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Estudos de Expresso Gnica e Possibilidades de Aplicao no Melhoramento Gentico de Pessegueiro

[Prunus persica (L.) Batsch]
Documentos 370
Estudos de Expresso Gnica
e Possibilidades de Aplicao
no Melhoramento Gentico de
Pessegueiro [Prunus persica
(L.) Batsch]
Embrapa Clima Temperado
Pelotas, RS
2013
ISSN 1516-8840
Dezembro, 2013
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Miriam Valli Bttow
Sandro Bonow
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Autor(a) foto da capa: Miriam Valli Bttow
1 edio (2013)
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A reproduo no autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui violao
dos direitos autorais (Lei N 9.610).
Dados Internacionais de Catalogao na Publicao (CIP)
Valli Bttow, Miriam
Estudos de expresso gnica e possibilidades de aplicao no melhoramento
gentico de pessegueiro [Prunus persica (L.) Batsch] / Miriam Valli Bttow e Sandro
Bonow Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2013.
27p. (Embrapa Clima Temperado. Documentos, 1516-8840, 370)
1. Biologia Molecular. 2. Expresso Gnica. 3. Melhoramento gentico vegetal.
4. Pssego. I. Bonow, Sandro. II. Ttulo. III. Srie.

CDD 572.865
Embrapa 2013
Autores
Miriam Valli Bttow
Biloga, D.Sc. em Gentica e Biologia Molecular,
pesquisadora da Fepagro Serra do Nordeste,
Caxias do sul, RS, miriam-buttow@fepagro.
rs.gov.br
Sandro Bonow
Engenheiro-agrnomo, D.Sc em Agronomia,
pesquisador da Embrapa Clima Temperado,
Pelotas, RS, sandro.bonow@embrapa.br
Apresentao
O pessegueiro uma das espcies frutferas de maior relevncia em
regies de clima temperado. O Estado do Rio Grande do Sul possui uma
tradio de mais de 50 anos de pesquisa em melhoramento gentico
de pssego, visando sempre cultivares mais adaptadas s condies
edafoclimticas e aos interesses dos consumidores.
Nas ltimas dcadas, o desenvolvimento de inmeras tcnicas de
biologia molecular tem ajudado a enfrentar alguns dos maiores desafos
desta cultura, como por exemplo maior qualidade de fruto, propriedades
nutricionais e funcionais e durabilidade ps-colheita. Em locais com
invernos amenos, no entanto, a produtividade pode ser ameaada
devido necessidade que esta cultura tem de acumular horas de frio
antes da forao.
Este documento revisa alguns aspectos bsicos da biologia molecular
e mostra como as pesquisas mais recentes nesta rea podem ser
importantes para o avano no melhoramento gentico de diversas
espcies, especialmente o pessegueiro.
Clenio Nailto Pillon
Chefe-Geral
Sumrio
Introduo....................................................................................9
Conceitos bsicos de biologia molecular.........................................11
Os cidos nucleicos.................................................................11
Da sequncia de DNA sntese proteica......................................13
Estudos de expresso gnica em plantas........................................14
RT-qPCR: uma abordagem para estudos de expresso gnica............16
Oportunidades de pesquisa com expresso gnica em pessegueiro....17
Consideraes finais....................................................................19
Referncias.................................................................................19
Estudos de Expresso Gnica
e Possibilidades de Aplicao
no Melhoramento Gentico de
Pessegueiro [Prunus persica (L.)
Batsch]
Introduo
Miriam Valli Bttow
Sandro Bonow
O ramo da Biologia conhecido como biologia molecular possui especial
foco na estrutura e funo dos cidos nucleicos DNA e RNA e seus
produtos de expresso, as protenas. Nas ltimas dcadas, o advento
das tecnologias de sequenciamento e o mapeamento completo do
genoma de muitas espcies de plantas cultivadas, tornou o estudo dos
genomas uma tarefa muito mais interessante e fortemente aplicvel
para o melhoramento.
A pesquisa em expresso gnica, por sua vez, dedicada ao estudo
de como, quando e quanto os genes, contidos no DNA, so expressos
ao longo do desenvolvimento e em resposta a estresses biticos e/
ou abiticos. De modo geral, cada clula vegetal contm os mesmos
genes. A diferena entre as clulas da folha em relao s presentes
nas fores, por exemplo, o nvel de expresso destes genes.
