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Testes em fase de
antiglobulina humana
Direto e Indireto
Desvendando a Imunohematologia
Site Novo!!!!!
www.diamed.com.br
O que so potencializadores?
O que so potencializadores?
Como surgiram ?
O que so potencializadores?
Albumina bovina
em meio salino.
Polietilenoglicol (PEG)
Enzimas proteolticas
Como surgiram ?
Em 1945, Coombs e cols. descreveram o teste indireto de antiglobulina
IgG.
16/8/2007
+ + +
+ + + +++
+++ + + +
+ + + +
+
+++
+
+
+
+
+
++ + +
+
+ +
+
++
+ + +
+
+
+ + + + ++ + +
Enzimas proteolticas
Enzimas proteolticas
+ ++ + + ++
++ + destas tcnicas pode:
Enzima
A utilizao
+ +
+ +
+ +
- Potencializar
a+reatividade
de alguns sistemas +
+
+
ABO,Rh, Kidd, Lewis e P
++ ++ +++++ especialmente
+
+ antgeno/anticorpo,
- +Anular as configuraes antignicas de M, N, S, s, Fya, Fyb e
Hidrlise
Sialoglicoprotenas
Xga.
++++++ ++ +
++
++++falsos
++positivos ou negativos.
++ resultados
- Produzir
(macromollulas)
+
+
+ ++ so: +Bromelina e Papaina, alm de
+ mais usadas
As enzimas
tripsina e ficina.
++ ++++ ++ + +
+
Os mais usados:
Os mais usados:
Causam
menor interferncia
++ ++ na unio antgeno-anticorpo, facilitando
++ ++ ++ das++hemcias.
+
a sensibilizao
+
+++
+
+
+
+ +
+++
+tempos
+
Permitem
mais
+ ++ LISS
Salina
+ curtos.
++++de+incubao
+
+
+
+ +
Pode produzir falsos resultados
positivos
devido a fixao
+
+
+
+ ++
++ de componentes
inespecfica
++ + do complemento membrana.
++ ++ +
+ ++
+
+
+
+
+
+
++
+
+ +
+
+
+ + ++ +
Aumenta
+ + + a+intensidade
+ + +++++da+ aglutinao.
+
++ +aSalina
especialmente
til
deteco de anticorpos IgG.
++ para
++
PEG
+ + pois+a +baixa
++ +
No se deve usar o+soro
antiglobulina poliespecfico
+ ++
+
++
fora +
inica
meio
+++produz
+ + resultados falso positivos devido a
+ + do +
+
++ componentes
++ inespecfica
do complemento na superfcie
+ + ++de
+fixao
++
++
H 2O
da clula.
H 2O
H 2O
16/8/2007
Aglutinao
Ph e temperatura
+ + +
+ + + +++
+++ + + +
+
+
+ +
+
+ + + +++
+
+ Potencializador
++ + +
+
+ +
Liss, PEG, Alb
+
++
+ + +
+
+
+ + + + ++ + +
+
+ +
+ + +
+
+
+
+
+
+ + +
+ + + + +
+ +
+
+
+
+
+
++ +
Potencializador +
+
GH
Potencializadores
Soluo de
PEG ou
PEG+LISS
LISS
Soluo de
albumina
bovina 22%
Soluo de
enzimas
(1estgio)
Quantidade
(geralmente)
2 gotas
4 gotas
2-3 gotas
2 gotas
Tempo de
incubao a
37C
15-(45) min
5-(30) min
15-(60)min
10-(30)min
Caractersticas
Sensibilidade
comparada ao
mtodo em gel
Rapidez
Boa
reprodutibilidad
e
Usar com soro
AGH
monoespecfico
Boa
sensibilidade
Qualquer
variabilidade em
proporo do
potencializador e
soro pode
promover falsos
resultados
positivos
Sensibilidade
Anticorpos do
sistema ABO/
Viscoso, pode
Rh
dificultar a
leitura e causar
Para PAI e
roleaux
Identificao de
anticorpos
Potencializao de
acs sem
significado clnico
16/8/2007
Transfuses sanguneas
Reao transfusional:
(Sistema
Sistema
Imune):
de
defesa
coordenado e complexo:
Transfuses
Riscos transfusionais
Benefcios X Riscos
A reao transfusional qualquer intercorrncia
Benefcios
Benefcios
Benefcios
Riscos
Riscos
Riscos
(RDC 153/2004)
ISSIT, P.D.
P.D.,, 1999
16/8/2007
Imediata
Extravascular
Intravascular
Rh ( 34% )
ABO (0,8% )
Kidd ( 30% )
Extravascular
Ateno:
Duffy ( 14% )
Kell ( 13%)
Kidd,Duffy
Outros (1%)
Mollison, 1988
AutoAnticorpo
Aloanticorpo
do
so
reconhecimento
a
de
Anticorpo droga-induzido
formados
na
membrana
eritrocitria
Antgenos!
