Tuberculosis Bovina Caprina Diagnostico Epidemiologia 20110418

Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria
(VISAVET) UCM
Epidemiologa y su aplicacin al
diagnstico de campo de la tuberculosis
bovina y caprina. Importancia del uso
de pruebas complementarias.
Luca de Juan Ferr

Servicio de Micobacterias
EU-RL for Bovine Tuberculosis
Centro de Vigilancia Sanitaria Veterinaria (VISAVET), UCM
bovina y caprina. Importancia del uso de
pruebas complementarias

(VISAVET) UCM

(VISAVET) UCM
14 Personal docente
40 Investigadores pre y postdoctorales
25 Personal de apoyo

(VISAVET) UCM
www.vigilanciasanitaria.es

(VISAVET) UCM
Lneas de Investigacin
Aplicacin de nuevas tcnicas de diagnstico: MGIT, real time PCR,
tcnica de extraccin directa de ADN a partir de muestra clnica.
Estudios de sensibilidad y especificidad de las pruebas diagnsticas
de
la
tuberculosis.
Interferencia
de
otras
micobacterias
(M.a.paratuberculosis).
Estudios inmunolgicos. Caracterizacin de la respuesta inmune.
Nuevas citoquinas para diagnstico.
Caracterizacin molecular de miembros de los complejos M.
tuberculosis (MLST, spoligotyping, VNTR) y M. avium (PCR, REAs).
Epidemiologa de la tuberculosis y paratuberculosis. Papel de los
animales salvajes. Control de la enfermedad. Vacunacin.
Puesta a punto de una tcnica de validacin de las tuberculinas sin
uso de animales de experimentacin (EU-RL).
Trabajo de Servicio
Cultivo microbiolgico: tuberculosis y paratuberculosis.
Identificacin de complejo Mycobacterium tuberculosis y
M. avium mediante la tcnica de Reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR).
Caracterizacin molecular de aislados del
Mycobacterium: DVR-spoligotyping, PFGE, VNTR.
gnero
Pruebas inmunolgicas:
Deteccin de gamma-interferon (PPD aviar y PPD
bovina)
Deteccin
de
anticuerpos
frente
a
M.a.paratuberculosis.

(VISAVET) UCM
Acreditacin
Trabajo de Servicio
Cultivo microbiolgico: tuberculosis y paratuberculosis.
Identificacin de complejo Mycobacterium tuberculosis y
M. avium mediante la tcnica de Reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR).
Caracterizacin molecular de aislados del
Mycobacterium: DVR-spoligotyping, PFGE, VNTR.
gnero
Pruebas inmunolgicas:
Deteccin de gamma-interferon (PPD aviar y PPD
bovina)
Deteccin
de
anticuerpos
frente
a
M.a.paratuberculosis.
PE/001/MYC
TINCIN
PE/003/MYC*
PE/012/MYC
CULTIVO
Muestra biolgica
PE/009/MYC* PE/010/MYC
IFN TBC
Serologa PTB
PE/005/MYC*
PE/011/MYC
PE/013/MYC
PCR
PE/007/MYC
SPOLIGOS
Medio de
cultivo
ADN
Perfiles de
spoligo
Flujo Servicio

(VISAVET) UCM
Convenios de colaboracin
- Apoyo en el diagnstico de tuberculosis

- Asesora cientfica/tcnica
- Estudios de investigacin
- Estudios
epidemiolgicos
(DVR-spoligotyping,
VNTRs).
Gestin y actualizacin de la Base de Datos Nacional mycoDB.
- Escuela de Tuberculosis para la formacin del personal
veterinario y desarrollo de una tcnica de sensibilizacin en
animales sanos mediante la aplicacin de antgenos de
Mycobacterium bovis.
- Cultivo microbiolgico de tuberculosis, identificacin y
caracterizacin molecular de los aislados e interpretacin de
resultados de CCAA.
- Estudio de la interferencia producida por la vacunacin frente
a la paratuberculosis y pseudotuberculosis o de la co-infeccin
por C. pseudotuberculosis en el diagnstico de la tuberculosis.
- Complementar al Laboratorio de Referencia Europeo de
Tuberculosis Bovina.
- Tuberculosis en reservorios silvestres y anlisis de la eficacia
de un programa de vacunacin en estas especies.
- Valoracin de la sensibilidad y especificidad de las pruebas
oficiales de diagnstico de la tuberculosis bovina y caprina
mediante el empleo de PPDs.
- Asesora cientfica y tcnica al MARM y CCAA (acreditacin).

