El diseo de reactores biolgicos o biorreactores es una tarea bastante compleja.
Los microorganismos o clulas son capaces de realizar su funcin deseada con gran eficiencia bajo condiciones propicias. Las condiciones ambientales de un reactor biolgico tales como flujo de gases (por ejemplo, oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono, etc.), temperatura, pH, oxgeno disuelto y velocidad de agitacin o circulacin, deben ser cuidadosamente monitoreadas y controladas. La mayora de los fabricantes de reactores biolgicos usan recipientes, sensores, controladores y un sistema de control interconectados para su funcionamiento en el sistema de biorreaccin. La misma propagacin celular puede afectar la esterilidad y eficiencia del reactor biolgico, especialmente en los intercambiadores de calor. Para evitar esto, el reactor biolgico debe ser fcilmente limpiable y con acabados lo ms sanitario posible. Se requiere de un intercambiador de calor para mantener el bioproceso a temperatura constante. La fermentacin biolgica es una fuente importante de calor, por lo que en la mayor parte de los casos, los reactores biolgicos requieren de agua de enfriamiento. Pueden ser refrigerados con una chaqueta externa o, para recipientes sumamente grandes, con serpentines internos. En los reactores biolgicos utilizados para crecer clulas o tejidos, el diseo es significativamente distinto al de los reactores biolgicos industriales. Muchas clulas y tejidos, requieren una superficie u otro soporte estructural para poder crecer y los ambientes agitados son comnmente dainos para estos tipos de clulas y tejidos. Los organismos superiores tambin requieren medios de cultivo ms complejos. El biorreactor es la parte principal de cualquier proceso bioqumico en el que se empleansistemas microbianos fngales o sistemas celulares mamferos o plantas para la manufactura econmica de una amplia variedad de productos biolgicos tiles. La funcin principal de un biorreactor diseado apropiadamente es la de proveer un medio controlado para alcanzar el crecimiento y la formacin de productos ptimos, o cualquiera de ambos. El sistema celular particular empleado. A menudo, el trmino "fermentado" se usa enpublicaciones para referirse al "biorreactor". El funcionamiento de cualquier biorreactor depende de muchas funciones incluyendo: la concentracin de biomasa, la cual debe permanecer alta; el mantenimiento de las condiciones estriles; agitacin efectiva para que la distribucin de los substratos y microorganismos en el reactor sea uniforme; eliminacin de calor; creacin de las condiciones correctas de corte; las rapideces altas de corte pueden ser dainas para el organismo pero las rapideces de corte bajas tambin pueden ser indeseables debido a la floculacin o al crecimiento de biomasa inconvenientes sobre la pared del reactor y sobre el agitador. Hay tres grupos de biorreactores usados actualmente para la produccin industrial: v no agitados, sin aeracin (86%); v no agitados, con aeracin (11%); v agitados, con aeracin (13%). La sntesis de la mayora de nuevos productos requiere el crecimiento demicroorganismos en recipientes aereados con agitacin. Antes de hacer un repaso acerca de los biorractores es importante considerardetalle dos de los factores principales que afectan el diseo de un biorreactor.Transferencia de oxgeno y los efectos de corte.
Figura 1. Diseo de un biorreactor comn.
2.2. BASES MICROBIOLGICAS PARA EL DISEO DE UN BIORREACTOR. Las bases microbiolgicas que se deben de tomar en cuenta para disear un biorreactor son las siguientes: v Complejidad de la mezcla reaccionante. v Concentraciones relativamente bajas de sustrato y productos. v Restriccin de la fase acuosa. v Condiciones suaves de temperatura y PH. v Incremento de la masa microbiana junto a la transformacin bioqumica. v Capacidad de los microorganismos de sintetizar sus propios catalizadores. v Dificultad del mantenimiento de la transformacin bioqumica requerida.
Ejemplo de microorganismos usados en un biorreactor.
