PREPARACION DE MEDIOS Y SIEMBRA DE BACTERIAS EN MEDIOS DE CULTIVO

I. INTRODUCCIN
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otro
s componentes, preparados en el laboratorio, que suministran los compuestos nece
sarios para el desarrollo de los microorganismos. Algunas bacterias pueden crece
r satisfactoriamente en casi cualquier medio de cultivo, otras bacterias necesit
an medios especiales y existen algunas que no pueden crecer en ninguno de los me
dios desarrollados hasta ahora. Los distintos tipos de medios de cultivo varan se
gn las necesidades de los microorganismos objeto de estudio, pero todos han de cu
mplir los siguientes requisitos:
- Han de contener las sustancias necesarias para el crecimiento del microorganis
mo que se siembra.
- Han de mantenerse estriles hasta el momento de la siembra.
- Los requerimientos para el crecimiento microbiano se pueden agrupar en dos cat
egoras: Fsicos y qumicos. Entre los primeros se incluyen la temperatura, el pH y la
presin osmtica; entre los requerimientos qumicos se encuentran el agua, las fuente
s de carbono y nitrgeno, las sustancias minerales, el oxgeno y determinados factor
es orgnicos de crecimiento.
- Finalmente, una vez sembrados, deben ser incubados a la temperatura y condicio
nes adecuadas.
Ademslas bacterias pueden ser divididas en auttrofas y hetertrofos. Las primeras co
mprenden las bacterias del suelo y el agua que obtienen carbono y nitrgeno de la
atmsfera y de la materia inorgnica simple. Las bacterias hetertrofas requieren comp
uestos orgnicos ms complejos como fuente de carbono y nitrgeno, as como protenas o su
s derivados,
tambin requieren carbohidratos y grasas. Este ltimo grupo de organismos es el ms im
portante en bacteriologa mdica.
II. OBJETIVOS
* Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados por componentes
* Aprender a preparar, esterilizar y almacenar distintos tipos de medios de cult
ivo. As como la importancia de los diferentes medios de cultivo y su uso.
* Familiarizarse con las tcnicas empeladas en microbiologa para el cultivo y la ma
nipulacin de microorganismos en condiciones de esterilidad.
III. MARCO TEORICO
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Existe una gran variedad de medios para el cultivo de los microorganismos en el
laboratorio, la mayora de ellos pueden adquirirse ya elaborados, necesitando algu
nos slo la adicin de agua o la esterilizacin. Los medios de cultivo pueden clasific
arse:
I. POR SU CONSISTENCIA:
1. Medios Lquidos o Caldos: Son aquellos que contienen, disueltos en agua, los nu
trientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos.
2. Medios Slidos: Contienen nutrientes disueltos en agua pero se les aade un agent
e solidificante. El Agar es un polisacrido complejo que se obtiene de algas rodofc
eas de origen marino cuyas propiedades son de gran utilidad en la preparacin de m
edios de cultivo slidos: No es degradado enzimticamente por los microorganismos (a
excepcin de algunos microorganismos de ambientes marinos), funde aproximadamente
a 100C y permanece en estado lquido mientras la temperatura no descienda por deba
jo de 45-50C.
Adems, una vez solidificado se puede incubar a temperaturas elevadas sin que se l
ice. Generalmente el Agar se aade, para
solidificar un medio lquido, en una concentracin del 1,5%. Los medios con Agar se
envasan en tubo o en placa de Petri.
3. Medios Semislidos: Son similares a los medios slidos, pero la concentracin del a
gente solidificante es menor, generalmente del 0,4% con lo que, una vez solidifi
cados mantienen una consistencia gelatinosa. Se utilizan, por ejemplo, para dete
rminar la movilidad de los microorganismos.
II. POR SU COMPOSICIN
1. Medios complejos: Contienen todos los nutrientes necesarios para el crecimien
to de muchos tipos de microorganismos, pero no se conocen todos los componentes
que forman parte de ellos, ni las concentraciones exactas de cada uno de ellos.
Muchos de sus componentes proceden de la degradacin parcial de tejidos o producto
s animales, de plantas o de microorganismos que son fuente de aminocidos, azcares,
lpidos, vitaminas y minerales. Ejemplos de dichos componentes son las peptonas o
triptonas (protenas animales digeridas enzimticamente), el extracto de carne y el
extracto de levadura.Como ya se ha mencionado, en estos medios suelen encontrar
se azcares pero en muchos casos los medios complejos son suplementados con glucos
a.Un ejemplo de medio nutritivo complejo es el caldo nutritivo, que contiene pep
tona y extracto de carne.
