Manual de Prácticas Iamb PDF

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE INGENIERA AMBIENTAL I ITSM
ACADEMIA DE INGENIERA AMBIENTAL

1

SEP DGIST SNIT DITD

INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE LA MONTAA


2

NDICE

Introduccin al laboratorio y seleccin de la bitcora.. 4
Determinacin de pH. 15
Determinacin de slidos sedimentables... 20
Coliformes totales y fecales en agua de consumo humano. 24
Coliformes, coliformes totales y fecales en agua residual... 38
Determinacin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO
5
) 46
Determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno.. 58
Determinacin de Dureza. ... 63
Determinacin de Alcalinidad Total.. 67
Determinacin de Conductividad.. 72
Determinacin de Nitrgeno Total Kjeldahl.. 77
Determinacin de Nitritos en Aguas Naturales y Residuales.. 83


3

INTRODUCCIN

En la actualidad, los problemas ambientales han alcanzado tal magnitud que es necesario
abordarlos desde diferentes perspectivas, las ciencias ambientales se han convertido en
una prioridad para la mayora de las instituciones educativas de enseanza superior es el
caso del Instituto Tecnolgico Superior de la Montaa a travs de la academia de
Ingeniera Ambiental, se planteo la necesidad de que los estudiantes tengan un Manual de
Prcticas de Laboratorio de Ingeniera Ambiental I, para complementar los conocimientos
tericos con la prctica, facilitar la investigacin cientfica y obtener la formacin
multidisciplinaria que la vida actual exige.

Con la colaboracin de la Ingeniera Ambiental Graciela G. Jimnez Guinto y el Ingeniero
Qumico Irving Bayln Fuentes se elabor el presente manual; el cual es una recopilacin
de procedimientos prcticos para determinar la calidad del agua. Se incluyen
determinaciones microbiolgicas y fisicoqumicas.

MISIN:

Contar con un manual de consulta que permita el desarrollo, individual y colectivo de
alumnos y cuerpos acadmicos.

OBJETIVOS

Los objetivos que se han planteado para que el laboratorio cumpla cabalmente con las
funciones para las que fue creado, son los siguientes:

Reforzar el conocimiento sobre los problemas ambientales en los aspectos de
suelo, agua y aire, a nivel de licenciatura, por medio de prcticas de laboratorio.

Impulsar la investigacin sobre los problemas ambientales en los aspectos de agua
suelo y aire, de tal forma que se promueva el equilibrio ambiental, a travs del
desarrollo sustentable, con el fin de lograr un futuro prominente para las siguientes
generaciones.

Brindar un servicio serio y profesional de anlisis de agua, suelo y aire a
dependencias oficiales, iniciativa privada y a la sociedad en general, con el
respaldo de profesionistas altamente calificados.


4

PRCTICA No 1
INTRODUCCIN AL LABORATORIO Y SELECCIN DEL LIBRO DE
BITCORA.

OBJETIVO.

Conocer los criterios para la seleccin del libro de bitcora, Realizar una investigacin
bibliogrfica. Conocer el diseo de protocolos y reportes. Conocer los principales marcos
legales sobre seguridad en el trabajo de laboratorio, contingencias, mitigacin y
remediacin. Conocer los criterios sobre primeros auxilios relacionados con el trabajo en
laboratorio.

INTRODUCCIN.

Una de las caractersticas de "el mtodo cientfico" (cualquiera que ste sea) es la
reproducibilidad o posibilidad de repeticin del trabajo realizado por un cientfico. De esta
manera, cualquier colega en el mundo est en la posibilidad de confirmar los hallazgos
anunciados y, finalmente, contribuir al incremento del conocimiento humano. Siguiendo los
pasos de "una receta" es posible elaborar siempre igual un mismo platillo u obtener un
compuesto qumico. En ambos casos, la cocina o el laboratorio qumico, la receta para
elaborar una "receta" reproducible es escribirla mientras se est desarrollando o
inventando. Las notas deben tomarse inmediatamente para no dejar nada a la
memoria (que puede fallar) en un cuaderno, libro o libreta seleccionada exclusivamente
para este fin. Esto es el libro de bitcora (o simplemente "bitcora") y, al igual que la
bitcora de a bordo de un navo, debe narrar todas las experiencias que permitan
reconstruir las acciones llevadas a cabo.

El libro de bitcora es el diario de trabajo donde se describen las acciones cotidianas de la
investigacin, y es totalmente personal. Se elabora simultneamente a la experiencia y
debe estar totalmente al alcance de los colegas y compaeros de trabajo para su lectura y
consulta. Adems, ya sea que se est trabajando en un laboratorio, en el campo o en la
biblioteca, siempre se debe tener a la mano el libro de bitcora personal.
Investigacin bibliogrfica.

La investigacin bibliogrfica es una compilacin de los hallazgos precedentes que sobre
el tema del trabajo o sobre temas afines y relacionados, se encuentran publicados en la
literatura y en otras fuentes de informacin. Los antecedentes son todos los datos
necesarios que describen la historia previa al trabajo y con los que se justifica su
realizacin y desarrollo. Los antecedentes se obtienen de la literatura y deben buscarse en
todas las fuentes disponibles al respecto, sean libros, artculos, entrevistas personales, e
incluso fuentes audiovisuales y cibernticas de informacin.

DISEO DE PROTOCOLOS Y REPORTES.


5

Aunque la forma y estilo de los textos cientficos pueden variar tanto como individuos se
dedican y han dedicado a esta actividad, su contenido se puede generalizar en cinco
grandes captulos, que son:

1. Introduccin.
2. Metodologa.
3. Resultados.
4. Discusin.
5. Conclusiones.

Ahora que todo esto va precedido por el Ttulo. El Ttulo de un trabajo cientfico, sea el
protocolo o el informe del mismo, debe representar breve y fielmente el tema principal, la
naturaleza, el resultado y las conclusiones principales obtenidas para o durante su
desarrollo.

La Introduccin a su vez est constituida por varios rubros, siendo los ms comunes los
antecedentes, la hiptesis y el objetivo. En ella se localizan las preguntas que justifican y
le dan importancia al problema que aborda la investigacin. Con base en los antecedentes
se sealan las razones que llevan a plantear el desarrollo del trabajo presente, y de este
modo justifica el objetivo y su realizacin.

En la Metodologa se deben describir en detalle escrupuloso los mtodos, los materiales,
los equipos, las substancias, las ecuaciones y las condiciones ambientales exactas y
precisas en las cuales se lleva a cabo la experiencia. Para ser detallado debe emplearse
incluso cualquier modo de registro e ilustracin disponible, sean tablas, dibujos,
diagramas, esquemas, fotografas y otras figuras tiles. En el libro de bitcora se
describen el material y el mtodo propuestos, que puede haberse consultado en la
literatura. Asimismo, se deben describir los cambios, modificaciones y adecuaciones que
se hagan al mismo durante el desarrollo de la experiencia. De este modo, en el informe o
reporte del trabajo se deber redactar nicamente el material y el mtodo finalmente
empleados para la obtencin de los resultados del estudio.

Finalmente, las anotaciones del trabajo de laboratorio se acompaan con comentarios que
sean tiles para la realizacin posterior de la Discusin de los resultados y las
Conclusiones finales del trabajo desarrollado.

Todas estas notas son indispensables para poder elaborar el Reporte de Laboratorio. Este
debe contener, a su vez, Introduccin (con el Objetivo), Materiales y Mtodos, Resultados
(acompaados con Tablas y/o Figuras), Discusin y Conclusiones.

CUADERNO DE NOTAS

El libro de bitcora es el diario de trabajo y debe llevarse consigo al lugar de labores. Por
lo tanto, es de suponer que se le dar un uso constante y, tal vez, agitado y rudo. En el
laboratorio se coloca sobre la mesa de trabajo, por lo que est expuesta a que se
derramen sobre ella reactivos puros o soluciones de ellos; si se trabaja con fuego, puede
llegar a quemarse. Si se est en el campo, se expone a otros riesgos para su integridad,
ms an si se encuentra trabajando en investigacin sobre sistemas acuticos o marinos
(y no siempre se cuenta con un buque oceanogrfico).


6

Es por los anteriores motivos que se requiere tener cuidado para seleccionar el mejor
cuaderno, libro o libreta que vaya a fungir el papel de libro de bitcora de trabajo. Y
precisamente un aspecto importante a considerar es el tipo de papel que se usar. La
regla bsica es un papel resistente al rasgado, poco poroso y absorbente,
preferentemente blanco (sin color), ya sea rayado, cuadriculado o liso. El rayado y el
cuadriculado pueden ser tiles para la organizacin de las notas o para la elaboracin de
tablas o grficas preliminares. Es recomendable realizar pruebas de las propiedades de
diferentes muestras de papel para elegir la ms apropiada. Se debe probar la resistencia
al rasgado manual y con la punta afilada de un lpiz duro, del nmero 3 o mayor o de la
serie H de dibujo. La porosidad y absorbencia se prueban mediante un plumn de punta
fina, uno de punta gruesa y con tinta fuente, aunque sta ya casi est fuera de uso; se
debe elegir el papel que muestre el menor corrimiento o dispersin de las tintas
ensayadas, pero cuya absorbencia permita la adherencia de la tinta.

Otras pruebas necesarias para escoger el papel son las de resistencia al agua y otros
solventes. Debe soportar el mojado sin romperse ni desbaratarse. Adems, si el papel es
rayado o cuadriculado, la tinta de stos no debe correrse al mojar el papel con diversos
solventes. A este respecto, es importante mencionar que no existe el papel ideal, ya que
las tintas de rayado y cuadriculado que no son solubles en agua suelen serlo en solventes
orgnicos, como el etanol. Por otro lado, aunque hay en el mercado papel resistente al
agua, ste suele ser soluble en solventes orgnicos. La conclusin es que se debe elegir
el papel que mejor resista todas las pruebas o que salga mejor librado de ellas.

Otro aspecto a considerar es la forma o tipo de cuaderno, libro o libreta en la que se
encuentra el papel elegido. Lo ms comn es emplear una libreta de pasta dura cosida
como las usadas para la contabilidad. El tamao suele ser totalmente al gusto del usuario;
pueden ser tamao carta, esquela, oficio u otro; de 200 o ms hojas; de forma francesa o
italiana. Por otra parte, hay quienes utilizan cuadernos de pasta blanda de argollas, espiral
o engrapado, pero el inconveniente es que las hojas se desprenden fcilmente y esto
puede ser de consecuencias negativas para el trabajo, ya que se est expuesto al extravo
de notas que pueden ser importantes. Adems, otra regla de oro de la bitcora es no
desprendas hojas; por el contrario, es muy frecuente que se aadan o adhieran hojas al
diario, que pueden ser grficas milimtricas u otras ilustraciones, como fotografas o
grficas impresas por los aparatos del laboratorio. No se debe olvidar que tambin es
importante someter a las mismas pruebas de resistencia a las pastas y a la bitcora
misma. A diferencia de las hojas, debe elegirse una bitcora de pastas no absorbentes, tal
vez plastificadas, que la protegern del mojado cuando est cerrada. Si se desea tener
una identificacin de primera mano sobre la pasta, puede colocarse una etiqueta con las
mismas caractersticas del papel. En suma, de las propiedades de la bitcora depende en
gran medida su durabilidad y vida til, an despus de haberse usado en su totalidad.

Un formato alterno de bitcora usado que facilita la organizacin de las notas y la adicin
de hojas al diario, es la carpeta de argollas, que tambin puede ser de la forma y tamao
preferido por el usuario, aunque tambin se pueden desprender las hojas como en los
cuadernos de pasta blanda; sin embargo, a diferencia de stos, en las carpetas se tiene la
posibilidad de reforzar las hojas con etiquetas ad hoc.

REGISTRO DE NOTAS


7

Al mismo tiempo que se elige el material para el libro de bitcora, debe seleccionarse el
instrumento para la escritura de las notas de trabajo.

Tradicionalmente, los cientficos, filsofos, ingenieros, etc., han elaborado sus notas con
tinta o con lpiz de carbn o grafito. La tinta ha sido preferida por los habituados al trabajo
en el laboratorio, mientras que el lpiz ha sido la eleccin de los naturalistas e ingenieros
en el campo. Ambos instrumentos cuentan con ventajas y problemas. Las tintas
tradicionales, como la de china, pueden ser disueltas por el agua; an las tintas modernas
insolubles en agua, resultan solubles en diversos solventes orgnicos. La mejor opcin
son los bolgrafos, aunque no se escapan de ser probados en el papel que se vaya a
escoger, sometiendo su tinta impresa, tanto al agua como a diversos solventes, como el
etanol.

El otro artefacto para la escritura es el lpiz de grafito. An aqu es indispensable elegir el
ms apropiado para usarse en el papel seleccionado. Si bien es obvio que el grafito no es
soluble en agua ni en solventes orgnicos, debe escogerse un lpiz que permita una
escritura clara, firme y duradera. Los lpices de dibujo son apropiados por su calidad, pero
si se escoge un lpiz muy suave, de la serie B, la escritura se borra con slo pasar el dedo
por encima. Por el contrario, si se toma un lpiz muy duro, el trazo es tan tenue y plido
que puede dificultarse la lectura, an cuando se escriba con puo muy firme; en este caso
es casi como si se escribiera con un clavo sobre el papel. La mejor recomendacin es el
lpiz de dibujo HB o el de escritura 2 2. Los lpices de mayor graduacin tambin
equivalen a clavos, mientras que los de menor, resultan tan suaves como los B de dibujo.
El lpiz ofrece otras ventajas sobre la tinta: es til para escribir bajo la tormenta ms
cerrada e incluso bajo el agua, adems de que es ms prctico para elaborar diagramas,
bocetos o dibujos que puedan requerirse.

Por cierto: cuando se est escribiendo con lpiz existe la tentacin de borrar lo que se
considere intil, inapropiado o equivocado. En cambio, cuando se escribe con tinta no
existe esta posibilidad; lo ms que se puede hacer es tachar lo escrito. De cualquier modo,
en el caso de una bitcora no importa con qu instrumento se est escribiendo. La
siguiente regla lo explica: jams se borra o se tacha completamente. Cuando se considere
necesario, slo se traza una lnea sobre el escrito deseado; uno nunca sabe si la idea
indeseada podr ser til o correcta en un momento posterior.

LA REDACCIN DE LAS NOTAS

Una vez seleccionados el libro de bitcora y el instrumento de escritura, se puede
comenzar a realizar el trabajo relacionado con el laboratorio o el campo: A escribir! Pero
cmo hacerlo?

En cualquier actividad cientfica o tcnica, el registro de las notas del trabajo sobre la
bitcora debe ser claro, exacto y preciso. Adems, a diferencia del estilo literario clsico
libre, es deseable que el lenguaje usado en la bitcora sea ahorrativo, cauto sin la mayor
complicacin que la necesaria. Aunque se debe evitar la metfora, suele ser necesario el
uso de la analoga o la homologa. Por otra parte, si bien debe ser ahorrativo no use
abreviaturas, sobre todo si son personales, ya que su significado suele olvidarse con el
tiempo. Algo ms que debe evitarse como a la peste negra, aunque no directamente
relacionado con el estilo, son las anotaciones en papeles u hojas sueltas. Estas suelen ser
perdedizas por muy diversos motivos. Hay incluso profesores que acostumbran confiscar
este tipo de material literario.

8

Siguiendo con el estilo, dado que el objetivo del libro de bitcora es registrar toda la
informacin relacionada con el trabajo para ser utilizada en la elaboracin y comunicacin
de los reportes tcnicos, debe buscarse ante todo la claridad. En este sentido, no debe
escatimarse en la repeticin de frases o palabras, cuidando siempre la brevedad y
precisin. Por otro lado, si se ve en la necesidad de acuar algn neologismo, defina
claramente el nuevo trmino para evitar ambigedad. Este es, en s mismo, otro fin de la
labor cientfica al descubrir nuevos hechos: la aportacin de nuevos conceptos o
paradigmas al cuerpo del conocimiento humano.

Una caracterstica comn de la redaccin tcnica y cientfica, que tambin la distingue de
otros estilos literarios, es la forma impersonal de expresin utilizada. Es muy poco comn,
salvo en los casos de narraciones de tipo histrico o autobiografas, que los cientficos
escriban en forma personal: descubr el principio de. . . En lugar de ello, suelen decir: se
descubri el principio de . . .

Otra propiedad de la redaccin de un escrito tcnico es el manejo de los tiempos. Si se
est proponiendo un procedimiento o protocolo de trabajo, se debe redactar en futuro.
Pero una vez que se est desarrollando dicho procedimiento y se estn observando los
resultados o es necesario realizar modificaciones al proyecto original, se debe expresar en
tiempo pasado, ya que se trata de lo que se hizo o se llev a cabo.

LA ORGANIZACIN DE LA BITCORA

Ya que se trata de una herramienta del trabajo cientfico o tcnico, al elaborar el libro de
bitcora se debe seguir la misma disciplina y rigor que requiere el mtodo cientfico en el
orden, organizacin y planeacin.

Lo primero a escribir en una bitcora de trabajo, son los datos de identificacin de la
misma. Ya sea en la cubierta o en la primera pgina, debe plasmarse claramente el
nombre del propietario de la bitcora, la disciplina, tema o materia para la que se ha
designado, as como la informacin sobre la adscripcin nombre del laboratorio o lugar
de trabajo, domicilio y telfono institucionales y/o particulares. Esto ltimo es fundamental
para evitar el riesgo de prdida o extravo.

Otra informacin que debe encontrarse en el libro de bitcora es la relacionada con la
seguridad para el trabajo de laboratorio o de campo. En primer lugar, e inmediatamente
despus de los datos de identificacin del titular, debe contarse con las instrucciones de
primeros auxilios pertinentes para los incidentes ms comunes. Por ejemplo, en el trabajo
qumico puede ocurrir el derrame de cidos o lcalis sobre la piel o sobre las mucosas;
puede haber quemaduras por fuego o calor; pueden ocurrir accidentes elctricos o
mecnicos punzocortantes. La persona involucrada puede inhalar vapores o gases
irritantes, txicos o venenosos, o sufrir de shock o de paros cardiaco y respiratorio. Por
otra parte, cuando sucede un evento inesperado es frecuente que se derramen reactivos
lquidos o slidos, o incluso haya escapes o emanaciones de gases o vapores, todos los
cuales deben ser detenidos, reducidos y eliminados oportuna y apropiadamente, por lo
que es indispensable tambin tener disponible las medidas ms comunes de contencin y
mitigacin de incidentes, qumicos en este caso. Ms abajo se podr encontrar mayor
informacin.


9

En el libro de bitcora, cada pgina que se usa debe ser numerada en secuencia,
iniciando con la primera del cuaderno. Una vez numerada, cada pgina inicia con la fecha.
Esto permite una rpida identificacin del contenido por parte del autor y usuario del libro
de bitcora. Ya que se ha numerado y fechado la pgina, se puede proceder a verter uno
de los contenidos ms relevantes del cuaderno de laboratorio: el protocolo de trabajo.
Aunque la forma y estilo de los textos cientficos pueden variar tanto como individuos se
dedican y han dedicado a esta actividad, su contenido se puede generalizar en cinco
grandes captulos, que son: la Introduccin, la Metodologa, los Resultados, la Discusin y
las Conclusiones. Ahora que todo esto va precedido por el Ttulo.

EL TTULO

El Ttulo de un trabajo cientfico, sea el protocolo o el informe del mismo, debe representar
breve y fielmente el tema principal, la naturaleza, el resultado y las conclusiones
principales obtenidas para o durante su desarrollo. Si bien se puede ser ingenioso para
enfatizar la claridad, debe evitarse el enfoque periodstico, sensacionalista y amarillista. El
ttulo "Los voraces cocodrilos" deber evitarse en bien de "Estudio de los hbitos
alimenticios del Crocodilus moreleti". La brevedad del ttulo no debe caer en tipo
periodstico de la pieza de rock mexicano "Matola y violola con una pistola", ni la extensin
excesiva deber parecerse al de la cancin de autores argentinos "La bella y graciosa
moza se fue a lavar la ropa, la moj en el arroyuelo y cantando la lav, la frot sobre una
piedra y la colg de un abedul".