2.3. CLASIFICACIN DE LOS REACTORES BIOLGICOS. Hay tres maneras de clasificar los reactores biolgicos y son las siguientes. Clasificacin Operativa: Los reactores biologicos se clasifican primeramente de acuerdo al modo de operacin: discontinuo, semicontnuo y continuo. Esta es una clasificacin operativa y se aplica a cualquier reactor, sea qumico o biolgico. En los reactores biolgicos el modo de operacin define el sistema de cultivo que es el mismo y delimita la clasificacin procesal-productiva del bioproceso. Al operar un reactor biolgico en una determinada categora, automticamente queda determinado el modo de cultivo del sistema y se definen los parmetros y las caractersticas operativas y de diseo que intervienen en el proceso productivo del sistema. Clasificacin Biolgica:Los biorreactores se clasifican biolgicamente de acuerdo al metabolismo procesal del sistema de cultivo: anaerbico, facultativo, aerbico. Los bioprocesos de cultivo y las fermentaciones estn basados en el metabolismo celular del cultivo. El metabolismo define los parmetros y caractersticas operativas-biolgicas de diseo y de operacin del biorreactor. Estas caractersticas son las que intervienen en la parte biolgica del sistema y tienen que ver con el crecimiento, productividad y rendimiento del cultivo. Clasificacin Biolgica-Operativa:Al conjuntarse las primeras dos clasificaciones, se conjuntan tambin la funcin operativa y la biolgica para establecer entre ambas un propsito de utilizacin, el modo de cultivo y el bioproceso. Siendo el propsito de utilizacin, el destino de cultivo del biorreactor; para qu tipo de cultivo va a ser utilizado el biorreactor; el modo de cultivo es sinnimo de sistema de cultivo y el bioproceso es en s, todo el proceso.
Tipos de biorreactores.
Existen otros tipos de biorreactores que son muy especiales como lo son:
BIORREACTOR DE ELEVACION CON AIRE. La falta de un patrn de flujo bien definido en un reactor de tanque con agitacin fueconducido a la creacin de un reactor basado en el principio del lazo. La cantidad de aire necesario para la reaccin biolgica usualmente es suficiente para actuar como la nica fuente de movimiento del lquido. El aire de proceso se introduce en el fondo del tubo iscendente, en donde la flotacin de las burbujas ascendentes ejerce una fuerza de arrastre sobre el fluido circundante que gua el medio por el tubo. En la parte superior, la mayora de las burbujas se separan y solamente una pequea porcin es transportada hacia el tubo de descenso de manera que en esta regin hay slo un aporte mnimo de oxgeno y poco arrastre hacia arriba. Las ventajas principales de los biorreactores de elevacin con aire comparados con los biorreactores de tanque agitado son el corte escaso, requerimientos de energa relativamente bajos y construccin ms simples, ya que no se necesitan sellos aspticos alrededor de la flecha del agitador. Las desventajas principales. particularmente a gran escala, son los altos costos de capital, dificultad de esterilizacin y mayores costos de energa. Aunque los requerimientos de energa son menores, la comprensin de aire para el mezclado y la transportacin de la biomasa es menos consciente debido a que el motor del agitador usa energa elctrica. Siempre que el flujo debido a la conveccin exceda el retro mezclado. 54 caracterstica bsica del lazo. Sin embargo, tan pronto como no se cumpl miento bsico, el sistema debe considerarse como una columna de b retroalimentacin y no un sistema de lazo. Una colocacin diferente del tubo de descenso afecta el funcionamiento. El tubo de aspiracin interno concntrico otorga un mezclado adicional repetidos pasajes del medio durante la circulacin, el cual se divide en un cuando deja el tubo de aspiracin y se une otra vez cuando entra. En tabla algunos datos de mezclado para columnas de burbujeo y brazos lazos de aire de distintos tamaos. Puede verse que para tener una homogeneidad n necesario recorrer seis veces el reactor despus de la aplicacin de un pulso de kom En la construccin escala de sistemas de elevacin con aire el tiempo de ac aumenta slo ligeramente con el tamao debido a que la rapidez de circulado: se puede mantener casi constante. Esto a su vez se debe a que la diferencia de pe la fuerza impulsora causada por la retencin de gas aumenta con la altura,en poca friccin con la pared disminuye a medida que aumenta el dimetro. En funcionamiento metablico de un reactor de elevacin con aire no se detiene aumentar la escala. El biorreactor de elevacin con aire ha sido aumentado a escala exi dimensin comercial por ICI (Zannetti, 1984). En este proceso se usa substrato para producir protena unicelular, SCP, usando