Simplifcadamente, a informao que est contida nos genes (DNA) da
planta transcrita em RNA. O RNA, ento, traduzido em protenas.
Variaes das quantidades de transcritos (informao contida no RNA)
e do contedo de protenas faz com que as clulas sejam, em ltima
anlise, diferentes.
Da mesma forma, cultivares de uma mesma espcie possuem
diferenas na expresso de seus genes, sendo que a identifcao de
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genes de interesse diferencialmente expressos entre cultivares pode
ser um caminho efciente na seleo precoce de gentipos promissores
para o melhoramento (LEIDA et al., 2012b). Nos estudos de expresso
gnica, uma das tcnicas que se destacam atualmente a tcnica RT-
qPCR (do Ingls quantitative reverse-transcriptase polymerase chain
reaction). Esta tcnica permite a identifcao da presena de RNAs
especfcos de um gene, alm da sua quantifcao, possibilitando
estudos de expresso diferencial, ou seja, quais genes apresentam
alterao na expresso quando a planta est em determinada condio
ou ambiente (BUSTIN et al., 2005).
As espcies frutferas de clima temperado, como o pessegueiro,
tm um perodo de dormncia que permite que as plantas suportem
temperaturas muito frias. O preparo das plantas para as condies
desfavorveis compreende o acmulo de reservas, a perda de
rgos sensveis (como as folhas) e o desenvolvimento de estruturas
que protegem os meristemas. Portanto, no perodo de dormncia
acontecem vrios eventos que iniciam pela induo e terminam na
superao da dormncia. A regularidade de baixas temperaturas
durante o perodo hibernal fundamental para a induo e adequada
superao da dormncia. O suprimento inadequado em frio para
espcies de clima temperado determina a ocorrncia de problemas
relacionados brotao, afetando o potencial produtivo destas
espcies. Dentre as principais estratgias utilizadas para minimizao
dos problemas decorrentes do insufciente acmulo de frio, destaca-
se a seleo e uso de cultivares de menor requerimento em frio
(HAWERROTH et al., 2010). Erez (2000) enfatiza que o aspecto mais
crtico no cultivo de espcies frutferas de clima temperado em zonas
com baixo acmulo de frio hibernal a superao da dormncia de
forma natural. Por outro lado, tanto a induo como a superao da
dormncia podem ter problemas. No primeiro caso, por ela acontecer
tarde demais, podendo resultar em danos a rgos que no estavam
preparados. J na superao da dormncia, existe o risco de que esta
ocorra demasiado cedo e as gemas (e ou fores) sejam danifcadas
por geadas. Os programas de melhoramento em pessegueiro tm
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trabalhado intensamente no sentido de desenvolver cultivares com
menor necessidade em frio e, portanto, melhor adaptadas a estas
condies (HAWERROTH et al., 2010).
Entender os processos relacionados com a transcrio e expresso
de genes pode abrir novos caminhos para a pesquisa de plantas em
clima temperado, aumentando a precocidade e efcincia da escolha
de gentipos e selees em programas de melhoramento gentico.
Portanto, o objetivo deste trabalho foi reunir aspectos bsicos da
biologia molecular, importantes para a compreenso da tcnica de RT-
qPCR e seu potencial para estudar os principais alvos da pesquisa e
melhoramento em pessegueiro.
Conceitos bsicos de biologia molecular
Os cidos nucleicos
Entre as caractersticas dos organismos vivos, a capacidade de
autorreplicao fundamental. A maneira como este processo
ocorre, h muito tempo vem sendo objeto de estudo de inmeros
pesquisadores. Desde a descoberta do DNA por Friederich Miescher,
em 1869, levou muito tempo at que suas funes primordiais de
conterem e transmitirem a informao gentica fossem comprovadas
por Herschey, em 1953. Ainda em 1953, a estrutura em dupla-hlice
foi proposta por Watson e Crick e lanou as bases de como essa
molcula poderia ser duplicada. No mesmo laboratrio onde Miescher
descobriu o DNA, outra substncia muito semelhante, hoje conhecida
como RNA, foi descrita por Hoppe-Seyler (ZAHA et al., 2013).