2. Medios definidos: Son aquellos que contienen los distintos nutrientes en form
a de productos qumicos puros (pero no extra puros) y en concentraciones conocidas
. As, un medio definido que permita el desarrollo de un microorganismo hetertrofo
y "poco exigente", como E. coli, debera contener sales inorgnicas y fuentes de car
bono y nitrgeno: MgSO4, KPO4H2, Na2PO4H, glucosa y NH4Cl. Otros
elementos esenciales, como hierro, manganeso y cobre, se encuentran generalmente
presentes como contaminantes de los productos qumicos antes citados, en cantidad
es suficientes para el crecimiento.
III. POR SU UTILIZACIN:
Muchos medios de cultivo utilizados en el laboratorio son medios generales en lo
s que se pueden desarrollar una gran variedad de microorganismos con distintos r
equerimientos nutricionales. Sin embargo, en algunas ocasiones, es necesario ais
lar a partir de una muestra un microorganismo que se encuentre en un bajo nmero y
que pueda ser enmascarado por otros microorganismos presentes en un nmero ms elev
ado. En esos casos es recomendable utilizar medios de cultivo que ayuden a separ
ar y diferenciar dichos microorganismos o que, de forma selectiva, favorezcan el
crecimiento de alguno de ellos. Estos medios pueden ser:
1. Medios Selectivos: Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo determ
inado de microorganismos, inhibiendo el desarrollo de los dems. Algunos de estos
medios contienen un agente selectivo como antibiticos, productos qumicos, colorant
es, etc.
Entre los agentes selectivos podemos citar el cloruro sdico, que en concentracin e
levada inhibe la mayora de los microorganismos excepto los microorganismos haloto
lerantes, como son los estafilococos, o la azida de sodio, que inhibe el crecimi
ento de bacterias Gram negativas al fijarse al hierro de la porfirina del sistem
a citocromo, permitiendo seleccionar los estreptococos, que carecen de este sist
ema, as como otros Gram positivos.
De la misma manera, la bilis y sales biliares convierten los medios de cultivo a
los que se aaden en selectivos para
Salmonella ya que, adems de inhibir a los microorganismos Gram positivos, en conc
entraciones elevadas inhiben tambin a bacterias Gram negativas fermentadoras de l
actosa. Los colorantes, como el verde brillante, inhiben selectivamente las bact
erias Gram positivas, siendo tambin inhibidor para la mayora de las bacterias inte
stinales excepto para Salmonella.
Este colorante es la base del medio Agar Verde Brillante, utilizado para el aisl
amiento de Salmonella a partir de muestras fecales. Los medios selectivos pueden
serlo tambin por su pH, as el Agar glucosado de Sabouraud ajustado a pH 5,6, se u
sa para el aislamiento de hongos, que a ese pH crecen mejor que las bacterias.
2. Medios Diferenciales: Son aquellos diseados para distinguir unos microorganism
os de otros, a partir de una poblacin mixta, por la apariencia distinta que toman
sus colonias. Estos medios de cultivo ponen de manifiesto propiedades que un de
terminado tipo de microorganismo posee. Por ejemplo, los medios diferenciales ll
evan incluido un indicador de pH, que pone de manifiesto la degradacin de un nutr
iente especfico (generalmente un azcar) por el cambio de color que se origina cuan
do ste es metabolizado, como en el caso del medio CLED.
Los medios diferenciales pueden ser adems selectivos, si se aaden agentes que inhi
ben el crecimiento de determinados microorganismos. En este caso va a ser posibl
e distinguir diferentes tipos microbianos dentro del limitado grupo de microorga
nismos que pueden crecer. As, el medio EMB de Levine es selectivo para las bacter
ias Gram negativas por contener dos colorantes, eosina y azul de metileno, que i
nhiben el crecimiento de
bacterias Gram positivas.