(VISAVET) UCM
ESPAA
PREVALENCIA DE REBAO E INCIDENCIA EN

ANIMALES 1986-2010 TUBERCULOSIS BOVINA
Estudios
epidemiolgicos
14
12
11,77
11,14
11,17
10,78
10,21
10
Problemas de
diagnstico
9,18
8
Animales
salvajes
7,46
5,91
5,68
4,2
4,01
3,69
5,21
3,68
5,35
4,57
3,67
3,44
3,08
2,14
1,28
1,72
1,63
1,26
1,38
0,89
2,812,24 2,14
2,49
1,76 1,63 1,59 1,65
2,11
1,80 1,52
0,75 0,66 0,58 0,52
0,47 0,40
0,42 0,49 0,48 0,41
0,31
1,51
0,36
1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
PREVALENCIA DE REBAO
INCIDENCIA EN ANIMALES
La erradicacin de la tuberculosis bovina es

posible siempre y cuando se mantenga la
integridad del rebao (considerado como unidad
epidemiolgica) y todos los reservorios y factores
de riesgo se eliminen o controlen
Objetivo: Detectar el mayor nmero de animales infectados

(VISAVET) UCM
El problema de la erradicacin...
Existencia de gran variedad de sistemas
de explotacin.
Epidemiologa compleja.
Medidas que deben mantenerse mucho
tiempo.
Colaboracin necesaria de todas las
partes (ganadero, matadero, )
Inmunidad
humoral
Bacilos
Inmunidad
celular
Bacilos
Respuesta inmune
Diagnstico inmunolgico de la tuberculosis
Tiempo
- Inmunidad de base celular
- Intradermotuberculinizacin
(IDTB): simple / comparada
- Tcnica de gamma-interferon
- Inmunidad de base humoral: Deteccin de anticuerpos

(VISAVET) UCM
IDTB simple
sensibilidad individual
Interpretacin estndar
Imprescindible para
Resultado
Medida (mm)
Signos clnicos
Negativo
NO
Dudoso
>2 y <4
Positivo
NO
y/o
En ciertas circunstancias los

animales dudosos se consideran
positivos
clasificar rebaos
Especificidad falsos positivos exposicin a micobacterias

no tuberculosas (ej. Complejo M. avium). Solucin IDTB
comparada
IDTB comparada
- Tcnica de aplicacin (PPDbov/PPDav)
- Lectura
- Interpretacin estndar:
Resultado
Interpretacin
Negativo
Reaccin negativa a la tuberculina bovina o reaccin positiva o dudosa a

la tuberculina bovina pero igual o inferior a una reaccin positiva o
dudosa a la tuberculina aviar, con ausencia de signos clnicos.
Dudoso
Reaccin a la tuberculina bovina positiva o dudosa y superior en 1 a 4 mm

a la reaccin a la tuberculina aviar, con ausencia de signos clnicos.
Positivo
Reaccin a la tuberculina bovina superior en ms de 4 mm a la reaccin a

la tuberculina aviar o presencia de signos clnicos.
En ciertas
positivos
circunstancias
los
animales
dudosos
se
consideran
- Permite
discriminar
paratuberculosis
u
otras
micobacterias en rebaos sin tuberculosis.
- especificidad, pero sensibilidad uso estratgico
en ciertos casos!!
10

(VISAVET) UCM
Test de deteccin de gamma-interferon

Mide la respuesta inmune celular in-vitro
Ventajas: interpretacin objetiva de los
resultados,
reduce
los
problemas
prcticos intrnsecos a las pruebas de
intradermotuberculinizacin
Detecta animales en fases ms tempranas de la infeccin
Buena sensibilidad, pero problemas de especificidad
EMPLEO COMO UN TEST COMPLEMENTARIO PARA
DETECTAR
EL
MAYOR
NMERO
DE
ANIMALES
INFECTADOS
EN
CIERTAS
SITUACIONES
EPIDEMIOLGICAS
Prueba del gamma-interfern

