UNIVERSIDAD AUTNOMA DE TLAXCALA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

LICENCIATURA EN NUTRICIN




MANUAL DE PRCTICAS




LABORATORIO DE BIOQUIMICA






QFB. EVA ENRIQUEZ OLIVARES
Zacatelco, Tlax. A 9 de julio del 2014.



PRESENTACION
En este Manual se muestra la ubicacin de la unidad de aprendizaje terico- prctica de
BIOQUIMICA dentro del plan de estudio de LIC. EN NUTRICION.. Las unidades de aprendizaje
terico-prcticas, incluyen horas de teora y prctica. Las horas de prctica tienen duracin de dos
horas semana/mes se imparte durante el primer semestre de LN. Esta disciplina guarda
coherencia con disciplinas subsecuentes, vinculacin vertical y reas consecuentes. Esta rea del
conocimiento contribuye con el perfil del egresado en la adquisicin de habilidades, destrezas,
actitudes de trabajo en equipo y consolidacin de los conceptos tericos que permiten formar
nutrilogos con calidad.
El presente Manual tiene por objeto apoyar a los alumnos en su formacin , para adquirir
conocimientos, aptitudes y actitudes, en especial en aspectos de tcnicas analticas qumicas que
le permitan la formacin de un criterio respecto al contenido de nutrientes que poseen los
alimentos.
Un objetivo ms del presente trabajo, fue reunir y analizar las tcnicas qumicas ms
comnmente utilizadas para evidenciar las diferentes presentacin, asociacin y actividad de las
biomolculas.
El egresado de la licenciatura en Nutricin ser capaz de evaluar y diagnosticar el estado
nutricio de la poblacin, a nivel comunitario e individual, a travs del conocimiento de la
composicin bioqumica del ser humano, as como, los procesos metablicos que ocurren en el
organismo, para en su caso, diagnosticar los casos patolgicos que se generan por carencias de
nutrientes.

Utilizando como una herramienta el conocimiento de las diversas vas metablicas de las
biomolculas, los diferentes procesos enzimticos involucrados, para el estudio de diferentes
enfermedades o eventos relacionados con el proceso salud-enfermedad. Permitiendo al
Licenciado en Nutricin el reconocimiento de su origen y trascendencia definiendo los
campos de intervencin con la finalidad de resolver problemas nutricionales a nivel
poblacional e individual, basado en aspectos metodolgicos, como un eje necesario para el
desarrollo y avance del conocimiento en esta rea.


Slida capacitacin para investigar tanto el diagnstico nutricional de las comunidades,
adems de realizar investigaciones sobre el valor nutritivo y caractersticas de nuevos
alimentos.

Planificar Programas de Nutricin congruentes con la realidad, basados en el diagnstico de un
problema metablico, tomando en cuenta los indicadores de poblacin, recursos e
instrumentos.

Dar asesoras sobre la nutricin basados en procesos bioqumico-metablicos en los
diferentes niveles que se le solicite.

Capacitacin bsica para participar en el proceso Enseanza-Aprendizaje en el campo de la
nutricin a nivel tcnico, medio superior y superior.

Fundamento Legal de la Evaluacin
REGLAMENTO DE EVALUACIN ACADEMICA.

Ttulo Primero. Capitulo Unico. Disposiciones Generales. Artculo 1,2,3,4,5,6 y 7.
Titulo Segundo. Captulo II. De las Evaluaciones de Asignaturas. Artculos 12, 13, 15, 16, 17, 28,
24, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32 y 33.
Titulo Segundo. Captulo III. De las Evaluacin para Titulacin. Artculos 34, 35, 36, 37 y 38.
Titulo Tercero. Capitulo I. Del Procedimiento. Artculos 44, 45, 46, 51, 52 y 53.

Elementos de evaluacin

Parcial 1 Parcial 2 Parcial 3 Ordinario
Criterio Valor Criterio Valor Criterio Valor Criterio Valor
LABORATORIO
Reporte de
prcticas y tareas
30% Reporte de
prcticas y
tareas
30% Reporte de
prcticas y
tareas
30% LABORATORIO 30%
Procedimiento
prctico,
disciplina .actitud
y habilidades y
destrezas
30% Procedimiento
prctico,
disciplina
.actitud y
habilidades y
destrezas
30% Procedimiento
prctico,
disciplina
.actitud y
habilidades y
destrezas
30%
Examen escrito 40% Examen escrito 40% Examen
escrito
40%