Es tambin un medio diferencial, porque distingue las bacterias que fermentan la l
actosa (con produccin de cido) de las no fermentadoras. La formacin de cidos a parti
r de lactosa hace que ambos colorantes precipiten en la superficie de las coloni
as, que aparecen de color morado. En ciertas ocasiones, como ocurre en el caso d
e E. coli, las colonias presentan adems un brillo metlico. El Agar Mac Conkey es o
tro ejemplo de medio selectivo y diferencial. La presencia de sales biliares y c
ristal violeta inhiben el crecimiento de bacterias no entricas; la fermentacin de
lactosa con liberacin de productos cidos hace virar un indicador de pH incorporado
en el medio.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO BACTERIANO
Las bacterias pueden ser divididas en auttrofas y hetertrofos. Las primeras compre
nden las bacterias del suelo y el agua que obtienen carbono y nitrgeno de la atmsf
era y de la materia inorgnica simple. Las bacterias hetertrofas requieren compuest
os orgnicos ms complejos como fuente de carbono y nitrgeno, as como protenas o sus de
rivados, tambin requieren carbohidratos y grasas. Este ltimo grupo de organismos e
s el ms importante en bacteriologa mdica.
- Protenas: Se suministran generalmente como peptonas que se encuentran disponibl
es en el comercio, preparadas por digestin parcial de carne con enzimas ppticas, c
onsisten en polipptidos, dipptido y aminocidos.
- Carbohidratos: Suministran carbono para las sntesis, y adems su fermentacin liber
a energa utilizable en el metabolismo.
- Factores accesorios de crecimiento: Son tambin requeridos por algunas bacterias
. Entre ellos estn las
vitaminas del complejoB (tiamina, cido nicotnico, piridoxina, botina). Estas susta
ncias son necesarias y las bacterias no las pueden sintetizar. Otros factores ne
cesarios para algunas bacterias son obtenidos de nutrimentos ms complejos, como e
l suero, la sangre la yema del huevo, etc.
- Sales minerales: Elementos como potasio, sodio, calcio, etc. Tambin son requeri
dos por algunas bacterias en su desarrollo.
- Atmsfera: Microorganismos aerobios obligados, anaerobios obligados, anaerobios
facultativos, etc.
- Presin osmtica: Las clulas pueden encogerse y ser destruidas (plasmlisis) en soluc
iones hipertnicas, inversamente, se rompen (plasmoptisis) por entrada de agua, en
las soluciones hipotnicas.
- Temperatura: Para la mayora de bacterias patgenas del hombre la temperatura ptima
de crecimiento es de 37 C.
- Luz: La mayora de las bacterias desarrollan en ausencia de luz porque esta pued
e ser letal.
- Reaccin: La mayora de las bacterias crece mejor en un medio ligeramente alcalino
(pH 7,2- 7,6).
IV. PROCEDIMIENTO
Tcnica de estra cruzada
a) En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en cuatro cuadrantes.
Tomar una muestra con el asapreviamente flameada y fra, inocular la muestra hacie
ndo 4-5 estras simples muy juntas de lado a ladosobre el primer cuadrante de la c
aja, cerrar la caja (Figura 4).
b) Flamear el asa de inoculacin y hacer girar la caja de Petri un cuarto de vuelt
a. Abrir nuevamente la caja yenfriar el asa de siembra tocando la superficie del
medio lejos de la zona de estras recin hechas.
c) Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estras y hacer
un segundo grupo de
estrasen el segundo cuadrante como en el caso anterior.
d) Repetir el procedimiento 4 y 5 en el tercer cuadrante y al efectuar la siembr
a en el ltimo cuadrante, no sedeber flamear el asa de siembra y se har una estra ms a
bierta (simple).
Siembra en tubos con caldo y agar nutritivo
1. Sembrar un cultivo puro diferente en cada uno de los dos tubos con caldo Nutr
itivo y en tubos con agarnutritivo inclinado.
2. Sembrar con el asa extendida los mismos cultivos puros en otros dos tubos con
agar nutritivo solidificado enforma recta (Figura 5)
Siembra de cajas de Petri con medios diferenciales y selectivos
1. Dividir en tres partes, una caja de Petri con EMB Agar, otra con Agar 110 y u
na de MM. Sembrar en cada parteun cultivo puro diferente por estra simple.
2. En otra serie de tres cajas con cada uno de los medios antes descritos, sembr
ar por estra cruzada la muestraproblema.
Condiciones de incubacin
1. Incubar las cajas en forma invertida a 37C durante 24 horas. De las cajas inoc
uladas por estra cruzada,seleccionar la colonia ms aislada (generalmente del cuart
o cuadrante). Transferir una pequea muestra deesta colonia a tubos inclinados con
agar nutritivo.
