Manual de Serie Roja 2014-2015 PDF

CARRERA
PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
NOMBRE DE LA ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTICO
BILOGO
2014-2015 LABORATORIO DE SERIE ROJA
PRCTICA
NMERO
NOMBRE DE LA PRCTICA DURACIN
1 BIOSEGURIDAD
2 HORAS
1 INTRODUCCIN
El laboratorio clnico, es el establecimiento pblico, social o privado, legalmente establecido,
independiente o ligado a otro establecimiento para la atencin mdica de pacientes hospitalari os o
ambulatorios, que tiene como finalidad realizar anlisis fsicos, qumicos o biolgicos de diversos
componentes y productos del cuerpo humano. Sin embargo, dentro de las acciones a seguir en el
laboratorio clnico para el anlisis de estos productos biolgicos, desde la recepcin, transporte,
manipulacin, procesamiento, almacenamiento y elimi nacin, los profesionales del laboratorio
conllevan un potencial riesgo a su salud, puesto que estos productos son catalogados como
material RPBI, que de acuerdo con la NORMA Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002,
Proteccin ambiental- Salud ambiental- Residuos peligrosos biolgico infecciosos- Clasificacin y
especificaciones de manejo, son todos aquellos materiales generados durante los servicios de
atencin medica que contengan agentes biolgico-infecciosos segn son definidos en esta norma, y
que puedan causar efectos noci vos a la salud y al ambiente.
Es por ello, que diversas organizaciones nacionales e i nternacionales han implementado Normas de
Bioseguridad en los laboratorios clnicos, con el propsito de prevenir la exposicin a agentes
infecciosos del personal que se encuentra en contacto directo con material RPBI.
En un laboratorio clnico, las vas de exposicin ms comunes se dan por la ingestin, inoculacin,
contami nacin de piel o mucosas e i nhalacin:
VIAS DE EXPOSICION
INGESTION Pipeteo con boca
Salpicaduras en la boca
Colocacin en boca de art culos o dedos contami nados
Consumo de comida en lugar de trabajo
INOCULACION Accidentes con aguj as
Cort aduras con objetos punzo cortantes
Mordedura de animales
CONTAMINACION DE PIEL O MUCOSAS Cont acto con superficies, equipo o art culos contami nados
Salpicaduras en piel intacta o no intacta (lesin)
Salpicadura en oj os, boca o nariz.
INHALACION Por di versos procedimientos que producen aerosoles
Por esta razn, los profesionales de laboratorio deben portar obligatoriamente equipo de proteccin
que sirvan de barrera ante los productos i nfecciosos manipulados. El equipo de barrera
fundamentalmente est constituido por bata, gafas de laboratorio, mascarilla o cubrebocas y
guantes; sin embargo, esto representa lo bsico en proteccin, puesto que basados en la
clasificacin reali zada por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) los laboratorios pueden
implementar otras medidas de bioseguridad en funcin del grupo de riesgo al que pertenecen los
patgenos o material RPBI manejados.
La misin primordial de las reglas de Bioseguridad en un laboratorio, ya se trate de laboratori o de
investigacin, de anlisis y diagnstico clnico, de patologa, industriales, de enseanza a diferentes
niveles educativoses lograr un ambiente de trabajo seguro para el personal y para las personas
ajenas al laboratorio, i ncluyendo las que se encuentran fuera de las i nstalaciones, y es por esto, que
todo laboratorio debe mantener una reglamentacin general de bioseguridad.

2 OBJETIVOS
Informar al alumno acerca de las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio.
Explicar al alumno la importancia de los RPBI (residuo peligroso biolgico infeccioso), su
clasificacin y desecho.
3 FUNDAMENTO
La Ley General del Equilibrio Ecolgico y la Proteccin al Ambiente, defi nen como residuos
peligrosos a todos aquellos residuos que por sus caractersticas corrosi vas, reactivas, explosivas,
txicas, inflamables y biolgico-infecciosas, que representan un peligro para el equilibrio ecolgico o
el ambiente.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
EQUIPO DE BARRERA PRIMARIA
Bata
Gafas
Cubrebocas
Guantes
Gorro
MATERIAL DE RPBI
Recipiente hermtico color amari llo y rojo
Bolsas de polietileno color amarillo y rojo

B DESARROLLO DE LA PRCTICA

EQUIPO DE
PROTECCION

MATERIAL DE ALMACENAMIENTO RPBI
C REPORTE DE RESULTADOS
Realizar anotaciones de la exposicin del catedrtico en la sesin, as como tus observaciones.
5 INTERPRETACIN Y CONCLUSIONES
Desarrolla tus discusiones y conclusiones en funcin a lo aprendido en esta sesin, enriqueci endo
tus discusiones con lo que conocas del tema.
6 ANEXOS
Revisar la NORMA Mexicana NMX-AA-22-1985.
Revisar la NORMA Oficial NOM-083-SEMARNAT-2003.
Revisar la Ley General para la Prevencin y Gestin Integral de los Residuos.
Revisar las Buenas Prcticas de Laboratorio.
OJO: De cada una de las actividades anteriores deber hacerse un resumen, el cual
debers hacerlo en la bitcora.
7 REFERENCIAS
http://www.cenetec.salud.gob.mx/descargas/equipoMedico/normas/NOM_007_SSA3_2011.p
df
http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57611111003
http://epidemiologiamolecular.com/barreras-primarias-equipos-proteccion-personal/
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/087ecolssa.html

