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1. INTRODUO

As enzimas desempenham um papel fundamental no organismo vivo, j que
catalisam reaes bioqumicas de desenvolvimento e manuteno das clulas.
Medindo-se a velocidade da reao catalisada por uma enzima, determina-se
sua concentrao. Para isso, necessrio utilizar mtodos analticos que permitam
medir a diminuio na concentrao do substrato ou o aumento na concentrao do
produto da reao.
Diversos fatores podem influenciar na atividade enzimtica, como a
concentrao do substrato, temperatura, pH, concentrao de ativadores e inibidores,
concentrao do produto. Estas variveis devem ser controladas. s vezes, a presena
de ativadores e inibidores em sistemas biolgicos no pode ser detectada, e por isso
no podem ser controlada. Em vista disso, a medida da atividade enzimtica no
corresponde respectivamente concentrao real da enzima. Deve-se manter a
constante durante o experimento, a fim de se medir com preciso a velocidade de uma
reao enzimtica.
Enzimas so biocatalisadores utilizados em diferentes aplicaes. Dentre os
principais setores de aplicaes esto os alimentos, papel e celulose, a produo de
bicombustveis, detergentes e as atividades que envolvem tratamento enzimtico de
produtos agrcolas. J, para enzimas especiais tem aplicaes em frmacos, reaes
para diagnostico alem de inmeras linhas em pesquisa bsica.
Em anlises clnicas, freqentemente utilizam-se enzimas no diagnstico de
doenas. Na indstria farmacutica, enzimas ligadas a matrizes insolveis (enzimas
imobilizadas) so usadas como reatores qumicos altamente especficos. A -
galactosidase utilizada para reduzir o contedo de lactose no leite, por exemplo.
Alm disso, enzimas so utilizadas como reagentes qumicos em analisadores
clnicos portteis. Dosagens de colesterol, triacilgliceris, glicose, podem ser realizadas
em poucos minutos, usando plasma. Anticorpos especficos contra um antgeno
protico so acoplados a uma enzima indicadora, como peroxidase de raiz forte
(horseradish), gerando um ensaio muito especfico e sensvel.






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2. OBJETIVOS
Demonstrar e identificar a presena e a atividade de algumas enzimas
existentes em produtos naturais, atravs de identificaes por reaes especficas, em
testes qualitativos.


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3. REVISO BIBLIOGRFICA

As enzimas so protenas que, atuam como catalisadoras na maioria das
reaes bioqumicas. Os catalisadores aceleram as reaes qumicas, at torn-las
quase instantneas, pois baixam a energia de ativao necessria para que a reao
ocorra.
A grande maioria das reaes bioqumicas se d em vias metablicas, que so
seqncias de reaes em que o produto de uma reao utilizado como reagente na
reao seguinte. Diferentes enzimas catalisam diferentes passos de vias metablicas,
agindo de forma concertada, assim no interrompendo o fluxo nessas vias. Por outro
lado, cada enzima pode sofrer ajuste da sua atividade, aumentando, diminuindo ou
mesmo interrompendo. Assim, o fluxo de uma via metablica depende da velocidade
de catlise das enzimas que nela participam. Um pequeno grupo de enzimas, as
ribozimas, tm uma natureza no protica. As ribozimas so molculas de RNA que
possuem capacidade cataltica.
Uma das propriedades das enzimas, como catalisadores, que elas no alteram
o equilbrio de uma reao. Em geral, uma enzima catalisa apenas um substrato, algo
que condicionado pela estrutura do centro ativo da enzima. Este possui uma
geometria definida e determinadas caractersticas fsico-qumicas que condicionam o
tipo de substrato que pode se ligar e sofrer alterao qumica no centro ativo.
Quando um substrato se liga ao centro ativo, forma-se o chamado complexo
enzima-substrato (ES). A formao do ES importante na determinao da velocidade
de reao e, por conseqncia, na velocidade de formao dos produtos. O substrato
sofre uma alterao enquanto se encontra ligado enzima, transformando-se num
produto; existe ento, de forma transiente, um complexo enzima-produto (EP). O
produto se desliga ento da enzima, e esta encontra-se preparada para novo ciclo
cataltico.
A determinao da atividade enzimtica envolve a medida da velocidade da
reao. Pode ser medida com a enzima pura e em condies tais que permita que a
velocidade da reao seja mxima, o que significa que o substrato (S) deve estar em
concentrao elevada, de modo a permitir que toda enzima (E) esteja transformada
nesse complexo ativado enzima-substrato (ES). Nesse caso a velocidade (V) da reao
proporcional a concentrao enzimtica, e tambm ao complexo ES.

