Relatrio de Microbiologia

Controle do Crescimento de E.coli por meio do Calor

INTRODUO

Muitos so os agentes fsicos empregados no controle microbiano, tais como

aquecimento, baixas temperaturas, radiaes, filtrao e dessecao. O mtodo
escolhido depende no somente do agente, mas tambm do tipo de material que
contm os microorganismos que esto tratados, sendo importante se eles esto em
meio de cultura, produtos farmacuticos, na superfcie de instrumentos cirrgicos, ou
em alimentos de consumo (Pelczar, 1997).
O mtodo mais utilizado no controle microbiano o uso de altas
temperaturas, podendo ser aplicado em condies midas ou secas. O calor mido
causa desnaturao e coagulao das protenas vitais como as enzimas, enquanto que o
calor seco causa oxidao dos constituintes orgnicos das clulas. Pode-se observar
que o calor mido mais eficiente, pois a desnaturao de protenas celulares ocorre
em temperaturas e tempos de exposio menores do que aqueles requeridos para a
oxidao.
Para se destruir os microorganismos pode-se utilizar o calor mido na forma
de vapor dgua, gua fervente ou gua aquecida temperatura abaixo do seu ponto de
ebulio.
O tratamento pelo calor controlado chamado pasteurizao, desenvolvido
em 1860 por Pasteur, que utilizou aquecimento lento para destruir microorganismos
indesejveis que estariam estragando vinhos franceses. Ele destri muitas formas de
microorganismos, mas no esteriliza, no entanto, prolonga a manuteno da qualidade
dos produtos.
No calor seco so necessrios temperaturas maiores e tempo de exposio
tambm maiores, pois esta tcnica no to eficaz quanto a de calor mido.
A incinerao uma prtica de rotina utilizada em laboratrios, hospitais para
a esterilizao e eliminao de lixo e outros materiais biolgicos.
Outro mtodo fsico usado no controle microbiano so as baixas
temperaturas, que abaixo de 0 gruas inibem o metabolismo dos microorganismos em
geral. O congelamento comumente utilizado para preservar alimentos, drogas e
espcimes laboratoriais, pois bloqueia efetivamente o crescimento microbiano.
Radiaes eletrnicas de alta energia, raios gama e raios X so radiaes
ionizantes, causando ionizao das molculas. Radiaes no ionizantes como U.V.,
causam excitao de eltrons modificando a estrutura do DNA, atuando na sua
replicao.
A filtrao utilizada nos laboratrios e nas indstrias para esterilizar
materiais que no podem ser autoclavados, como vitaminas ou outros composto
termossensveis.
Atravs de um agente esterelizante so destrudas ou removidas todas as
formas de vida microscpicas de um objeto ou espcime. Um desinfetante uma
substncia qumica que destri as formas vegetativas de microorganismos patogenicos
mas no necessariamente as formas esporuladas, (Pelezar, 1997). O germicida

sinnimo de um desinfetante, difere entretanto por no destruir apenas formas

patognicas.
Antissptico um composto qumico, usualmente aplicado na superfcie do
corpo humano, prevenindo a multiplicao dos microorganismos, atravs de sua
destruio, inibio do crescimento ou da sua atividade metablica.

OBJETIVOS
Neste trabalho pretende-se comparar a eficcia do calor mido e seco sobre
as bactrias; avaliar a resistncia dos mciroorganismos ao calor; avaliar a ao de
antisspticos bucais; determinar a ao de detergentes na flora microbiana; comparar
a ao do lcool iodado e mertiolate na flora bacteriana da pele e a ao de metais
pesados no crescimento bacteriano.

MATERIAL E MTODOS
No controle da populao bacteriana por agentes fsicos, aps diviso do
fundo da placa em duas partes iguais, utilizou-se dois palitos e foi feita a
contaminao de 2\3 dos mesmos em suspenso de E. coli. Um dos palitos foi
transferido para um tubo seco e o outro para um tubo contendo soluo fisiolgica; os
tubos foram devidamente tampados e levados para fervura em banho-maria durante
dez minutos. Aps a fervura ambos os palitos foram utilizados para semearem as duas
metades da placa. Ento a placa foi levada incubada a 4C e 37C em perodo de 24
horas.
Para estudar o efeito desinfetante de detergentes na flora bacteriana das
mos, utilizou-se uma placa contendo meio TSA, e dividiu-se a mesma em trs partes
iguais. Com um swab embebido em soluo fisiolgica estril fez-se a coleta entre os
dedos das mos e posterior semeadura em uma das partes da placa previamente
dividada. Prosseguindo experimento, as mesmas mos foram lavadas com o detergente,
e depois de secas naturalmente, nova semeadura foi realizada em outro quadrante;
uma Segunda lavagem das mos com o mesmo detergente foi feita, assim como a
terceira inoculao no quadrante restante. A placa foi levada a estufa 37C por 24
horas.
No experimento da ao antissptica do Cepacol e Anapyon na flora
bacteriana da boca, foram utilizados dois alunos voluntrios, um para cada produto;
dividiu-se a placa com meio TSA em quatro quadrantes iguais. Primeiramente foi feito
um bochecho com gua pura, e ento, com o auxlio de um swab, foi feita a primeira
inoculao na placa. Em seguida foi feito um bochecho com mistura de gua mais m dos
produtos em teste, e ento, nova semeadura. Duas vezes mais foi repetido o mesmo
procedimento, lembrando que o mesmo foi realizado com ambos os produtos (Cepacol e
Anapyon). As referentes placas foram levadas a estufa a 37C, e os resultados foram
observados em 24 e 48horas.
No estudo da ao antissptica do lcool, lcool iodado e mertilate na flora
bacteriana da pele, uma placa de TSA foi dividida em quatro partes iguais, um swab foi

