UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLNDIA

INSTITUTO DE GENTICA E BIOQUMICA

CURSO DE GRADUAO EM BIOTECNOLOGIA
DISCIPLINA: MORFOLOGIA E FISIOLOGIA VEGETAL
PROFA. DRA. TEREZINHA APARECIDA TEIXEIRA
Aula Prtica N
o
. 1
_______________________________________________
MATERIAL DE APOIO
1 Microscpio ptico (M.O.)
1.1 Partes (Fig 1)
Mecnica
p
brao
tubo ou canho
revlver
platina
charriot
parafusos para ajuste macro e/ou micromtrico do foco
ptica
Sistema de aumento:
o oculares
o objetivas
Sistema de iluminao:
o espelho
o condensador
o diafragma
o filtro

Observaes:
1. A imagem proporcionada pelo M.O. aumentada, virtual e invertida em
relao ao objeto examinado;
2. Calcula-se o aumento da imagem obtida ao M.O. multiplicando-se o valor do
aumento da ocular pelo valor do aumento da objetiva;
3. Campo microscpico a rea da preparao que se est observando ao
M.O. Quanto maior o aumento da imagem, menor a abrangncia do
campo;
4. Em virtude do ltimo item, sempre se inicia a observao ao M.O. com uma
combinao de lentes que proporcione o menor aumento, a fim de se ter
uma viso panormica da regio que se quer observar com maior aumento.


Figura 1 Partes do microscpio ptico

1.2 MANEJO DO MICROSCPIO
1. Acender a lmpada do sistema de iluminao;
2. Abrir totalmente o diafragma e colocar o sistema condensador - diafragma na
posio mais elevada, pois aquela que permite melhor iluminao;
3. Movimentar o revlver, colocando em posio a objetiva de menor aumento
(4X);
4. Tomar a lmina com a lamnula para cima e coloc-la na platina, prendendo-
a com os grampos;
5. Movimentar o charriot, fazendo com que o preparado fique em baixo da
objetiva;
6. Com o parafuso macromtrico, elevar a platina ao mximo, observando que
a objetiva no toque na lamnula, pois poder quebr-la;
7. Focalizar a preparao para a obteno de uma imagem ntida,
movimentando o parafuso macromtrico e abaixando a platina at que se
possa visualizar a imagem;
8. Aperfeioar o foco com o parafuso micromtrico;
9. Colocar a regio do preparado que se quer ver com maior aumento bem no
centro do campo visual da lente;
10. Movimentar o revlver, colocando em posio a objetiva de 10X (aumento
mdio);
11. Repetir o procedimento do item 6;
12. Para focalizar a nova imagem, repetir o procedimento do item 7;
13. Repetir o item 8;
14. Repetir o item 9;
15. Colocar a objetiva de 40X (maior aumento) em posio e repetir os itens 6,
7 e 8;
16. A objetiva de 100X chamada de imerso e seu uso ser explicado
posteriormente.


OBSERVAES:
1. A maior parte de nossos microscpios possuem lentes parafocais. Isto
significa que, uma vez obtido o foco com a objetiva de menor aumento,
basta girar o revlver, colocar a objetiva 10X em posio e acertar o foco
apenas com o parafuso micromtrico;
2. Age-se da mesma forma, ao focalizar a objetiva 40X, desde que a imagem
esteja em foco com a objetiva 10X;
3. A objetiva de 100X chamada de imerso e seu uso ser explicado
oportunamente;
4. O aluno dever repetir vrias vezes as operaes descritas no manejo do
microscpio, a fim de atingir maior desenvoltura no manuseio do
microscpio ptico.



2 Tcnica de corte a mo livre
2.1 Obteno de cortes a mo livre
O material para ser observado em microscopia ptica deve ser fino e
transparente. Isto significa que o material dever ser cortado e clarificado,
podendo ser corado ou no.

Em anatomia vegetal os cortes podem ser feitos a mo livre ou com o auxlio
de micrtomos. Tais cortes so efetuados geralmente em um dos seguintes
sentidos: (Fig 2)
corte transversal: perpendicular ao maior eixo do rgo;
corte longitudinal: paralelo ao maior eixo do rgo. Quando o rgo for
cilndrico o corte pode ser tangencial (tangente ao raio cilndrico)
dimetro ou raio;
Paradrmico: paralelo superfcie do rgo. Utilizado principalmente em
estudos dos tecidos de revestimentos.

Figura 2 Planos de corte em rgo cilndrico.
2.2 Emprego de lmina de barbear
Para os cortes a mo livre pode-se empregar navalha ou lmina de barbear. A
lmina de barbear mais utilizada devido ao preo menor e fcil manuseio.

Os cortes so obtidos com dois movimentos rpidos e conjugados da lmina
sobre o material a ser cortado (um movimento para dentro e outro para a
direita). Com o auxlio de um pincel, leva-se o corte para um recipiente
contendo gua destilada. Aps serem obtidos diversos cortes, escolhem-se os
melhores (mais finos so os mais transparentes).
2.3 Clareamento dos cortes
Efetua-se o clareamento com o auxlio de soluo de hipoclorito de sdio. Os
cortes escolhidos so transportados para o hipoclorito onde devem permanecer
at completa descolorao. Tal operao deve ser efetuada com o auxlio de
um estilete e no com o pincel. Aps a descolorao, o material submetido
lavagem de forma a eliminar o hipoclorito.
2.4 Colorao
Colocam-se duas gotas do corante em um pequeno vidro de relgio ou placa
de petri, transportam-se os cortes para o corante, permanecendo a por dois ou
trs minutos. Aps esse tempo os cortes so retirados do corante e lavados em
gua destilada.
2.5 Montagem da lmina
Limpa-se muito bem uma lmina e uma lamnula e coloca-se sobre a lmina
uma gota de gua. Transporta-se a seguir, com todo o cuidado, o corte para a
gota dgua com o auxlio de um estilete. Cobre-se o corte e a gota dgua com
a lamnula.

A gua deve ser o suficiente para preencher totalmente o espao sob a
lamnula. Pode-se substituir a gua por glicerina. Neste, deve-se tomar o
cuidado para eliminar possveis bolhas de ar da glicerina.
2.6 Fechamento da lmina
Quando material montado em glicerina, pode-se prender a lamnula lmina
com esmalte de unha.






Trabalho Prtico 1
Material: bulbo de cebola escamas ou catafilos
Nome cientfico: Allium cepa L.
Famlia: Liliaceae

Objetivo: Observao de clula vegetal parede celular, citoplasma, ncleo,
clulas normais e clulas plasmolisadas

Procedimento:
1. Retirar a escama ou catafilo de um bulbo de cebola;
2. Com a lmina de barbear destacar um fragmento de camada mais externa
do catafilo;
3. Montar o material em uma gota dgua e uma gota de azul de metileno
entre a lmina e a lamnula;
4. Observar ao microscpio;
5. Fazer desenho;
6. Retirar o azul de metileno e a gua com um pedao de papel filtro, aps
levantar a lamnula;
7. Adicionar glicerina, tomando-se o cuidado de evitar a presena de bolhas;
8. Aquecer ligeiramente o material;
9. Observar ao microscpio, notando-se o aspecto das clulas plasmolisadas;
10. Desenhar.

Trabalho Prtico 2

Material: Batata tubrculo
Nome cientfico: Solanum tuberosum L.
Famlia: Solanaceae

Objetivo: Observao de clula vegetal contendo reservas. Parede celular,
reservas de amido.

Procedimento:
1. Tomar um pedao do tubrculo de batata e cortar com o auxlio de
lmina de barbear;
2. Levar os cortes a uma placa de petri contendo soluo de hipoclorito de
sdio para a descolorao;
3. Retirar os cortes do hipoclorito de sdio com um estilete, passando-os
para um outro recipiente contendo gua destilada, lava-los muito bem;
4. Transferir o corte para outra placa de petri contendo 2 a 3 gotas de
hematoxilina, deixa-lo at que o material fique corado adequadamente;
5. Lava-lo com gua destilada para retirar o excesso de corante;
6. Colocar uma gota dgua sobre a lmina de microscopia e transferir o
corte para a gua e cobri-lo com lamnula;
7. Observa-lo ao microscpio;
8. Desenhar a clula vegetal contendo reservas.

Trabalho Prtico 3

Material: Batata tubrculo
Nome cientfico: Solanum tuberosum L.
Famlia: Solanaceae

Objetivo: Observao do amido no interior de clulas

Procedimento:
1. Cortar, o mais fino possvel, com o auxlio de lmina de barbear,
tubrculo de batata descascado;
2. Colocar os cortes em uma placa de petri com gua destilada;
3. Montar um dos cortes obtidos, em gua, entre lmina e lamnula;
4. Colocar, em uma placa de petri, 10 gotas de gua e uma gota de lugol;
5. Transferir um corte para este lquido, para cora-lo;
6. Montar o corte entre a lmina e a lamnula e observa-lo ao microscpio;
7. Desenha-lo.




BIBLIOGRAFIA CONSULTADA


OLIVEIRA, FERNANDO; SAITO, MARIA LUCIA. Prticas de morfologia
vegetal. So Paulo: Editora Atheneu, 2006.