= = [] (Eq. 1)

A velocidade das reaes enzimticas varia com fatores de concentrao de
enzima e substrato, bem como temperatura e pH.


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As enzimas podem ser classificadas de acordo com o tipo de reao em que
atuam. As chamadas oxidorredutases catalisam reaes de oxi-reduo em sistemas
biolgicos e esto relacionadas com processos de respirao e fermentao. Podemos
citar como membros deste grupo: hidrogenases, oxidases, peroxidases, hidroxilases e
oxigenases. As transferases so enzimas que catalisam a transferencia de grupos de
um composto para outro, como por exemplo, a metilao em sistemas biolgicos. As
hidrolases catalisam reaes hidrolticas, estando entre elas as enzimas proteolticas e
as amilolticas. As liases atuam nas reaes de eliminao, elas modificam o substrato
cindindo compostos ou removendo grupos da molcula de substrato, dando lugar a
formao de uma dupla ligao, como por exemplo as descarboxilases. As isomerases
so enzimas que catalisam reaes de isomerizao. As ligases (sintetases) so enzimas
que atuam na reao de sintese de novos compostos, nas quais duas molculas so
ligadas as custas da energia liberada na degradao da molcula de ATP.
A urease uma importante enzima relacionada decomposio microbiana de
compostos orgnicos. Ela considerada uma enzima constitutiva, pois sintetizada
pela bactria na presena ou ausncia do substrato (uria). Pode ser encontrada em
bactrias, leveduras e vrias plantas superiores. A urease um enzima que catalisa a
hidrlise da uria em dixido de carbono e amnia. A reao processada a seguinte:

(NH
2
)
2
CO + H
2
O CO
2
+ 2NH
3


A catalase uma enzima constitutiva importante, que apresenta a funo
biolgica de proteger as clulas das substancias txicas produzidas pela atividade do
oxignio sobre a superfcie celular. uma enzima intracelular, encontrada na maioria
dos organismos, que decompe o perxido de hidrognio, segundo a reao qumica:

2 H
2
O
2
2 H
2
O + O
2






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4. MATERIAIS E MTODOS

4.1 Materiais Utilizados:

Tubos de ensaio;
Pipetas graduadas de 10 mL;
Soluo de uria 3% em tampo fosfato pH 7;
Pipetador;
gua destilada;
Vermelho de fenol;
Farelo cru;
Farelo tostado;
Suspenso de batata em tampo fosfato pH 7;
Banho maria a 30C;
Estante para tubos de ensaio;
gua Oxigenada 0,1 M.

4.2 Mtodo:

1. Urease

Em tubos de ensaio com tampa, contendo um grama de farelo de soja cru em
um tubo e um grama de farelo de soja tostado no outro tubo, adicionar 4 mL da
soluo de uria nos dois tubos. Deixar de repouso por 30 minutos a 30C e aps
adicionar gotas do indicador vermelho de fenol. Fazer um branco com adio apenas
do tampo

2. Catalase

Em um tubo de ensaio adicionar 5 mL da suspenso enzimtica de batata e
aps adicionar 10 mL de gua oxigenada 0,1 M.




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5. RESULTADOS E DISCUSSES

1. Urease

As cores observadas nos trs tubos de ensaio foram:

Tubo de ensaio com o tampo: vermelho (cor do indicador);
Tubo de ensaio com o farelo cru: rosa intenso;
Tubo de ensaio com o farelo tostado: vermelho.

Observando as cores, podemos perceber que no tudo de ensaio que contm o
farelo cru possui atividade enzimtica, pois a cor do rosa intenso devido amnia
formada, pois a urease est presente no farelo cru e est decompe a uria em
amnia, segundo a reao abaixo:

CO(NH
2
)
2
+ H
2
O 2 NH
3
+ 2 CO
2


J observando o tudo de ensaio que continha o farelo de soja tostado obteve a
mesma cor do tampo, pois no h atividade enzimtica no farelo, ou seja, a enzima
urease presente no farelo de soja foi desativada, no decompondo assim a uria em
amnia.

2. Catalase

Observou-se que quando adicionado a gua oxigenada na suspenso de batata
ocorreu um rpido desprendimento de O
2
devido presena da enzima catalase na
suspenso de batata, isto ocorre seguindo a reao abaixo:
H
2
O
2
H
2
O + O
2



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6. CONCLUSO

Pode-se observar nesta prtica a ao e a presena das enzimas nos
alimentos. Podemos ver que no teste da urease a ao desta enzima e podemos
concluir tambm que o farelo de soja foi corretamente tostado, pois a urease foi
desativada e no houve ao enzimtica sobre a uria, quando esta adicionada no
tubo de ensaio.
J no teste da catalase pode-se perceber o rpido desprendimento do
oxignio, o que indicou a presena da enzima em estudo e a sua rpida ao sobre a
gua oxigenada.







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7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

LEHNINGER, Albert L. Bioqumica; So Paulo: Editora Edgard Blucher
LTDA,1976 ;

REGULY, J. C. . Introduo Analtica e a Tecnologia de Carboidratos, Lipdios,
Protenas e Enzimas . Rio Grande: Editora da FURG, 1983.

Bioqumica/Enzimas. Disponvel em: <
http://pt.wikibooks.org/wiki/Bioqu%C3%ADmica/Enzimas> Acesso em 09 de Junho de
2010;

Enzimas, Aspectos Gerais. Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia
de Alimentos. Disponvel em: <
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/lista_exerc/enzimas_aspectos_ger
ais.pdf> Acesso em 09 de Junho de 2010;






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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE
ESCOLA DE QUMICA E ALIMENTOS











RELATRIO TCNICO CIENTFICO

Disciplina de Bioqumica Industrial
Professor Andr Burkert





Anlise Qualitativa de Algumas Enzimas







Ana Carolina Butzke 40726
Caroline Lindemann 40755
Thiago Carvalho 41400
Vanessa Wendt Schmidt 40748


Rio Grande, Junho de 2010


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ANEXOS

1. Qual a importncia e exemplos de aplicao prtica das enzimas
mencionadas acima?

As enzimas desempenham um papel fundamental no organismo vivo, j que
catalisam reaes bioqumicas de desenvolvimento e manuteno das clulas.
A catalase usada na indstria txtil para a remoo de perxido de hidrognio
de tecidos. Encontra-se tambm em alguns produtos de limpeza de lentes de contacto,
agindo como agente antibacteriano. Encontrada na maioria dos organismos, a catalase
decompe o perxido de hidrognio, que txico para as clulas, em espcies qumica
que sejam incuas.
A urease a enzima que catalisa a hidrlise da uria para dixido de carbono e
amnio, sendo produzida por um grande nmero de microrganismos principalmente
bactrias. A distribuio da urease e os fatores que a influenciam tem importncia
relevante em vista do uso da uria na agricultura como fertilizante e um dos fatores
que podem influenciar a atividade desta enzima no solo o uso crescente de
pesticidas.

2. A partir do teste qualitativo de urease como poderia ser elaborado um
mtodo quantitativo de determinao da atividade enzimtica da referida enzima?

A anlise quantitativa da enzima poderia ser feita da seguinte maneira:

Ensaios diretos: medida direta da concentrao do substrato ou produto em
funo do tempo.

Ensaios indiretos: quando a medida da concentrao do substrato e do
produto so prximas, a gerao do produto pode ser acoplada a outra reao no
enzimtica, que produza um sinal mais conveniente.

Ensaios acoplados: a reao enzimtica de interesse acoplada a uma segunda
reao enzimtica, que pode ser convenientemente medida, tendo como exemplo a
reao da glicose oxidase

Para a obteno de uma anlise quantitativa necessrio saber:

Toda estequiometria de uma reao cataltica
Se a enzima requer adio de cofatores como um on ou coenzima;


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A dependncia da enzima sob a concentrao do cofator ou substrato.
O pH timo.
A temperatura pela qual a enzima esta estvel e apresenta alta atividade.
O procedimento para determinao do aparecimento e desaparecimento do produto
de reao ou substrato, respectivamente, ou de um intermedirio (especialmente
quando estes so coloridos ou absorvidos em luz UV).

A anlise quantitativa confirmada quando o substrato ou o produto colorido
ou absorvido em luz ultravioleta. O valor de aparecimento ou desaparecimento do
produto ou substrato absorvido por luz pode ser analisado pelo espectrofotmetro.
Alm do produto ou substrato pode - se analisar o intermedirio (aquele que serve
como ponte para o desencadeamento de outra reao).