LA INTRODUCCIN

El primer captulo en las anotaciones de un trabajo en el libro de bitcora y en el informe
del mismo es la Introduccin. La introduccin a su vez est constituida por varios rubros,
siendo los ms comunes los antecedentes, la hiptesis y el objetivo.
Los antecedentes son la parte donde se plasman los datos necesarios que describen la
historia previa al trabajo que se est desarrollando. En ella se localizan las preguntas que
justifican y le dan importancia al problema que aborda la investigacin. Normalmente
incluye una compilacin de los hallazgos precedentes que sobre el tema del trabajo o
sobre temas afines y relacionados, se encuentran publicados en la literatura y en otras
fuentes de informacin. Con base en dichos antecedentes se sealan las razones que
llevan a plantear el desarrollo del trabajo presente, y de este modo justifica su desenlace
con el fin adicional de motivar al lector.
Dado que la Introduccin consta de antecedentes citados de la literatura, deben relatarse
todas las fuentes consultadas al respecto, sean libros, artculos, entrevistas personales, e
incluso fuentes audiovisuales y cibernticas de informacin.
Es obvio que si se trata de un trabajo experimental, deben indicarse las hiptesis que se
intenta demostrar o refutar. A fin de cuentas ste ser el objetivo del trabajo, poner a
prueba la hiptesis sustentada en los antecedentes del campo.

LA METODOLOGA

Lo que caracteriza a cualquier trabajo cientfico o tecnolgico, y que lo distingue de otras
actividades humanas, es la posibilidad de repetir innumerables veces en el tiempo la

10

experiencia y obtener exactamente los mismos resultados. Por lo tanto, un captulo
indispensable en todo trabajo cientfico y tecnolgico es la metodologa.

En la Metodologa se debe describir en detalle escrupuloso los mtodos, los materiales, el
equipo, las substancias, las ecuaciones y las condiciones ambientales exactas y precisas
en las cuales se lleva a cabo la experiencia. Para ser detallado debe emplearse incluso
cualquier modo de ilustracin disponible, sean tablas, dibujos, diagramas, esquemas,
fotografas y otras figuras tiles. En la bitcora se describen el material y el mtodo
propuestos, que puede haberse consultado en la literatura. Asimismo, se deben describir
los cambios, modificaciones y adecuaciones que se hagan al mismo durante el desarrollo
de la experiencia. De este modo, en el informe o reporte del trabajo se deber redactar
nicamente el material y el mtodo finalmente empleados para la obtencin de los
resultados del estudio.

Es necesario que los materiales y equipos se anoten con la marca, modelo y nmero de
serie, ya que permitir reproducir o adecuar la metodologa en cualquier repeticin
posterior, aunque no se cuente con equipos idnticos a los previamente empleados. En
cuanto a los reactivos y otras sustancias, es necesario aclarar el nmero de muestras, la
concentracin de las soluciones, as como los pesos y medidas empleados, sin dejar de
mencionar las especificaciones y los grados de calidad utilizados.

Cuando son necesarios los clculos para la preparacin de las soluciones y los materiales
o para el desarrollo del trabajo, aquellos se anotan en una pgina aparte, debidamente
rotulada e identificada con el trabajo al que corresponde.

Finalmente, las anotaciones del trabajo de laboratorio se acompaan con Comentarios
que sean tiles para la realizacin posterior de la Discusin de los resultados y las
Conclusiones finales del trabajo desarrollado.

Todas estas notas son indispensables para poder elaborar el Reporte de Laboratorio. Este
debe contener, a su vez, Introduccin (con el Objetivo), Materiales y Mtodos, Resultados
(acompaados con Tablas y/o Figuras), Discusin y Conclusiones.

SEGURIDAD Y CONTINGENCIA.

Seguridad, en este caso se refiere fundamentalmente a la previsin, la precaucin y el
cuidado en el trabajo para reducir la probabilidad de incidentes no deseados. El concepto
de seguridad no excluye la existencia del peligro, pero s reduce el riesgo de daos a
niveles menores. Con un poco de cuidado, basado en informacin, se elimina casi por
completo la posibilidad de un accidente. En la prctica, la seguridad en el laboratorio
significa el empleo de cualquier instalacin, dispositivo o sistema que sirva para reducir el
riesgo de peligros o accidentes antes, durante y despus de la sesin de trabajo.

El cido sulfrico concentrado, por ejemplo, representa un riesgo en potencia. Cuando es
manejado por personas que cuentan con el entrenamiento adecuado y que, por lo tanto,
conocen sus propiedades peligrosas y toman las precauciones necesarias, el cido
sulfrico concentrado es "de uso seguro". Por el contrario, la carencia de capacitacin y
conciencia sobre la seguridad, el exceso de confianza, as como el no aplicar las medidas
precautorias requeridas, aumenta el riesgo hasta niveles inaceptables.


11

PRIMEROS AUXILIOS.

Debe contarse con las instrucciones de primeros auxilios pertinentes para los incidentes
ms comunes. Por ejemplo, en el trabajo qumico puede ocurrir el derrame de cidos o
lcalis sobre la piel o sobre las mucosas; puede haber quemaduras por fuego o calor;
pueden ocurrir accidentes elctricos o mecnicos punzo cortantes. La persona involucrada
puede inhalar vapores o gases irritantes, txicos o venenosos, o sufrir de shock o de paros
cardiaco y respiratorio.

Algo indispensable para toda persona que se encuentre desarrollando trabajos en
laboratorios, en campo, en planta piloto o planta de produccin es contar con una
identificacin personal en la que se debe indicar el tipo sanguneo, alergias y avisos sobre
padecimientos crnicos y/o uso de prtesis o aparatos biomdicos, como marcapasos,
lentes de contacto, etc. Sobre estos ltimos, se debe sealar que su uso est
contraindicado para trabajos qumicos o biolgicos.

MATERIAL CON QUE DEBE CONTAR TODO EL SEMESTRE.

Gogles o anteojos neutros de policarbonato o vidrio endurecido con proteccin
lateral
Bata larga (a la rodilla o pantorrilla) de algodn 100% y manga larga, con botones.
Se recomienda que sea blanca
Cinco frascos de vidrio de ~100 ml con tapa metlica (jugo Gerber)*
Cinta para encubrir (masking tape) de 1.27 cm de ancho
Cuaderno u hojas de papel
Detergente bajo en fosfatos
Encendedor para mechero o estufa y/o cerillos
Escobillones de varios tamaos
Fibra verde
Franela de algodn limpia
Guantes de neopreno para manejar cidos y solventes alifticos
Guantes de nitrilo para manejar solventes y derivados orgnicos
Lpiz o pluma o bolgrafo
Marcador indeleble, preferentemente negro
Rollo de papel higinico blanco o caja de pauelos desechables blancos
Toallas absorbentes de papel blanco

MATERIALES Y EQUIPOS.

2 Cristalizadores grandes
Esptula
4 Pipetas serolgicas de 5 ml
5 Vasos de precipitados de 100 ml

REACTIVOS Y SUSTANCIAS.

25 ml Acetona o quitaesmalte

12

25 ml cido actico o vinagre
25 ml Agua destilada o desmineralizada
100 g Bicarbonato de sodio
25 ml Etanol o alcohol etlico 96

RECOMENDACIONES:

Anteojos de policarbonato o monogogles
Guantes de nitrilo para solventes orgnicos
Ropa de algodn
Maneje cidos y solventes en campana para vapores
No respire los vapores
Bao de ojos disponible
Regadera de seguridad disponible
Extinguidor de polvo qumico o CO2 (Tipo ABC)
Lave abundantemente despus de usar los reactivos
Colquese ropa de algodn para proteccin (bata)
Revise que las llaves de gas estn cerradas
Revise que las llaves de agua estn cerradas
Revise que las llaves de aire comprimido estn cerradas
Revise que los contactos elctricos estn libres
Revise que los interruptores de luz del laboratorio estn encendidos
Revise que los extractores de aire estn encendidos

DESARROLLO DE LA PRCTICA

1 Revise que la campana de extraccin est encendida.
2 Revise que la acetona est en la campana.
3 Revise que el cido actico est en la campana.
4 Revise que el agua destilada est sobre la mesa.
5 Revise que el bicarbonato de sodio sobre la mesa.
6 Revise que el Etanol est en la campana.
7 Colquese los guantes de neopreno o nitrilo.
8 Lave el material con agua corriente y detergente.
9 Enjuague el material con agua destilada.
10 Seque el material con franela o con papel absorbente.
11 Seque los guantes de neopreno con franela o con papel absorbente.
12 Colquese anteojos de policarbonato o monoggles sin ventilacin.
13 Seleccin del libro de bitcora.
14 Etiquete cada vaso de precipitados con el nombre de un reactivo.
15 Vierta los reactivos en sendos vasos de precipitados.
16 Tome una hoja de papel del cuaderno.
17 Corte la hoja en seis trozos iguales.
18 Sobre cada trozo trace un garabato con lpiz, pluma y bolgrafo.
19 Coloque los trozos de papel separados sobre la mesa.
20 Con una pipeta vierta 1 ml de acetona sobre uno de los trozos de papel.
21 Con una pipeta vierta 1 ml de cido actico sobre unos trozos de papel.
22 Con una pipeta vierta 1 ml de agua sobre uno de los trozos de papel.
23 Con una pipeta vierta 1 ml de etanol sobre uno de los trozos de papel.

13

24 Observe lo que sucede con el garabato en cada trozo de papel y anote.

Neutralice lentamente los residuos cidos (ver Forma de desechar)
Deseche los residuos cidos (ver Forma de desechar)
Deseche los residuos orgnicos (ver Forma de desechar)

FORMA DE DESECHAR.
Neutralice los residuos cidos con bicarbonato de sodio.
Deseche.

LAVE Y ENJUAGUE EL MATERIAL

1 Seque el material con papel o con franela
2 Guarde y entregue el material y los equipos
3 Revise que no haya reactivos en la campana
4 Apague la campana de extraccin
5 Revise que no haya reactivos sobre la mesa
6 Revise que la mesa est limpia y seca
7 Revise que las llaves de gas estn cerradas
8 Revise que las llaves de agua estn cerradas
9 Revise que las llaves de aire comprimido estn cerradas
10 Revise que los contactos elctricos estn libres
11 Revise que los extractores de aire estn apagados
12 Revise que los interruptores elctricos del laboratorio estn apagados
13 Retrese el equipo de proteccin personal
14 Guarde el equipo de proteccin personal
15 Revise que la luz del laboratorio est apagada

CUESTIONARIO

1 Realice una investigacin sobre medidas de Seguridad qumica.
2 Realice una investigacin sobre medidas de Contingencias qumicas.
3 Realice una investigacin sobre Primeros auxilios en incidentes qumicos.
4 Realice una investigacin sobre Leyes, reglamentos y normas qumicas.
5 Incluya la informacin ms importante en su nuevo libro de bitcora.
6 Elabore un reporte con los hallazgos de su investigacin experimental:
Introduccin (antecedentes, hiptesis y objetivo experimental).
Metodologa (materiales y mtodos).
Resultados (descripcin, tablas y/o figuras).
Discusin (anlisis y explicacin de los resultados).
Conclusiones (confirmacin o rechazo de la hiptesis).
Referencias (bibliografa consultada y utilizada).


14

BIBLIOGRAFA

Cole-Parmer 97-98. Cole-Parmer Instrument Company, Vernon Hills, IL. 1996.
Hackett, W.J. y Robbins, G.P. 1982. Manual Tcnico de Seguridad.
Representaciones y Servicios de Ingeniera, S.A., Mxico.
The Merk Catalogue. Merk KgaA, Darmstadt, BRD. 1996.
The Merk Index. 12th ed. Merk KgaA, Darmstadt, BRD. 1996.


15

PRCTICA No 2
DETERMINACIN DE Ph (ACIDEZ)

INTRODUCCIN

El principio bsico de la medida electromtrica del pH se fundamenta en el registro
potenciomtrico de la actividad de los iones hidrgeno por el uso de un electrodo de vidrio
y un electrodo de referencia, o un electrodo combinado.

La fuerza electromotriz (fem) producida por el sistema electroqumico vara linealmente
con el pH y puede verificarse por la obtencin de una grfica de pH vs. fem para diferentes
soluciones de pH conocido. El pH de la muestra se determina por interpolacin.

El mtodo es aplicable a aguas potables, superficiales, y salinas, aguas residuales
domsticas e industriales y lluvia cida.

LIMITACIONES E INTERFERENCIAS

El electrodo de vidrio est libre de interferencias debidas a color, turbidez, material
coloidal, oxidantes, reductores o alta salinidad, excepto para interferencias del ion sodio en
soluciones de pH mayor de 10; este error se reduce con la utilizacin de electrodos
especiales ("error bajo de sodio, low sodium error").

Las capas de materiales aceitosos presentes en algunos tipos de aguas pueden disminuir
la respuesta del electrodo. Se limpian suavemente con un pao o mediante lavado con
detergente y enjuague con agua destilada. Puede ser necesario un tratamiento adicional
con HCl 1+9 para remover la pelcula remanente.

Las mediciones de pH varan con la temperatura en dos formas: por efectos mecnicos
causados por cambios en las propiedades de los electrodos y por efectos qumicos
producidos por alteracin de las constantes de equilibrio. En el primer caso, se incrementa
la pendiente de la ecuacin de Nernst con el aumento de temperatura y los electrodos
requieren de un mayor tiempo para lograr el equilibrio trmico.

Este efecto provoca cambios significativos en el pH. Debido a que los equilibrios qumicos
afectan el pH, los estndares para preparar las soluciones tampn tienen pH especfico a
la temperatura indicada.

Reportar siempre la temperatura a la cual se mide el pH. La mayora de los instrumentos
de medida del pH estn equipados con compensadores de temperatura que corrigen los
errores del primer tipo, pero la medicin slo puede mostrar el pH a la temperatura de la
medida.


16

TOMA Y PRESERVACIN DE MUESTRAS

Las muestras deben ser analizadas inmediatamente, preferiblemente en el campo
despus de obtener la muestra.

Las aguas de alta pureza y las aguas que no estn en equilibrio con la atmsfera, estn
sujetas a cambios cuando se exponen a la atmsfera, por lo cual los frascos de muestra
deben llenarse completamente y mantenerse sellados hasta el anlisis.

APARATOS

El instrumento de medida del pH est constituido por un potencimetro, un electrodo de
vidrio, un electrodo de referencia y un mecanismo compensador de temperatura; cuando
se sumergen los electrodos en la solucin problema se completa el circuito. Muchos
medidores de pH pueden realizar lecturas en escalas de pH o de milivoltios; algunos
tienen expansin de escala que permite hacer lecturas de 0,001 unidades de pH, pero la
mayora de instrumentos no son tan precisos. Para trabajos de rutina usar instrumentos
con exactitud y reproducibilidad de 0,1 unidades de pH en un rango de 0 a 14 y equipados
con un compensador de temperatura.

Electrodo de referencia, consiste en una semicelda que provee un potencial de electrodo
constante; los ms comnmente usados son electrodos de calomel y plata: cloruro de
plata. Seguir las recomendaciones del fabricante para el uso y cuidado del electrodo de
referencia. Llenar los electrodos no sellados con el electrolito correcto hasta el nivel debido
y asegurarse de que la unin est humedecida.

Electrodo de vidrio. El electrodo sensor es un bulbo de vidrio especial que contiene una
concentracin fija de HCl o una solucin tamponada de cloruro en contacto con un
electrodo de referencia interno. Los electrodos combinados incorporan los electrodos de
vidrio y de referencia en uno solo. Utilizar un electrodo especial de error bajo de sodio,
"low sodium error", que puede operar a altas temperaturas para mediciones de pH
mayores de 10, los electrodos estndar de vidrio producen valores bajos. Para medir pH
inferiores a 1 emplear una membrana lquida, los electrodos estndar de vidrio producen
valores altos.

Vasos. Usar preferiblemente vasos de polietileno o de tetrafluoroetileno (TFE, tefln).
Agitador. Usar un agitador magntico con barra agitadora recubierta de TFE o un agitador
mecnico con hlice recubierta en plstico.

REACTIVOS

Preparacin General. Calibrar el sistema de electrodos con soluciones tampn estndar
de pH conocido. Debido a que las soluciones tampn se pueden deteriorar como resultado
del crecimiento de mohos o por contaminacin, es necesario prepararlas frescas para
trabajos de precisin. Se pesan las cantidades de reactivos especificadas en la Tabla 1, se
disuelven en agua destilada, a 25C y se diluyen a 1000 mL. Esto es particularmente
importante para las soluciones tampones de borato y carbonato.


17

El agua destilada, hervida y fra debe tener una conductividad menor de 2 mhos/cm. A 50
mL agregar una gota de la solucin saturada de KCl para usar en el electrodo de
referencia. Si el pH de esta solucin de prueba est entre 6,0 y 7,0, se puede usar para
preparar las soluciones estndar.

Para preparar las soluciones estndar, consultar en el "Standard Methods" las condiciones
de temperatura, tiempo, precauciones de secado de los reactivos y los pH de las
soluciones tampn estndar a temperaturas diferentes de 25C. Por ejemplo, el KH2PO4
se debe secar a una temperatura entre 110C y 130C por 2 horas, el hidrato tetraoxalato
de potasio, no se debe calentar a ms de 60C, y las otras sales tampn especificadas no
se deben secar.

La regla general es seleccionar y preparar las soluciones tampn clasificadas como
estndares primarios, mostradas en la Tabla 1; reservar los estndares secundarios para
situaciones extremas encontradas en mediciones de las aguas residuales. Para uso
rutinario, almacenar las soluciones tampn y las muestras en botellas de polietileno.
Reemplazar las soluciones tampn cada cuatro semanas.

Solucin saturada de tartrato cido de potasio. Agitar vigorosamente un exceso (5 a 10 g)
de cristales finos de KHC4H4O6 con 100 a 300 mL de agua destilada, a 25C, en una
botella con tapn de vidrio. Separar por decantacin o filtracin la solucin clara del
material no disuelto. Preservar, para dos meses o ms, por adicin de un cristal de timol (8
mm de dimetro) por cada 200 mL de solucin preparada.

Solucin saturada de hidrxido de calcio. Calcinar CaCO3 bien lavado y de bajo grado
alcalino, en una cpsula de platino por ignicin durante 1 hora a 1000C. Enfriar e hidratar,
adicionando lentamente agua destilada mientras se agita, calentar a ebullicin, enfriar,
filtrar y recoger el Ca(OH)2 slido en un filtro de vidrio fritado de porosidad media. Secar a
110C, enfriar y pulverizar hasta obtener grnulos finos y uniformes. Agitar vigorosamente
un exceso de estos grnulos con agua destilada en una botella de polietileno tapada.
Despus de mezclar, alcanzar la temperatura de 25 C. Con la ayuda de un equipo de
filtracin al vaco, filtrar el sobrenadante a travs de un filtro de vidrio sinterizado de
porosidad media y usar el filtrado como la solucin tampn. Descartar la solucin tampn
cuando el CO2 atmosfrico cause la aparicin de turbidez.

Soluciones auxiliares: NaOH 0,1N; HCl 0,1N; HCl 5N (diluir cinco volmenes de HCl 6N en
un volumen de agua destilada), y solucin cida de fluoruro de potasio (disolver 2 g de KF
en 2 mL de H2SO4 concentrado y diluir a 100 mL con agua destilada).

Preparacin de soluciones estndar de pH estndar.

PROCEDIMIENTO


18

CALIBRACIN INSTRUMENTAL

En cada caso se deben seguir las instrucciones del fabricante para el manejo del pH metro
y para el almacenamiento y preparacin de los electrodos para su uso. Las soluciones
recomendadas para perodos cortos de almacenamiento de los electrodos varan con el
tipo de electrodo y el fabricante, pero generalmente tienen una conductividad mayor de
4000 mhos/cm. El agua del grifo es un mejor sustituto que el agua destilada, pero un
tampn de pH 4 es mejor para el electrodo de vidrio sencillo y una solucin saturada de
KCl es preferible para un electrodo de referencia de calomel y Ag/AgCl. Para un electrodo
combinado es preferible una solucin saturada de KCl. Mantener los electrodos hmedos
retornndolos a la solucin de almacenamiento mientras que el instrumento no est en
uso.