Para un mejor desarrollo de este curso, deber cumplirse rigurosamente el REGLAMENTO DEL
LABORATORIO.
Ser requisito que los equipos elaboren de manera clara y concisa los reportes de las
prcticas de laboratorio (procedimiento, resultados y conclusiones) que se realicen durante el
semestre. Se aplicarn 3 exmenes parciales y en cada examen se evaluarn 4 prcticas de
laboratorio. Se evaluar la calidad de la participacin en el laboratorio y el desempeo del alumno
al explicar una pregunta determinada que surja en las sesiones de laboratorio, o bien, su
participacin espontnea. As mismo se evaluar la disciplina en el laboratorio y la destreza de los
alumnos al realizar las prcticas. La calificacin final del laboratorio ser el promedio de los tres
exmenes parciales lo cual equivale al 30% de la calificacin final a la que se sumar el 70%
obtenido en Teora.
El laboratorio de Bioqumica I constituye un 30% de la calificacin de la materia (el otro 70%
corresponde a la teora) y su evaluacin se har independientemente en base a lo siguiente:
Se evaluar la disciplina en el laboratorio, la destreza de los alumnos para realizar las prcticas y la
capacidad para comprender el fundamento de cada una de las prcticas por medio de tres
exmenes, el primero se aplicar al final de la realizacin de la cuarta prctica y el segundo al final
de la octava prctica y el tercero al final de la dcima prctica.
a) Exmenes tericos del laboratorio
b) Reporte de las prcticas de laboratorio e investigacin bibliogrfica.
c) Participacin

REGLAS GENERALES DEL LABORATORIO

1. Uso obligatorio de la bata.

2. No ingerir agua, ni alimentos.

3. No fumar, ni llevarse objetos a la boca.

4. No dejar objetos personales sobre su lugar de trabajo.

5. El alumno es responsable de la limpieza de su mesa al iniciar y al concluir la prctica.
6. Es indispensable lavarse las manos con un jabn adecuado al inicio y al finalizar la prctica
correspondiente.


Recomendaciones importantes para la seguridad del usuario del laboratorio :

a) Al calentar un recipiente con alguna sustancia, asegurarse que el tapn este un poco flojo,
de otra manera la botella puede estallar.


b) En caso de incendio, quemadura en al piel o herida personal, informe al momento a su
profesor, todas las personas en el laboratorio deben conocer la ubicacin del extinguidor y
del botiqun de primeros auxilios.


c) Ya que la lista de accidentes es muy larga, en caso de que esto ocurra, lo mejor que se
debe hacer es NO tomar la iniciativa, sino notificar inmediatamente al profesor, las
recomendaciones de cada prctica en particular se darn al inicio de cada una de ellas.




CONTENIDO TEMTICO DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA I
PRIMER SEMESTRE
Encuadre e Introduccin al Laboratorio.

Practica 1: La clula.- Clulas sanguneas
Practica 2: Mezclas, concentraciones y separacin de mezclas
Practica 3:Agua. Cantidad relativa de agua en alimentos
Practica 4:pH:equilibrio acido-base

PRIMER EXAMEN PARCIAL

Practica 5: Grupos funcionales: CARBOHIDRATOS.-
Deteccin de glucosa en alientos
Practica 6: LIPIDOS.- Deteccin de Colesterol y Triglicridos en alimentos
Practica 7: PROTEINAS.-Deteccin de Protenas y Albmina en alimentos.
Prctica 8:AMINOACIDOS.- Identificacin de Aminocidos por cromatografa

SEGUNDO EXAMEN PARCIAL


PRACTICA No. 1

Practica 9: ENZIMAS.- Cintica enzimtica
Practica 10: Minerales: Deteccin de calcio y Magnesio en alimentos.
TERCER EXAMEN PARCIAL



ENCUADRE
Tema Actividad de
aprendizaje
Tcnica
didctica
Material de
apoyo y
referencia
bibliogrfica
Tiempo
Introduccin al
laboratorio de
Bioqumica y
organizacin
para realizar las
prcticas
Que el alumno
conozca. El
reglamento,
forma de
evaluar, carta
descriptiva y las
principales
medidas de
seguridad en el
laboratorio.
Entrega de
contenido
temtico de
prcticas.






Taller y lectura
comentada.
Reglamento,
lista de material
bsico, carta
descriptiva y
medidas de
seguridad.
2 hrs.

LA CLULA.- Observacin microscpica de clulas sanguneas.

INTRODUCCION


INVESTIGAR COMPOSICION DE LA SANGRE, QUE CELULAS CONTIENE Y CUAL ES LA FUNCION DE
CADA UNA.
I.OBJETIVO

Observacin microscpica de clulas sanguneas en una extensin teida.
Identificar microscpicamente los algunos organelos que poseen pueden ser observados
en el microscopio ptico.

Realizar la tincin de la misma utilizando colorante de Wright.