methylophilusmeik\ a una capacidad de produccin de 60 000 tpa. En Rumania se encuentra ojeaw instalacin comercial de SCP, que produce 60 000 tapa de Candidaparafmicz-naparafinas (Zannatti, 1984). En este proceso se emplean cuatro reactores de coknaa j bujas cada una con una volumen de 1 250 m 3 . BIORREACTORES FLUIDIFICADOS. En la ltima dcada se ha registrado un aumento significativo en el numere 3= de reactor de lecho fluidificado los cuales se han usado principalmente pzn,inmovilizadas sobre un material particular, (tabla 14.5). Si la densidad de partculas es mayor que la del agua, el bioneactor se puede disponer como en la figura 14.9 (Atkinson, 1974), en la cual se ajusta un lazo externo a un reactor comn. Esto tiene la ventaja de que se puede usar una densidad de partculas mayor y que la velocidad de flujo requerida para la fluidificacin se puede alcanzar independientemente del gasto del reactor. Las partculas con menor densidad que la del agua se pueden mantener en suspensin usando el flujo de aire de un reactor aerobio para reducir la densidad del fluido y, por tanto, la flotacin de las partculas, como se muestra en la figura 14.10 (Walker y Austin, 1981). Las principales ventajas de un sistema de bioneactor fluidificado son: 1) caractersticas superiores de transferencia de masa y calor; 2) mezclado adecuado entre las tres fases; 3) requerimientos de energa relativamente bajos; 4) bajas velocidades de corte lo cual hace al reactor de lecho fluidificado adecuado para clulas sensibles al corte tales como clulas de mamferos y de plantas.
SISTEMAS DE BIORREACTOR CON MICROPORTADOR. La mayora de las clulas de mamfero necesitan una superficie slida sobre la cual crezcan. La idea inicial de cultivar clulas de mamfero dependientes del anclaje sobre microportadores fue concebida por van Wezel (1967), quien empleo una resina de intercambio inico fragmentada como microportador. Este tipo de resina se us en lugar de las cuentas de vidrio debido a que su baja densidad permita velocidades de agitacin sienores para mantener las partculas en suspensin. El crecimiento de clulas sobre perlas zaicroportadoras depende directamente de la superficie disponible para el crecimiento, zasta el punto en que las partculas alcancen concentraciones suficientes para envenenar a s clulas y, por lo tanto, reducir su rendimiento. La Toxicidad del soporte puede causar sirgas fases de retardo, la muerte de las clulas en las primeras etapas de desarrollo y rendimientos celulares limitados. La creacin de nuevos soportes microportadores mejora la aplicabilidad y reducir los efectos txicos. BORREACTORES DE MEMBRANA (FIBRA HUECA Y MEMBRANA GIRATORIA) En sistemas de fibra hueca se han creado y probado para el crecimiento de clulas pretales y de mamferos y para la inmovilizacin de bacterias, levaduras y enzimas. Las fibras huecas se pueden hacer de acetato de celulosa con una matriz de pared uniforme, .polmeros acrlicos o fibras polisulfonadas con figuraciones de pared asimtricas. Estas crisis huecas tienen una superficie altamente porosa de casi 70 um de grosor, en la cual atracanlas clulas por enlaces y un lumen cilindrico de aproximadamente 200 prn. 2.4. TRANSFERENCIA DE OXGENO. La velocidad de transferencia de 0 2 desde el seno de la fase gaseosa hasta la fase lquida est determinada por la siguiente ecuacin: Ro = Kla (C*- C) donde KLa es el coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno; C la concentracin de 0 2 disuelto en el seno del lquido y C* la concentracin de O 2 disuelto en equilibrio con la presin parcial de oxgeno de la fase gaseosa. El KLa y por lo tanto el grado de transferencia de oxgeno desde el seno del lquido hasta las clulas o microorganismos en cultivo, dependen del diseo del biorreactor y de las condiciones de operacin del sistema de cultivo: caudal de aire, volumen del lquido, rgimen de agitacin, rea de transferencia y viscosidad del cultivo. En general, disminuyen el KLa: la viscosidad y el volumen del lquido y aumentan el KLa: el rea de transferencia, la agitacin y la presencia de dispositivos que aumenten una, la otra, o ambas. La ecuacin de balance de oxgeno en el estado estacionario es: d(VCO2) / dt = F (C C*) VrO2 + VNiO2 donde Ni es la velocidad de transferencia de un componente del gas (oxgeno) al lquido (medio). Dado que el oxgeno es el sustrato limitante de la velocidad de crecimiento, cuando el cultivo se encuentra en crecimiento, el flujo de entrada oxgeno (FiO2) ser mayor al flujo de salida de oxgeno (FfO2) debido al consumo de oxgeno disuelto en el lquido por parte de las clulas o microorganismos en crecimiento y/o divisin celular.