Antes de usarlos, retirar los electrodos de la solucin de almacenamiento, enjuagarlos y
secar con un papel suave, colocar en la solucin tampn inicial, y ajustar el punto
isopotencial. Seleccionar un segundo tampn que est en un rango de 2 unidades del pH
de la muestra y llevar el tampn y la muestra a la misma temperatura, la cual puede ser la
temperatura ambiente, una temperatura fija tal como 25C, o la temperatura de una
muestra fresca. Retirar los electrodos del primer tampn, enjuagarlos abundantemente con
agua destilada, secarlos y sumergirlos en el segundo tampn. Registrar la temperatura de
medicin y ajustar el indicador de temperatura en el pH-metro hasta que el equipo indique
el valor de pH del tampn a la temperatura de anlisis (esto es el ajuste de pendiente).

Utilizar el valor de pH de las tablas para el tampn usado a la temperatura del ensayo.
Retirar los electrodos del segundo tampn, enjuagarlos abundantemente con agua
destilada y secarlos. Sumergirlos en un tercer tampn por debajo de pH 10,
aproximadamente tres unidades de pH de diferencia con el segundo; la lectura estar
dentro de 0,1 unidades para el pH del tercer tampn. Si la respuesta del pH-metro muestra
una diferencia mayor de 0,1 unidades de pH con respecto al valor esperado, buscar
averas o fallas de los electrodos o el potencimetro.

El propsito de la estandarizacin es ajustar la respuesta del electrodo de vidrio al
instrumento. Cuando se hacen mediciones de pH slo ocasionalmente, se debe calibrar el
instrumento antes de cada medicin. Cuando se hacen mediciones frecuentes y el
instrumento es estable, la calibracin se puede hacer con menor frecuencia. Si los valores
de pH de las muestras varan ampliamente, se debe hacer una calibracin para cada
muestra con un tampn que tengo un pH dentro del intervalo de 1 a 2 unidades con
respecto a la muestra.

Tratamiento de la muestra. Establecer el equilibrio entre los electrodos y la muestra
agitndola para garantizar la homogeneizacin; agitar lentamente para minimizar la
incorporacin de dixido de carbono. Para muestras tamponadas o con alta fuerza inica,
acondicionar los electrodos despus de lavarlos dejndolos dentro de la muestra por un
minuto. Secar, sumergir en una porcin fresca de la misma muestra y leer el pH. Con
soluciones diluidas o dbilmente tamponadas, equilibrar los electrodos sumergindolos en
tres o cuatro porciones sucesivas de muestra. Tomar una muestra fresca para medir el pH.

PRECISIN


19

Con un cuidadoso uso del pH metro y con buenos electrodos, se puede lograr una
mediciones en agua y soluciones dbilmente tamponadas. Por esta razn, reportar los
valores de pH con aproximacin a 0,1 unidades de pH.

El anlisis electromtrico de una muestra sinttica de pH 7,3 realizado por 30 laboratorios


20

PRCTICA No 3
DETERMINACIN DE SLIDOS SEDIMENTABLES EN AGUAS
NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS

Las aguas naturales, residuales o residuales tratadas con altos contenidos de slidos
sedimentables no pueden ser utilizadas en forma directa por las industrias o las plantas
potabilizadoras. De ello se deriva el inters por determinar en forma cuantitativa este
parmetro.

OBJETIVO

Establecer el mtodo de prueba para la determinacin de slidos sedimentables en aguas
naturales, residuales y residuales tratadas.

PRINCIPIO

La materia sedimentable se define como la cantidad de slidos que en un tiempo
determinado se depositan en el fondo de un recipiente en condiciones estticas. El mtodo
propuesto es volumtrico.

MATERIALES

- Frasco de polietileno o vidrio con un mnimo de capacidad de 1 litro, con tapa;

- Cono de sedimentacin tipo Imhoff de vidrio o plstico;

- Bases para Conos Imhoff;

- Agitador largo de vidrio, y

- Reloj.

RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

Colectar un volumen de muestra homogneo y representativo superior a 1 L en un frasco
de polietileno o vidrio con tapa de boca ancha, teniendo siempre en cuenta que el material
en suspensin no debe adherirse a las paredes del recipiente.

No se recomienda la adicin de agentes preservadores. Transportar la muestra y
mantenerla a 4C hasta realizar el anlisis. Las muestras deben estar a temperatura
ambiente al momento del anlisis.


21

CONTROL DE CALIDAD

Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de control de
calidad (CC) formal.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los siguientes registros:
- Los nombres y ttulos de los analistas que ejecutaron los anlisis y el encargado de
control de calidad que verific los anlisis, y
- Las bitcoras manuscritas del analista y del equipo en los que se contengan los
siguientes datos:

a) Identificacin de la muestra
b) Fecha del anlisis
c) Procedimiento cronolgico utilizado
d) Cantidad de muestra utilizada
e) Nmero de muestras de control de calidad analizadas
f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin
g) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados
h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original reportada por los
equipos en disquetes o en otros respaldos de informacin.

De tal forma que permita a un evaluador externo reconstruir cada determinacin mediante
el seguimiento de la informacin desde la recepcin de la muestra hasta el resultado final.

Cada vez que se adquiera nuevo material volumtrico debe de realizarse la verificacin de
la calibracin de ste tomando una muestra representativa del lote adquirido.

PROCEDIMIENTO

Mezclar la muestra original a fin de asegurar una distribucin homognea de slidos
suspendidos a travs de todo el cuerpo del lquido.

Colocar la muestra bien mezclada en un cono Imhoff hasta la marca de 1 L. Dejar
sedimentar 45 min, una vez transcurrido este tiempo agitar suavemente los lados del cono
con un agitador o mediante rotacin, mantener en reposo 15 min ms y registrar el
volumen de slidos sedimentables del cono como mL/L. Si la materia sedimentable
contiene bolsas de lquido y/o burbujas de aire entre partculas gruesas, evaluar el
volumen de aquellas y restar del volumen de slidos sedimentados.

En caso de producirse una separacin de materiales sedimentables y flotables, no deben
valorarse estos ltimos como material sedimentable.

CLCULOS

Tomar directamente la lectura de slidos sedimentables del cono Imhoff.

Reportar la lectura obtenida en mL/L.


22

INTERFERENCIAS

Bolsas de lquido y/o burbujas de aire: Algunas veces pueden formarse bolsas de lquido
y/o burbujas de aire entre partculas gruesas. Tomar en cuenta el volumen de stas al
hacer la medicin.

SEGURIDAD

No ha sido determinada la carcinogenicidad de todos los reactivos con precisin. Por lo
que cada sustancia qumica debe tratarse como peligro potencial a la salud. La exposicin
a estas sustancias debe reducirse al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio
realice monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar
expuesto el analista y que dichos resultados se encuentren a su disposicin.

Cuando se trabaje en este mtodo, debe usarse todo el tiempo equipo de seguridad tal
como: guantes de ltex y bata de laboratorio.

Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un
archivo de las normas de seguridad respecto a la exposicin y manejo seguro de las
sustancias qumicas.

Debe tenerse un archivo de referencia de las hojas de informacin de seguridad el cual
debe estar disponible a todo el personal involucrado en estos anlisis.

MANEJO DE RESIDUOS

Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,
estatales y locales referente al manejo de residuos, particularmente las reglas de
identificacin, almacenamiento y disposicin de residuos peligrosos.

Cada laboratorio debe contemplar dentro de su Programa de Control de Calidad el destino
final de los residuos generados durante la determinacin.

Todas las muestras que cumplan con la Norma de descarga a alcantarillado pueden
descargarse en el mismo sistema.

BIBLIOGRAFA

NOM-001-ECOL-1996 Que establece los lmites mximos permisibles de contaminantes
en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el
Diario Oficial de la Federacin el 6 de enero de 1997.

NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario
Oficial de la Federacin el 14 de octubre de 1993

NMX-AA-003-1980 Aguas residuales.- Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el
Diario Oficial de la Federacin el 25 de marzo de 1980.

23

NMX-AA-014-1980 Cuerpos receptores.- Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en
el Diario Oficial de la Federacin el 5 de septiembre de 1980.

NMX-AA-089/1-1986 Proteccin al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario - Parte 1.
Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 15 de julio de
1986

NMX-AA-115-SCFI-2000 Anlisis de agua.- Criterios generales para el control de la
calidad de resultados analticos.

NMX-AA-116-SCFI-2000 Anlisis de agua - Gua de solicitud para la presentacin de
mtodos alternos.

Criterios Ecolgicos de Calidad del Agua publicados en el Diario Oficial de la Federacin el
13 de diciembre de 1989.

2540 Solids, American Public Health Association, Standard Methods for The
Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association, United States
of America, Washington, DC 20005, 19th Edition 1995. pp. 2-53 - 2-58.

Solids. Enviromental Protection Agency, Methods for Chemical Analysis of Water
and Wastes, Environmental Monitoring and Support Laboratory, Office of Research
and Development, Cincinnati, Ohio, 1986.


24

PRCTICA No 4
COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN AGUA DE CONSUMO
HUMANO

OBJETIVO

Investigar la presencia de bacterias del grupo Coliforme en agua de consumo humano
mediante la tcnica del Nmero Ms Probable (NMP), usando tubos de fermentacin
mltiple.
INTRODUCCIN

La potabilidad del agua es de gran importancia en cuanto a Salud Pblica, ya que sta
puede servir como vehculo de microorganismos patgenos, es decir, productores de
enfermedades llamadas comnmente "de origen hdrico" tales como Salmonelosis
(Tifoidea y Paratifoidea), Shigelosis, Clera, Hepatitis, etc. Estos microorganismos son
todos de origen entrico.

Se sabe que los microorganismos patgenos que llegan a los depsitos de agua,
proceden de las descargas intestinales de hombres y animales.

Adems, ciertas especies de bacterias, particularmente Escherichia coli, y varios
microorganismos similares, denominados coliformes, Estreptococos fecales (como
Streptococcus faecalis) y Clostridium perfringens, son habitantes normales del intestino
grueso de hombres y animales y en consecuencia siempre estn en las materias fecales.
As pues, la presencia de cualquiera de estas especies en el agua es evidencia de
contaminacin fecal y el camino est abierto a los patgenos ya que se encuentran en las
materias fecales.

La evaluacin rutinaria del agua en busca de microorganismos patgenos, como
Salmonella spp. y Shigella spp. puede ser difcil de realizar ya que el nmero de estas
bacterias es relativamente escaso, por lo que se tiene que recurrir a pruebas
bacteriolgicas del agua potable que demuestren la presencia de microorganismos
indicadores que siempre estn presentes en materia fecal, fcil de demostrar y que sirva
de gua para conocer el grado de contaminacin fecal.

Surge as el concepto de "Indicador de contaminacin fecal", el cual ser utilizado para la
valoracin de la potabilidad bacteriolgica de las aguas. De acuerdo con lo anterior, se ha
adoptado con carcter general, el "Grupo Coliforme" como indicador ms digno de
confianza.

La OMS incluye dentro del grupo coliforme todos los bacilos aerobios y anaerobios
facultativos Gram negativos, no esporulados, que producen cido y gas al fermentar la
lactosa, a 35 - 37 C. Las especies clsicas de este grupo son Escherichia coli y
Enterobacter aerogenes. El microorganismo indicador ms comnmente utilizado es

25

Escherichia coli, considerando la OMS preferible emplear la expresin "Coliforme fecal"
que comprende un nmero ligeramente mayor de variedades, todas ellas de claro origen
fecal e indicadores de contaminacin fecal reciente.

Para los efectos del anlisis sanitario del agua, se define el Coliforme fecal como un bacilo
aerobio o anaerobio facultativo, Gram negativo, no esporulado, que fermenta la lactosa
con produccin de cido y gas a 44 C (0.5 C) en menos de 24 horas. El mtodo se
basa en la inoculacin de alcuotas de la muestra sin diluir que pueden ser volmenes de
50, 10 y 1 mL, de 10, 1 y 0.1 mL, o diluida en caso necesario, en una serie de tubos por
triplicado o quintuplicado con un medio que contiene lactosa (caldo lactosado o caldo lauril
triptosa).

La valoracin del contenido microbiano de una muestra de agua por el mtodo del NMP
supone la utilizacin de tablas numricas que tienen en cuenta los volmenes de agua y
las cantidades de tubos sembrados en una ms series. Realmente consiste en tratar
estadsticamente el nmero de tubos de cada serie sembrada que resulten positivos
despus de su incubacin. En cuanto a la investigacin de patgenos en agua, no existe
un mtodo nico que permita aislar e identificar todos estos microorganismos. En general,
los mtodos con los que se obtienen mejores resultados comprenden una fase de
concentracin, seguida de tcnicas de enriquecimiento y aislamiento especficas para
cada microorganismo. El procedimiento para la recoleccin de las muestras de agua para
el anlisis bacteriolgico, depende del tipo de agua que se desee muestrear. Este se har
de acuerdo a la normatividad mexicana vigente. Las muestras para el anlisis
bacteriolgico, se deben tomar en frascos muestreadores que se hayan lavado con
extremo cuidado y esterilizado. En su interior aadir, previo a la esterilizacin, 0.1 mL de
solucin de Na
2
S
2
O
3
(tiosulfato de sodio) al 10%, por cada 120 mL de muestra con el
propsito de neutralizar la accin del cloro que pudiera contener la muestra, cubriendo
adems el tapn del frasco hasta el cuello con papel aluminio.

El anlisis bacteriolgico de la muestra debe practicarse inmediatamente despus de su
recoleccin. Es por ello que se recomienda que de no efectuarse as el anlisis, se inicie
dentro de las dos horas prximas a la recoleccin de la muestra y en ningn caso, este
lapso debe de exceder de 24 horas para agua potable y de 6 horas para otros tipos de
agua para que sea vlido el resultado del anlisis. Durante el perodo que transcurre del
muestreo al anlisis, se debe conservar la muestra a 4 C, con objeto de inhibir la
actividad bacteriana para no obtener resultados falsos o dudosos.

MATERIAL Y SUBSTANCIAS

Muestras de agua potable de diferente origen (Grifo, purificada y embotellada, tinaco,
cisterna u otro), de un volumen mnimo de 100 mL.
5 Tubos de 20 x 180 mm con campana Durham en su interior, conteniendo 20 mL de
caldo lactosado lauril triptosa estril de doble concentracin.
10 Tubos de 18 x 150 mm campana Durham en su interior, conteniendo 10 mL de
caldo lactosado estril de simple concentracin.
1 Pipeta de 10 mL graduada en dcimas, estril.
2 Pipetas de 1 mL graduadas en dcimas, estriles.
caldo Lactosa bilis verde brillante (LBVB) estril de concentracin sencilla.

26

caldo E.C. (Escherichia coli) estril de concentracin sencilla.
Mechero Bunsen.
Cerillos encendedor.
Asa bacteriolgica.
Gradillas para tubos de 18 x 150 y de 20 x 200.
Agitador de tubos Vortex.
Incubadora a 35 C.
Incubadora para C. Fecales a temperatura constante de 44 C (0.5 C).

TCNICAS
Descripcin de la metodologa de anlisis:

La tcnica del NMP comprende siempre una prueba presuntiva y otra confirmativa.

Esto es as porque una positividad en un tubo de la prueba presuntiva no indica
necesariamente la presencia del grupo bacteriano a determinar (Coliformes Totales,
Coliformes Fecales o Estreptococos Fecales), sino tan solo es una presuncin, que habr
de confirmarse posteriormente.

Sin embargo, una negatividad en la prueba presuntiva permite dictaminar la ausencia de
dicho grupo bacteriano en el agua examinada.

La denominada prueba presuntiva consiste en una metodologa de tipo general para
cualquier grupo de bacterias, mientras que la prueba confirmativa es especfica.

DESARROLLO (TCNICA PRUEBA PRESUNTIVA)

Todas las operaciones debern efectuarse en absolutas condiciones de asepsia.

1 Preparar tres series sucesivas de 5 tubos con caldo lactosado, una de doble
concentracin y las otras dos de concentracin sencilla.
2 Etiquetar las series con 10, 1 y 0.1 mL.
3 Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces antes de tomar el volumen
que se va a inocular, a efecto de homogeneizar.
4 Antes y despus de realizar las inoculaciones, la boca del frasco de la muestra
deber ser flameada con objeto de evitar contaminacin.
5 Inocular con una pipeta de 10 mL este volumen de muestra en la serie de tubos
con caldo de doble concentracin, con otra pipeta de 1 mL para 1 mL de muestra
en la segunda serie de tubos con concentracin sencilla. (Fig. 17.1)
6 Igualmente con la misma pipeta podr inocularse la tercera serie de tubos con 0.1
mL de muestra.
7 Normalmente, siempre que no se sospecha que el agua contenga elevada carga
bacteriana, solo se inoculan estas tres primeras series de tubos.
8 En caso contrario, ser necesario inocular otras series y por lo tanto, realizar
diluciones de la muestra original.
9 Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 C durante 24-48 horas.

27

10 Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura para observar si
hay tubos positivos, es decir, con produccin de cido, si el medio contiene un
indicador de pH, turbidez y produccin de gas en la campana Durham.
11 Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la produccin de gas sea
resultado de la fermentacin de la lactosa en cuyo caso se observar turbidez en el
medio de cultivo y no confundir con burbujas de aire.
12 Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas
Durham antes de proceder a la inoculacin y desechar aquellos que contengan
burbujas de aire de alguna manera eliminar stas y as poder utilizarlos.
13 De los tubos que en esta primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las
pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.
14 En caso de no apreciarse alguno o todos los cambios mencionados en el resto de
los tubos, continuarn en incubacin 24 horas ms.
15 Despus de 48 horas (2h) a partir de la inoculacin, se hace la lectura final.
16 Si pasadas estas 48 h tampoco se aprecia turbidez ni produccin de gas, los tubos
se toman como negativos.

TABLA 17.1: ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de resultados positivos y negativos
cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm3 en cada uno, 5 con porciones de 1 cm3 y 5 con porciones de 0.1 cm3.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS

Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando la
AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra analizada.

Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se anotarn
convenientemente y se proceder a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para
Coliformes Totales y Fecales.

28

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:

A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitndolos previamente para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo
caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB). (Fig. 17.2)

Incubar durante 48 3 h a 35 0.5 C.

Despus de la incubacin observar la presencia de turbidez y de gas.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS (COLIFORMES TOTALES)

Si se observa turbidez y produccin de gas:

La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para
posteriormente hacer el clculo del NMP.

Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe
turbidez:

Se consideran negativos, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del
NMP.

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES FECALES:

A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo E.C.
(Escherichia coli). (Fig. 17.3)


29

Incubar durante 24 horas a 44 C (0.5 C), observar presencia de turbidez y gas. (Fig.
17.4)

INTERPRETACIN DE RESULTADOS (COLIFORMES FECALES)




30

Si no se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez: Se reporta la
AUSENCIA DE COLIFORMES FECALES.

CLCULOS.

De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes Totales y
Fecales:

Establecer los cdigos correspondientes para calcular por referencia en la tabla estadstica
correspondiente (Tablas 17.1 - 17.4), el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL
de agua.

En caso de no encontrar en las tablas la combinacin de tubos adecuada, emplear para
los clculos la siguiente ecuacin:

ELABORACIN Y PRESENTACIN DE RESULTADOS.

Los resultados se elaboran de la siguiente manera:

Si nicamente se inoculan tres series de cinco tubos cada una con 10, 1 y 0.1 mL de
muestra, la lectura de los resultados nos permite tener dos cdigos de valores uno
para coliformes totales y otro para coliformes fecales los cuales ledos en la tabla del
NMP nos dar el valor de bacterias correspondientes en 100 mL de muestra, de
manera directa.

Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero.

A continuacin se establece el triplete de valores correspondiente a las tres series
anteriores a la del valor cero que podr ser leda en la tabla del NMP.

Para efectos de expresar el valor obtenido basndose en 100 mL de muestra habr de
dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra inoculada en cada tubo
de la serie central de cada triplete escogido.

Se tendr un triplete de valores para cada tipo de determinacin.