O DNA (cido desoxirribonucleico) e o RNA (cido ribonucleico)
constituem os cidos nucleicos, macromolculas de extrema
importncia biolgica em todos os organismos vivos. As clulas
recebem instrues sobre quais protenas sintetizar e em que
quantidade, a partir destas molculas, responsveis por estocar
e transmitir a informao gentica na clula. Essa informao
decifrada atravs do cdigo gentico, cuja traduo resulta na sntese
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proteica. Portanto, conter a informao gentica signifca no somente
armazenar e transmitir ao longo das geraes, mas expressar, ou
seja, servir de molde para a sntese de RNAs e alguns desses serem
traduzidos nas protenas correspondentes (TURNER et al., 2004; ZAHA
et al., 2013).
Em contraste com o DNA, diferentes tipos de RNA esto presentes na
clula e desempenham funes especfcas. Os RNAs so classifcados
de acordo com a sua localizao e sua funo na clula: O mRNA (RNA
mensageiro) transfere a informao gentica do DNA aos ribossomos,
stio da sntese de protenas; o rRNA (RNA ribossomal) o componente
majoritrio dos ribossomos e o tRNA (RNA transportador) carrega os
resduos de aminocidos at os ribossomos para a sntese de protenas
(TURNER et al., 2004).
No incio dos anos 1950, Francis Crick sugeriu que haveria um fuxo
unidirecional de informao gentica do DNA atravs do RNA para uma
protena, ou seja, o DNA faz um RNA que faz uma protena. Esta
sentena fcou conhecida como dogma central da biologia molecular.
Atualmente se reconhece que a ampla confana no dogma central
correta, embora existam vrias modifcaes no esquema bsico. A
via primria permanece do DNA para o RNA para a protena. Tanto
nas clulas procariticas quanto nas eucariticas, o DNA transcrito
para uma molcula de mRNA e, ento, a mensagem traduzida em
uma sequncia de protena conforme o cdigo gentico. Entretanto,
existem algumas excees a este esquema bsico. Diversas classes
de vrus contm um genoma que consiste em uma molcula de RNA.
Em retrovrus, por exemplo no HIV, a molcula uniflamentar de RNA
convertida em DNA de dupla hlice. Este processo conhecido como
transcrio reversa, e a enzima responsvel - codifcada no genoma
viral, chamada de transcriptase reversa. O uso de transcriptases
reversas (RT) derivadas de vrus em inmeras tcnicas de laboratrio
revolucionou a biologia molecular (TURNER et al., 2004).
A sntese de DNA e RNA ocorre por processos semelhantes,
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entretanto, a funo biolgica de cada um desses processos bastante
diferente. Uma sequncia particular de DNA, codifcadora de uma
informao ou protena, corresponde a um gene. J o conjunto de
genes de um organismo, o genoma, possui sempre a mesma funo
bsica, que de servir como repositrio replicativo da informao
codifcada pelo DNA que o constitui. Enquanto a sntese de DNA
deve ser precisa e uniforme, a transcrio espelha o estado fsiolgico
da clula e, portanto, extremamente varivel para atender s suas
necessidades. Assim, a sequncia de mRNA alterada aps ser
transcrita do DNA, em um processo de edio do RNA, de modo que a
sequncia do DNA no integralmente usada para codifcar o produto
proteico (TURNER et al., 2004).
Diversos avanos signifcativos tm sido obtidos atravs do isolamento,
anlise e sntese de sequncias de DNA e de genes, e da introduo
desses DNAs recombinantes em clulas vivas para o estudo da sua
funo e dos mecanismos que controlam sua expresso. Atualmente,
os esforos esto voltados para o entendimento das relaes entre
cidos nucleicos e protenas que resultam em, virtualmente, todos os
eventos genticos na clula (TURNER et al., 2004; WANG et al., 2010;
ARS et al., 2012).