CARRERA
PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTIC
O BILOGO
2014 2015 LABORATORIO DE SERIE ROJA
PRCTICA
NMERO
NOMBRE DE LA PRCTICA FECHA Y DURACIN
2 PROCEDIMIENTO DE RECOLECCION 2 horas
1 INTRODUCCIN
El objetivo del laboratorio clnico es la obtencin de informacin sobre el estado de salud de una
persona. Esta informacin puede utili zarse para establecer un diagnstico, evaluar una evolucin
y/o pronstico de una enfermedad, valorar la efectividad de un tratamiento, reali zar un cribado en
la poblacin, etc. Para ello, a partir de muestras biolgicas, se realizan pruebas en las que se
miden una serie de magnitudes de diferente ndole: bioqumicas, hematolgicas, inmunolgicas,
microbiolgicas, parasitolgicas, toxicolgicas, etc.
La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del laboratorio clni co.
Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto
de vista de la muestra sangunea, la enorme importancia que conlleva una muestra
apropiadamente colectada, la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte,
constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe de los exmenes a reali zar.
2 OBJETIVOS
Aplicar las recomendaciones mencionadas en la sesin para efectuar una adecuada
puncin venosa y capilar.
Conocer los di versos sistemas existentes para llevar a cabo la extraccin sangunea:
sistema Vacutainer, uso de jeri nga, aguja mariposa, lancetas.
Utili zar los conocimientos aprendidos en la sesin 1, acerca del desecho del material RPBI.
3 FUNDAMENTO
Levar a cabo la extraccin sangunea no se limita al acto de obtener la muestra de estudio, sino
que tambin se hace necesaria la aplicacin de ciertas medidas previas a la extraccin, que tienen
como propsito brindar al paciente un servicio de calidad, desempeado con alto grado ticoy de
manera responsable por parte de los profesionales de laboratorio, ofreciendo al paciente las
recomendaciones necesarias para obtener una muestra en condiciones idneas y que arrojen
resultados confiables sobre su estado de salud.

PREPARACION DEL PACIENTE
Se han descrito factores preanalticos que pueden afectar de forma decisiva a la calidad de los
resultados fi nales. Algunos de los factores relacionados con el paciente son i nmodificables y por
tanto no controlables, es decir, no podemos actuar sobre ellos (sexo, edad, raza, embarazo, etc.),
sin embargo la correcta identificacin de los mismos puede ayudarnos a evitar i nterpretaciones
errneas. Existen otro grupo de factores preanalticos que si son modificables, como por ejemplo:
Dieta y ayuno:
La dieta y la i ngesta de lquidos pueden tener influencia en varias magnitudes bioqumicas y
hematolgicas. Por otra parte, la desnutricin y el ayuno prolongado tambin pueden alterar
algunas magnitudes de manera clnicamente relevante.
Por esta razn, es recomendable i nformar a los pacientes la importancia que tiene el guardar un
periodo de ayuno de por lo menos 8-12 hrs previo a la toma de muestra, a fin de evitar una
errnea interpretacin de los resultados.
Ejercicio:
El ejercicio fsico reciente, tambin puede alterar notablemente el resultado de algunas magnitudes
biolgicas. Ello es debido a cambios hormonales, cambios en la distribucin de volumen por
sudoracin. Por ello, el paciente debe ser i nterrogado sobre la realizacin de ejercicio reciente y
anotarlo, para que pueda ser tenido en cuenta en la interpretacin de los resultados.
Medicacin, ingesta de alcohol, drogas, entre otras.

EL PROCEDIMIENTO DE LA FLEBOTOMIA
La muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones ms favorables para evitar errores.
Esto incluye la absoluta identificacin del paciente, el sitio a puncionar y el volumen a colectar.
Adems, requiere de colocar al paciente en una posicin cmoda; as que, tratndose de
pacientes ambulatorios la posicin adecuada es sentado en una si lla, con el antebrazo colocado
en un apoyabrazos i nclinado y el brazo extendido, de manera que forme una lnea recta desde el
hombro a la mueca. El brazo debe apoyarse firmemente en el apoyabrazos y no debe estar
doblado a ni vel de codo. En cambio, cuando los pacientes se encuentran en cama, este debe
descansar sobre su espalda. Si se necesitara un apoyo adicional, puede colocarse una almohada
bajo el brazo del que se va a extraer la muestra. El paciente debe extender su brazo, de manera
que forme una lnea recta desde el hombro hasta la mueca.

SELECCIN DEL SITIO A PUNCIONAR
Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, hay que evitar las reas con hematoma, fistulas,
quemaduras, escoriaciones de la piel o cicatrices.
Palpacin:
Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es reali zando una
palpacin de las mismas para esa decisin. Para ello el torniquete se coloca por arriba del sitio
seleccionado, para visualizarlas mejor.
Las venas ms utilizadas para la venopuncin, estn localizadas en el rea antecubital. Entre
estas tenemos:

Asepsia:
Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe procederse a descontami nar el rea
con alcohol etlico o isopropilico al 70% utilizando algodn y con movimientos circulares del interior
al exterior. Reali zado esto, no debe volverse a tocar el rea venosa.

Vena cubital: Es la ms larga
y gruesa de todas y es la
preferida por bordear la
musculatura del brazo.
Vena ceflica: Tiene
caractersticas similares a l a
vena cubital, sol o que esta
es ms delgada.
Vena baslica: Es ms
pequea que la vena cubital y
ceflica, esta vena. Esta
cerca de l a art eria branquial,
por lo que su puncin es
riesgosa y su rea es ms
sensible y dolorosa para el
paciente.
4 PROCEDIMIENTO
A MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS EQUIPO DE APOYO
Algodn (torundas)
Alcohol
Recipientes RPBI para punzocortantes
Tubos vacutai ner con/sin anticoagulante
Agujas para vacutai ner
Capuchn para sistema vacutainer
Ligadura
Agujas mariposa para jeringa
Tubos de ensaye de vidrio
Agujas para jeringa
Jeringa de 5ml
Lancetas
Capilares con/si n anticoagulante
Gradilla

