6 10,0
Hongos
Aspergillus oryzae 1,6 9,3
Fusarium oxysporum 1,8 11,1
Penicillium italicum 1,9 9,3
Rhizoctonia solani 2,5 8,5
Botrytis cinerea <2,8 7,4
Aspergillus niger 2,8 8,8

Aunque para la mayora de las bacterias el pH ptimo para el crecimiento se
encuentra entre 8,5 y 7,5; pocas especies son acidfilas (Thiobacillus), algunas son cido-
tolerantes (lactobacilos), pero muchas crecen en condiciones alcalinas (nitriificadores,
rizobios, actinomicetos y bacterias ureolticas). Por su parte, los hongos prefieren
valores bajos de pH, y predominan cuando se siembra una muestra de suelo en un
medio de pH 5, pero no a pH 8 (15). Algunos organismos productores de cidos no son
cido-tolerantes y si el medio no posee un regulador de pH se autoenvenenan, por
ejemplo ciertas enterobacterias (2).
2.5.4. Oxgeno
El metabolismo de los microorganismos est fuertemente infludo por el oxgeno
molecular. Los organismos que dependen de la respiracin aerbica, para los cuales el
oxgeno es el aceptor final de electrones, se conocen como aerbicos estrictos. Un
ejemplo de stos es la actinobacteria Streptomyces. Por el contrario para los organismos
anaerbicos estrictos el oxgeno es generalmente txico. Las clulas somticas de las
bacterias del gnero Clostridium son muy sensibles al oxgeno mientras que los
endosporos estn protegidos de su efecto letal. Un grupo intermedio de organismos,
los anaerbicos facultativos, pueden crecer en presencia o ausencia de oxgeno
molecular, por ejemplo la levadura Saccharomyces cerevisiae que puede obtener su
energa tanto de la fermentacin como de la respiracin. Por otro lado estn los
organismos que nicamente toleran al oxgeno, como algunas bacterias lcticas que
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 8
obtienen su energa exclusivamente de la fermentacin sin ser daadas por el oxgeno.
Ciertas bacterias aerbicas se cultivan mejor en ambientes donde la concentracin de
oxgeno es reducida y se las denomina microaeroflicas (14).
2.5.5 Potencial de reduccin
El potencial de reduccin de un substrato es aquel en que dicho substrato gana
electrones con mayor facilidad. Cuando pasan electrones de un compuesto a otro, se
crea una diferencia de potencial entre ambos, la que se expresa en milivoltios (mV).
Cuanto ms oxidada est una substancia ms positivo ser su potencial elctrico, y
cuanto ms reducida el potencial ser ms negativo.
El potencial de reduccin de un sistema se expresa con el smbolo Eo. Los
microorganismos aerobios crecen en ambientes con valores Eo positivos mientras que
los anaerbicos necesitan para su desarrollo un medio con Eo negativo. Entre las
substancias que ayudan a mantener condiciones reductoras en el medio de cultivo se
encuentran los aminocidos con un grupo tiol (-SH) y los azcares con un grupo
aldehdo libre (15).
2.5.6. Temperatura
En muestras de agua recogidas en las proximidades inmediatas a las surgencias
termales se han hallado hasta 10
8
- 10
9
clulas bacterianas por mL. Las bacterias
adaptadas a elevadas presiones hidrostticas (250260 bares o sea 25-26 MPa) muestran
adems una notable adaptacin a las altas temperaturas, por ejemplo unas bacterias
metanognicas tenan tiempos de duplicacin entre 37 y 65 minutos a 100C bajo tales
presiones (16).

Temperaturas cardinales en C para microorganismos procariticos (17)
grupo mnima ptima mxima
termfilos 40-45 55-75 60-90
mesfilos 5-15 30-45 35-47
psicrotrofos -5-+5 25-30 30-35
psicrfilos -5-+5 12-15 15-20

Los valores de las temperaturas cardinales (mnima, ptima, mxima) varan
ampliamente entre las bacterias como se muestra en el cuadro siguiente, pero algunas
tienen una amplitud mayor, como por ejemplo Clostridium perfringens que crece entre 12
y 50C. Los organismos aislados de ambientes fros crecen a temperaturas por debajo
de 0C si las altas concentraciones de solutos impiden la congelacin del medio (1).