Da sequncia de DNA sntese proteica
Os cidos nucleicos possuem papel fundamental no armazenamento e
transmisso da informao gentica. O processo da cpia de regies
especfcas de DNA (os genes) numa molcula de mRNA e a passagem
da informao contida na sequncia de nucleotdeos desse mRNA
para uma sequncia de aminocidos, resulta na expresso dos genes
contidos em determinado organismo, ou expresso gnica.
As molculas de RNA so sintetizadas por um processo de transcrio,
similar replicao do DNA. A transcrio deve ser iniciada e
terminada em pontos especfcos da sequncia do DNA, e a clula
controla quando determinadas sequncias devem ser transcritas e
quanto RNA deve ser sintetizado. Nesse processo, uma das duas
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ftas do DNA atua como modelo para que o pareamento de bases
complementares possa acontecer. O mRNA, ento transcrito, dirige
a sntese da molcula proteica. Em uma determinada clula e em
determinado momento, alguns genes so utilizados para transcrever
RNA em grandes quantidades, enquanto outros podem ser pouco ou
no so transcritos. A partir de um gene ativo, grandes quantidades
de mRNAs podem ser sintetizados em cada clula. Alm disso, cada
molcula de mRNA pode ser traduzida em milhares de cpias de uma
cadeia polipeptdica, isto , a informao contida numa pequena regio
do DNA pode dirigir a sntese de milhares de cpias de uma protena
especfca (ZAHA et al., 2013). Portanto, a transcrio representa a
diversidade e a complexidade da expresso dos genes contidos em
um determinado genoma. Este conjunto de transcritos de uma clula
ou conjunto de clulas, incluindo mRNAs que codifcam protenas,
e RNAs pequenos no codifcantes, como RNA ribossomal e RNA
transportador, formam o transcriptoma (TURNER et al., 2004).
As propriedades biolgicas de cada tipo de clula so amplamente
determinadas pelas protenas expressas dentro dela. Este conjunto
de protenas expressas importante para a arquitetura celular, para
as atividades enzimticas, as interaes com o ambiente, e diversas
outras propriedades fsiolgicas. No entanto, em determinado
momento da vida da clula, apenas uma frao dos RNAs e protenas
codifcadas em seu genoma expressa. Em momentos diferentes, o
perfl dos produtos expressos pode diferir marcantemente, tanto em
tipos de protenas como em que nveis so expressas. A maioria da
regulao gnica tida como ocorrendo atravs da transcrio gnica.
O mecanismo bsico pelo qual a expresso gnica regulada depende
dos sinais moleculares de fora ou de dentro da clula, os quais levam
ligao de protenas reguladoras a stios especfcos do DNA, e a
ligao destas protenas modula a taxa de transcrio (GRIFFITHS et
al., 2008).
Estudos de expresso gnica em plantas
As plantas possuem a habilidade de alterar consideravelmente seus
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padres de expresso gentica em resposta a alteraes ambientais
como temperatura, disponibilidade de gua e ataque por patgenos
(NICOT et al., 2005; WINFIELD et al., 2010). O ambiente percebido
pelas plantas atravs de um sinal particular, o qual pode ser ou no
especfco de algum tipo de estresse. Essa pista na transcrio de
um sinal dentro da planta a leva a amplas mudanas no metabolismo
celular, envolvendo mudanas na expresso de centenas de genes.
Algumas vezes, estas alteraes transcricionais so adaptaes bem
sucedidas que levam tolerncia, enquanto que em outras situaes,
a planta acaba falhando em se adaptar e tida como suscetvel
determinada condio. Um perfl de expresso pode, portanto, defnir
respostas sensveis e tolerantes (HAZEN et al., 2003).
A anlise do transcriptoma auxiliou a melhor compreenso das
respostas das plantas a diferentes tipos de estresse e, atravs destes
estudos, numerosos genes de resposta a estresse foram descobertos.
A sobreposio de genes induzidos sob vrias condies sugere que
existam interseces entre as vias de sinalizao (NICOT et al., 2005).
O tempo tambm outro fator crtico na regulao da transcrio.
Alguns genes tm sua expresso aumentada em determinado perodo e
depois continuam no mesmo nvel, enquanto que outros so ligados e
desligados. Em plantas de aveia estressadas por sal, foram descritos
quatro estdios de mudana de expresso: resposta instantnea,
resposta precoce, recuperao precoce e compensao do estresse.
Neste caso, acessos suscetveis obtiveram respostas similares aos
acessos tolerantes, porm responderam de forma mais lenta. Portanto,
aparentemente, a regulao rpida da transcrio foi responsvel pela
tolerncia a sal nos gentipos estudados (KAWASAKI et al., 2001).
Ainda, a descoberta de que existem mudanas de expresso gnica
durante a aclimatao no frio levou ao conhecimento detalhado de
uma das mais bem compreendidas rotas metablicas de respostas a
estresses abiticos (HAZEN et al., 2003; WINFIELD et al., 2010). Da
mesma forma, outros tipos de estresse podem ser explorados na busca
por uma correlao entre a expresso gnica e os mecanismos de
16
tolerncia e suscetibilidade em diferentes espcies e gentipos.
As mudanas no transcriptoma so, em grande parte, tecido-
especfcas. Esta uma condio esperada, j que muitos tipos
de estresse so tambm tecido-especfcos. Razes, por exemplo,
percebem fontes de estresse provenientes do solo, enquanto que
temperaturas extremas so percebidas pela biomassa acima do solo.
Alm disso, fsiologicamente, razes e ramos respondem seca de
formas diferentes. As razes podem continuar o alongamento, enquanto
que o crescimento dos ramos pode ser completamente inibido. A
consequncia desta resposta diferencial que as razes podem buscar
gua em solo mais profundo, enquanto que os ramos sem crescimento
conservam o consumo de gua. Assim sendo, fca evidente que
existem diferenas entre tecidos e rgos em resposta a estresse
(HAZEN et al., 2003).
Em muitas espcies arbreas perenes, a superao da dormncia
responde ao acmulo sazonal de horas de frio e diversos estudos
recentes usaram abordagens globais a fm de analisar os mecanismos
moleculares deste processo. Os perfs de expresso durante a induo,
manuteno e superao da dormncia foram realizados em espcies
como Populus tremula, carvalho, framboesa, videira, pssego e
damasco. Estes estudos descreveram um conjunto inicial de genes
candidatos envolvidos na induo de dormncia por frio e luminosidade
em espcies arbreas (JIMNEZ et al., 2010). Em pssego, alguns
fatores de transcrio codifcados por uma famlia de genes conhecida
como DORMANCY ASSOCIATED MADS-box (DAM) esto relacionados
com esta rota metablica, porm outros elementos regulatrios ainda
no foram identifcados. Alm disso, a regulao dos genes DAM ainda
no conhecida a nvel molecular. A expresso de alguns genes desta
famlia, relacionados com o cido abscsico e estresse por seca, esto
tambm correlacionados com o processo da dormncia em cultivares
de pssego (LEIDA et al., 2012a).
O entendimento das respostas regulatrias das plantas aos diferentes
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tipos de condies ambientais tem aplicao direta no melhoramento
gentico das plantas (HAZEN et al., 2003). Existe um grande potencial
para melhorar a tolerncia ao estresse atravs tanto da engenharia
gentica quanto do melhoramento convencional. Os estudos de perfs
de transcrio podem aumentar o conhecimento de rotas metablicas
de resposta a estresse e fornecer novos caminhos para a avaliao e
seleo de gentipos.
RT-qPCR: Uma abordagem para estudos de expresso gnica
A quantifcao dos nveis de expresso gnica um passo
fundamental em, virtualmente, todos os aspectos da biologia
molecular. Alm disso, particularmente importante quando genes
que so expressos especifcamente sob certas condies ambientais
devem ser comparados. Entre as tcnicas comuns para avaliar nveis
de expresso gnica destacam-se a hibridizao Northernblot e a PCR
mediada por transcriptase reversa. Ambas as tcnicas so prticas para
a anlise de pequenos conjuntos de genes e so complementadas pela
anlise de microarranjos, a qual rotineiramente utilizada em perfs de
expresso globais, em larga escala (HONG et al., 2008).
Recentemente a RT-qPCR tem sido o mtodo de escolha para medir os
nveis de expresso em mltiplas amostras, envolvendo um limitado
nmero de genes (BUSTIN et al., 2010). A tcnica de RT-qPCR
tornou-se extremamente til para a deteco e quantifcao dos
nveis de transcrio do RNA mensageiro mRNA de determinado
gene de interesse, devido sua alta sensibilidade, especifcidade e
reprodutibilidade, pela facilidade de dispensar o ps-processamento do
PCR e permitir uma comparao direta entre RNAs que diferem muito
em abundncia. A base desta tcnica reside no processo de transcrio
reversa (RT) seguida da reao em cadeia da polimerase (PCR) com a
incorporao de molculas fuorescentes covalentemente ligadas ou
no a nucleotdeos, as quais podem ser quantifcadas durante a cintica
da reao (em tempo real). Os produtos formados so monitorados a
cada ciclo de reao, o que permite uma deteco rpida e especfca
dos produtos de amplifcao. Esta tcnica fornece uma acurada e
sensvel quantifcao dos transcritos, mesmo em genes com nveis de
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expresso muito baixos e atualmente o mtodo que apresenta maior
sensibilidade e especifcidade na anlise de transcritos (GACHON et al.,
2004; HONG et al., 2008).
Para quantifcar a expresso gnica acuradamente, muitas variaes
experimentais devem ser levadas em conta: qualidade e quantidade
do material inicial, presena de inibidores em diferentes materiais
amostrais, desenho de primers (iniciadores), extrao de RNA e
efcincia de retrotranscrio. A seleo de um gene mais estvel
ou um conjunto de genes para serem usados como controle interno
tambm um passo crtico para controlar a variabilidade entre
amostras para estudos de expresso gnica quantitativa com a tcnica
de RT-qPCR (TONG et al., 2009). Idealmente, o gene de referncia e
o gene alvo devem ter intervalos similares de expresso nas amostras
utilizadas (VANDESOMPELE et al., 2002).
Desde ento, foram estudados genes de referncia para muitas
culturas, como por exemplo arroz (JAIN et al., 2006), feijo (BORGES
et al., 2012), ervilha (DIE et al., 2010), pssego (TONG et al., 2009),
algodo (ARTICO et al., 2010), entre outras. Estes estudos mostraram
que muitas vezes no possvel encontrar um gene de referncia que
atinja todas as exigncias de normalizao, o que pode levar a erros
signifcativos de interpretao dos resultados. Assim, atualmente
recomendado utilizar de dois a trs genes de referncia em cada
estudo. Os genes mais comuns utilizados como referncia so o 18S
ribossomal, (18S rRNA), -actina (ACT) e o gliceraldedo-3-fosfato
desidrogenase (GAPDH). Ainda assim, a seleo adequada de genes de
referncia ir depender sempre da natureza e mbito do experimento a
ser realizado (HUGGETT et al., 2005; NICOT et al., 2005; TONG et al.,
2009).
Oportunidades de pesquisa com expresso gnica em
pessegueiro
O pessegueiro (Prunus persica L. Batsch) a espcie mais bem
caracterizada geneticamente dentro da famlia Rosaceae. De relevante
19
importncia econmica, a terceira fruta de clima temperado em
rea cultivada. Algumas caractersticas a tornam interessantes como
uma espcie modelo entre as espcies frutferas arbreas, como por
exemplo o sistema de cruzamento autocompatvel e um perodo juvenil
relativamente curto (2 a 3 anos). Alm disso, uma espcie diploide
com n=8 e um genoma pequeno, estimado em 0,61 pg de DNA por
ncleo diploide e equivalente a cerca de 300 Mpb por genoma haploide
(ARS et al., 2012).
No Brasil, os programas de melhoramento gentico em pessegueiro
tm trabalhado intensamente no sentido de desenvolver cultivares mais
adaptadas s condies de inverno ameno, isto , com mais baixa
necessidade de frio (BYRNE, 2010). A Embrapa Clima Temperado
possui uma longa tradio no melhoramento de pssego, sendo que
grande parte das variedades atualmente cultivadas so oriundas desta
instituio (RASEIRA et al., 2008).
Com o sequenciamento completo do genoma do pessegueiro em
2010 (ARS et al., 2012) e a disponibilidade de um enorme nmero
de sequncias expressas (ESTs, do Ingls expressed sequence tags)
em bancos de dados, foram impulsionadas vrias oportunidades de
estudos relacionados ao genoma e ao transcriptoma em Prunus. Alguns
trabalhos em Prunus tm buscado testar genes candidatos envolvidos
em diferentes rotas metablicas de caractersticas de interesse
agronmico via estudos de ESTs (TITTARELLI et al., 2009; VIZOSO et
al., 2009), porm, outras alternativas, como por exemplo, via estudos
de sequncias homlogas de espcies utilizadas como modelo deve ser
considerada. Uma vez identifcados os genes candidatos, esses podem
ser validados via estudos de expresso gnica.
A grande maioria dos estudos de expresso gnica em pessegueiro
busca genes associados qualidade de frutos e durabilidade durante o
armazenamento e transporte. Em muitas situaes, o armazenamento
refrigerado utilizado como uma alternativa para desacelerar o
amadurecimento e aumentar a durabilidade do fruto. No entanto,
20
este tipo de armazenamento pode ter efeitos negativos na qualidade
de fruto, resultando em problemas como escurecimento e injria
mecnica. Neste sentido, pesquisas recentes buscam encontrar genes
ou grupos de genes diferencialmente expressos em resposta a fatores
de ps-colheita (VIZOSO et al., 2009). Durante o armazenamento
refrigerado, os genes dos frutos so expressos diferencialmente e
associados com a aclimatao no frio (TITTARELLI et al., 2009).
Outros trabalhos buscam em marcadores de sequncias expressas
genes envolvidos na qualidade de fruto e estes genes so validados
atravs de anlises de RT-qPCR (OGUNDIWIN et al., 2008).
Entre as caractersticas estudadas via expresso gnica em Prunus,
no so encontrados na literatura estudos substanciais envolvendo a
tolerncia ao calor em pessegueiro (MARTNEZ-GMEZ et al., 2011).
Isso explicado por esse estresse ser um problema, ao menos at o
momento, apenas para alguns pases e regies do mundo, incluindo
o Brasil. Existem, no entanto, estudos que buscam relacionar a
necessidade de horas de frio para superao da dormncia com a
expresso diferencial de genes. Um melhor conhecimento dos genes
envolvidos na manuteno e superao da dormncia pode fornecer
ferramentas genticas para o acesso precoce desta caracterstica
em programas de melhoramento gentico. Estudos recentes sobre
os aspectos moleculares da dormncia forneceram uma descrio
inicial de genes candidatos envolvidos na manuteno e superao
da dormncia de gemas em pessegueiro. Os resultados indicam que a
anlise da expresso gnica pode contribuir para estimar a necessidade
de horas de frio para superao da dormncia em novas cultivares
(LEIDAet al., 2012b).
Consideraes fnais
O melhoramento gentico tem alcanado um grande sucesso nas
ltimas dcadas, atravs do melhoramento de caractersticas
agronmicas (produtividade, qualidade de fruto, resistncia a insetos
e doenas) por cerca de um sculo. O advento da era genmica abriu
novas oportunidades, ajudando no melhoramento de cultivares com
21
tcnicas moleculares e engenharia gentica (ARS et al., 2012)
O contexto atual de, por um lado, uma maior demanda por alimentos
funcionais e com qualidade nutritiva superior, e, por outro, a percepo
do aumento da temperatura global nos ltimos cem anos (ROOT,
2003), desafa a pesquisa em pessegueiro, em busca de gentipos
superiores e bem adaptados a estas condies climticas. Estes
eventos, mais do que difculdades, representam oportunidades para o
desenvolvimento cientfco, to importante para a cadeia produtiva do
pssego na regio e no Pas.
Referncias
ARTICO, S.; NARDELI, S. M.; BRILHANTE, O.; GROSSI-DE-SA, M. F.;
ALVES-FERREIRA, M. Identifcation and evaluation of new reference
genes in Gossypium hirsutum for accurate normalization of real-time
quantitative RT-PCR data. BMC Plant Biology, v. 10, n. 49, 2010.
ARS, P.; VERDE, I.; SOSINSKI, B.; ZHEBENTYAYEVA, T.; ABBOTT,
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