PUNCIN VENOSA CON SISTEMA VACUTAINER
1. Se rotula el tubo vacutainer con/si n anticoagulante con el nombre del paciente y se coloca
en la gradilla.
2. Se verifica que la aguja para vacutainer se encuentra sellada. Se enrosca la aguja en el
capuchn y para ello debe romperse el sello a la vista del paciente.
3. Se ubica cerca del rea de puncin todo lo necesario: el recipiente RPBI, torundero,
capuchn con aguja vacutainer, ligadura.
4. Se localiza la vena del paciente con ayuda de la ligadura (no dejar en el brazo por mucho
tiempo).
5. Se debe realizar asepsia en la zona localizada para la puncin.
6. Se introduce en la piel la aguja para vacutainer cuidando que el bisel de la aguja se
encuentre hacia abajo.
7. Se toma el tubo vacutainer y se i ntroduce en el capuchn, lo cual da como resultado la
extraccin.
8. Mientras se llena el tubo, se quita la ligadura del brazo del paciente.
9. Lleno el tubo vacutainer con muestra, se retira del capuchn (si el tubo tiene anticoagulante
debe mezclarse con movimiento vortx con la finalidad de que se mezcle con este).
10. Se toma una torunda colocndola sobre la zona de puncin y se retira rpidamente la aguja.
11. Se desecha la aguja en el recipiente RPBI para punzocortantes.

PUNCIN VENOSA CON AGUJA MARIPOSA
12. Se ubica cerca del rea de puncin todo lo necesario: el recipiente RPBI, torundero, aguja
mariposa para jeringa, ligadura, tubo de ensaye de vidrio.
13. Se localiza la vena del paciente con ayuda de la ligadura (no dejar por mucho tiempo en el
brazo).
14. Se realiza asepsia en la zona de puncin.
15. Se toma la aguja mariposa teniendo presente que el bisel se encuentre abajo y tomando las
orejas de la aguja.
16. Se realiza la puncin para extraer la muestra sangunea.
17. Se retira la ligadura del brazo del paciente.
18. Se coloca una torunda sobre la zona de puncin y se retira la aguja rpidamente.
19. Se desecha la aguja mariposa (solo la aguja) en el recipiente RPBI para punzocortantes.

PUNCIN VENOSA CON JERINGA
jeringas, ligadura.
21. Se saca la jeringa de su empaque y se asegura la aguja.
22. Se localiza la vena del paciente con ayuda de la ligadura (no dejar por mucho tiempo en el
brazo).
23. Se realiza asepsia en la zona de puncin.
24. Se efecta la puncin con jeri nga cuidando que el bisel se encuentre abajo.
25. Se retira la ligadura del brazo del paciente.
26. Para extraer la muestra sangunea se jala el embolo de la jeri nga de forma lenta evitando
sacar accidentalmente la aguja.
27. Tras obtener el volumen de sangre deseado, se coloca una torunda sobre la zona de
puncin y se retira la aguja rpidamente.
28. Se desecha la aguja en el recipiente RPBI para punzocortantes y el cuerpo de la jeringa se
desecha en la bolsa RPBI color rojo.

PUNCIN CAPILAR
lancetas, capilares con/si n anticoagulantes.
30. Se realiza asepsia en la zonade puncin (yema de los dedos medio o anular).
31. Se dispara la lanceta desechando la primera gota que salga.
32. Se toma un capilar con/sin anticoagulante y se ubica en la puncin para que se llene
partes del capilar.
33. Se desecha el capilar en el recipiente de RPBI de punzocortantes.
C CLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS
Observar la tcnica empleada por los compaeros de mesa y con ello hacer anotaciones en
la bitcora de todo lo ocurrido durante la puncin.
Reportar con fotografas, dibujos.
Elaborar una conclusin en funcin al objeti vo planteado en esta prctica.
6 ANEXOS
CUESTIONARIO
1. Mencione tres ventajas y tres de una puncin capilar.
2. Mencione tres ventajas y tres desventajas de una puncin venosa.
3. Cules son los tipos de eleccin para llevar a cabo una puncin capilar y una puncin en
nios?
4. Qu determi naciones hematolgicas se efectan en un frotis sanguneo?
5. Mencione cinco tipos de anticoagulantes empleados en hematologa?
6. Cuantos tipos de tubos vacutai ner existen y que i ndica el color del tapn?
7 REFERENCIAS
1. Sans-Sabrafen J et al. Hematologa Clnica. 4 Edicin. Editorial Harcourt. Espaa.2001.
2. Rui z Arguelles G. J. et al. Hematologa .2 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Mxico.
2000.
3. Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995.
4. Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico.
1998.
5. McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa.
1998.

CARRERA
PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTICO
BIOLOGO
PRCTICA
NMERO
3
CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA SANGUINEA
POR EL METODO DE CIANOMETAHEMOGLOBINA.