Temperaturas en C para el crecimiento de bacterias (1)
especie mnima ptima
mxima
Listeria monocytogenes 1 30-37 45
Pseudomonas maltophila 4 35 41
Escherichia coli 10 37 45
Clostridium kluyveri 19 35 37
Bacillus flavothermus 30 60 72
Thermus aquaticus 40 70-72 79
Sulfolobus acidocaldarius 70 75-85 90
Pyrobacterium brockii 80 102-105 115

Los mohos psicrotrofos pertenecen a los gneros Cladosporium, Fusarium, Penicillium,
Trichothecium y las levaduras a Candida, Cryptococcus, Torulopsis, Rhodotorula (18).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 9

Temperaturas cardinales de algunos hongos (18,19)
temperatura C
grupo mnima ptima mxima
Alternaria solani 2 27 45
Aspergillus fumigatus 12 35 55
Botrytis cinerea 0 20 30
Fusarium moniliforme <5 25 35
Rhizoctonia solani 2 25-30 35
Trichothecium roseum <10 30 35

La velocidad de crecimiento se ve afectada por los cambios de temperatura y en los
rangos inferiores el tiempo de generacin puede sobrepasar las cien horas. Los
microorganismos eucariticos, por ejemplo protozoos, son ms sensibles a las bajas
temperaturas que los procariticos, y entre estos ltimos los gram negativos son ms
afectados que los gram positivos (17).
2.6. Medios de cultivo
El medio sirve de reservorio para los nutrientes. El componente dominante es casi
siempre el agua. Tambin en el caso en el que los microorganismos se hallen sobre un
substrato slido, por ejemplo cereales o forrajes, ste debe estar hmedo para permitir
la accin microbiana o enzimtica.

Medios complejos para el enriquecimiento de bacterias hetertrofas (21)
base: extracto de levadura 1%, KH2PO4 0,1%, MgSO4 0,02%
incubacin: 30C, en la obscuridad
fuente condiciones agregado organismos
suelo pH 7,0 - aerobiosis --- oxidantes de aminocidos
" pH 3,0 - anaerobiosis glucosa 2% Sarcina sp.
suelo pasterizado pH 7,0 - aerobiosis --- Bacillus spp.
" pH 7,0 - anaerobiosis --- Clostridium fermentadores
de aminocidos
" pH 8,0 - aerobiosis urea 5% Bacillus pasteurii
" pH 7,0 - anaerobiosis glucosa 2%, Clostridium fermentadores
CaCO3 2% de azcares
vegetales, leche, pH 6,5 - anaerobiosis glucosa 2% bacterias lcticas
frutas, cerveza pH 6,0 - aerobiosis etanol 4% bacterias acticas
suelo, agua pH 7,0 - anaerobiosis glucosa 2%, bacterias coliformes
residual CaCO3 2%
queso suizo pH 7,0 - anaerobiosis lactato Na 2% bacterias propinicas

Los microorganismos heterotrficos pueden utilizar azcares, alcoholes y
aminocidos como fuente de energa. Algunos son capaces de emplear polisacridos,
como almidn y celulosa, al tener la posibilidad de hidrolizar estos compuestos hasta
azcares sencillos. Loa aminocidos y nucletidos suelen constituir la fuente primaria
de nitrgeno y para obtenerlos, algunos organismos son capaces de degradar pptidos,
protenas y polinucletidos. Tambin las grasas son utilizadas como fuente de energa,
aunque slo un nmero relativamente pequeo de microorganismos las atacan (20).
Adems del carbono, los nutrientes primordiales son nitrgeno y fsforo que se
incorporan como amonio o nitrato, y fosfato. Otros nutrientes, tales como vitaminas e
iones metlicos, se requieren en pequea cantidad (micronutrientes) y suelen estar,
como contaminantes, en los componentes principales de los medios de cultivo e incluso
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 10
en los recipientes de vidrio que los contienen. Cuando el oxgeno es necesario para el
metabolismo, la fuente usual de suministro es el aire filtrado (5).
La mayora de los mohos, as como unas pocas bacterias y levaduras, cuando crecen
sin alteraciones, forman una pelcula fuerte y contnua en la superficie del medio. En
cambio, si crecen bajo el efecto de una agitacin vigorosa, originan bolitas de una pulpa
fibrosa dispersadas por todo el medio fludo (20).
Los requerimientos nutritivos de los mohos son muy parecidos a los de las levaduras,
salvo que los mohos presentan ms diversidad en los tipos de substratos orgnicos que
pueden asimilar (5). En el laboratorio un medio corriente es el extracto de malta, con o
sin extracto de levadura y agar. Para el crecimiento de algunos mohos se utiliza un
medio definido constitudo por sacarosa y sales minerales conocido como agar Czapek,
a veces adicionado de extracto de levadura. Cuando se desea aislar hongos osmfilos se
le agrega 20 a 50% de sacarosa (18).
Un medio con cloruro de amonio y otras sales, sin ninguna fuente de carbono, cuando
se incuba aerbicamente tendr disuelto CO2 atmosfrico y en presencia de luz
permitir el crecimiento de algas y cianobacterias. Pero si se incuba en la obscuridad
facilitar el desarrollo de bacterias que obtienen energa por oxidacin del amonio (20).