(SANCO/10200/2006)
- Prueba complementaria para permitir la deteccin del
mximo
nmero
de
animales
infectados
(Directiva
64/432/CEE).
- En paralelo con la IDTB para aumentar sensibilidad.
- Punto de corte autorizado en el expendiente del registro del
kit (0,05).
-En rebaos o regiones de alta prevalencia.
-En rebaos positivos confirmados, en la primera repeticin
junto a la IDTB.
-- No uso como tcnica de screening en reas de baja
prevalencia.
- Los requerimientos logsticos implican dificultades en reas
remotas.
11

(VISAVET) UCM
Fundamento de la tcnica
Tcnica de gamma-interferon
Plasma
GIFN
*
macrfago
EIA
linfocito T
Cultivo in vitro de la sangre
Ensayo -IFN: dos fases distintas
RECOGIDA Y ESTIMULACIN
ELISA
PUNTOS CRTICOS!!!
12

(VISAVET) UCM
Portal de la Red de Alerta Sanitaria Veterinaria: www.rasve.mapa.es

Centro VISAVET: www.vigilanciasanitaria.es
1. IDTB
> 60 das IDTB
Animales hipersensibilizados por la IDTB Falsos positivos
Animales > 6 meses IFN
Tomar las muestras de sangre antes de inocular las tuberculinas
2. Extraccin de sangre
Material estril, agujas para extraccin de sangre
Tubos con anticoagulante (heparina de litio)
Volumen sangre > 4,5 ml (recomendado 5 ml)
Volumen de los tubos: 10 ml.
Invertir el tubo para homogeneizar la heparina
Personal especializado
13

(VISAVET) UCM
3. Transporte al laboratorio
Temperatura ambiente (no refrigerada)
4. Tiempo de estimulacin
Inferior a 8h tras su recogida
Soporte cientfico: Se ha demostrado que es un factor
que afecta al ensayo de -IFN en bovino
Retraso de 24 horas: disminucin de los valores de DO
5. Dispensar la sangre
Invertir el tubo para homogeneizar la sangre
Para una muestra dispensar en tres pocillos
consecutivos:1,5 ml
6. Estimulacin sangre con PPDs

PPDs de campaa de erradicacin
Concentracin ptima: 20 g PPD/ml sangre
Concentracin trabajo PPDs = 300 g/ml
Volumen: 100 l PPD/1,5 ml sangre
PPDbov
PPDav
PBS
PBS
14

(VISAVET) UCM
7. Incubacin
Temperatura: 37C.
Tiempo: 18-24h.
8. Recogida plasma tras centrifugacin
500-800 g / 10-15 minutos
9. Realizacin del ELISA
10. Interpretacin de los resultados

-IFN bovino POSITIVO:
DO PPDbov DO PBS 0,05
DO PPDbov > PPDav
-IFN bovino NEGATIVO
Ejemplos
Cualquier otra posibilidad
DO PBS DO PPDav DO PPDbov

0,0086
0,0132
0,1717
0,0089
0,0325
0,0681
0,0072
0,0067
0,0077
0,0072
0,0779
0,0763
0,0077
0,2071
0,0086
0,0101
0,2539
0,1606
IFNav
0,0046
0,0236
-0,0005
0,0707
0,1994
0,2438
IFNbov
0,1631
0,0692
0,0005
0,0691
0,0009
0,1505
RESULTADO IFN bovino

POSITIVO
POSITIVO
NEGATIVO
NEGATIVO
NEGATIVO-REACTOR AVIAR
NEGATIVO-REACTOR AVIAR
15

(VISAVET) UCM
Causas potenciales de fallos diagnsticos

Tipo de explotacin
(manejo: carne-extensivo vs. leche-intensivo)
Transmisin interespecfica:
Pastoreo mixto (ovejas, cabras)
Reservorios de vida salvaje
Factores relacionados con los tests diagnsticos disponibles:

Falta de sensibilidad: no se detectan animales infectados
Falta de especificidad: resultados positivos de animales libres
La existencia de Falsos Positivos/Negativos puede

ser debida a factores relacionados con:
1. Reactivos (tuberculinas)
NRL
Evitables
2. Realizacin de la prueba
Formacin
personal
16

(VISAVET) UCM

NRL
Evitables
Formacin
personal
3. El estado inmunitario del animal analizado

Difcil

NRL
Evitables
Formacin
personal
3. El estado inmunitario del animal analizado

Difcil
17

(VISAVET) UCM
Animales falsos negativos

Estado real
Test status
Mantienen la infeccin en el rebao
Ralentizan la erradicacin implicaciones econmicas

Varias posibles causas las ms comunes y conocidas:
Demasiado pronto (pre-alrgico) / demasiado tarde (anrgico)
Infeccin con (Mico)bacterias ambientales
A VECES MUY DIFCILES DE CARACTERIZAR!!!
Animales falsos positivos

Estado real
Test status
Sacrificio innecesario de animales
Origen complejo (reacciones de hipersensibilidad inespecficas)

Vacunacin vs. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis
Infeccin con (Mico)bacterias ambientales
Prdidas econmicas
Disminuye la confianza y el compromiso de los ganaderos
18

(VISAVET) UCM
En tuberculosis.
Prueba de referencia: cultivo bacteriolgico
Ventajas del cultivo: E=100%; S100% en
casos avanzados
Inconvenientes:
S: en campaas NO hay (apenas) casos
avanzados sensibilidad limitada (y
variable en funcin del curso de la
enfermedad)
E: necesario medirlo en ausencia de
enfermedad (por la limitada S)
situaciones epidemiolgicas distintas
Por ello
Resultados muy variables de los estudios de
campo (de la Rua-Domenech, 2006)
IDTB:
Sensibilidad=63,2-100% (83,9%)
Especificidad=75,5-99% (96,8%)
IFN-:
Sensibilidad=73-100% (87,6%)
Especificidad=85-99,6% (96,6%)
19

(VISAVET) UCM
Abordaje tradicional vs. bayesiano

Tradicional: no incorporamos experiencia
Bayesiano: distribucin a posteriori de un
parmetro
es
consecuencia
de
una
distribucin a priori ms el efecto de los
datos observados
Es decir: adems de tener en cuenta los
datos, introducimos nuestra experiencia
sobre el tema (ms informacin)
Evaluacin de las pruebas diagnsticas

de
tuberculosis
bovina
mediante
anlisis bayesiano (IDTB y IFN-)
MATERIAL Y MTODOS:
6062 bovinos de 42 rebaos una vez detectada la
infeccin en la explotacin.
RESULTADOS:
IDTB: S muy variable (40-92%)
E muy elevada (>99%)
Limitada sensibilidad a la hora de detectar animales
recientemente infectados tras repetirse la prueba en
un mismo rebao 3-6 meses despus del anterior test.
IFN-: S mayor (>80% dependiendo del punto de corte
aplicado)
E aceptable (>80%)
Confirma su utilidad como prueba complementaria
20

(VISAVET) UCM
Ejemplos prcticos de interpretacin

Espaa: diagnstico en cuatro posibles situaciones
TBC
PTB
Rebao con infeccin mixta tuberculosis-paratuberculosis
PTB
Rebao libre de tuberculosis /infectado con paratuberculosis
TBC
Rebao con tuberculosis libre de paratuberculosis

Rebao libre de ambas enfermedades
Ejemplos
1. Falsos negativos
2. Falsos positivos
3. Situacin epidemiolgica complicada
4. Latencia
1. FALSOS NEGATIVOS
Diagnstico en un rebao
caprino con una infeccin
mixta de tuberculosis y
paratuberculosis
Resultados de cultivo (n=163)

Resultados de cultivo
Map +
Map -
Total
Tuberculosis+
24
107
131
Tuberculosis -
26
32
30
133
163
Total
21