En general se tiene:


31

Los resultados obtenidos se expresarn de la siguiente manera:

NMP DE COLIFORMES TOTALES: / 100 mL
NMP DE COLIFORMES FECALES: / 100 mL

EJEMPLOS:

1) La lectura de los resultados obtenidos en el anlisis del agua de un grifo es la
siguiente:

Volumen de Denominacin de Tubos positivos Tubos positivos Tubos positivos en
muestra la serie de 5 en la prueba en la prueba la prueba
inoculada. tubos. presuntiva para confirmativa para confirmativa para
(mL) coliformes totales coliformes totales. coliformes fecales.
y fecales.
10
1
0.1
1 - CT.CF
2 - CT.CF
3 - CT.CF
5
3
2
4
2
1

2
1
0

Con estos datos consultando la tabla del NMP correspondiente tenemos:

Para coliformes totales los resultados obtenidos finalmente en la prueba confirmativa son:
4,2,1 que en la tabla nos indica un valor de 26 es decir el resultado ser:

NMP DE COLIFORMES TOTALES: 26/100 mL.

Para coliformes fecales el triplete de valores obtenido es: 2,1,0 y consultando la tabla del
NMP se tiene el valor de 7.

El resultado se expresar:

NMP DE COLIFORMES FECALES: 7/100 mL

2) La lectura de los resultados obtenidos en el anlisis de un agua de la que fue
necesario hacer diluciones, es la siguiente:

Volumen de Denominacin de Tubos positivos Tubos positivos Tubos positivos en
muestra la serie de 5 en la prueba en la prueba la prueba
inoculada. tubos. presuntiva para confirmativa para confirmativa para
(mL) coliformes totales coliformes totales. coliformes fecales.
y fecales.
0.1
0.01
0.001
3 - CT.CF
4 - CT.CF
5 - CT.CF
4
2
1
3
1
1

2
1
0

Para coliformes totales se establece el cdigo del triplete: 3,1,1 y consultando la tabla del
NMP se observa un valor de 14, por lo tanto se tiene:

14 / 0.01 = 14 x 100 = 1400.


32

NMP DE COLIFORMES TOTALES: 1400/100 mL
Para coliformes fecales con el mismo razonamiento se establece el cdigo: 2,1,0 que en
las tablas del NMP correspondientes se observa un valor de 7, por lo tanto se tiene:

7 / 0.01 = 7 x 100 = 700


NMP DE COLIFORMES FECALES: 700/100 mL

CONFIABILIDAD:

El procedimiento de fermentacin en tubos mltiples es el mtodo ms usado por su
facilidad y economa.

El resultado de esta prueba se expresa por "el nmero ms probable" (NMP), pero debe
entenderse que este mtodo no es exacto ya que slo nos da la probable densidad de
bacterias coliformes totales o fecales de una muestra determinada.

La confiabilidad est dada por los niveles superiores o inferiores del lmite de confianza al
95% establecidos en las tablas para cada NMP/100 mL, no obstante, es una indicacin
importante para evaluar la calidad sanitaria del agua.

CUESTIONARIO

1 Mostrar los clculos realizados para obtener el NMP de Coliformes Totales y
Fecales en el agua analizada.

2 Cules son las caractersticas que debe reunir un Microorganismo Indicador?

3 Por qu el nmero de Coliformes Totales es siempre mayor que el de Coliformes
Fecales?

4 De acuerdo a la normatividad mexicana vigente Cules son los lmites permisibles
en cuanto a Coliformes Totales y Coliformes Fecales en el agua para consumo
humano? Dar los nmeros de las Normas Oficiales Mexicanas correspondientes.

5 Por qu aun cuando los microorganismos patgenos se encuentran en poca
concentracin en un agua stos pueden causar enfermedad?


33

TABLAS DE INTERPRETACIN DE RESULTADOS.

TABLA 17.1: ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 5 tubos con porciones de 10 cm
3

en cada uno, 5 con porciones de 1 cm
3
y 5 con porciones de 0.1 cm
3
.

No. De tubos con reacciones ndice Lmite confiable de No. De tubos con reacciones ndice Lmite confiable de

positivas
.

del
NMP
por 100
cm
3
.
95%.

positivas.

del
NMP
por 100
cm
3
.
95%.
5 tubos 5 tubos 5 tubos Inferior Superior 5 tubos 5 tubos 5 tubos Inferior Superior
con 10 con 1 con 0.1

con 10 con 1 con 0.1

cm
3
. cm
3
. cm
3
.

cm
3
. cm
3
. cm
3
.

0 0 0 < 2

0 0 1 2 < 0.5 7 4 2 1 26 9 78
0 1 0 2 < 0.5 7 4 3 0 27 9 80
0 2 0 4 < 0.5 11 4 4 3 4 1 0 33 34 11 12 93 93

0 0 2 < 0.5 7

0 1 4 < 0.5 11 5 0 0 23 7 70

1 0 4 < 0.5 11 5 0 1 31 11 89

1 1 6 < 0.5 15 5 0 2 43 15 110

2 0 6 < 0.5 15 5 5 1 1 0 1 33 46 11 16 93 120
2 0 0 5 < 0.5 13 5 1 2 63 21 150
2 0 1 7 1 17

2 1 0 7 1 17 5 2 0 49 17 130
2 1 1 9 2 21 5 2 1 70 23 170
2 2 0 9 2 21 5 2 2 94 28 220
2 3 0 12 3 28 5 5 3 3 0 1 79 110 25 31 190 250
3 0 0 8 1 19 5 3 2 140 37 340
3 0 1 11 2 25

3 1 0 11 2 25 5 3 3 180 44 500
3 1 1 14 4 34 5 4 0 130 35 300
3 2 0 14 4 34 5 4 1 170 43 490
3 2 1 17 5 46 5 4 2 220 57 700
3 3 0 17 5 46 5 5 4 4 3 4 280 350 90 120 850 1000
4 0 0 13 3 31 5 5 0 240 68 750
4 0 1 17 5 46 5 5 1 350 120 1000
4 1 0 17 5 46 5 5 2 540 180 1400
4 1 1 21 7 63 5 5 3 920 300 3200
4 1 2 26 9 78 5 5 4 1600 640 5800
4 2 0 22 7 67 5 5 5 >2400

Tomado de NOM-AA-42-1987


34

TABLA 17.2: ndice del lmite confiable de 95% para varias combinaciones de
resultados positivos y negativos cuando se usan: 1 tubo con porciones de 50 cm
3
, 5
tubos con porciones de 10 cm
3
y 5 tubos con porciones de 10 cm
3
.
No. de tubos con ndice del Lmite confiable de No. de tubos con ndice del Lmite confiable de
reacciones positivas NMP por _ 95% reacciones positivas. NMP por 95%
1 tubo 5 tubos 5 tubos 100 cm
3
Inferior Superior 1 tubo 5 tubos 5 tubos 100 cm
3
Inferior Superior
con 50 con 10 con 1

con 50 con 10 con 1

cm
3
cm
3
cm
3

cm
3
cm
3
cm
3

0 0 0 < 1

0 0 1 1 < 0.5 4

2 1 7 1 17
0 0 2 2 < 0.5 6

2 2 10 3 23
0 1 0 1 < 0.5 4

2 3 12 3 28
0 1 1 2 < 0.5 6

3 0 8 2 19
0 1 2 3 < 0.5 8

3 1 11 3 26
0 2 0 2 < 0.5 6

3 2 14 4 34
0 2 1 3 < 0.5 8

3 3 18 5 53
0 2 2 4 < 0.5 11

3 4 21 6 66
0 3 0 3 < 0.5 8

4 0 13 4 31
0 3 1 5 < 0.5 13

4 1 17 5 47
0 4 0 5 < 0.5 13

4 2 22 7 69

0 0 1 < 0.5 4

4 3 28 9 85

0 1 3 < 0.5 8

4 4 35 12 100

0 2 4 < 0.5 11

4 5 43 15 120

0 3 6 < 0.5 15

5 0 24 8 75

1 0 3 < 0.5 8

5 1 35 12 100

1 1 5 < 0.5 13

5 2 54 18 140

1 2 7

1 17

5 3 92 27 220

1 3 9

2 21

5 4 160 39 450

2 0 5 < 0.5 13

5 5 240


TABLA 17.3 ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de
3
,
5 tubos con porciones de 10 cm
3
y 5 tubos con porciones de 1 cm
3
.


positivas
.

del
NMP
95%.

positivas.

del
NMP
95%.
5 tubos 5 tubos 5 tubos

Inferior Superior 5 tubos 5 tubos 5 tubos

Inferior Superior
con 50 con 10 con 1 por A n n con 50 con 10 con 1 por A n n
cm
3
. cm
3
. cm
3
.
100
cm
3
.

cm
3
. cm
3
. cm
3
.
100
cm
3
.

0 0 0 < 1

0 0 1

< 0.5 2 4 1 1 4 1 9
0 1 0

< 0.5 2 4 1 2 4 1 9
0 1 1

< 0.5 2 4 2 0 4 1 9
0 2 0

< 0.5 2 4 2 1 4 1 9
0 3 0

< 0.5 2 4 2 2 5 2 12

4 3 0 5 2 12

35

0 0

< 0.5 2

0 1

< 0.5 2 4 3 1 5 2 12

1 0

< 0.5 2 4 3 2 6 2 14

1 1

< 0.5 2 4 4 0 6 2 14

2 0

< 0.5 2 4 4 1 7 3 17

2 1 2 < 0.5 4 4 5 0 7 3 17

3 0 2 < 0.5 4 4 5 1 8 3 19
2 0 0 1 < 0.5 2 5 0 0 4 1 9
2 0 1 1 < 0.5 2 5 0 1 4 1 9
2 1 0 1 < 0.5 2 5 0 2 6 2 14
2 1 1 2 < 0.5 4 5 1 0 5 2 12
2 2 0 2 < 0.5 4 5 1 1 6 2 14
2 2 1 2 < 0.5 4

5 1 2 7 3 17
2 3 0 2 < 0.5 4 5 2 0 6 2 14
2 3 1 3 1 7 5 2 1 8 3 19
2 4 0 3 1 7 5 2 2 10 4 23

5 2 3 12 4 28
3 0 0 2 < 0.5 4

3 0 1 2 < 0.5 4 5 3 0 9 3 21
3 1 0 2 < 0.5 4 5 3 1 11 4 26
3 1 1 2 < 0.5 4 5 3 2 14 5 34
3 1 2 3 1 7 5 3 3 18 6 53
3 2 0 3 1 7 5 4 0 13 6 31
3 2 1 3 1 7 5 4 1 17 6 47
3 2 2 4 1 9 5 4 2 22 7 70
3 3 0 3 1 7 5 4 3 28 9 85
3 3 1 4 1 9 5 4 4 35 11 100
3 4 0 4 1 9 5 5 0 24 8 75
3 4 1 4 1 9

5 5 1 35 11 100
4 0 0 2 < 0.5 4 5 5 2 54 18 140
4 0 1 3 1 7 5 5 3 92 27 220
4 0 2 3 1 7 5 5 4 160 39 420
4 1 0 3 1 7 5 5 5 > 240


TABLA 17.4: ndice del NMP y lmite confiable de 95% para varias combinaciones de
3
,
3 con porciones de 1 cm
3
y 3 con porciones de 0.1 cm
3
.


positivas
.

del
NMP
95%.

positivas.

del
NMP
95%.
5 tubos 5 tubos 5 tubos

Inferior Superior 5 tubos 5 tubos 5 tubos

Inferior Superior
con 50 con 10 con 1 por A n n con 50 con 10 con 1 por A n n
cm
3
. cm
3
. cm
3
.
100
cm
3
.

cm
3
. cm
3
. cm
3
.
100
cm
3
.

0 0 0 < 3

0 0 0 < 3

0 0 1 3 < 0.5 9 0 0 1 3 < 0.5 9

36

0 1 0 3 < 0.5 13 0 1 0 3 < 0.5 13

0 0 4 < 0.5 20

0 0 4 < 0.5 20

0 1 7 1 21

0 1 7 1 21

1 0 7 1 23

1 0 7 1 23

1 1 11 3 36

1 1 11 3 36

2 0 11 3 36

2 0 11 3 36
2 0 0 9 1 36 2 0 0 9 1 36
2 0 1 14 3 37 2 0 1 14 3 37
2 1 0 15 3 44 2 1 0 15 3 44
2 1 1 20 7 89 2 1 1 20 7 89
2 2 0 21 4 47 2 2 0 21 4 47
2 2 1 28 10 150 2 2 1 28 10 150
3 0 0 23 4 120 3 0 0 23 4 120
3 0 1 39 7 130 3 0 1 39 7 130
3 0 2 64 15 380 3 0 2 64 15 380
3 1 0 43 7 210 3 1 0 43 7 210
3 1 1 75 14 230 3 1 1 75 14 230
3 1 2 120 30 380 3 1 2 120 30 380
3 2 0 93 15 380 3 2 0 93 15 380
3 2 1 150 30 440 3 2 1 150 30 440
3 2 2 210 35 470 3 2 2 210 35 470
3 3 0 240 36 1300 3 3 0 240 36 1300
3 3 1 460 71 2400 3 3 1 460 71 2400
3 3 2 1100 150 4800 3 3 2 1100 150 4800
3 3 3 > 2400

3 3 3 > 2400

0 0 0 < 3

0 0 0 < 3



37

PRCTICA No 5
DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN
AGUA RESIDUAL

OBJETIVO:

Determinar la presencia de coliformes totales y fecales en agua residual por el mtodo del
Nmero Ms Probable, utilizando la tcnica de tubos de fermentacin mltiple.

INTRODUCCIN

Debido a que las aguas residuales son de composicin variada provenientes de descargas
de usos municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrcolas, pecuarios,
domsticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier uso, as como la
mezcla de ellas, contienen diferentes tipos de microorganismos contaminantes y las
diferentes concentraciones, dependiendo de su fuente.

La variada poblacin de microorganismos en esta agua, proviene del suelo y de origen
intestinal, incluyen aerobios y anaerobios estrictos y facultativos as como tambin
numerosos virus como: Poliovirus y virus de la hepatitis. Igualmente pueden contener
formas parasitarias variables como quistes de Protozoarios y huevecillos de Helmintos
(Metazoarios).

Asimismo, existe en nuestro pas el grave problema de contaminacin de ros, lagos
acuferos y costas debido a que estos son utilizados como depsito de todos los desechos
generados por las actividades humanas. Estos microorganismos pueden sobrevivir al
tratamiento, por lo que su rehso p.ej., en riego agrcola, actividades recreativas:

Aguas de piscinas, baos de hidromasaje, aguas potables naturales, actividades
pisccolas y aguas marinas superficiales (playas), representan un riesgo potencial a la
salud pblica.

Por todo lo anterior, adems del estudio de las caractersticas fisicoqumicas del agua se
requiere de un estudio microbiolgico. Para este propsito se debern obtener muestras
representativas usando los procedimientos de toma de muestras establecidos en las
Normas Oficiales Mexicanas.

Para la determinacin del NMP de Coliformes Totales y Fecales en este tipo de aguas, es
necesario proceder a preparar diluciones decimales de la muestra, debido a que se espera
que la concentracin de coliformes sea superior en stas que en un agua potable.

El nmero de diluciones vara mucho, dependiendo del origen de la muestra a tratar. Por
lo dems, para su anlisis de procede en la misma forma que para una muestra de agua
potable.


38

MATERIAL Y SUBSTANCIAS

Muestra de agua de diferente naturaleza.
Mechero Bunsen.
Cerillos encendedor.
tubos de 18 x 150 mm conteniendo 9 mL de agua de dilucin estril.
Pipetas de 1 mL estriles.
tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo caldo lactosado estril
de concentracin sencilla.
15 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo Caldo Lactosa Bilis
Verde Brillante estril.
10 tubos de 18 x 150 mm con campana Durham, conteniendo caldo E.C. estril.
2 Cajas de Petri conteniendo Agar Endo estril.
5 Tubos de 18 x 150 mm conteniendo agar nutritivo inclinado estril.
Agitador de tubos Vortex.
Gradillas para tubos de 18 x 150 y de 13 x 100 mm.
Asa Bacteriolgica.
Incubadora a 35 C.
Incubadora a una temperatura constante de 44 C (0.5 C).

DESARROLLO (TCNICA PRUEBA PRESUNTIVA)

Todas las operaciones debern efectuarse en absolutas condiciones de asepsia.

1 Agitar vigorosamente la muestra por lo menos 20 veces para lograr una distribucin
uniforme de los microorganismos.

2 Dependiendo del origen de la muestra y el contenido bacteriano esperado, preparar
diluciones.

3 Para preparar las diluciones, con una pipeta estril tomar una alcuota de 1 mL de
la muestra original y llevarlo a uno de los tubos conteniendo 9 mL de agua de
dilucin estril, obteniendo de esta manera una dilucin de 10-1. (Fig. 18.1)

4 Agitar el tubo de la dilucin 10-1 y con otra pipeta estril tomar una alcuota de 1
mL y llevarlo a otro tubo con 9 mL de agua de dilucin estril para obtener una
dilucin de 10-2.

5 Proceder de la misma manera hasta obtener una dilucin de 10-3 o hasta donde
sea necesario.

6 Inocular aspticamente con 1 mL de muestra por quintuplicado, tubos de
fermentacin conteniendo caldo lactosado o caldo lauril triptosa, a partir de las
ltimas 3 diluciones y conservar todas las anteriores en refrigeracin por si se
requiere su utilizacin posterior.

7 Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 C durante 24-48 horas.


39

8 Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura para observar si
hay tubos positivos, es decir, con produccin de cido, si el medio contiene un
indicador de pH, turbidez y produccin de gas en el interior de la campana Durham.

9 Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la produccin de gas sea
resultado de la fermentacin de la lactosa, en cuyo caso se observar turbidez en
el medio de cultivo, y no confundir con burbujas de aire.

10 Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las campanas
Durham antes de proceder a la inoculacin y desechar aquellos tubos cuyas
campanas contengan burbujas de aire de alguna manera eliminar stas y as
poder utilizarlos.

11 De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden hacer las
pruebas confirmatorias para coliformes totales y coliformes fecales.

12 En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos, continuarn en
incubacin 24 horas ms.

13 Despus de 48 horas (2h) a partir de la inoculacin, se hace la lectura final.

14 Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni produccin de gas, los tubos se
toman como negativos.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

Si el total de tubos son NEGATIVOS: El examen se da por terminado, reportando la
AUSENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES en la muestra analizada.

Todos aquellos tubos que den POSITIVOS para prueba presuntiva se anotarn
convenientemente y se proceder a realizar la PRUEBA CONFIRMATORIA para
Coliformes Totales y Fecales.

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:

1 A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba
presuntiva, agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos
conteniendo caldo Lactosa Bilis Verde Brillante (LBVB).

2 Incubar durante 48 3 h a 35 0.5 C.

3 Despus de la incubacin observar la presencia de turbidez y de gas.




40


Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se observe
turbidez:

Se consideran NEGATIVOS, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del
NMP

Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de
dilucin analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de
dilucin menores (mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de
muestra), respectivamente.

PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES FECALES:

1 A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en la prueba presuntiva,
agitndolos para homogeneizar, inocular con tres asadas tubos conteniendo caldo
E.C. (Escherichia coli).

2 Incubar durante 24 horas a 44.5 0.2 C. y despus de este perodo, observar
presencia de turbidez y gas.



La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos y
establecer el cdigo para posteriormente hacer el clculo del NMP, (Figs. 18.2 y 18.3)

Si no se observa produccin de gas, aun cuando se observe turbidez:
Se consideran negativos, establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del
NMP.

Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base en los grados de
dilucin analizados, considerar la necesidad de repetir el anlisis a partir de grados de
dilucin menores (mayores volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de
muestra), respectivamente.

CLCULOS

De acuerdo a los tubos positivos en las pruebas confirmativas para Coliformes Totales y
Fecales, establecer los cdigos correspondientes para calcular por referencia en las tablas
estadsticas (Tablas 17.1-17.4) el NMP de Coliformes Totales y Fecales en 100 mL de
agua.

En caso de no encontrar en las tablas la combinacin de tubos adecuada, emplear para
los clculos la siguiente ecuacin:

41

ELABORACIN Y PRESENTACIN DE RESULTADOS.

Los resultados se elaboran de la siguiente manera:

Si se han realizado diluciones, se ha de obtener una serie final con valor cero.

A continuacin se establece el triplete de valores correspondiente a las tres series
anteriores a la del valor cero que podr ser leda en la tabla del NMP.