Medios para el enriquecimiento de bacterias fotosntetizantes (21)
base: NH4Cl 0,1%; K2HPO4 0,1%; MgSO4 0,02%; FeSO4 0,005%; CaCl2 0,002%; MnCl2
0,0002%; NaMoO4 0,0001%
incubacin: 25 - 30C, iluminacin constante, sin aire
agregado pH organismos
Na2S 0,2% + NaHCO3 0,5% 7,5 bacterias verdes del azufre
Na2S 0,2% + NaHCO3 0,5% 8,0 - 8,5 bacterias purpreas del azufre
Na malato 0,5% + ext de levadura 0,05% 7,0 - 7,5 bacterias purpreas no del azufre

Medios sintticos para el enriquecimiento de bacterias autotrficas (21)
base: K2HPO4 0,1%; MgSO4 0,02%; FeSO4 0,005%; CaCl2 0,002%; MnCl2 0,0002%;
NaMoO4 0,0001%
incubacin: 25 - 30C, en la obscuridad
agregado pH atmsfera organismos
NH4Cl 0,15% + CaCO3 0,5% 8,5 aire Nitrosomonas
NaNO2 0,3% 8,5 aire Nitrobacter
NH4Cl 0,1% +Na2S2O3 0,7% 7,0 aire Thiobacillus
NH4NO3 0,3% +Na2S2O3 0,7% +NaHCO3 0,5% 7,0 sin aire T. denitrificans
NH4Cl 0,1% 7,0 H2 85%,
O2 10%, bacterias
. CO2 5% del hidrgeno

Sea cual fuere la composicin qumica del medio, es necesario que todos los
componentes estn perfectamente mezclados, de modo que el microorganismo tenga
acceso a todos los nutrientes. La mayora de las bacterias y algunas levaduras crecen
comnmente como clulas individuales o como agregados de varias de ellas, y
permanecen suspendidas en el medio. Cuando se trata de una poblacin densa o las
clulas secretan polmeros, el medio fludo se vuelve viscoso y adems, pueden formar
grandes agregados o crecer como una pelcula mucosa sobre la superficie.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 11
2. 7 Esterilizacin
2.7.1. Accin del calor
Con el fin de evitar el crecimiento de microorganismos extraos introducidos por la
contaminacin, se esterilizan con vapor de agua a presin todos los materiales que
integran el medio de cultivo. El vapor tambin se suele emplear para esterilizar
recipientes y otras superficies con las que el medio est en contacto (20).

Tiempo de destruccin de algunos endosporos bacterianos (2)
calor hmedo minutos a
organismo 100 105 110 115 120 125 130 134
0
C
bact. termfilas ... 400 100-300 40-110 11-35 4-8 3,5 1
Bacillus anthracis 2-15 5-10 ... ... ... ... ... ...
B. subtilis horas ... 40
Clostridium tetani 5-90 5-25
C. perfringens 5-45 5-27 10-15 4 1 ...
C. botulinum 300-530 40-120 32-90 10-40 4-20 ... ... ...
C.sporogenes 150 45 12 ... ... ... ... ...
calor seco minutos a
organismo 120 130 140 150 160 170 180
0
C
bacilos termfilos ... ... ... 180 30-90 15-60 15
B. anthracis ... ... >180 60-120 9-90 3
C. botulinum 120 60 15-60 25 20-25 10-15 5-10
C.pefringens 50 15-35 5
C. tetani 20-40 5-15 30 12 5 1