2. Incubar los tubos a 37C durante 24-48 horas. Observar la aparicin de colonias y
reportar la forma en quese distribuyen a lo largo del tubo.
Preparacin de medios de cultivo
V. CONCLUSIONES
* Al inicio de cualquier prctica de laboratorio, es necesario lavar, desinfectar
y esterilizar los instrumentos y el medio de trabajo.
* Para la obtener buenos resultados es necesario considerar los factores de cont
aminacin: el analista, el medio de trabajo y la
muestra.
* La estufa se utiliza para esterilizar a los instrumentos de laboratorio.
* En la incubadora se colocar el medio de cultivo, ya sembrado, para el crecimien
to de los microorganismos.
* El conteo de colonias se realiza por triplicado, logrando un resultado preciso
.
* La autoclave se utiliza para esterilizar medios de cultivos preparados en labo
ratorio.
VI. CUESTIONARIO
MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVO UTILIZADOS EN MICROBIOLOGIA ALIMENTARIA
1. Agar Baird Parker
Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamien
to y recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiale
s de importancia sanitaria.
Frmula (en gramos por litro) | Instrucciones |
Peptona de casena | 10.0 | Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml
de agua destilada. Dejar en reposo 5 a 10 minutos. Calentar agitando frecuentem
ente y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121C (15
libras) durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y agregar 50 ml de la emulsin de yema
de huevo y 10ml de la solucin de telurito (Cdigo B03-601-61). Homogeneizar y distr
ibuir en cajas de Petri. |
Extracto de carne | 5.0 | |
Extracto de levadura | 1.0 | |
Cloruro de litio | 5.0 | |
Agar | 17.0 | |
Glicina | 12.0 | |
Piruvato de sodio | 10.0 | |
pH final: 6.8 0.2 |
Siembra
Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin d
e la muestra a analizar.
Incubacin
24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Microorganismos | Crecimiento | Apariencia |
E. coli ATCC 25922 | Inhibido | --- |
P. mirabilis ATCC 43071 | Bueno | Colonias marrones sin
zona clara u opaca alrededor |
S. aureus ATCC 25923 | Bueno a excelente | Colonias negras con borde inco
loro, convexas, rodeadas de una zona opaca, con una zona clara externa. |
S. epidermidis ATCC 14990 | Escaso o bueno | Colonias negras, de ta
mao irregular. Zona opaca alrededor de la colonia (no hay zona clara). |
2. Agar BPLS
Para el aislamiento de SALMONELLA
Agar BPLS (Brilliant-greet phenol-red lactose sucrose agar) | Cantidades
|
Peptona de carneCloruro de sodioLactosaRojo de fenolVerde brillanteAgarpH 6.5
| 7g5g15g0.04g0.05g13g |
Incubacin
Incubar 24 horas a 35-37C.
Microorganismos
3. Agar Cetrimide
Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa
Frmula* por litro de agua purificada Digerido pancretico de gelatina | 20,0 g |
Cloruro de magnesio | 1,4 |
Sulfato de potasio | 10,0 |
Glicerol | 10,0 ml |
Cetrimida | 0,3 g |
Agar | 13,6 |
pH 7,2 0,2 |
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2
y 8C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la c
ongelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fech
a de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los perodos de
incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana s
iempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C. PA-25
4419.05 - 2
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO :
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener los det
alles, vase el documento
INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar en atmsfera aerobia a 35 37 C y efectuar
la lectura de las placas despus de 18 24 y 42 48 h.
Microorganismos | Resultados del crecimiento |
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 | Crecimiento con pigmento verde azulado alrede
dor de las colonias; fluorescencia bajo luz UV (254 nm) |
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | Crecimiento con pigmento verde azulado alred
edor de las colonias; fluorescencia bajo luz UV (254 nm) |
Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637 | Inhibicin de parcial a completa |
Escherichia coli ATCC 25922 | Inhibicin completa. |
Staphylococcus aureus ATCC 25923 | Inhibicin de parcial a completa |
Sin inocular | Ambar plido |
4. Agar DCLS
(Agar sacarosa desoxicolato citrato lactosa) es un medio moderadamente selectivo
diferencial para el aislamiento de Salmonella, Shigella y vibriones de clera en
las heces y otras sustancias.