II.MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo
Gradillas para tubos
Portaobjetos de vidrio
Riel de tincin
Reloj de intervalos
Pipetas pasteur
Bulbos de hule
Colorante de Wright
Buffer para tincin de Wright
Microscopio ptico microscopio de luz

Muestra:
Sangre venosa obtenida por venopuncin y contenida en un tubo con anticoagulante EDTA.
III.PROCEDIMIENTO
Extensin o frotis sanguneo:
1. En un extremo del portaobjetos se coloca una gota pequea de sangre (aprox. 10 ul)
2. Con otro portaobjetos y en un ngulo de 45 con un movimiento rpido extender la gota
de sangre.
3. Dejar secar a T.A.
4. Colocar en forma horizontal sobre el riel de tincin con la muestra hacia arriba y cubrir con
abundante cantidad de colorante de Wright y dejar por 10 min.
5. Sin quitar el colorante agregar suficiente cantidad de buffer para Wright evitando se
derrame y dejar 5 minutos ms.
6. dejar secar y observar al microscopio.

IV.RESULTADOS:
CLULAS OBSERVADAS:
ORGANELOS OBSERVADOS



Conceptos para investigar
Describa los tipos de microscopios y sus partes; caractersticas y uso del microscopio
ptico.
Mencione brevemente la clasificacin y funcin de las clulas sanguneas
Describa la funcin de cada uno de los organelos celulares.

V.BIBLIOGRAFIA

HENRY, John Bernard.-Clinical diagnosis and management by laboratory methods.
Pennsylvania USA. 20 th ed.2007
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001
LAGUNA, Jos; PIA, Enrique.- Bioqumica de Laguna.- 5 ed.- Manual Moderno.-Mxico
D.F.- 2002.









PRACTICA No. 2
PREPARACIN y SEPARACION DE MEZCLAS

INTRODUCCION.-








I.OBJETIVOS.-
Adquirir destreza en los clculos y preparacin de los diversos tipos de soluciones.
Preparar soluciones de importancia bioqumica.
Diferenciar los diferentes tipos de mezclas de inters bioqumico.
Ensayar algunos mtodos de separacin
Identificar los mtodos para separar los componentes de una mezcla y adquirir habilidad
en la
aplicacin de diferentes mtodos a travs de la experiencia en el laboratorio.
Identificar los tipos de mezclas para poder seleccionar el mtodo de separacin
ms adecuado para su separacin.

II. MATERIALES Y REACTIVOS.
Balanza analtica
Calculadora (personal)
Tabla peridica
Pipetas graduadas
Glucosa anhidra
Alcohol medicinal
azcar de mesa
Cloruro de sodio
Sulfato de zinc
Maicena
Leche lquida
Aceite comestible
Limones
Papel filtro
Centrfuga
Vasos de precipitados
Embudos
Agua destilada
Mechero
Tripi
Tela de alambre con asbesto
Probetas
Pipetas Pasteur

III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Ensayo n 01. preparacin de soluciones porcentuales.
1.-Solucin azucarada al 2% (identifique tipo de solucin) 100 ml.
2.-250 mL de solucin isotnica de NaCl (tipo de solucin)
3.-Solucin hidroalcholica 4:6 (determinar el porcentaje)100 ml
4.-Sol. De cloruro de sodio al 10% en alcohol, 100 ml
5.-Sol. De maicena en agua 10%, 100 ml
6.-Sol . de maicena en alcohol al 10%, 100 ml
7.-Sol. De aceite al 30% en agua, 100 ml

Ensayo n 02. preparacin de soluciones molares.
8.-Preparar 1 dL de una solucin de ZnSO4 0.2 M. cuantos gramos?
9.- Preparar 100 ml. De una solucin 0.1M de glucosa. cuantos gramos?
10.-Solucin de azcar al 10% de azcar en alcohol, 100 ml
Dependiendo del tipo de mezcla se proceder a utilizar los mtodos de separacin de:
decantacin, filtracin, evaporacin y centrifugacin.




IV. RESULTADOS







V. CONCLUSIONES


Preguntas de investigacin

Cul es la clasificacin de las mezclas
Definir mezcla homognea y heterognea
2 ejemplos de cada una.
Qu es Normalidad, Molaridad, Molalidad y concentracin porcentual.
Describa y explique los fenmenos: Difusin, Dilisis, Equilibrio Donnan, Osmosis, presin
osmtica.
Cuales de las siguientes sustancias son sustancias puras?




Cmo podra separa cada una de stas mezclas?


Ejercicios propuestos:
1.-Una solucin de cido sulfrico tiene una densidad de 1,84 g/ml y contiene 98 % en peso de
acido. Que volumen de la solucin ocuparan 360 g de acido qumicamente puro?
2.- Cuantos gramos de KOH se necesitan para preparar una solucin 0.25M disueltos en cantidad
de agua suficiente, hasta realizar 500 ml de solucin?
.Cuantos gramos de sulfato de sodio se necesitan para preparar 30 ml una solucin 7,1M?