2 horas
1 INTRODUCCIN
La BiometraHemtica (BH), tambin denominada citometra o citologa hemtica, es uno de los
estudios de laboratorio que con ms frecuencia se solicitan i nicialmente tanto para los pacientes
ambulatorios como para los hospitali zados.
La importancia de esta prueba de laboratorio radica en que a travs de este, se puede hacer un
estudio morfolgico y cuantitati vo de los elementos celulares de la sangre (eritrocitos, leucocitos
y plaquetas) y la evaluacin de parmetros como el tamao, forma y volumen celular; lo cual,
resulta significativo determinar en los pacientes, puesto que la evaluacin correcta de estos
parmetros citomorfologicos ofrece informacin acerca de los padecimientos primarios del tejido
hematopoytico, y de otros trastornos no hematolgicos permitiendo ampliar la variedad de
diagnsticos diferenciales.
En la Biometra Hemtica (BH), el anlisis de la lnea celular eritroide est fundamentado en la
determinacin de algunos ndices primarios, como lo es la cuantificacin de hemoglobina.
La Hemoglobina es una de las protenas ms importantes del organismo, dado que transporta el
oxgeno hacia todas las clulas, ocupa cerca de 33% del volumen del eritrocito y participa en
90% del peso seco total de la clula. Est constituida por cuatro subunidades, cada una de ellas
conformada por la globina, un grupo hemo y una molcula de hierro que se une de forma
reversible con el oxgeno.
Su medicin en el laboratorio clnico es til para el diagnstico de anemia, evento que se
presenta cuando la hemoglobi na disminuye por debajo 12 gr/dl en mujeres mayores de 15 aos o
13 gr/dl en varones mayores de 15 aos, y cuya prevalencia global estimada por la Organizaci n
Mundial de la Salud es de 24.8%, siendo los ni os de edad preescolar y las mujeres no
embarazadas los grupos de mayor riesgo.
Adems de su importancia en ni os y mujeres, la determinacin de la hemoglobina es de gran
relevancia en poblaciones como pacientes crticos, quirrgicos y de urgencias, principalmente
para decidir oportunamente la necesidad de una transfusin.
Para la cuantificacin de la hemoglobi na se han diseado e implementado diversas metodologas
en respuesta a diferentes necesidades clnicas, como reali zar procedimientos no i nvasivos o
dolorosos; y tecnolgicas, como emplear baja cantidad de muestra, obtener de forma inmediata
la cuantificacin y facilidades para el transporte de equipos. Entre los mtodos empleados se
tiene:
El gravimtrico con sulfato de cobre, caracterizado por ser menos costoso, pero arroja gran
proporcin de resultados falsamente normales en sujetos anmicos,
El espectrofotomtrico, basado en la cuantificacin de un complejo coloreado, la
cianometahemoglobi na, mtodo de referencia que se utiliza ampliamente para
determinaciones con sangre capilar y venosa, en analizadores hematolgicos o
hemoglobinmetros porttiles y
Mtodos elctricos, acsticos y pticos, los cuales se caracteri zan por ser no invasi vos.
Adems de los anteriores mtodos, en la dcada de los 90 se i nici la determi nacin de
hemoglobina reticulocitaria, parmetro que indica la hemoglobina de los reticulocitos ms no de
los glbulos rojos maduros, como sucede con los mtodos inicialmente mencionados y cuya
relevancia radica en la deteccin temprana de eritropoyesis deficiente en hierro.

2 OBJETIVOS
Que el alumno prepare el reactivo (estndar) de cianometahemoglobina.
Cuantificar la hemoglobi na por medio de la tcnica manual de cianometahemoglobina.
3 FUNDAMENTO
En la actualidad existen diversas tcnicas para la cuantificacin de hemoglobina; sin embargo, y
pese a que hoy en da muy pocos laboratorios fabriquen reacti vo de cianometahemoglobina para
desarrollar la tcnica con el mismo nombre, en los laboratorios de enseanza esta tcnica sigue
siendo la ms empleada para la cuantificacin de este ndice primario.
La sangre entera es diluida con reacti vos de cianometahemoglobina y el lquido diluyente
hemoliza a los eritrocitos para liberar la hemoglobi na en una solucin. Los iones ferrosos (Fe2+)
de las molculas de hemoglobina se oxidan con ferrocianuro de potasio a iones frricos (Fe3+).
Esta oxidacin resulta en la formacin de
metahemoglobina, la cual se combina con los iones de cianuro (CN-) para formar
cianometahemoglobi na, compuesto estable que puede cuantificarse con el uso de
espectrofotometra.
Cuando se mide en forma espectrofotomtrica a 540 nm, la absorbancia de las
cianometahemoglobi nas sigue la ley de Lambert-Beer y es directamente proporcional a la
concentracin de la hemoglobina en la sangre. Debe prepararse una curva de referencia
(estndar) con soluciones estndar de cianometahemoglobi na las cuales tienen concentraciones
conocidas de hemoglobina as, una concentracin desconocida de hemoglobina puede calcularse
de la absorbancia medida o leerse en una curva de calibracin estndar.

4 PROCEDIMIENTO
Muestra de sangre con Hb determinada para elaborar el
estndar de cianometahemoglobi na.
Reactivo de Drabkin
Tubos de ensaye
Gradilla
Micropipetas y puntillas
Cubetas para leer en espectrofotmetro.
Muestra de sangre con anticoagulante (EDTA)
Espectrofotmetro

PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACIN
Para elaborar esta curva se tomara una muestra de sangre con Hb determinada
proporcionada por el laboratorio clnico de esta i nstitucin.
1. A partir de la concentracin de la muestra con Hb conocida preparar el estndar haciendo
los clculos necesarios para obtener concentraciones de Hb de 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16,
18, 20 que corresponde a la concentracin de Hb que va contener cada tubo.
2. Se preparan los ml necesarios de estndar de cianometahemoglobina con la muestra de
Hb conocida.
3. En una gradilla, colocar tubos rotulados con dichas concentraciones de hemoglobi na.
4. Se deja reposar 10 mi nutos a temperatura ambiente.
5. Se toman lecturas en espectrofotmetro a 540 nm, usando reacti vo de Drabkin (como
blanco).
6. En papel milimtrico se diseara el grafico de las absorbancia de cada solucin valorada
en el eje de las ordenadas (y), contra las concentraciones en el eje de las abscisas (x).

PROCEDIMIENTO PARA LA MUESTRA PROBLEMA

7. Obtener sangre venosa y mezclar perfectamente con un anticoagulante.
8. En un tubo de ensaye que contenga 5 ml de reactivo de Drabkin, adicionar 20 l de la
sangre problema.
9. Se deja reposar durante 10 mi nutos a temperatura ambiente.
10. Se lee en espectrofotmetro a 540 nm.
11. Registrar la lectura de absorbancia dela muestra problema en el grafico del estndar para
conocer la concentracin de la hemoglobina.