Frmula* por litro de agua destilada
Composicin |
Digerido pancretico de casena | 3,5 g |
Digerido pptico de tejido animal | 3,5 |
Extracto de carne bovina | 3,0 |
Lactosa | 5,0 |
Sacarosa | 5,0 |
Desoxicolato de sodio | 2,5 g |
Citrato sdico | 10,5 |
Tiosulfato sdico | 5,0 |
Rojo neutro | 0,03 |
Agar | 12,0 |
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2
y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la
congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fec
ha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los perodos d
e incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana s
iempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las INSTRU
CCIONES GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas). Incubar las pla
cas en condiciones aerobias a una temperatura entre 35 y 37 C, por un perodo de 18
a 48 horas. Leer al cabo de 18 a 24 horas e incubar nuevamente en caso necesari
o.
Microorganismos | Resultados del crecimiento |
E. coli | Colonias grandes, planas, de color rosa o rojo con una zona de precipi
tacin biliar |
Enterobacter/Klebsiella | Colonias grandes, mucoides, de color rosa |
Proteus | Colonias incoloras o rojas dependiendo de la especie |
Salmonella/Shigella | Colonias incoloras o de color anaranjado plido |
Pseudomonas | Colonias desde incoloras hasta marrn o verde |
Vibrio cholerae | Colonias de incoloras a rojas |
Bacterias gram-positivas | Crecimiento nulo o escaso |
5. Agar Endo
Para el aislamiento de ESCHERICHIA COLI
Agar Endo | Cantidades |
Peptona de carnedi-potasio hidrogenofosfatoLactosaSulfito de sodioFucsina bsicaAg
arpH 7.5 0.2 | 10g3.5g10g2.5g0.4g12.5g |
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2
y 8 C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la
congelacin y el calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fec
ha de caducidad (ver la etiqueta en el paquete) e incubarse durante los perodos d
e incubacin recomendados.
Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana s
iempre que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (consultar las INSTRU
CCIONES GENERALES DE USO para obtener instrucciones detalladas). Incubar las pla
cas en un lugar oscuro durante un perodo de 18 a 24 horas a una temperatura de 35
2 C en un ambiente aerobio.
Microorganismos | Endo Agar |
E. coli | Colonias de rosa oscuro a rojizo, brillo verde metlico |
Enterobacter/Klebsiella | Colonias grandes, mucoides, de color rosa |
ProteusProteus | Colonias desde incoloras hasta rosa muy plido, proliferativas |
Salmonella | Colonias desde incoloras hasta rosa muy plido |
Shigella | Colonias desde incoloras hasta rosa plido |
Pseudomonas | Colonias irregulares, incoloras |
Bacterias gram-positivas | Crecimiento nulo o escaso |
6. Agar Leche
Este medio tiene como propsito ayudar a la deteccin de la presencia de la enzimaex
tracelular proteasa. La proteina presente en la leche se llama casena. Esta proten
a es responsable del color blanco de la leche. Algunas bacterias producen la enz
imaextracelular proteasa, capz de hidrolizar la casena en polipptidos pequeos capace
s de atravezar la membrana celular.
El procedimiento consiste en la incubacin de una placa petri con inoculacin en lnea
recta. Luego se incuba por 24-48 horas a su temperatura ptima de crecimiento ( 3
7 grados Celcius). Se observa el rea alrededor de las colonias. En una reaccin pos
itiva se observa una zona clara (protelisis) alrededor de las
colonias. En una reaccin negativa no se observa halo alrededor de las colonias.
Composicin |
Enzyme-casena hidrolizada | 5.0g/litro |
extracto de levadura | 2.5g/litro |
D-glucosa | 1.0g/litro |
SMP | 1.0g/litro |
Agar | 10.0g/litro
|
PH final:7,20,2 |
Microorganismos | Milk Agar |
Lactococcus lactisNCTC 662 | Crecimiento |
Escherichia coli ATCC 11775 | Crecimiento |
Enterococcus faecalis ATCC 19433 | Crecimiento |
7. Agar Manitol Salado
Para el aislamiento de STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Agar Manitol Salado | Cantidades |
Peptona de carneExtracto de carneCloruro de sodiod-manitaRojo de fenolAgarpH 7.4
0.2 | 10g1g75g10g0.025g12g |
Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3
das a 32 C, en aerobiosis.