En este caso, la ecuacin de balance de oxgeno para clulas o microorganismos en crecimiento es: d(VCO2) = FiO2C FfO2C* VrO2 + VNiO2.
Entrada de aire (21% O 2 ). La forma ms fcil de obtener el oxigeno para el biorreactor es por medio del aire, ya que el aire esta compusto de 21% de oxigeno y adems es gratis. El sistema de aireacin externamente comprende las lneas de entrada Fi y salida de aire Ff e internamente debe optimizar la transferencia de gases nutrientes (aire) hacia el medio lquido. Un sistema de aireacin consta de cuatro partes mecnicas: fuente de aire; tubera y filtros de entrada; boquilla y difusor de aire; tubera y filtros de salida. Y tres partes de control: control de flujo aire; control de presin de aire; control de difusin de oxgeno disuelto. El sistema de difusin de oxigeno disuelto debe optimizar al mximo la transferencia de oxgeno disuelto al medio lquido. El sistema consta de dos partes mecnicas: boquilla y difusor de aire; una parte de medicin: sensor de oxgeno disuelto y una de control: controlador de oxgeno disuelto. adems de regular el flujo y la presin del aire en la lnea o tubera, se debe controlar el valor y la concentracin del oxgeno disuelto (OD) dentro del medio lquido; variable que puede medirse en dos formas: v Oxgeno Disuelto (OD): es la concentracin de oxgeno disuelto requerido para la reduccin qumica de un equivalente en iones sulfito (de sodio) a la cantidad de materia orgnica presente en el medio lquido que se debe oxidar. v Demanda Bioqumica Oxgeno (DBO): es la taza de oxidacin biolgica o demanda bioqumica de oxgeno disuelto requerida por el microorganismo o clula en cultivo para oxidar la materia orgnica presente en el medio lquido. La tasa especfica de consumo de oxgeno de un cultivo est determinada por la velocidad de transferencia de oxgeno (r02) y el KLa que la correlaciona; recordemos que: rO2 = Kla (C*- C). Se debe conocer la r02 para poder determinar el KLa; el valor de r02 se consigue en la literatura; la concentracin de oxgeno disuelto en el lquido (C) es equivalente al valor de OD, e instrumentalmente, se llama: razn de toma de oxigeno (OUR); el equivalente a C* (concentracin de oxgeno disuelto en el lquido en equilibrio con el gas) es la demanda bioqumica de oxgeno (DBO) que, instrumentalmente se llama: razn especfica de toma de oxigeno: SOUR (specificoxygenuptakerate). Ambas razones pueden medirse, regularse con un controlador OUR/SOUR. Una probeta o electrodo OD es un sensor que mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido. Similarmente, una probeta o electrodo BOD mide la concentracin de oxgeno disuelto en el medio lquido en equilibrio con el gas. En ambos casos, el material de su construccin debe ser acero inoxidable y su especificacin es por la longitud de inmersin (H) y dimetro (D) de la probeta.
MEDICION DE K LA.