(VISAVET) UCM
1. FALSOS NEGATIVOS
IDTB simple vs. IDTB comparada

Animales con tuberculosis (n=131)
IDTB COMP+
IDTB COMP -
Total
IDTB SIMPLE+
56
37
93 (S=71%)
IDTB SIMPLE-
38
38
Total
56 (S=42.7%)
75
N=131
Animales TBC+/PTB(n=61)
IDTB COMP+
IDTB COMP -
Total
IDTB SIMPLE+
29
19
48 (S=78.7%)
IDTB SIMPLE-
13
13
Total
29 (S=47.5%)
34
N=61
IDTB COMP+
IDTB COMP -
Total
13 (S=54.2%)
IDTB SIMPLE-
11
11
Total
7 (S=29.2%)
17
N=24
IDTB SIMPLE+
Animales TBC+/PTB+
(n=24)
1. FALSOS NEGATIVOS
IDTB simple vs. IDTB comparada
IFN+
Animales con tuberculosis (n=131)
IFN-
No detectados
mediante IDTB
comparada!
(75/131)
18
Dif. Bov.
16
14
12
Detectados por
IDTB simple!
(93/131)
10
8
6
4
2
0
Detectados
solo por IFN!
(26/38)
XD
10
12
No detectados
mediante IDTB
simple!
(38/131)
Dif. Aviar
22

(VISAVET) UCM
1. FALSOS NEGATIVOS
Sensibilidad de las pruebas diagnsticas segn resultados de cultivo
2. FALSOS POSITIVOS
Diagnstico en un rebao bovino

libre de tuberculosis e
infectado de paratuberculosis
Explotacin de leche, en UVL de baja prevalencia
Primer saneamiento: 627 animales analizados
IFN-: 66+ (121+ sin PPD aviar)
C.tbc: Neg!
C.ptb: 1+
Cultivo: 21 animales sacrificados

IDTB:
Interpretacin
Standard
Estricta
IDTB
Positivo
Dudoso
Negativo
Simple
17
606
Comparada
16
610
Simple
21
606
Comparada
17
610
23

(VISAVET) UCM
2. FALSOS POSITIVOS
Segundo saneamiento: 550 animales analizados

Cultivo: 10 animales sacrificados todos negativos
IDTB:
Interpretacin
Standard
Estricta
Positivo
Dudoso
Negativo
Simple
IDTB
549
Comparada
549
Simple
549
Comparada
549
Tercer saneamiento: 769 animales analizados

IDTB:
Interpretacin
Standard
Estricta
IDTB
Positivo
Dudoso
Negativo
Simple
766
Comparada
767
Simple
766
Comparada
767
3. SITUACIN EPIDEMIOLGICA COMPLICADA/ ANIMALES ANRGICOS
Diagnstico en un rebao
bovino con una infeccin
mixta de tuberculosis y
paratuberculosis
Ms de 600 animales
Infeccin por M. bovis y Map confirmada por cultivo
Situacin epidemiolgica compleja:
M. bovis: 6 spoligotipos diferentes
Map: cepas de tipo II y III
Ms de 200 animales sacrificados dependiendo de
resultados de diagnstico (SICCT, IFN-, serologa
paratuberculosis) en los ltimos saneamientos
24

(VISAVET) UCM
3. SITUACIN EPIDEMIOLGICA COMPLICADA / ANIMALES ANRGICOS
Resultados de cultivo (n=218)

Resultados de cultivo
Map +
Map -
Total
Tuberculosis+
18
30
48
Tuberculosis -
94
76
170
Total
112
106
218
3. SITUACIN EPIDEMIOLGICA COMPLICADA / ANIMALES ANRGICOS
Sensibilidad de la pruebas diagnsticas
25