Para efectos de expresar el valor obtenido basndose en 100 mL de muestra habr de
dividirse el resultado de la tabla por el volumen real de muestra inoculada en cada tubo
de la serie central de cada triplete escogido. Ver ejemplo (2) de la prctica anterior.

En general se tiene:

Los resultados obtenidos se expresarn de la siguiente manera:

NMP DE COLIFORMES TOTALES:_ / 100 mL
NMP DE COLIFORMES FECALES: / 100 mL

CUESTIONARIO

1 Cules son los lmites mximos permisibles de C. Fecales para las descargas de
aguas residuales vertidas a aguas y bienes nacionales as como a suelo?

2 Mencionar 5 enfermedades transmitidas por el agua, indicando el agente etiolgico
correspondiente.

3 Adems de representar un riesgo para la salud pblica el vertido de aguas
residuales tratadas inadecuadamente o sin tratar a los depsitos naturales, Qu
otros efectos indeseables puede representar?

4 Cules son los lmites mximos permisibles de Coliformes Fecales en aguas
residuales tratadas que se rehsan en servicios al pblico? Indicar la NOM.


42


43


44

PRCTICA No 6
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA DEMANDA
BIOQUMICA DE OXGENO EN AGUAS NATURALES,
RESIDUALES (DBO
5
) Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE
PRUEBA

OBJETIVO

Determinar los requerimientos relativos de oxgeno en aguas residuales, domsticas,
industriales, aguas superficiales y efluentes provenientes de plantas de tratamiento de
aguas.

INTRODUCCIN

La demanda bioqumica de oxgeno (DBO) es una prueba usada para la determinacin de
los requerimientos de oxgeno para la degradacin bioqumica de la materia orgnica en
las aguas municipales, industriales y en general residuales; su aplicacin permite calcular
los efectos de las descargas de los efluentes domsticos e industriales sobre la calidad de
las aguas de los cuerpos receptores. Los datos de la prueba de la DBO se utilizan en
ingeniera para disear las plantas de tratamiento de aguas residuales.

La prueba de la DBO es un procedimiento experimental, tipo bioensayo, que mide el
oxgeno requerido por los organismos en sus procesos metablicos al consumir la materia
orgnica presente en las aguas residuales o naturales. Las condiciones estndar del
ensayo incluyen incubacin en la oscuridad a 20C por un tiempo determinado,
generalmente cinco das. Las condiciones naturales de temperatura, poblacin biolgica,
movimiento del agua, luz solar y la concentracin de oxgeno no pueden ser reproducidas
en el laboratorio. Los resultados obtenidos deben tomar en cuenta los factores anteriores
para lograr una adecuada interpretacin.

Las muestras de agua residual o una dilucin conveniente de las mismas, se incuban por
cinco das a 20C en la oscuridad. La disminucin de la concentracin de oxgeno disuelto
(OD), medida por el mtodo Winkler o una modificacin del mismo, durante el periodo de
incubacin, produce una medida de la DBO.


Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO, entre ellos la relacin de la
materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables, los
flotables, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de
compuestos azufrados y las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe una forma de
corregir o ajustar los efectos de estos factores.


45

DBO carboncea contra nitrogencea. La oxidacin de las formas reducidas del nitrgeno
como amoniaco y nitrgeno orgnico, mediada por los microorganismos, ejercen una
demanda nitrogencea, que ha sido considerada como una interferencia en la prueba; sin
embargo, esta puede ser eliminada con la adicin de inhibidores qumicos. Cuando se
inhiba la demanda nitrogencea de oxgeno, reportar los resultados como demanda
bioqumica de oxgeno carboncea (DBOC5); cuando no se inhiba, reportar los resultados
como DBO5.

Requerimientos de dilucin. Si el agua de dilucin es de baja calidad, su DBO aparecer
como DBO de la muestra, efecto que ser amplificado por el factor de dilucin, y el
resultado tendr una desviacin positiva. El mtodo de anlisis debe incluir agua de
dilucin de verificacin y agua de dilucin como blanco para establecer su calidad,
mediante la medicin del consumo de oxgeno con una mezcla orgnica conocida,
generalmente glucosa y cido glutmico. La fuente del agua de dilucin puede ser:
destilada a partir del agua de grifo, o agua libre de sustancias orgnicas biodegradables o
bioinhibitorias tales como cloro o metales pesados. El agua destilada puede contener
amoniaco o compuestos orgnicos voltiles; el agua desionizada tambin puede estar
contaminada con compuestos orgnicos solubles lixiviados del lecho de la resina; el uso
de destiladores con conductos o accesorios de cobre en las lneas de agua destilada
pueden producir agua con cantidades excesivas de cobre, que acta como biocida.


Las muestras para determinacin de la DBO se deben analizar con prontitud; si no es
posible, refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de congelacin, ya que se
pueden degradar durante el almacenamiento, dando como resultado valores bajos. Sin
embargo, es necesario mantenerlas el mnimo tiempo posible en almacenamiento, incluso
si se llevan a bajas temperaturas. Antes del anlisis calentarlas a 20C.

Muestras simples. Si el anlisis se emprende en el intervalo de 2 h despus de la
recoleccin no es necesario refrigerarlas; de lo contrario, guardar la muestra a 4C o
menos; reportar junto con los resultados el tiempo y la temperatura de almacenamiento.
Bajo ningn concepto iniciar el anlisis despus de 24 h de haber tomado la muestra; las
muestras empleadas en la evaluacin de las tasas retributivas o en otros instrumentos
normativos, deben ser analizadas antes de que transcurran 6 h a partir del momento de la
toma.

Muestras compuestas. Mantener las muestras a 4C o menos durante el proceso de
composicin, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los mismos criterios que para las
muestras sencillas, contando el tiempo transcurrido desde el final del perodo de
composicin. Especificar el tiempo y las condiciones de almacenamiento como parte de
los resultados.

MATERIAL Y EQUIPO

Botellas de incubacin para la DBO, de 250 a 300 mL de capacidad. Lavarlas con
detergente, enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su uso. Para evitar la entrada
de aire en la botella de dilucin durante la incubacin, se debe utilizar un sello de agua,
que se puede lograr satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un bao de agua o

46

adicionando agua en el reborde cncavo de la boca de las botellas especiales para la
DBO. Colocar una copa de papel o plstica o un capuchn metlico sobre la boca de la
botella para reducir la evaporacin del sello de agua durante la incubacin.

Incubadora de aire o bao de agua,
cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso de produccin fotosinttica de OD.

Equipo de aireacin con difusor

Incubador: Controlado por termostato a 20C 1C. Eliminar toda la luz para evitar la
posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno disuelto.

Balanza analtica con precisin de 0,1 mg

Medidor de oxgeno disuelto

Todo el material usado en la determinacin debe ser exclusivo para este procedimiento.

Para el lavado del material remojar durante 1 h en una disolucin de cido sulfrico al 10
% y enjuagar con agua. Los detergentes con base de amoniaco no deben usarse para la
limpieza del material.

Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de detergente no inico,
libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse en cido toda la noche y volver a
enjuagarse con agua libre de metales.

Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe dejarse
remojando de 12 h a 24 h con HNO3 (1:1), HCl (1:1) o con agua regia (3 partes de HCl
concentrado + 1 parte de HNO3 concentrado) a 70 C solo en los casos que presente
material adherido, despus debe ser enjuagado con agua libre de metales.

En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o hexano.

Botellas Winkler de vidrio para incubacin con capacidad de 300 mL de aforo total y con
boca estrecha, reborde y tapn de vidrio esmerilado, de forma cnica.

Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plstico para botella Winkler

Bureta

REACTIVOS

Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo, a menos
que se indique otro grado.

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:

a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.;
b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 mx.
c) pH: 5,0 a 8,0.

47

1 Solucin tampn de fosfato: Disolver 8,5 g de KH
2
PO
4
, 21,75 g de K
2
HPO
4
, 33,4 g de
Na
2
HPO
4
.7H
2
O, y 1,7 g de NH
4
Cl en aproximadamente 500 mL de agua destilada y
diluir a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si se presenta alguna seal de
crecimiento biolgico, descartar este o cualquiera de los otros reactivos.

2 Solucin de sulfato de magnesio: Disolver 22,5 g de MgSO
4
.7H
2
O en agua destilada y
diluir a 1 L.

3 Solucin de cloruro de calcio: Disolver 27,5 g de CaCl
2
en agua destilada y diluir a 1L.

4 Solucin de cloruro frrico: Disolver 0,25g de FeCl3.6H
2
O en agua destilada, diluir a 1L

5 Soluciones cida y alcalina, 1 N, para neutralizacin de muestras custicas o cidas.

a) Acido. A un volumen apropiado de agua destilada agregar muy lentamente y
mientras se agita, 28 mL de cido sulfrico concentrado; diluir a 1 L.

b) Alcali. Disolver 40 g de hidrxido de sodio en agua destilada y diluir a 1 L.

6 Solucin de sulfito de sodio: Disolver 1,575 g de Na
2
SO
3
en 1000 mL de agua
destilada. Esta solucin no es estable y se debe preparar diariamente.

7 Inhibidor de nitrificacin: 2-cloro-6-(triclorometil) piridina.

8 Solucin de glucosa-cido glutmico: Secar a 103C por 1 h glucosa y cido glutmico
grado reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de cido glutmico en agua
destilada y diluir a 1 L. Preparar inmediatamente antes de su uso.

9 Solucin de cloruro de amonio: Disolver 1,15 g de NH4Cl en 500 mL de agua
destilada, ajustar el pH a 7,2 con solucin de NaOH, y diluir a 1 L. La solucin contiene
0,3 mg de N/mL.

PROCEDIMIENTO

El laboratorio debe mantener los siguientes registros:

control de calidad que verifica los anlisis.

siguientes datos:

a) Identificacin de la muestra;
b) Fecha del anlisis;
c) Procedimiento cronolgico utilizado;
d) Cantidad de muestra utilizada;
e) Nmero de muestras de control de calidad analizadas;

48

f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin;
g) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados, y
h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original reportada por los equipos
en disquetes o en otros respaldos de informacin.


PREPARACIN DEL AGUA DE DILUCIN
1

La prueba de DBO requiere la utilizacin de agua de muy alta calidad para las muestras
de dilucin. El agua no debe contener sustancias txicas, tales como pequeas cantidades
de cloro, cobre y mercurio ni sustancias orgnicas. Si existen sustancias orgnicas en el
agua de dilucin, se producir una demanda de oxgeno.

La manera ms prctica de producir agua con bajo contenido orgnico en una base
consistente es la destilacin de permanganato alcalino (permanganato de potasio y
pastillas de hidrxido de sodio). Se dispone de soluciones tampn comerciales que
producen automticamente agua destilada de alta calidad.

Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y aadir por cada litro de agua 1 mL
de cada una de las siguientes disoluciones: disolucin de sulfato de magnesio (ver lista de
reactivos), disolucin de cloruro de calcio (ver reactivos), disolucin de cloruro frrico (ver
lista de reactivos) y disolucin amortiguadora de fosfatos (ver reactivos). Preparar el agua
de dilucin diariamente.

Analizar y almacenar el agua de dilucin como se describe en los incisos 4.2, 4.2.1 y 4.3,
de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de usar el
agua de dilucin debe ponerse a una temperatura aproximada de 20C. Saturar con
oxgeno aireando con aire filtrado, libre de materia orgnica durante 1 h por lo menos.

Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo
contenido de materia orgnica, es necesario inocular la muestra.

Si se requiere, sembrar el agua de dilucin como se indica en el inciso 4.4.1.

4.2 Control del agua de dilucin

4.2.1 Utilizar este procedimiento como una comprobacin aproximada de la calidad del
agua de dilucin. Si la disminucin de oxgeno disuelto del agua excede de 0,2 mg/L,
obtener agua de mejor calidad mejorando la purificacin o usar agua de otra fuente.
Alternativamente si se requiere inhibir la nitrificacin, almacenar el agua de dilucin
sembrada en una habitacin oscura a temperatura ambiente hasta que la captacin de
oxgeno disuelto se haya reducido lo suficiente para cumplir los criterios de comprobacin
del agua de dilucin. No se recomienda su almacenamiento cuando la DBO5 se va a
determinar sin inhibir la nitrificacin ya que pueden desarrollarse microorganismos

1
Nota: La absorcin de OD en 5 das a 20C no debe exceder 0,2 mg/l.

49

nitrificantes durante ese tiempo. Si el agua de dilucin no ha sido almacenada para
mejorar su calidad, aadir suficiente inculo como para un consumo de OD de 0,05 mg/L a
0,1 mg/L en cinco das a 20C. Al Incubar en un frasco Winkler lleno de agua de dilucin
durante cinco das a 20C, el consumo no debe ser mayor a 0,2 mg/L y preferiblemente no
menor a 0,1 mg/L.

4.3 Control de la glucosa-cido glutmico.

Comprobar en cada lote analtico la calidad del agua de dilucin, la efectividad del inculo
y la tcnica analtica mediante determinaciones de la DBO5 en muestras estndar de
concentracin conocida. Utilizar la disolucin de glucosa-cido glutmico (ver reactivos)
como disolucin madre de control. La glucosa tiene una tasa excepcionalmente alta y
variable de oxidacin, pero cuando se utiliza con cido glutmico, dicha tasa se estabiliza
y es similar a la obtenida en muchas aguas residuales municipales. Alternativamente, si un
agua residual particular contiene un componente principal identificable que contribuya a la
DBO5, utilizar este compuesto en lugar de la glucosa-cido glutmico. Determinar la
DBO5 de una disolucin al 2 % de la disolucin de control patrn de glucosa-cido
glutmico utilizando las tcnicas expuestas en los incisos 4.4 a 4.10.

4.4 Inculo

4.4.1 Fuente de la siembra

4.4.1.1 Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaces de oxidar la
materia orgnica biodegradable de la muestra. El agua residual domstica, los efluentes
no clorados o sin desinfeccin, los efluentes de las plantas de tratamiento de desechos
biolgicos y las aguas superficiales que reciben las descargas de aguas residuales que
contienen poblaciones microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una
poblacin microbiana suficiente (por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados,
residuos desinfectados, residuos de alta temperatura o con valores de pH extremos).
Para tales residuos, sembrar el agua de dilucin aadiendo una poblacin de
microorganismos. La mejor siembra es la que proviene del efluente de un sistema de
tratamiento biolgico de aguas residuales. Cuando se usa como siembra el efluente de
tratamiento biolgico de sistema de aguas residuales se recomienda la inhibicin de la
nitrificacin. Cuando no se disponga de sta, utilizar el sobrenadante del agua residual
domstica despus de dejarlo reposar a temperatura ambiente durante al menos 1 h, pero
no ms de 36 h. Determinar si la poblacin existente es satisfactoria haciendo la prueba
de la siembra en una muestra para DBO5. El incremento del valor de la DBO5 indica una
siembra exitosa.

4.5 Control del inculo

Determinar la DBO5 del material de siembra como para cualquier otra muestra. Esto es
una siembra control. A partir de este valor y de uno conocido de la dilucin del material de
siembra (en el agua de dilucin) determinar el consumo de OD de la siembra. Lo ideal es
hacer disoluciones tales de la siembra que la mayor cantidad de los resultados presenten
una disminucin de al menos el 50 % del OD. La representacin de la disminucin del OD
(mg/L) con respecto a los mililitros de siembra, tiene que ser una lnea recta cuya
pendiente corresponde a la disminucin de OD por mililitro del inculo. La interseccin del
eje de las abscisas (OD) representa el consumo del oxgeno causado por el agua de
dilucin y debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver inciso 4.8). Para determinar el consumo de OD

50

de una muestra, se resta el consumo de OD de la siembra, del consumo de OD total. La
captacin de OD total del agua de dilucin sembrada debe oscilar entre 0,6 mg/L y 1,0
mg/L.

4.6 Pretratamiento de la muestra

4.6.1 Muestras con pH cidos o bsicos

4.6.1.1 Neutralizar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico o hidrxido de
sodio de concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la muestra en ms del 0,5
%. El pH del agua de dilucin sembrada no debe verse afectado por la dilucin de la
muestra.

4.6.2. Muestras que contienen cloro residual

4.6.2.1 Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual, tomndolas antes
del proceso de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay residuo detectable de
cloro, sembrar el agua de dilucin. Si hay cloro residual, eliminar el cloro de la muestra y
sembrar con inculo (ver inciso 4.4). No se deben analizar las muestras cloradas sin
sembrar el agua de dilucin. En algunas muestras, el cloro desaparece en el lapso de 1 h
a 2 h despus de su exposicin a la luz. Esto suele ocurrir durante el transporte o la
manipulacin de la muestra. Para las muestras en las que el residuo de cloro no se disipe
en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual aadiendo disolucin de
sulfito de sodio.

Determinar el volumen requerido de disolucin de sulfito de sodio cuantificando el cloro
residual total. Aadir a la muestra neutralizada el volumen relativo de la disolucin de
sulfito de sodio determinada por la prueba anterior, mezclar y despus de 4 min a 20 min,
comprobar el cloro residual de la muestra.

4.6.2.2 La determinacin de cloro residual se realiza de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMX-AA-100.

4.6.3 Muestras sobresaturadas con OD

4.6.3.1 En aguas fras o en aguas donde se produce la fotosntesis (aguas de embalses),
es posible encontrar muestras que contienen ms de 9,0 mg OD/L a 20C. Para evitar la
prdida de oxgeno durante la incubacin de tales muestras, reducir el OD por saturacin,
calentando la muestra aproximadamente a 20C en frascos parcialmente llenos mientras
se agitan con fuerza o se airean con aire limpio, filtrado y comprimido.

4.6.4 Ajustar la temperatura de la muestra a 20C 1C antes de hacer diluciones.

4.6.5 Inhibicin de la nitrificacin

4.6.5.1 Si se requiere inhibir la nitrificacin adicionar 3,0 mg de 2-cloro-6 (triclorometil)
piridina (ver inciso 5.11) a cada uno de los frascos antes de recolectar o bien adicionar la
cantidad suficiente de agua para tener una concentracin de 10 mg/L aproximadamente.

4.6.5.2 Entre las muestras que requieren inhibicin de la nitrificacin se incluyen, los
efluentes tratados biolgicamente, las muestras sembradas con efluentes tratados

51

biolgicamente y las aguas superficiales entre otras. Debe hacerse la observacin del uso
de inhibicin del nitrgeno cuando se presente el informe de los resultados.

4.7 Tcnica de dilucin

4.7.1 Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/L y una captacin de
OD de al menos 2 mg/L despus de 5 das de incubacin, producen los resultados ms
confiables. Hacer varias diluciones (al menos 3) por duplicado de la muestra preparada
para obtener una captacin de OD en dicho intervalo. La experimentacin con una
muestra concreta permite el uso de un nmero menor de diluciones. Un anlisis ms
rpido tal como la DQO, presenta una correlacin aproximada con la DBO5 y sirve como
una gua para seleccionar las diluciones. En ausencia de datos previos, utilizar las
siguientes diluciones: de 0 % a 1 % para los residuos industriales fuertes, de 1 % a 5 %
para las aguas residuales sedimentadas y crudas, del 5 % al 25 % para el efluente tratado
biolgicamente y del 25 % al 100 % para las aguas superficiales contaminadas.

4.7.2 Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una pipeta
volumtrica, aadir el volumen de muestra deseado a frascos Winkler individuales de 300
mL. Aadir cantidades adecuadas del material de siembra a los frascos tipo Winkler o al
agua de dilucin. Llenar los frascos con suficiente agua de dilucin, sembrada si es
necesario, de forma que la insercin del tapn desplace todo el aire, sin dejar burbujas. No
realizar diluciones mayores de 1:300 (1 mL de la muestra en un frasco). Determinar el OD
inicial en uno de los frascos de cada una de las diferentes diluciones. En los frascos de los
duplicados de cada una de las diluciones, Ajustar hermticamente el tapn, poner un sello
hidralico y la contratapa e incubar durante 5 das a 20C.

4.8 Determinacin del OD inicial

4.8.1 Mtodo yodomtrico: La determinacin del OD inicial se realiza por medio del
mtodo yodomtrico de azida modificado, de acuerdo a lo establecido en la norma
mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver 2 Referencias).