El crecimiento de un organismo aerobio en el cultivo sumergido requiere oxigeno disuelto en el medio. El oxgeno debe ser aportado continuamente ya que es escasamente soluble en una solucin acuosa. La transferencia de oxgeno del gas hacia los microorganismos se lleva a cabo en varias etapas. Primeramente el oxigeno debe viajar a travs del gas hacia la interfase gas-lquido, despus a travs de la interfase, a travs del lquido y, finalmente, hacia el organismo. El proceso completo es impulsado por la diferencia entre la concentracin de oxgeno en el gas y en el organismo. Se ha encontrado que la rapidez de transferencia de oxgeno a bajas concentraciones es proporcional a la diferencia de concentraciones del mismo.Puesto que usualmente es imposible determinar las concentraciones locales en todas las partes de un biorreactor, se debe usar valores promedio de las concentraciones y delos coeficientes de transferencia de masa. Para conocer la rapidez total de transferenciade oxigeno en un recipiente, se tiene que determinar el rea superficial total disponiblepara la transferencia de oxgeno. Esta es una cantidad difcil de evaluar, de modo que se usa coeficiente global de transferencia de masa que incorpora el rea superficial de las burbujas.
2.5. AGITACIN EN LOS REACTORES BIOLGICOS. BIORREACTOR DE TANQUE CON AGITACIN El biorreactor ms importante para aplicacin industrial es el recipiente para mezclacomn que tiene la doble ventaja de bajo costo de capital y bajos costos de operacin. La siguiente figura es un esquema de dicho reactor. Los recipientes para experimentos de la tecnologia son diseados y fabricados con el propsito de resistir muchas condiciones a las cuales son sometidos para estudiarlas y tratar de manejarse de una manera adecuada a las necesidades de las industria y los procesos donde son emplados los biorreactores.
Entrada de gas. Biorreactor tpico de tanque con agitacin.
Es rotatorio de hasta de 201 de volumen se hacen de vidrio y para volmenes mayores su construccin es de acero inoxidable. La relacin altura a dimetro del recipiente puede variar entre 2:1 y 6:1 dependiendo en gran medida de la cantidad de calor que ser eliminado. El agitador puede ser accionado desde la parte superior o desde la parte inferior. Todos los tanques estn provistos con mamparas que evitan la formacin de un gran vrtice central y mejoran el mezclado. Usualmente se instalan cuatro mamparas con una anchura a dimetro del reactor de 1:10 a 1:12. Si la disipacin de calor es un problemacomo puede serlo en biorreactores mayores de 100 m 3 , se puede usar hasta 12 mamparas y se puede pasar refrigerantes a travs de stas.
AGITADORES.
Tanto las dispersiones de gas-lquido como las de partcula-lquido en recipientes agitados mecnicamente han sido bien estudiadas. Sin embargo, la suspensin de partculas slidas con dispersin simultnea de un gas en un lquido, ha recibido menos atencin. La finalidad de la agitacin en un biorreactor es: 1) dispersar el aire en la solucin de nutriente; 2) obtener una temperatura y una concentracin de nutriente en todo el recipiente; 3) suspender los microorganismos y nutrientes slidos; 4) dispersar cualesquiera de los lquidos inmicibles presentes. Hay tres tipos principales de agitadores que son usados en biorreactores, los cuales se nuestranmas adelante: 1) turbina; 2) impulsor; 3) MIG/INTERMIG. La turbina de Rushton es el ms comn de los tres tipos de agitador. Consta de varias paletas sujetas a un eje central. El dimetro de una turbina est normalmente entre el 30 y el 50% del dimetro del tanque y, por lo general, hay entre cuatro a seis paletas. Las turbinas con aspas planas dan un flujo radial, como se muestra en la figura 14.3, lo cual es bueno para dispersar el gas cuando es introducido justo por debajo del impulsor sobre el eje y es llevado hacia las aspas y se rompe en finas burbujas. Cuando estn presentes slidos, como en una fermentacin, se encuentra que es til un componente axial para mantener los slidos en suspensin, por lo que se usa una turbina de paletas con un ngulo de paleta de 45.