Los factores que afectan a la termodestruccin pertenecen a tres tipos generales:
(a) factores intrnsecos, por ejemplo diferencias entre cepas y especies, entre
endosporos y clulas somticas;
(b) factores ambientales que ejercen su influencia durante el crecimiento y la
formacin de las clulas o los endosporos, como edad, temperatura y medio de
cultivo;
(c) factores ambientales que actan durante el tratamiento trmico de las clulas o los
endosporos, por ejemplo pH, aw, medio de suspensin, tipo de substrato, sales y
otros compuestos orgnicos o inorgnicos.
Los endosporos bacterianos son muy resistentes a la temperatura, algunos pueden
incluso sobrevivir tratamientos de varios minutos a 120C en ambiente hmedo.
Cuando se utiliza el calor para destruir los microorganismos presentes en una pelcula
lquida es posible utilizar tratamientos muy cortos, pero la esterilizacin de algunos
slidos exige horas debido a las dificultades impuestas por la penetracin del calor (17).
El autoclave es un aparato cuyo funcionamiento se basa en quela temperatura de
ebullicin del agua aumenta con la presin. Por consiguiente si la presin absoluta del
vapor en el recipiente cerrado se eleva a 2,02 kg/ cm
2
la temperatura subir hasta 120
0
C.
La presin absoluta es la suma de la presin atmosfrica y la presin manomtrica del
autoclave. La temperatura de una mezcla de vapor y aire a determinada presin es
inferior a la del vapor solo, por lo que debe evacuarse todo el aire de la cmara de
esterilizacin (1). Otra precaucin importante es la de que el vapor se introduzca bien en
los materiales sometidos a esterilizacin. El tiempo de funcionamiento depende de la
naturaleza y volumen del material que se esteriliza, as como del tipo de envase.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 12
El orden de la termodestruccin microbiana es logartmico, lo que permite desarrollar
combinaciones de tiempo y temperatura que aseguren un efecto destructivo. La figura
3 muestra una recta tpica de supervivencia microbiana obtenida representando, en
funcin del tiempo, el logaritmo del nmero de los supervivientes a la exposicin a una
determinada temperatura. A partir de este grfico se puede determinar el tiempo de
reduccin, decimal (D) que es el nmero de minutos precisos para destruir el 90% de
una poblacin. La lnea recta se extiende tericamente hasta la zona de logaritmos
negativos, por ejemplo log 10
-3
= 1 clula por cada 1000 g (14).
La muerte de los microbios por una fuente
de calor, u otro agente letal, se expresan
mediante la ecuacin cintica de primer
orden N = No .e
-kt
donde N es el nmero
de clulas (UFC/ g), No el nmero inicial de
clulas, t el tiempo, k la constante de
velocidad, luego 2,3 log(N/ No) =- (kt)
y entonces t = - [2,3 log(N/ No)] / k
El tiempo de reduccin decimal es la
constante cintica usada con ms frecuencia
en la industria de conservas vegetales e igual
a D =2,3 / k estando D y k definidos para
una temperatura dada.
La interrelacin entre k y T est relacionada
con la energa de activacin Ea mediante la
ecuacin de Arrhenius k=s
-Ea/ RT
donde s es
la constante de frecuencia, R la constante de
los gases ideales, T temperatura en grados
Kelvin.
La interrelacin entre D y T est dada por el valor z y est relacionado con Ea por la
ecuacin Ea = [2,3 R. T1. T2 / z]. 9/ 5 siendo T1 la temperatura de referencia y T2 la
del ensayo, en grados Kelvin (14).
2.7.2. Accin de las radiaciones
La irradiacin consiste en proyectar una cierta cantidad de energa sobre un cuerpo
para expulsar los electrones perifricos fuera de los tomos y producir de esta manera
iones. Estos iones, as como los electrones expulsados, reaccionan a su vez con otros
tomos. El resultado es la rotura de enlaces entre los tomos y las molculas que
constituyen la substancia tratada. En las clulas, la radiacin afecta en primer lugar a
los cidos nucleicos y las protenas, sin que se produzca un calentamiento apreciable.
Algunas de las alteraciones que una radiacin ionizante puede producir en un cido
nucleico son reparables por el microorganismo, por ejemplo la hidratacin de la
citosina. Otras alteraciones son ms perjudiciales, como la formacin de puentes entre
ambas cadenas del ADN impidiendo la duplicacin del mismo y por tanto de la
bacteria.
Se emplean tres formas de radiacin: los rayos gamma, los electrones acelerados y los
rayos X. Los irradiadores de rayos gamma funcionan con cobalto 60, emitiendo estos
rayos con gran poder de penetracin, de hasta varias decenas de centmetros, lo que
permite tratar productos a granel. La irradiacin tambin inhibe la germinacin de las
papas y las cebollas, prolongando el tiempo de almacenamiento, as como afecta a las
larvas y huevos de insectos en los cereales.
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 13
El gray es la cantidad de energa absorbida correspondiente a un joule por kg de
substancia ionizada y reemplaza al rad (1 Gy =100 rad) en el sistema internacional (22).
2.7.3. Accin de la luz ultravioleta
El rango de la radiacin UV que ms afecta a los microorganismos est entre 240 y
280 nm, y se utiliza para el tratamiento de superficies contaminadas pues tienen poco
poder de penetracin. La radiacin germicida (254 nm) es absorbido por el material
celular pero de manera ms significativa por los cidos nucleicos, a los que causa el
mayor dao. Los endosporos bacterianos son 7 a 50 veces ms resistentes a la radiacin
UV de 254 nm que las clulas vegetativas (23).
El principal efecto de la luz UV es causar la formacin de dmeros, mediante enlaces
transversales, entre pirimidinas adyacentes, especialmente residuos de timina del
ADN. Estos residuos unidos por enlaces transversales, alteran el proceso normal de
replicacin dando como resultado mutaciones. Muchas bacterias poseen un eficiente
mecanismo de fotorreactivacin para reparar el dao causado por la radiacin UV
cuando se exponen inmediatamente despus a la luz visible (2).
2.7.4. Accin de las microondas
Las microondas son una parte del espectro de ondas electromagnticas cuya banda se
extiende desde los 500 megahertz hasta los 10 gigahertz, es decir incluye ondas cuyas
frecuencias de oscilacin van desde los 500 millones a los 10.000 millones de ciclos por
segundo, y se usan para generar calor interno en diversos productos (24).
Las molculas de agua son dipolos elctricos y cuando se aplica un campo de
microondas, se reorientan con cada cambio en la direccin del campo produciendo
calor por la friccin intermolecular. Las caractersticas fsicas, trmicas, dielctricas del
tejido biolgico, su masa y la frecuencia de la radiacin, causan un calentamiento
diferencial de los distintos constituyentes. Esta falta de uniformidad trmica ha
limitado el uso de las microondas para la inactivacin microbiana, pues el
calentamiento heterogneo puede dejar puntos donde sobrevivan microorganismos,
aunque tericamente estas clulas son calentadas especficamente dentro de la matriz
del producto que las contiene. La frecuencia comnmente usada, por distintas razones,
es 2,45 GHz y no parece ser la ms conveniente (23).
2.7.5. Accin del ultrasonido
Las ondas sonoras de alta frecuencia (ultrasonido) tambin se usan para desintegrar
clulas microbianas y eliminar microorganismos de un equipo (2). Se ha usado para
productos lquidos un proceso combinado de inactivacin microbiana que incluye calor
(112C) y ultrasonido (20kHz) bajo una presin de 300 kPa (23).
2.7.6. Separacin por filtracin
Las preparaciones que contienen productos sensibles al calor se esterilizan mejor por
filtracin. El material filtrante se prepara con un ster de celulosa u otros polmeros con
poros de tamao preciso y uniforme. Es muy delgado, con un espesor de unos 150 m
y por eso se le denomina membrana filtrante. Los filtros ms usados tienen un
dimetro de poro de 0,2 m de 0,45 m. Para su uso se suele colocar la membrana
preesterilizada sobre el disco que la soporta en la unidad de filtracin estril.
Los filtros de aire de elevada eficiencia (HEPA) permiten suministrar aire libre de
polvo y microorganismos a una cmara de siembra, y estn acoplados a un sistema de
flujo laminar (2).
2. 8. Desinfeccin
Los desinfectantes son substancias qumicas que matan a las clulas somticas
adheridas a las superficies inanimadas, pero no necesariamente a las formas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 14
esporuladas. Los antispticos destruyen o inhiben el crecimiento y la actividad de los
microorganismos que estn sobre los tejidos vivos (1).
Se llama bactericida a la substancia que mata las clulas bacterianas y bacteriosttico a
la que impide el crecimiento y multiplicacin de las mismas. Un agente antimicrobiano
interfiere con el crecimiento y metabolismo de los microorganismos y cuando se refiere
a grupos especficos se usan los trminos antibacteriano o antifngico (2).
Varios factores influyen sobre la velocidad con que son inhibidos o destrudos los
microorganismos. A medida que aumenta la concentracin del agente las clulas
mueren ms rpido, por ejemplo 4,25 g de fenol/ L requieren unas 10 horas para
obtener el mismo resultado que una concentracin de 6,04 g/ L en 1,5 horas. Un ligero
aumento de la temperatura permite aumentar grandemente la efectividad de un
desinfectante por ejemplo, para una solucin de fenol de 4,62 g/ L, un incremento de 30
a 42C permite obtener el mismo resultado en un tiempo diez veces menor (2).
Las especies de microorganismos difieren en la sensibilidad a los diversos agentes
antimicrobianos. Los endosporos bacterianos son las clulas ms resistentes por su
capacidad de sobrevivir a las condiciones qumicas adversas. La presencia de materia
orgnica puede reducir significativamente la efectividad de un antimicrobiano,
inactivndolo por combinacin con el mismo o protegiendo al microorganismo al
dificultar el contacto con el desinfectante. Cuando estn en un ambiente con un pH
cido los microorganismos son destrudos a temperatura ms baja y en menor tiempo
que en un medio ligeramente alcalino (1).
Los compuestos fenlicos pueden ser bactericidas o bacteriostticos segn la
concentracin usada, pero algunos son fungicidas. La actividad es reducida por un pH
alcalino o la presencia de materia orgnica. El alcohol etlico en concentraciones de 50 a
70% v/ v es efectivo contra clulas somticas. Los productos que contienen 5 a 7% de
hipoclorito de sodio se usan para higienizar diversos equipos, pero es muy afectado
por la presencia de materia orgnica.
Los detergentes disminuyen la tensin superficial y no son afectados por las aguas
duras. Los agentes que al ionizarse tienen la propiedad detergente en el anin son
conocidos como detergentes aninicos, por ejemplo el lauril sulfato sdico o los
jabones. Producen la eliminacin mecnica de los microorganismos al atraparlos en la
espuma. Los que tienen la propiedad detergente en el catin son llamados catinicos,
por ejemplo los cloruros de amonio cuaternario. Son bactericidas frente a las
grampositivas pero tienen poca accin contra las gramnegativas (2).
El formaldehdo es un gas que se comercializa como una solucin acuosa (formol o
formalina) que contiene entre 37 y 40 % de formaldehdo. Se emplea en soluciones del 3
al 8%. Tiene una alta actividad microbicida. Se lo suele usar para esterilizar ambientes
cerrados bajo condiciones apropiadas pues los vapores son nocivos (2).
2. 9. Interacciones microbianas
2.9.1. Antibiosis
Un microorganismo puede producir metabolitos que hagan el ambiente desfavorable
para el desarrollo de otros o que perturben su metabolismo hasta el punto de que
mueran o sean incapaces de reproducirse. El fenmero recibe el nombre de antibiosis o
antagonismo.
Los antibiticos constituyen un grupo heterogneo de molculas orgnicas
relativamente pequeas, producidas por unos microorganismos para inhibir a otros a
una concentracin muy baja. La mayora de los microorganismos notoriamente
productores de antibiticos se alojan en el suelo (8).
Otro grupo se molculas antagonistas son las bacteriocinas. Constituyen un grupo
relativamente heterogneo de pequeas protenas sintetizadas en los ribosomas
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 15
microbianos. Actan sobre bacterias estrechamente relacionadas al agente productor
pero no afectan a ste. Algunas bacteriocinas son: nisina producida por Lactococcus
Iactis, subtilina por B. subtilis, colicinas por E. coIi, pediocina por Pediococcus acidilactici
(26).