(VISAVET) UCM
4. LATENCIA
Diagnstico en un rebao bovino

infectado con tuberculosis y
paratuberculosis
- Animales infectados
diagnsticas
que
no
responden
pruebas
En resumen
Valorar la presencia/ausencia de tuberculosis y paratuberculosis
En zonas de tuberculosis (y paratuberculosis) el empleo de pruebas
comparadas (SICCT) DISMINUYE LA SENSIBILIDAD DIAGNSTICA
Progreso lento de erradicacin de la tuberculosis.
Calificacin de rebaos infectados fuente de infeccin.
Existencia de animales coinfectados anrgicos (positivos a
serologa de paratuberculosis)
En zonas libres de tuberculosis el uso de pruebas comparadas
permite la diferenciacin de falsos reactores disminuye el
sacrificio innecesario de animales
Abordar cada problema de forma

individual NO HAY FRMULAS
MGICAS
26

(VISAVET) UCM
1. Maximizar las interacciones entre los Estados Miembros mediante

colaboraciones activas
2. Armonizar los protocolos entre los pases de la Unin Europea
3. Contribuir a los objetivos cientficos, tcnicos y relacionados con la
regulacin que sean propuestos por la Comisin.
Responsabilidades y tareas del EU-RL:
1. Coordinacin de los mtodos utilizados en los estados

miembros para el diagnstico de la tuberculosis
bovina.
-
Aislamiento e identificacin de Mycobacterium spp.

Caracterizacin de cepas de Mycobacterium spp.
Coleccin de cultivos de Mycobacterium spp.
Base de datos de cepas aisladas en la Unin Europea.
Validacin de reactivos para pruebas inmunolgicas.
Armonizacin de protocolos
Preparacin y control de reactivos de referencia
Pruebas comparativas
2. Organizacin de workshops y formacin de personal.

3. Asistencia tcnica a la Comisin.
4. Actividades de investigacin.
27

(VISAVET) UCM
Programa de trabajo EU-RL 2011

Principales actividades
1. Validacin de las tuberculinas
2. Diagnstico de tuberculosis en camlidos.
3. Determinar la eficacia de la pruebas diagnsticas
en ganado bovino infectado con M. caprae.
4. Membrana de spoligos a NRL.
5. Manual de revisin de los protocolos.
6. Interlaboratorios.
7. Misiones.
8. Grupo de trabajo.
Subgrupo de la Task Force

- Comisin Europea, Suecia, Irlanda, Reino Unido, Italia,
Portugal, EU-RL for Btb.
- Asesora tcnica
Ministerio
Veterinarios
Matadero
Laboratorio
Ganadero
-
Programa de erradicacin
Estrategia largo plazo
Fases finales
Desarrollo del programa

Identificacin de los animales (bases de datos)
Compensaciones
Problemas especficos
Estudios especiales (lidia, bfalo, fauna salvaje)
28

(VISAVET) UCM
En Europa
- Distinta prevalencia.
- Anlisis de los datos.
- Animales positivos: reactores IDTB vs.
cultivo y/o lesin.
- Diferente epidemiologa: gran variedad de
sistemas de explotacin (pastos comunes,
tipo
explotacin,
)
y
epidemiologa
compleja (fauna).
- Diferentes
programas:
si/no,
edad
animales, interpretacin prueba, puntos de
corte, frecuencia, etc.
- Regionalizacin.
Comparacin de la sensibilidad
(ensayos de potencia) de diferentes
tuberculinas europeas en vacuno
29

(VISAVET) UCM
Pistolas de inoculacin
intradrmica
Synthena
Dermo Jet
McLintock
MUTO-Tuberkulina
30

(VISAVET) UCM
Tuberculinas
WDT
Material y mtodos:
Animales:
-
Animales infectados naturalmente.

8 animales por cada tuberculina a analizar.
60 das desde anterior IDTB.
Ideal: animales mansos, de fcil manejo.
1 2
3 4
Tuberculinas:
- International Standard (IS): 32.500 U.I.

- Tuberculinas a analizar: se compararn frente al IS (1mg/ml,
0,2 mg/ml).
Metodologa:
- Rasurar 4 zonas a cada lado del cuello, separadas entre s 1012 cm, en cada animal.
- Medir espesor de piel con cutmetro de cada zona.
Inyectar las tuberculinas: rotando las posiciones entre animales.
- Lectura a las 72 horas.
31

(VISAVET) UCM
Animales + con cada PPD (IDTB)
(n=58)
Animales + con IDTB y -IFN
International Standard (IS): 32.500 U.I.

Segn la OIE la potencia estimada de la tuberculina bovina debera
estar comprendida entre el 66% y el 150% de la potencia del IS.
- 4/5 PPD empleadas aptas.

- Mayor n de animales detectados a concentracin
1mg/ml.
- Mayor n de animales positivos detectados por -IFN.
-Situacin idnea realizacin de ambas pruebas en
paralelo.
32

(VISAVET) UCM
ESPAA
PREVALENCIA DE REBAO E INCIDENCIA EN

ANIMALES 1986-2010 TUBERCULOSIS BOVINA
Estudios
epidemiolgicos
14
12
11,77
11,14
11,17
10,78
10,21
10
Problemas de
diagnstico
9,18
8
Animales
salvajes
7,46
5,91
5,68
4,2
4,01
3,69
5,21
3,68
5,35
4,57
3,67
3,44
2,14
3,08
1,28
1,72
1,63
1,26
1,38
0,89
2,812,24 2,14
2,49
1,76 1,63 1,59 1,65
2,11
1,80 1,52
0,75 0,66 0,58 0,52
0,47 0,40
0,42 0,49 0,48 0,41
0,31
1,51
0,36
1986 1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
PREVALENCIA DE REBAO
INCIDENCIA EN ANIMALES
Epidemiologa compleja
Factores relacionados con la enfermedad
- Epidemiologa clsica
Densidad (hacinamiento, tipo de ganadera, etc.)
Comportamiento, movimiento de animales
Estudio de las lesiones (cavidad torcica o abdominal)
Interacciones (ganado, peridomsticos, salvajes, hombre)
Microbiologa
- Epidemiologa molecular
-DVR-spoligotyping
-MIRU-VNTRs
33

(VISAVET) UCM
PCR Mltiple
Identificacin por PCR

Gnero Mycobacterium
Complejo Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis
Direct Variable Repeat - Spacer Oligonucleotide Typing

DVR-SPOLIGOTYPING
Cepa 1
1
Locus DR
DR
espaciador
3
DR
1
DR
Cepa 2
4
DR
Cepa 1
Cepa 2
34

(VISAVET) UCM
1101111101111110111101111000011111111100000 Cdigo numrico (SB0121)
M. bovis
SB0120
SB0132
M. tuberculosis
SIT58
M. caprae
SB0157
SB0415
Base de Datos Nacional de

Mycobacterium bovis y
Mycobacterium caprae
SB0157
35

(VISAVET) UCM
Objetivos:
- Centralizacin de la informacin de ADN de cepas
del complejo M. tuberculosis en una Base de Datos
Nacional.
- Vigilancia y estudios epidemiolgicos
Datos epidemiolgicos:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Perfil espoligotipo www.Mbovis.org

Fecha de recepcin de la muestra
Comunidad Autnoma y su cdigo oficial
Provincia y municipio y su cdigo oficial
Especie animal
Identificacin (Mycobacterium sp.)
Spoligotype Search
36

(VISAVET) UCM
Spoligotype Search: SB0121
Spoligotype Search: SB1232
37

(VISAVET) UCM
Transmisin entre explotaciones
Movimiento de un animal?
Fallo diagnstico?
Nueva infeccin?
Isolate Search: M. bovis en salvajes
38

(VISAVET) UCM
Isolate Search: M. bovis en salvajes
Importancia de la tuberculosis en animales salvajes

1. RESERVORIOS DE INFECCIN PARA GANADO DOMSTICO
Transmisin ganado fauna salvajes:
Solapamiento de hbitats
(pastos, agua)
Cadveres infectados
Supervivencia en el ambiente
2. ESPECIES PROTEGIDAS
Conservacin de pequeas
poblaciones
3. IMPACTO EN SALUD PBLICA
Directo: cazadores, manejo
de carcasas
Productos (alimento)
infectados: embutidos
39

