Extraccin del ADN de una cebolla

2 Bach. A
Objetivo de la prctica
El objetivo de la prctica es conseguir extraer el ADN de la cebolla
Introduccin terica
Extraccin del ADN
La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas
En primer lugar tienen que romperse la membrana plasmtica de la clula eucariota para poder acceder al
ncleo de la clula. En el caso de los vegetales tambin habr que romper la pared celular.
A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN.
Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que
precipite en alcohol.
Como el ADN se encuentra en todas las clulas de los seres vivos, incluyendo por supuesto los vegetales,
intentaremos extraer esta importante molcula a partir de cualquier fruta.
El proceso de extraccin de ADN desde una clula es el primer paso para muchos procedimientos (protocolos)
de los laboratorios de biotecnologa.
Los cientficos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran
en las clulas, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).
El material que se necesita para ello es fcil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los
ingredientes tiene su propia funcin . la solucin de sal y jabn sirve para romper la membrana plasmtica y
nuclear e incluso la pared celular.El lquido de lentillas elimina las proteinas que degradan el ADN. El alcohol
etlico sirve para precipitar el ADN
EL ADN
El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En l estn escritas las instrucciones que deben
seguir las clulas para construir un organismo y mantenerlo vivo. Todas las clulas que forman un individuo
contienen una copia idntica de ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y
por eso hay clulas con diferentes formas y funciones.
Esta formado por desoxirribonucleotidos (A,G,C,T). Que a su vez estn formados por un azcar D
desoxirribosa y un ion fosfato.
La proporcin y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los polinucletidos.
El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:
Estructura primaria:
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Los polinucletidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenina, guanina , citosina y timina por enlaces
covalentes de tipo fosfodiester. As se forma un esqueleto de polidesoxiribosafosfato, de forma que queda un
extremo con OH 3 libre y un extremo 5 co un grupo fosfato libre.
Estructura secundaria
Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.
Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos :
.El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hlice dextrgira (forma B) . Las dos
hebras son antiparalelas es decir si una presenta la direccin 5>3, la otra posee la direccin 3>5.
El conjunto se pliega sobre s mismo obligado por los puentes de hidrgeno entre diferentes regiones de la
molcula, hasta adoptar la conformacin ms estable, que es la de doble hlice. Este enrollamiento entre las 2
hebras de la doble hlice es destrgiro es decir gira a derechas y de tipo plectonmico, como si estuvieran
trenzadas.
Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia entre las bases de ambas cadenas
.La adenina slo puede estar frente a la timina y la guanina frente a la citosina. As las bases pricas estn
enfrentadas a las bases pirimidnicas y la unin se realiza por puentes de hidrgeno en los pares A=T y tres en
los pares GC
La correspondencia entre las bases es la causa de que las dos cadenas de la doble hlice de ADN posean
secuencias complementarias.
Adems los pares de bases estn horizontales y el eje los atraviesa por el centro.
.Modelo hlice A: En este modelo los pares de bases nitrogenadas estn inclinados hacia el exterior pero la
hlice al igual que la del ADN B es dextrogiro
. Modelo hlice z : En este modelo las cadenas de adn no se enrollan en forma de doble hlice sino en forma
de zigzag.
Metodologa
Materiales
1 cebolla
vaso de precipitados x 2 (250ml y 500 ml)
cuchillo
batidora elctrica con vaso
tubos de ensayo
10 ml de detergente lquido de lavavajillas
termmetro
2
embudo
papel de filtro
100 ml de agua mineral
3 g de NaCl
5 g de bicarbonato sdico
enzimas proteasas( lquido de lentillas)
20 ml de alcohol etlico muy fro
Procedimiento
En primer lugar cortamos la cebolla en trozos pequeos para poder batirla con facilidad. Despus pesamos
con la balanza 3 gramos de NaCl y 5 gramos de bicarbonato sdico. Depositamos todo esto con 10 ml de
lavavajillas en un vaso de precipitados de 500 ml., le aadimos la cebolla y los 100 ml de agua mineral y lo
batimos todo. Cuando ya la disolucin est bien batida lo ponemos a calentar al bao mara durante 15
minutos. Para ello necesitaremos el soporte, la placa de amianto y otro vaso de precipitados lleno de agua del
grifo.
Cuando ya est calentado tenemos que filtrarlo. Para ello cogemos papel secante para hacer el filtro. Con la
medida de un embudo grande hacemos un crculo y lo plegamos progresivamente, como si fuera un acorden.
Ponemos el filtro dentro de nuestro embudo y pasamos la disolucin de cebolla por el filtro. El liquido
verdeamarillo sin espuma que nos quede (20 ml) lo ponemos en un tubo de ensayo. Ms tarde le ponemos un
poco de liquido de lentillas .Adems tenemos que poner 20 ml de alcohol etilico pero muy fro ,que medimos
en una probeta, y lo metemos en un tubo de ensayo. Luego pasamos el alcohol etlico de ese tubo de ensayo al
otro pero de manera que el alcohol pase solo por las paredes del tubo de ensayo con un ngulo de 45 y
vertemos muy despacio.
Cuando ya hayamos acabado con todo ese proceso cogemos un gancho y sacamos el ADN de la cebolla.
Parte experimental
En la primera prctica el resultado fue la obtencin del ADN de la cebolla que era una sustancia gelatinosa
transparente.En el tubo de ensayo, se apreciaba una parte transparente arriba y debajo de sta una parte
amarillenta.
Pero en la segunda no se produjo con xito la extraccin del ADN se veian las dos partes pero no
conseguimos ver el ADN
Conclusiones
La primera prctica en s sali bien aunque hay que decir que el adn de la cebolla no se vea muy claramente.
Tenamos que agitar el tubo un poco para poderlo mejor.
Durante la prctica tuvimos algunos problemas con el filtro, que no estaba muy bien hecho y que no filtraba
bien, por lo que tuvimos que hacer otro. Adems tambin tuvimos complicaciones con la forma de poner el
alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.
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En la segunda prctica el ADN no se vio y creemos que fue porque no utilizamos suficiente lquido de
lentillas; sin embargo en los los pasos previos de la prctica anterior como por ejemplo la adicin del alcohol
con inclinacin de 45 y el filtro s que salieron bien.
Bibliografa
Libro de Biologa de 2 de bachiller edit. Bruo
www. Centros5.es
www.centraleureka.com
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