VI. BIBLIOGRAFIA:
1. Roskoski R. Bioqumica. Editorial McGraw-Hill Interamericana. Mxico 1998.
2. Herrera E. Bioqumica, Biologa molecular y biologa fisiolgica. Editorial McGraw-Hill
Interamericana. Espaa 1996 Volumen I y II
3. Robert K. Murray, Mayes Peter A. Bioqumica de Harper.-Dcima quinta edicin. Editorial
Manual Moderno. Mxico.2001







PRACTICA No. 3
AGUA. Cantidad relativa de agua en alimentos
INTRODUCCION.-



Mtodos gravimtricos, por volatilizacin, para cuantificar la humedad en los sistemas
alimenticios. Mtodo Indirecto.
Fundamento: Se basan en la volatilizacin del agua libre del sistema al exponerla a la temperatura
de ebullicin del agua hasta obtener el peso constante de la materia seca. Se cuantifica el
porcentaje de humedad del sistema alimenticio admitiendo que la diferencia aritmtica entre el
peso inicial de la muestra, expuesto a la temperatura de ebullicin del agua, y el peso constante
obtenido de materia seca, se debe al agua libre evaporada bajo las condiciones experimentales
establecidas y que es el nico compuesto que bajo esas condiciones se volatiliza
(Skoog y West, 1983).



I. OBJETIVOS:

1.-Conocer y ensayar el mtodo Gravimtrico, por volatilizacin , para cuantificar la humedad
en los sistemas alimenticios
2.- Medir la cantidad relativa de agua existente en algunos alimentos.




II. MATERIALES Y REACTIVOS

Balanza granataria
Vidrio de reloj o caja Petri
Mechero
Tripi
Tela de alambre con asbesto
Parrilla elctrica
Pinzas para cpsulas y esptulas
Estufa de secado

MUESTRAS
Tortillas de harina de trigo
Tortillas de maz
Galletas de soda.


III PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Deshidratacin de la muestra

Pesar exactamente de 20 a 30 g de muestra en el momento de colocar la muestra en la estufa.

Exponer la muestra por un periodo de tiempo adecuado para cada caso (segn contenido
de humedad).
Pesarla tan pronto alcance la temperatura ambiente.
Llevar a peso constante, para lo cual debe colocarla nuevamente en la estufa durante el tiempo
necesario, dejar enfriar y pesar. Repetir esta operacin hasta que dos pesadas consecutivas varen slo 1 gramo.

IV. CALCULOS Y RESULTADOS
Clculos: Calcular el porcentaje de humedad en el producto evaluado.
Nota: Realizar las determinaciones por duplicado. Para harinas y productos derivados el
calentamiento se realiza a 130 1 C por una hora exacta, comenzando a contar el tiempo
cuando el interior de la estufa haya alcanzado la temperatura indicada.
El contenido de humedad en alimentos como malta, cacao, queso, vegetales con bajo contenido
de azcar puede determinarse en este mismo tipo de estufa a presin atmosfrica, a la temperatura
y tiempo de secado apropiadas.


Calcular el porcentaje de agua en estos alimentos tomando en cuenta el peso antes y despus de
De la deshidratacin.











PRACTICA No. 4



V . CONCLUSIONES:







Informacin que debe conocer el estudiante:
1) Defina el punto de ebullicin
2) A qu temperatura hierve el agua al nivel del mar?
3) A qu temperatura hierve el agua en la ciudad de Tlaxcala?
4) Por qu el agua se volatiliza a Temp. < 100 C?
5) Cules son los constituyentes de los sistemas alimenticios que se pueden volatilizar a
temperaturas cercanas a 100 C?
6) D ejemplos de sistemas alimenticios en los cual aplicara esta metodologa y por qu?



VI. BIBLIOGRAFIA
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001
LAGUNA, Jos; PIA, Enrique.- Bioqumica de Laguna.- 5 ed.- Manual Moderno.-
Mxico D.F.- 2002.
ROSKOSKI, R. Bioqumica. Editorial McGraw-Hill Interamericana. Mxico 1998.
HERRERA, E. Bioqumica, Biologa molecular y biologa fisiolgica. Editorial McGraw-Hill
Interamericana.Espaa 1996 Volumen I y II.




Ph:equilibrio acido-base


INTRODUCCION

I. OBJETIVO
Interpretar los conceptos de cido base y pH para que explique el comportamiento de los
principales sistemas amortiguadores en el organismo.
Observar y diferenciar el comportamiento de un acido fuerte y un acido dbil frente a una
base fuerte.
Determinar el pH de NaOH y HCl en soluciones diluidas y de las diferentes muestras presentes.

II. MATERIAL Y REACTIVOS

Materiales Reactivos
Agua destilada
Hidrxido de sodio
cido clorhdrico
Matraz Erlenmeyer de 100 ml
Probeta de 100 ml
Vaso de precipitados de 50 y 100 ml.
Gradilla y tubos de ensayo
Pipetas de 5 y 10 ml
Tiras reactivas para medir pH
Muestras Biolgicas: Orina, zumo de frutas, vinagre, leja, caf, leche, clara de huevo, saliva, etc.


III. PROCEDIMIENTO
En la primera parte de la prctica se determinara la acidez total de dos disoluciones. La primera es
una disolucin de cido fuerte (HCl) en agua y la segunda es un cido dbil (cido vinagre)
Colocar una alcuota de cada muestra en los tubos de ensayo y una alcuota de HCl 0,1 N y de
NaOH 0,1N y medir el pH con las tiras para medir pH.

IV. RESULTADOS

ALIMENTO pH




V. CONCLUSIONES



PREGUNTAS:

Definicin de cido y base de Arrenhius, Brondsted-Lowry y Lewis
Qu es un cido y base dbil y fuerte.
Cual es la Ecuacin y que significa la Ecuacin de Henderson-Hasselbalch
Qu es una solucin amortiguadora o buffer.


VI. BIBLIOGRAFIA:
DEVLIN, Thomas M.- Bioqumica.- 3 ed.- reverte, S.A. de C.V.-Mxico, D.F.- 2000.
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001
HERRERA, E. Bioqumica, Biologa molecular y biologa fisiolgica. Editorial McGraw-Hill
Interamericana. Espaa 1996 Volumen I y II.
NELSON, David L.- Qumica Orgnica.- 2 ed.- Pearson educacin.- Mxico, D.F..- 2000.


PRACTICA No. 5

GRUPOS FUNCIONALES : CARBOHIDRATOS.- Deteccin de glucosa en alimentos

INTRODUCCION

La glucosa es el monosacrido que proporciona .la mayor fuente de energa del cuerpo humano
PRINCIPIO (4-5)
La determinacin enzimtica de glucosa de acuerdo a las siguientes reacciones:
Glucosa oxidasa
Glucosa + O
2
-------------------------cido Glucnico + H
2
O
2

Peroxidasa
2 H
2
O
2
+ Fenol + 4-AAP-------------------------Quinoneimina + 4 H
2
0
4-AAP = Amino-4-antipirina






I.OBJETIVO

Identificar los alimentos que contiene glucosa
Diferenciar los alimentos dulces que contienen glucosa y los que no la contienen.

II.MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensaye
Gradillas para tubos
Micropipetas automticas de 1000 ul y 500 ul.
Bao mara
Termmetro
Reactivo para determinacin de glucosa por el mtodo de glucosa-oxidasa
Muestras:
Leche
Atole de maicena blanco
Jugo de naranja natural
Jugo de naranja comercial
Refresco incoloro
Miel de abeja
Miel de maz
azcar

III.PROCEDIMIENO

Tipo de muestra Volumen de muestra Volumen de reactivo
500 ul 1000 ul



Mezclar e incubar a 37C durante 10 minutos y leer
Desarrollo de color rosa resultado positivo
Sin cambio de color: resultado negativo



IV.RESULTADOS
Tipo de muestra Resultado



V.CONCLUSIONES



CUESTIONARIO:
A. Dibujar la molcula de la glucosa, lactosa, galactosa, fructosa y sacarosa.
B. Porqu la sacarosa no reacciona con el reactivo de glucosa oxidasa?
C .A qu se refiere la isomera de los azucares y cules son los tipos de isomera?
D. A qu tipo de carbohidrato pertenece la glucosa
E. Nombre de 2 monosacridos, 2 disacridos y 2 polisacridos.




VI.BIBLIOGRAFIA

MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001
HERRERA, E. Bioqumica, Biologa molecular y biologa fisiolgica. Editorial McGraw-Hill
Interamericana.Espaa 1996 Volumen I y II.
FOX,Mary Ann .- Qumica Orgnica.- 2 ed.- Pearson educacin.- Mxico, D.F..- 2000.
HENRY, John Bernard.-Clinical diagnosis and management by laboratory methods.
Pennsylvania USA. 20 th ed.2007
NELSON,David L .- Lehninger Principios de Bioqumica.- 2 ed.- Omega .- Mxico, D.F..-
2000.


PRACTICA No. 6
LIPIDOS.- deteccin de colesterol y triglicridos en alimentos.

INTRODUCCION


Mtodo Enzimtico-colorimtrico.-Trinder. Punto final.
La determinacin enzimtica de colesterol total de acuerdo a las siguientes reacciones:
Colesterol estearasa
Colesterol ester + H2O ------------------------------- Colesterol + cidos grasos

Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 ------------------------------------ ColesM-en-3-eno + H
2
O
2

Peroxidasa


2H
2
0
2
+4-AAP +Fenol -------------------- Quinoneimina + 4H
2
0
4-AAP = Amino-4-antipirina

Determinacin enzimtica de los triglicridos de acuerdo a las siguientes reacciones.

Lipoproteinlipasa
Triglicridos + H2O------------------------- Glicerol + cidos Grasos
Glicerol Kinasa
Glicerol + ATP ------------------------------- Glicerol-3-Fosfato + ATP
Glicerol-3-Fosfato Oxidasa
Glicerol-3-Fosfato + O2 ------------------------------------ Dihidroxiacetona-P+H
2
O
2
Peroxidasa
H202 + 4-AAP + p-Clorofenol------------------------- Quimioneimina

4-AAP = Amino-4-antipirina

I.OBJETIVO

Identificar la presencia de Colesterol y Triglicridos en algunos alimentos por mtodos
enzimtico-colorimtricos.
Identificar qu alimentos contienen Colesterol y/o Triglicridos

II.MATERIAL Y REACTIVOS
Tubos de ensaye
Gradillas para tubos
Micropipetas automticas de 1000 ul y 500 ul.
Bao mara
Termmetro
Reactivo para determinacin de Colesterol por mtodo enzimtico-colorimtrico.
Reactivo para determinacin de Triglicridos por mtodo enzimtico-colorimtrico.

Muestras:
Leche-1
Consom de pollo natural-2
Consom de pollo comercial-3
Consom de res natural-4
Consom de res comercia-5l
1Huevo-6
mantequilla
margarina
aceite comestible.
Crema comestible.

III.PROCEDIMIENO
Tipo de muestra Volumen de muestra Volumen de reactivo
para Colesterol
Vol. De reactivo
para Triglicridos
500 ul 1000 ul 1000 ul



Mezclar e incubar a 37C durante 5 minutos y leer
Desarrollo de color rosa resultado positivo
Sin cambio de color: resultado negativo

IV.RESULTADOS
Tipo de muestra Resultado para Colesterol Resultado para Triglicridos





V.CONCLUSIONES

CUESTIONARIO:
A. Cul es la clasificacin general de los lpidos.
B. A que grupo de esta clasificacin pertenecen los triglicridos?.
C .A qu grupo pertenece el colesterol?.
D. Escriba la estructura qumica de los triglicridos
E. Escriba la estructura qumica del Colesterol
F. Cules son las funciones biolgicas del Colesterol
G. Cules son las funciones biolgicas de los Triglicridos
H. Mencione 2 alimentos ricos en Colesterol
I. Mencione 2 alimentos ricos en Triglicridos.



VI.BIBLIOGRAFIA
HENRY, John Bernard.-Clinical diagnosis and management by laboratory methods.
Pennsylvania USA. 20 th ed.2007
NELSON,David L .- Lehninger Principios de Bioqumica.- 2 ed.- Omega .- Mxico, D.F..-
2000.
DEVLIN, Thomas M.- Bioquimica.- 3 ed.- reverte, S.A. de C.V.-Mxico, D.F.- 2000.
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001

PRACTICA No. 7
PROTEINAS.- Deteccin de Protenas y albmina en alimentos.

INTRODUCCION.


Las protenas forman un complejo coloreado en presencia de sales de cobre en un medio alcalino.

Protenas + Cu
2+
---------------- Complejo coloreado(morado)


Determinacin colorimtrica de la albmina utilizando verde de bromocresol a pH 4,20.
pH= 4,20
Albmina + BCG -------------------------------- Albmina- BCG complejo(verde bandera)

I.OBJETIVO

Detectar la presencia de protenas en algunos alimentos por el mtodo de Biuret
Detectar la presencia de Albmina en algunos alimentos
Identificar los alimentos que contienen protenas y los que no las tienen.

II.MATERIAL Y REACTIVOS
Tubos de ensaye
Gradillas para tubos
Micropipetas automticas de 1000 ul y 500 ul.
Bao mara
Reactivo para determinacin de Protenas totales por mtodo colorimtrico de Biuret.
Reactivo para determinacin de Albmina por mtodo colorimtrico de Verde de
Bromocresol.