Algunos agitadores que podemos observar en los biorreactores:
El agitador propulsor usualmente tiene tres paletas y resuelve a velocidades relativamente altas, 60-300 Hz, para obtener una mezcla efectiva. El patrn de flujo generado, mostrado en la figura 14.3, se denomina flujo axial ya que la corriente fluye axialmente hacia abajo del eje central y hacia arriba sobre los lados del tanque. Los avances recientes en el diseo de agitadores han conducido a los agitadores MIG e INTERMIG, los cuales requieren 25% y 40%, menos potencia para conseguir el mismo grado de mezcla que un agitador de turbina.
CARACTERIZACION DE LA AGITACION
Cuando la mezcla es extremadamente compleja, las variables se renen en grupos adimensionales para obtener correlaciones que describan al sistema. El nmero de Reynolds se usa para caracterizar el flujo. El flujo turbulento se encuentra arriba de un nmero de Reynolds de 10 4 , en tanto que el flujo laminar ocurre abajo de 100, entre ambos hay una zona de transicin. Otro grupo usado para caracterizar la mezcla en un recipiente, el cual toma en cuenta efectos gravitacionales, es el nmero de Froude. 1) La presencia de slidos aumentar la viscosidad efectiva, lo cual debe conducir al aumento del tamao de las burbujas y a la reduccin del rea interfacial, a. 2) Las partculas pequeflas pueden colectar burbujas en su superficie reduciendo la coalescencia e incrementando el rea interfaciala, pero aumentado la resistencia y, por lo tanto, reduciendo k L . 3) Las partculas grandes pueden romper las burbujas incrementado coalescencia ya se reduce, pero k L aumentar. Este efecto depender de la susceptibilidad a hidratarse de los slidos. La evidencia experimental no es concluyente en cuanto a cul mecanismo es el que filtrla. Debe quedar establecido que la mayor parte del trabajo sobre agitacin con sidos se ha realizado en sistemas donde los slidos no son microorganismos y, por lo tanto, I distribucin de tamao y la concentracin de las partculas no cambian con el tiempo. Hay ventajas considerables al usar agitadores con paletas angulares para sistemas de res fases, en que se requiere menos potencia y se puede lograr mayor estabilidad. Tambin se reducir el corte mximo. Sin embargo, las interacciones con el tubo rociador son muy complejas que con las turbinas de disco y se necesita ms trabajo para determinar las baas ptimas. En la tabla 14.3 se muestra una comparacin entre la turbina estndar o agitadores de bombeo hacia arriba y hacia abajo. Puede verse que los agitadores de bombeo hacia arriba suspenden slidos a menor disipacin de energa a bajas tasas de aeracin.
Algunos biorreactoresutlizan los motores como agitador dependiendo de la sustancia que aplican al biorreactor.El rendimiento del par del motor para un recipiente de 10 litros es de 1.32W/Nm y la velocidad de agitacin est comprendida entre los 20 y 800 r.p.m. El acoplamiento del eje del motor es directo y el sellado es mediante un sello mecnico simple, adems el impulsor es de paletas y para el sistema de aireacin se utiliza un anillo de aspersin.
Motor de agitacin. En la siguiente figura se muestra el montaje de un motor
2.6. INOCULACIN DE REACTORES BIOLGICOS. En microbiologa se entiende por siembra la operacin que consiste en depositar un germen aspticamente en un medio de cultivo. Toda siembra debe adaptarse a los siguientes principios generales: 1- Practicarla en medios de cultivo favorable y previamente esterilizado. 2- Emplear instrumentos aspticos. 3- No contaminar ni destruir el inculo. 4- Depositarla aspticamente en los medios elegidos. 5-Esterilizar los instrumentos empleados antes y despus de cada operacin. El instrumento corrientemente empleado en las siembras es el asa que es un alambre de cromo-nquel, tiene un dimetro de 0,3 a 1 mm.De dimetro y est sujeto a un mango de vidrio o de metal. El hilo puede terminar recto (aguja), en anillo (asa) o aplastado (esptula). Los medios de cultivo, pueden ser slidos o lquidos, y estar contenidos en tubos, placas o frascos.La tcnica general de las siembras variar segn el estado fsico del material a sembrar y del medio de cultivo. Ejemplo de siembra en un medio de cultivo.
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