139 ISSN 0326-2383

Acta Farm. Bonaerense 25 (1): 139-44 (2006)

Recibido el 4 de junio de 2005
Aceptado el 17 de septiembre de 2005
Actualizaciones
PALABRAS CLAVE: Agentes mutagnicos, Compuestos N-nitroso, Nitrosacin, Sulfatiazol, Test de Ames.
KEY WORDS: Ames test, Mutagenic agents, Nitrosation, N-nitroso compounds, Sulfathiazole.
* Autor a quien dirigir la correspondencia. E-mail: mrizzot@agatha.unr.edu.ar; mrizzott@fbioyf.unr.edu.ar
Deteccin de Mutagenicidad en Compuestos N-Nitroso
con el Test de Ames
Claudia TROSSERO
1
, Graciela CAFFARENA
2
, Estela HURE
1
& Marcela RIZZOTTO
1
*
1
rea Inorgnica, Facultad de Ciencias Bioqumicas y Farmacuticas,
Universidad Nacional de Rosario, Suipacha 531, 2000 Rosario, Argentina.
2
Ctedra de Microbiologa, Facultad de Ciencias Mdicas,
Universidad Nacional de Rosario, Av. Francia y Santa Fe, 2000 Rosario, Argentina
RESUMEN. Hay una gran cantidad de sustancias, naturales o sintticas, con posible capacidad mutagni-
ca. Entre ellas se cuentan los compuestos N-nitroso, los que pueden formarse por reaccin de nitritos con
compuestos nitrogenados, como aminas o amidas en medio cido. Esta reaccin de nitrosacin puede darse
tambin dentro del organismo con productos nitrogenados de la dieta, incluso antibiticos. El test de Ames
es un mtodo sencillo y eficaz de deteccin de este tipo de mutgenos, ya sea como compuestos puros o for-
mando parte de mezclas complejas. El objetivo del presente trabajo es realizar una somera revisin acerca
de la deteccin de mutagenicidad de compuestos N-nitroso mediante el test de Ames.
SUMMARY. Detection of Mutagenicity in N-Nitroso Compounds with the Ames Test. There are a lot of natu-
ral or synthetic products with possible mutagenic capacity. Among these, N-nitroso compounds, that are formed
by nitrosation reactions between nitrite and amines or amides in acidic medium, can also be formed into the or-
ganism. The Ames test is an efficient tool for detecting these mutagenic compounds, as pure ones or as part of
mixtures. In this paper we try to do a brief review about the detection of mutagenicity of N-nitrosocompounds by
mean of the Ames test.
INTRODUCCIN
Mutaciones, mutgenos y cncer
La inform acin gentica es transm itida de
una clula a su sucesora por la precisa duplica-
cin de las cadenas del cido desoxirribonuclei-
co (AD N ), en un proceso que es com n a todos
los seres vivos, desde sim ples bacterias hasta
com plejos anim ales o plantas. Alteraciones en la
inform acin gentica ocurren com o resultado de
pequeas alteraciones en la estructura de la m o-
lcula de AD N , por lo cual, la secuencia de ba-
ses transm itida a la otra generacin celular es
distinta. Estas alteraciones son m utaciones, las
que pueden ser com patibles con una vida nor-
m al y sana, dando lugar a las pequeas diferen-
cias entre m iem bros de una especie y constitu-
yendo la fuerza m otriz de la evolucin. Por el
contrario, otras m utaciones contribuyen signifi-
cativam ente a enferm edades y m alform aciones
congnitas. Los agentes m utagnicos (qum icos
o fsicos) interactan con el A D N causando
cam bios en su estructura. Este cam bio puede
ser una prdida, adicin o reem plazo de bases,
alterndose as la secuencia del AD N y afectan-
do la fidelidad del m ensaje gentico
1
.
El nacim iento de nios con m alform aciones
congnitas siem pre ha provocado gran cantidad
de problem as a la sociedad y trem enda angustia
al afectado y su fam ilia. Aunque m uchas de las
causas de anorm alidades de nacim iento perm a-
necen an desconocidas, se ha estim ado que al-
rededor del 20% de las m ism as se deberan a
m utaciones genticas. Todava no se ha presta-
do la suficiente atencin a agentes am bientales
y drogas que pudieran tener efectos teratogni-
cos (que producen m alform aciones durante el
desarrollo, previo al nacim iento). Esto es im por-
tante puesto que el conocim iento lleva a la pre-
vencin. Aunque los diversos agentes teratog-
nicos pueden producir su efecto m ediante varia-
140
TROSSERO C., CAFFARENA G., HURE E.& RIZZOTTO M.
dos m ecanism os, la actividad m utagnica juega,
sin lugar a dudas, un papel im portante en m u-
chos de ellos
2
.