Muestras:
Leche
Consom de pollo natural
Consom de pollo comercial
Consom de res natural
Consom de res comercial
1Huevo
Yogourth
Leche blgara
Sopa instantnea comercial

III.PROCEDIMIENO

Tipo de muestra Volumen de muestra Volumen de reactivo
de Biuret
Volumen de
reactivo de Verde
e Bromocresol
500 ul 1000 ul 1000 ul



Mezclar e incubar a temperatura ambiente(TA) durante 15 minutos y leer
PROTEINAS: Morado + ; sin cambio de color -
ALBUMINA: Verde + ; sin cambio de color -

IV.RESULTADOS
Tipo de muestra Resultado para Protenas Resultado para Albmina





V.CONCLUSIONES



CUESTIONARIO:
A. Describa las estructuras de las Protenas .
B. A qu grupo de su clasificacin pertenecen las Albminas?.
C .Menciones 2 propiedades fsicas de las protenas
D. Mencione 2 propiedades qumicas de las protenas
E. mencione 2 caractersticas de las Albminas
F. Funciones biolgicas de las Protenas
G. Funciones biolgicas de las Albminas
H. Mencione 2 alimentos ricos en protenas.


VI.BIBLIOGRAFIA
HENRY, John Bernard.-Clinical diagnosis and management by laboratory methods.
Pennsylvania USA. 20 th ed.2007
NELSON,David L .- Lehninger Principios de Bioqumica.- 2 ed.- Omega .- Mxico, D.F..-
2000.
DEVLIN, Thomas M.- Bioquimica.- 3 ed.- reverte, S.A. de C.V.-Mxico, D.F.- 2000.
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001


PRACTICA No. 8

IDENTIFICACION CROMATOGRAFICA DE AMINOACIDOS

INTRIDUCCION




I.OBJETIVO
Ensayar la tcnica de Cromatografa de Placa Fina
Identificar que alimentos contienen el aminocido GLICINA
Comprobar las reacciones coloridas que desarrollan los aminocidos con la Ninhidrina.

II.MATERIALES Y REACTIVOS

Secador de pelo.
Placa de silicagel para cromatografa en capa fina.
Gradillas con tubos de ensayo.
micropipetas automticas de 10,20,50 y 100 ul
Probetas (100 y 250 ml).
Vasos de precipitado (100 y 500 ml).
Frasco lavador con agua destilada.
Recipientes de muestras biolgicas de 50 ml.
Papel de filtro.
Rotulador de vidrio.
Glicina en sol alc.
Etanol.
Hidrxido amnico.
Ninhidrina en solucin
Muestras:
Consom de pollo natural
Consom de pollo comercial
Consom de res natural
Consom de res comercial
Sopa instantnea comercial

III.PROCEDEMIENTO
1.- Se coloca a una altura de 2 cm del inicio de la placa 50 ul de sol. de glicina y con una separacin
de 1cm se colocar 50 ul se muestra. Sin tocar la silica.
2.- Secar con aire las gotas de muestra.
3.- Se aade al tanque cromatogrfico eluyente hasta una altura aproximada de 1 cm y sin que
ste alcance la zona de aplicacin de las muestras. Se mete la placa en el tanque, se tapa y se deja
desarrollar la cromatografa hasta que el eluyente alcance el borde superior, sin llegar a
sobrepasarlo (20-30 min aproximadamente).
4.- Terminada la cromatografa se saca la placa, se marca la distancia recorrida por el eluyente, se
seca dentro de la campana de gases con la ayuda de un secador de aire y se roca con un
pulverizador que contiene la solucin reveladora (en la campana de gases). La placa se secar
hacindole llegar aire caliente con el secador.

IV.CALCULOS Y RESULTADOS


Muestra Distancia recorrida
en cm.
Rf Resultado
GLICINA




V.CONCLUSIONES


CUESTIONARIO
Qu propiedades de los aminocidos debemos tomar en cuenta para su separacin
cromatogrfica?
Describa los tipos de cromatografa que existen
Que es la cromatografa en placa fina
Qu tipo de aminocidos reaccionan desarrollando color con la Ninhidrina?.
Cules son los aminocidos esenciales y los no esenciales y porqu se les clasifica as.




VI.BIBLIOGRAFIA
Luisot P (1982). Bioqumica Estructural, 2 Ed. Editorial AC.
Excelente libro de bioqumica estructural. En el captulo de aminocidos se describen con
detalle sus propiedades fsicas y qumicas.
Smith I, Feinberg JG (1965) Paper & Thin Layer Chromatography and Electrophoresis.
Shandon Scientific Company Ltd.
Desarrollo histrico de la tcnica y aplicaciones.





PRACTICA No. 9
ENZIMAS.- Cintica enzimtica

INTRODUCCION
EFECTOS DE LA TEMPERATURA:
EFECTOS DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO
EFECTOS DEL pH:
ACTIVADORES
INHIBIDORES




I.OBJETIVOS
Demostrar la influencia del pH en una reaccin enzimtica.
Demostrar la influencia de la concentracin de sustrato en una reaccin enzimtica.
Demostrar la influencia de la temperatura en una reaccin enzimtica
Demostrar la influencia del tiempo de incubacin en una reaccin enzimtica.