Protenas (imunoglobulinas)
produzidas pelos plasmcitos aps
Hemlise intravascular
Hemlise extravascular
Em Imuno-hematologia:
classes IgM e IgG so as mais
importantes.
EM ALGUNS CASOS:
MORTE DO PACIENTE
16/8/2007
UTILIZAMOS
PARA DETECTDETECTLOS IN VITRO ?
Paciente
AMOSTRA DE SANGUE
Testes Laboratoriais
Rotina Imunohematolgica
FENOTIPAGEM
ABO/Rh
T.A.D.
POSITIVO
NEGATIVO
ELUIO
T.A.D.
reversa
ABO
NEGATIVO
POSITIVO
IDENTIFICAO
DE ANTICORPOS
SRICOS
IDENTIFICAO
DE ANTICORPOS
ADSORVIDOS
Paciente
AMOSTRA DE SANGUE
P.A.I.
*discrepncias
Painel de Hemcias
Fenotipagem
paciente/bolsa
Deteco de Anticorpos
P.A.I.
Soro/plasma
principal: P.A.I.
existem outras tcnicas que detectam
Ligados s hemcias
principal: T.A.D.
existem outras tcnicas que detectam
ELUIO
Painel de Hemcias
16/8/2007
TAD
PAI
Auto
anticorpo?
Aloanticorpo?
TAD POSITIVO
PAI POSITIVO
_
+
+
+ + + + ++ + +
+ + + +
+ +
_ +
+
+
+
_
+
+
+ _ +
_
_
+ _
_ + _ +
+
+
+ + +
+
+
+
_
+
+ +
_ + _ + _ + _ +
+
+
+ + +
_
+
+
_
+
+
+
+ _
+ ++
+
+ +
+
+
COOH_
_
+ ++
_
+
+
COOH+
+
+
+ + +
_
_
+ _
COOH+
+ + +
+
+ + + +
+
COOH_
_
+ + +
+
+
+ + _
+
COOH_
+
+ + +
_
+
+
+
COOH+
+ +
+ + +
+ _
_ +_
+
+
COOH+
+
+
+
++ +
_
_
+
COOH+ + + +
+
+
+
+ +_ + + _ +
COOH+
+
_
+
+
COOH+ +
+ _
+
+ + +
+
+
COOH_ +
+ _
+
+ +
+
_ +
+
COOH+ +
ImunoBase- DiaMed AG
Sensibilizao
Acs no aglutinantes
16/8/2007
_
+
_ + _ +_
+
+ ++ + + +
+
_
+
+ + + + _+
_
+
+
_ +
+
+
+
+
+ +
+
+
_
+
+
+ _ + _ + _ +
+
+
+
+
_
_
+
+
+ _
+
+
+
COOH+
+
_
+
COOH_ + Adio de soro
+ AGH
+
+
COOH_
_
+ _Aps lavagem
+
+ +
+ em
+
COOHtubo!
+ + - tcnica
_
_ +
+ +
+
+
_
COOH+
+ +
_
+
+
_
+
+
+
COOH+
+
+
+ _
+_
+ +
COOH+
+
+
+
_
_
COOH+ +
+
+
COOH+ + + + _ +
+ +
_
COOH+
+
+ _
+
+ +
COOH+
+ _ +
+ + +
COOH_ +
ImunoBase- DiaMed AG
+ +
+
+ ++ + + +
+
+
+
_
+
_+
+
COOH-
+
+
COOHCOOHCOOHCOOH-
_
_ + _ +_
+
+
_
+
_
+
_ +
+
+
+
+
+
_
+ _ + _ + _ +
+
+
_
+
_
+
+
+
+
+
_
+ _ +
_
+
+
+
Adio de soro AGH=
_ de+
_
+ _
Neutralizao
+
+
+ + cargas eltricas
_
_ +
+
+
+
_
+
+
_
+
+ _
+
+
COOH-
COOH-
COOHCOOHCOOHCOOHImunoBase- DiaMed AG
COOH-
+
+
+ _
+
_
+
+
+
+
+
_
_
+
+ +
+
+ + + + _ +
+ +
_
+ +
+
+ _
+ +
+
+ _ +
+ + +
_ +
+ +
TAD POSITIVO
...Ser
Ser que eu no posso
pular esta etapa???
to chato e
trabalhoso!!!
1 passo:
Lavagem de hemcias e preparo de suspenso
5%
NO!
A lavagem das hemcias para
TAD obrigatria:
3X para amostras em geral
6-9X para Cls de cordo
16/8/2007
ATENO!
E pronto!
Sua suspenso de
trabalho a 5% est
preparada !