En la bitcora debern estar los clculos reali zados para la preparacin del estndar de
cianometahemoglobi na (C1*V1= C2*V2); as como, el grfico de dicho estndar.

6 ANEXOS

1.-Mencione las ventajas y desventajas de la tcnica de la cianometahemoglobina
2.-Diga cuantos tipos de hemoglobina se pueden determi nar?
3.-Describa como se lleva a cabo la formacin de hemoglobina y su destruccin y eliminacin del
organismo.

Elabora de manera terica un estndar a partir de una Hb de 36 g/dlhasta una concentracin de
0 g/dl. Esta tabla deber estar en tu bitcora y de igual manera el grfico absorbancia vs
concentracin.
7 REFERENCIAS

1. http://www.revistaamicac.com/biometria%20hematica%20interpretacion.pdf
2. http://www.ejournal.unam.mx/rfm/no53-4/RFM053000405.pdf
3. http://www.redalyc.org/pdf/2390/239028092005.pdf

CARRERA
PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTICO
BILOGO
PRCTICA
NMERO
4
DETERMINACIN DE HEMATCRITO Y DE
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR
2 horas
1 INTRODUCCIN
Dentro de los ndices eritrocitarios primarios considerados en la biometra hemtica se
encuentran:la determinacin de hematocrito y velocidad de sedimentacin globular.
El hematocrito se defi ne como el volumen que representa el paquete globular en el total del
volumen sanguneo, que denota el porcentaje de eritrocitos en un volumen conocido de sangre
entera. El hematocrito es una de las pruebasde laboratorio ms simple y ms reproducible, til en
la deteccin de anemia y policitemia.
En cambio, la velocidad de sedimentacin globular (VSG) es una medida de la velocidad a la cual
asientan los eritrocitos en el plasma. La velocidad de asentamiento depende de:
La composicin de protenas del plasma
El tamao y forma de los eritrocitos
La concentracin de los eritrocitos
El incremento de valores de las protenas del plasma (principalmente fibringeno, alfa globuli nas
o gamma globulinas) resulta en una disminucin del potencial Z que rodea a los eritrocitos. Con
un potencial Z menor, los eritrocitos pueden unirse en formacin de pila de monedas y asentar se
en el plasma a una velocidad ms rpida.
De igual manera, el tamao y la forma de los eritrocitos afectan la velocidad de la sedimentacin.
Los macrocitos se asientan ms rpidamente que los eritrocitos normales, y los microcitos de
manera ms lenta.
La concentracin de los eritrocitos afecta directamente a la VSG y mientras mayor es la
concentracin de los eritrocitos menor es la VSG; un paciente anmico parece tener aumento de
la VSG.
La VSG se usa para demostrar la presencia de inflamacin o destrucci n tisular, o ambas
afecciones. Es una prueba no especfica que indica destruccin de tejido, pero no identifica la
causa.
2 OBJETIVOS
Que el alumno adquiera los conocimientos necesarios acerca de los ndices primarios
eritrocitarios contemplados en la Biometra Hemtica: HEMATOCRITO, VELOCIDAD DE
SEDIMENTACION GLOBULAR.
3
FUNDAMENTO
Para la determinacin de VSG, se han usado principalmente dos mtodos: el mtodo de
Westergren y el mtodo de Wintrobe.
El mtodo de Wintrobe consiste en dejar que la sangre sedimente por la accin de la gravedad
formando un paquete ms o menos compacto separado del plasma; para ello, se utili za sangre
entera no diluida y un tubo denomi nadotubo de Wintrobe, el cual se llena hasta la marca 0 y
se le permite asentarse en posicin vertical durante 60 minutos. La VSG se mide como la
distancia (mm) entre el menisco del plasma y la parte superior de los eritrocitos, y la distancia
resultante es la velocidad de sedimentacin globular en mm/hora.
Para determinar el hematocrito, se puede emplear la tcnica de macrohematocrito, as como la
de microhematocrito, donde el pri ncipio que las rige es acelerar el proceso de sedimentaci n
mediante la centrifugacin de una muestra de sangre anticoagulada que darcomo resultado la
acumulacin de eritrocitos en el fondo del tubo o capilar, segn sea el caso. Sin embargo, se
prefiere emplear la tcnica de microhematocrito sobre el macrohematocrito debido a que requiere
menos tiempo de centrifugacin, menor cantidad de muestra y se puede utili zar sangre capilar o
venosa.
4 PROCEDIMIENTO

Muestra de sangre venosa
Torundas con alcohol
Tubo Vacutainer con EDTA
Agujas y capuchn de sistema Vacutainer
Recipientes RPBI para punzocortantes
Capilares
Tubos de Wi ntrobe
Jeringa con cnula
Mechero de alcohol o encendedor
Base de plastili na

Microcentrifuga
Centrifuga

HEMATCRITO (HTO)

MACROMTODO: MTODO DE WINTROBE.
Se obtiene sangre venosa, se coloca en un tubo con anticoagulante y se mezcla por
inversin.
Para llenar el tubo de Wintrobe con la muestra de sangre venosa del paciente la jeri nga
con cnula ser de gran ayuda para evitar la formacin de burbujas. Por tanto, el llenado
deber hacerse con cuidado y desde el fondo del tubo subiendo lentamente hasta llegar a
la marca de 10.
Se centrifuga a 3000 rpm durante 30 minutos.
La altura de la columna de glbulos rojos se toma como valor hematocrito y se multiplica
por 100 para expresarlo en valor porcentual.

MICROMTODO: CAPILAR
Por capilaridad, llenar partes del capilar con la sangre del paciente.
El extremo seco del capilar se sella con la llama de un mechero.
El capilar se centrifuga en microcentrfuga durante 5 minutos a 10 000 rpm.
Se lee el valor del hematocrito en un Hematimetro.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (VSG)

MACROMETODO: TUBO WINTROBE

Con ayuda de la jeringa con cnula, se llena el tubo de Wi ntrobe (si n formar burbujas).
Se deja reposar en posicin vertical a temperatura ambiente durante 60 minutos.
El valor se expresa en mm/hr.

MICROMTODO: CAPILAR
Por capilaridad, llenar partes del capilar con la sangre del paciente.
Se coloca el capilar en posicin vertical sobre una base de plastili na y debe
permanecer as durante 60 minutos.
Se lee el valor del VSGpor medio de una regla de tres.

Reporta los datos obtenidos durante la sesin.
6 ANEXOS
1. Cul es la importancia de la determinacin de hematocrito, desde el punto de vista de
diagnstico clnico?
2. Indique otros mtodos para calcular el valor del hematocrito.
3. Que ventajas y desventajas tienen el microhematcrito con respecto al macrohematcri to?
4. Enumere tres padecimientos en los cuales se encuentra alterado el hematocrito.
5. A qu se deben los cambios en la sedimentacin de los glbulos rojos?
6. Mencione 5 padecimientos en los que se encuentra elevada la VSG.
7. Como se reali za la correccin de la VSG en padecimientos con anemia.

7 REFERENCIAS
http://www.jano.es/ficheros/sumarios/1/0/1622/55/1v0n1622a13093325pdf001.pdf
http://wiki.fisiologia.me/images/4/42/Practic6.pdf

CARRERA
PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTICO
BILOGO
PRCTICA
NMERO
5
RECUENTO DE ERITROCITOS Y DETERMINACIN
DE CONSTANTES HEMATOLGICAS.
2 horas
1 INTRODUCCIN
El eritrocito es un disco bicncavo de ms o menos 7 a 7.5 m de dimetro y de 80 a 100 fl de
volumen, estos constituyen cerca del 45% del volumen sanguneo. Sin embargo, en casos de
anemia o policitemia la cantidad de eritrocitos en sangre puede encontrarse disminuida o
aumentada que van a ser el reflejo de la funcin hematopoytica de la medula sea, por ellose
recurre a determinar el nmero total de eritrocitos que se encuentran en 1 mm3 de sangre, a lo
que se conoce como recuento de eritrocitos.
Adems, se hace importante la determi nacin de los ndices eritrocitarios, puesto que son de
extrema utilidad para clasificar a los eritrocitos de acuerdo con su tamao y contenido de
hemoglobina. Se usan la hemoglobina, el hematocrito y la cuenta de eritrocitos para calcular los
tres ndices:
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM), es una valoracin del peso promedio de
la hemoglobi na en eritrocitos i ndividuales expresado en pg.
VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM), i ndica el volumen promedio de los eritrocitos
individuales expresado en femtolitros.
CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR (CMHC), es la
concentracin promedio de hemoglobina expresada en un decilitro de eritrocitos g/dL.
Los ndices proporcionan al cientfico de laboratorio clnico un indicio sobre cmo deben verse los
eritrocitos en frotis de sangre teido. Como la morfologa anormal de los eritrocitos es
caracterstica de diferentes tipos de anemia, los ndices son de utilidad como clasificacin inicial
de los estados anmicos.
2 OBJETIVOS
Determinar el nmero de eritrocitos por mm3 y las constantes hematolgicas, parmetros
muy importantes, para el diagnstico de anemias.
3 FUNDAMENTO
Los principios generales de este recuento se basan en 2 puntos bsicos, los cuales consisten:
Primero escoger un lquido de dilucin, que no solamente diluya los eritrocitos hasta cifras
legibles, sino que tambin permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares
que en ese momento no nos i nteresen y,
Segundo utili zar equipos automatizados que nos proporcionen las lecturas del nmero de
eritrocitos por mm
3
.

Los diluyentes ms utilizados en el recuento de eritrocitos son el Lquido de Hayem, las
Soluciones de Gower, o bien simplemente solucin salina de cloruro de sodio al 0.85%

El recuento de glbulos en la sangre es una prctica poco habitual en el laboratorio clnico, en el
cual se determi na el nmero de eritrocitos por mm3 de sangre, con la ayuda de la cmara de
Neubauer o hemocitmetro. La cmara de Neubauer o hemocitmetro es un grueso portaobjetos
de vidrio, en el centro de su superficie se encuentra un cuadrado de 3 mm de lado di vidido en 9
cuadros grandes cada uno de 1 mm, donde el cuadro central est di vidido en 25 cuadros los
marcados con la letra E son utili zados para el recuento de eritrocitos.

4 PROCEDIMIENTO
Muestra de sangre venosa con EDTA
Recipiente RPBI para punzocortantes
Tubo Vacutainer con EDTA
Aguja y capuchn de sistema Vacutai ner
Cmara de Neubauer con cubrehematmetro
Solucin sali na .85%
Tubos de ensaye

Microscopio
1. Tomar la muestra por puncin venosa con sistema Vacutainer.
2. Con solucin sali na y la muestra del paciente preparar una dilucin 1:200
3. Se procede al llenado de la cmara de Neubauer cuidando que el lquido llene por
completo el espacio situado por debajo del cubrehematimetro sin que ninguna porcin se
haya deslizado al fosocentral y si n que se formen burbujas.
4. Se dejan sedimentar las clulas durante algunos mi nutos pero evitando que haya
evaporaciones hace la observacin microscpica en objetivo de bajo aumento para
demostrar una distribucin homognea de las clulas en la cuadricula.
5. Se hace el recuento de los eritrocitos en cinco de los 25 cuadros centrales que tiene a su
vez 16 cuadrados ms pequeos tomando en cuenta que o para evitar confusiones al
contar las clulas sobre las lneas superior e izquierda estas deben considerarse como si
estuvieran dentro de los cuadrados pero las lneas derecha e inferior del cuadrado no
deben contarse, de esta forma, se evitan contar dos veces a una misma clula.