El cncer es una enferm edad en la cual desa-
parecen las reglas del com portam iento celular-
norm al
3,4
. El crecim iento de las clulas norm a-
les es regulado cuidadosam ente para satisfacer
todas las necesidades del organism o. En cam -
bio, las clulas cancerosas se dividen continua-
m ente y en form a autnom a, invadiendo e in-
terfiriendo la funcin de los tejidos norm ales. La
transform acin de una clula norm al en cance-
rosa sera consecuencia de anom alas en los sis-
tem as de regulacin que son fundam entales en
la fisiologa celular norm al
5
. La caracterstica
m s im portante de la clula m aligna es que se
m ultiplicar dando siem pre origen a clulas can-
cerosas y nunca volver a originar clulas nor-
m ales. As, las anom alas que producen las clu-
las cancerosas son heredadas en form a perm a-
nente y son estables a nivel celular
6
. Esto nos
sugiere la hiptesis que cam bios genticos son
responsables de la transform acin neoplsica
7
.
En la actualidad se considera al cncer com o el
resultado de una acum ulacin de alteraciones
genticas
8,9
. M uchos agentes carcinognicos ini-
cian su accin daando al AD N
10
.
Mutgenos: distintas fuentes
La industria m oderna ha aportado y aporta
num erosas sustancias m utagnicas y/o cancer-
genas al m edio am biente, aunque no es la nica
fuente: tam bin en la naturaleza se encuentran
sustancias de este tipo. Com o ejem plo, la aflato-
xina B
1
, producto m etablico de algunos hon-
gos, es uno de los m utgenos m s potentes que
se conocen
11
. En cuanto a los productos sintti-
cos, la lista est en continuo aum ento, dada la
gran cantidad de nuevos productos. Entre ellos
podem os m encionar nitrosoderivados, form ados
por reaccin entre nitritos y sustancias nitroge-
nadas, com o am inas o am idas. Adem s de los
productos naturales y sintticos presentes en el
m edio am biente, un lugar destacado lo ocupan
los productos generados in situ en el organis-
m o, com o son las nitrosam inas (y en general,
com puestos N -nitroso) provenientes de la reac-
cin entre com puestos nitrogenados (am inoci-
dos, antibiticos, etc.) con nitritos que pueden
provenir de aditivos en alim entos o del propio
organism o (por ejem plo, la saliva contiene un
alto tenor de nitritos). Es necesario tam bin aler-
tar sobre los productos m edicinales
11
, no slo
por las drogas prim arias, sino tam bin por posi-
bles interacciones.
D ada la gran cantidad de sustancias m utag-
nicas existentes, tanto exgenas com o endge-
nas, es m uy im portante disponer de un m todo
sencillo para analizar sustancias potencialm ente
peligrosas (la estructura m olecular del com pues-
to puede ser un indicio cierto de su posible acti-
vidad), en especial aquellas que, debido a sus
caractersticas, podran llegar a ser m edicam en-
tos. Aunque la relacin m utgenos-carcinogni-
cos es m enor que la estim ada en un principio
12
, la deteccin de m utgenos es im portante en
s m ism a, sean o no carcinognicos, a fin de
prevenir los propios problem as que acarrean. El
objetivo del presente trabajo es realizar una so-
m era revisin acerca de la deteccin de m utage-
nicidad de com puestos N -nitroso (los cuales
constituyen tam bin una im portante clase de
carcingenos) m ediante el test de Am es.
Una forma sencilla de deteccin de
mutgenos: el test de Ames
El test de Am es, ensayo de m utacin bacte-
riano que em plea Salmonella typhimurium co-
m o bacteria indicadora, ha sido universalm ente
adoptado para la deteccin de m utgenos, sien-
do quizs la m s difundida de las pruebas para
detectar, en form a sim ple, rpida y econm ica,
el poder m utagnico de diversas sustancias
12
.