Adicionar 1 gota de
suspenso de hemcias
LAVADAS, a 5%
16/8/2007
+ 1 gota de suspenso
de hemcias a 5% .
AGH monoespecfico IgG:
Centrifugar
imediatamente
15 a 3.400 rpm.
Observar o resultado e
anot-lo.
TESTE DA
ANTIGLOBULINA DIRETA
Sem
Lavagem!
(T.A.D.)
EM GEL TESTE
Auto
anticorpo?
Centrifugao 85g
TAD POSITIVO
Poliespecfico
Monoespecficos
IgG, IgA, IgM, C3 ( e fraes), C4
10
16/8/2007
POLIESPECFICO
Anticorpos contra Imunoglobulina humana (anti-IgG +anti-cadeias
Anti-IgG !
MONOESPECFICOS
Afinal,
quando se usa
um ou outro?
Em ambos os casos,
quando o resultado
observado for negativo,
obrigatrio adicionar 1
II
II
rpm.
II
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16/8/2007
Controle de AGH
Algoritmo em TAD
TAD
NEGATIVO
Eluio- Opcional
Acs baixo ttulo
Importncia Clnica??
POSITIVO
PESQUISA DE ANTICORPOS
IRREGULARES
(P.A.I.)
Pesquisa c/ soros
Monoespecficos
subclasses
IgG-Eluio
Titulao
Aloanticorpo?
Identificao
do Ac
Fase AGH
Titulao
PAI POSITIVO
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16/8/2007
Mesmo
calibre!
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16/8/2007
Adicionar 2 gotas de
soro de antiglobulina
humana. Centrifugar
e ler, anotando os
resultados.
Desprezar o
sobrenadante, e na ltima
vez, secar bem a boca do
tubo, retirando qualquer
excesso de salina
No esquea!
Em caso de resultado
negativo,adicionar 1 gota da
hemcia Controle de AGH ,
centrifugar e ler o resultado,
que dever ser positivo.
doador
- Pacientes obsttricos: detectar e permitir monitoramento da gravidez
de mulheres com anticorpos capazes de causar DHPN / identificar
mulheres Rh- que devem receber IgRh
- Politransfundidos
- Investigao de AHAI
Sem
Lavagem!
Porque?
ANTICORPOS
CLINICAMENTE
IMPORTANTES
ANTICORPOS
BENGNOS
ANTICORPOS POSSIVELMENTE
IMPORTANTES
(SE REATIVOS A 37 0C)
ANTICORPOS
RARAMENTE
IMPORTANTES
ABO
Chido / Rodgers
Lewis
Yt (Yta)
Rh
Xg (Xga)
MNS (M, N)
Vel
Kell
Bg
P (P1)
Ge
Duffy
Knops
Lutheran
Do (Gya, Hy)
Kidd
Csa
A1
Sda
Diego
JMH
MNS (S, s)
Anti-H
(Bombay)
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Prximo passo:
anticorpo(s) irregular(s), e
devemos portanto identific-lo.
Identificar a especificidade
do anticorpo
Como?
Painel de hemcias
10
Dpnp!joufsqsfubs!
pt!sftvmubept!
ep!qbjofm@
Amostra
Soro
15
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P.A.I.
POSITIVO
Painel de hemcias
Resultado Ntido
Fazer contra-prova
Fenotipagem
Ag
correspondente
Dificuldades?
Todas as Reaes
POSITIVAS
Auto-controle
NEGATIVO
Auto-controle
POSITIVO
Mistura de
Anticorpos
Auto-AC
???
Ac contra
AG pblico
Falha Tcnica
Dificuldades tcnicas
Utilizao de tcnicas complementares
Ttulo do anticorpo
Amplitude trmica deste anticorpo
Metodologia aplicada
Soro x hemcias
Mas porque o
receptor forma
anticorpos, j que
so feitos testes prtransfusionais?
16
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Testes pr-transfusionais
obrigatrios (RDC 153/ 2004 M.S.)
Paciente
Bolsa
Retipagem ABO
Fenotipagem ABO/Rh(D)
P.A.I.
bolsas
Rh-, sem
Seleo de unidade
para transfuso
pesquisa de D fraco
para pacientes J
sensibilizados (obrigatrio!)
Jka
Fy
K
D
S
K
Fy
a
+
Anti-Jka
Hemcias
soro do receptor
do doador
Lembrar a PCTestes
pr-transfusionais
(RDC 153/ 2004 M.S.)
insuficienteobrigatrios
para prevenir
aloimunizao eritrocitria!
Paciente
Prova cruzada maior
Bolsa
Fenotipagem das bolsas
para pacientes J
sensibilizados
(obrigatrio!)
Traumas?
Comentrios?
eritrcitos transfundidos
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Referncias Bibliogrficas
Revisado e ampliado
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