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Existen varios mtodos para producir ADNr, que es el ADN nuevo que se formar a partir
del intercambio gentico: entre los que se encuentra la transformacin, la introduccin de
fagos y la transformacin no bacteriana. El primer paso en la transformacin es
seleccionar un fragmento de ADN para insertarlo en un vector de naturaleza plasmdica. El
segundo paso es cortar ese segmento con una enzima de restriccin y ligar el inserto en el
vector utilizando ADN ligasa. Luego el vector es insertado en una clula husped en un
proceso denominado transformacin; las clulas husped deben prepararse
especialmente
para
poder
recibir
el
ADN
forneo.
El inserto contiene un marcador seleccionable que permite la identificacin de las
molculas recombinantes, por ejemplo un gen de resistencia a antibiticos o un gen que
codifica una enzima clave en la sntesis de un aminocido (marcador auxotrofico).
La introduccin de fagos supone un proceso de transfeccin, equivalente al de la
transformacin, excepto que se utiliza un fago en lugar de un plsmido.
En el caso de la transformacin no bacteriana, en lugar de transformar bacterias, se
transforman clulas de origen vegetal o animal mediante diferentes procesos como
microinyeccin del DNA directamente en el ncleo o bombardeo con microproyectiles,
tales como partculas de oro o tungsteno recubiertas con ADNr
El ADNr funciona cuando la clula transformada expresa la protena o protenas
correspondientes
a
los
genes
presentes
en
l.
La produccin de protenas recombinantes en los sistemas eucariticos se lleva a cabo
usualmente
en
levaduras
y
hongos
filamentosos.
Luego de este proceso necesitamos que este gen que se ha introducido nuevo en la clula
se propague y procedemos al paso que incluye el clonado molecular que permite la
produccin de gran nmero de molculas idnticas de DNA. Esta tcnica se basa en el
hecho de que se pueden construir molculas de DNA hbrido o quimricas utilizando
vectores de clonado, tales como plsmidos, fagos, csmidos o cromosomas artificiales,
que se pueden replicar de forma autnoma en una clula husped utilizando sus propios
sistemas de control. De esta manera, se puede amplificar el DNA quimrico.
La introduccin del ADNr se lleva cabo mediante procedimientos de transformacin
bacteriana con DNA plasmdico, transduccin con fagos o csmidos y, en el caso de clulas
eucariotas, mediante transfeccin con vectores diversos. La seleccin de los clones se
realiza mediante mtodos microbiolgicos, inmunoqumicos y de hibridacin con cidos
nucleicos.
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