Microorganismos | Crecimiento | Caractersticas de las colonias |
Staphylococcus aureus ATCC 25923 | Excelente | Amarilla |
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 | Bueno | Roja |
Escherichia coli ATCC 25922 | Inhibido | Inhibido |
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 | Inhibido | Inhibido |
8. Agar McConkey
Para el aislamiento de COLIFORMES
Agar Mac Conkey | Cantidades |
Peptona de casenaPeptona de carneCloruro de sodioLactosaSales biliaresRojo neutro
Cristal violetaAgarpH 7.1 0.2 | 17g3g5g10g1.5g0.03g0.001g13.5g |
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Microorganismos | Colonias |
Escherichia coli ATCC 25922 | Rojas con halo turbio |
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 | Rosadas mucosas |
Salmonella typhimurium ATCC 14028 |
Incoloras, transparentes |
Shigella flexneri ATCC 12022 | Incoloras, transparentes |
Proteus mirabilis ATCC 43071 | Incoloras, transparentes |
Enterococcus faecalis ATCC 29212 | Diminutas, incoloras, opacas |
9. Agar Ogy
10. Agar Plate Count
Para el aislamiento de BACTERIAS AEROBIAS MESFILAS
Agar Plate Count | Cantidades |
Extracto de levaduraExtracto de carnePeptona de casenaCloruro de sodiopH 7.2 0.2
| 5g3g15g5g |
-Medio deshidratado: crema en polvo, de flujo librey homogneas.
-Preparadomedio: Agar mbar claro.
-Respuestacultivo tpicodespus de72 horasde incubacin a30C
11. Agar Sabouraud glucosa
El Agar de Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de la USP y de la
Ph. Eur. para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que s
uministra todos los requerimiento nutritivos necesarios.
Incubar
Entre 25 37 C de 3 a 5 das
12. Agar selectivo para Aeromonas
Agar Selectivo Aeromonas se utiliza para el aislamiento selectivo de las especie
s de Aeromonas en muestras de heces.
Litros aproximado, por de agua desionizada filtrada
Digerido pancretico de casena | 7,5 g |
Pptica Recopilacin de tejido animal | 7,5 g |
Hgado Resumen | 2,5 g |
Extracto de levadura | 5.0 g |
Cloruro de Sodio | 5.0 |
Agar | 12,0 |
Sheep Blood | 50,0 ml |
Ampicilina | 20,0 mg |
El pH final 7,4 0,2 a 25 C |
Almacenamiento: Al recibo de almacn a 2-8 C, protegido de la luz directa. Los med
ios no deben usarse si hay signos de deterioro
(Contraccin, agrietamiento o decoloracin), o si la fecha de caducidad ha pasado.
13. Agar selectivo de CEREUS
Mossel concibi este
medio para la deteccin y enumeracin de Bacillus cereus en todo tipo de limentos. A
dems del recuento, este medio permite definir determinadas caractersticas de este
microorganismo: la resistencia a la Polimixina B, la produccin de lecitinasa y la
no fermentacin del Manitol.
14. Agar selectivo para Enterococos
Para el aislamiento de ENTEROCOCOS
Agar selective para Enterococos | Cantidades |
Peptona de casenaPeptona de harina de soyaExtracto de levaduraGlucosadi-potasio h
idrogenofosfatoazida de sodio2.3.5 trifeniletrazolio cloruroAgarpH 7.2 | 15g5g5
g2g4g0.4g0.1g10g |
Incubar a una temperatura de 20 - 25 C y 30 35 C
CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO | CEPA | RESULTADO |
Escherichia coli | ATCC 25922 | Crecimiento escaso a inhibido, colonias transpar
entes con o sin halo negro |
Enterococcus faecalis | ATCC 29212 | Buen crecimiento, colonias con periferia ne
gra |
Streptococcus pyogenes | ATCC 19615 | Crecimiento escaso a inhibido |
15. Agar SPS
Para el aislamiento de CLOSTRIDIUM PERFRINGENS
Agar SPS | Cantidades |
Peptona de casenaExtracto de levaduraCitrato de fierro IIISulfito sdicoPolimixina
B sulfatoSulfadiazine sdicaAgarpH 7.0 0.2 | 15g10g0.5g0.5g0.01g0.1214g |
Los resultadosse obtuvieron los siguientesenelrendimiento del medioa partir de c
ultivosde tipodespus de incubacin alatemperatura de 35 2Cy 24-48Observadodespus de ho
ras.
VII. BIBLIOGRAFIA
* http://es.scribd.com/doc/8614571/Manual-de-Medios-de-Cultivo
* VILCHEZ UCEDA,Vctor. Manual de Practicas de Microbiologa. p.32-38
* http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf