UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURMAC

PATOLOGA CLNICA
PRACTICA N 3
TCNICAS DE FROTIS HEMATOLGICO

INTRODUCCIN
El frotis sanguneo es esencial el estudio clnico hematolgico. Este anlisis clnico
arroja datos importantes como la cantidad, morfolgicos, y dimensiones de las
clulas componentes de la sangre. Lo anterior favorece el esclarecimiento de
patologas sanguneas. Adems el frotis sanguneo puede arrojar informacin a
seca de patgenos existentes en el torrente sanguneo.
La importancia de un buen frotis y su correcta tincin son fundamentales a la hora
de la observacin al microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca
informacin tanto cuantitativa como cualitativa.
El frotis sanguneo es realizado en forma rutinaria en todo hemograma, ya sea que
se realice en forma manual o automatizada. En este ltimo sistema, cuando hay
normalidad en todos los elementos, se obtienen los datos grficamente desde el
equipo y es opcional el uso del frotis (lectura total, parcial o nada). Esto depender
del laboratorio y de la experiencia del profesional. La importancia de un buen
extendido y su correcta tincin son fundamentales a la hora de la observacin al
microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca informacin acerca de
la morfologa celular, y en algunos casos es esta observacin la que entrega al
Clnico la informacin que requiere para realizar su diagnstico.

OBJETIVOS
Realizar el frotis sanguneo de las diferentes especies animal.

Familiarizarse con el frotis hematolgico y su correcta tincin.

MATERIALES
o Sangre de especies animales.
o Porta objetos
o Colorante Wright
o Microscopio

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MARCO TERICO
Frotis sanguneo
Es la extensin de sangre realizada sobre un portaobjeto y a partir de la cual se
observarn, al microscopio, las caractersticas de las clulas sanguneas.
Una extensin o frotis sanguneo consiste en recubrir parcialmente una porta con
una gota de sangre, de tal manera que las clulas de sta se dispongan formando
una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automticamente. Lo ltimo
se realiza mediante un aparato (spinner) que centrifuga rpidamente la porta con
la sangre depositada en su centro. Con este aparato se obtienen unos frotis que
presentan una distribucin celular muy homognea.

1. PARTES DE UNA EXTENSIN.
a) CABEZA.
Es la zona inicial de la extensin.
Es la regin ms gruesa.
En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman
aglomerados (pilas de monedas).
b) CUERPO.
Es la zona media del frotis.
Su espesor es el apropiado.
En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos.
Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que limita
con la cola.
c) COLA.
Es la zona final de la extensin.
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Suele tener un aspecto redondeado.
Es la regin ms fina.
En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y
monocitos), y adems. los hemates estn deformados y presentan una tonalidad
uniforme.
En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si
son grandes.
d) BORDES.
Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes.
Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar
deformadas o destruidas
2. CARACTERSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIN.
La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta.
La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a l.
El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino
deshilacha miento recibe el nombre de "barbas".
Toda la extensin ha de ser fina y homognea.
Los bordes laterales de la extensin deben estar separados de los bordes
del porta por 1 mm aproximadamente.
Una extensin normal ha de tener una longitud de las partes del
portaobjetos.
El uso de teido res automticos exige la realizacin de extensiones ms
cortas que las consideradas normalmente como correctas (con una longitud
de la mitad del portaobjetos).






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3. DEFECTOS DE UNA EXTENSIN.
Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud y excesivo grosor. Esto
se debe a un inadecuado tamao de la gota de sangre o/y a un error en la
velocidad o/y a un fallo en el ngulo de extensin de la misma.
Presencia de escalones o estras. Esto est ocasionado por una falta de
uniformidad en el deslizamiento de la gota.
Existencia de abundantes zonas redondeadas que carecen de sangre. Esto
se produce por la presencia de restos de grasa o de suciedad en el porta.
Extremo final excesivamente dentado.




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4. UTILIDAD DE LAS EXTENSIONES.
El estudio de las extensiones sanguneas es esencial para el anlisis morfolgico
de las clulas hemticas y para la realizacin del recuento diferencial linfocitario
(RDL). Adems, es imprescindible para la distincin de una autntica trombopenia
de una pseudotrombopenia producida por agregados plaquetarios.
La investigacin de las extensiones tambin es til para la comprobacin de las
alarmas que proporcionan los auto analizadores hematolgicos

5. REALIZACIN DE UNA EXTENSIN SANGUNEA.
Las extensiones sanguneas se llevan a cabo deslizando una porta sobre otro en
el que se ha depositado previamente una gota de sangre. Con esto se obtiene una
fina capa de clulas sanguneas que puede ser adecuadamente observada con el
microscopio.

Tcnica
Con los dedos ndice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta
normal (porta soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa.
Tambin puede apoyarse, simplemente, el porta soporte sobre el extremo
del dedo corazn de la mano que lo sujeta. De esta forma, el porta soporte
forma un ngulo con la mesa.
Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar
una pequea gota de sta (de unos 5 microlitros) en la cara superior de ese
porta, a no menos de 2 cm del extremo opuesto al que agarra la mano.
Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco
por delante de la gota de sangre y formando un ngulo de 45 con el porta
soporte. Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para
adaptarlo a esta funcin.
Desplazar suavemente hacia atrs el porta extensor, hasta que alcance la
gota de sangre.
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Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del
porta extensor que toca el porta soporte.
Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta
extensor hacia delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una
velocidad media. Este deslizamiento debe acabar, aproximadamente, a 1
cm del extremo final del porta soporte, con un movimiento de ascensin del
porta extensor.
Secar rpidamente la extensin, agitndola al aire, para que sus clulas no
se distorsionen.
Escribir el nombre del enfermo, en la porta que soporta la extensin.


















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PROCEDIMIENTO

1. se realiz el mtodo de las dos porta objeto.

I. se deja caer una mnima gota de sangre en un extremo del
portaobjeto.






II. Con uno de los portaobjetos colocar en el medio de la gota de
sangre para que esto se extienda a lo largo del borde de esta.




III. Con una velocidad constante jalar la posicin que uno desea
para poder finalmente el frotis de sangre.












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IV. Dejar secar a temperatura ambiental.


V. Luego de que el frotis este completamente seco se realizara la
coloracin Wright. Se jera caer de 2 a 3 gotas y dejara secar por
un tiempo de 5 minutos aproximadamente.







VI. Observacin al microscopio, es en donde se ver si el frotis es
buena o mala como la coloracin.














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RESULTADOS
La prctica de frotis hematolgico, se realiz en varios intentos ya que no sala
como debera una capa muy fina para poder observar las clulas, por la cual en
varios intentos se pudo obtener un frotis medianamente observables.

CONCLUSIONES

De esta prctica concluya que es una de las herramientas fundamentales y ms
sencillas para poder observar las patologas sanguneas y ms.


CUESTIONARIO

1.- tcnicas de frotis hematolgico.

Tcnica con cubreobjetos
El mtodo de preparacin de extendidos con cubreobjetos es una tcnica
ms antigua, que en la actualidad slo se usa raras veces para los
extendidos de sangre perifrica. La nica ventaja de esta preparacin es su
distribucin excelente de los leucocitos, lo que a su vez permite obtener
frmulas diferenciales ms exactas. Deben usarse cubreobjetos de vidrio
completamente limpios. No obstante, rotular, transportar, teir y almacenar
estos extendidos pequeos y frgiles plantea muchos problemas. En la
figura 3 se muestra la tcnica correcta para la realizacin de este tipo de
extendidos.

a) Coloque una gota pequea de sangre o de aspirado de mdula sea
sobre un cubreobjetos limpio (22 * 22 mm) y coloque otro cubreobjetos
encima, para permitir que la sangre se esparza por ambos.

b) Seguidamente se hacen girar uno sobre otro para crear dos xtendidos
delgados, uno en cada cubreobjetos.


c) Separar los cubreobjetos rpido pero con cuidado. Esto se hace jalando
lateralmente en direccin opuesta uno del otro (no hay que levantar los
cubreobjetos). Los dos extendidos pueden teirse y montarse sobre un
portaobjetos de vidrio de 75 * 25 mm.
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2.- caractersticas de clulas sanguneas de las especies animales
Los eritrocitos, al igual que los del hombre, son anucleados, y, con alguna excepcin,
como en los miembros de la familia Camelidae, toman la forma de discos bicncavos. En
los Camelidae (camellos, llamas, vicuas, alpacas y guanacos) los eritrocitos, aunque
tambin anucleados, son planos y elpticos.
Son ms pequeos que los de las aves y reptiles, y, en concreto, los eritrocitos ms
pequeos los tienen el ciervo, la oveja y las cabras. Existe una gran variacin entre las
especies, particularmente entre mamferos, desde el ms pequeo tamao corpuscular,
de 1'5 mm en el lesser Malay chevrotain, al ms grande, de 9
m, presentes en los elefantes y algunos grandes roedores.
Dado que los animales con eritrocitos pequeos tienen cantidades elevadas de clulas y
viceversa, el hematocrito (VPC) es relativamente constante en los mamferos.
En los mamferos, la eritropoyesis tiene lugar en la mdula sea, y en general consiste en
una serie de cambios en los eritroblastos, entre los que estn la reduccin del tamao del
citoplasma y prdida del ncleo, disminucin de la basofilia citoplasmtica y adopcin de
las funciones caractersticas, como son la sntesis de hemoglobina y la adquisicin de una
forma adecuada para el intercambio de gases y la correcta circulacin a travs de los
vasos, podemos ver diferentes pasos o estados en la maduracin de los eritrocitos:
Proeritroblasto: clula redondeada de gran tamao, con un ncleo grande, excntrico o
central que ocupa la mayor parte de la clula, cromatina nuclear finamente granulada y
espacios nucleolares. El citoplasma es fuertemente basfilo.
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Eritroblasto basfilo: clula redondeada pequea con cromatina nuclear granulada, sin
nuclolo. Citoplasma basfilo.
Eritroblasto policromatfilo: clula redonda de menor tamao, con el ncleo ms
pequeo en relacin al citoplasma; grupos irregulares de cromatina. Citoplasma gris o
ligeramente eosinfilo.
Eritroblasto ortocromtico: citoplasma eosinfilo o algo basfilo, ncleo de tamao
reducido, uniformemente basfilo o picntico.
Reticulocito: clula ligeramente ms pequea, sin ncleo. Citoplasma eosinfilo o con
tinte basfilo. En los Camelidae puede ser ligeramente oval. La tincin del reticulocito
revela la presencia de uno o ms grnulos o filamentos.
Eritrocito maduro: ms pequeo, clula redonda eosinfila con cierta palidez central que
indica biconcavidad excepto, como ya hemos dicho, en los Camelidae, donde es oval y no
existe la palidez central.
Existen diferencias marcadas entre especies respecto a la vida media, aunque en general
est directamente relacionada con la actividad metablica y el peso corporal. Por lo tanto,
la supervivencia de los eritrocitos es ms corta y la eritropoyesis ms activa en los
animales de menor tamao. Parece que existe una relacin directa entre la proporcin
normal de recambio eritroctico y la proporcin a la cual el animal puede reemplazar los
eritrocitos perdidos por una hemorragia o hemolisis, esto es ms rpido en los pequeos
animales que en los grandes, as, en los pequeos mamferos es normal encontrar un
moderado nmero de eritrocitos policromticos en un frotis as como un nmero de
reticulocitos relativamente elevado y, gracias a eso, estos animales responden rpida y
drsticamente a la prdida de eritrocitos. En contraste, en la mayora de los grandes
mamferos los eritrocitos policromticos rara vez se observan en condiciones normales,
siendo bajo el nmero de reticulocitos, de manera que en algunas especies, incluidos
caballos y otros Perisodctilos, los eritrocitos no entran en la circulacin sangunea hasta
que no estn completamente maduros, ni tampoco se observan eritrocitos policromticos
en frotis de sangre perifrica, incluso durante la recuperacin de una hemorragia aguda.
En los mamferos tambin se observan en el citoplasma del eritrocito corpsculos de
Howell-Jolly y cuerpos de Heinz, que ya describamos al hablar de los eritrocitos
humanos. Los cuerpos de Howell-Jolly, aunque son signo de ciertas disfunciones en
humanos, pueden observarse bajo condiciones normales en algunos carnvoros,
roedores, marsupiales y pequeos primates. Por otra parte, los cuerpos de Heinz han sido
asociados a tratamientos con fenotiazina y diferentes intoxicaciones segn la especie,
como la intoxicacin por hojas de arce en caballos o por cobre en ovejas, adems de la
exposicin al colorante azul de metileno en gatos, deficiencia de selenio en vacas o
tratamiento prolongado con corticosteroides en perros, en cualquier caso, estos cuerpos
de Heinz tambin pueden verse sin estar asociados a una enfermedad en algunas
especies como el gato o la marmota comn.
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Tambin puede aparecer el llamado punteado basfilo, pequeos grnulos distribuidos
irregularmente por el citoplasma que son agregados de ribosomas que se tien de
prpura o azul con la tincin de Romanowsky, su presencia normalmente se considera
patolgica, aunque pueden observarse en las primeras semanas de vida de los
artiodctilos sanos, cuando el recambio de los eritrocitos fetales por las clulas adultas
est en marcha.
Los leucocitos tambin se dividen en granulocitos polimorfonucleados y agranulocitos
mononucleares, veremos primero los granulocitos:
Los leucocitos con citoplasma granular estn presentes en la sangre de todos los
mamferos, y, como en el hombre, se clasifican en neutrfilos, eosinfilos y basfilos en
base a la reaccin de sus grnulos citoplasmticos con la tincin de Romanowsky. En
general son bastante similares a los granulocitos humanos.
Existe tambin variacin entre las distintas especies en lo relativo al tamao, forma y
distribucin de las caractersticas de tincin de los grnulos citoplasmticos, en especial
en los de los neutrfilos.
1.1. Neutrfilos: sus grnulos pueden ser basoflicos, como en el chimpanc o
fuertemente eosinoflicos como en el conejo y algunos roedores; adems, en algunas
especies, su citoplasma aparece granulado o con partculas rosa plido, de forma que en
estos animales las clulas se clasifican como granulocitos neutrfilos en base a su ncleo
polimrfico as como por la ausencia de granulacin eosinoflica o basoflica especfica
Como en los humanos, es el ms abundante en todos los mamferos y su funcin es la
degradacin bacteriana, mediante quimiotaxis, opsonizacin, ingestin y lisis.
1.2. Eosinfilos y basfilos: sus grnulos tambin presentan variaciones entre las
especies en lo relativo a tamao, nmero, forma e intensidad de su tincin, por otra parte,
el citoplasma de los eosinfilos, cuando es visible, suele aparecer de un color azul plido.
Los agranulocitos de los mamferos son los mismos que los del hombre: linfocitos y
monocitos.
2.1. Linfocitos: los linfocitos tpicos son regulares, redondos y con el ncleo redondo
central o ligeramente excntrico y un citoplasma que vara de claro a azul plido. Se
hallan presentes en la sangre de todos los mamferos y, en algunas especies, el
citoplasma de una parte de estas clulas contiene unos cuantos grnulos azurfilos o
basfilos.
Estn relacionados con las reacciones inmunolgicas y, en mamferos, pueden estar
divididos en dos grandes grupos con diferentes funciones y propiedades de membrana,
son los linfocitos B que se encargan de producir anticuerpos y los linfocitos T
responsables de la inmunidad celular. No pueden ser diferenciados sin el uso de tcnicas
especializadas.
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La linfopoyesis tiene lugar en el bazo y en el timo y, adicionalmente, en los ndulos
linfticos, placas de Peyer y por extensin en la mdula sea. Los linfocitos inmaduros se
distinguen de las formas ms maduras por su mayor tamao, basofilia citoplasmtica y
por la presencia de un nuclolo.
2.2.Monocitos: son normalmente ms grandes que los linfocitos y pueden diferenciarse
por la presencia de una tincin relativamente plida, un ncleo arrionado y un citoplasma
abundante, ligeramente opaco y azul grisceo, que puede estar algo granulado. Tambin
se encuentran en la sangre de todos los mamferos, aunque en muchas especies, en
mayor cantidad en animales jvenes que en los adultos.
En la mayora de las especies, se hallan en poca cantidad pero en los elefantes se
encuentran en gran cantidad unas clulas con el ncleo claramente bilobulado y
citoplasma azul grisceo, que tienen las caractersticas citoqumicas de los monocitos.
Plaquetas: por definicin, las clulas sanguneas hemostticas de todos los animales
vertebrados son clasificadas correctamente como trombocitos; en mamferos, sin
embargo, estas clulas hacen referencia a las plaquetas a fin de tener presente las
notables diferencias morfolgicas que las distinguen de los otros vertebrados.















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Podemos resumir este trabajo, de manera muy esquematizada, en el siguiente cuadro:
CLULAS MAMFEROS AVES REPTILES
ERITROCITOS
Disco bicncavo anu-cleado, oval en
cam-lidos. Pueden aparecer cuerpos
de Howell-Jolly, de Heinz y pun- teado
basfilo, as co-mo pilas de moneda.
Nucleado, oval.
Pueden
aparecer cuer-
pos de Heinz y
punte- ado
basfilo.
No se han visto
pilas de
moneda.
Nucleado, oval.
No se han visto ni cuerpos
de ningn tipo ni punteado
basfilo ni pilas de
moneda.
CLULAS HOMEOSTTICAS
Plaquetas anucleadas, pueden aparecer
fila- mentosas.
Trombocitos
nucleados. Trombocitos nucleados.
L
E
U
C
O
C
I
T
O
S
GRANULO
- CITOS.
NEUTR
FILOS/
HETER
FILOS.
Neutrfilos: grnulos
basoflicos o eosinof-
licos, pueden aparecer
grnulos rosa plido.
Ncleo lobulado.
Heterfilos:
grnulos ovales
o espiculados
eosinoflicos.
Ncleo lobulado.
Heterfilos: grnulos
ovales o espiculados
eosinoflicos.
Ncleo redondeado, oval o
lobulado.

EOSINFILOS.
Ncleo lobulado, cito-
plasma azul plido.
Sin diferencias
impor-tantes.
Sin diferencias impor-
tantes.

BASFILOS. Ncleo lobulado.
Sin diferencias
impor-tantes.
Sin diferencias impor-
tantes.

AGRANU- LOCITOS. LINFOCITOS.
Redondeados, ncleo
redondo, pueden tener
grnulos azurfilos o
basfilos. Linfopoye-sis en
el bazo, timo, ndulos
linfticos,pla-cas de Peyer
y mdula sea.
Sin diferencias
impor-tantes en la
morfolo- ga.
Linfopoyesis en el
bazo, timo y bolsa
de Fabricio.
Sin diferencias impor-
tantes en la morfolo- ga.
Linfopoyesis en el bazo,
timo y glndulas tonsilares.

MONOCITOS. Ncleo arrionado.
Sin diferencias
impor-tantes.
Sin diferencias impor-
tantes.

AZUR FILOS. No hay. No hay.
Redondos, destaca la
reaccin metacromti- ca
del citoplasma.




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BIBLIOGRAFA

http://qbhematologia.files.wordpress.com/2011/07/prc3a1ctica-2.pdf

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0258-
65762010000200001

http://ocw.um.es/cc.-de-la-salud/fisiologia-
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los-animales-domesticos.pdf

http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39584.pdf

http://es.slideshare.net/pajitacoxito/frotis-o-extensin-de-sangre-11184885