Productos metablicos microbianos que actan como antibiticos (1, 25)
antibacterianos producido por modo de accin
aminoglucsidos
estreptomicina Streptomyces griseus induce sntesis anormal de protenas
neomicina Streptomyces fradiae
cefalosporinas Acremonium cephalosporium inhiben sntesis de pared celular
cloranfenicol Streptomyces venezuelae
eritromicina Saccharopolyspora erythraea interfiere con sntesis de protenas
lincomicina Streptomyces lincolnensis
penicilinas Penicillium chrysogenum inhiben sntesis de pared celular
polipptidos
polimixinas BaciIIus polymyxa deterioro de membrana celular
bacitracina BaciIIus subtilis inhibe formacin de pared celular
rifamicinas Amycolatopsis mediterranei interfiere con sntesis de protenas
tetraciclinas Streptomyces spp.
vancomicina Arnycolatopsis orientali s
viomicina Streptomyces griseus
antifngicos
anfotericina B Streptomyces nodosus interfiere con funcin de membrana
griseofulvina PeniciIIium griseofulvum daa la membrana celular
lipopptidos
iturina A BaciIIus subtilis interfiere con funcin de membrana
surfactina BaciIIus subtilis
nistatina Streptomyces noursei daa la membrana celular

2.9.2. Mutualismo y simbiosis
Los microorganismos que habitan en un ecosistema presentan varios tipos de
asociaciones e interacciones entre las especies. A veces se asocian diferentes especies
bacterianas, o bien bacterias y otra clase de organismos, como levaduras, mohos, algas,
protozoos e incluso plantas, u hongos con plantas como en el caso de las micorrizas. En
muchos casos, el crecimiento y la reproduccin son ms vigorosos en asociaciones
favorables de dos tipos de organismos que en cultivos de una sola especie (9).
El mutualismo es la vida en comn de dos o ms organismos asociados en beneficio
mutuo pero no implica necesariamente el contacto fsico. Simbiosis es una asociacin
especfica entre dos tipos de organismos que estn en contacto fsico. Generalmente el
de menor tamao (simbionte) vive dentro o est adherido a la superficie del mayor
(hospedador). La simbiosis no siempre implica mutualismo. El hospedador es siempre
un organismo eucaritico y puede mantener al simbionte (eubacteria, actinomiceto,
hongo o alga) intracelular o albergarlo en el interior de cavidades u rganos (12). Por
otra parte, la sintrofia es la accin cooperante de dos microorganismos con
metabolismos complementarios (un tipo de mutualismo) alcanzando un efecto que no
es logrado separadamente por ninguno de ellos (9).
Un organismo puede ser incapaz de crecer en presencia de cierto substrato, pero si
coincide con un microorganismo capaz de degradarlo y producir molculas tiles para
el primero, se observa su crecimiento. Esta asociacin recibe el nombre de
comensalismo o vida en comn de dos especies con beneficio para una de ellas y sin
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 16
dao ni provecho para la otra, por ejemplo cuando los microbios colonizan la superficie
externa de una planta obteniendo energa de la metabolizacin de exudados
producidos por el hospedador. Otro ejemplo es la influencia favorable de un microbio
facultativo sobre el desarrollo de uno anaerobio, el primero reduce la tensin de
oxgeno y crea un ambiente adecuado para que prospere el segundo (27).
Las comunidades microbianas estn caracterizadas por siete diferentes mecanismos
biolgicos:
a) provisin de nutrientes especficos por los diferentes miembros de la comunidad,
b) moderacin de la inhibicin del crecimiento,
c) interacciones que causan la alteracin de los parmetros de crecimiento de las
poblaciones individuales, produciendo un desempeo de la comunidad ms
eficiente y/ o competitivo,
d) actividad metablica combinada no expresada por las poblaciones individuales
aisladas,
e) cometabolismo,
f) reacciones de transferencia de hidrgeno,
g) interaccin entre varias especies dominantes (28).
2.9.2.1. Fijacin simbitica del nitrgeno
Una particularidad de las plantas leguminosas es su capacidad para asociarse con
bacterias fijadoras de nitrgeno pertenecientes a los gneros Rhizobium, Sinorhizobium,
Bradyrhizobiumy Azorhizobium. Esta simbiosis se traduce en el desarrollo del ndulo en
cuyo interior las bacterias se multiplican y transforman el nitrgeno del aire en amonio
(ver 3.10). La asimilacin de ese amonio por parte
de las plantas les permite crecer en suelos pobres
en nitrgeno.
En la primera etapa, la planta secreta en su
exudado radicular unos flavonoides que atraen a
los rizobios por quimiotactismo y activan en la
bacterias la expresin de ciertos genes que
determinan la produccin, en los rizobios, de
molculas fundamentales para el reconocimiento
y la infeccin de la planta hospedadora
induciendo la formacin de los ndulos. Las
bacterias se adhieren a los pelos absorbentes de la
raz e inducen la curvatura del extremo de los
mismos (29).
Los rizobios infectan la planta mediante un filamento de infeccin que avanza hacia
la base del pelo y el interior de la raz, simultneamente las clulas de la corteza interna
de la raz se dividen y forman el primordium nodular. La multiplicacin muy intensa
de estas clulas provoca la aparicin del ndulo, que es un verdadero rgano
especializado en el intercambio metablico entre ambos asociados.

Algunas especies de bacterias fijadoras de nitrgeno en simbiosis (33)
Gnero, especie, biovar Planta hospedadora
Sinorhizobium meliloti alfalfa
Rhizobium leguminosarumbiovar trifolii trbol
Rhizobium leguminosarumbiovar phaseoli poroto
Rhizobium ciceri garbanzo
Bradyrhizobium japonicum soja
Azorhizobium caulinodans Sesbania (ndulos en el tallo)
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 17
Las simbiosis entre rizobios y leguminosas son muy especficas, por ejemplo R.
leguminosaruminduce la nodulacin en el poroto pero no en la alfalfa (30). Las bacterias
no se mezclan con los orgnulos citoplasmticos, sino que se mantienen confinadas en
los simbiosomas que son vesculas protegidas por membranas. Los simbiosomas del
lupino tienen una sola bacteria, los de la soja varias. La figura 4 muestra el corte de un
ndulo.
La membrana del simbiosoma acta a modo de
barrera que controla el flujo de cidos carboxlicos
(malato, succinato, fumarato). stos constituyen la
fuente de carbono para los bacteroides. Tales cidos
proceden de la oxidacin de azcares sintetizados en
las hojas por la fotosntesis. Durante el proceso de
formacin de los simbiosomas, las bacterias se van
transformando en bacteroides que expresan diversas
protenas especficas como la enzima nitrogenasa y
algunos citocromos. Las clulas intersticiales sin
infectar intervienen en las ltimas etapas de la sntesis
de ureidos, asparagina o glutamina, por incorporacin
del nitrgeno fijado. stos se exportan hacia la parte
area a travs de los vasos del xilema.
Para que los ndulos de las leguminosas fijen
nitrgeno es imprescindible que contengan
leghemoglobina cuyo grupo hemo es sintetizado por el
vegetal (32). La fijacin de nitrgeno requiere gran
cantidad de energa que se produce en los bacteroides
durante la oxidacin de los cidos dicarboxlicos y la
leghemoglobina transporta el O2 a una concentracin
baja pero estable que permite mantener una elevada
actividad respiratoria sin afectar la nitrogenasa, pues
esta enzima se inactiva en presencia de oxgeno (30).
La rizsfera de algunas plantas contienen acumulaciones de bacterias fijadoras, tal
como Azotobacter paspali sobre la superficie de la raz de Paspalum notatum y
Azospirillum brasilense en la de caa de azcar. Las bacterias se hallan en el espacio
intercelular del crtex radical, en una simbiosis donde se benefician los dos
participantes de la asociacin. Por otra parte, el helecho de agua Azollacontiene a la
cianobacteria Anabaena azollae en las cavidades de las hojas. Nostoc vive
simbiticamente en el lquen Peltigera y sobre las races areas de Cycas y Gunnera (29).
Varias dicotiledneas que no pertenecen a las leguminosas, tambin contiene ndulos
en las races capaces de fijar N2. En la mayora de los casos se trata de actinomicetos del
gnero Frankia. En la figura 5 se esquematiza la forma en que los filamentos penetran a
las clulas de la raz y produce ndulos donde tambin se encuentra una hemoglobina
que facilita la provisin de O2 al endfito (32).
Un inoculante para enriquecer el suelo con la bacteria simbitica deseada, contiene
altas concentraciones celulares en un substrato que favorece largos perodos de
supervivencia sin prdidas de las caractersticas fisiolgicas del microorganismo. Los
pasos a seguir comprenden:
a) seleccin de las cepas convenientes por su mayor eficiencia;
b) cultivo del microorganismo en un medio lquido;
c) eleccin, preparacin y esterilizacin del material de soporte;
d) impregnacin del soporte con el cultivo lquido que posee un alto nmero de clulas,
e) control del nmero de bacterias vivas en el producto terminado (34).
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 18
No todas la cepas infectivas en un hospedador
particular son capaces de fijar nitrgeno, debido
a la interrrelacin varietal y a la interaccin con
los suelos y sistemas de produccin. La cepa
seleccionada debe ser genticamente estable,