(VISAVET) UCM
Qu ocurre en Espaa?
1. Variedad de fauna salvaje, varias
susceptibles (jabal, gamo, ciervo)
2. Proliferacin
depredadores)
especies
3. Alta
densidad
de
animales salvajes)
especies
receptoras
poblacin
(falta
(alimentacin
4. Caza como actividad econmica

5. Prctica ganaderas especficas (extensivo)
Aislados de M. bovis 2006-2007
Aislados de M. bovis
procedentes de
fauna salvaje
Aislados
bovinos de M.
bovis
22
17
155
42
Total:
81
40

(VISAVET) UCM
DVR-Spoligotyping: caracterizacin molecular

Aislados
deM.bovis
Bovino
Fauna salvaje
Perfil
Aislados
Aislados
SB0339
72
46,4
70
86,4
SB0121
37
23,9
SB0265
16
10,3
SB0867
11
7,1
SB0122
3,2
SB0120
2,6
SB0134
1,9
1,2
SB0294
1,9
SB0152
1,3
SB0295
0,6
SB1090
0,6
SB1142
9,9
SB1302
1,2
SB1393
1,2
Total:
155
81
ESPECIES PROTEGIDAS
Conservacin de poblaciones
Nmero limitado de muestras: tejidos,
articulaciones
Dos reas de muestreo
Spoligotipos SB1232, SB1230 y SB0426

Jabal y ciervo, vacuno
Lince ibrico
41

(VISAVET) UCM
Isolate Maps
Objetivos futuros
Cepa 2
Cepa 1
Cepa 1
Asesora y apoyo a la base de datos Nacional.

Completar con:
- Otras tcnicas moleculares (VNTR).
Cepa 2
VNTR
Spoligotyping
17 cepas
SB0121
Especie
Ao de
muestreo
ETR-A
MIRU-4
7 vacuno
4 jabal
2001-2003
2002
5 vacuno
1 jabal
2001
2002
42

(VISAVET) UCM
Objetivos futuros
Humans as the Source of

Mycobacterium tuberculosis
Infection in Cattle

Completar con:
- Otras especies del complejo M. tuberculosis.
MDR
Objetivos futuros
Completar con:
- Otras especies del complejo M. tuberculosis.
- Sistema de informacin geogrfica (GIS).
43

(VISAVET) UCM
Muchas
gracias
44

Tuberculosis Bovina Caprina Diagnostico Epidemiologia 20110418

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- Inmunidad de base humoral: Deteccin de anticuerpos

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En ciertas circunstancias los

Especificidad falsos positivos exposicin a micobacterias

Reaccin negativa a la tuberculina bovina o reaccin positiva o dudosa a

Reaccin a la tuberculina bovina positiva o dudosa y superior en 1 a 4 mm

Reaccin a la tuberculina bovina superior en ms de 4 mm a la reaccin a

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Prueba del gamma-interfern

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Portal de la Red de Alerta Sanitaria Veterinaria: www.rasve.mapa.es

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6. Estimulacin sangre con PPDs

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10. Interpretacin de los resultados

Cualquier otra posibilidad

DO PBS DO PPDav DO PPDbov

RESULTADO IFN bovino

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Causas potenciales de fallos diagnsticos

(manejo: carne-extensivo vs. leche-intensivo)

Factores relacionados con los tests diagnsticos disponibles:

La existencia de Falsos Positivos/Negativos puede

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La existencia de Falsos Positivos/Negativos puede

3. El estado inmunitario del animal analizado

La existencia de Falsos Positivos/Negativos puede

3. El estado inmunitario del animal analizado

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Animales falsos negativos

Mantienen la infeccin en el rebao

Ralentizan la erradicacin implicaciones econmicas

A VECES MUY DIFCILES DE CARACTERIZAR!!!

Animales falsos positivos

Sacrificio innecesario de animales

Origen complejo (reacciones de hipersensibilidad inespecficas)

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Abordaje tradicional vs. bayesiano

Evaluacin de las pruebas diagnsticas

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Ejemplos prcticos de interpretacin

Rebao con infeccin mixta tuberculosis-paratuberculosis

Rebao libre de tuberculosis /infectado con paratuberculosis