En el m ism o se cultivan cepas de S. typhimu-
riumgenticam ente m odificadas -de m odo que
requieren histidina para su crecim iento- en pre-
sencia y ausencia de la droga a ensayar, en un
m edio sin histidina. U na sustancia m utagnica
puede revertir esta carencia, haciendo que las
bacterias crezcan en el m edio sin histidina (dan-
do colonias llam adas revertantes). Segn el test
de Am es una sustancia, natural o sinttica, se
considera m utagnica cuando el coeficiente de
reversin, C.R., es m ayor que 2. (C.R. = N de
colonias revertantes por placa ensayada/ N de
colonias revertantes por placa control -espont-
neas-). Para la m ayora de los m utgenos ensa-
yados, hay un rango de concentraciones que
produce una curva dosis-respuesta lineal. O tros,
tal com o la 9-am inoacridina, produce una curva
dosis-respuesta no lineal
13
, hecho que debe ser
inform ado. M uchos m utgenos son txicos para
la bacteria, y la observacin de un solo punto,
si est situado en la zona descendente de la cur-
va dosis-respuesta, llevara a una interpretacin
errnea de la capacidad m utagnica de la sus-
tancia ensayada.
Cepas bacterianas
Todas las cepas son derivadas de S. typhimu-
141
acta farmacutica bonaerense - vol. 25 n 1 - ao 2006
rium LT2 y requieren histidina (o sea, son H is

).
Adicionalm ente a la m utacin para histidina, ca-
da cepa presenta otras m utaciones, que hacen
increm entar su sensibilidad para determ inados
m utgenos. Las cepas actualm ente recom enda-
das para las pruebas generales de m utagenici-
dad son las siguientes: TA 97, TA 98, TA 100 y
TA 102. O tras cepas tales com o TA 110, TA 89,
TA 1538, etc., se han dejado de usar con fre-
cuencia por diversos m otivos (por ejem plo, de-
teccin de pocos m utgenos, reem plazo por
otras m s sensibles, etc.).
Control de las cepas
Se debe confirm ar el genotipo de las cepas
(requerim iento de histidina, carcter rugoso,
sensibilidad a U V, factor R (resistencia a la am -
picilina). La cepa TA102 tam bin debe ser teste-
ada para requerim iento de tetraciclina. N o es
necesario com probar el requerim iento de bioti-
na, ya que se trata de una m utacin no reversi-
ble.
Amplitud o espectro de deteccin del test de
Ames
Se cuentan por m iles la cantidad de sustan-
cias que han sido ensayadas con el test de Am es
14
, desde com puestos m etlicos (com plejos de
hierro, rutenio y osm io con bipiridinas sustitui-
das, ensayadas con TA98 y TA100
15
o de plati-
no, tam bin con las m ism as cepas TA 98 y
TA100
16
hasta m ezclas com plejas com o aguas
residuales hospitalarias, tam bin em pleando las
m encionadas cepas
17
, o incluso para la detec-
cin de antim utgenos, com o la actividad pro-
tectora de flavonoides, con la cepa TA102
18
.
Relacin estructura-actividad
El uso de m odelos y program as tericos que
estudian la relacin estructura-actividad de sus-
tancias perm iten hacer predicciones sobre su
potencial peligrosidad, que luego debe ser con-
firm ada por estudios biolgicos, entre los cuales
tienen relevancia los tests bacterianos.
D esde el punto de vista de su m ecanism o de
accin, los carcingenos pueden ser clasificados
com o: a) genotxicos, los cuales causan dao
directo al AD N . M uchos m utgenos estn en es-
ta categora, y frecuentem ente la m utacin es el
prim er paso en el desarrollo del cncer. b) car-
cingenos que no se ligan directam ente al AD N ,
y que en general dan negativas las pruebas de
m utagenicidad (carcingenos epigenticos).
Aunque los m ecanism os de accin son variados,
hay factores a tener en cuenta, ya sea para la
m ism a sustancia o sus m etabolitos: electrofilici-
dad; y factores que tienen que ver con la absor-
cin: peso m olecular, solubilidad, estado fsico,
etc. La geom etra m olecular es otro punto a te-
ner en cuenta: m uchos carcingenos son m ol-
culas planares (ej.: policclicos arom ticos), con
algn grupo funcional electroflico y tam ao
adecuado, de m odo de poder intercalarse en la
m olcula del AD N . O tro factor crtico es el m e-
tabolism o, convirtiendo en m utgenos sustan-
cias que originalm ente no lo eran
19
. Respecto a
am inas arom ticas, que representan una de las
m s im portantes clases de qum icos industriales
y am bientales, m uchas de ellas tienen reconoci-
da actividad cancergena. La exposicin a am i-
nas arom ticas ocurre en diferentes actividades
y m bitos (industria, agricultura, hum o del ciga-
rrillo, etc.). Los estudios tericos de relacin es-
tructura-actividad de estas sustancias han corre-
lacionado bien con el test de Am es en la parte
experim ental
20
.
Compuestos N-nitroso
Los com puestos o derivados N -nitroso se for-
m an por reaccin de nitritos con am inas o am i-
das en m edio cido
21
. Todos ellos, y en espe-
cial las nitrosam inas, constituyen una im portante
clase de carcingenos con caractersticas nicas
en cuanto son activos en todas las especies y
poseen un am plio espectro de clulas blanco.
U no de los principales aportes de nitrosam inas
al organism o hum ano lo constituye el hum o del
cigarrillo, aunque tam bin hay fuentes endge-
nas. D e unos 300 com puestos ensayados, m s
del 90% m ostraron capacidad carcinognica
22,23
.
Deteccin de mutagenicidad de compuestos
N-nitroso mediante el test de Ames
D ada la im portancia de los derivados N -ni-
troso, tanto exgenos com o endgenos, m en-
cionarem os algunos ejem plos de la determ ina-
cin de su m utagenicidad, tanto com o com -
puestos puros o bien form ando parte de m ez-
clas.
La m ayora de la poblacin est expuesta a
m ezclas com plejas de sustancias nocivas, ya sea
desde el residuo proveniente de la com bustin
en m otores de autom viles hasta el ya m encio-
nado hum o del cigarrillo de personas fum ado-
ras. Los prim eros estudios de genotoxicidad en
m ezclas com plejas provienen de la dcada de
1950 e involucraron m ayorm ente la evaluacin
de cultivos celulares expuestos al hum o del ci-
garrillo. Sin em bargo, el estudio de la genotoxi-
cidad de m ezclas com plejas se puede decir que
realm ente com enz en 1974, con el inform e de
K ier et al.
24
sobre la m utagenicidad de un con-
142
TROSSERO C., CAFFARENA G., HURE E.& RIZZOTTO M.
densado de hum o de cigarrillo m ediante el test
de A m es. Previam ente, estos autores haban
evaluado la m utagenicidad de las fracciones ais-
ladas, lo que di inform acin sobre cules com -
puestos eran los responsables de la m utagenici-
dad de la m ezcla com pleta. D e las cepas de S.
typhimurium, em pleadas en el test de Am es, las
m s usadas para la deteccin de m utagenicidad
en m ezclas com plejas han sido la TA 98 y la
TA1538
25
. Esta ltim a, sin em bargo, actualm en-
te no es tan em pleada, ya que sus resultados se
superponan en gran m edida con los de la TA98
(que es m s usada)
12
.
En 1995 se observ accin m utagnica de la
m ezcla de tiam ina con nitrito con la cepa
TA100, sin activacin m etablica
26
. En 1997, la
genotoxicidad de nitrobencenos y nitroanilinas
fue determ inada con las cepas TA 98 y TA100,
hallndose 10 com puestos m utagnicos sobre
14 ensayados (71% )
27
. Por otra parte, en 1997
fue revisada la m utagenicidad de m s de 80
am inas arom ticas. M uchas m ostraron actividad
m utagnica con las cepas TA 98 y TA 100, con
adicin de S9 en varios casos
28
. M s reciente-
m ente, la genotoxicidad de nitrosopiperidinas y
seis de sus alquil derivados fue estudiada m e-
diante el test de A m es em pleando las cepas
TA100 y TA1535. Todos los com puestos fueron
m utagnicos con la adicin de S9(hom oge-
neizado de hgado de rata)
29
.
Riesgos del metabolismo
El AD N puede ser daado no slo por sus-
tancias externas, sino por sustancias provenien-
tes del propio m etabolism o, entre ellas, especies
reactivas de nitrgeno
30
.