RECUENTO DE ERITROCITOS
Si se contaron 5 cuadros de los 25:
num. GR / mm3 = num. GR x Factor de dilucin

CONSTANTES HEMATOLGICAS O DE WINTROBE:
VGM= EL VGM ES EL VOLUMEN MEDIO DE LOS ERITROCITOS INDIVIDUALES.

HEMATCRITO % X 10
VGM = ---------------------------------------
NUM. G.R/ mm3

HCM = EL HCM ES EL CONTENIDO DE HEMOGLOBINA EN UN ERITROCITO INDIVIDUAL.

HEMOGLOBINA ( g/dl) X 10
HCM = -------------------------------------------------
NUM. G.R /mm3

CMHC = LA CMHC ES LA CONCENTRACION MEDIA DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR
POR 100 ml DE ERITROCITOS CONCENTRADOS.

Hb (g/dl) X 100
CMHC = --------------------------
HTO (%)

6 ANEXOS
EJERCICIO:
INDIQUE 3 CASOS EN LOS QUE SE OBTENGAN VALORES DE VGM, CMHB, HbCM PARA
CLASIFICAR UNA ANEMIA:
a) microcticahipocrmica
b) normocticanormocrmica
c) normocticahipocrmica
d) macroctica

1.- Mencione la composicin qumica de los tres lquidos empleados en la cuanti ficacin de
glbulos rojos.
2.- Esquematice la cuadricula de la cmara de neubauer donde se reali za el recuento de
eritrocitos.
3.- Explique cmo se obtiene el factor de 10 000 de los glbulos rojos.
4.- Culsera el factor si reali za un recuento en a) los 25 cuadros, b) un cuadro?
5.- Cmo realiza el clculo de eritrocitos si realiza una dilucin de 400 en lugar de 200?
7 REFERENCIAS
http://artemio-parasitologiaartemio.blogspot.mx/2012/03/practica-no-3-hematologia. html# !/
2012/03/practica-no-3-hematologia.html

CARRERA

PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE
LA
ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTICO
BILOGO
PRCTICA
NMERO
5 RECUENTO DE RETICULOCITOS 2 horas
1 INTRODUCCIN
Los reticulocitos representan a los eritrocitos inmaduros en el estado fi nal de diferenciacin. Se
originan de los eritroblastos ortocromticos luego de la eyeccin del ncleo y maduran
gradualmente, parte en la mdula sea (3 das en promedio) y en la sangre perifrica (1 da). Hay
cambios morfolgicos y estructurales y el proceso de maduracin consiste en una reducci n
gradual en la cantidad de RNA ribosomal y protenas. El primer i ntento para clasificar a los
reticulocitos por madurez lo reali z Heilmeyer en 1932. Los dividi en 4 categoras de acuerdo al
contenido retculofilamentoso.

Ilustracin 1. Clasificacin de los reticulocitos de acuerdo con la edad. Las clulas del grupo I son
las menos maduras y las del grupo IV, las ms maduras
2 OBJETIVOS
Identificar reticulocitos por medio de tincin supravital para describir la funcin
eritropoyetica de la medula sea.
3 FUNDAMENTO
La cuantificacin de los reticulocitos presentes en la sangre perifrica proporciona un mtodo
para evaluar la actividad eritropoyetica de la medula sea, la cual se usa en el diagnsti co
diferencial de anemias y en la vigilancia de la respuesta eritropoyetica de un paciente en
tratamiento.
Con el uso de un colorante supravital (nuevo azul de metileno) se precipita el RNA ribosmico
residual dentro de los reticulocitos. Se prepara un frotis sanguneo con la mezcla de sangre
anticoagulada y colorante supravital que se exami na en el microscopio. Un eritrocito que contiene
dos o ms partculas de material teido de azul es un reticulocito. El nmero de reticulocitos se
expresa como porcentaje del nmero total de eritrocitos contados.

4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS
NECESARIOS
MATERIAL DE APOYO

Agujas y capuchn para sistema Vacutainer
Tubo vacutai ner con EDTA
Colorante nuevo azul de cresilo
Pipeta Pasteur
Portaobjetos

Microscopio
Incubadora
1. Tomar muestra por puncin venosa con sistema Vacutainer.
2. Poner 6 gotas del colorante para reticulocitos en un tubo de ensaye y aadir 6 gotas de
sangre del paciente y mezclar.
3. Incubar 15 mi nutos a 37 grados centgrados.
4. Hacer frotis.
5. Dejar secar el frotis observar a 100x x y contar el nmero de reticulocitos en 500 clulas.

OPCIONAL: Teir el frotis con el mtodo de Wright y contar el nmero de reticulocitos por cada
100 eritrocitos.


RETICULOCITOS (%) = RETICULOCITOS CONTADOS X 100
--------------------------------------------------
500

% DE RETICULOCITOS X NUM. G.R / mm3
RECUENTO RETICULOCITARIO ABSOLUTO= ---------------------------------------------------
100

% DE RETICULOCITOS X HTO DEL PACIENTE
RECUENTO DE RETICULOCITOS
CORREGIDOS = -------------------------------------------------------------------
HTO. NORMAL (45 %)

RECUENTO DE RETICULOCITOS CORREGIDOS
NDICE DE PRODUCCIN
RETICULOCITARIA= --------------------------------------------------------------------
TIEMPO DE MADURACIN( 2 DAS )

6 ANEXOS
CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento de la tcnica de coloracin del nuevo azul de metileno para
reticulocitos.
2. Como se prepara el reactivo para coloracin de reticulocitos ( nuevo azul de metileno)
3. Mencione tres casos en los que se encuentre elevado el porcentaje de reticulocitos y tres
casos en los que se encuentre disminuido
4. Como se reali za la correccin del porcentaje de reticulocitos y como se calcula el nmero
total de reticulocitos
5. Indique otro reactivo para teir reticulocitos y su mtodo de preparacin.
6. Porque se utilizan estos colorantes, explicar.