umedecido em salina estril e passada na regio da dobra de um dos braos do aluno

voluntrio, e com este swab, semeou-se a primeira parte da placa. Um algodo
umedecido com lcool etlico a 60% foi passado na mesma regio da dobra do brao do
mesmo aluno, e novamente com um swab umedecido em salina e passado nesta dobra do
brao, semeou-se outra parte da placa. Para os testes com lcool iodado e mertiolate
foram repetidos fidedignamente os mesmos procedimentos de coleta e semeadura. A
placa ento foi levada para estuda a 37C por 24 horas.
Na ao de metais pesados no crescimento bacteriano, a placa de TSA foi
dividida em duas metades. Um swab foi introduzido em cultura de bactria em TSB, e
em seguida utilizado para inoculao em toda a placa de TSA. Com o auxlio de uma
pina, uma moeda de cobre foi colocada em uma das metades da placa, e outra moeda
de liga metlica (real) foi depositada na outra metade da mesma placa. Esta foi
finalmente levada para a mesma estufa e incubada por um perodo de 24 horas, para
ento serem realizadas as observaes.

RESULTADOS
Na anlise dos resultados dos experimento que visou a comparao do
crescimento e controle bacteriano atravs do calor seco e calor mido, pudemos
observar que em ambas a placas que ficou incubada em temperatura de 37C
apresentou o seguinte resultado: no local que houve apenas a inoculao da cultura, e
foi considerado controle houve crescimento intenso, havendo formao de inmeras
colnias. Na regio, que foi semeada com o material que havia sido anteriormente
submetido ao calor seco, foi observado a formao de uma colnia, e na regio que foi
anteriormente submetida ao calor mido, no houve formao de colnias. A placa que
foi submetida a temperatura de 4C, nem mesmo na regio do controle houve a
formao de colnias.
No experimento onde foram utilizados detergentes na flora bacteriana das
mos, foi constatado que sem a lavagem das mos houve crescimento de uma colnia
bem grande, nas demais partes destinadas a primeira e Segunda lavagens, observou-se
crescimento atenuado na regio da primeira lavagem e nenhum crescimento na regio
da Segunda lavagem.
No experimento realizado com os antisspticos Ceapcol e Anapyon foram
obtidos os mesmos resultados: nos primeiros quadrantes, onde foi feito o controle
(apenas bochecho com gua pura), foi observado um grande crescimento bacteriano,
enquanto nos demais quadrantes, conforme eram feitas as lavagens com os
antisspticos, o crescimento populacional bacteriano diminuiu gradativamente, no
entanto, houve crescimento em todos os quadrantes estudados.
Na ao do lcool, lcool iodado e mertiolate, observou-se a formao de uma
grande colnia na regio onde foi testado o efeito do lcool, j nas partes referentes
ao lcool iodado e ao mertilate as colnias, embora presentes, eram menores.
Concluindo o estudo, na ao dos metais pesados sobre o crescimento
bacteriano observou-se o crescimento de colnias isoladas distantes das moedas, mas
no foi possvel notar um halo de inibio do crescimento em torno das moedas.

DISCUSSO E CONCLUSO
De acordo com a literatura, o calor mido um processo eficiente no controle
bacteriano, e isso pode ser comprovado com nosso experimento, sendo que no calor
seco ainda houve formao de colnias ( apenas uma) e no calor mido no houve
nenhuma formao de colnias. Por se tratar de uma bactria mesfila, a E. coli no
necessita de altas temperaturas para ser eliminada, por isso, talvez o calor mido
tenha se mostrado to eficiente.
Na coleta da flora bacteriana das mos, na primeira lavagem foi constatado
um grande crescimento, como era de se esperar, pode ser avaliada a eficcia dos
detergentes j que os crescimentos bacterianos diminuram conforme as mos eram
lavadas, o que mostrava a remoo gradual dos microorganismos.
No experimento de crescimento da flora bacteriana bucal atravs de
antisspticos puderam ser observados o crescimento de vrias colnias, embora o
nmero de bactrias fosse menor nas placas odne a coleta do material foi feita as o
uso de antissptico. A soluo alm de eliminar alguns dos microorganismos, removia
outros que estavam aderidos a mucosa, fazendo com que este fossem removidos pelo
swab. Um desinfetante ou antissptico ideal seria aquele capaz de atuar sem causar
dano ao material ou tecido.
No estudo da ao do lcool, lcool iodado e mertiolate, pudemos observar o
grande crescimento no quadrante reservado para o lcool, j que segundo Pelezar
(1997), o lcool etlico de 70% a 90% eficiente contra as formas vegetativas dos
microorganismos. Como a concentrao do lcool empregado no experimento era 60%,
provavelmente ele no promoveu a desnaturao das protenas e dissoluo dos
lipdeos presente na membrana das bactrias estudadas, ao ponto de elimin-las. J o
lcoo iodado e o mertiolate mostraram-se bem mais eficientes.
No experimento para a demonstrao da ao de metais pesados atravs dos
resultados obtidos, ficou constatado a eficincia na inibio bacteriana atravs do
cobre e da liga de metais. Esses metais inativam as protenas celulares combinando-se
com algum componente da protena, inibindo ento o crescimento bacteriano.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
LARPENT, J.P. & LARPENT-GOURGAUD, M., 1970. Microbiologia Prtica.
Edta. Edgard Blcher.
LIEBER, S. R., 1999. Roteiro de aula prtica Controle da Populao Microbiana
por
Agentes Fsicos e Qumicos. Fac. Cincias Biolgicas, Exatas e Experimentais

Universidade Mackenzie.
PELCZAR, M.; REID,R. & CHAN, E.C.S., 1997. Microbiologia: Conceitos e
Aplicaes. Volume I. Edta. Makron Books do Brasil. 2 edio.