La doble accin de nitritos y nitratos
El uso de nitritos y nitratos com o aditivos en
los alim entos trae aparejado ciertos riesgos. El
prim ero es el de toxicidad aguda: el nitrito es
txico (una dosis de 2 g puede causar la m uerte
de una persona), m s an para los nios, que
son m s sensibles, por form acin de m etahem o-
globina, la cual es incapaz de transportar oxge-
no. O tro riesgo del uso de nitritos es la form a-
cin de nitrosam inas, sustancias que son agen-
tes cancergenos. Las nitrosam inas se pueden
form ar tanto en el alim ento com o en el organis-
m o. En el alim ento se producen en aquellos
productos que deben ser calentados para su ela-
boracin (ej.: tocino), o que son ricos en am inas
nitrosables (ej.: pescado y productos ferm enta-
dos). En este segundo caso, la form acin de ni-
trosam inas se puede producir en el estm ago.
Los nitratos se pueden transform ar en nitritos
por accin de m icroorganism os. Adem s, los ni-
tratos de la dieta, form ando parte de m uchos
vegetales (com o espinaca y apio), son reducidos
a nitritos en la saliva, y, con la acidez estom acal,
pueden generar interm ediarios nitrogenados,
entre los cuales estn las potencialm ente carci-
nognicas N -nitrosam inas.
Para reducir el riesgo de la form acin de ni-
trosam inas, una de las vas sera la reduccin en
el uso de nitritos com o aditivos en los alim en-
tos. Es necesario en este caso analizar la rela-
cin riesgo/beneficio, ya que los nitritos evitan
el botulism o, provocando la inhibicin del Clos-
tridium botulinum, bacteria que produce la
m ortal toxina botulnica
31
. D ado su poder m i-
crobicida, los nitritos seran una barrera natural
contra grm enes patgenos intestinales; por
otro lado, la reaccin de nitrosacin que puede
darse en el estm ago con algunos com puestos
nitrogenados (am inas y am idas), los acerca a la
peligrosidad por la form acin de derivados N -
nitroso, potencialm ente cancergenos y m utag-
nicos
32
. N o obstante, se debe tener en cuenta
que la elim inacin de los nitritos com o aditivos
no los excluye, ni m ucho m enos, del organis-
m o. M ientras que con los alim entos se ingieren
m enos de 3 m g/da, se segregan en la saliva en
el orden de 12 m g/da, a la par que las bacterias
intestinales producen unos 70 m g/da
31
.
Reacciones de nitrosacin endgenas
C om o decam os antes, m uchos de estos
com puestos N -nitroso estn am pliam ente distri-
buidos en el m edio am biente, pero tam bin m u-
chos de ellos son form ados en el interior del or-
ganism o m ediante reacciones de nitrosacin, so-
bre todo en el m edio cido del estm ago
33-36
.
La form acin de derivados N -nitroso en alim en-
tos tratados con nitritos com o aditivo y preser-
vante es un hecho conocido desde hace m s de
40 aos. La accin de nitritos y xidos de nitr-
geno con com puestos nitrogenados secundarios
y terciarios en alim entos (carnes curadas -jam n
en especial-, conservas de pescado, etc.) tam -
bin lleva a la form acin de com puestos N -ni-
troso
37
. La nitrosacin para dar derivados N -ni-
troso no slo es posible en relacin a alim entos:
tam bin sustancias usadas com o herbicidas pue-
den sufrir la reaccin en el jugo gstrico
38
.
V arios autores han estudiado la cintica y
m ecanism o de nitrosacin de am inocidos por
accin del nitrito en condiciones de acidez que
sem ejen las del estm ago, hallando que las es-
pecies alquilantes dainas para el AD N , luego
de la nitrosacin, son las correspondientes lac-
tonas
39
, y que la reactividad en am inocidos
143
acta farmacutica bonaerense - vol. 25 n 1 - ao 2006
con un grupo am ino fue la siguiente: -am ino-
cidos > -am inocidos > -am inocidos
40
.
Mutageni ci dad de la mezcla sulfati azol-
nitrito
En nuestro grupo, en la U niversidad N acio-
nal de Rosario, decidim os investigar la posible
m utagenicidad del sulfatiazol sdico, N aST, (un
antibitico de uso com n
41
, el cual posee tanto
una funcin am ina prim aria com o una funcin
am ida m onosustituida en su m olcula) en pre-
sencia de nitritos. Se determ in la m utagenici-
dad de N aST en presencia de nitrito de sodio en
m edio cido, em pleando las cepas de S. typhi-
murium TA 98 y TA100, hallndose com porta-
m iento m utagnico
42
. Estudios com parativos
con com puestos relacionados (ftalilsulfatiazol,
sulfanilam ida, cido sulfanlico) perm iten sugerir
que, en la form acin del derivado N -nitroso, es-
tara involucrada la funcin am ida.
Una reflexin final a modo de conclusin
Podra resultar desalentador el panoram a,
vista la cantidad de m utgenos que nos rodea,
m uchos de los cuales no podem os evitar puesto
que se generan dentro de nuestro propio orga-
nism o, o son parte necesaria del cuidado de
cultivos. Tam poco sera bueno llegar al extrem o
de elim inar todo pesticida sin tener en cuenta
peligros m ayores, com o ser la proliferacin de
hongos productores de toxinas m ucho m s da-
inas (la aflatoxina, por ejem plo, uno de los
carcingenos naturales m s potente que se co-
noce)
43
. Por fortuna, hay sustancias con propie-
dades antim utagnicas (en frutas por ejem plo)
43
, y otras que reaccionan con nitritos, dism inu-
yendo as su peligrosidad, com o polifenoles
presentes en el t verde
44
.
Agradecimientos. Los autores agradecen a la U N R y
a su Consejo de Investigaciones, CIU N R, por la ayuda
recibida; a G raciela N . G onzlez y V ilm a E. B idut,
personal de la ctedra de M icrobiologa de la Facul-
tad de Ciencias M dicas, U N R, por la colaboracin
tcnica en el trabajo experim ental; al D r. Juan M oret-
ton por el fundam ental apoyo brindado en las prim e-
ras etapas de este proyecto.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. W orld H ealth O rganization (1985) Environ.
Health Criteria 51: 3-208.
2. Bishop, J. B., K . W itt & R. Sloane (1997) Mu-
tat. Res. 396: 9-46.
3. Bishop, J.M . (1987) Science 235: 305-11.
4. Clurm an, B.E. & J. M . Roberts (1995) J. Natl.
Cancer Inst. 87: 1499-501.
5. Sherr, C.J. (1996) Science 274: 1672-7.
6. Fialkow , P.J. (1979) Annu. Rev. Med. 30: 135-
43.
7. Vogelstein, B. & K . W . K inzler (1988) The Ge-
netics Basis of Human Cancer M c G raw H ill.
8. Fearon, E.R. & B . V ogelstein (1990) Cell 61:
759-67.
9. N ow ell, P.C. (1989) Cancer Cells 1: 29-30.
10. Inam i, K . & M . M ochizuki (2002) Mutat. Res.
519: 133-40.
11. Lojo, M . (1982) Determinacin de poder mu-
tagnico de distintas sustancias Facultad de
Ciencias Exactas, U N LP.
12. M aron, D . & B. Am es (1983) Mutat. Res. 113:
173-215.
13. M c Cann, J., N . Springarn, J. K obori & B. Am es
(1975) Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 72: 979-83.
14. Trossero, C. (2000) Tecnogenologa, mutge-
nos y vida U N R editora, Rosario, A rgentina,
pgs. 89-132.
15. G asiorow sky, K ., K . Szyba, M . Cieslak-G olon-
ka, S. Zakeeruddin, M . G rtzel & D . Fraser
(1995) BioMetals 8: 257-62.
16. G m s, F., . Pam uk, T. sden, S. Y ildiz, N .
D iril, E. kszoglu, S. G r & A. skul (2003)
J. Inorg. Biochem. 94: 255-62.
17. Paz, M ., H . M uzio, V. G em ini, A. M agdaleno,
S. Rossi, S. K orol & J. M oretton (2004) Hig. Sa-
nid. Ambient. 4: 83-8.
18. Edenhauer, R. & D . G rnhage (2003) Mutat.
Res. 540: 1-18.
19. Benigni, R. (2005) Chem. Rev. 105: 1767-800.
20. Benigni, R. & L. Passerini (2002) Mutat. Res.
511: 191-206.
21. N oller, C. (1968) Qumica de los compuestos
orgnicos II ed., Editorial M dico-Q uirrgica,
Buenos Aires, pgs. 337-338, 348-349, 670.
22. Bartsch, H ., H . O shim a, B. Pignatelli, C. M ala-
vielle & M . Friesen (1991) Nitrite-reactive phe-
nols present in smoked foods and amino-su-
gars formed in the Maillard reaction as precur-
sors of genotoxic arenediazonium ions or ni-
troso compounds en M utagens in food: de-
tection and prevention(H . H ayatsu, ed.) CRC
Press, Boca Raton, Ann Arbor/Boston, pp. 87-
100.
23. Loeppky, R. & C. M ichejda (1994) ACS Sympo-
sium Series N 553, Am . Chem . Soc. W ashing-
ton D C.
144
TROSSERO C., CAFFARENA G., HURE E.& RIZZOTTO M.
24. K ier, L., E. Y am asaki & B. Am es (1974) Proc.
Natl. Sci. USA 71: 4159-63.
25. D eM arini, D . (1994) Environ. Health Perspect.
102: 127-30.
26. H iram oto, K ., H . N i-Iyam a, T. K ato & K . K iku-
gaw a (1995) Jpn. J. Toxicol. Environ. Health 41:
447-51.
27. Am an, N ., M . Em m irch, G . K am pf & M . K ai-
ser (1997) Mutat. Res. 395: 139-144.
28. Chung, K -T., L. K irkovsky, A. K irkovsky & W .
Purcell (1997) Mutat. Res. 387: 1-16.
29. G onzlez-M ancebo, S., J. G aspar, E. Calle, S.
Pereira, A. M ariano, J. Rueff & J. Casado (2004)
Mutat. Res. 558: 45-51.
30. Burchm an, P. (1999) Mutat. Res. 443: 11-36.
31. Reyes, A., Rodrguez, P., C. Torres lvarez, D .
Torres G onzlez, J. Vzquez Rodrguez & A.
Zavala Chvez (2004) Revista de la Fac. de Sa-
lud Pblica y Nutricin 1: 49, U niversidad Au-
tnom a de N uevo Len, M xico.
32. D ykhizen, R.S., R. Fraze, C. D uncan, C. Sm ith,
M . G olden, N . B enjam in & C. Leifert (1996)
Antimicrob. Agents Ch. 40: 1422-5.
33. Laires, A., J. G aspar, H . Borba, M . Proena, M .
M onteiro & J. Rueff (1993) Fd. Chem. Toxicol.
31: 989-94.
34. G aspar, J.; A. Laires, S. Va, S. Pereira, A. M aria-
no, M . Q uina & J. Rueff (1996) Teratog. Carci-
nog. Mutagen. 16: 275-86.
35. D uarte, M ., A. Laires, J. G aspar, J. O liveira & J.
Rueff. (2000) Teratog. Carcinog. Mutagen. 20:
241-9.
36. Bartsch, H .; H . O shim a & B. Pignatelli (1988)
Mutat. Res. 202: 307-24.
37. Lijisky, W . (1999) N-nitroso compounds in the
diet, Mutat. Res. 443: 1-2: 129-38.
38. Cova, D ., C. N ebuloni, A. Arnoldi, A. Bassoli,
M . Trevisan & A. D el Re (1996) J. Agric. Food
Chem. 44: 2852-5.
39. G arca-Santos, M ., E. Calle & J. Casado (2001)
J. Am. Chem. Soc. 123: 7506-10.
40. G arca-Santos, M ., S. G onzlez-M ancebo, J.
H ernndez-Benito, E. Calle & J. Casado (2002)
J. Am. Chem. Soc. 124: 2177-82.
41. M andell, G . & M . Sande (1981) Agentes anti-
microbiano (continuacin). Sulfonamidas, tri-
metoprima-sulfametoxazol y antispticos de las
vas urinarias en Las bases farm acolgicas
de la teraputica(G oodm an, A. & L. G ilm an,
eds.) 6
th
ed., Ed. M dica Panam ericana, Bue-
nos Aires, pgs. 1087-105.
42. Trossero, C., E. H ure, M . Trap, C. D rogo, L.
M onti, N . M osconi, G . Caffarena & M . Rizzotto
(2005) Biocell 29: 117.
43. Form an, D . (1991) Brit. Med. J. 303: 428-9.
44. Panzella, L., P. M anini, A . N apolitano & M .
dIschia (2005) Chem. Res. Toxicol. 18: 722-9.