7 REFERENCIAS
http://www.sah.org.ar/revista/numeros/vol17-n1-67-69-Sah1-5C.pdf

CARRERA
PLAN DE
ESTUDIOS
CLAVE DE
LA
ASIGNATURA
QUMICO
FARMACUTICO
BIOLOGO
PRCTICA
NMERO
NOMBRE DE LA PRCTICA DURACIN
7
FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS

1 INTRODUCCIN
En las anemias hemolticas existe una elevada tendencia a la destruccin de los glbulos rojos. La
clasificacin de estas anemias se basa en la localizacin del factor causante de la hemlisis que
puede ser:
1. Factores hereditarios o i ntracorpusculares.
2. Factores adquiridos o extracorpusculares.

Se ha estudiado el lmite de tonicidad de los eritrocitos, y se ha visto que la fragilidad osmtica
est aumentada en la esferocitosis hereditaria, en algunas ocasiones en la anemia hemoltica
autoi nmune, en la enfermedad hemoltica del recinnacido (por anti -A y con menos frecuencia con
anti Rh) y en la anemia hemoltica por envenenamiento qumico o por quemaduras graves. Se ha
observado mayor resistencia globular en soluciones hipotnicas en la talasemia, anemia de
eritrocitos falciformes(drepanocitosis) y en otros trastornos en los que aparecen eritrocitos de
escaso espesor( blanco de tiro o dianocitos)

2 OBJETIVOS

El alumno efectuar e i nterpretar la prueba de fragilidad osmtica de los eritrocitos frente a
las soluciones sali nas hipotnicas.
3 FUNDAMENTO
En este procedimiento se agrega sangre entera a soluciones crecientemente hipotnicas de
cloruro de sodio amortiguado y se incuban a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se
determina la cantidad de hemolisis en cada concentracin al medir de manera espectrofotomtrica
la absorbancia del lquido sobrenadante. Se prepara una grfica de fragilidad osmtica al registrar
el porcentaje de hemolisis de cada solucin respecto de su concentracin, y comparar los
resultados con un testigo normal. Los eritrocitos normales comienzan a hemoli zarse a una
concentracin aproximada de .50% de NaCl, y la hemolisis se completa a .30%.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS
NECESARIOS
MATERIAL DE APOYO
Agujas y capuchn para sistema Vacutainer
Tubo vacutai ner con EDTA
Solucin Stock: NaCl al 10%
Solucin de trabajo: NaCl al 1%
Tubos de ensaye
Gradilla
Agua destilada
Espectrofotmetro
1. Tomar muestra por puncin venosa con sistema vacutai ner.
2. Hacer la prueba de fragilidad osmtica de 30 minutos. Usando tubos de ensaye de la
siguiente manera:
3.
No. TUBO CONCENTRACION
% NaCl
SOLUCION
DE TRABAJO
AL 1%
AGUA
DESTILADA
SANGRE
DESFIBRINADA
1 0.09 4.50 0.50 0.05
2 0.85 4.25 1.00 0.05
3 0.80 4.00 1.50 0.05
4 0.75 3.75 1.75 0.05
5 0.70 3.50 2.00 0.05
6 0.65 3.25 2.25 0.05
7 0.60 3.00 2.50 0.05
8 0.55 2.75 2.75 0.05
9 0.50 2.50 3.00 0.05
10 0.45 2.25 3.25 0.05
11 0.40 2.00 3.50 0.05
12 0.35 1.75 3.75 0.05
13 0.30 1.50 4.00 0.05
14 0.20 1.00 4.25 0.05
15 0.10 0.50 4.50 0.05
16 0.00 0.00 5.00 0.05

4. Mezclar bien las soluciones antes de agregar la sangre y al agregar esta, mezclarlo por
inversin usando papel parafilm.
5. Incubar 30 mi nutos a temperatura ambiente.
6. Centrifugar 5 mi nutos a 2000 r.p.m.
7. Leer el sobrenadante en el espectrofotmetro a 540 m.
8. Determinar el porcentaje de hemlisis en cada celdilla aplicando la formula:

%hemlisis= _D.O TUBOS 1-15 X 100

D.O TUBO 16

9. Graficar en papel milimtrico (abscisas- concentracin de NaCl) ordenada % de hemlisis).

I
NFORME DE RESULTADOS 30 mi n
Fragilidad osmtica: Paciente ------------------------% NaCl
Dada en 50% Hemlisis normal ----------------- ------% NaCl


6 ANEXOS

1. Qu sucede con los eritrocitos cuando se exponen a soluciones hipotnicas de NaCl?
2. Qu i ndica la fragilidad aumentada?
3. Indique 5 casos en los cuales se encuentra aumentada la fragilidad osmtica.
4. indique 5 casos en los cuales se encuentra disminuida la fragi lidad osmtica.
7 REFERENCIAS

Carrillo Farga,J. El atlas de hematologa. Caber Cell. Mxico. 1995.
Hillman, R. S et al. Manual de hematologa. 2 Edicin. Editorial Manual Moderno. Mxico.
1998.
McDonald, G.A. Atlas de hematologa. 5 Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Espaa.
1998.

Manual de Serie Roja 2014-2015 PDF

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