4.8.2 Mtodo electromtrico: La determinacin del OD inicial se realiza por medio del
mtodo electromtrico con electrodo de membrana, de acuerdo a lo establecido en la
norma mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver 2 Referencias). Los aceites, grasas o cualquier
sustancia que se adhiera a la membrana puede ser causa de baja respuesta en el
electrodo.

4.9 Blanco del agua de dilucin. Emplear un blanco del agua de dilucin como un
control aproximado de la calidad del agua de dilucin no sembrada y de la limpieza de los
frascos de incubacin. Junto con cada lote de muestras, incubar un frasco de agua de
dilucin no sembrada. Determinar el OD inicial y final como se especifica en los incisos 4.7
y 4.10. El consumo de OD no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferentemente no menor a
0,1 mg/L.

4.10 Incubacin

Incubar a 20C 1C las botellas de DBO5 que contengan las muestras con las diluciones
deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilucin y el control de
glucosa-cido glutmico. En caso de no contar con contratapas, diariamente se debe

52

verificar que el sello hidralico est intacto en cada botella incubada, agregar agua si es
necesario.

4.11 Determinacin del OD final

Despus de 5 das de incubacin determinar el OD en las diluciones de la muestra, en los
controles y en los blancos. La medicin del OD debe ser realizada inmediatamente
despus de destapar la botella de Winkler, para evitar la absorcin de oxgeno del aire por
la muestra.

CLCULOS

Calcular la DBO
5

Cuando no se utilice inculo ni diluciones:

DBO
5
(mg/L) = ODi mg/L - OD
5
mg/L

Donde:

ODi mg/L es el oxgeno disuelto inicial, y

OD5 mg/L es el oxgeno disuelto al quinto da.

Cuando se emplea una dilucin:

Cuando se utiliza inculo

Sin dilucin:

Con dilucin:

Donde:

B1 es el OD del inculo antes de la incubacin, en mg/L;
B2 es el OD del inculo despus de la incubacin, en mg/L;
C1 es el volumen de inculo en la muestra;

53

C2 es el volumen de inculo en el inculo control;
Vt es el volumen total del frasco Winkler, y
Vm es el volumen de muestra sembrada.

Expresar los resultados como CDBO5 s se inhibe la nitrificacin.

Reportar los resultados en mg/L de DBO5 con dos cifras significativas con la precisin
(media, desviacin estndar) correspondiente.

SEGURIDAD

No ha sido determinada la carcinogenicidad de todos los reactivos, por lo que cada
sustancia qumica debe tratarse como peligro potencial a la salud. La exposicin a estas
sustancias debe reducirse al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
inspecciones de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el
analista y que dichos resultados estn a su disposicin.

substancias qumicas especificadas en ste mtodo. Debe tenerse un archivo de
referencia de las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo el
personal involucrado en estos anlisis.

Cuando se trabaje con cualquiera de los compuestos qumicos descritos en este mtodo,
debe usar todo el tiempo equipo de seguridad, tal como: batas, guantes de ltex y lentes
de seguridad.

La preparacin de todos los reactivos usados en este mtodo debe efectuarse bajo una
campana de extraccin. Consulte las hojas de seguridad sobre manipulacin y disposicin
de stos.

El cido sulfrico es un compuesto qumico debe manejarse con extremo cuidado. El
adicionar cido sulfrico concentrado al agua produce una fuerte reaccin exotrmica por
lo cual esto debe realizarse muy lentamente con agitacin y enfriamiento externo.


54

BIBLIOGRAFA

NOM-001-ECOL-1996 Que establece los lmites mximos permisibles de contaminantes
en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el
Diario Oficial de la Federacin el 6 de enero de 1997.

NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida, publicada en el Diario
Oficial de la Federacin el 14 de octubre de 1993.

NMX-AA-003-1980 Aguas residuales - Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en el
Diario Oficial de la Federacin el 25 de marzo de 1980.

NMX-AA-014-1980 Cuerpos receptores - Muestreo. Declaratoria de vigencia publicada en
el Diario Oficial de la Federacin el 5 de septiembre de 1980.

NMX-AA-089/1-1986 Proteccin al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario - Parte 1.
Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 15 de julio de
1986.

NMX-AA-089/2-1992 Proteccin al ambiente - Calidad del agua - Vocabulario. Parte 2.
Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 24 de marzo de
1992.

NMX-AA-108-1992 Calidad del agua - Determinacin de cloro libre y cloro total - Mtodo
volumtrico de la DPD ferrosa. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 24 de marzo de 1992.

PROY-NMX-AA-115-SCFI-2001 Anlisis de agua - Criterios generales para el control de la
calidad de resultados analticos. Aviso de consulta pblica publicado en el Diario Oficial de
la Federacin el 2 de noviembre de 1999.

PROY-NMX-AA-116-SCFI-2001 Anlisis de agua - Gua de solicitud para la presentacin
de mtodos alternos. Aviso de consulta pblica publicado en el Diario Oficial de la
Federacin el 2 de noviembre de 1999.

AWWA Mtodo-5210 B Biochemical Oxigen Demand (BOD), Standard Methods for
Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association (APHA),
American Water Works Association (AWWA), Water Pollution Control Federation (WPCF),
19a Ed. Criterios Ecolgicos de Calidad del Agua, publicados en el Diario Oficial de la
Federacin el 13 de diciembre de 1989.

Sawyer, C.N. y P.L. McCarty, Chemistry for Environmental Engineering, McGraw-Hill
Tokio, 1978.


55

PRCTICA No 7
DEMANDA QUMICA DE OXIGENO (D.Q.O.) MTODO DE REFLUJO
ABIERTO

INTRODUCCIN

La demanda qumica de oxgeno (DQO) determina la cantidad de oxgeno requerido para
oxidar la materia orgnica en una muestra de agua residual, bajo condiciones especficas
de agente oxidante, temperatura y tiempo.

Las sustancias orgnicas e inorgnicas oxidables presentes en la muestra, se oxidan
mediante reflujo en solucin fuertemente cida (H
2
SO
4
) con un exceso conocido de
dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
) en presencia de sulfato de plata (AgSO
4
) que acta como
agente catalizador, y de sulfato mercrico (HgSO
4
) adicionado para remover la
interferencia de los cloruros. Despus de la digestin, el remanente de K
2
Cr
2
O
7
sin reducir
se titula con sulfato ferroso de amonio; se usa como indicador de punto final el complejo
ferroso de ortofenantrolina (ferroina). La materia orgnica oxidable se calcula en trminos
de oxgeno equivalente.

Para muestras de un origen especfico, la DQO se puede relacionar empricamente con la
DBO, el carbono orgnico o la materia orgnica; la prueba se usa para controlar y
monitorear despus que se ha establecido la correlacin.

El mtodo es aplicable a muestras de aguas residuales domsticas e industriales que
tengan DBO superiores a 50 mg O
2
/L. Para concentraciones ms bajas, tales como
muestras de aguas superficiales, se puede usar el mtodo modificado para bajo nivel en
un intervalo entre 5 y 50 mg O
2
/L. Cuando la concentracin de cloruro en la muestra es
mayor de 2 000 mg/L, se requiere el mtodo modificado para las aguas salinas.
Los compuestos alifticos voltiles de cadena lineal no se oxidan en cantidad apreciable,
en parte debido a que estn presentes en la fase de vapor y no entran en contacto con el
lquido oxidante; tales compuestos se oxidan ms efectivamente cuando se agrega
Ag
2
SO
4
como catalizador. Sin embargo, ste reacciona con los iones cloruro, bromuro y
yoduro produciendo precipitados que son oxidados parcialmente.

Las dificultades causadas por la presencia de los haluros pueden superarse en buena
parte, aunque no completamente, por acomplejamiento antes del proceso de reflujo con
sulfato de mercurio (HgSO
4
), que forma el haluro mercrico correspondiente, muy poco
soluble en medio acuoso. Si bien se especifica 1 g de HgSO
4
para 50 mL de muestra, se
puede usar una menor cantidad cuando la concentracin de cloruro sea menor de 2 000
mg/L, mientras se mantenga una relacin HgSO
4
:Cl
de 10:1. La tcnica no se debe usar

para muestras que contengan ms de 2 000 mg de Cl
/L; existen otros procedimientos

diseados para determinar la DQO en aguas salinas.


56

El nitrito (NO
2
) tiene una DQO de 1,1 mg de O

2
/mg de NO
2
-N, y como las

concentraciones de NO2 en aguas rara vez son mayores de 1 o 2 mg NO2-N/L, esta
interferencia es considerada insignificante y usualmente se ignora. Para evitar una
interferencia significante debida al NO2, agregar 10 mg de cido sulfmico por cada mg
de NO2-N presente en el volumen de muestra usado; agregar la misma cantidad de
cido sulfmico al blanco de agua destilada.

Las especies inorgnicas reducidas, tales como iones ferroso, sulfuro, manganoso, etc.,
se oxidan cuantitativamente bajo las condiciones de la prueba; para concentraciones altas
de estas especies, se pueden hacer las correcciones al valor de DQO obtenido, segn los
clculos estequiomtricos en caso de conocer su concentracin inicial.


Colectar las muestras en botellas de vidrio preferiblemente; el uso de envases plsticos es
permisible si se asegura la ausencia de contaminantes orgnicos.

Si la muestra tiene materia orgnica biolgicamente activa, el anlisis debe realizarse
inmediatamente, aunque preservada a pH 2 por adicin de H
2
SO
4
concentracin
(generalmente 2 mL de H
2
SO
4
conc./L de muestra) puede analizarse hasta siete das
despus.

Las muestras que contengan slidos sedimentables deben mezclarse con un
homogeneizador para obtener una muestra representativa.

En el anlisis de aguas residuales con alta DQO deben hacerse diluciones preliminares,
para reducir el error inherente en la medida de pequeos volmenes de muestra.

EQUIPO

Equipo de reflujo, constituido por balones o tubos de digestin de 500 o 250 mL de
capacidad con boca 24/40 de vidrio esmerilado y condensador Liebig, West, Friedrichs,
Allihn o equivalente, de 300 mm, con unin 24/40 de vidrio esmerilado, y una plancha de
calentamiento con regulador de temperatura y potencia suficiente para producir al menos
1,4 W/cm2 de superficie de calentamiento, o su equivalente.

REACTIVOS

Solucin estndar de dicromato de potasio, 0,0417M. Disolver 12,259 g de
K
2
Cr
2
O
7
, grado estndar primario previamente secado durante 2 h a 103C, en
agua destilada y diluir a 1 000 mL en un baln volumtrico clase A.

Reactivo de cido sulfrico. Agregar con cuidado Ag
2
SO
4
grado reactivo o tcnico, en
cristales o en polvo, sobre H
2
SO
4
concentrado en proporcin de 5,5g de Ag
2
SO
4
/Kg de
H
2
SO
4
. Dejar en reposo 1 o 2 das para la disolucin del Ag
2
SO
4
.


57

Solucin indicadora de ferroina. Disolver 1,485 g de 1,10-fenantrolina monohidratada y
695 mg de FeSO
4
7H
2
O en agua destilada y diluir a 100 mL. Esta solucin tambin se
puede adquirir comercialmente.

Sulfato ferroso de amonio (FAS), 0,25 M. Disolver 98 g de Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
6H
2
O en agua
destilada; agregar 20 mL de H
2
SO
4
concentrado, enfriar y diluir a 1000 mL. Estandarizar
esta solucin diariamente con una solucin estndar de K
2
Cr
2
O
7
as:

Diluir 10,0 mL de la solucin estndar de K
2
Cr
2
O
7
a aproximadamente 100 mL; agregar 30
mL de H
2
SO
4
concentrado y enfriar. Titular con FAS en presencia de 0,10 a 0,15 mL (2 o 3
gotas) de indicador de ferroina.

Sulfato mercrico, HgSO
4
, en cristales o en polvo.

Acido sulfmico. Requerido solamente para eliminar la interferencia de nitritos.

Ftalato de potasio e hidrgeno estndar (biftalato de potasio, KHP). Triturar ligeramente y
secar el biftalato de potasio (HOOCC
6
H
4
COOK) hasta peso constante a 120C; disolver
425 mg en agua destilada y diluir a 1 000 mL. La solucin es estable por ms de tres
meses si se conserva refrigerada; se debe verificar la presencia o ausencia de crecimiento
biolgico, y en caso afirmativo descartarla. El biftalato tiene una DQO terica de 1,176 mg
O
2
/mg y la solucin tiene una DQO terica de 500 g O
2
/mL.

PROCEDIMIENTO

Tratamiento de muestras con DQO > 50 mg O
2
/L: Colocar 50,0 mL de muestra en un
baln de reflujo de 500-mL (para muestras con DQO > 900 mg O
2
/L, usar una porcin ms
pequea de muestra y diluirla a 50,0 mL); agregar 1 g de HgSO
4
, en presencia de perlas
de vidrio para controlar la ebullicin, y muy lentamente agregar 5,0 mL del reactivo de
cido sulfrico, mientras se agita para disolver el HgSO
4
. Enfriar y agitar para evitar la
posible prdida de materiales voltiles; agregar 25 mL de solucin de K
2
Cr
2
O
7
0,0417 M y
mezclar. Acoplar el baln al condensador y abrir el flujo de agua refrigerante; agregar el
remanente del reactivo de cido sulfrico (70 mL) a travs del extremo superior del
condensador. Continuar la agitacin mientras se agrega el reactivo de cido sulfrico.
PRECAUCIN: Agitar muy bien la mezcla de reflujo antes de suministrar calor para
prevenir el sobrecalentamiento en el fondo del baln y la formacin de espuma.

Cubrir el extremo superior del condensador con un vaso pequeo para prevenir la entrada
de materiales extraos a la mezcla y dejar en reflujo durante 2 h. Enfriar y enjuagar el
condensador desde la parte superior con agua destilada; desconectar el condensador y
diluir la muestra al doble de su volumen con agua destilada. Enfriar hasta temperatura
ambiente y valorar el exceso de K
2
Cr
2
O
7
con FAS en presencia de 0,10 a 0,15 mL (2 o 3
gotas) de indicador de ferroina; aunque la cantidad de ferroina no es crtica, usar el mismo
volumen para todas las titulaciones. Tomar como punto final de la titulacin el primer
cambio ntido de color azul-verdoso a caf-rojizo; el color azul-verdoso puede reaparecer.
El cambio de color no es tan marcado como en la titulacin del blanco de reactivos debido

58

a la mayor concentracin de cido en la muestra. De la misma manera, someter a reflujo y
titular un blanco que contenga los reactivos y un volumen de agua destilada igual al
volumen de muestra.

Procedimiento alternativo para muestras con DQO-bajo: Seguir el procedimiento anterior,
con dos excepciones: (i) usar K
2
Cr
2
O
7
estndar 0,00417 M, y (ii) titular con FAS 0,025 M.
Tener cuidado extremo, ya que cualquier traza de materia orgnica en la vidriera o
deposiciones desde la atmsfera pueden causar errores. Si se requiere un mayor aumento
de la sensibilidad, concentrar un mayor volumen de muestra antes de la digestin por
reflujo, de la siguiente manera: Agregar todos los reactivos a la muestra y reducir el
volumen total a 150 mL mediante ebullicin en el baln de reflujo abierto a la atmsfera
(sin acoplar el condensador). Calcular la cantidad de HgSO
4
a ser adicionada (antes de la
concentracin por ebullicin), basada en una relacin de peso HgSO
4
:Cl
de 10:1, segn
la cantidad de Cl
presente en el volumen de muestra original. Hacer un blanco de

reactivos mediante el mismo procedimiento. Esta tcnica tiene la ventaja de concentrar la
muestra sin prdidas significativas de materiales voltiles fcilmente digestibles; los
materiales voltiles difciles de digerir, tales como cidos voltiles, se pierden pero se
consigue una mejora frente a mtodos de concentracin por evaporacin ordinarios.

Determinacin de la solucin estndar. Evaluar la tcnica y la calidad de reactivos
realizando la prueba con una solucin estndar de ftalato cido de potasio.

CLCULOS

DQO como mg de O2/lt = (A-B) x M x 8000/mL de Muestra
Donde:
A = mL FAS usados para el blanco
B = mL FAS usados para la muestra, y
M = molaridad del FAS
PRECISIN

Un grupo de muestras sintticas preparadas con ftalato cido de potasio y NaCl se
analizaron en 74 laboratorios. Para los valores de la DQO de 200 mg O
2
/L en ausencia de
Cl
, la desviacin estndar obtenida fue 13 mg/L (coef. de variacin 6,5 %); para los
valores de la DQO de 160 mg O
2
/L y 100 mg Cl
/L, la desviacin estndar obtenida fue de

14 mg/L (coef. variacin, 10,8%).

REFERENCIAS


59

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health
Association, American Water Works Association, Water Pollution Control Federation. 19
ed., New York, 1995. pp 5-12 a 5-16.

Methods for Chemical Analysis of Water and Wastes. United States Environmental
Protection Agency. Cincinnati, 1983.

BIBLIOGRAFA

RODIER, J. Anlisis de Aguas: aguas naturales, aguas residuales, agua de mar. Omega,
Barcelona, 1981.

SAWYER, C.; McCARTY, P. Chemistry for Environmental Engineering. McGraw Hill, New
York, 1996

GARAY, J., PANIZZO, L., LESMES, L., RAMIREZ, G., SANCHEZ, J. Manual de Tcnicas
Analticas de Parmetros Fsico-qumicos y Contaminantes Marinos. Tercera edicin.
Centro de Investigaciones Oceanogrficas e Hidrogrficas. Cartagena, 1993


60

PRCTICA No 8
DETERMINACIN DE DUREZA.

INTRODUCCIN

El cido dietilenamino tetraactico y su sal disdico forman un complejo quelado soluble
cuando se adicionan a una solucin de ciertos catines metlicos. Si se adiciona una
pequea cantidad del indicador negro de eriocromo T a una solucin que contiene los
iones calcio y magnesio en un pH de 10, la solucin toma un color similar al del vino rojo.
Si se adiciona EDTA como titulante los iones calcio y magnesio sern completados
paulatinamente hasta que la solucin adquiere un color azul, lo que indica el final de la
titulacin. Las reacciones que se llevan a cabo son:

INTERFERENCIAS

Tabla XXXII. Interferencias en la determinacin de dureza


61

MATERIAL

2 matraces volumtricos de 1000 ml

2 matraces volumetricos de 100 ml

1 cpsula de porcelana

1 soporte con pinzas para bureta

2 matraces Erlenmayer de 125 ml

1 pipeta de 10 ml

2 frascos goteros de 100 ml

REACTIVOS

Solucin buffer pH 10: Disolver 6.56 gr. de NH
4
Cl y 57 ml de NH
4
OH en agua destilada y
aforar a 100 ml.

Indicador negro de eriocromo T: Disolver 0.5 g de Eriocromo negro T y 4.5 gr. de
clorhidrato de hidroxilamina en 100 ml de etanol.

Solucin de EDTA (sal disdica): Disolver 2 gr de EDTA (sal disdica) ms 0.05 gr de
MgCl
2
.6H
2
O en agua destilada y
aforar a 1000 ml.

Solucin de CaCl
2
0.01 N: Disolver 0.5 gr de CaCO
3
secado a 110 centgrados durante
2 horas y disolverlo en 10 ml de HCl 3N y aforar a 1000 ml con agua destilada.

ESTANDARIZACIN


62

La estandarizacin del EDTA (sal disdica) se hace de la siguiente manera: colocar 5 ml
de solucin de CaCl
2
en un matraz Erlenmayer de 125 ml, se aaden 5 gotas de solucin
buffer de pH 10 y 3 gotas de indicador de Eriocromo negro T, aparece un color prpura en
presencia de iones de calcio y magnesio, y se procede a titular con la solucin de EDTA
cuya normalidad se desea conocer, se termina hasta la aparicin de un color azul.