tener una alta competencia frente a las cepas
menos eficientes propias del suelo, crecer en los
medios corrientemente utilizados en la industria
y sobrevivir en el soporte a las condiciones de
comercializacin.
El empleo de turba estril como soporte, el
almacenamiento refrigerado del producto y el
control de calidad, permiten mantener altos
niveles de rizobios vivos en la distribucin del
inoculante. Esto se traduce en un incremento de
rizobios por semilla. Se suele exigir 2*10
9
bacterias/ g de inoculante a la salida de la fbrica, para as asegurar que el momento de
aplicacin permanezcan vivos unos mil millones por gramo. Las condiciones de
transporte, almacenamiento y uso determinan el xito de la inoculacin (34).
2.9.2.2. Micorrizas
Una de las funciones ms importantes
de las micorrizas (asociaciones entre
hongos y plantas) es absorber los
elementos minerales menos mviles del
suelo (fosfato, cobre, zinc) y
transferirlos a la planta hospedadora,
as como amonio. La planta proporciona
azcares al hongo (36).
Las ectomicorrizas se caracterizan por
una modificacin de la raz, que pierde
sus pelos absorbentes. El hongo rodea la
raz con un manto de filamentos, del
cual parte una red micelial externa que
se extiende por el suelo y una red micelial interna que penetra la raz en el espacio
intercelular. Los hongos implicados son macromicetos que solamente en simbiosis
pueden formar basidiomas (por ejemplo Amanita, Boletus, Lactarius, Pisolithus, Suillus) o
ascomas (como las trufas) (ver 7.3).
En las endomicorrizas el micelio entra en la raz donde
inicialmente es intercelular, luego penetra en las clulas
y se ramifica formando los arbsculos que son ms o
menos digeridos por el hospedador, y unas vesculas.
Los hongos de las endomicorrizas son micromicetos
(Glomus). En la figura 6 se observa un esquema de una
endomicorriza y en la 7 de una ectomicorriza.
2.9.2.3. Biopelculas
Las biopelculas que se forman en el forraje ingerido
por el ganado vacuno y otros rumiantes, estn
inicialmente formadas por microorganismos que
digieren la celulosa del material vegetal y producen
cidos grasos y otros metabolitos. Luego las clulas de
otras especies invaden la pelcula y comienzan a usar
Leonor Carrillo. 2003. Microbiologa Agrcola. Captulo 2 19
esas sustancias para su propio metabolismo. As es como el forraje desaparece y es
transformado en una masa bacteriana que el animal digiere ms tarde. Estas pelculas
son imprescindibles para los rumiantes.
Menos de la tercera parte de la biopelcula est constituda por microcolonias de
bacterias, el resto es una sustancia blanda y pegajosa (matriz extracelular) secretada por
ellas que absorbe agua, atrapa partculas pequeas y mantiene unidas a las
microcolonias (figura 8). La pelcula biolgica est atravesada por diminutos conductos
que baan a cada agrupacin bacteriana, aportando nutrientes disueltos y eliminando
productos de desecho (37).

2.9.3. Predacin
Algunos microorganismos predadores se alimentan de las bacterias, como los
protozoos, mixobacterias, acrasiomicetos y varios flagelados fotosintetizantes que no
siempre estn clasificados como algas.
Siempre que existen protozoos en estado trfico hay una poblacin bacteriana que le
sirve de presa. Debido a que una sola clula de protozoo consume entre divisiones 10
3
a
10
4
bacterias, una comunidad con 10
3
protozoos por mL g est caracterizada por una
predacin activa. Un suelo suele tener 10
9
bacterias/ cm
3
, pero en solucin los
protozoos reducen el nmero de clulas a 10
6
/ cm
3

Sin embargo, a pesar de su abundancia y actividad, los protozoos no suelen eliminar
sus presas porque esto acarreara la desaparicin consecuente del predador. Con una
baja densidad de presas el protozoo debe utilizar gran cantidad de energa para llegar a
las pocas clulas que le sirven de alimento y puede morir cuando se acaben o bien
enquistarse (27).

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