II.MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales Reactivos
Tubos de prueba
Micropipepetas automticas de 10ul, 20ul, 50ul y 1000 ul.
Bao mara
Espectrofotmetro
HCl 0,1
NaOH 0,1 N
Reactivo con enzima Glucosa-Oxidasa
Termmetro

III.PROCEDIMIENTO
Ensayo 1: Efecto del pH
Sol. De Glucosa
100 mg/dl
Agua
destilada
NaOH 0.1N HCl 0.1N Reactivo de Glucosa-
oxidasa
TUBO 1 10 ul 10 ul 1000 ul
TUBO 2 10 ul 10 ul 1000 ul
TUBO 3 10 ul 10 ul 1000 ul
TUBO 4 20 ul 1000 ul
Incubar los tubos a 37C durante 10 min. Y leer.

Ensayo 2: Efecto de la temperatura
Sol. De Glucosa
100 mg/dl
Agua
destilada
Reactivo de
Glucosa-Oxidasa
Temperatura de
incubacin
TUBO 1 10 ul 10 ul 1000 ul 4C
TUBO 2 10 ul 1000 ul 37C
TUBO 3 10 ul 1000 ul 50C
TUBO 4 20 ul 1000 ul 37C
Incubar los tubos a 37C durante 10 min. Y leer.

Ensayo 3: Efecto de la concentracin del sustrato.
Sol. De Glucosa
100 mg/dl
Agua
destilada
Reactivo de
Glucosa-Oxidasa
TUBO 1 10 ul 10 ul 1000 ul
TUBO 2 20 ul 1000 ul
TUBO 3 50 ul 1000 ul
TUBO 4 20 ul 1000 ul
Incubar los tubos a 37C durante 10 min. Y leer.

Cada una de las reacciones se leern en un Espectrofotmetro en unidades de Absorbancia.

IV.RESULTADOS

A ensayo 1 A ensayo 2 A ensayo 3
TUBO 1
TUBO 2
TUBO 3
TUBO 4
V.CONCLUSIONES




CUESTIONARIO:
Explique el mecanismo de accin de la Glucosa-Oxidasa.
Que efecto tiene la sol. De HCl y NaOH en la reaccin ensayada.
Clasificacin de las Enzimas
A qu grupo de esta clasificacin pertenece la Glucosa-Oxidasa
Como se compone un sistema enzimtico
Qu es una Holoenzima, apoenzima, grupo prosttico y coenzima.



VI.BIBLIOGRAFIA

HENRY, John Bernard.-Clinical diagnosis and management by laboratory methods.
Pennsylvania USA. 20 th ed.2007
NELSON,David L .- Lehninger Principios de Bioqumica.- 2 ed.- Omega .- Mxico, D.F..-
2000.
DEVLIN, Thomas M.- Bioquimica.- 3 ed.- reverte, S.A. de C.V.-Mxico, D.F.- 2000.
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001






PRACTICA No 10

MINERALES.-Deteccin de calcio en alimentos.

INTRODUCCION




I.OBJETIVOS

Detectar calcio en los alimentos por el mtodo complejomtrico
Identificar que alimentos contienen calcio.
Correlacionar los resultados obtenidos con los de la literatura.


II.MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensaye
Gradillas para tubos
Micropipetas automticas de 1000 ul y 500 ul.
Reactivo para determinacin de Calcio por el mtodo complejomtrico.
Muestras:
Leche
Crema
Huevo
Refresco incoloro
Yogourth
Leche blgara
Sopa instantnea comercial





III.PROCEDIMIENO

Tipo de muestra Volumen de muestra Volumen de reactivo
500 ul 1000 ul



Mezclar e incubar a T.A. durante 10 minutos y leer
Desarrollo de color azul resultado positivo
Sin cambio de color: resultado negativo



IV.RESULTADOS
Tipo de muestra Resultado



V.CONCLUSIONES



CUESTIONARIO:
A. Importancia biolgica del Calcio
B. Qu son los macro y microminerales.
C .Mencione 2 macrominerales
D. Mencione 2 microminerales

VI.BIBLIOGRAFIA
HENRY, John Bernard.-Clinical diagnosis and management by laboratory methods.
Pennsylvania USA. 20 th ed.2007
NELSON,David L .- Lehninger Principios de Bioqumica.- 2 ed.- Omega .- Mxico, D.F..-
2000.
DEVLIN, Thomas M.- Bioquimica.- 3 ed.- reverte, S.A. de C.V.-Mxico, D.F.- 2000.
MURRAY,Robert k.- Bioqumica de Harper.- 15. Ed.- Manual Moderno. Mxico D.F. 2001 .