La Normalidad del EDTA se calcula as:

Donde:

N
2
= Normalidad del EDTA

V
1
= ml de solucin de CaCl
2

N
1
= normalidad de la solucin de CaCl
2

V
2
= ml gastados de EDTA

PROCEDIMIENTO

1 Colocar 5 ml de la muestra de agua en un matraz Erlenmayer de 125 ml

2 Agregar 5 gotas de buffer pH 10

3 Adicionar 3 gotas de negro eriocromo T

4 Titular con EDTA (sal disdica) 0.01 N

5 Vire de prpura a azul

CLCULOS

Clculos para dureza total expresada como ppm de CaCO
3

A=mL de solucin de EDTA utilizados

B=mg de CaCO
3
equivalentes a 1 mL de titulante EDTA


63

PROCEDIMIENTO (RESUMEN)


64

PRCTICA No 9
DETERMINACIN DE LA ALCALINIDAD TOTAL

INTRODUCCIN

Definimos la alcalinidad total como la capacidad del agua para neutralizar cidos y
representa la suma de las bases que pueden ser tituladas. Dado que la alcalinidad de
aguas superficiales est determinada generalmente por el contenido de carbonatos,
bicarbonatos e hidrxidos, sta se toma como un indicador de dichas especies inicas. No
slo representa el principal sistema amortiguador (tampn, buffer) del agua dulce, sino que
tambin desempea un rol principal en la productividad de cuerpos de agua naturales,
sirviendo como una fuente de reserva de CO
2
para la fotosntesis (fig. 1).

Internacionalmente es aceptada una alcalinidad mnima de 20 mg de CaCO
3
/L para
mantener la vida acutica. Cuando las aguas tienen alcalinidades inferiores se vuelven
muy sensibles a la contaminacin, ya que no tienen capacidad para oponerse a las
modificaciones que generen disminuciones del pH (acidificacin).

Se han propuesto clasificaciones de las aguas segn su capacidad amortiguadora
(alcalinidad), lo que permite manejar descriptores categricos sencillos a ser utilizados en
el anlisis de calidad de agua (tabla 1).

Tabla 1.- Clasificacin de los cuerpos de agua^ segn su alcalinidad total

Descriptor Alcalinidad (mg/L)
Mnimo aceptable 20
Pobremente amortiguadas <25
Moderadamente amortiguadas 25-75
Muy amortiguadas >75
Valores tpicos de lagunas de agua
dulce de Maldonado
50-80
Valores tpicos de lagunas de agua
dulce de Rocha (Aguas dulces)
20-30

METODOLOGA


65

La alcalinidad se determina por titulacin con una solucin estndar de un cido mineral
fuerte a los puntos sucesivos de equivalencia del bicarbonato y el cido carbnico (pH ~
4,5-4,3) (fig.1).

Para determinar la Alcalinidad total se emplea una mezcla de reactivos indicadores
(anaranjado de metilo/verde bromocresol).

Se recomienda realizar la determinacin en el laboratorio. No olvide utilizar recipientes
bien limpios para tomar y acarrear las muestras de agua (preferentemente lvelos
previamente y enjuguelos con agua destilada). Conserve las muestras refrigeradas para
su transporte. La determinacin debe ser realizada preferentemente dentro de las
primeras 24 horas a partir de la colecta, ya que pueden modificarse por interaccin con el
anhdrido carbnico atmosfrico (CO
2
).

Gua para la utilizacin de las Valijas Viajeras Alcalinidad

CO
2
+ H
2
O--- H
2
CO
3

H
2
CO
3
HCO
3
+
H
+

HCO
3
-
CO
3
-2

+
H
+

Fig. 1.- Equilibrio cido carbnico-bicarbonato-carbonato

MATERIALES:

Reactivo Indicador acuoso: anaranjado de metilo/verde de bromocresol (4:5).


66

Matraz aforado de 50 Ml

Erlenmeyer de 250 mL

Bureta y soporte

Solucin de cido sulfrico 0.02 N

Agua destilada

Lentes de seguridad

PRECAUCIONES Y CONSEJOS SEGURIDAD

Si bien se trabajar con una solucin diluida de cido sulfrico, debe tenerse en cuenta
que la misma es corrosiva e irritante por contacto y txica por ingestin. El docente
encargado debe planificar la actividad con el fin de disminuir los riesgos asociados a la
utilizacin de esta sustancia.

Utilcese proteccin para los ojos. En caso de contacto con la piel o los ojos lvese
prontamente con agua en abundancia y acdase inmediatamente al mdico.

PROCEDIMIENTO:

1. Mida 50 mL de muestra en el matraz aforado. Para esto, aada la muestra hasta que
falte aproximadamente un centmetro para el aforo (marca de enrase) y complete con
un gotero. El enrase se considera bien realizado cuando el menisco que forma el
lquido queda tangente, por encima, al aforo (fig.2).

Fig. 2.- a) Matraz aforado. b) La marca de aforo sobre el vidrio se representa con una lnea naranja. El menisco cncavo
representa la superficie del lquido.

2. Vierta los 50 mL en el erlenmeyer de 250 mL (fig.2.a) y agregue agitando unas pocas
gotas de reactivo indicador, hasta que note una coloracin leve (el color exacto
depender del pH de la muestra y el color aparente del agua).

67

3. Titular bajo bureta con solucin de cido sulfrico, agitando y aadiendo gota a gota
hasta el viraje a color prpura. Determine el volumen de cido gastado (fig. 2).

4. La alcalinidad de la muestra se calcula multiplicando por 20 el gasto en mL de la
solucin de cido (fig.3.b). Esto permite expresar la suma de las bases presentes en la
muestra como si fueran solamente carbonato de calcio. Debe expresarse entonces
como alcalinidad total equivalente a x mg de CaCO3 por litro (mg CaCO3/L) o su
equivalente, partes por milln (ppm).

5. Alternativamente la variacin de pH puede monitorearse con un pHmetro.

6. Registre los resultados

Fig. 3.- a) El cambio de color indica el punto final de la titulacin. b) Determinacin del
gasto de cido sulfrico en la titulacin.

68


69

PRCTICA No 10
DETERMINACIN DE CONDUCTIVIDAD.
INTRODUCCIN

La conductividad elctrica de una muestra de agua es la expresin numrica de su
capacidad para transportar una corriente elctrica. Esta capacidad depende de la
presencia de iones en el agua, de su concentracin total, de su movilidad, de su carga o
valencia y de las concentraciones relativas, as como de la temperatura a la cual se realiza
la medicin.

De los muchos factores que afectan el comportamiento de los iones en solucin, las
atracciones y repulsiones elctricas entre iones y la agitacin trmica, son quiz los ms
importantes. Estos
efectos se expresan a travs de un parmetro conocido como la "fuerza inica" de la
solucin, :

= 1 / 2 Ci x Zi
2

En donde "Ci" y "Zi" representan la concentracin y la carga inica del componente "i".

Las soluciones de la mayora de los cidos, bases y sales inorgnicas son relativamente "buenos
conductores" de la corriente elctrica. Inversamente, las soluciones acuosas de solutos orgnicos, que
no se disocian o que se disocian muy poco en el agua, poseen conductividades elctricas muy bajas o
similares a las del agua pura.

En la mayora de las soluciones acuosas, cuanto mayor es la concentracin de las sales disueltas,
mayor es su conductividad elctrica. Este efecto contina hasta el punto de saturacin de la sal o hasta
que la solucin se halla tan concentrada en iones que la restriccin del movimiento, causada por un
aumento posterior en la concentracin, disminuye la conductividad elctrica del sistema.

Puesto que a mayor temperatura menor viscosidad y a menor viscosidad mayor libertad de movimiento,
la temperatura tambin tiene una marcada influencia sobre la conductividad elctrica de un sistema
acuoso. Si bien el incremento de la conductividad elctrica con la temperatura puede variar de un in a
otro, en general, se acepta que sta aumenta en promedio un 3% por cada grado centgrado que
aumente la temperatura.

Un equipo para la medicin de la conductividad elctrica en muestras de agua es un equipo que consta
de un "sensor" o par de placas metlicas y de una parte electrnica desde donde se enva una seal
elctrica hacia las placas durante cada medicin. Atado a este sistema, se halla una termocupla que
registra la temperatura a la cual se realizan las mediciones.

El equipo cuenta adems con un traductor y corrector electrnico de la seal, que referencia las
corrientes elctricas ledas a una temperatura determinada y que las traduce a valores aproximados
del contenido en slidos disueltos, TDS, tomando como referencia el NaCl.

Los conductmetros miden la "resistencia" de una solucin (sistema acuoso) al paso de una corriente
elctrica y convierten estos valores en unidades inversas de "conductividad elctrica".

Como la resistencia de un cuerpo es inversamente proporcional a su seccin transversal y
directamente proporcional a su longitud, se ha adoptado como unidad estndar de

70

comparacin, la resistencia al paso de la corriente que ofrece un cubo de 1 cm de lado,
construido del material que se examina. El recproco de esta medida es la "conductividad
especfica".

ACADEMIA DE INGENIERA AMBIENTAL 71

[KCl] a 25 C
0,0001 M 0,0005 M 0,001 M 0,005 M 0,01 M 0,02 M 0,05 M
0,1 M 0,5 M

FIGURA 8.1 CONDUCTMETRO DE CAMPO Y DATOS DE CALIBRACIN.

C.E. S/cm
15 74
147 718
1413 2767 6668
12900 58640

mg/l KCl
7,5
37,3 74,5
372,8 745,5 1491
3727,5 7455,0
37275,0

En el sistema internacional de unidades, la unidad de conductividad elctrica, en trabajos
de aguas, es el micro Siemens por centmetro, normalmente abreviado como S/cm. Un
S/cm en conductividad elctrica equivale a 10.000 Ohm x m, en trminos de resistividad.
Otra unidad frecuente, especialmente en aguas salobres, es el mS/m. Un mS/m = 10
S/cm = 1.000 Ohm x m.

En sntesis, y desde el punto de vista fsico, un S/cm es una medida de la mayor o menor
facilidad con que una corriente elctrica puede pasar a travs de un material de forma
cbica, de un centmetro de arista.
REACTIVOS

Agua desmineralizada. Se utiliza para el lavado del electrodo antes y despus de cada
medida. Es necesario realizar un control diario de la conductividad del agua obtenida
despus del paso por la resina de intercambio inico y establecer que su conductividad se
encuentre por debajo de 5 S/cm.

Cloruro de potasio, secado a 105 C.

Solucin 0,1 N de KCl. Pese 7,4365 g y lleve a 1 litro. Patrn de Conductividad Elctrica,
Rango alto.

Solucin 0,01 N. de KCl. Pese 0,7440 g y lleve a 1 litro o diluya 1:10 la anterior solucin.
Patrn de conductividad elctrica medio.


MATERIAL

Conductmetro

Vasos de precipitados.

Frasco lavador.

MEDICIONES EN CAMPO

La conductividad elctrica de una muestra de agua es un parmetro ms o menos estable
en el tiempo, de tal suerte que las mediciones en campo y en el laboratorio no muestran
variaciones significativas. Pese a ello, se acostumbra a medir la conductividad elctrica
del agua en campo, debido a que sus variaciones de un punto a otro, constituyen
generalmente una valiosa herramienta de interpretacin preliminar, particularmente en
estudios de evaluacin ambiental.

Los valores de conductividad elctrica, orientan y direccionan el muestreo en campo y
constituyen una pieza clave para la toma rpida de decisiones, especialmente cuando se
observan resultados inesperados o anmalos en campo.

NOTA: Es muy importante enjuagar el electrodo de un conductmetro con cierta periodicidad, antes y despus
de cada medicin, con agua desmineralizada, no slo para evitar que la salinidad de una muestra altere la
medicin de la siguiente, sino tambin para evitar el deterioro del electrodo por formacin de depsitos de
sales en las placas.

PROCEDIMIENTO:

En esta prctica de laboratorio, cada grupo de estudiantes deber realizar las siguientes
mediciones:

1. Medir el pH de varias muestras coloreadas utilizando un pHmetro. Realizar sobre
estas muestras pequeas adiciones de NaCl y medir nuevamente el pH. Realizar
ahora pequeas adiciones de CaCl2 y medir nuevamente el pH de las muestras.

2. Utilizando porciones frescas de las mismas muestras anteriores, mida los valores de
pH, primero con adiciones de FeCl3 y luego con adiciones de Na2CO3.

3. Preparar las soluciones a-, b-, c- y d- y, a partir de cada una de ellas preparar las
siguientes diluciones: 0,10 M; 0,05 M; 0,01 M; 0,005 M; 0,001 M; 0,0005 M y 0,0001
M.

4. Solucin a-. Un litro de solucin de cloruro de potasio de concentracin, 0,10 M,
valorada por duplicado frente a una solucin patrn de nitrato de plata.

5. Solucin b-. Un litro de solucin de sulfato de magnesio de concentracin, 0,10 M,
valorada por duplicado frente a una solucin patrn de EDTA.


6. Solucin c-. Un litro de solucin de cloruro de calcio de concentracin, 0,10 M,
valorada por duplicado frente a una solucin patrn de EDTA.

7. Solucin d-. Mezclar y homogeneizar 50 mililitros de cada una de las soluciones a-, b-
y c- de concentracin 0,10 M y medir su conductividad elctrica para contrastar con el
valor que se puede predecir a partir de las grficas de concentracin "vs"
conductividad elctrica.

8. Medir las conductividades elctricas en cada una de las series a-, b-, c- y d- y
establecer una correlacin entre la conductividad elctrica y la concentracin de
slidos disueltos, en mg/l, a partir de la construccin de curvas antes mencionadas.

9. Medir el pH y la conductividad elctrica de las muestras de trabajo.

Esquema operativo para las mediciones de pH, turbidez y conductividad elctrica.



PRCTICA No 11
DETERMINACIN DE NITRGENO TOTAL KJELDAHL.

INTRODUCCIN

Los compuestos nitrogenados se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza.
Las fuentes de nitrgeno incluyen adems de la degradacin natural de la materia
orgnica, fertilizantes, productos de limpieza y tratamiento de aguas potables.

Debido a que el nitrgeno es un nutriente esencial para organismos fotosintticos, es
importante el monitoreo y control de descargas del mismo al ambiente.

En el mtodo Kjeldahl los compuestos nitrogenados de la muestra se descomponen con
cido sulfrico concentrado en caliente, transformndose el nitrgeno de la mayora de los
grupos funcionales orgnicos en amonio. Cuando la descomposicin se ha completado la
disolucin se enfra, se diluye y se alcaliniza con hidrxido de sodio concentrado. El
amoniaco liberado se destila y se adsorbe en una disolucin de concentracin conocida
de cido brico.

Los grupos amino y amido se convierten cuantitativamente a in amonio. Sin embargo los
grupos nitro, azo o azoxi generan en las mismas condiciones, otros productos
nitrogenados (N2 u xidos de nitrgeno).

REACTIVOS



a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min;
b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 mx., y
c) pH: 5,0 a 8,0.

Tetraborato de sodio decahidratado (Na
2
B
4
O
7
10H
2
O)

Hidrxido de sodio (NaOH)

cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
)

cido brico (H
3
BO
3
)

Indicador de rojo de metilo

Indicador de azul de metileno



Alcohol etlico (CH
3
CH
2
OH)

Sulfato de cobre (II) anhidro (CuSO
4
)

Sulfato de potasio (K
2
SO
4
)

Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O35H2O)

Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3), patrn primario

Cloruro de amonio (NH4Cl) patrn primario

Disolucin indicadora de cido brico. Secar aproximadamente 30 g de cido brico en un
desecador que contenga slica gel como desecante por 24 h. Pesar aproximadamente
20,0 g de cido brico seco disolver en 500 mL agua, agregar 10 mL de la mezcla de
indicadores y diluir a 1 L. Guardar la disolucin en un envase de plstico o en un
contenedor libre de boro, preparar mensualmente.

Disolucin de tetraborato de sodio (0,025M). Pesar aproximadamente pero con precisin
9,50 g de tetraborato de sodio decahidratado en 50 mL de agua y llevar a 1 L con agua
posteriormente.

Disolucin amortiguadora de boratos. Aada 88 mL de la disolucin de NaOH 0,10 N a
500 mL de disolucin de tetraborato de sodio 0,025 M (ver inciso 4.14) y diluya a 1 L en
un matraz aforado.

Disolucin de hidrxido de sodio (0,10 N). Pesar aproximadamente 4,0 g de hidrxido de
sodio y disolver en 500 mL de agua, dejar enfriar a temperatura ambiente y llevar a 1 L.

Disolucin valorada de cido sulfrico (0,02 N). Preparar una disolucin de cido sulfrico
aproximadamente 0,1 N diluyendo 3 mL de cido sulfrico concentrado en 1 L de agua.
Diluir 200 mL de esta disolucin en 1 L de agua. Titular el cido sulfrico
aproximadamente 0,02 N con carbonato de sodio, pesando aproximadamente y con
precisin 0,031 8 g de carbonato de sodio anhdro, secado en horno a 140C. Calcular la
normalidad exacta de la disolucin (1 mL = 0,28 mg de N-amoniacal).

Mezcla de indicadores. Pesar aproximadamente 200,0 mg de indicador rojo de metilo
aforar a 100 mL con alcohol etlico. Pesar aproximadamente 100,0 mg de indicador azul
de metileno y aforar a 50 mL con alcohol etlico. Mezclar las dos disoluciones en un frasco
de vidrio. Preparar mensualmente.

Reactivo para la digestin. Pesar aproximadamente y con precisin 134,0 g de sulfato de
potasio y 7,3 g de sulfato de cobre (II) anhidro disolver en 800 mL de agua destilada libre
de amoniaco, agregar cuidadosamente 134 mL de cido sulfrico concentrado. Dejar
enfriar a temperatura ambiente y diluir la mezcla a 1 L con agua. Almacenar la disolucin
a una temperatura de 20C para evitar la cristalizacin.

Disolucin reactivo de hidrxido - tiosulfato de sodio. Pesar aproximadamente y con
precisin 500,0 g de hidrxido de sodio y 25,0 g de tiosulfato de sodio pentahidratado
disolver en agua libre de amoniaco y llevar a 1 L.



Disolucin de hidrxido de sodio (6 N). Pesar aproximadamente 240,0 g de hidrxido de
sodio y llevar a 1 L con agua libre de amoniaco.

Disolucin madre de amonio (1 mL = 1,0 mg de nitrgeno amoniacal). Pesar
aproximadamente y con precisin 3,819 g de cloruro de amonio y aforar a 1 L con agua.

Disolucin patrn de amonio (1,0 mL = 0,01 mg de nitrgeno amoniacal). Tomar una
alcuota de 10,0 mL de la disolucin madre de amonio y aforar a 1 L con agua.

MATERIAL Y EQUIPO

EQUIPO

Slo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para el presente
mtodo.

Para determinacin de nitrgeno tipo Kjeldahl que consta de: Digestor con sistema de
extraccin de humos y destilador con sistema de condensacin para mantener la
temperatura por abajo de 29C.

Potencimetro para medicin de pH reproducible hasta 0,02 unidades de pH, con
compensador de la temperatura y sus respectivos electrodos.

Balanza analtica con precisin de 0,1 mg

Balanza granataria con precisin de 0,1 g

MATERIALES

Todo el material usado en esta determinacin debe ser exclusivo para este
procedimiento. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una disolucin de
cido sulfrico al 10 % y enjuagar con agua desionizada. Los detergentes con base de
hidrxido de amonio o amoniaco no deben usarse para la limpieza del material. Su
uso debe restringirse dentro del laboratorio.

Todo el material volumtrico utilizado en este mtodo debe ser clase A con certificado
en su caso debe estar calibrado.

Frasco de polietileno o vidrio con tapa de 2 L de capacidad

Matraz tipo Kjeldahl de 800 mL

Bureta

RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

Deben tomarse un mnimo de 2,0 L de muestra en un envase de polietileno. Pueden
utilizarse muestras compuestas o simples.



Debe preservarse la muestra con cido sulfrico a un pH de 1,5 a 2,0.

Posteriormente mantener a 4C hasta su anlisis.

El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 7 das.

PROCEDIMIENTO

Limpiar el equipo de destilacin antes de utilizarlo, destilando una mezcla (1:1) agua-
disolucin hidrxido - tiosulfato de sodio (ver inciso 4.20) hasta que el destilado est libre
de amonio. Repetir esta operacin cada vez que el equipo se vaya a utilizar, si no se
emplea en intervalos de menos de 4 h tambin se requiere realizar esta operacin.

Seleccin de volumen de muestra: Determinar el volumen de la muestra de acuerdo a la
tabla 1, si es necesario, ajustar el volumen aproximadamente 500 mL y neutralizar a pH 7.
Colocar la muestra medida en un matraz Kjeldahl de 800 mL.

TABLA 1.- Seleccin del volumen de muestra

NITRGENO AMONIACAL

Tomar una muestra dependiendo de las concentraciones esperadas, de acuerdo a la tabla
1 diluir con agua hasta 500 mL. Preparar un blanco con 500 mL de agua y darle el mismo
tratamiento que a la muestra como sigue:

Aadir 25 mL de la disolucin amortiguadora de boratos y ajustar el pH a 9,5 con
disolucin de hidrxido de sodio 6 N utilizando potencimetro o papel indicador para
verificar. Transferir la disolucin a un matraz Kjeldahl y aadir unas cuentas de vidrio o
perlas de ebullicin.

Conectar el matraz Kjeldahl al bulbo del aparato de destilacin, destilar la muestra
cuidando que la temperatura del condensador no pase de 302 K (29C), recolectando el
condensado con la punta del tubo del refrigerante sumergido en 50 mL de la disolucin
amortiguadora de boratos.

La destilacin se completa cuando se hayan recolectado 300 mL de destilado
aproximadamente, incluyendo los 50 mL de la disolucin amortiguadora de Boratos con
la disolucin mezcla de indicadores.



Retirar el matraz colector y titular con solucin de cido sulfrico 0,02 N hasta que la
solucin vire de un verde esmeralda a morado.

Nitrgeno orgnico Enfriar el residuo contenido en el matraz Kjeldahl. Digestin:
Adicionar cuidadosamente 50 mL de reactivo para la digestin al matraz de destilacin y
mezclar perfectamente. Aadir unas cuentas de vidrio o piedras de ebullicin. Si se
encuentran presentes grandes cantidades de materia orgnica libre de nitrgeno adicionar
50 mL de reactivo de digestin por cada gramo de materia slida en la muestra.

Mezclar y calentar a ebullicin bajo una campana de extraccin, (eliminar los vapores de
SO3) hasta que el volumen de la disolucin se reduzca aproximadamente entre 25 mL y
50 mL y se observe gran desprendimiento de vapores blancos (estos vapores pueden
oscurecerse cuando la muestra presenta grandes cantidades de materia orgnica).

Continuar la digestin durante 30 min ms. En este perodo, la disolucin cambia de turbia
hasta ser transparente e incolora o con una ligera coloracin amarillo plido. Durante la
digestin el matraz Kjeldahl debe permanecer inclinado. Enfriar el matraz y su contenido,
diluir a 300 mL con agua y mezclar.

Cuidadosamente aadir 50 mL de la disolucin de hidrxido-tiosulfato de sodio (ver inciso
4.20), para formar una capa alcalina en el fondo del matraz, conectar el matraz a un
equipo de destilacin y sumergir la punta del condensador en un matraz que contenga 50
mL de disolucin de cido brico (ver inciso 4.13) y la mezcla de indicadores por abajo del
nivel de esta disolucin. Agitar hasta asegurarse que est completamente mezclado, el
pH de la disolucin debe ser mayor a 11,0.

Destilacin: Destilar y colectar aproximadamente 200 mL de destilado, no permitir que la
temperatura en el condensador suba por arriba de 29C. Cuando se alcance un volumen
aproximado de 250 mL en el matraz colector del destilado, sacar la punta del
condensador del destilado sin retirarlo del matraz y continuar la destilacin durante 1 min
o 2 min para limpiar el condensador.

Titulacin del destilado: Titular el volumen destilado con disolucin valorada de cido
sulfrico 0,02 N hasta el cambio del indicador de verde esmeralda a morado.

Blanco

Llevar un blanco durante todos los pasos del mtodo.

CLCULOS

Usar la siguiente ecuacin para calcular la concentracin de nitrgeno total



Donde:

A son los mL de cido sulfrico gastados en la titulacin de la muestra;
B son los mL de cido sulfrico gastados en el blanco;
N es la normalidad del cido sulfrico;
V son los mL de muestra, y
14 es el peso equivalente del nitrgeno.



PRCTICA NO 12
DETERMINACIN DE NITRITOS EN AGUAS NATURALES Y
RESIDUALES -MTODOS DE PRUEBA

INTRODUCCIN

El nitrito considerado como una etapa intermedia en el ciclo del nitrgeno puede estar
presente en el agua como resultado de la descomposicin biolgica de materiales
proticos. En aguas superficiales crudas, las huellas de nitritos indican contaminacin.
Tambin se puede producir el nitrito en las plantas de tratamiento o en los sistemas de
distribucin de agua, como resultado de la accin de bacterias sobre el nitrgeno
amoniacal.

El nitrito puede entrar en un sistema de abastecimiento a travs de su uso como inhibidor
de corrosin en agua de proceso industrial. El nitrito es un agente etiolgico potencial de
metahemoglobinemia. El cido nitroso, que se forma de nitritos en solucin cida, puede
reaccionar con aminas secundarias ( RR'-NH ) para formar nitrosaminas ( RR'-N-N=0 )
muchas de las cuales son conocidas por ser potentes agentes carcinognicos.

El nitrgeno de nitritos rara vez aparece en concentraciones mayores a 1 mg/L an en
efluentes de plantas de tratamiento municipales. Su concentracin en aguas superficiales
y subterraneas es normalmente ms baja de 0,1 mg/L Debido a que el nitrgeno es un
nutriente esencial para organismos fotosintticos, es importante el monitoreo y control de
descargas del mismo al ambiente.

El principio del mtodo consiste en que los nitritos presentes reaccionan en medio cido
(pH = 1,9 a 2,5), para formar cido nitroso que reacciona con la sulfanilamida por una
reaccin de diazoacin para formar una sal de diazonio, la cual por copulacin con el
diclorhidrato de N-(1-Naftil ) etilendiamina forma un colorante azico de color purpura
rojizo que se mide espectrofotomtricamente a 543 nm.

El sistema de unidades utilizado en la presente norma debe cumplir con lo establecido en
la norma oficial mexicana NOM-008-SCFI (ver 2 Referencias).

OBJETIVO:

El estudiante conocer un mtodo de prueba espectrofotomtrico para la determinacin
de nitrgeno de nitritos, en agua natural, residual y residual tratada, en un intervalo de
0,01 mg/L a 1 mg/L de N-N02

PATRONES




Resistividad: megohm-cm a 25 C: 0,2 Mn.

Conductividad: S/cm a 25 C: 5,0 Mx.

pH: 5,0 a 8,0

Hidrxido de amonio (NH4OH) concentrado.

Suspensin clarificadora de hidrxido de aluminio: Disolver 125 g de sulfato de
aluminio y potasio (AlK(SO
4
).12H
2
O) de sulfato de aluminio y amonio
(AlNH4(sO
4
)
2
.12H
2
O) en 1 L de agua. Calentar a 60 C y adicionar 5 mL de NH
4
OH
concentrado lentamente con agitacin, dejar que la mezcla repose 3 h y decantar. Lavar
el precipitado con adiciones sucesivas de agua destilada con mezclado manual y
decantacin hasta que se encuentre libre de olores amoniacales. Decantar la mayor
cantidad posible de agua y almacenar la suspensin concentrada, en un frasco
hermticamente cerrado.

Disolucin de cido sulfrico (H
2
SO
4
) 1N: Diluir 30 mL de H
2
SO
4
concentrado y llevar a
volumen de 1 000 mL con agua.

Disolucin de hidrxido de sodio (NaOH) 1N: Pesar 40 g de NaOH, disolverlos y llevar
a volumen de 1 000 mL con agua.

cido clorhdrico. (HCl) concentrado: Disolucin de sulfanilamida (NH
2
C
6
H
4
SO
2
NH
2
); 4
aminobencensulfonamida Disolver 5,0 g de sulfanilamida en una mezcla de 50 mL de HCl
y 300 mL de agua, y llevar a volumen de 500 mL con agua.

La disolucin es estable por varios meses debe de almacenarse en frasco ambar y en
refrigeracin a 4C 2C.

Disolucin de diclorhidrato de N-(1-naftil) etilendiamina (C
10
H
7
NH-CH
2

NH
2
.2HCl),NEDA Disolver 500 mg de NEDA y llevar a volumen de 500 mL con agua,
almacenar en frasco mbar y poner en refrigeracin a 4C 2C. Renovar la disolucin
mensualmente o si aparece un color caf intenso.

Precaucin: este reactivo es txico. Debe evitarse su ingestin o contacto con la piel.

cido sulfrico concentrado (H
2
SO
4
)

Disolucin de oxalato de sodio (Na
2
C
2
O
4
) 0,05 N (Patrn primario): Secar
aproximadamente 6 g de (Na
2
C
2
O
4
) a 105C por lo menos 1 h; pesar 3,35 g disolver y
llevar al volumen de 1 000 mL con agua.

Disolucin de permanganato de potasio (KMnO
4
) 0,05 N: Disolver 1,60 g (de KMnO
4
) y
llevar al volumen de 1 000 mL con agua, almacenarlo en frasco mbar.



Valoracin de la disolucin. Medir 25 mL de la disolucin de oxalato de sodio (5.9)
agregar 10 mL de (H2SO4) concentrado (5.8) calentar a 80C, titular con la disolucin de
(KMnO4) hasta la obtencin de un color rosa tenue estable por 30 s.

Calcular la concentracin de (KMnO4) (N1) con la siguiente ecuacin:

Donde:

V1 = volumen de la disolucin de (KMnO
4
) gastado en la titulacin, en mL;

V2 = volumen de la disolucin de (Na
2
C
2
O
4
) (0,05N) empleado para la titulacin, en mL,

N2 = la concentracin de la disolucin ( Na
2
C
2
O
4
) (0,05N).

NOTA.- Para simplicidad de los clculos, la concentracin de las disoluciones se expresa como normalidad
(N); la equivalencia con la concentracin molar ( mol/L ) empleada en el Sistema Internacional de Unidades
debe involucrar la estequiometra de la reaccin de xido-reduccin que se realiza.

2 MnO
4
+
+ 5 C
2
O
4
-2
+ 16 H
+
------> 2 Mn
-2
+ 10CO
2
+ 8 H
2
O

Disolucin madre de nitritos ( 250 mg/L ): Secar aproximadamente 5 g de nitrito de
sodio (NaNO2) por lo menos 2 h a 105C; pesar 1,232 0 g de este reactivo, disolverlo y
llevar a volumen de 1 000 mL con agua. Preservar con 1 mL de cloroformo. 1,0 mL = 250
g de N-NO2.

Valoracin de la disolucin. Tomar 50 mL de la disolucin de (KMnO4) (5.10); transferir
a un matraz erlenmeyer de 250 mL, agregar 5 mL de H2SO4 concentrado (5.8) y 50 mL
de la disolucin madre de nitritos de tal forma que la pipeta descargue bajo la superficie
de la disolucin en el matraz, agitar y calentar hasta 80 C, titular con la disolucin de
oxalato de sodio (5.9) hasta decoloracin, retitular el exceso de oxalato con la disolucin
de KMnO4 (5.10) hasta la obtencin de un color rosa tenue estable por 30 s. Calcular la
concentracin de la disolucin madre de nitritos (Co) en mg/L con la siguiente ecuacin:

Donde:

N1 es la concentracin de la disolucin de KMnO4 (0,05N);

N2 es la concentracin de la disolucin de Na2C2O4 (0,05N);


V1 es el volumen de la disolucin de KMnO4 adicionado para la valoracin de 50 mL ms
el volumen empleado en la retitilacin;

V2 es el volumen de la disolucin de Na2C2O4 gastado en la valoracin en mL;

V3 es el volumen de la disolucin madre de nitritos que se valora ( 50 mL);

7 es el peso equivalente del nitrgeno, y

1 000 es el factor de conversin.

Disolucin intermedia de nitritos ( 50 mg/L)

Calcular el volumen (V) de la disolucin madre de nitritos de manera que la alicuota
contenga 12,5 mg de nitrgeno de nitritos, requerido para la disolucin intermedia por
medio de la siguiente ecuacin.

donde :

Co es la concentracin de la disolucin madre de nitritos en mg/L.

Medir el volumen calculado (V) (aproximadamente 50 mL) de la disolucin madre de
nitritos (5.11), diluir y llevar a volumen de 250 mL con agua. 1mL = 50 g de N-N02.

Disolucin patrn de nitritos ( 0,5 mg/L.): Diluir 10 mL de la disolucin intermedia de
nitritos (5.12) y llevar a volumen de 1 000 mL con agua.

1 mL = 0,5 g de N-N02

NOTA.- Esta disolucin debe ser preparada momentos antes de utilizarse.

MATERIAL Y EQUIPO

Espectrofotmetro o fotocolorimetro con filtro para leer a 543 nm, con celdas de paso de
luz de 1 cm a 10 cm.

Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.

Balanza granataria con precisin de 0,1 g.

pHmetro.

Todo el material volumtrico utilizado en este mtodo debe ser clase A.



Frasco de polietileno o vidrio con tapa de 2 L de capacidad.

Membrana filtrante de 0,45 m.

Filtros de fibra de vidrio con dimetro de poro de 0,7 m

Papel filtro de poro medio.

Electrodo combinado de vidrio.

CONTROL DE CALIDAD

Cada laboratorio que utilice este mtodo est obligado a operar un programa de control
de calidad (CC) formal.

Es obligatorio para el laboratorio mantener los siguientes registros:

control de calidad que verific los anlisis.

siguientes datos:

a) Identificacin de la muestra

b) Fecha del anlisis

c) Procedimiento cronolgico utilizado

d) Cantidad de muestra utilizada

e) Nmero de muestras de control de calidad analizadas

f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin

g) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados

h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original reportada por los
equipos en disquetes o en otros respaldos de informacin.


PROCEDIMIENTO

1 Pre tratamiento de la muestra: La muestra debe estar libre de turbiedad y color, para
lograr esto, filtrarla a trves de membranas de 0,45 m de poro, filtros de fibra de
vidrio de 0,7 m de poro o adicionar 2 mL o la cantidad necesaria de suspensin
clarificadora (5.2) segn sea el caso, a aproximadamente 100 mL de muestra con


agitacin y filtrarla a travs de papel de poro medio. Si existe color en la muestra
continuar con el procedimiento y efectuar la correccin por color establecida en el
punto 9.

2 Neutralizar el filtrado a un pH aproximado de 7,0 con H
2
S0
4
1N o Na0H 1N

3 Porcin de muestra: De la disolucin obtenida en 10.1 tomar una porcin de
muestra, dependiendo del contenido esperado de nitritos segn la tabla No. 1

TABLA 1.- Seleccin del volumen de muestra

4 Con una pipeta volumtrica tomar 50 mL de la muestra o lo que indica la tabla y
transferirla a un matraz Erlenmeyer o tubo Nessler. En caso de realizar diluciones,
tomar el volumen de muestra con pipeta volumtrica y depositarlo en un matraz
volumtrico de 50 mL, llevar a la marca de aforo con agua y posteriormente vertir el
contenido en un matraz Erlenmeyer o tubo Nessler. En donde se llevar al cabo el
desarrollo del color.

5 Adicionar 1 mL de la disolucin de sulfanilamida (5.6), y agitar varias veces. Permitir
que la mezcla reaccione de 2 min a 8 min.

6 Adicionar 1 mL de NEDA (5.7), y agitar varias veces, revisar que el pH est entre 1,9 y
2,5

7 Dejar reposar por lo menos 10 min pero no ms de 1 h, la presencia de nitritos
desarrolla una coloracin prpura.

8 Leer la absorbancia a 543 nm.

9 Correccin por color. Si el color de la muestra pretratada persiste, puede interferir
con la medicin de la absorbancia. Tratar otro volumen igual de muestra como se
describe en 10.2. En lugar de agregar las soluciones de sulfanilamida y NEDA,
adicionar 1 mL de HCl al 10 % y leer la absorbancia.

10 Corregir la absorbancia de la muestra por medio de la ecuacin :



donde :

A es la absorbancia corregida;

Am es la absorbancia de la muestra determinada;

Ab es la absorbancia del blanco, y

Ac es la absorbancia de la muestra empleada para correccin, de color. En caso de
muestras incoloras Ac=0.

11 Curva de calibracin: En matraces volumtricos de 50 mL preparar una serie de al
menos cinco patrones que contengan 1,0 g de N-N02, 2,0 g de N-N02, 3,0 g de N-
N02, 4,0 g de N-N02, 5,0, g de N-N02 a partir de la disolucin patrn de nitritos
(5.13) llevar a la marca con agua y proseguir como en (10.4, 10.5, 10.6 y 10.7)

12 Blanco: Llevar un blanco durante todos los pasos del mtodo ya sea cuando se
prepare curva de calibracin o cuando se analicen muestras.

CLCULOS

Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin de la recta que se
obtiene de las curvas de calibracin empleando la siguiente ecuacin:

y = mX + b

donde :
y es la absorbancia de la muestra;

m es la pendiente, y

b es la ordenada al origen.

Despejar X que sern g de N-N02 . Para calcular la concentracin de la muestra tomar
en cuenta los factores de dilucin que se realicen.

Reportar los resultados como mg/L de N-N02.

INTERFERENCIAS

Por su propiedad de precipitacin en las condiciones de la prueba interfieren los iones
siguientes: frrico (Fe3+), mercuroso (Hg+), plata (Ag+), bismuto (Bi+), antimonioso
(Sb3+), plomo (Pb2+), arico (Au3+),hexacloroplatinato (PtCl62-) y metavanadato
(VO32+). Interfieren el mtodo ciertas sustancias frecuentemente encontradas en
muestras de agua, principalmente: cloraminas, tiosulfatos, polifosfatos de sodio, entre
otras.

NOTA.- Se recomienda emplear matrices fortificadas para verificar las interferencias.



SEGURIDAD

substancias qumicas especificadas en ste mtodo. Debe tenerse un archivo de
referencia de las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo el
personal involucrado en estos anlisis.

Los cidos y bases concentradas empleados en este mtodo pueden causar severas
quemaduras e irritaciones en la piel, por lo que debe utilizarse ropa protectora tal como:
batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos compuestos qumicos.

El hidrxido de sodio en contacto con los ojos o piel, puede causar severa irritacin o
quemaduras. La inhalacin de vapores puede causar tos, dolor en el pecho, dificultad
para respirar o estado de inconsciencia.

La preparacin de todos los reactivos usados en este mtodo debe realizarse bajo una
campana de extraccin. Consultar las hojas de seguridad sobre manipulacin y
disposicin de stos.

Cuando se trabaje con cualquiera de los compuestos qumicos descritos en este mtodo,
debe usarse todo el tiempo equipo de seguridad tal como: guantes de ltex, bata de
laboratorio as como anteojos de seguridad.

MANEJO DE RESIDUOS

Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,
estatales y locales referente al manejo de residuos, particularmente las reglas de
identificacin, almacenamiento y disposicin de residuos peligrosos.

Cada laboratorio debe contemplar dentro de su Programa de Control de Calidad el destino
final de los residuos generados durante la determinacin.

Los desechos cidos se deben neutralizar para su posterior desecho.

Todas las muestras que cumplan con la Norma de descarga a alcantarillado pueden
descargarse en el mismo sistema.



BIBLIOGRAFA

Ley Aguas Nacionales, publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 1 de diciembre
de 1992.

NOM-001-SEMARNAT-1996 Que establece los lmites mximos permisibles de
contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales.,
publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 6 de enero de 1997.

NMX-AA-099-1987 Proteccin al ambiente - Calidad del agua - Determinacin de
nitrgeno de nitritos en agua. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 11 de febrero de 1987.

NMX-Z-013/1-1977 Gua para la Redaccin, Estructuracin y Presentacin de las Normas
Mexicanas. Declaratoria de vigencia publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 31
de octubre de 1977.

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 20th Edition 1998, 4500-
NO2- B Colorimetric Method.

Manual de Prácticas Iamb PDF

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Manual de Prácticas Iamb PDF

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE INGENIERA AMBIENTAL I ITSM

ACADEMIA DE INGENIERA AMBIENTAL

de 10:1. La tcnica no se debe usar

/L; existen otros procedimientos

) tiene una DQO de 1,1 mg de O

-N, y como las

presente en el volumen de muestra original. Hacer un blanco de

/L, la desviacin estndar obtenida fue de

You might also like